一種合成替度魯肽的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及醫(yī)藥合成領(lǐng)域，公開了一種合成替度魯肽的方法。本發(fā)明所述方法按照替度魯肽肽鏈N端至C端的氨基酸順序，先合成2-33氨基酸多肽片段，然后和N端偶聯(lián)有X保護(hù)基且側(cè)鏈上偶聯(lián)有Y保護(hù)基的His或其鹽進(jìn)行偶聯(lián)合成得到替度魯肽，其中所述X保護(hù)基為Boc保護(hù)基或Trt保護(hù)基，所述Y保護(hù)基為Trt保護(hù)基、Bum保護(hù)基、mtt保護(hù)基、Boc保護(hù)基或者mmt保護(hù)基。本發(fā)明首先按照替度魯肽肽序合成2-33片段，然后再將2-33多肽片段與由特定保護(hù)基保護(hù)的His合成原料在特定的偶聯(lián)體系下偶聯(lián)獲得替度魯肽，解決了現(xiàn)有合成方法中由于合成原料以及偶聯(lián)方法的不當(dāng)造成His的消旋雜質(zhì)含量較高，替度魯肽純度較低的問題。
【專利說明】一種合成替度魯肽的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥合成領(lǐng)域，具體涉及一種合成替度魯肽的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]替度魯肽，英文名為Teduglutide，一種胰高血糖素樣肽2 (GLP-2)類似物，一種天然生成的激素，可減少胃排空和分泌，并調(diào)節(jié)小腸內(nèi)膜細(xì)胞的生長、增殖和修復(fù)。該藥增加了這些細(xì)胞的數(shù)量，后者可增加小腸吸收、減少腹瀉。歐洲商品名為Revestive，在美國商品名為Gattex。在臨床上用于治療成人短腸綜合征。該藥成為首個被推薦應(yīng)用于這種罕見卻使患者極其虛弱疾病的藥物，結(jié)構(gòu)式和肽序如下:
[0003]

【權(quán)利要求】
1.一種合成替度魯肽的方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟1、固相合成在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列N端、Asp側(cè)鏈上、Ser側(cè)鏈上、Glu側(cè)鏈上、Asn側(cè)鏈上、Thr側(cè)鏈上、Arg側(cè)鏈上、Gln側(cè)鏈上、Trp側(cè)鏈上和Lys側(cè)鏈上偶聯(lián)有保護(hù)基且在C端偶聯(lián)有樹脂的多肽片段樹脂； 步驟2、所述多肽片段樹脂脫N端保護(hù)基，與N端偶聯(lián)有X保護(hù)基且側(cè)鏈上偶聯(lián)有Y保護(hù)基的His或N端偶聯(lián)有X保護(hù)基且側(cè)鏈上偶聯(lián)有Y保護(hù)基的His鹽在雙試劑偶聯(lián)體系和有機(jī)堿的作用下進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，得到替度魯肽樹脂； 其中，所述X保護(hù)基為Boc保護(hù)基或Trt保護(hù)基，所述Y保護(hù)基為Trt保護(hù)基、Bum保護(hù)基、Boc保護(hù)基、mtt保護(hù)基或者mmt保護(hù)基；所述雙試劑偶聯(lián)體系由A試劑和B試劑組成，A試劑選自HBTU、HATU, PyBOP, PyAOP中的一種，B試劑選自HOAt、HOBt中的一種，所述有機(jī)堿為DIPEA或TMP ； 步驟3、將替度魯肽樹脂脫除N端X保護(hù)基后裂解，獲得替度魯肽粗品，經(jīng)RP-HPLC純化后獲得替度魯肽純品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述樹脂為CTC樹脂或者Wang樹脂。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，步驟I具體為: 步驟1.1、Fmoc-Asp (OtBu) -OH在HOBt/DMAP/DIC三試劑偶聯(lián)體系或者有機(jī)堿DIPEA作用下與樹脂進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)得到Fmoc-Asp (OtBu)-樹脂； 步驟 1.2、Fmoc-Asp (OtBu)-樹脂脫除 Fmoc 保護(hù)基得到 H-Asp(OtBu)-樹脂,Fmoc-Thr(tBu) -OH在HOBt/DIC雙試劑偶聯(lián)體系作用下與H-Asp (OtBu)-樹脂進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)得到Fmoc-Thr (tBu) -Asp (OtBu)-樹脂； 步驟1.3、按照SEQ ID N0:1所示氨基酸序列C端到N端的順序，依次逐個將Fmoc-1le-OH、Fmoc_Lys (Boc)-OH>Fmoc-Thr (tBu)-OH、Fmoc_Gln (Trt)-OH、Fmoc-1le-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp (Boc) -OH、Fmoc-Asn (Trt) -OH、Fmoc-1le-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp (OtBu) -OH、Fmoc-Arg (pdf) -OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn (Trt)-OH、Fmoc_Asp (OtBu )-OH、Fmoc_Leu-OH、Fmoc-1 Ie-OH、Fmoc_Thr (tBu)-OH、Fmoc-Asn (Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc_Glu (OtBu)-OH、Fmoc-Asp (OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu) -OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Ser (tBu) -OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp (OtBu) -OH 和Fmoc-Gly-OH按照步驟1.2偶聯(lián)方式進(jìn)行氨基酸延伸偶聯(lián),得到Gly-Asp (OtBu) -Gly-Ser (tBu)-Phe-Ser(tBu)-Asp (OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Asn(Trt)-Thr(tBu)-1le-Leu-Asp (OtBu)-Asn (Trt)-Leu-Ala-Ala-Arg(pbf)-Asp (OtBu)-Phe-1le-Asn(Trt)-Trp(Boc)-Leu-1le-Gln(Trt) -Thr-Lys (Boc) -1le-Thr (tBu) -Asp (OtBu)-樹脂，即多肽片段樹脂； 其中，所述Fmoc為氨基酸N端保護(hù)基,所述OtBu、tBu、Trt、Boc、pbf為氨基酸側(cè)鏈保護(hù)基。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述方法,其特征在于,步驟1.1所述Fmoc-Asp (OtBu)-OH、HOBt、DMAP.DIC 的摩爾比為 1:1.2:0.1:1.2。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述方法，其特征在于，步驟1.1所述Fmoc-Asp(OtBu)-OH和DIPEA的摩爾比為1:3。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述方法，其特征在于，步驟1.2和1.3所述各氨基酸與HOBt、DIC的摩爾比為1:1.2:1.2。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，步驟2所述N端偶聯(lián)有X保護(hù)基且側(cè)鏈上偶聯(lián)有Y保護(hù)基的His或N端偶聯(lián)有X保護(hù)基且側(cè)鏈上偶聯(lián)有Y保護(hù)基的His鹽與A試劑、B試劑、有機(jī)堿的摩爾比為1:1:1.2:2。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，步驟2所述N端偶聯(lián)有X保護(hù)基且側(cè)鏈上偶聯(lián)有Y保護(hù)基的His為Trt-His (Trt)-OH或Boc-His (Boc)-OH，所述N端偶聯(lián)有X保護(hù)基且側(cè)鏈上偶聯(lián)有Y保護(hù)基的His鹽為Boc-His (Boc) -OH.DCHA。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，步驟3所述裂解為采用體積比TFA:PhSMe:EDT:TIS:H2O:PhenoI 為 80-85:2-5:2-5:2-5:0-3:0-2 的混合裂解液裂解。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述方法，其特征在于，所述偶聯(lián)反應(yīng)以NMP、DMF、DCM中的一種或兩種為溶 劑。
【文檔編號】C07K14/605GK104072603SQ201310102159
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2013年3月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年3月27日
【發(fā)明者】宓鵬程, 潘俊鋒, 馬亞平, 袁建成 申請人:深圳翰宇藥業(yè)股份有限公司