專利名稱：制備嘧啶衍生物及其醫(yī)藥上可用的鹽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于新的嘧啶衍生物或其醫(yī)藥上可用的鹽，和關(guān)于動物周圍和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)疾病的新治療劑，該治療劑含有上述化合物作為活性組分。
日本專利公告No.23394/1971公開了下式表示的氨基嘧啶
式中A代表含有最多16個碳原子的亞烷基，或被氨基或C2-5酰氨基取代的低級亞烷基，M代表H、Na、K、NH4、Mg、Ca或有機(jī)堿的銨鹽，n是和M的原子價相等的數(shù)字，該化合物具有有效的治療活性，特別是在精神病領(lǐng)域作為抗憂郁病劑和精神興奮劑。
日本專利公告No.22044/1976公開了2-異丙基氨基嘧啶的二氯低級脂肪族羧酸鹽，如2-異丙基氨基嘧啶二氯乙酸鹽，用作神經(jīng)疾病的治療劑。
日本專利公開No.100477/1977(專利公告No.28548/1984)公開了2-異丙基氨基嘧啶磷酸鹽用作神經(jīng)疾病的治療劑。
日本專利公告No.157575/1979公開了高收率制備2-氯嘧啶的方法。此專利公告中一個實施例說明制備2-氯嘧啶的收率是69%。
日本專利公開No.393/1980公開了高收率制備2-異丙基氨基嘧啶的方法。此專利公開中一個實施例說明制備2-異丙基氨基嘧啶的收率是60%。
日本專利公開No.122768/1980公開了下式表示的2-異丙基氨基嘧啶的羥基衍生物
式中A4、A5、A6分別代表H或OH，而且至少其中之一代表OH，該化合物用于神經(jīng)再生領(lǐng)域和治療肌營養(yǎng)不良。
日本專利公開No.145670/1980公開了下式表示的2-異丙基氨基鹵代嘧啶
式中A4′、A5′和A6′分別代表H或鹵原子，并且至少其中之一是鹵原子，該化合物用于治療各種神經(jīng)疾病和肌營養(yǎng)不良。
日本專利公開No.145671/1980公開了制備2-異丙基氨基嘧啶羥基衍生物的方法。
日本專利公開No 151571/1980公開了2-異丙基氨基-5-鹵代嘧啶在治療神經(jīng)疾病中是有效的。
日本專利公開No.10177/1981公開了用異丙基胺使2-甲基磺?；奏ぐ被苽?-異丙基氨基嘧啶的方法，該方法基本得到定量收率。
日本專利公開No.26880/1981公開了制備2-異丙基氨基嘧啶的方法，該方法包括雙(異丙基胍)硫酸鹽與1，1，3，3-四乙氧基丙烷反應(yīng)。
日本專利公開No.90013/1981公開了肌營養(yǎng)不良、肌病、肌強(qiáng)直和/或神經(jīng)肌肉傳導(dǎo)障礙的治療劑，含取代的嘧啶衍生物或其治療上可用的鹽或其代謝產(chǎn)物作為活性組分。但是，該專利只公開了各種鹽如2-異丙基氨基嘧啶正磷酸鹽作為活性化合物。
日本專利公開No.65873/1986公開了下式的2-哌嗪基嘧啶衍生物
式中R1是H或芳烷基，Y是本專利公開的權(quán)利要求中定義的二價有機(jī)基團(tuán)，該衍生物用作稻田和旱田的除草劑。
本發(fā)明人以前曾提供神經(jīng)疾病的新治療劑，含給定的2-哌嗪基嘧啶衍生物或其醫(yī)藥上可用的鹽(國際專利公開No.W087/04928)。
本發(fā)明的目的是提供
1)新的嘧啶衍生物和其醫(yī)藥上可用的鹽。
2)含有上述新化合物的神經(jīng)疾病治療劑。
3)具有再生和恢復(fù)神經(jīng)細(xì)胞作用的神經(jīng)疾病新治療劑。
4)能適用于周圍神經(jīng)紊亂的神經(jīng)疾病新治療劑。
5)能適用于與精神病不同的中樞神經(jīng)疾病新治療劑，在這種中樞神經(jīng)疾病中化學(xué)介質(zhì)的工作系統(tǒng)或代謝系統(tǒng)中的異常被認(rèn)為是初始的。
6)具有改善和恢復(fù)理解和記憶作用的大腦疾病新治療劑。
7)神經(jīng)疾病或大腦疾病的新治療劑，含有適于治療神經(jīng)疾病或大腦疾病藥理作用的全面優(yōu)良和有用的化合物，該治療劑有小的付作用如肝損傷。
本發(fā)明的其他目的和其優(yōu)點(diǎn)從下面的說明中變得顯而易見。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的上述目的和優(yōu)點(diǎn)通過下式(Ⅰ)表示的嘧啶衍生物或其醫(yī)藥上可用的鹽實現(xiàn)
式中X代表下式(Ⅰ)-1基團(tuán)
其中R1代表氫原子或含有1至4個碳原子的烷基，R2代表苯乙基、環(huán)己基、苯基、芐基或哌啶基，或可以被哌啶子基取代的含有1至4個碳原子的烷基，哌啶子基又可以被C1-4烷基取代，或者R1和R2可以與連接它們的氮原子一起形成雜環(huán)基，該雜環(huán)基從下列基團(tuán)中選擇
R3代表環(huán)己基、4-吡啶基、苯甲?；駽1-4烷基，可以被氯或低級烷氧基取代的苯基，或被C1-6烷基一取代或二取代的烷基氨基羰基，R31和R32相同或不同，分別代表氫原子或低級烷氧基，而且上述雜環(huán)基可以任意被苯基、芐基、苯硫基、氰基或低級烷氧羰基取代，或被
-基一取代，或被C1-4烷基一至五取代，或被鄰接的環(huán)碳原子上的C3-5多亞甲基取代，或者(ⅱ)下式(Ⅰ)-2代表的基團(tuán)其中R4代表含有1至4個碳原子的烷基;
Y代表氨基或被C1-4烷基一取代或二取代的氨基;Z代表被C2-5低級烷氧基羰基取代的甲基，或含有2至5個碳原子的低級烷氧基羰基;或者Y和Z可以一起以二價基-Y-Z-的形式形成下式的基團(tuán)
其中R5代表可以被低級烷氧基取代的含有1至4個碳原子的烷基，或者形成下式基團(tuán)
其中R6代表含有1至4個碳原子的烷基。
在上述式(Ⅰ)中，X或者是(ⅰ)下式(Ⅰ)-1基團(tuán)
或者是(ⅱ)下式(Ⅰ)-2基團(tuán)在式(Ⅰ)-1中，R1代表氫原子或含有1至4個碳原子的烷基。
該烷基可以是直鏈的或支鏈的，其實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基和叔丁基。
在式(Ⅰ)-1中，R2代表苯乙基、環(huán)己基、苯基、芐基或哌啶基，或可以被哌啶子基取代的C1-4烷基。哌啶基可以被含有1至4個碳原子的烷基取代。低級烷基的實例可以和上面給出的相同。
在式(Ⅰ)-1中，R1和R2可與連接它們的氮原子一起形成雜環(huán)基，該雜環(huán)基從下列基團(tuán)中選擇
這些雜環(huán)基可以被苯基、芐基、苯硫基、氰基或低級烷氧基羰基取代，或被
-基-取代，或被C1-4烷基一至五取代，或被鄰接的環(huán)碳原子上的C3-5多亞甲基取代。
低級烷氧基羰基在烷氧基部分最好有1至4個碳原子。其實例包括甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丙氧基羰基、異丙氧基羰基、正丁氧基羰基、異丁氧基羰基、仲丁氧基羰基和叔丁氧基羰基。
