果子貍抗貍瘟熱高免血清的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了果子貍抗貍瘟熱高免血清的制備方法。本發(fā)明果子貍瘟熱病高免血清是用犬瘟熱狗毒疫苗在豬身上產(chǎn)生抗病血清，再把抗病血清分離提取高抗血清。其特征在于抗原使用犬瘟熱狗毒疫苗和使用犬瘟熱狗毒疫苗皮下或肌肉分多次注射。用本高免血清對(duì)預(yù)防和可疑感染貍進(jìn)行緊急預(yù)防，可大大的降低CD的發(fā)病率。
【專利說明】果子貍抗貍瘟熱高免血清的制備方法
[0001]【技術(shù)領(lǐng)域】本發(fā)明涉及人工飼養(yǎng)的野生動(dòng)物防疫血清的制備，特別是果子貍抗貍瘟熱高免血清的制備。
[0002]【背景技術(shù)】果子貍又名花面貍，體型似貓如貍，果子貍屬國家二級(jí)保護(hù)動(dòng)物，其皮稱為青苕皮，是我國大宗出口毛皮之一；其脂肪在化妝品生產(chǎn)中是難得的高級(jí)原料，還是醫(yī)治燙傷的良藥。其肉質(zhì)為野味珍品，因其不凡身價(jià)和其獨(dú)特的口感風(fēng)味，長期遭受人類無節(jié)制的濫捕和高價(jià)收購，目前日漸稀少，瀕臨滅絕。該發(fā)明是根據(jù)國家針對(duì)野生動(dòng)物資源，“護(hù)、養(yǎng)、獵”政策，保護(hù)生態(tài)平衡，攻克人工馴養(yǎng)繁殖技術(shù)，保護(hù)野生動(dòng)物資源，擴(kuò)大種群和養(yǎng)殖規(guī)模，實(shí)現(xiàn)特種動(dòng)物人工馴養(yǎng)，轉(zhuǎn)野生為家養(yǎng)，實(shí)行專業(yè)化養(yǎng)殖，向產(chǎn)業(yè)化、產(chǎn)業(yè)鏈方向發(fā)展，滿足人們生產(chǎn)生活需要。
[0003]貍瘟熱是危害果子貍最嚴(yán)重的傳染病之一，近年來有的果子貍養(yǎng)殖場常有本病的爆發(fā)，造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。有的養(yǎng)殖場或?qū)I(yè)戶甚至造成毀滅性后果。盡管目前已有研制預(yù)防本病的疫苗用于臨床，但因種種原因仍不能完全保證不發(fā)本病，免疫失敗時(shí)有發(fā)生。在免疫過程中往往受到源抗體的影響，不能有效的產(chǎn)生主動(dòng)免疫，尤其是為了提高生產(chǎn)效益實(shí)行年產(chǎn)二胎的種貍場提早斷奶仔貍?cè)菀赘腥颈静≡斐纱笈劳觯试谂R床上急需要提供抗貍瘟熱高免血清進(jìn)行治療和緊急預(yù)防。而目前國內(nèi)外末見報(bào)道貍抗瘟熱血清抗體的生產(chǎn)。
[0004]
【發(fā)明內(nèi)容】
本發(fā)明的目的就是使人工飼養(yǎng)的果子貍克服貍瘟熱病，生產(chǎn)一種對(duì)果子貍貍瘟熱有高效免疫功能的疫苗。
[0005]一種果子貍貍瘟熱高免血清的制備方法，包括:
[0006](I)、選擇用豬:選擇營養(yǎng)良好臨床癥狀、體溫、糞便檢查確記為健康的豬；
[0007](2)、抗原選用:使用犬痕熱狗毒疫苗；
[0008](3)、疫苗注射:分五次注射疫苗；
[0009](4)、采血方法:在第五次注射后15天耳靜脈采血；
[0010](5)、分離提純；
[0011](6)、檢驗(yàn)血清；
[0012]其特征在于:
[0013]使用犬瘟熱狗毒抗原疫苗在營養(yǎng)良好臨床癥狀、體溫、糞便檢查確記為健康體重在40公斤-50公斤的種豬身上產(chǎn)生血清；
[0014]使用犬痕熱狗毒疫苗皮下或肌肉分多次注射，每次注射5個(gè)免疫劑量,第一日多點(diǎn)皮下注射犬瘟熱狗毒疫苗50ml加完全佛氏佐劑50ml，第十日多點(diǎn)皮下注射狗毒疫苗50ml，加不完全佛氏佐劑60ml，第二十日多點(diǎn)皮注射瘟熱狗毒疫苗50ml，不加佐劑，第三十日多點(diǎn)皮注射瘟熱狗毒疫苗50ml，不加佐劑，第四十日多點(diǎn)皮注射瘟熱狗毒疫苗50ml，不加佐劑。
