一種銀杏內(nèi)酯a與銀杏內(nèi)酯b的精制方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種銀杏內(nèi)酯A、B的精制方法，包括以下步驟：（1）萃取；（2）過(guò)柱制備銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B的粗品；（3）結(jié)晶純化：分別將銀杏內(nèi)酯A、B粗品用含水乙醇結(jié)晶后制備高純度銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B的精制品。所得銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B的純度均為95%-98%。本方法用銀杏葉提取物為原料，工藝簡(jiǎn)單，減少損失，同時(shí)分離純化銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B。全過(guò)程除乙醇和乙酸乙酯外，不用其它有機(jī)溶劑，可實(shí)現(xiàn)重結(jié)晶母液回收利用。產(chǎn)品純度高，適于工業(yè)化生產(chǎn)，有較大的應(yīng)用價(jià)值。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B的精制方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥，尤其涉及中藥有效成分單體的純化，具體涉及一種銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B的精制方法。
【背景技術(shù)】
[0002]銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B是銀杏中二萜內(nèi)酯類(lèi)化合物，是一類(lèi)特異有效的血小板活化因子受體拮抗劑。此外，銀杏總內(nèi)酯還包括銀杏內(nèi)酯C、銀杏內(nèi)酯J、銀杏內(nèi)酯M和白果內(nèi)酯等。銀杏總內(nèi)酯中各單體的藥效和功用存在一定差異。銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B對(duì)治療心腦血管疾病具有顯著療效。為開(kāi)發(fā)高效新藥，控制藥品質(zhì)量，有必要對(duì)銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯B進(jìn)行高純度分離。
[0003]文獻(xiàn)報(bào)道的銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B單體分離方法主要有醇類(lèi)提取一溶劑萃取一柱色譜分離法，醇類(lèi)提取一溶劑萃取一反相色譜分離法，色譜分離一重結(jié)晶法和超臨界流體萃取法(SCFE)等。
[0004]ZL00117758.3 (《由銀杏葉或銀杏葉浸膏制備藥物銀杏內(nèi)酯A，B的方法》):該方法是向銀杏葉或其浸膏加入乙醇等浸取劑，得到的浸取液經(jīng)過(guò)濾、分層，取出有機(jī)相去雜，然后經(jīng)濃縮、干燥獲得富集銀杏內(nèi)酯A和B，采用制備型液相色譜再分離A與B。該方法運(yùn)用制備色譜進(jìn)行分離，缺點(diǎn)在于制備銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B生產(chǎn)能力小，難于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化。
[0005]ZL201010536023.6 (《一種銀杏內(nèi)酯A的制備方法》):其特征在于包含下列步驟:將銀杏葉粗提物用大孔反相吸附樹(shù)脂進(jìn)行柱層析分離，即可；其中，所述的大孔反相吸附樹(shù)脂的參數(shù)如下:粒徑為50-100μπι，孔徑為90-110A，樹(shù)脂骨架為聚苯乙烯一二乙烯苯。該制備方法缺點(diǎn)在于只分離得到銀杏葉中銀杏內(nèi)酯Α，其它內(nèi)酯類(lèi)成分被舍棄，提高了該工藝的成本，浪費(fèi)原料。
[0006]ZL201010608847.X (《一種從銀杏內(nèi)酯混合物中分離銀杏內(nèi)酯B的方法》):本發(fā)明公開(kāi)了一種從銀杏內(nèi)酯混合物中分離銀杏內(nèi)酯B的方法，該方法以離子液體或者由離子液體水組成的二元混合溶劑為萃取劑，采用分餾萃取法高效地從含有銀杏內(nèi)酯Α、銀杏內(nèi)酯
