專(zhuān)利名稱(chēng)：一種從草蓯蓉中提取草蓯蓉甙的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種草蓯蓉甙的純化方法，特別是涉及一種利用超臨界CO2流體萃取和大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化草蓯蓉中草蓯蓉甙的方法。
背景技術(shù)：
草蓯蓉，為列當(dāng)科植物草蓯蓉的全草，一年生寄生草本。全草含8-表脫氧馬錢(qián)子式酸(8-epideoxyloganic acid),草灰蓉苯丙烯醇式(rossicaside) B、C、D,草灰蓉苯丙烯醇式A,草灰蓉式(boschnaside),草灰蓉醒式(boschnaloside),松脂酹-β -D-卩比喃葡萄糖式(pinoresinol-β-D-glucopyranoside),對(duì)-香豆酸(p-coumaric acid),對(duì)-香豆酸甲酯(methyl p-coumarate), β-谷留醇(β-sitos-terol),齊墩果酸(oleanolicacid), 3-表齊墩果酸(3-epioleanol·ic acid), β _D_卩比喃葡萄糖基(1 — 4) α-卩比喃鼠李糖基-(I — 3) -D- (4-0-咖啡酸基)批喃葡萄糖(β -D-glucopyranosyl (I — 4) - a -L-rhamnopyranosyl-(I — 3)-D-(4-0-caffeoyl)-glucopyranose), C9>C10>C11 職內(nèi)酯(C9、C10、Cllterpene lactones) 0主要用于補(bǔ)腎壯陽(yáng)；潤(rùn)腸通便；止血。主腎虛陽(yáng)痿；遺精；腰膝冷痛；小梗遺浙；尿血；宮冷不孕；帶下；崩漏。草蓯蓉甙是一種對(duì)人類(lèi)健康有顯著保健作用的天然活性物質(zhì)，已引起國(guó)際社會(huì)的譜遍關(guān)柱。近年來(lái)，人們發(fā)現(xiàn)天然植物草蓯蓉中含有大量的草蓯蓉甙，由于原料草蓯蓉來(lái)源較廣，從中提取草蓯蓉甙已取得了可喜進(jìn)展。目前國(guó)內(nèi)對(duì)草蓯蓉甙的提取方法主要是甲醇制備工藝，其工藝主要為干品粉碎后用甲醇浸泡過(guò)夜，在用布氏濾斗過(guò)濾，提取4次，合并濾液，最后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、減壓濃縮、噴霧干燥得草蓯蓉甙，所用的提取分離方法其效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)不如超臨界CO2流體萃取后進(jìn)行大孔吸附樹(shù)脂分離的效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服常規(guī)技術(shù)提取率相對(duì)較低、提取純度低等缺點(diǎn)，提供一種利用超臨界CO2流體萃取和大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化草蓯蓉中草蓯蓉甙的方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種利用超臨界CO2流體萃取和大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化草蓯蓉中草蓯蓉甙的方法，其步驟如下(I)將干草蓯蓉粉碎，加入到C02超臨界萃取器中，用乙醇作為夾帶劑，萃取壓力為20MPa 40MPa，溫度為50°C 60°C，萃取時(shí)間IOOmin 140min，得萃取物；(2)將經(jīng)步驟(I)處理的草蓯蓉萃取液用鹽酸調(diào)其pH值為3. O 4. 0，靜置、抽濾、減壓濃縮得草蓯蓉甙粗提物；(3)將所得草蓯蓉甙粗提物用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附；(4)用40%、50%、60%、70%、80%、90%不同濃度的乙醇對(duì)大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行洗
脫，用薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集草蓯蓉甙各階段洗脫液；(5)將草蓯蓉甙各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得草蓯蓉甙半成品，其含量為在30%以上；(6)將所得草蓯蓉甙半成品上硅膠層析柱，并以丙酮甲醇以1: 1、2 1、3 1、4 : 1、5 : 1、6 1、7 I不同體積比例進(jìn)行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集草蓯蓉甙各階段洗脫液，減壓濃縮，回收溶劑；(7)將所收集的草蓯蓉甙濃縮液用溶劑結(jié)晶，分離結(jié)晶，洗滌，干燥精制得草蓯蓉甙，其含量在95%以上。所述步驟(3)中，所用的大孔吸附樹(shù)脂為天津南開(kāi)大學(xué)所產(chǎn)生的X-5、NKA-9、S_8、D 3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-H型樹(shù)脂中的一種，吸附為靜態(tài)吸附或動(dòng)態(tài)吸附。本發(fā)明應(yīng)用超臨界CO2流體萃取可確保原有的色、味不因受熱破壞，更能確保其中熱敏性，易氧化物質(zhì)不被破壞；還可在萃取的過(guò)程中同時(shí)對(duì)萃取物進(jìn)行分離純化；大孔吸附技術(shù)分離純化草蓯蓉甙，對(duì)草蓯蓉甙的吸附選擇性良好，吸附快解析也快，吸附容量較大；提取方便快捷，原料來(lái)源豐富，生產(chǎn)成本低廉，分離效果明顯，提取純度高，可以得到含量35%以上的草蓯蓉甙半成品和含量95%以上的草蓯蓉帶終產(chǎn)品，克服了常規(guī)提取率相對(duì)較低、提取純度低的特點(diǎn)。本發(fā)明選用理化性質(zhì)穩(wěn)定、表面積較大、交換速度較快、機(jī)械強(qiáng)度高、抗污染能力強(qiáng)、熱穩(wěn)定性好的大孔吸附樹(shù)脂，不容于酸、堿及有機(jī)媒，對(duì)有機(jī)物選擇性較好，不受無(wú)機(jī)鹽類(lèi)技強(qiáng)離子低分子化合物存在的影響，可以通過(guò)物理吸附從溶液中有選擇地吸附草蓯蓉甙，吸附快、解析也快，吸附容量較 大。
