一種蛹蟲草腺苷的提取方法
【專利摘要】一種蛹蟲草腺苷的提取方法，其提取方法的具體步驟為：（1）超微粉碎：（2）蛹蟲草腺苷的超聲仿生提取、酶解提取。本發(fā)明的一種蛹蟲草腺苷的提取方法，應(yīng)用酶解技術(shù)破除了蛹蟲草堅(jiān)硬的細(xì)胞壁，有利于細(xì)胞內(nèi)容物的溶出，有利于提取過程的順利進(jìn)行，在保證腺苷的生物活性的同時(shí)，提高腺苷的提職率，減少浪費(fèi)；應(yīng)用該方法提取得到的腺苷，不僅提取率高，易于后續(xù)的分離純化，而且易于吸收，能夠充分發(fā)揮腺苷在體內(nèi)的功效。
【專利說明】一種蛹蟲草腺苷的提取方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物提取【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種蛹蟲草腺苷的提取方法。

【背景技術(shù)】
[0002]蛹蟲草又名北冬蟲夏草、北蟲草等，與冬蟲夏草同屬異種，是蟲草屬的模式種，屬于子囊菌亞門蟲草屬，是其寄生在昆蟲綱鱗翅目夜蛾科昆蟲蛹體上所長(zhǎng)出的子座與僵死蛹體的復(fù)合體。多年的研宄表明蛹蟲草具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、抗感染等多種藥理活性，廣泛用于腫瘤、免疫功能低下、包括艾滋病毒感染等多種疾病中。
[0003]腺苷是一種內(nèi)源性嘌呤核苷酸，具有廣泛的生理活性，蛹蟲草中腺苷的含量與冬蟲夏草相似，甚至更高，多在0.01%以上。至今已從蟲草及發(fā)酵菌絲中分離鑒定有11個(gè)核苷類化合物，包括腺嘌呤、腺苷、尿嘧啶、尿苷、鳥嘌呤、鳥苷、次黃嘌呤、次黃嘌呤核苷、胸腺嘧啶、胸腺嘧啶脫氧核苷及尿嘧啶脫氧核苷等。蟲草素是蛹蟲草中主要活性成分，也是第一個(gè)從真菌中分離出來的核苷類抗生素，又稱蟲草菌素、蛹蟲草菌素。蟲草素的分子式為C10H13N503，相對(duì)分子質(zhì)量為251。蛹蟲草是在目前已報(bào)道的300余種蟲草菌中唯一能大量形成蟲草素的菌種。天然冬蟲夏草或發(fā)酵菌絲體中蟲草素不存在或極其微量。目前國(guó)內(nèi)外針對(duì)其結(jié)構(gòu)及藥理作用已經(jīng)進(jìn)行了詳細(xì)的研宄，研宄證明蟲草素具有多種生物活性，主要表現(xiàn)在抗菌、抗炎、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)等幾個(gè)方面。其中蟲草素對(duì)腫瘤的抑制作用一直是廣大科學(xué)家們關(guān)注的熱點(diǎn)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種蛹蟲草腺苷的提取方法。
[0005]本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn):一種蛹蟲草腺苷的提取方法，其提取方法的具體步驟為:
(1)超微粉碎:稱取200g烘干的蛹蟲草子實(shí)體，放入超微粉碎機(jī)中粉碎5-15分鐘；
(2)蛹蟲草腺苷的超聲仿生提取、酶解提取，包括:
a、按照料液比，每g物料加入Iml的提取劑，為6~25m/v的比例加入PH值為4.0-6.0的鹽酸溶液，稱取質(zhì)量體積比為0.5-1%的破壁酶，于37°C條件下保溫10~30min，然后于超聲波中以60%~80%的功率加熱1~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，沉淀自然風(fēng)干；
b、再按照料液比，每g物料加入Iml的提取劑，為6~25m/v的比例向上述PH值為4.0-6.0的鹽酸溶液提取，結(jié)束后自然風(fēng)干的沉淀中加入pH為6~7.5，濃度為0.lmol/L的磷酸鈉緩沖溶液，于超聲波中以60%~80%的功率加熱1~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，沉淀自然風(fēng)干收集上清液，沉淀自然風(fēng)干；
C、最后向自然風(fēng)干的沉淀中加入6~30倍體積，每g物料加入Iml的提取劑，PH值為8.0-9.0氫氧化鈉堿性溶液，于超聲波中以60%~80%的功率加熱1~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，棄去沉淀； d、合并三次上清液，過0.45um的水系膜后取10ul加超純水稀釋至100ul，過0.22um的水系膜后，于高效液相色譜儀中測(cè)定腺苷的含量，得到蛹蟲草腺苷。
[0006]本發(fā)明具有以下有益效果
1.該方法模擬人體胃腸道酸堿環(huán)境進(jìn)行蛹蟲草腺苷的提取，所獲得的腺苷易于加工成各種類型的藥劑；在生產(chǎn)加工成口服液或其他類型的劑型之后，可確保蛹蟲草有效成分的直接吸收，減輕腸胃負(fù)擔(dān)；
2.該方法提取蛹蟲草腺苷含量高，腺苷的含量可達(dá)到每g原藥材提取得到2.825mg的量，最終活性成分的提取率可高達(dá)0.304%，比其他的常規(guī)提取方法提取率都高，且質(zhì)量可控，料損少，生產(chǎn)周期短，適合大規(guī)模生產(chǎn)，市場(chǎng)潛力巨大；
3.酶解技術(shù)破除了蛹蟲草堅(jiān)硬的細(xì)胞壁，有利于細(xì)胞內(nèi)容物的溶出，有利于提取過程的順利進(jìn)行，在保證腺苷的生物活性的同時(shí)，提高腺苷的提職率，減少浪費(fèi)；
4.應(yīng)用該方法提取得到的腺苷，不僅提取率高，易于后續(xù)的分離純化，而且易于吸收，能夠充分發(fā)揮腺苷在體內(nèi)的功效。