B、銀杏內(nèi)酯C等銀杏內(nèi)酯同系物的混合物中分離銀杏內(nèi)酯B。該制備工藝缺點(diǎn)在于使用離子液體萃取，成本較高。
[0007]ZL200710050245.5 (《從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯B的方法》):本發(fā)明將公開(kāi)一種從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯B的方法，其步驟如下:1)取銀杏葉，用由高到低不同濃度的乙醇進(jìn)行提取 ，合并提取液，回收乙醇，得到濃縮后的提取液；2)向濃縮后的提取液中加入乙酸乙酯萃取，回收有機(jī)相后濃縮至浸膏；3)將步驟2)所得浸膏稀釋后上選擇性極性無(wú)孔吸附樹(shù)脂柱，用乙醇洗脫，所得洗脫液回收乙醇后，再用乙醇結(jié)晶得到銀杏內(nèi)酯類(lèi)化合物；4)將銀杏內(nèi)酯類(lèi)化合物結(jié)晶上硅膠柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗脫，收集洗脫液，得到富集銀杏內(nèi)酯B的洗脫液；5)回收步驟4)中收集的洗脫液中的溶劑，再用乙醇結(jié)晶，得到銀杏內(nèi)酯B單體。該制備工藝缺點(diǎn)在于只制備分離得到銀杏內(nèi)酯B，原料利用率不高，且制備工藝中使用多種有機(jī)試劑，難于回收，對(duì)環(huán)境易產(chǎn)生污染。[0008]上述方法中，有的只是得到一種銀杏內(nèi)酯A或銀杏內(nèi)酯B的單體成分，有的工藝流程較長(zhǎng)，不易實(shí)現(xiàn)工業(yè)化。因此，需要研究能同時(shí)純化銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B，適于工業(yè)化生產(chǎn)的精制方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于克服上述不足之處，研究能同時(shí)純化銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B，并適于工業(yè)化生產(chǎn)的精制方法。
[0010]本發(fā)明提供一種銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B的精制方法。
[0011]本發(fā)明方法包括下列步驟:
[0012](1)萃取:取銀杏葉提取物浸膏，加入有機(jī)溶劑進(jìn)行多次萃取，合并萃取液，回收溶劑至干，用含水乙醇定容至濃度為0.2-1.0g/ml ；
[0013](2)過(guò)柱層析富集:將上述藥液通過(guò)反相吸附樹(shù)脂柱進(jìn)行富集，依次用不同濃度的含水乙醇進(jìn)行除雜、洗脫，分段收集洗脫液，分別將洗脫液濃縮至浸膏，分別得到銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B粗品；
[0014](3)結(jié)晶:將上述銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B粗品浸膏用含水乙醇進(jìn)行多次重結(jié)晶，即得到高純度的銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B精制品。
[0015]步驟(3)的重結(jié)晶母液合并后可作為上樣藥液，用于下一批藥液中步驟(2)過(guò)柱分離。
[0016]本方法所得銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B精制品含量各為95%_98%。
[0017]本發(fā)明方法所述步驟(1)中銀杏葉提取物浸膏為市售，含量標(biāo)準(zhǔn)為總內(nèi)酯含量≥6%，總黃酮含量≥24%，銀杏酸含量< lOppm。
[0018]步驟(1)所用有機(jī)溶劑為乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酮、甲基乙基酮、正丁醇或異丁醇中的一種或多種溶劑，優(yōu)選乙酸乙酯，溶劑用量為銀杏葉提取物浸膏的1-10倍(V/W)，萃取次數(shù)為1-5次，所用含水乙醇為10-20%乙醇，優(yōu)選10%乙醇。