具體實(shí)施例方式實(shí)施案例1:一種利用超臨界CO2流體萃取和大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化草蓯蓉中草蓯蓉甙的方法，其步驟如下(I)將500g干草蓯蓉粉碎后過(guò)60目篩，加入到CO2超臨界萃取器中，用乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為1%，萃取壓力為20MPa，溫度為50°C，CO2流量為lmg/g生藥· min,萃取時(shí)間IOOmin,得萃取物；(2)將經(jīng)步驟⑴處理的草蓯蓉萃取液用鹽酸調(diào)其pH值為3.0，靜置、抽濾、減壓濃縮得草蓯蓉甙粗提物；(3)將所得草蓯蓉甙粗提物用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附，所用的大孔樹(shù)脂為天津南開(kāi)大學(xué)所生產(chǎn)的NKA-H型樹(shù)脂；(4)用40%、50%、60%、70%、80%、90%不同濃度的乙醇對(duì)大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行洗
脫，用薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集草蓯蓉甙各階段洗脫液；(5)將草蓯蓉甙各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得草蓯蓉甙半成品，其含量為
30.2% (6)將所得草蓯蓉甙半成品上硅膠層析柱，并以丙酮甲醇以1: 1、2 1、3 1、4 : 1、5 : 1、6 1、7 I不同體積比例進(jìn)行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集草蓯蓉甙各階段洗脫液，減壓濃縮，回收溶劑；(7)將所收集的草蓯蓉甙濃縮液用無(wú)水乙醇結(jié)晶，分離結(jié)晶，洗滌，干燥精制得草蓯蓉甙，其含量在95. 3%。實(shí)施案例2 : —種利用超臨界CO2流體萃取和大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化草蓯蓉中草蓯蓉甙的方法，其步驟如下(I)將500g干草蓯蓉粉碎后過(guò)70目篩，加入到CO2超臨界萃取器中，用乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為2%，萃取壓力為30MPa，溫度為55°C，CO2流量為2mg/g生藥· min,萃取時(shí)間120min,得萃取物；(2)將經(jīng)步驟(I)處理的草蓯蓉萃取液用鹽酸調(diào)其pH值為38，靜置、抽濾、減壓濃縮得草蓯蓉甙粗提物；(3)將所得草蓯蓉甙粗提物用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附，所用的大孔樹(shù)脂為天津南開(kāi)大學(xué)所生產(chǎn)的D4006型樹(shù)脂；(4)用40%、50%、60%、70%、80%、90%不同濃度的乙醇對(duì)大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行洗
脫，用薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集草蓯蓉甙各階段洗脫液；(5)將草蓯蓉甙各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得草蓯蓉甙半成品，其含量為
31.5% ；(6)將所得草蓯蓉甙半成品上硅膠層析柱，并以丙酮甲醇以1: 1、2 1、3 1、4 : 1、5 : 1、6 1、7 I不同體積比例進(jìn)行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集草蓯蓉甙各階段洗脫液，減壓濃縮，回收溶劑；(7)將所收集的草 蓯蓉甙濃縮液用無(wú)水乙醇結(jié)晶，分離結(jié)晶，洗滌，干燥精制得草蓯蓉甙，其含量在96. 1%。實(shí)施案例3 : —種利用超臨界CO2流體萃取和大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化草蓯蓉中草蓯蓉甙的方法，其步驟如下(I)將500g干草蓯蓉粉碎后過(guò)80目篩，加入到CO2超臨界萃取器中，用乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為3%，萃取壓力為40MPa，溫度為60°C，CO2流量為3mg/g生藥· min,萃取時(shí)間140min,得萃取物；(2)將經(jīng)步驟⑴處理的草蓯蓉萃取液用鹽酸調(diào)其pH值為4.0，靜置、抽濾、減壓濃縮得草蓯蓉甙粗提物；(3)將所得草蓯蓉甙粗提物用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附，所用的大孔樹(shù)脂為天津南開(kāi)大學(xué)所生產(chǎn)的NKA-9型樹(shù)脂；(4)用40%、50%、60%、70%、80%、90%不同濃度的乙醇對(duì)大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行洗
