專利名稱：新山油柑堿類似物、它們的制備方法及含這些化合物的藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及新山油柑堿類似物，涉及它們的制備方法以及含有這類化合物的藥物組合物。
山油柑堿是1948年首次分離到的一種生物堿，1966年由G.H.Svoboda等在實驗模型上證實了它的抗腫瘤作用(見于J.Pharmaceut.Sci.，55(8)，1966，758-768)。
可是J.H.Scarffe等進行的臨床研究(見于Cancer.Treat.Rep.，67(1)，1983，93-94)并未確認山油柑堿的抗腫瘤作用，這可能是一方面由于它的溶解度太差無法靜脈給藥，另一方面可能是由于口服時生物利用度太低造成的。
不過，G.H.Svoboda等(見于Lloydia，29(3)，1966，206-244)在實驗模型上證實山油柑堿具有較寬的活性譜，對實體瘤尤其有效。
申請者最近發(fā)現(xiàn)，新山油柑堿類似物的抗癌活性和效應都比山油柑堿好，特別是溶解度好，使得可以靜脈給藥。
本發(fā)明特別涉及通式(Ⅰ)的化合物，其中X
為-OR′1，Y為 基，或X為 基，Y為 基，或X和Y共同形成 基，或X和Y共同形成 基，R1和R2可以相同也可以不同，各自獨立為C1-C6的直鏈或支鏈烷基，該烷基隨意被1個或多個取代基取代，這些取代基選自羥基、鹵素、硝基、氨基、烷氧基和?；?，R′1選自氫和R1，A為1價鍵或二價的烴基，該烴基被1個或多個C1-C6不飽和直鏈或支鏈烴基取代，該不飽和烴基取代基又被隨意地單取代或多取代，取代基來自羥基、鹵素、硝基、氨基、烷氧基和?；?，R3、R4和R6可以相同也可以不同，各自獨立為氫和烷基，R5為氫、羥基和烷氧基，這里使用的烷基、烷氧基和?；鶓斫鉃橥榛糠值暮荚訑?shù)為1至6，并隨意被1個或多個取代基取代，取代基為羥基、鹵素、硝基、氨基、烷氧基及?；?，本發(fā)明還涉及它們的可能的對映異構體、非對映異構體、N-氧化物，以及它們與生理上可以接受的酸或堿生成的鹽。
本發(fā)明涉及通式(Ⅰ)的化合物的制備方法，該制備方法的特征是在于在金屬氯化物的存在下，例如在氯化鋅的存在下，鄰氨基苯甲酸與通式(Ⅱ) 的化合物在無水醇性溶劑，例如在無水丁醇中反應，在通式(Ⅱ)中R5的定義同上，生成通式(Ⅲ)的化合物，在通式(Ⅲ)中R5的定義同上，然后再與
通式(Ⅳ)的炔反應，反應溶劑為非質子溶劑， 例如二甲基甲酰胺，回流下反應，堿金屬碳酸鹽作催化劑，例如碳酸鉀作催化劑，生成通式(Ⅵ)的化合物 (V1)其中R3、R4和R5的定義同上，并通過鹵代烷或二烷基硫酸酯在去質子化試劑的存在下，例如在氫化鈉的存在下，在極性的非質子化溶劑中作用，使它的氮原子烷基化，使用的極性的非質子化溶劑例如可以是二甲基甲酰胺，得到通式(V2) (V2)
的化合物，其中R3、R4、R5的定義同上，R′6與上面定義的R6同，但不為氫，然后通式(V1)或(V2)的化合物在合適的溶劑中，例如在叔丁酸/四氫呋喃/水的混合溶劑中與四氧化鏻反應，生成通式(Ⅵ)的順式鄰二酸，其中R3、R4、R5和R6的 (Ⅵ)定義同上，然后通式(Ⅵ)的化合物進行下述反應A.與N，N'-羰基二咪唑反應，生成通式(I/A)的化合物，其中R3、R4、R5和R6的定義同上，
