專利名稱：普拉克索作為神經(jīng)保護劑的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及普拉克索(pramipexole)或2-氨基-6-正丙基氨基-4，5，6，7-四氫苯并-噻唑，或其(+)-或(-)-對映體，及其可藥用鹽作為神經(jīng)保護劑的用途。
本發(fā)明背景大量神經(jīng)系統(tǒng)疾病引起神經(jīng)性損傷?？蓪?dǎo)致神經(jīng)損傷的疾病包括原發(fā)性神經(jīng)變性疾病；亨廷頓舞蹈病；中風(fēng)和其它缺氧或局部缺血性疾病；神經(jīng)外傷；代謝引起的神經(jīng)性損傷；腦病發(fā)作引起的后遺癥；出血性中風(fēng)；繼發(fā)性神經(jīng)變性病(代謝性或毒性疾病)；帕金森氏?。话柎暮Ｄ?，阿爾茨海默型老年癡呆(SDAT)；與年齡有關(guān)的識別性機能障礙；或血管性癡呆，多梗塞性癡呆，Lowy body癡呆，或神經(jīng)變性性癡呆。
普拉克索是多巴胺-D3/D2激動劑，其合成描述于歐洲專利186087及其相應(yīng)部分，美國專利4,886,812中。已知，它主要用于治療精神分裂癥和帕金森氏病。從德國專利申請DE3843227中已知，Pramipexole降低催乳激素的血漿水平。該歐洲專利申請中也公開了Pramipexole用來治療藥物依賴的用途。此外，從德國專利申請DE3933738中已知，Pramipexole可用于降低甲狀腺刺激激素(TSH)的異常高水平。美國專利5,112,842公開了透皮給予本發(fā)明化合物和包含這些活性化合物的透皮系統(tǒng)。WO專利申請PCT/EP 93/03389中描述了普拉克索作為抗抑郁劑的用途。
到目前為止，還沒有可通過商業(yè)渠道購買到的具有明顯治療中風(fēng)功效的藥物。
意外地發(fā)現(xiàn)，普拉克索及其(+)-對映體也具有神經(jīng)保護作用。
資料公開據(jù)報道，與眾多受體包括多巴胺受體結(jié)合的血管擴張劑-吡貝地爾在球腦局部缺血的沙土鼠模型中，具有對功能和生化參數(shù)的作用。例如，見Society for Neuroscience Abstracts，19673(1993)；id.，at1645。
歐納(Lisuride)與幾種不同的受體包括多巴胺D2和5-HT1a受體結(jié)合。據(jù)報道，在腦梗塞性鼠模型中，當(dāng)在發(fā)病前給藥時，歐納減輕腦水腫并延長存活時間。Miya Zawa，等人Nippon-Yakurigaku-Zasshi98(6)449-561，(1991)。
本發(fā)明摘要本發(fā)明主要提供預(yù)防患神經(jīng)性損傷或?qū)ι窠?jīng)性損傷敏感的病人神經(jīng)損傷的方法，它包括給予有效量2-氨基-6-正丙基氨基-4，5，6，7-四氫苯并-噻唑，或其(+)-或(-)-對映體，及其可藥用鹽，特別是有效量的普拉克索，即2-氨基-6-正丙基氨基-4，5，6，7-四氫苯并-噻唑(-)-對映體的二鹽酸鹽或有效量的2-氨基-6-正丙基氨基-4，5，6，7-四氫苯并-噻唑(+)-對映體的二鹽酸鹽。
對于一般熟練的神經(jīng)病醫(yī)生或類似的醫(yī)生來說，可引起神經(jīng)損傷的疾病是公知的并且包括原發(fā)性神經(jīng)變性疾病；亨廷頓舞蹈病；中風(fēng)和其它缺氧或局部缺血性疾?。簧窠?jīng)外傷；代謝引起的神經(jīng)性損傷；腦病發(fā)作引起的后遺癥；出血性中風(fēng)；繼發(fā)性神經(jīng)變性病(代謝性或毒性疾病)；帕金森氏??；阿爾茨海默病，其它記憶性疾??；或血管性癡呆，多梗塞性癡呆，Lowy body癡呆，或神經(jīng)變性性癡呆。
本發(fā)明優(yōu)選的普拉克索適應(yīng)癥為帕金森氏病，該病的特點由進行性變性的nigrostriatal多巴胺神經(jīng)元來確定。在此意義上說，名詞“帕金森氏病”也包括名詞“帕金森氏癥”。除了普拉克索的治標(biāo)作用(即，代替損失的多巴胺的神經(jīng)傳導(dǎo)功能)外，該化合物也延緩存活多巴胺神經(jīng)元的變性并因此延緩疾病的進程。
本發(fā)明化合物的預(yù)防性用途包括早期或帕金森氏病癥狀出現(xiàn)前期的單一治療和局部缺血引起的神經(jīng)變性性疾病的預(yù)防。
普拉克索的合成，制備和給予描述于美國專利4,843,086；4,886,812；和5,112,842；本文引入供參考。