C1-4低級烷基的實例可以與上文給出的相同。
含有3至5個碳原子的多亞甲基包括1，3-亞丙基、1，4-亞丁基和1，5-亞戊基。這些基團(tuán)可以與連接它們的相鄰的環(huán)碳原子一起分別形成5元環(huán)、6元環(huán)和7元環(huán)。
在哌嗪基的4一位上的取代基R3是環(huán)己基、4-吡啶基、苯甲?；駽1-4烷基，或可以被氯或低級烷氧基取代的苯基，或被含有1至6個碳原子的烷基-取代或二取代的烷基氨基羰基。
低級烷基可以和上文列舉的相同，也可以是正己基。
低級烷氧基最好含有1至4個碳原子，其例子是甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。
在烷基氨基羰基中烷基氨基的例子是甲基氨基、乙基氨基、正丙基氨基、異丙基氨基、正丁基氨基、叔丁基氨基、正戊基氨基、正己基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、二正丙基氨基、二異丙基氨基、二正丁基氨基和環(huán)己基氨基。
在下式基團(tuán)中
R31和R32相同或不同，分別代表氫原子或低級烷氧基。
該低級烷基最好有1至4個碳原子，可以與上文列舉的相同。
在式(Ⅰ)-2中，R4代表含有1至4個碳原子的烷基，其實例可與上文列舉的相同。
式(Ⅰ)-2代表的基團(tuán)的實例是甲硫基、乙硫基、正丙硫基、異丙硫基、正丁硫基、仲丁硫基和叔丁硫基。
在式(Ⅰ)中，Y是氨基(-NH2)或被含有1至4個碳原子的烷基-取代或二取代的氨基。
C1-4烷基和取代的氨基(烷基氨基)的具體實例可以與上文列舉的相同。
在式(Ⅰ)中，Z代表被含有2至5個碳原子的低級烷氧基羰基取代的甲基，或含有2至5個碳原子的烷氧基羰基。低級烷氧基羰基的實例包括甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丙氧基羰基、異丙氧基羰基、正丁氧基羰基和仲丁氧基羰基。
在式(Ⅰ)中，Y和Z可以一起以二價基-Y-Z-的形式形成下式基團(tuán)
其中R5、R6和R7分別代表含有1至4個碳原子的烷基，但須R5的低級烷基可以被含有1至4個碳原子的低級烷氧基取代。
式(Ⅰ)化合物的實例如下。
(A)式(Ⅰ)中-Y-Z-代表下式基團(tuán)的化合物
(102)(100)的鹽酸鹽(104)(100)的馬來酸鹽
(116)(114)的鹽酸鹽(118)(114)的馬來酸鹽
(239)(238)的鹽酸鹽(240)
(241)(240)的鹽酸鹽(C)在式(Ⅰ)中y和Z彼此無關(guān)并代表一價基的化合物(400)
(402)(400)的鹽酸鹽(404)
(406)(404)的馬來酸鹽本發(fā)明提供的式(Ⅰ)化合物可以用已知方法，特別是在日本專利公開No.140568/1986和87627/1986中描述的方法制備，或者用已知方法(例如通過還原除去保護(hù)基)處理上述這些方法得到的中間體來制備。下文中給出的實施例1至14詳細(xì)地描述了制備式(Ⅰ)化合物的方法。
更確切地說，本發(fā)明的化合物(Ⅰ)例如可以用下述方法制備。
(a)制備下式(Ⅰ)-A的化合物
其中R1、R2和R5如同式(Ⅰ)中的定義，使下式(Ⅴ)的化合物
其中R1和R2如同上面關(guān)于式(Ⅰ)的定義，R是含有1至4個碳原子的烷基，與下式(Ⅵ)的胺反應(yīng)，
其中R5如同關(guān)于式(Ⅰ)的定義。
由原料開始的這個反應(yīng)可以按照下面反應(yīng)圖解1進(jìn)行。
反應(yīng)圖解1
例如，這個反應(yīng)可以進(jìn)行如下。化合物(Ⅱ)和(Ⅲ)在反應(yīng)介質(zhì)如水、甲醇、乙醇、四氫呋喃或二甲基甲酰胺中，于溫度0至100℃，反應(yīng)0.5至10小時，生成化合物(Ⅳ)。化合物(Ⅳ)和磷酰氯在不用溶劑情況下或在惰性溶劑如二氯乙烷中反應(yīng)，生成化合物(Ⅴ)。然后，化合物(Ⅴ)與化合物(Ⅵ)在醇溶劑(如異丙醇和乙醇)中于溫度80至150℃下反應(yīng)，生成化合物(Ⅰ)-A。
在反應(yīng)圖解1中使用的中間體(Ⅳ)也可以按照反應(yīng)圖解1′制備。
反應(yīng)圖解1′
反應(yīng)圖解1′的方法可以通過化合物(Ⅶ)和(Ⅷ)在醇溶劑(如丁醇和戊醇)中，于溫度100至200℃下反應(yīng)來進(jìn)行。化合物(Ⅷ)也可以通過反應(yīng)圖解1制備，只是用S-甲基異硫脲代替化合物(Ⅱ)。
式(Ⅰ)-A中包括的化合物是下列序號的化合物100、106、110、114、500、120、124、128、144、146、148、150、152、154、156、158、160、162、164、166、524、528、532、536、540、168、170、174、176、178、544、548、552、556、558、560、564、568、572、575、576、580、582、180、182、和184。
(b)制備下式(Ⅰ)-B的化合物
其中R5如同關(guān)于式(Ⅰ)的定義，R30代表C1-4烷基或苯甲?；虮籆1-6烷基一取代或二取代的烷基氨基羰基，(b1)下式(Ⅸ)的化合物
其中R5如同關(guān)于式(Ⅰ)的定義，與下式(Ⅹ)的化合物反應(yīng)，
其中R33代表C1-4烷基或苯甲酰基，或被含有1至6個碳原子的烷基二取代的二烷基氨基羰基，Q代表鹵原子，或者(b2)化合物(Ⅸ)與式(Ⅺ)的化合物反應(yīng)其中R34代表含有1至6個碳原子的烷基。
上述反應(yīng)可以用下面反應(yīng)圖解2說明。
反應(yīng)圖解2
按照此圖解反應(yīng)可以進(jìn)行如下在使用R33是含有1至4個碳原子的烷基的式(Ⅹ)化合物時，化合物(Ⅸ)和(Ⅹ)在溶劑如乙醇中，在無機(jī)堿如碳酸鉀存在下，于溫度20至100℃反應(yīng)，生成R30是含有1至4個碳原子的烷基的式(Ⅰ)-B的化合物。
在使用式(Ⅹ)的化合物中R33是苯甲?；虮缓?至6個碳原子的烷基二取代的二烷基氨基羰基的化合物作為化合物(Ⅹ)時，化合物(Ⅸ)和(Ⅹ)在堿性有機(jī)溶劑如吡啶中，于溫度20至100℃下反應(yīng)，生成R30是苯甲酰基或被含有1至6個碳原子的烷基二取代的二烷基氨基的式(Ⅰ)-B的化合物。
在式(Ⅹ)中，Q代表氯、溴或碘。
在使用式(Ⅺ)的異氰酸酯時，化合物(Ⅸ)和(Ⅺ)在溶劑如四氫呋喃或甲苯中，在堿性有機(jī)化合物如三乙胺存在下，于溫度20至100℃下反應(yīng)，生成R30是烷基的式(Ⅰ)-B的化合物。
在式(Ⅰ)-B中包括的化合物例如是下列序號的化合物130、132、504、508、512、516、520、136、140和142。
(c)制備下式(Ⅰ)-C的化合物
其中R1、R2和R6如同關(guān)于式(Ⅰ)的定義，(c1)式(Ⅻ)的化合物
其中R1和R2如同關(guān)于式(Ⅰ)的定義，R代表含有1至4個碳原子的烷基，與下式(Ⅻ)的化合物反應(yīng)，