脫，用薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集草蓯蓉甙各階段洗脫液；(5)將草蓯蓉甙各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得草蓯蓉甙半成品，其含量為33. 7% ；(6)將所得草蓯蓉甙半成品上硅膠層析柱，并以丙酮甲醇以1: 1、2 1、3 1、4 : 1、5 : 1、6 1、7 I不同體積比例進(jìn)行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集草蓯蓉甙各階段洗脫液，減壓濃縮，回收溶劑；(7)將所收集的草蓯蓉甙濃縮液用無(wú)水乙醇結(jié)晶，分離結(jié)晶，洗滌，干燥精制得草蓯蓉甙，其含量在96.5%。
權(quán)利要求
1.一種利用超臨界c(v流體萃取和大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化草蓯蓉中草蓯蓉甙的方法，其步驟如下 (1)將干草蓯蓉粉碎，加入到CO2超臨界萃取器中，用乙醇作為夾帶劑，萃取壓力為20MPa 40MPa，溫度為50°C 60°C，萃取時(shí)間IOOmin 140min，得萃取物； (2)將經(jīng)步驟(I)處理的草蓯蓉萃取液用鹽酸調(diào)其pH值為3.0 4.0，靜置、抽濾、減壓濃縮得草蓯蓉甙粗提物； (3)將所得草蓯蓉甙粗提物用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附； (4)用40%、50%、60%、70%、80%、90%不同濃度的乙醇對(duì)大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集草蓯蓉甙各階段洗脫液； (5)將草蓯蓉甙各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得草蓯蓉甙半成品，其含量為30%以上； (6)將所得草蓯蓉甙半成品上硅膠層析柱，并以丙酮甲醇以1: 1、2 1、3 1、4 : 1、5 : 1、6 1、7 I不同體積比例進(jìn)行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集草蓯蓉甙各階段洗脫液，減壓濃縮，回收溶劑； (7)將所收集的草蓯蓉甙濃縮液用溶劑結(jié)晶，分離結(jié)晶，洗滌，干燥精制得草蓯蓉甙，其含量在95%以上。
所述步驟(3)中所用的大孔吸附樹(shù)脂為天津南開(kāi)大學(xué)所產(chǎn)生的X-5、NKA-9、S-8、D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-1I型樹(shù)脂中的一種，吸附為靜態(tài)吸附或動(dòng)態(tài)吸附。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用超臨界CO2流體萃取和大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化草蓯蓉中草蓯蓉甙的方法，其特質(zhì)是所述的步驟(I)中，干草蓯蓉粉碎后過(guò)60 80目篩。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用超臨界CO2流體萃取和大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化草蓯蓉中草蓯蓉甙的方法，其特征是所述的步驟(I)中，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為1% 3%。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用超臨界CO2流體萃取和大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化草灰蓉中草灰蓉式的方法，其特征是所述的步驟(I)中，CO2流量為I 3mg/g生藥 min。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的利用超臨界CO2流體萃取和大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化草 蓯蓉中草蓯蓉甙的方法，其特征是所述的步驟(7)中，濃縮液結(jié)晶所用的溶劑為無(wú)水乙醇。
全文摘要
本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種利用超臨界CO2流體萃取和大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化草蓯蓉中草蓯蓉甙的方法。其特點(diǎn)是超臨界CO2流體萃取技術(shù)在萃取過(guò)程中保持著藥用植物的有效成分，萃取過(guò)程中不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，安全性好，不僅萃取的效率高而且能耗較少，提高了生產(chǎn)效率也降低了費(fèi)用成本。應(yīng)用大孔吸附技術(shù)分離純化草蓯蓉甙，分離效果明顯，提取純度高，可以得到含量30％以上的草蓯蓉甙半成品和含量95％以上的草蓯蓉甙終產(chǎn)品，克服了常規(guī)提取率相對(duì)較低、提取純度低的缺點(diǎn)。
文檔編號(hào)C07H17/04GK103044504SQ20121059560
公開(kāi)日2013年4月17日 申請(qǐng)日期2012年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月13日
發(fā)明者萬(wàn)莉, 姚德坤, 張亞紅, 姚德利 申請(qǐng)人:大興安嶺林格貝有機(jī)食品有限責(zé)任公司