可給予2-氨基-6-正丙基氨基-4，5，6，7-四氫苯并-噻唑，特別是(-)-對映體，及其可藥用鹽來預(yù)防神經(jīng)性損傷。常規(guī)蓋侖派醫(yī)學(xué)制劑的形式基本上由惰性藥物載體和有效量的活性物質(zhì)組成；例如，普通的或包衣的片劑，膠囊劑，錠劑，粉劑，溶液劑，懸浮液，乳劑，糖漿劑，栓劑等等。
在培養(yǎng)基中表明，L-多巴對小腦顆粒細胞具有毒性。普拉克索及(+)對映體阻斷L-多巴的毒性。二者的EC50在0.3-1uM之間并且10uM提供生存力的測定，它對應(yīng)于未暴露在L-多巴中的對照細胞。保護機理沒有顯示出包含產(chǎn)生受體激活，(+)對映體在單胺受體結(jié)合測定中活性是低的。2-氨基-6-正丙基氨基-4，5，6，7-四氫苯并-噻唑，其(+)和(-)對映體和其與可藥用酸加成的鹽，特別是普拉克索及其(+)對映體作為已知由L-多巴培養(yǎng)產(chǎn)生的反應(yīng)性氧的抗氧劑而起作用，這種可能性是存在的。
有效劑量范圍為0.01-2.0mg/kg。更優(yōu)選的口服劑量范圍為1-2mg/kg。優(yōu)選的神經(jīng)保護總劑量為口服0.5-20mg/kg/天。優(yōu)選的人的總劑量為0.1-6.0mg/天，分2或3次使用。除了口服或靜脈內(nèi)途徑之外，普拉克索可透皮給藥。
優(yōu)選實施方案的描述通過下文實施例使本發(fā)明更清楚。實施例1我們通過組織學(xué)方法檢查沙土鼠28天多巴胺能nigrostriatal(NS)束的退行性變性，該沙土鼠通過雙側(cè)頸動脈閉合而導(dǎo)致10分鐘的前腦局部缺血。在這段時間內(nèi)，對照動物在致密區(qū)有39％的NS細胞體損失(通過tyroxine羥化酶免疫細胞化學(xué)判斷)。局部缺血后每日口服普拉克索(損傷后1小時開始每日兩次口服1mg/kg)在局部缺血后28天NS多巴胺神經(jīng)元損失減少為36％(與用賦形劑治療的相比，D＜0.01)。實施例2我們成功地重復(fù)了實施例1的發(fā)現(xiàn)；即，普拉克索能夠保護雙側(cè)頸動脈閉合而導(dǎo)致10分鐘的前腦局部缺血并且局部缺血后28天仍然存活的沙土鼠模型中的多巴胺神經(jīng)元。在局部缺血后60分鐘以1mg/kgPO起始劑量給予普拉克索并且在第一天結(jié)束后再次給藥，然后，在接下來的26天，每天給藥兩次。每天兩次，每次0.3mg/kg產(chǎn)生閾效應(yīng)(與賦形劑相比，nigrostriatal多巴胺神經(jīng)元增加14％)。每天兩次，每次1mg/kg，在局部缺血后28天，多巴胺神經(jīng)元存活得到38％的明顯改善(與賦形劑治療相比，p＜0.0001)。該作用表明對多巴胺神經(jīng)元是特異的，因為在海馬CA1區(qū)中，局部缺血后非多巴胺能神經(jīng)元的損失不受明顯影響。實施例3小腦粒細胞的第一代培養(yǎng)物如上所述，用8天大小的Sprague Dawley鼠(Charles River，Portage，MI)來制備小腦粒細胞的第一代培養(yǎng)物(1)。在6孔，35mm培養(yǎng)皿(Nunc，Denmark)中，以2ml/孔，1×106個細胞/ml的密度使神經(jīng)元生長8-9天。通過制板后19小時，以10uM的最終濃度加入阿拉伯呋喃糖胞苷一磷酸鹽來抑制神經(jīng)膠質(zhì)細胞的生長。通過該方法產(chǎn)生的培養(yǎng)物已定性并顯示含有超過90％的粒細胞(2)。細胞毒性模型細胞在體外8天后(8DIV)開始試驗。用2ml不含血清的生長介質(zhì)(serum free growth medium)來洗滌細胞。制備100×PPX儲備液和(+)對映體的無血清生長介質(zhì)濃溶液。通過每孔細胞生長介質(zhì)液中加入20ul來將濃溶液分配到細胞中。藥物的最終濃度范圍為1nM-10uM。5分鐘后，將20ul在無血清生長介質(zhì)中的L-多巴10×儲備液加到各個孔中，使得最終濃度為100uM。在上述條件下，將細胞培養(yǎng)24小時。然后將用于成活率測定的細胞洗滌兩次并在復(fù)方氯化鈉糖液中，用1uCi/ml的α-(甲基)-14C)氨基異丁酸(New England Nuclear)脈沖1小時。細胞溶解，然后用0.5％Triton X-100沖洗。然后，將溶解的細胞在閃爍計數(shù)器上計數(shù)放射性。以每一點上的三次平均值±S.D.來表示數(shù)據(jù)。