[0019]步驟(2)中所用反相樹(shù)脂為MCI或NM-100樹(shù)脂，除雜溶劑為10-30%乙醇，優(yōu)選30%乙醇進(jìn)行除雜，以除去水溶性和大極性雜質(zhì)，再用35-40%乙醇分段進(jìn)行洗脫；所述除雜溶劑洗脫體積為1-5BV，分段收集為前1-2BV (該段主要含有銀杏內(nèi)酯A)，后3-5BV (該段主要含有銀杏內(nèi)酯B)的富集物。
[0020]所述BV為本領(lǐng)域公認(rèn)的洗脫柱體積單位。
[0021]步驟(2)中MCI樹(shù)脂填料為MC1-GEL CHP系列反相吸附樹(shù)脂，其技術(shù)參數(shù)為:粒徑為75-150 μ m，平均粒徑為120 μ m，PH范圍為0-14，孔徑為450埃，基體為聚苯乙烯和二乙烯基共聚物。NM-100樹(shù)脂技術(shù)參數(shù)為粒度范圍為30-50 μ，平均孔徑120埃，比表面積800m2/g。
[0022]步驟(3)中銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B粗品分別用4-50倍粗品重量(V/W)的50_80%乙醇結(jié)晶1-3次，結(jié)晶時(shí)間l_48h，結(jié)晶及重結(jié)晶溫度為-20-25°C。
[0023]本發(fā)明所得銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B含量分別為95-98%。
[0024]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)主要在于:
[0025]①本方法通過(guò)乙酸乙酯萃取后，萃取液一次過(guò)柱即可分離銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B，提高原料的利用效率，節(jié)約成本。[0026]②對(duì)銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯B的粗品分別進(jìn)行重結(jié)晶，提高了銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯B單體的純度。
[0027]③將結(jié)晶后的母液合并后并入下一批藥液中繼續(xù)過(guò)柱富集，提高了銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B的回收率。
[0028]本方法用銀杏葉提取物為原料，工藝簡(jiǎn)單，減少損失，同時(shí)分離純化銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B。全過(guò)程除乙醇和乙酸乙酯外，不用其它有機(jī)溶劑，可實(shí)現(xiàn)溶劑回收利用的綠色生產(chǎn)。產(chǎn)品純度高，適于工業(yè)化生產(chǎn)，有較大的應(yīng)用價(jià)值。
【具體實(shí)施方式】
[0029]參考下列實(shí)施例將更易于理解本發(fā)明，給出實(shí)施例是為了闡明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。
[0030]實(shí)施例所用原料通過(guò)市售得到。
[0031]銀杏葉提取物浸膏為市售，含量標(biāo)準(zhǔn)為總內(nèi)酯含量> 6%，總黃酮含量> 24%，銀杏酸含量< lOppm。
[0032]檢測(cè)方法參考文獻(xiàn)[1](劉曉謙，王躍生，羅曉健等.HPLC-ELSD法測(cè)定不同廠(chǎng)家銀杏葉提取物中4種銀杏內(nèi)酯的含量研究[J]，江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，(20) 1:89-90.即流動(dòng)相:甲醇-水(25: 75)，流速l.0ml/min，ELSD檢測(cè)器:漂移管溫度104°C，載氣流速
2.9L/min，柱溫 25°C)。
[0033]實(shí)施例1
[0034]取銀杏葉提取物浸膏l(xiāng)OOOg，用水`溶液稀釋至0.5g生藥/mL，加入1000ml乙酸乙酯進(jìn)行萃取，共萃取三次，合并乙酸乙酯萃取液，于45°C減壓濃縮至無(wú)溶劑，加入10%乙醇使?jié)饪s液濃度為0.5g/mL，濕法裝柱，使藥液通過(guò)MCI樹(shù)脂，先用30%乙醇洗脫樹(shù)脂除雜，以除去水溶性和大極性雜質(zhì),共洗脫3BV，洗脫速度lBV/h，再用40%乙醇以同樣流速洗脫樹(shù)月旨，分別收集前2BV洗脫液和后2BV洗脫液，分別于45°C減壓濃縮至lg/ml的浸膏，加入500ml80%乙醇，70°C加熱至溶解，4°C冰箱靜置24h析晶，析出晶體后，抽濾，分別得到銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B的粗品，將得到的銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B粗品分別用50ml的80%乙醇重結(jié)晶I次，溫度4°C，靜置時(shí)間24h。