其中R6如同關(guān)于式(Ⅰ)的定義;或者(c2)下式(ⅩⅣ)的化合物
其中R6如同關(guān)于式(Ⅰ)的定義，R是含有1至4個碳原子的烷基，與下式(ⅩⅤ)的化合物反應(yīng)，
其中R1和R2如同關(guān)于式(Ⅰ)的定義。
上述反應(yīng)可以按照反應(yīng)圖解3或4由原料開始進(jìn)行。
反應(yīng)圖解3
反應(yīng)圖解3的方法例如可以進(jìn)行如下化合物(Ⅱ)和(ⅩⅧ)(其中R是含有1至4個碳原子的烷基)在反應(yīng)溶劑如水、甲醇、乙醇、四氫呋喃或二甲基甲酰胺中，于溫度0至100℃反應(yīng)，反應(yīng)最好進(jìn)行0.5至10小時，生成化合物(Ⅻ)?；衔?Ⅻ)與化合物(ⅩⅢ)在溶劑如水、醇(如甲醇或乙醇)、四氫呋喃、二甲基甲酰胺、甲苯或二甲苯中，于溫度0至150℃反應(yīng)，反應(yīng)最好進(jìn)行0.5至20小時，生成化合物(Ⅰ)-C。
反應(yīng)圖解4的方法例如可以進(jìn)行如下化合物(ⅩⅣ)和(ⅩⅤ)在醇溶劑如丁醇或戊醇中，于溫度80至150℃反應(yīng)，生成化合物(Ⅰ)-C。化合物(ⅩⅣ)可以用與反應(yīng)圖解3相同的方法制備，只是用S-甲基異硫脲代替化合物(Ⅱ)。
式(Ⅰ)-C中包括的化合物是下列序號的化合物200、202、206、208、210、212、214、216、218、584、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238和240。
(a)制備下式(Ⅰ)-D的化合物
其中R1和R2如同關(guān)于式(Ⅰ)的定義，R代表含有1至4個碳原子的烷基，由下式(ⅩⅥ)代表的化合物
其中R1、R2和R如同上述定義，與氨反應(yīng)。
該反應(yīng)可以由下面的反應(yīng)圖解5說明。
反應(yīng)圖解5
反應(yīng)圖解5的方法可以進(jìn)行如下化合物(ⅩⅥ)可以按照反應(yīng)圖解1用與制備化合物(V)相同的方法制備，只是用2-乙氧基亞甲基丙二酸二烷基酯如2-乙氧基甲基丙二酸二乙酯代替化合物(Ⅲ)?；衔?ⅩⅥ)與NH3的反應(yīng)也可以按照反應(yīng)圖解1中的方法進(jìn)行，以制備化合物(Ⅰ)-D。
式(Ⅰ)-D化合物的實例是第400號化合物。
(e)制備下式(Ⅰ)-E的化合物
式中R1和R2如同關(guān)于式(Ⅰ)的定義，各R彼此無關(guān)，代表含有1至4個碳原子的烷基，由式(Ⅴ)的化合物與下式(ⅩⅦ)的化合物反應(yīng)
其中各R彼此無關(guān)，代表含有1至4個碳原子的烷基。
上述反應(yīng)可以用下面反應(yīng)圖解6說明。
反應(yīng)圖解6
化合物(Ⅰ)-E可以按照反應(yīng)圖解6通過化合物(Ⅴ)與化合物(ⅩⅦ)而不是根據(jù)反應(yīng)圖解1的化合物(Ⅵ)反應(yīng)制備。
式(Ⅰ)-E化合物的實例是第404號化合物。
式(Ⅰ)化合物醫(yī)藥上可用的鹽可以根據(jù)下述方法制備。鹽酸鹽的制備如下將相應(yīng)的式(Ⅰ)化合物溶于溶劑如甲苯、乙醚、乙醇或乙酸乙酯中，并向該溶液中鼓入氯化氫氣體，或向該溶液中加入濃鹽酸。鹽酸鹽的實例是下列序號的化合物102、114、502、122、126、129、506、510、514、518、522、526、530、534、538、175、177、546、550、554、557、562、566、570、574、578、582、204、211、215、239、241、400和588。
相應(yīng)的馬來酸鹽和對甲苯磺酸鹽可以用相同的方法用馬來酸和對甲苯磺酸代替鹽酸得到。這樣鹽的實例是序號104、108、112、118、138和404的馬來酸鹽和對甲苯磺酸鹽第542號。
根據(jù)本發(fā)明，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)由本發(fā)明提供的式(Ⅰ)化合物用作神經(jīng)疾病的治療劑。
式(Ⅰ)化合物通常以醫(yī)藥組合物形式使用，并通過各種途徑投藥，例如口服、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、intrarhinal和直腸內(nèi)途徑投藥，也可以通過皮膚傳遞投藥。
本發(fā)明也是關(guān)于含醫(yī)藥上可用的載體和通式(Ⅰ)的化合物或其醫(yī)藥上可用的鹽作為活性組分的醫(yī)藥組合物。醫(yī)藥上可用的鹽包括例如酸加成鹽和季銨(或胺)鹽。
化合物(Ⅰ)醫(yī)藥上可用的鹽的實例包括從能生成醫(yī)藥上可用的無毒的含有陰離子的酸加成鹽的酸生成的鹽，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、乙酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、苯甲酸鹽、檸檬酸鹽、葡糖酸鹽、葡聚糖酸鹽、甲基磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、萘磺酸鹽或它們的水合物，和季銨(或胺)鹽或它們的水合物。
本發(fā)明的組合物可以配制成片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、錠劑、糯米紙囊劑、酏劑、乳劑、溶液、糖漿、懸浮劑、氣霧劑、軟膏劑、無菌注射液、模制的泥罨劑、帶劑、軟的和硬的明膠膠囊劑、栓劑，和無菌包裝的粉劑。醫(yī)藥上可用的載體的實例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露糖醇、玉米淀粉、結(jié)晶纖維素、阿拉伯膠、磷酸鈣、藻酸鹽、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍膠、明膠、糖漿、甲基纖維素、羥甲基纖維素、甲基羥基苯甲酸酯、丙基羥基苯甲酸酯、滑石、硬脂酸鎂、惰性聚合物、水和礦物油。
固體和液體組合物均可以含有上述填料、粘結(jié)劑、潤滑劑、潤濕劑、崩解劑、乳化劑、懸浮劑、防腐劑、增甜劑和增香劑。本發(fā)明的組合物可以這樣配制以致投藥于病人后活性化合物快速連續(xù)釋放或緩慢釋放。
在口服情況下，式(Ⅰ)化合物與載體或稀釋劑混合，配制成片劑、膠囊劑等。在腸胃外投藥情況下，活性組分溶于10%葡萄糖水溶液，等滲鹽水，經(jīng)過消毒的水或類似液體中，裝入小瓶或安瓿中，以供靜脈滴注或注射或肌內(nèi)注射之用。有利的是也可將溶解助劑、局部麻醉劑、防腐劑和緩沖劑包括進(jìn)介質(zhì)中。為了增加穩(wěn)定性，在裝入小瓶或安瓿后，凍干該組合物是可能的。腸胃外投藥的另一實例是以軟膏劑或泥罨劑形式通過皮膚投醫(yī)藥組合物。在這種情況下，模制的泥罨劑或帶劑是有利的。
對于每單位劑量形式，本發(fā)明的組合物含有0.1至2000mg，通常含有0.5至1000mg活性組分。
