轉(zhuǎn)化生長因子β1激動(dòng)劑多肽及其制備方法、應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及預(yù)防或治療腦梗塞的多肽化合物。轉(zhuǎn)化生長因子-β1激動(dòng)劑多肽2，其特征在于：其序列為CAELYIDFRKDLGWKWIHEP。采用Fmoc保護(hù)的固相合成技術(shù)制備，F(xiàn)moc-Gly-Wang樹脂作為載體，6-氯-1-羥基苯并三氮唑?yàn)榭s合劑，三氟乙酸為切割試劑?？晒矁r(jià)連接一個(gè)佐劑，佐劑是牛血清白蛋白，人血清白蛋白，或聚乙二醇。轉(zhuǎn)化生長因子-β1激動(dòng)劑多肽2在預(yù)防或治療腦梗塞中的應(yīng)用?？赏ㄟ^多種給藥方式預(yù)防或治療腦梗塞，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注，口服給藥如藥丸、膠囊等，鼻噴劑等。本發(fā)明中的轉(zhuǎn)化生長因子-β1激動(dòng)劑多肽2可以靶向促進(jìn)轉(zhuǎn)化生長因子-β1表達(dá)，提高血漿中轉(zhuǎn)化生長因子-β1的含量，達(dá)到預(yù)防或治療腦梗塞的作用。
【專利說明】轉(zhuǎn)化生長因子β1激動(dòng)劑多肽及其制備方法、應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及用于預(yù)防或治療腦梗塞的多肽化合物。

【背景技術(shù)】：
[0002] 腦梗塞是指突然發(fā)生的腦局部血液循環(huán)障礙導(dǎo)致腦組織缺血缺氧引起的局灶性 神經(jīng)功能缺損綜合征。世界范圍內(nèi)三大死亡疾病之一，也是成年人首位致殘?jiān)?。由于?前腦梗塞的病因及發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，且臨床上理想的治療手段有限，使得其不僅發(fā) 病率很高，致死率、致殘率及復(fù)發(fā)率也較高，給個(gè)人和社會(huì)造成了巨大的負(fù)擔(dān)。
[0003] 目前預(yù)防或治療腦梗塞的藥物，主要為針對控制易患因素。如患者凝血高，給予抗 血栓的治療；如患有糖尿病、應(yīng)及時(shí)控制血糖，包括飲食控制；如有高血壓則應(yīng)給降壓藥， 使血壓降至適當(dāng)水平，如有血膽固醇增高，則應(yīng)控制高膽固醇適當(dāng)給予降脂藥物。
[0004] 轉(zhuǎn)化生長因子-β I (transforming growth factor-pi, TGF-β 1)是具有潛在抗炎 特性的多功能細(xì)胞因子，目前發(fā)現(xiàn)其可通過多種途徑參與腦缺血后損傷與修復(fù)的病理生理 過程。有研究稱其可通過增加 TGF-β 1蛋白的表達(dá)，提高血漿中TGF-β 1的含量，進(jìn)而在疾 病的發(fā)生發(fā)展中起到預(yù)防或治療腦梗塞的作用。然而，現(xiàn)階段，沒有成熟開發(fā)的轉(zhuǎn)化生長因 子-β 1激動(dòng)劑問世，用于預(yù)防或治療腦梗塞。


【發(fā)明內(nèi)容】
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[0005] 本發(fā)明目的是針對現(xiàn)有預(yù)防或治療腦梗塞藥物的特點(diǎn)，設(shè)計(jì)一種多肽化合物，能 有效治療或預(yù)防腦梗塞。
[0006] 技術(shù)方案
[0007] 轉(zhuǎn)化生長因子-β 1激動(dòng)劑多肽2,其特征在于：其序列為CAELYIDFRKDLGWKWIHEP。 采用Fmoc保護(hù)的固相合成技術(shù)制備，F(xiàn)moc-Gly-Wang樹脂作為載體,6-氯-1-輕基苯并三 氮唑?yàn)榭s合劑，三氟乙酸為切割試劑?？晒矁r(jià)連接一個(gè)佐劑，佐劑是牛血清白蛋白，人血清 白蛋白，或聚乙二醇。轉(zhuǎn)化生長因子-β?激動(dòng)劑多肽2在預(yù)防或治療腦梗塞中的應(yīng)用?？?通過多種給藥方式預(yù)防或治療腦梗塞，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注，口服 給藥如藥丸、膠囊等，鼻噴劑等。
[0008] 有益結(jié)果：
[0009] 本發(fā)明中的轉(zhuǎn)化生長因子-β 1激動(dòng)劑多肽2可以靶向促進(jìn)轉(zhuǎn)化生長因子-β 1表 達(dá)，提高血漿中轉(zhuǎn)化生長因子-β 1的含量，達(dá)到預(yù)防或治療腦梗塞的作用。