析出結(jié)晶，抽濾，母液合并，結(jié)晶分別于80°C烘干，最終得到銀杏內(nèi)酯A0.76g、銀杏內(nèi)酯B1.07g。經(jīng)HPLC-ELSD檢測(cè)(檢測(cè)方法參考文獻(xiàn)[1])銀杏內(nèi)酯A含量為95.6%，銀杏內(nèi)酯B含量為96.2%。
[0035]實(shí)施例2
[0036]取銀杏葉提取物浸膏500g，用水溶液稀釋至0.2g/mL，加入1000ml乙酸乙酯進(jìn)行萃取，共萃取四次，合并乙酸乙酯萃取液，將實(shí)施例1中結(jié)晶后母液與萃取液合并，45°C減壓濃縮合并液至無(wú)溶劑，加入20%乙醇240ml使?jié)饪s液濃度為0.5g/mL,濕法裝柱，使藥液通過(guò)MCI樹(shù)脂，先用30%乙醇洗脫樹(shù)脂除雜，以除水溶性和大極性雜質(zhì)，共洗脫4BV，洗脫速度2BV/h,再用40%乙醇以同樣流速洗脫樹(shù)脂，分別接取前2BV洗脫液和后3BV洗脫液，分別于45°C減壓濃縮至無(wú)溶劑后，加入800ml70%乙醇，70°C加熱至溶解，4°C冰箱靜置12h析晶，析出晶體后，抽濾，分別得到銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B，將得到的銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B繼續(xù)用50ml70%乙醇重結(jié)晶2次，靜置溫度4°C，靜止時(shí)間24h。待析出結(jié)晶后，抽濾，將結(jié)晶后的各份母液合并，并入下一批藥液中，作為上樣藥液繼續(xù)過(guò)柱分離，另存。結(jié)晶分別于80°C烘干，最終得到銀杏內(nèi)酯A0.46g、銀杏內(nèi)酯B0.67g。經(jīng)HPLC-ELSD檢測(cè)(檢測(cè)方法參考文獻(xiàn)
[1])銀杏內(nèi)酯A含量為97.1%，銀杏內(nèi)酯B含量均為95.8%。
[0037]實(shí)施例3
[0038]取銀杏葉提取物浸膏800g，用水溶液稀釋至0.4g/mL，加入4000ml乙酸乙酯進(jìn)行萃取，共萃取五次，合并乙酸乙酯萃取液，將實(shí)施例2中結(jié)晶后母液與萃取液合并，于45°C減壓濃縮至無(wú)溶劑，加入20%乙醇350ml使?jié)饪s液濃度為0.5g/mL，濕法裝柱，使藥液通過(guò)MCI樹(shù)脂，先用30%乙醇洗脫樹(shù)脂除雜，以除去水溶性和大極性雜質(zhì)，共洗脫4BV，洗脫速度lBV/h,再用40%乙醇以同樣流速洗脫樹(shù)脂，分別接取前2BV洗脫液和后3BV洗脫液，分別于45°C減壓濃縮至無(wú)溶劑后，加入500ml60%乙醇，70°C加熱至溶解，4°C冰箱靜置24h析晶，待析出晶體后，抽濾，分別得到銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B，將得到的銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B繼續(xù)用150ml70%乙醇重結(jié)晶2次，室溫靜置48h。待析出結(jié)晶后，抽濾，將結(jié)晶后的各份母液合并，并入下一批藥液中，作為上樣藥液繼續(xù)過(guò)柱分離，另存。結(jié)晶分別于80°C烘干，最終得到銀杏內(nèi)酯A0.66g、銀杏內(nèi)酯B0.96g。經(jīng)HPLC-ELSD檢測(cè)(檢測(cè)方法參考文獻(xiàn)[1])銀杏內(nèi)酯A含量為98.1%，銀杏內(nèi)酯B含量均為96.8%。
[0039]實(shí)施例4