[0015]本發(fā)明果子貍瘟熱病高免血清是用犬瘟熱狗毒疫苗在豬身上產(chǎn)生抗病血清，再把抗病血清分離提取高抗血清。
[0016]本發(fā)明的技術(shù)方案是通過下述步驟實(shí)現(xiàn)的:
[0017](I)、選擇用豬:選擇營養(yǎng)良好臨床癥狀、體溫、糞便檢查確記為健康體重在40公斤-50公斤的種豬；
[0018](2)、抗原選用:使用犬瘟熱狗毒疫苗；
[0019](3)、疫苗注射:使用犬瘟熱狗毒疫苗皮下或肌肉分多次注射，每次注射5個(gè)免疫劑量，第一日多點(diǎn)皮下注射犬痕熱狗毒疫苗50ml加完全佛氏佐劑50ml,第十日多點(diǎn)皮下注射狗毒疫苗50ml，加不完全佛氏佐劑60ml，第二十日多點(diǎn)皮注射瘟熱狗毒疫苗50ml，不加佐劑，第三十日多點(diǎn)皮注射瘟熱狗毒疫苗50ml，不加佐劑，第四十日多點(diǎn)皮注射瘟熱狗毒疫苗50ml，不加佐劑；
[0020](4)、采血方法:在第五次注射后15天耳靜脈采血；
[0021](5)、分離提純；
[0022](6)、檢驗(yàn)血清。
[0023]果子貍屬稀有動(dòng)物，人工養(yǎng)殖具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，遠(yuǎn)比其它特種養(yǎng)殖動(dòng)物優(yōu)越，搶先開發(fā)占領(lǐng)果子貍養(yǎng)殖市場，將有著巨大的市場潛力。目前已經(jīng)掌握了繁殖技術(shù)，擴(kuò)大種群，擴(kuò)大養(yǎng)殖規(guī)模，實(shí)現(xiàn)專業(yè)化發(fā)展，形成產(chǎn)業(yè)鏈，既可受益千家萬戶，使農(nóng)民增收，增加財(cái)政收入，又可保護(hù)野生種群，保護(hù)生態(tài)平衡。
[0024]【具體實(shí)施方式】本發(fā)明的果子貍貍瘟熱高免血清是按下述方法制備的:
[0025](I)、選擇用豬:選用本公司飼養(yǎng)的40kg — 50kg /頭，營養(yǎng)良好經(jīng)臨床癥狀、體溫、糞便檢查確記為健康本地土種豬兩頭。
[0026](2)、抗原選用:使用犬瘟熱狗毒疫苗；中國農(nóng)科院特產(chǎn)研究所生產(chǎn)。
[0027](3)、疫苗注射:使用犬瘟熱狗毒疫苗皮下或肌肉分多次注射，每次注射5個(gè)免疫劑量，第一日多點(diǎn)皮下注射犬痕熱狗毒疫苗50ml加完全佛氏佐劑50ml,第十日多點(diǎn)皮下注射狗毒疫苗50ml，加不完全佛氏佐劑60ml，第二十日多點(diǎn)皮注射瘟熱狗毒疫苗50ml，不加佐劑，第三十日多點(diǎn)皮注射瘟熱狗毒疫苗50ml，不加佐劑，第四十日多點(diǎn)皮注射瘟熱狗毒疫苗50ml，不加佐劑；
[0028](4)、采血方法:在第五次免疫后15天耳靜脈采血，檢測血清抗體效價(jià)，血清抗體效價(jià)合格后，方可無菌放血分離血清。
[0029](5)、分離提純:采血在上午空腹時(shí)進(jìn)行，前一天下午不喂精料，僅喂粗料和水，以免血中出現(xiàn)糜乳。采取無菌放血清法，于大玻璃瓶內(nèi)加入滅菌的10%構(gòu)椽酸鹽鈉液35ml /100ml，采血后在分離血漿前按每毫升加入10%結(jié)晶碳酸鈉液和6.6%氯化鈉液各15ml，邊加邊攪，使PH值在7.8-8.0，靜置分層，用虹吸法抽取血漿。按100ml血漿加入30%氯化鈣液1.3ml，混勻后靜放48h，振搖除去纖維制成血清。加入0.5%碳酸或I /萬硫抑汞后抽樣作無菌檢驗(yàn)。
[0030](6)、檢驗(yàn)血清:抗血清的質(zhì)量檢驗(yàn)、無菌檢驗(yàn)，物理性狀檢驗(yàn)等按《成品檢驗(yàn)有關(guān)規(guī)定》進(jìn)行。效力檢驗(yàn)按各種抗血清規(guī)定方法標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。安全檢測用18g_22g健康小鼠2只，各皮下注射血清0.5ml，用體重250g — 450g健康鼠，各皮下注射血清10ml，觀察10天均應(yīng)健活。
[0031]高免血清效價(jià)檢測:
[0032]治療試驗(yàn):按每公斤體重2_8ml皮下或肌肉注射，每日一次，連用三天。
[0033]緊急預(yù)防接種試驗(yàn):對(duì)以發(fā)現(xiàn)并確診為CD流行時(shí)，與本病畜有過密切接觸，末進(jìn)行主動(dòng)免疫的貍或犬進(jìn)行緊急預(yù)防接種，按每公斤體重2 — 4ml皮下或肌肉注射，并提倡盡應(yīng)用。
[0034]被動(dòng)免疫試驗(yàn):若果子貍每年產(chǎn)二胎，新生幼貍離開母貍吮乳，只喂牛奶，這時(shí)幼貍母源抗體水平低，抗病能力差，需要被動(dòng)免疫。從出生第10天開始，分別在第10天、第30天、第45天用研制的高免疫血清進(jìn)行被動(dòng)免疫。在第60天70天進(jìn)行主動(dòng)免疫。在第90日齡統(tǒng)計(jì)⑶發(fā)病情況。
[0035]CD診斷標(biāo)準(zhǔn):以臨床癥狀、流行病學(xué)調(diào)查、結(jié)合實(shí)驗(yàn)室瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)和酶聯(lián)吸附試驗(yàn)綜合判定為標(biāo)準(zhǔn)。
[0036]試驗(yàn)結(jié)果:
[0037]高免血清效價(jià)測定結(jié)果為:1:640。
[0038]⑶臨床發(fā)病貍治療效果為:治療病貍32只，治愈30只，治愈率為94%。
[0039]緊急預(yù)接種試驗(yàn)結(jié)果為:可疑感染貍50只，應(yīng)用高免血清作緊急預(yù)防接種的貍在疫病流行期間均未感染以病。
[0040]對(duì)新生幼貍施行被動(dòng)免疫，可以幫助幼貍安全度過和避免，由于母源抗體缺失和主動(dòng)免疫失敗而強(qiáng)毒侵害的“危險(xiǎn)期”。
[0041 ] 本發(fā)明果子貍瘟熱病高免血清是使用犬瘟熱狗毒疫苗加佐劑多點(diǎn)皮下注射經(jīng)反復(fù)多次刺激豬體，產(chǎn)生高效價(jià)的特異抗體從而獲得高效價(jià)血清抗體。治療貍瘟熱具有非常顯著的療效，是任何藥物不能代替它的作用。用特異性高免血清對(duì)可疑感染貍進(jìn)行緊急預(yù)防，可大大的降低CD的發(fā)病率。特異性高免血清應(yīng)用對(duì)新生幼貍施行被動(dòng)免疫可以避免幼貍在人工哺乳期，無母活抗體保護(hù)而遭受CDV感染的危害。高免血清治療在早期進(jìn)行效果更好，除了用特異性血清治療外，還應(yīng)配合常規(guī)抗菌、消炎、補(bǔ)液等輔助療法。特異性高免血清治療對(duì)貍食欲減退、營養(yǎng)缺乏，腹瀉等一般性疾病都有較好的療效。
【權(quán)利要求】
1.一種果子貍貍瘟熱高免血清的制備方法，包括: (1)、選擇用豬:選擇營養(yǎng)良好臨床癥狀、體溫、糞便檢查確記為健康的豬； (2)、抗原選用:使用犬瘟熱狗毒疫苗； (3)、疫苗注射:分五次注射疫苗； (4)、采血方法:在第五次注射后15天耳靜脈采血； (5)、分離提純； (6)、檢驗(yàn)血清； 其特征在于: 使用犬瘟熱狗毒抗原疫苗在營養(yǎng)良好臨床癥狀、體溫、糞便檢查確記為健康體重在40公斤-50公斤的種豬身上產(chǎn)生血清； 使用犬瘟熱狗毒疫苗皮下或肌肉分多次注射，每次注射5個(gè)免疫劑量，第一日多點(diǎn)皮下注射犬瘟熱狗毒疫苗50ml加完全佛氏佐劑50ml，第十日多點(diǎn)皮下注射狗毒疫苗50ml，加不完全佛氏佐劑60ml，第二十日多點(diǎn)皮注射瘟熱狗毒疫苗50ml，不加佐劑，第三十日多點(diǎn)皮注射瘟熱狗毒疫苗50ml，不加佐劑，第四十日多點(diǎn)皮注射瘟熱狗毒疫苗50ml，不加佐劑。
【文檔編號(hào)】C07K16/10GK104513311SQ201310465426
【公開日】2015年4月15日 申請(qǐng)日期:2013年10月8日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月8日
【發(fā)明者】王秀松 申請(qǐng)人:王秀松