(I/A)B.與通式(Ⅶa)或(Ⅶb)的化合物反應，其中 A的定義同上，生成通式(I/B)的化合物，其中 (I/B)
R3、R4、R5、R6和A的定義同上，C.與通式為R1-OH的醇反應，其中R1的定義同上，用酸例如用鹽酸催化，生成通式(Ⅷ)的化合物，其中R1、R3、R4、R5和R6的定義同上， (Ⅷ)它的游離醇羥基在弱鹼，例如在吡啶的存在下用通式為(R2CO)2CO的酸酐酯化，其中R2的定義同上，生成通式(I/C)的化合物，其中R1、R2、R3、R4、R5和R6的定義同上，
(I/C)D.或在同樣的實驗條件下直接與通式(R2CO)2O的酸酐反應，生成通式(I/D)的化合物，其中R2 (I/D)
R3、R4、R5和R6的定義同上，通式(I/D)的化合物可以在同樣的反應條件下直接與通式(R1CO2)2O的酸酐反應，生成通式(I/E)的化合物， (I/E)其中R1、R2、R3、R4、R5和R6的定義同上，通式(I/A)至(I/E)的化合物的總體構成了通式(Ⅰ)的化合物的總體，它們被純化，并使用常規(guī)的分離方法分離成對映異構體或非對映異構體，并隨意轉化為氮-氧化物，或用生理上可以接受的酸或堿轉化為鹽。
其中X和Y相同，而且為 的基的通式(Ⅰ)的化合物可以用通式為(R1CO)2O的酸酐直接與通式(Ⅵ)的二醇反應制得。
當R3＝R4＝CH3時，制備通式(Ⅵ)的化合物的最便利的方法是用四氧化鋨直接作用于山油柑堿(R5＝OMe，R6＝Me)，6-去甲氧基山油柑堿(R5＝H，R6＝Me)，6-O-去甲基山油柑堿(R5＝OH，R6＝CH3)，或N-去甲基-6-O-去甲基山油柑堿(R5＝OH，R6＝H)。
象山油柑堿一樣，本發(fā)明的化合物不僅顯示特別有價值的抗腫瘤作用。而且這些新化合物的抗腫瘤作用的活性和強度都遠比山油柑堿優(yōu)越。此外，它們的溶解度卻很好，因而可以靜脈給藥。
在本發(fā)明中，申請者認為新山油柑堿類似物的抗腫瘤作用可以用于治療目標。后面實施例中的藥理研究表明這些新化合物無論是體外還是體內對各種腫瘤都具有重要價值的治療作用。
本發(fā)明還涉及含有通式(Ⅰ)的化合物的藥物組合物，含有它的一種氮氧化合物的藥物組合物，或含有它與生理上可以接受的酸或堿生成的鹽的藥物組合物，或單獨使用，或與1種或多種惰性的無毒的賦型劑一塊使用。在本發(fā)明的藥物組合物中，可以提到的有適合于口服的、非腸道、滴鼻、直腸、經(jīng)舌、眼部或肺部給藥的藥物組合物，特別是注射劑、滴耳劑、滴眼劑、滴鼻劑、片劑、糖衣丸、薄膜包衣片、軟明膠膠囊、硬明膠膠囊、栓劑、乳劑、軟膏劑、皮膚凝膠劑等等。
劑量隨患者的年齡和體重、給藥途徑、疾病的性質、可能的治療方式而變，劑量范圍為每24小時0.2mg至2g。
下面的實施例用來說明本發(fā)明，但沒有任何限制意味。用的原料為已知化合物或按已知方法制備。
制備A(±)-順式-1，2-二羥基-1，2-二氫山油柑堿往6.4ml 2-甲基丙醇-2的2.5%四氧化鋨溶液和1.68g(11mmol)N-甲基嗎啉的氮-氧化物水合物與45ml叔丁醇/四氫呋喃/水(10∶3∶1)的混合物中，加3.21g(10mmol)山油柑堿的反應混合物室溫攪拌2天。然后往里加120ml飽和硫酸氫鈉溶液。室溫攪拌1小時后，反應混合物用二氯甲烷萃取5次，每次80ml。按常規(guī)處理有機層，得4g殘留物，然后用閃式硅膠柱層析純化，用二氯甲烷/甲醇(98∶2至95∶5)的混合溶劑洗脫，得2.66g(7.5mmol)預期的產物。收率75%。紅外光譜(KBr)，Vmax(cm-1)為3400，2920，1650，1600，1585，1390，1095。