[0040]取銀杏葉提取物浸膏l(xiāng)OOOg，用水溶液稀釋至0.8g/mL，加入250ml乙酸乙酯進(jìn)行萃取，共萃取五次，合并乙酸乙酯萃取液，將實(shí)施例3中結(jié)晶后母液與萃取液合并，于45°C減壓濃縮至無(wú)溶劑，加入20%乙醇200ml使?jié)饪s液濃度為1.0g/mL，濕法裝柱，使藥液通過(guò)NM-100樹(shù)脂，先用30%乙醇洗脫樹(shù)脂除雜，以除去水溶性和大極性雜質(zhì)，共洗脫3BV，洗脫速度2BV/h，再用35%乙醇以同樣流速洗脫樹(shù)脂，分別接取前2BV洗脫液和后3BV洗脫液，分別于45°C濃縮至無(wú)溶劑后，加入1000ml80%乙醇，70°C加熱至溶解，4°C冰箱靜置24h析晶，析出晶體后，抽濾，分別得到銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B，將得到的銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B繼續(xù)用80ml乙醇重結(jié)晶I次，室溫`靜置48h。待析出晶體后，將母液合并，將結(jié)晶后的各份母液合并，并入下一批藥液中，作為上樣藥液繼續(xù)過(guò)柱分離，另存。結(jié)晶分別于80°C烘干，最終得到銀杏內(nèi)酯A0.86g、銀杏內(nèi)酯B1.17g。經(jīng)HPLC-ELSD檢測(cè)(檢測(cè)方法參考文獻(xiàn)[1])銀杏內(nèi)酯A含量為97.5%，銀杏內(nèi)酯B含量均為96.7%。
[0041]實(shí)施例5
[0042]取銀杏葉提取物浸膏500g，用水溶液稀釋至0.5g/mL,加入1500ml 1.5倍藥液體積的乙酸乙酯進(jìn)行萃取，共萃取三次，合并乙酸乙酯萃取液，將實(shí)施例4中結(jié)晶后母液與萃取液合并，于45°C濃縮至無(wú)溶劑，加入10%乙醇220ml使?jié)饪s液濃度為0.5g/mL，濕法裝柱，使藥液通過(guò)NM-100反相樹(shù)脂，先用30%乙醇洗脫樹(shù)脂除雜，以除去水溶性和大極性雜質(zhì)，共洗脫5BV，洗脫速度2BV/h，再用35%乙醇以同樣流速洗脫樹(shù)脂，分別接取前2BV洗脫液和后3BV洗脫液，分別于45°C濃縮至無(wú)溶劑后，加入600ml5倍干固物重量的80%乙醇，加熱溶解，4°C冰箱靜置48h析晶，析出晶體后，抽濾，分別得到銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B，將得到的銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B繼續(xù)用150ml20倍結(jié)粗晶重量的80%乙醇重結(jié)晶2次，結(jié)晶溫度4°C，靜置12h。待析出結(jié)晶后，抽濾，將母液合并，將結(jié)晶后的各份母液合并，并入下一批藥液中，作為上樣藥液繼續(xù)過(guò)柱分離，另存。結(jié)晶分別于80°C烘干，最終得到銀杏內(nèi)酯A0.77g、銀杏內(nèi)酯B0.96g，經(jīng)HPLC-ELSD檢測(cè)(檢測(cè)方法參考文獻(xiàn)[1])銀杏內(nèi)酯A含量為95.9%，銀杏內(nèi)酯B含量為98.1%。[0043]實(shí)施例6
[0044]取銀杏葉提取物浸膏800g，用水溶液稀釋至0.4g/mL,加入1000ml0.5倍藥液體積的乙酸乙酯進(jìn)行萃取，共萃取四次，合并乙酸乙酯萃取液，將實(shí)施例5中結(jié)晶后母液與萃取液合并，濃縮合并液至無(wú)溶劑，加入10%160ml乙醇使?jié)饪s液濃度為1.0g/mL，濕法裝柱，使藥液通過(guò)NM-100樹(shù)脂，先用30%乙醇洗脫樹(shù)脂除雜，以除去水溶性和大極性雜質(zhì)，共洗脫4BV，洗脫速度lBV/h，再用35%乙醇以同樣流速洗脫樹(shù)脂，分別接取前2BV洗脫液和后2BV洗脫液，分別于45°C濃縮至無(wú)溶劑后，加入900ml 10倍干固物重量的60%乙醇，70°C加熱至溶解，4°C冰箱靜置8h析晶，析出晶體后，抽濾，分別得到銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B，將得到的銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B繼續(xù)用120mll5倍粗結(jié)晶重量的80%乙醇重結(jié)晶I次，結(jié)晶溫度4°C，靜置24h。待析出結(jié)晶后，抽濾，將結(jié)晶后的各份母液合并，并入下一批藥液中，作為上樣藥液繼續(xù)過(guò)柱分離，另存。結(jié)晶分別于80°C烘干，最終得到銀杏內(nèi)酯A0.71g、銀杏內(nèi)酯B1.02g，經(jīng)HPLC-ELSD檢測(cè)(檢測(cè)方法參考文獻(xiàn)[1])銀杏內(nèi)酯A含量為96.6%，銀杏內(nèi)酯B含量為98.3%。
【權(quán)利要求】