式(Ⅰ)的化合物在廣泛的劑量范圍內(nèi)是有效的。例如，一天使用的該化合物的量通常在0.003mg/kg至100mg/kg的范圍內(nèi)。實際上使用的該化合物量由醫(yī)生根據(jù)例如使用的化合物的類型，和病人的年齡、體重、反應(yīng)狀態(tài)等，和投藥途徑確定。
因此，上述劑量范圍不限制本發(fā)明的范圍。合適的投藥次數(shù)是每天1至6次，通常1至4次。
式(Ⅰ)化合物本身對周圍神經(jīng)系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的病癥是有效的治療劑。如果需要，式(Ⅰ)化合物可以與至少一種其他等效藥物結(jié)合使用。這樣附加藥物的實例是神經(jīng)節(jié)苷脂、甲鈷胺和伊沙索寧。
根據(jù)本發(fā)明，式(Ⅰ)化合物的制劑和它們的生物學(xué)活性由下面給出的一系列實施例B和實施例進(jìn)行詳細(xì)說明。應(yīng)該明白無論如何它們不限制本發(fā)明的范圍。說明本發(fā)明組合物的下列實施例中的每一個使用一個上文描述的化合物或包括在通式(Ⅰ)中的一個其他醫(yī)藥上活性化合物。
實施本發(fā)明的最佳方式和工業(yè)實用性實施例12-異丙氨基-5，6-二氫-7-甲基-6-氧代-(7H)吡咯并〔2，3-d〕嘧啶(第100號化合物)將磷酰氯(26.2g)加入2.26g(9.45mmol)2-異丙氨基-4-羥基嘧啶-5-乙酸乙酯中，該混合物加熱回流3小時。反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，加入氯仿和冰水。然后，用碳酸氫鈉中和。分離氯仿層，蒸發(fā)溶劑。殘余物用硅膠柱色譜法提純，得到1.80g(收率74%;熔點(diǎn)67-71℃)2-異丙氨基-4-氯代嘧啶-5-乙酸乙酯。將1.05g(13.5mmol)甲胺的40%甲醇溶液加入該產(chǎn)物中，并加入10ml乙醇，混合物在高壓釜中于120℃反應(yīng)7小時。加入水，混合物用氯仿萃取。蒸發(fā)溶劑。殘余物用硅膠柱色譜法提純，得到0.50g(收率35%)目的產(chǎn)物。
熔點(diǎn)120-123℃1H-NMR 波譜(CDCl3溶液，δppm)1.28(6H，d，J＝5Hz)，3.20(3H，s)，3.44(2H，s)，4.20(1H，q，J＝5Hz)，5.0(1H，br.)，7.90(1H，s)。
用和上面相同方法，制備下列化合物。
實施例22-嗎啉代-4-二乙氨基嘧啶-5-乙酸乙酯(第404號化合物)將磷酰氯(11.7ml)加入3.35g(12.5mmol)2-嗎啉代-4-羥基嘧啶-5-乙酸乙酯中，該混合物加熱回流4小時。反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，加入二氯甲烷和冰水。用碳酸氫鈉中和。用無水硫酸鈉干燥二氯甲烷層，并在減壓下濃縮。將15ml乙醇和7.0g(95.7mmol)二乙胺加入產(chǎn)物中，混合物在高壓釜中于120℃反應(yīng)7小時。加入水，混合物用二氯甲烷萃取，蒸發(fā)溶劑，殘余物用硅膠柱色譜法提純，得到2.8g(收率56%)油狀目的產(chǎn)物。
1H-NMR 波譜(CDCl3溶液，δppm)1.16(6H，t，J＝7Hz)，1.24(3H，t，J＝7Hz)，3.20(4H，q，J＝7Hz)，3.44(2H，s)，3.74(8H，s)，4.16(2H，q，J＝7Hz)，7.80(1H，s)。
實施例32-丁氨基羰基哌嗪基-5，6-二氫-7-甲基-6-氧代(7H)吡咯并〔2，3-d〕嘧啶(第130號化合物)將四氫呋喃(THF)(30ml)，1ml三乙胺和0.43g(4.34mmol)異氰酸正丁酯加入0.5g(2.14mmol)2-哌嗪基-5，6-二氫-7-甲基-6-氧代(7H)吡咯并〔2，3-d〕嘧啶中，該混合物在室溫下攪拌3小時，在減壓下濃縮，加水后用氯仿萃取，在減壓下濃縮氯仿層，殘余物用硅膠柱色譜法提純，得到0.15g(收率21%)目的產(chǎn)物。
熔點(diǎn)168-178℃(分解)1H-NMR 波譜(CDCl3溶液，δppm)0.95(3H，t，J＝7Hz)，1.45(4H，m)，3.20(3H，s)，3.24(2H，s)，3.50(4H，m)，3.85(4H，m)，4.44(1H，m)，7.92(1H，s)。
實施例42-二乙氨基羰基哌嗪基-5，6-二氫-7-甲基-6-氧代(7H)吡咯并〔2，3-d〕嘧啶(第132號化合物)將嘧啶(15ml)和0.35g(2.6mmol)二乙氨基甲酰氯加入0.6g(2.6mol)2-哌嗪基-5，6-二氫-7-甲基-6-氧代(7H)吡咯并〔2，3-d〕嘧啶中，該混合物在70℃反應(yīng)2小時。反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，在加入碳酸氫鈉水溶液后，用氯仿萃取。在減壓下濃縮氯仿層。殘余物用硅膠色譜法提純得到0.24g(收率28%)目的產(chǎn)物。
熔點(diǎn)84.5-86.0℃1H-NMR 波譜(CDCl3溶液，δppm)1.16(6H，t，J＝7Hz)，3.22(3H，s)，3.29(8H，m)，3.44(2H，s)，3.84(4H，m)，7.93(1H，s)。
實施例52-苯甲酰基哌嗪基-5，6-二氫-7-甲基-6-氧代(7H)吡咯并〔2，3-d〕嘧啶(第504號化合物)將1g三乙胺，50ml二氯甲烷和0.6g(4.3mmol)苯甲酰氯加入1.0g(4.3mmol)2-哌嗪基-5，6-二氫-7-甲基-6-氧代(7H)吡咯并〔2，3-d〕嘧啶中，該混合物在室溫下反應(yīng)過夜。反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，在加入碳酸氫鈉水溶液后，用氯仿萃取。在減壓下濃縮氯仿層，殘余物用硅膠柱色譜法提純，得到1.1g(收率76%)目的化合物。
熔點(diǎn)158-160℃1H-NMR波譜(CDCl3溶液，δppm)3.19(3H，s)，3.43(2H，s)，3.80(8H，m)，7.43(5H，m)，7.90(1H，s)。
實施例62-甲硫基-5，6-二氫-7-甲基-6-氧代(7H)吡咯并〔2，3-d〕嘧啶(第134號化合物)將磷酰氯(59.0g)加入4.84g(21.2mmol)2-甲硫基-4-羥基嘧啶-5-乙酸乙酯中，該混合物加熱回流3小時。反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，在加入氯仿后，用碳酸氫鈉水溶液中和，在減壓下濃縮氯仿層。將20ml乙醇和3.48g(44.9mmol)甲胺的40%甲醇溶液加入濃縮物中，混合物在高壓釜中于100℃反應(yīng)5小時。在減壓下蒸發(fā)溶劑，加水后用氯仿萃取混合物。氯仿層在減壓下濃縮，在乙醇中用活性炭處理，重結(jié)晶得到1.50g(收率36%)目的化合物。
熔點(diǎn)183-185℃(分解)1H-NMR 波譜(CDCl3溶液，δppm)