制備B(±)-順式-1，2-二羥基-1，2-二氫-6-去甲氧基-山油柑堿由6-去甲氧基山油柑堿按制備A中描述的方法制備。收率65%。紅外光譜(KBr)，Vmax(cm-1)3450，3290，3005，3000，2985，1605，1555，770，650。
制備C(±)-順式-1，2-二羥基-1，2-二氫-6-O-去甲基山油柑堿該化合物按照制備A中描述的方法，從6-O-去甲基山油柑堿制備。收率70%。紅外光譜Vmax(cm-1)3515，3330，3005，2985，1685，1595，1155，840，772。
制備D(±)-順式-1，2-二羥基-1，2-二氫-N-去甲基-6-O-去甲基山油柑堿。
該化合物按照制備A中描述的方法，從N-去甲基-6-O-去甲基山油柑堿制備。收率70%。紅外光譜(KBr)Vmax(cm-1)3500，3310，3005，2980，1690，1615，1490，1345，775。
實施例1(±)-順式-1，2-二乙酰氧基-1，2-二氫山油柑堿將1.775g(5mmol)制備A中制得的化合物加到預先冷卻的5ml無水吡啶和5ml乙酸酐的混合物中。反應混合物室溫攪拌24小時，然后傾入50ml冰水中。
濾出生成的沉淀，水洗后干燥，得2.034g期待的化合物。收率92%。紅外光譜(KBr)，Vmax(cm-1)3000，2950，2870，1752，1639，1590，1505，1245，1160，772。
實施例2(±)-順式-1，2-二乙酰氧基-1，2-二氫-6-去甲氧基-山油柑堿該化合物按照實施例1中描述的方法，從制備B中制得的化合物制備。收率91%。紅外光譜(KBr)，Vmax(cm-1)3010，3000，2970，1738，1625，1595，1230，765，645。
實施例3(±)-反式-1，2-二苯甲酰氧基-1，2-二氫-山油柑堿0.178g(0.5mmol)制備A中得到的化合物溶于3ml無水吡啶中，然后用1g(4mmol)苯甲酸酐處理。反應混合物室溫攪拌36小時，室溫蒸發(fā)至干。殘留物用硅膠柱層析純化，用乙酸乙酯/甲苯(70∶30)洗脫，得0.0281g期待的產品，以及得到實施例4和5中描述的化合物。收率10%。紅外光譜(KBr)Vmax(cm-1)3100，3000，2890，2795，1740，1630，1270，1220，1000，770，720。
實施例4(±)-順式-1，2-二苯甲酰氧基-1，2-二氫山油柑堿。
該化合物在用硅膠柱純化實施例3的粗產品時得到。收率7.5%。紅外光譜(KBr)，Vmax(cm-1)3100，2890，2795，1740，1630，1270，1220，1000，770，720。
實施例5(±)-順式-1，2-二苯甲酰氧基-1-羥基-1，2-二氫山油柑堿。
該化合物在用硅膠柱純化實施例3的粗品中得到。收率40%。紅外光譜(KBr)，Vmax(cm-1)3350，3100，3000，2795，1720，1630，1600，1270，1220，770，720。
