熒光原性化合物或熒光性化合物及其用途
【專利摘要】本發(fā)明提供為熒光原性的或熒光性的化合物。還提供包含所述化合物的組合物和制品。另外，還提供使用所述化合物檢測(cè)微生物的方法。所述化合物是氟化的，并且可以有利地在酸性條件下使用。
【專利說(shuō)明】熒光原性化合物或熒光性化合物及其用途
[0001]相關(guān)專利申請(qǐng)的交叉引用
[0002]本申請(qǐng)要求2011年3月30日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)N0.61/469355的權(quán)益，該專利申請(qǐng)的公開(kāi)內(nèi)容全文以引用方式并入本文。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0003]本發(fā)明涉及突光原性(fluorogenic)化合物和突光性(fluorophoric)化合物、包含這些化合物的組合物和制品、制備這些化合物的方法以及利用這些化合物檢測(cè)微生物的方法。
【背景技術(shù)】
[0004]多種基于7-羥基香豆素的化合物(也稱為傘形酮)及其衍生物已被用作酶活性的熒光指示劑。傘形酮是發(fā)熒光的，但當(dāng)用酶不穩(wěn)定基團(tuán)將7-羥基官能化時(shí)，所得化合物的熒光被猝滅。當(dāng)與適當(dāng)?shù)拿附佑|時(shí)，該酶不穩(wěn)定基團(tuán)可通過(guò)水解釋放，從而導(dǎo)致7-羥基重新形成且熒光恢復(fù)。
[0005]一些已知的熒光指示劑包括(例如)美國(guó)專利N0.5，830, 912 (Gee等人)、美國(guó)專利N0.6, 566, 508 (Bentsen 等人)、Gee 等人的論文 Analytical Biochemistry (《分析生物化學(xué)》)，273，41-48 (1999)和 Guo 等人的論文 Huaxue Shiji (《化學(xué)試劑》)，32 (8),673-676(2010)中所述的那些。
[0006]一種示例性的熒光指示劑為稱為4-MUG的4-甲基傘形酮葡糖苷酸。當(dāng)暴露于微生物如大腸菌群時(shí)，非熒光的4-MUG轉(zhuǎn)化為稱為4-MU的熒光化合物4-甲基傘形酮。當(dāng)用作酶活性的熒光指示劑時(shí)，樣品的PH通常必須是堿性的，以便使4-MU的熒光信號(hào)最大化。即，諸如4-MU之類的化合物能夠以酸性和堿性形式存在，其中堿性形式在所關(guān)注的波長(zhǎng)(如，最大吸收波長(zhǎng)、最大發(fā)射波長(zhǎng)或這二者)處具有顯著更大的熒光。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]需要的是用于檢測(cè)多種微生物、在酸性條件下能夠發(fā)出熒光的化合物。提供或者(a)在酸性條件下發(fā)出熒光，或者(b)在暴露于將酶不穩(wěn)定基團(tuán)轉(zhuǎn)化為羥基的酶之后在酸性條件下發(fā)出熒光的化合物。還提供包含所述化合物的組合物和制品。另外，還提供制備所述化合物的方法以及用所述化合物檢測(cè)微生物的方法。
[0008]在第一個(gè)方面，提供了式(I)化合物。
[0009]
【權(quán)利要求】
1.一種式(I)化合物
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R2為糖基、糖酸基、氨基糖基、羧基封端的氨基酸基團(tuán)、竣基封端的妝基、酷基、含酷基團(tuán)、憐酸酷基或硫酸酷基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中R2為糖基，所述糖基為單糖基或二糖基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的化合物，其中R1為-(CO)-0R3，其中R3為烷基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的化合物，其中R1為具有五元雜環(huán)的雜環(huán)基團(tuán)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的化合物，其中Rl為具有稠合至苯環(huán)的五元雜環(huán)的雜環(huán)基團(tuán)。
7.一種包含可與水混溶的有機(jī)溶劑和式(I)化合物的組合物，
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的組合物，其中所述組合物包含式(1-1)化合物和式(1-2)化合物的混合物。
9.一種制品，其包括: a)第一層，其為支承層； b)與所述支承層相鄰的第二層，其中所述第二層包含式(I)化合物
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的制品，其中所述第二層包含式(1-1)化合物和式(1-2)化合物的混合物。
11.根據(jù)權(quán)利要求9或10所述的制品，其中所述第二層還包含膠凝劑、培養(yǎng)基或它們的組合。
12.根據(jù)權(quán)利要求9至11中任一項(xiàng)所述的制品，其中所述第二層為脫水的。
13.根據(jù)權(quán)利要求9至12中任一項(xiàng)所述的制品，其中所述第二層還包含聚合物粒子。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的制品，其中所述聚合物粒子包含丙烯酸酯聚合物或共聚物、苯乙烯聚合物或共聚物、纖維素聚合物或共聚物、葡聚糖聚合物或共聚物、它們的衍生物或它們的組合。
15.根據(jù)權(quán)利要求13或14所述的制品，其中所述聚合物粒子具有在0.0l微米至I微米范圍內(nèi)的平均粒徑。
16.一種檢測(cè)微生物的方法，所述方法包括: 提供式(Ia)熒光原性化合物
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中所述第一波長(zhǎng)的光和所述第二波長(zhǎng)的光均在紫外光、可見(jiàn)光或紅外光區(qū)域中。
18.根據(jù)權(quán)利要求16或17中任一項(xiàng)所述的方法，其中將所述測(cè)試樣品與所述熒光原性化合物一起溫育的步驟包括將液體形式的所述測(cè)試樣品添加至含有所述式(Ia)熒光原性化合物和培養(yǎng)基的脫水層。
19.根據(jù)權(quán)利要求16至18中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述方法還包括在聚合物粒子上螯合所述式(Ib)化合物。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述聚合物粒子具有在0.01微米至I微米范圍內(nèi)的平均粒徑。
21.—種制備式(Ib)化合物的方法，
【文檔編號(hào)】C07D311/16GK103476761SQ201280015761
【公開(kāi)日】2013年12月25日 申請(qǐng)日期:2012年3月5日 優(yōu)先權(quán)日:2011年3月30日
【發(fā)明者】S·B·羅斯科, 周世宏, S·J·莫勒, J·D·米勒, K·J·哈爾威森, J·W·比約克 申請(qǐng)人:3M創(chuàng)新有限公司