2.60(3H，s)，3.28(3H，s)，2.54(2H，s)，8.14(1H，s)。
實施例72-異丙氨基-5，6-二氫-7-甲基-6-氧代-(7H)吡咯并〔2，3-d〕嘧啶鹽酸鹽(第102號化合物)將0.49g(2.4mmol)2-異丙氨基-5，6-二氫-7-甲基-6-氧代(7H)吡咯并〔2，3-d〕嘧啶溶解于30ml甲苯中，向溶液中鼓入氯化氫氣體。在減壓下濃縮溶液，然后用己烷洗滌，得到0.53g(收率92%)目的化合物。
熔點(diǎn)272-275℃1N-NMR 波譜(CDCl3溶液，δppm)1.38(6H，d，J＝5Hz)，3.30(3H，s)，3.60(2H，br，s)，4.30(1H，br.)，7.90(1H，br.)，8.90(1H，br.)。
同樣，制備下面列入表中的化合物。
實施例82-異丙氨基-5，6-二氫-7-甲基-6-氧代(7H)吡咯并〔2，3-d〕嘧啶馬來酸鹽(第104號化合物)將6.37g(30.9mmol)2-異丙氨基-5，6-二氫-7-甲基-6-氧代(7H)吡咯并〔2，3-d〕嘧啶溶解于50ml乙酸乙酯中，加入3.58g(30.8mmol)馬來酸。
混合物在室溫下攪拌1小時。生成的結(jié)晶用過濾收集，得到8.90g(收率90%)目的化合物。
熔點(diǎn)158-160℃1H-NMR 波譜(CDCl3溶液，δppm)1.24(6H，d，J＝6Hz)，3.12(3H，s)，3.50(2H，s)，3.9-4.2(1H，m)，6.20(2H，s)，7.90(1H，s)。
同樣，制備列入下表中的化合物。
實施例92-(4-吡啶基哌嗪基)-5，6-二氫-7-甲基-6-氧代(7H)吡咯并〔2，3-d〕嘧啶對甲苯磺酸鹽(第542號化合物)將0.1g(0.6mmol)對甲苯磺酸的5ml氯仿-甲醇溶液溶解在0.18g(0.6mmol)2-(4-吡啶基哌嗪基)-5，6-二氫-7-甲基-6-氧代(7H)吡咯并〔2，3-d〕嘧啶的30ml氯仿-甲醇溶液中，混合溶液在室溫下攪拌1小時。在減壓下蒸發(fā)溶劑。用己烷洗滌沉淀的結(jié)晶，得到0.25g(收率90%)目的化合物。
熔點(diǎn)195-200℃1H-NMR 波譜(CDCl3-CD3OD 溶液 δppm)2.37(3H，s)，3.23(3H，s)，3.49(2H，s)，3.7-4.2(8H，m)，7.06(2H，d，J＝7Hz)，7.20(2H，d，J＝7Hz)，7.76(2H，d，J＝7Hz)，7.96(1H，s)，8.16(2H，d，J＝7Hz)。
實施例102-異丙氨基-5-氧代-6-甲基-5，6-二氫(7H)吡咯并〔3，4-d〕嘧啶(第202號化合物)由2.2g(32mmol)異丙胺，5.18g(37mmol)S-甲基異硫脲硫酸鹽和20ml水組成的溶液在室溫下攪拌24小時。在減壓下蒸發(fā)水。將7.8g(35mmol)4-氯-2-乙氧亞甲基乙酰乙酸乙酯和30ml甲醇加入殘余物中，再加1.4g氫氧化鈉?；旌衔飻嚢?小時，然后滴加27g(348mmol)甲胺的40%甲醇溶液。加完后混合物再攪拌2小時。用過濾收集沉淀的結(jié)晶，用水和氯仿萃取。氯仿層用無水硫酸鎂干燥。在減壓下蒸發(fā)溶劑，得到0.8g(收率12%)目的化合物。
熔點(diǎn)201-202℃1H-NMR 波譜(CDCl3溶液，δppm)1.27(6H，d，J＝7Hz)，3.12(3H，s)，4.20(2H，s)，4.27(1H，m)，5.50(1H，br.s)，8.63(1H，s)。
實施例112-嗎啉代-6-甲基-5-氧代-5，6-二氫(7H)吡咯并〔3，4-d〕嘧啶(第232號化合物)將79g(320mmol)4-氯甲基-5-乙氧羰基-2-甲硫基嘧啶溶解于300ml甲醇中，在15分鐘內(nèi)滴加50g(640mmol)甲胺的40%甲醇溶液，混合物攪拌15小時。過濾分離產(chǎn)物，干燥，得到11g(收率18%)2-甲硫基-6-甲基-5-氧代-5，6-二氫(7H)吡咯并〔3，4-d〕嘧啶。生成的產(chǎn)物(1.5g;7.7mmol)和3.4g(38.5mmol)嗎啉溶解于20ml正戊醇中，該溶液加熱回流7小時。冷卻反應(yīng)混合物，用過濾分離沉淀的結(jié)晶，得到0.75g(收率42%)目的化合物。
熔點(diǎn)184-187℃(分解)1H-NMR 波譜(CDCl3溶液，δppm)3.16(3H，s)，3.85(8H，m)，4.24(2H，s)，8.68(1H，s)。
用相同方法制備下列化合物。
實施例122-哌啶子基-4-氨基嘧啶-5-羧酸甲酯(第400號化合物)將50ml二氯乙烷和10ml磷酰氯加入5.6g(23.6mmol)2-哌啶子基-4-羥基嘧啶-5-羧酸甲酯中，該混合物加熱回流5.5小時。反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，加入氯仿和水后，用碳酸氫鈉中和。分離氯仿層，蒸發(fā)溶劑。向殘余物中加入70ml四氫呋喃和27.8g25%氫氧化銨。混合物在高壓釜中于70℃反應(yīng)1.5小時。反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，用甲苯/己烷重結(jié)晶，得到5.0g(收率90%)目的化合物。
1H-NMR 波譜(CDCl3溶液，δppm)1.62(6H，m)，3.82(3H，s)，3.80(4H，m)，8.60(1H，s)。
實施例13N-甲基-2-(4-芐基哌嗪基)-嘧啶-4，5-二甲酰亞胺(第300號化合物)將8.4g(150mmol)氫氧化鉀、50ml乙醇和10ml水加入19.9g(50mmol)2-(4-芐基哌嗪基)嘧啶-4，5-二羧酸二乙酯中，該混合物在室溫下攪拌1小時，然后在40℃攪拌2小時。向溶液中加入鹽酸以調(diào)節(jié)其PH值到3。生成的結(jié)晶用過濾分離，用乙酸乙酯洗滌。將結(jié)晶(18.1g)溶于527ml二氯甲烷中，加入21.3g(211mmol)三乙胺和12.5g(105mmol)亞硫酰氯?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時，然后冷卻到-78℃。加入8.17g(105mmol)甲胺的40%甲醇溶液，溫度升高到室溫。混合物在室溫下攪拌1小時。反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，生成的固體用水洗滌。將3.32g(40.4mmol)乙酸鈉和41.3g(404mmol)乙酐加入14.4g固體中?；旌衔锛訜峄亓?小時。反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，加水后，混合物攪拌30分鐘。生成的固體用硅膠柱色譜法提純，得到9.72g(收率56%)目的化合物。
熔點(diǎn)158.5-159.8℃1H-NMR 波譜(CDCl3溶液，δppm)2.56(4H，t，J＝4Hz)，3.18(3H，s)，3.58(2H，s)，4.06(4H，m)，7.36(5H，s)，8.72(1H，s)。