實施例6(±)-順式-1-乙酰氧基-2-苯甲酰氧基-1，2-二氫-山油柑堿0.092g(0.2mmol)實施例5中制得的化合物加到預先冷卻的2.5ml無水吡啶和2.5ml乙酸酐的混合物中。反應混合物室溫攪拌48小時，然后室溫減壓濃縮至干。殘留物用硅膠柱層析純化，二氯甲烷洗脫，得0.1g預期的產物。收率95%。紅外光譜(KBr)Vmax(cm-1)3100，3005，2980，1730，1630，1600，1285，1225，1770，720。
實施例7(±)-順式-1，2-羰基二氧-1，2-二氫山油柑堿1.62g(10mmol)N，N'-羰基二咪唑加到0.710g(2mmol)制備A中得到的化合物與50ml丁酮-2的溶液中。在氬氣保護下將反應混合物加熱回流3小時，然后溶入60ml 5%的碳酸鈉溶液中，并用乙酸乙酯萃取3次，每次用40ml乙酸乙酯。有機相按常規(guī)處理，得到的粗產品用二氯甲烷重結晶，得0.5g預期的產品。收率65.5%。紅外光譜(KBr)，Vmax(cm-1)3015，3000，2990，1085，1635，1610，1590，770，710。
實施例8(±)-反式-2-乙酰氧基-1-甲氧基-二氫山油柑堿0℃下將1ml用氯化氫氣體飽和的甲醇溶液加到由0.175g(0.5mmol)制備A中獲得的化合物和10ml甲醇配成的溶液中。反應混合物室溫攪拌48小時后用琥石陰離子交換樹子IR50OH中和，過濾、減壓濃縮。殘留物主要由(±)順/反-2-羥基-1-甲氧基-1，2-二氫山油柑堿組成，該殘留物用2ml無水吡啶和2ml乙酸酐的混合物乙?；?。反應混合物室溫攪拌48小時，然后室溫減壓至干。殘留物用硅膠柱層析純化;環(huán)己烷/乙酸乙酯(70∶30至50∶50)洗脫，得0.042g預期的產物和0.040g實施例9的化合物?？偸章?0%。
實施例9(±)-順式-2-乙酰氧基-1-甲氧基-1，2-二氫山油柑堿該化合物在實施例8描述的粗品純化中得到。
藥理學研究實施例A體外活性使用的細胞株為鼠白血病細胞L1210。該細胞在強化的培養(yǎng)介質RPMI1640中培養(yǎng)，內含10%胎牛血清、2mM谷氨酰胺、50單位/ml青霉素、50mg/ml鏈霉素和10mMHepes，pH為7.4。將細胞分布到微量板上并在細胞毒化合物中暴露48小時。用帕爾氏比色測定確定存活的細胞數(shù)，該檢測法亦稱微量培養(yǎng)四唑檢測法(見于J.Carmichael et al.，Cancer.Res.，47，936-942，1987)。結果以IC50表示，即用抑制被處理細胞增殖50%所需要的細胞毒化合物的濃度表示。結果列入表1。
表1對培養(yǎng)基中L1210細胞的毒性
所有本發(fā)明的化合物都比對照化合物(山油柑堿)的作用強很多。
實施例B體內活性在本實施例中，化合物懸浮于吐溫80中，然后用水稀釋。在強劑量下吐溫的濃度達到最大值1%?？瞻讓φ盏膭游镏环幂d體。
B-1/抗細胞株P388的抗腫瘤活性細胞株P388(鼠白血病細胞)由國家癌癥研究所提供(Frederick USA)。腫瘤細胞(106個細胞)在第0天接種到雌性B6D2F1小鼠(Iffa-Credo，F(xiàn)rance)的腹腔。小鼠體重18g至20g，每組8只至10只。待測化合物經(jīng)腹膜內給藥，第1天服用，或每天1次服4天(D1-4)，以及第1天經(jīng)靜脈給藥。