表中的結(jié)果表明，普拉克索對于L-多巴引起的毒性具有神經(jīng)保護作用(64.8％)。10uM的普拉克索時，用L-多巴處理的細胞與對照沒有區(qū)別。表明普拉克索輕微但明顯地降低小腦粒細胞中cAMP水平(3)。這提示在神經(jīng)保護機制中可能涉及多巴胺受體(D2族)。為了檢驗這種假設(shè)，在普拉克索的平行試驗中，試驗(+)對映體。已表明在涉及腎上腺素能和血清素激活受體的一組結(jié)合測定中，(+)對映體是非活性的，并且在多巴胺能受體中是低活性的。該試驗結(jié)果表明，作為本發(fā)明神經(jīng)保護劑，(+)對映體的能力和有效性與普拉克索是相同的。
在L-多巴胺介導(dǎo)的小腦粒細胞毒性中，普拉克索的神經(jīng)保護作用未顯示涉及多巴胺受體的激活。
盡管顯示與單胺受體小的結(jié)合能力，但普拉克索的(+)對映體具有作為神經(jīng)保護劑的實用性。
普拉克索及其(+)對映體存在有作為L-多巴毒性的抗氧劑的可能性，已知L-多巴毒性中涉及活性氧的產(chǎn)生。
表1100uML-多巴的毒性(64.8％)普拉克索和(+)對映體的作用劑量(nM) 普拉克索(對照的％(+)對映體(對照*) 的％*)0 35.2+/-8.5 35.2+/-8.51 30.0+/-6.5 51.3+/-5.810 39.2+/-9.4 57.8+/-4.9100 64.8+/-4.7 58.3+/-10.3300 76.2+/-7.3 81.0+/-18.3100065.5+/-14.8 86.9+/-7.0300084.9+/-0.6 95.2+/-2.510000 90.0+/-11.5 99.8+/-8.9*將對照定義為與細胞相關(guān)的放射活性，該細胞被暴露于賦形劑緩沖液中而不是100um的L-多巴。對照值等于三次計數(shù)的129547CPM的平均值。
權(quán)利要求
1.預(yù)防抑制患神經(jīng)損傷或?qū)ι窠?jīng)損傷敏感的病人神經(jīng)損傷的方法，它包括給予有效量的化合物，2-氨基-6-正丙基氨基-4，5，6，7-四氫苯并-噻唑及其可藥用酸加成鹽。
2.權(quán)利要求1的方法，其中疾病選自帕金森氏病，原發(fā)性神經(jīng)變性疾病，亨廷頓舞蹈病，中風(fēng)和其它缺氧或局部缺血性疾病，神經(jīng)外傷，代謝引起的神經(jīng)性損傷，腦病發(fā)作引起的后遺癥，出血性中風(fēng)，繼發(fā)性神經(jīng)變性病(代謝性或毒性疾病)，阿爾茨海默病，其它記憶障礙性疾病，或血管性癡呆，多梗塞性癡呆，Lowy body癡呆，或神經(jīng)變性性癡呆。
3.權(quán)利要求2的方法，其中疾病為帕金森氏病。
4.權(quán)利要求3的方法，其中化合物的總劑量大約為0.1-6mg/天。
5.權(quán)利要求1-4的方法，其中化合物為(+)對映體的形式。
6.權(quán)利要求1-4的方法，其中化合物為(-)對映體的形式。
7.權(quán)利要求1-6的方法，其中化合物為二鹽酸鹽。
8.選自2-氨基-6-正丙基氨基-4，5，6，7-四氫苯并-噻唑及其可藥用酸加成鹽的化合物用來制備抑制神經(jīng)損傷或神經(jīng)損傷進展的藥物的用途。
9.權(quán)利要求8的用途，其中神經(jīng)損傷源于帕金森氏病，原發(fā)性神經(jīng)變性疾病，亨廷頓舞蹈病，中風(fēng)和其它缺氧或局部缺血性疾病，神經(jīng)外傷，代謝引起的神經(jīng)性損傷，腦病發(fā)作引起的后遺癥，出血性中風(fēng)，繼發(fā)性神經(jīng)變性病(代謝性或毒性疾病)，阿爾茨海默病，其它記憶障礙性疾病，或血管性癡呆，多梗塞性癡呆，Lowy body癡呆，或神經(jīng)變性性癡呆。
10.權(quán)利要求8的用途，其中神經(jīng)損傷源于帕金森氏病。
11.權(quán)利要求8-10的用途，其中劑量為0.1-6mg/天。
12.權(quán)利要求8-11的用途，其中化合物為(+)對映體的形式。
13.權(quán)利要求8-12的用途，其中化合物為(-)對映體的形式。
14.權(quán)利要求8-13的用途，其中化合物為二鹽酸鹽。
全文摘要
本發(fā)明涉及普拉克索作為神經(jīng)保護劑的用途。
文檔編號C07D277/82GK1169677SQ95196769
公開日1998年1月7日 申請日期1995年12月12日 優(yōu)先權(quán)日1994年12月15日
發(fā)明者E·D·哈爾, P·F·馮沃特蘭德, F·A·羅德 申請人:法瑪西雅厄普約翰美國公司, 波林格英格爾海姆兩合公司