實施例142-異丙氨基-5-氧代-6-甲基-5，6-二氫(7H)吡咯并〔3，4-d〕嘧啶鹽酸鹽(第204號化合物)將0.27g(2.7mmol)濃鹽酸加入0.56g(2.7mmol)2-異丙氨基-5-氧代-6-甲基-5，6-二氫(7H)吡咯并〔3，4-d〕嘧啶在6ml氯仿的溶液中，該溶液攪拌30分鐘。然后，在減壓下蒸發(fā)溶劑，殘余物用乙醚洗滌，得到0.6g(收率92%)目的化合物。
熔點(diǎn)176-183℃(分解)用同樣方法制備下列化合物。
實施例1B每片含有10mg活性組分的片劑用下述方法制備。
每片活性組分 10mg玉米淀粉 55mg結(jié)晶纖維素 35mg聚乙烯吡咯烷酮(10%的水溶液) 5mg羧甲基纖維素鈣 10mg硬脂酸鎂 4mg滑石 1mg合計 120mg活性組分、玉米淀粉和結(jié)晶纖維素用80目篩篩分，充分混合?；旌系姆勰┖途垡蚁┻量┩橥芤阂黄鹪炝?，用18目篩篩分。生成的顆粒在50-60℃干燥，再用18目篩篩分，以調(diào)節(jié)顆粒的粒度。羧甲基纖維素鈣、硬脂酸鎂和滑石用80目篩篩分后加入顆粒中，混合，用造粒機(jī)造粒，得到每片重120mg的片劑。
實施例2B每片含有200mg活性組分的片劑用下述方法制備。
每片活性組分 200mg玉米淀粉 50mg結(jié)晶纖維素 42mg硅酸酐 7mg硬脂酸鎂 1mg合計 300mg
上述組分用80目篩篩分，充分混合。得到的混合粉用模壓制備，得到每片重300mg的片劑。
實施例3B每片含有100mg活性組分的膠囊用下述方法制備。
每粒膠囊活性組分 100mg玉米淀粉 40mg乳糖 5mg硬脂酸鎂 5mg合計 150mg將上述組分混合，用80目篩篩分，充分混合。得到的混合粉末裝入膠囊中，每個膠囊裝150mg。
實施例4B每瓶中含有5mg活性組分的注射劑用下述方法制備。
每瓶活性組分 5mg甘露糖醇 50mg在使用之前，將這些化合物溶解于1ml注射用的蒸餾水中，然后注射。
實施例5B每安瓿中含有50mg活性組分的注射劑按照下述配方制備。
每安瓿活性組分 50mg氯化鈉 18mg注射用蒸餾水 適量合計 2ml實施例6B含有17.5mg活性組分的粘膏用下述方法制備。
將10份聚丙烯酸銨溶解于60份水中。2份甘油二環(huán)氧甘油醚在加熱條件下溶解于10份水中。另外，將10份聚乙二醇(聚合度400)、10份水和1份活性組分一起攪拌。形成溶液。在攪拌聚丙烯酸銨水溶液時，加入甘油二環(huán)氧甘油醚的水溶液和含有活性組分、聚乙二醇和水的溶液，并混合。生成的水凝膠溶液涂在柔軟的塑料膜上，以使每平方厘米活性組分量是0.5mg。表面用隔離紙覆蓋，切成尺寸為35Cm2，而得到粘膏。
實施例7B含有10mg活性組分的粘膏用下述方法制備。
用100份聚丙烯酸鈉，100份甘油，150份水，0.2份異氰脲酸三環(huán)氧丙基酯，100份乙醇，25份肉豆蔻酸異丙酯，25份丙二醇和15份活性組分制備水溶膠。然后將水凝膠涂在由人造纖維非織造織物和聚乙烯薄膜構(gòu)成的復(fù)合薄膜的非織造織物表面上，厚度100微米，形成含有藥物的粘合層。在該層中含有的隔離劑(肉豆寇酸異丙酯和丙二醇)量大約30%(重量)。然后將粘合層在25℃交聯(lián)24小時，隔離膜連結(jié)在粘合層表面上。整個膜切成面積35Cm2的片。
對式(Ⅰ)化合物對于神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞的體外生物活性進(jìn)行了試驗。試驗的細(xì)胞是小鼠成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞系2a-神經(jīng)細(xì)胞(Dainippon制藥有限公司)作為神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞。上述神經(jīng)細(xì)胞在恒溫箱中在5%二氧化碳?xì)怏w存在下于37℃按指數(shù)規(guī)律生長，然后，和式(Ⅰ)化合物一起培養(yǎng)一段時間。結(jié)果證明式(Ⅰ)化合物具有促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞生長的活性和促進(jìn)軸突的形成和生長的活性，式(Ⅰ)化合物的這些活性大大高于對照組，并等于或高于作為對照藥物的伊沙索寧(日本專利公告NO.28548/1984中所描述的化合物)。
對本發(fā)明式(Ⅰ)化合物對于大鼠PC-12嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞的生物活性也進(jìn)行了試驗。當(dāng)NGF加入PC-12細(xì)胞中時，軸突生長。結(jié)果表明當(dāng)本發(fā)明的化合物(Ⅰ)在這時加入，NGF結(jié)合在PC-12細(xì)胞上和被吸收于該細(xì)胞中的量增加。
對本發(fā)明化合物(Ⅰ)對于NGF與兔頸上神經(jīng)節(jié)的結(jié)合作用也進(jìn)行了測試，發(fā)現(xiàn)它們促進(jìn)NGF的結(jié)合。
制備坐骨神經(jīng)被壓碎的大鼠作為周圍神經(jīng)病癥的模型，試驗本發(fā)明化合物對它的作用。顯然，本發(fā)明的化合物(Ⅰ)具有促進(jìn)指間距和比目魚肌重量恢復(fù)正常值的作用。
制備中樞神經(jīng)病癥的大鼠和小鼠模型，試驗本發(fā)明化合物(Ⅰ)的藥理作用。具體地說，通過注射很少量6-羥基多巴胺化學(xué)損壞大鼠腦的黑質(zhì)多巴胺細(xì)胞，以誘導(dǎo)運(yùn)動原失調(diào)。兩周后，將胎兒腦的多巴胺細(xì)胞移植到大鼠腦受損害一側(cè)的尾狀核中，試圖改善運(yùn)動原毛病。從移植那天開始，在兩周內(nèi)每天通過腹膜內(nèi)給藥本發(fā)明的化合物(Ⅰ)，測試本發(fā)明的化合物(Ⅰ)對改善運(yùn)動原失調(diào)和移植細(xì)胞生長的活性。發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物(Ⅰ)具有改善運(yùn)動原毛病的促進(jìn)作用。
制備由汞中毒引起神經(jīng)毛病的大鼠和小鼠模型，試驗本發(fā)明化合物(Ⅰ)的活性。發(fā)現(xiàn)化合物(Ⅰ)對情況改善以及恢復(fù)到正常情況有促進(jìn)作用，對化學(xué)藥品引起的病癥有治療作用，并有改善和恢復(fù)理解和記憶的作用。
因此，很明顯，本發(fā)明的化合物(Ⅰ)用作改善和治療哺乳動物各種神經(jīng)疾病如周圍神經(jīng)和中樞神經(jīng)疾病的藥劑，也用作改善理解和記憶的藥劑。