【具體實(shí)施方式】
[0010] 實(shí)施例1
[0011] 多肽的化學(xué)合成方法
[0012] 多肽2用Fmoc保護(hù)的固相合成技術(shù)制備。合成反應(yīng)按照抑制劑1序列從C端向 N端進(jìn)行,Fmoc-Gly-Wang樹脂作為載體，（可在Advanced Chem Tech公司購得）上有自由 氨基。每一步連接過程中，氨基酸殘基都要活化，活化混合物中有4倍于載體上自由氨基的 HBTU，HOBt，DIEA和Fmoc-氨基酸。用6-氯-1-羥基苯并三氮唑?yàn)榭s合劑，進(jìn)行連接反應(yīng)， 每次氨基酸的連接反應(yīng)之后，用吡啶/醋酸/N-甲基咪唑（4:2:0.5)的混合物來封閉未連 接的自由氨基，封閉反應(yīng)10分鐘。下一個(gè)氨基酸連接之前，都要把載體上的Fmoc-基團(tuán)去 掉，去Fmoc-基團(tuán)使用含20%哌啶的二甲基甲酰胺，需15分鐘。最后，當(dāng)所有氨基酸殘基順 序連接之后，抑制劑1用97%三氟乙酸從載體上切割下來，切割在室溫下進(jìn)行2小時(shí)。
[0013] 應(yīng)用上述化學(xué)條件可合成并獲得多肽2,序列為CAELYIDFRKDLGWKWIHEP，該序列 為全新序列。也可委托上海生工合成。
[0014] 實(shí)施例2
[0015] 轉(zhuǎn)化生長因子1激動(dòng)劑多肽2預(yù)防大鼠腦梗塞模型的作用
[0016] 雄性8周齡的SD大鼠40只，隨機(jī)分為4組，分別為：A組為空白對照組：生理鹽水； B組為模型對照組：造模+生理鹽水；C組為藥物干預(yù)組：造模+轉(zhuǎn)化生長因子-β 1激動(dòng)劑 多肽2(4mg/kg/d) ;D為陽性藥干預(yù)組：造模+尿激酶（10mg/kg)。連續(xù)10天。建立MCAO 的模型。（1)觀察大鼠局部腦缺血再灌注后梗死體積的大?。唬?)采用神經(jīng)行為學(xué)評分，觀 察MCAO動(dòng)物的康復(fù)情況；（3)檢測血漿中轉(zhuǎn)化生長因子-β 1的含量。
[0017] 結(jié)果：預(yù)防性給予多肽2組的腦梗塞模型大鼠與模型組相比，腦梗塞面積減少 (Ρ〈0. 01)，神經(jīng)行為學(xué)評分降低（Ρ〈0. 01)，血漿中TGF- β 1的含量升高（Ρ〈0. 01)，與模型對 照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見表1)。
[0018] 表1轉(zhuǎn)化生長因子_β 1激動(dòng)劑多肽2對預(yù)防大鼠腦梗塞模型的作用

【權(quán)利要求】
1. 一種轉(zhuǎn)化生長因子-M激動(dòng)劑多肽，其特征在于：其氨基酸序列為 CAELYIDFRKDLGffKffIHEP 〇
2. -種權(quán)利要求1所述多肽的制備方法，其特征在于：采用Fmoc保護(hù)的固相合成技 術(shù)制備，F(xiàn)moc-Gly-Wang樹脂作為載體，6-氯-1-羥基苯并三氮唑?yàn)榭s合劑，三氟乙酸為切 割試劑。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的多肽的制備方法，其特征在于：共價(jià)連接一個(gè)佐劑，佐劑是牛 血清白蛋白，人血清白蛋白，或聚乙二醇。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽在制備預(yù)防或治療腦梗塞藥物中的應(yīng)用。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的多肽的用途，其特征在于：可通過多種給藥方式預(yù)防或治療 腦梗塞，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注，口服給藥如藥丸、膠囊等，鼻噴劑。
【文檔編號】C07K1/04GK104311631SQ201410508311
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年9月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月28日
【發(fā)明者】羅瑞雪 申請人:蘇州普羅達(dá)生物科技有限公司