【具體實(shí)施方式】
[0007]實(shí)施例1
一種蛹蟲草腺苷的提取方法，其提取方法的具體步驟為:
(I)超微粉碎:稱取200g烘干的蛹蟲草子實(shí)體，放入超微粉碎機(jī)中粉碎10分鐘。
[0008](2)蛹蟲草腺苷的超聲仿生提取加酶解提取，包括:
a、按照料液比(每g物料加入Iml的提取劑)為15(m/v)的比例加入PH值為5.0的鹽酸溶液，稱取質(zhì)量體積比為0.5%的破壁酶，于37°C條件下保溫20min，然后于超聲波中以60%~80%的功率加熱1~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，沉淀自然風(fēng)干；
b、再按照料液比(每g物料加入Iml的提取劑)為15(m/v)的比例向上述PH值為5.0的鹽酸溶液提取。結(jié)束后自然風(fēng)干的沉淀中加入PH為7.0，濃度為0.lmol/L的磷酸鈉緩沖溶液，于超聲波中以60%~80%的功率加熱1~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，沉淀自然風(fēng)干收集上清液，沉淀自然風(fēng)干；
C、最后向自然風(fēng)干的沉淀中加入15倍體積(每g物料加入Iml的提取劑)的PH值為8.5氫氧化鈉堿性溶液，于超聲波中以60%~80%的功率加熱1~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，棄去沉淀；
d、合并三次上清液，過0.45um的水系膜后取10ul加超純水稀釋至100ul，過0.22um的水系膜后于高效液相色譜儀中測(cè)定腺苷的含量。
[0009]腺苷的含量可達(dá)到每g原藥材提取得到2.265mg的量，最終活性成分的提取率可高達(dá) 0.272%。
[0010]實(shí)施例2
一種蛹蟲草腺苷的提取方法，其提取方法的具體步驟為:
(I)超微粉碎:稱取200g烘干的蛹蟲草子實(shí)體，放入超微粉碎機(jī)中粉碎15分鐘。
[0011](2)蛹蟲草腺苷的超聲仿生提取加酶解提取，包括:
a、按照料液比(每g物料加入Iml的提取劑)為10 (m/v)的比例加入PH值為5.0的鹽酸溶液，稱取質(zhì)量體積比為1%的破壁酶，于37°C條件下保溫20min，然后于超聲波中以60%~80%的功率加熱1~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，沉淀自然風(fēng)干；
b、再按照料液比(每g物料加入Iml的提取劑)為10 (m/v)的比例向上述PH值為
4.0-6.0的鹽酸溶液提取。結(jié)束后自然風(fēng)干的沉淀中加入pH為7.0，濃度為0.lmol/L的磷酸鈉緩沖溶液，于超聲波中以60%~80%的功率加熱1~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，沉淀自然風(fēng)干收集上清液，沉淀自然風(fēng)干；
C、最后向自然風(fēng)干的沉淀中加入10倍體積(每g物料加入Iml的提取劑)的PH值為8.5氫氧化鈉堿性溶液，于超聲波中以60%~80%的功率加熱1~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，棄去沉淀；
d、合并三次上清液，過0.45um的水系膜后取10ul加超純水稀釋至100ul，過0.22um的水系膜后于高效液相色譜儀中測(cè)定腺苷的含量。
[0012]腺苷的含量可達(dá)到每g原藥材提取得到2.825mg的量，最終活性成分的提取率可高達(dá) 0.304%。
【權(quán)利要求】
1.一種蛹蟲草腺苷的提取方法，其特征在于:其提取方法的具體步驟為: (1)超微粉碎:稱取200g烘干的蛹蟲草子實(shí)體，放入超微粉碎機(jī)中粉碎5-15分鐘； (2)蛹蟲草腺苷的超聲仿生提取、酶解提取，包括: a、按照料液比，每g物料加入Iml的提取劑，為6~25m/v的比例加入PH值為4.0-6.0的鹽酸溶液，稱取質(zhì)量體積比為0.5-1%的破壁酶，于37°C條件下保溫10~30min，然后于超聲波中以60%~80%的功率加熱1~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，沉淀自然風(fēng)干； b、再按照料液比，每g物料加入Iml的提取劑，為6~25m/v的比例向上述PH值為.4.0-6.0的鹽酸溶液提取，結(jié)束后自然風(fēng)干的沉淀中加入pH為6~7.5，濃度為0.lmol/L的磷酸鈉緩沖溶液，于超聲波中以60%~80%的功率加熱1~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，沉淀自然風(fēng)干收集上清液，沉淀自然風(fēng)干； C、最后向自然風(fēng)干的沉淀中加入6~30倍體積，每g物料加入Iml的提取劑，PH值為8.0-9.0氫氧化鈉堿性溶液，于超聲波中以60%~80%的功率加熱1~5鐘之后，以.8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，棄去沉淀； d、合并三次上清液，過0.45um的水系膜后取10ul加超純水稀釋至100ul，過0.22um的水系膜后，于高效液相色譜儀中測(cè)定腺苷的含量，得到蛹蟲草腺苷。
【文檔編號(hào)】C07H19/167GK104478978SQ201410732004
【公開日】2015年4月1日 申請(qǐng)日期:2014年12月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月6日
【發(fā)明者】陳喜軍 申請(qǐng)人:黑龍江眾生生物工程有限公司