抗腫瘤活性以T/C%表示T/C%(小鼠)＝ (治療小鼠存活時間的中值)/(對照小鼠存活時間的中值) ×100表2給出了在各種給藥途徑和最佳劑量下的抗腫瘤活性。

所述化合物都具有很好的抗腫瘤活性，實施例1的化合物經(jīng)腹膜內治療和靜脈注射時具有極好的抗腫瘤活性。
山油柑堿因為完全不溶解，因而無法靜脈注射。
B/2化合物抗結腸38的抗腫瘤活性結腸38(由NCI，F(xiàn)rederick，USA提供)以片段的形式通過皮下給藥插入雌性B6D2F1小鼠。在第2天和第9天待測化合物經(jīng)腹膜內給藥，在第21天測定腫瘤體積(T/C體積，%)確定它們的抗腫瘤活性。
T/C%(體積)＝ (治療小鼠腫瘤體積的中值)/(對照小鼠腫瘤體積的中值) ×100結果列入下面的表3

實施例1的化合物對實體瘤有極好的療效，在25mg/kg劑量下活性與80mg/kg劑量的5-氟脲嘧啶相似，后者是臨床應用的藥物，在此作為陽性對照。
B/3對裸鼠異種移植HT-29的作用來自人結腸腺體癌的HT-29腫瘤細胞(American Type Culture，Collection，USA)經(jīng)皮下植入雌性裸鼠(Iffa Credo，F(xiàn)rance)。將腫瘤連續(xù)地通過對稱地植入小鼠兩肋的2-3mm3瘤塊而長大。當腫瘤體積達到50mm3(接種7于10天后)時，動物隨機分組，每組7至10只，并按前面指定的方法治療。小鼠稱重，每周量兩次腫瘤的體積。
按下式計算腫瘤體積V1= (a·b2)/2 a＝腫瘤的長，b＝腫瘤的寬結果以腫瘤體積的中值表示(t時(Vt)Vt的中值)/(O時(V0)Vt的中值)用t時計算的T/C中值的最小值評價用于治療的化合物的抗腫瘤活性。
T/C%中值(體積) (治療組的(VtVo))/(對照組的(Vt/Vo)) ×100按照歐洲癌癥治療機構(EORTC)的標準，用最終治療的后7天的最小值評價該參數(shù)的最小值。
小鼠每周經(jīng)腹膜內給藥治療，給藥2周，施用實施例1的化合物。DO對應于第1次給藥時第1次測得的腫瘤體積。
實施例1的化合物有極好的抗癌活性。表4給出了最佳的T/C值。

實施例C藥物組合物片劑制備20mg的片劑1000片的配方實施例1的化合物20g乳糖40g硬脂酸鎂10g玉米淀粉15g小麥淀粉15g硅膠5g羥丙基纖維素5g
權利要求
1.通式(Ⅰ)的化合物，它們的對映異構體，非對映異構體，N-氧化物和其與酸或堿的藥用加成鹽，其中X為-O-R1′基，Y為-O-C-R2 基，或X為 基，Y為 基，或X和Y共同形成 基，或X和Y共同形成 基，R1和R2可以相同也可以不同，各自獨立為直鏈或支鏈C1-C6的烴基，該烴基隨意被1個或多個取代基取代，取代基選自羥基，鹵素、硝基、烷氧基和?；?，R1′為氫和R1，A為1價鍵或2價烴基，該烴其隨意被不飽和C1-C6直鏈或支鏈烴基取代，該不飽和烴基隨意被1個或多個取代基取代，取代基為羥基、鹵素、硝基、氨基、烷氧基和?；?，R3、R4和R6可以相同也可以不同，各自獨立為氫和烷基，R5為氫、羥基和烷氧基，這里使用的烷基、烷氧基和酰基的烷基部分應理解為含碳酸為1至6的直鏈或支鏈烷基，它們可隨意被1個或多個取代基取代，取代基為羥基、鹵素、硝基、氨基、烷氧基和?；?。