各種類型的神經(jīng)病包括例如各種周圍神經(jīng)病癥，伴隨運(yùn)動原的、感覺的或外界的屈阻滯，醇引起的或藥物引起的，糖尿病的和代謝的，或原發(fā)的周圍神經(jīng)疾病，可以列舉包括創(chuàng)傷的、炎癥的、免疫的神經(jīng)根損害為這樣的神經(jīng)疾病。更具體的實例包括面麻痹、坐骨神經(jīng)麻痹、脊柱肌肉萎縮、肌肉營養(yǎng)不良、重癥肌無力、多發(fā)性硬代、肌萎縮側(cè)硬化、急性播散的腦脊髓炎、格一巴二氏綜合癥、接種后的腦脊髓炎、SMON疾病、癡呆、阿爾茨海默氏綜合癥、顱損害后的情況、腦局部缺血、腦出血的腦梗塞形成的后遺癥和風(fēng)濕病。這些實例不是限制性的。
通過毒性試驗，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物僅有微弱的毒性和副作用，可被用作安全和高效的藥物。
試驗例1本發(fā)明化合物對成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞的作用用下述方法進(jìn)行試驗。在含有10%FCS的Dulbecco改進(jìn)的Eagle介質(zhì)〔DMEM，每毫升含有100單位青霉素G鈉和100微克鏈霉素硫酸鹽〕中，把在對數(shù)生長期的小鼠2a神經(jīng)細(xì)胞接種于48穴的平皿上，以使每穴有1，000個細(xì)胞，每穴中有0.25ml培養(yǎng)液，在空氣中含有5%二氧化碳的恒溫箱中于37℃培養(yǎng)1天。然后加入和介質(zhì)量相同(0.25ml)4%戊二醛水溶液，培養(yǎng)液在室溫下放置2小時以固定細(xì)胞。用水洗后加入0.05%亞甲蘭水溶液使細(xì)胞染色。在顯微鏡下用肉眼計數(shù)具有長得快的軸突的細(xì)胞數(shù)量(細(xì)胞至少含有一個軸突，軸突長度至少是細(xì)胞直徑長度的2倍)，計算這些細(xì)胞在全部細(xì)胞中的比例。在從穴中心不動的標(biāo)記向左和向右連續(xù)的5或更多的視區(qū)(至少是穴全部表面積的2%)內(nèi)觀察穴，計數(shù)200多個細(xì)胞。一種藥物化合物最多以六種不同濃度使用，每種濃度做三次試驗。結(jié)果以平均數(shù)±S.D表示，結(jié)果列于表1中。
小鼠成神經(jīng)細(xì)胞瘤Ns-20Y細(xì)胞同樣在用聚鳥氨酸涂覆的皿中培養(yǎng)，測試化合物的作用。從開始培養(yǎng)后24小時和48小時得到的結(jié)果列于表2中。

表1(續(xù))
表1(續(xù))
表1(續(xù))
-待續(xù)-
表1(續(xù))
表2(續(xù))
表2(續(xù))
表2(續(xù))
試驗例2對壓碎坐骨神經(jīng)大鼠的治療效果本發(fā)明的化合物對壓碎坐骨神經(jīng)的大鼠作為周圍神經(jīng)病癥模型的治療效果用下述項目進(jìn)行試驗(1)壓碎坐骨神經(jīng)的后腳爪機(jī)能的變化;(2)作為末梢神經(jīng)退化和再生過程指數(shù)的肌肉重量的變化。
在試驗中，使用雄性大鼠(鼠齡6周)，每組7只。用與Yamatsu等人的方法相似的方法(參見Kiyomi Yamatsu，Takenori Kaneko，Akifumi Kitahara，Isao Ohkawa，Journal of Japanese Pharmacological Society，72，259-268〔1976〕)及與Hasegawa等人的方法相似的方法(參見Kazuo Hasegawa，Naoji Mikuni，Yutaka Sakai，Journal of Japanese Pharmacological Society，74，721-734〔1978〕)壓碎坐骨神經(jīng)。具體地說，在用戊巴比妥麻醉下(40mg/kg，腹膜內(nèi))，暴露股骨左側(cè)的坐骨神經(jīng)，暴露坐骨神經(jīng)那側(cè)在N.脛骨肌和N.小腿肚肌之間從分枝部分到中心5mm處用變形的動脈(Klomme)壓碎，有2mm寬，0.1mm裂孔。手術(shù)后，這些大鼠分到隨機(jī)抽樣時的試驗組內(nèi)。
選擇第118號化合物作為本發(fā)明的化合物(Ⅰ)，從手術(shù)那天到第22天每天一次通過腹膜內(nèi)向大鼠投藥。投甲鈷銨(Gedeon Richter有限公司制造)的組和投0.9%生理鹽水的組作為對照組。隨著時間推移(在坐骨神經(jīng)壓碎后第1天，第4天，第7天，第10天，第14天，第17天，第21天和第23天)測定下列項目。
(1)壓碎坐骨神經(jīng)的后腳爪一側(cè)機(jī)能的變化測定指間距離，因為這個距離是在功能上顯示神經(jīng)退化和再生的良好指數(shù)，其變化可以隨時間推移測定。
用與Hasegawa方法〔Hasegawa，K.，Experientia，34，750-751(1978)〕相似的方法，測定后腳爪第一指和第五指向的距離。
計算測定的距離與正常距離的比率，用百分?jǐn)?shù)(%)表示。平均計算值和標(biāo)準(zhǔn)誤差(S.E.)列于表3中。用斯氏的t一測驗法，對與投生理鹽水的對照組的數(shù)值顯然不同的試驗組數(shù)值，附有上標(biāo)＊為P＜0.05，附有上標(biāo)＊＊為P＜0.01。
在坐骨神經(jīng)壓碎后指間距離馬上變?yōu)檎＞嚯x的大約一半(50%)，直到第10天都傾向于減少。在各組中未見顯著差異。在第14天和第17天在投藥物組中出現(xiàn)再生，但是未顯示出與投生理鹽水組有顯著差異。在第21天，在投藥物組中和投甲鈷銨組中有快速恢復(fù)的明顯傾向性，這些組也顯示出與投生理鹽水組有顯著的差異。在第23天還繼續(xù)恢復(fù)。
(2)肌內(nèi)重量的變化已知去除神經(jīng)和神經(jīng)病癥能引起在其控制下的肌肉萎縮，肌肉萎縮一般由神經(jīng)的再控制而治愈。由于這個理由，選擇定量的肌肉重量變化作為指數(shù)。在手術(shù)后第23天，在用戊巴比妥麻醉下提取腳爪兩側(cè)的比目魚肌，測定它們的重量。計算壓碎側(cè)的比目魚肌重量與正常側(cè)的比目魚肌重量的比值，并用百分?jǐn)?shù)(%)表示。各組的平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤差(S.E.)列于表3。
試驗例3對由于移植胎兒大腦細(xì)胞使大鼠腦細(xì)胞損害引起的運(yùn)動原失調(diào)的改善的促進(jìn)作用將鼠齡為4周雌性Wistar大鼠(體重100g)腦左側(cè)的黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)細(xì)胞通過注射很少量的6-羥基多巴胺而損壞。在幾天內(nèi)大鼠在損害側(cè)的相反方向表現(xiàn)出自發(fā)的旋轉(zhuǎn)傾向，但是在那以后沒觀察到明顯的不正常動作。當(dāng)把去氧麻黃堿(5mg/kg，腹膜內(nèi))投入有損害的黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)細(xì)胞的大鼠時，它們便開始向損害側(cè)做旋轉(zhuǎn)運(yùn)動。