1.一種銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B的精制方法，其特征在于，該方法包括下列步驟: (1)萃取:取銀杏葉提取物浸膏，加入有機(jī)溶劑進(jìn)行多次萃取，合并萃取液，回收溶劑至干，用含水乙醇定容至濃度為0.2-1.0g/ml ； (2)過(guò)柱層析富集:將上述藥液通過(guò)反相吸附樹(shù)脂柱進(jìn)行富集，依次用不同濃度的含水乙醇進(jìn)行除雜、洗脫，分段收集洗脫液，分別將洗脫液濃縮至浸膏，分別得到銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B粗品； (3)結(jié)晶:將上述銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B粗品浸膏用含水乙醇進(jìn)行多次重結(jié)晶，即得到高純度的銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B精制品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B的精制方法，其特征在于，所述步驟(O中銀杏葉提取物浸膏為市售，含量標(biāo)準(zhǔn)為總內(nèi)酯含量> 6%，總黃酮含量> 24%，銀杏酸含量≤1Oppm;所用有機(jī)溶劑為乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酮、甲基乙基酮、正丁醇或異丁醇中的一種或多種溶劑，溶劑用量為銀杏葉提取物浸膏的1-10倍V/W，萃取次數(shù)為1-5次，所述含水乙醇為10-20%乙醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B的精制方法，其特征在于，所述步驟(1)有機(jī)溶劑溶劑為乙酸乙酯；含水乙醇為10%乙醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B的精制方法，其特征在于，所述步驟(2)中所述反相樹(shù)脂為MCI或NM-100樹(shù)脂，除雜溶劑為10-30%乙醇，再用35-40%乙醇分段進(jìn)行洗脫；所述除雜溶劑洗脫體積為1-5BV，分段收集前1-2BV和后3-5BV的富集物；所述BV為本領(lǐng)域公認(rèn)的洗脫柱體積單位。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B的精制方法，其特征在于，所述步驟(2)除雜溶劑為30%乙醇。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B的精制方法，其特征在于，所述步驟(2)中MCI樹(shù)脂填料為MC1-GELCHP反相吸附樹(shù)脂，其技術(shù)參數(shù)為:粒徑為75-150 μ m,平均粒徑為120 μ m，PH范圍為0-14，孔徑為450埃，基體為聚苯乙烯和二乙烯基共聚物；NM_100樹(shù)脂技術(shù)參數(shù)為粒度范圍為30-50 μ，平均孔徑120埃，比表面積800m2/g。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B的精制方法，其特征在于，所述步驟(3)中銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B粗品分別用4-50倍粗品重量V/W的50-80%乙醇結(jié)晶1_3次，結(jié)晶時(shí)間l_48h，結(jié)晶及重結(jié)晶溫度為_(kāi)20_25 C。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B的精制方法，其特征在于，所述步驟(3)的重結(jié)晶母液合并后可作為上樣藥液，用于下一批藥液中步驟(2)過(guò)柱分離。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述銀杏內(nèi)酯A與銀杏內(nèi)酯B的精制方法，其特征在于，所述步驟(3)得到的銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯B精制品含量各為95%-98%。
【文檔編號(hào)】C07D493/22GK103588785SQ201310624971
【公開(kāi)日】2014年2月19日 申請(qǐng)日期:2013年11月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月28日
【發(fā)明者】肖志勇, 于垂亮, 呂署一, 徐繼紅, 尹小華, 周力軍 申請(qǐng)人:上海信誼百路達(dá)藥業(yè)有限公司