2.權利要求1的化合物，它們的可能對映異構體，非對映異構體，N-氧化合物，以及它們與生理上可以接受的酸或堿生成的藥用鹽，其中R3和R4均為甲基。
3.權利要求1或2的化合物，它的對映異構體，非對映異構體，N-氧化合物，以及它與生理上可以接受的酸生成的藥用鹽，為1，2-二乙酰氧基-1，2-二氫山油柑堿。
4.權利要求1的通式(Ⅰ)化合物的制備方法，特點是在金屬氯化物存在下鄰氨基苯甲酸在無水醇溶劑中與通式(Ⅱ)的化合物回流反應，在通式(Ⅱ) 中R5的定義同上，生成通式(Ⅲ)的化合物，其 (Ⅲ)中R5的定義同上，然后通式(Ⅲ)的化合物與通式(Ⅳ)的炔反應，在通式(Ⅳ)中R3和R4的定義同上， (Ⅳ)反應溶劑為非質子溶劑，反應溫度為回流溫度，催化劑為堿金屬碳酸鹽，生成通式(V1)的化合物， (V1)其中R3、R4、R5的定義同上，它的氮原子在脫質子試劑存在下，在極性非質子溶劑中隨意與鹵代烷或二烷基硫酸酯反應而被取代，生成通式(V2)的化合物，在通式(V2)中R3、R4、R5的 (V2)意義同上，R6′與R6同，但不為氫，然后通式(V1)或(V2)的化合物在合適的溶劑中與四氧化鋨反應，生成通式(Ⅵ)的順式鄰二醇，其中R3、R4、R5和R6的定 (Ⅵ)義同上，通式(Ⅵ)的化合物然后進行下述反應A.與N，N'-羰二咪唑反應，生成通式(I/A)的化合物，其中R3、R4、R5和R6的定義同上， (I/A)B.與通式(Ⅶa)或(Ⅶb)的化合物反應，其中 A的定義同上，生成通式(I/B)的化合物，其中 (I/B)R3、R4、R5、R6和A的定義同上，C.與通式R1-OH的醇反應，其中R1的定義同上，以酸為催化劑，制得通式(Ⅷ)的化合物，其中 (Ⅷ)R1、R3、R4、R5、R6的定義同上，它的游離醇羥基在堿的催化下用通式為(R2CO)2O的酸酐酯化，其中R2的定義同上，生成通式(I/C)的化合物， (I/C)其中R1、R2、R3、R4、R5和R6的定義同上，D.在與上步C相同的反應條件下直接與通式(R2CO)2O的酸酐反應，制得通式(I/D)的化合物，其中R2、 R3、R4、R5和R6的定義同上，通式(I/D)的化合物可以在同樣的反應條件下與通式(R1CO)2O的酸酐反應，生成通式(I/E)的化合物， (I/E)其中R1、R2、R3、R4、R5和R6的定義同上，通式(I/A)至(I/E)的化合物的總體形成了通式(Ⅰ)化合物的總體，它們可以通過常規(guī)的分離方法適當?shù)胤蛛x和純化，隨意地轉化為N-氧化合物，與生理上可以接受的酸或堿生成藥用鹽。
5.以權利要求1至3中至少1種化合物為活性組分的藥物組合物，它們可以單獨使用，也可以和1種或多種惰性的非毒性的藥物上可以接受的載體聯(lián)合使用。
6.含權利要求5的藥物組合物，它具有抗腫瘤活性，并用于癌癥治療。
全文摘要
通式(I)的化合物，其中R
文檔編號C07D491/153GK1113490SQ9510200
公開日1995年12月20日 申請日期1995年2月17日 優(yōu)先權日1994年2月17日
發(fā)明者M·科克, F·蒂爾奎因, A-L·斯卡爾茨奧尼斯, Y·羅蘭, A·皮埃爾, G·阿特西 申請人:阿迪爾公司