在通過投藥損壞兩周后，將含有多巴胺細(xì)胞的胼胝體干(即在腹側(cè)的黑質(zhì)和大腦腳蓋)從14天至17天的胎兒大鼠的腦中切下，切碎，用胰蛋白酶處理。然后，提取的組織在37℃保溫30分鐘，用移液管取出該組織，配成懸浮液。向損害側(cè)的尾狀核的兩邊分別注入5微升懸浮液(總共10微升，大約105個細(xì)胞)。
從移入那天起的兩周內(nèi)每天以100mg/kg(腹膜內(nèi))的劑量投每種化合物(Ⅰ)。在移植和投入藥物前2周和1周，后2周和4周，測試通過投入去氧麻黃堿引起的旋轉(zhuǎn)運(yùn)動。在投入去氧麻黃堿后，以10分鐘的間隔對1分鐘內(nèi)旋轉(zhuǎn)運(yùn)動的次數(shù)計數(shù)，六次計數(shù)的旋轉(zhuǎn)運(yùn)動的總數(shù)求取旋轉(zhuǎn)運(yùn)動的平均數(shù)。
結(jié)果列于表4。
試驗例4由汞中毒引起神經(jīng)病癥的小鼠理解和記憶的改善和恢復(fù)作用使用雄性BalbC系小鼠，鼠齡7周，首先在一周內(nèi)使小鼠理解丁字形曲徑三次，以便它們從開始點(diǎn)一直跑到安全區(qū)域。然后，每天以6mg/kg的劑量口服氯化甲基汞(縮寫為MMC)，連續(xù)6天。每天以0.1ml/10g的劑量投生理鹽水的小鼠組用做對照組。從投MMC第二天開始，在10天內(nèi)，分別以每天69.5mg/kg和76.9mg/kg的劑量通過腹膜內(nèi)投第102號和第116號化合物，以便使化合物的摩爾數(shù)相等。在投藥后第6天(即開始試驗后第12天)，恢復(fù)丁字形曲徑的理解，觀察小鼠的跑動行為。記下在恢復(fù)后第10天和第11天(開始試驗后第21天和第22天)在丁字形曲徑中可被試驗的小鼠數(shù)，表示為分母。計算在10次跑動試驗中至少有8次在5秒內(nèi)跑到安全區(qū)的小鼠數(shù)，表示為分子。試驗動物數(shù)的減少由于MMC中毒引起的死亡。測定動物跑到安全區(qū)所需的時間(秒)。計算平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤差(SE)。結(jié)果列于表5。
試驗結(jié)果證明本發(fā)明化合物具有改善小鼠的理解和記憶及其恢復(fù)作用的效果。
表5有誘發(fā)性神經(jīng)病癥的小鼠的理解和記憶的改善和恢復(fù)作用。
試驗例5本發(fā)明化合物的急性毒性用下述方法測定。
雄性ddy系5周小鼠和雄性Wistar系8周大鼠，每組5只，用作試驗動物。將每種化合物溶于生理鹽水中，口服(P.O.)或腹膜內(nèi)投藥(i.p.)，投藥后24小時評定化合物的毒性。結(jié)果列于表6和表7中。
表6
本發(fā)明提供的通式(Ⅰ)的化合物對有神經(jīng)病癥的大鼠和小鼠的神經(jīng)細(xì)胞增生，軸突的形成和生長，神經(jīng)再生作用和運(yùn)動原功能恢復(fù)作用具有促進(jìn)作用，可以適用于改善和治療神經(jīng)疾病，例如周圍神經(jīng)或中樞神經(jīng)病癥和癡呆。預(yù)期這些化合物也適用于由涉及知覺的和感覺功能和自動功能的神經(jīng)組織和細(xì)胞引起的神經(jīng)疾病的恢復(fù)、改善和治療。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，正如在試驗例1至4和表1至5中表明的，本發(fā)明的化合物(Ⅰ)的生物活性與作為對照藥物的伊沙索寧和甲鈷銨的生物活性比較是相等或較高。正如在試驗例5和表6和7中表明的，本發(fā)明化合物(Ⅰ)的毒性一般是微弱的。因此，本發(fā)明的化合物一般被認(rèn)為是高活性和高安全性的藥物，并且是有微弱毒性的很有用的藥物。
權(quán)利要求
1.制備下式(Ⅰ)表示的嘧啶衍生物或其醫(yī)藥上可用的鹽的方法，
式中X代表(i)下式(Ⅰ)-1的基團(tuán)，
其中R1代表氫原子或含有1至4個碳原子的烷基，R2代表苯乙基、環(huán)己基、苯基、芐基或哌啶基，或可以被哌啶子基取代的含有1至4個碳原子的烷基，哌啶子基又可以被C1-4烷基取代，或者R1和R2可以與連接它們的氮原子一起形成雜環(huán)基，該雜環(huán)基從下列基團(tuán)中選擇
R3代表環(huán)己基、4-吡啶基、苯甲?；駽1-4烷基，可被氯或低級烷氧基取代的苯基，或被C1-6烷基一取代或二取代的烷基氨基羰基，R31和R32相同或不同，分別代表氫原子或低級烷氧基，而雜環(huán)基可以任意被苯基、芐基、苯硫基、氰基或低級烷氧基羰基取代，或被
-基一取代，或被C1-4烷基一至五取代，或被鄰接的環(huán)碳原子上的C3-5多亞甲基取代，或者(ii)下式(Ⅰ)-2代表的基團(tuán)，其中R4代表含有1至4個碳原子的烷基；y和Z可以一起以二價基-y-Z-的形式形成下式的基團(tuán)
其中R6代表含有1至4個碳原子的烷基，該方法包括(C1)式(Ⅻ)的化合物
其中R1和R2如同關(guān)于式(Ⅰ)的定義，R代表含有1至4個碳原子的烷基，與下式(ⅩⅢ)的化合物反應(yīng)其中R6如同關(guān)于式(Ⅰ)的定義；或者(C2)下式(ⅩⅣ)的化合物
其中R6如同關(guān)于式(Ⅰ)的定義，R是含有1至4個碳原子的烷基，與下式(ⅩⅤ)的化合物反應(yīng)
其中R1和R2如同關(guān)于式(Ⅰ)的定義，制備下式(Ⅰ)-C的化合物
其中R1、R2和R6如同關(guān)于式(Ⅰ)的定義；以及，必要時，用適當(dāng)?shù)乃釋⑹?Ⅰ)化合物轉(zhuǎn)化成其醫(yī)藥上可用的鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中醫(yī)藥上可用的鹽從下列嘧啶衍生物的鹽中選擇鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、乙酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、苯甲酸鹽、檸檬酸鹽、葡糖酸鹽、葡聚糖酸鹽、甲基磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、萘磺酸鹽和季銨鹽。
全文摘要
本發(fā)明提供了制備新的嘧啶衍生物或其醫(yī)藥上可用的鹽的方法。本發(fā)明的新化合物可用于治療哺乳動物周圍神經(jīng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)疾病。
文檔編號C07D487/04GK1079742SQ9310311
公開日1993年12月22日 申請日期1993年3月17日 優(yōu)先權(quán)日1987年8月26日
發(fā)明者粟屋昭, 堀込和利, 佐佐木忠之, 小林昶, 水智彰, 中野卓雄, 富野郁夫, 荒木信太郎, 武居三幸, 加藤穗慈, 橫山惠一 申請人:三井制藥工業(yè)株式會社, 三井石油化學(xué)工業(yè)株式會社