專利名稱：一種6-羧基熒光素的制備方法
一種6-羧基熒光素的制備方法技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于6-羧基熒光素的制備方法，具體涉及選擇性金屬催化制備6-羧基熒光素的制備方法。
背景技術(shù)：
6-羧基熒光素作為一種廣泛使用的熒光染料，其相關(guān)衍生物可與蛋白、抗體， 多肽，核酸和磷脂等生物大分子結(jié)合，廣泛應(yīng)用于生物科學(xué)和醫(yī)藥研究，如用于核酸探針，實(shí)時(shí)PCR和藥物靶標(biāo)標(biāo)記技術(shù)等。但是，現(xiàn)有制備6-羧基熒光素的方法中，有一個(gè)共同的難題，就是在生成6-羧基熒光素的同時(shí)，有約等量的5-羧基熒光素生成(參考文獻(xiàn)Yuichiro Ueno, Guan-Sheng Jiao & Kevin Burgess, Synthesis, 2004 (15)， 2591-2593)。由于5-羧基熒光素與6-羧基熒光素互為位置異構(gòu)體，性質(zhì)很相近，當(dāng)反應(yīng)產(chǎn)物的組成比例為6-羧基熒光素5_羧基熒光素近為1:1時(shí)，將使分離6-羧基熒光素與 5_羧基熒光素相當(dāng)困難。即使分離，由于兩異構(gòu)體相互交叉，損失較大，產(chǎn)率較低。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于一種制備6-羧基熒光素的新工藝方法。
本發(fā)明解決技術(shù)問題的技術(shù)方案為一種6-羧基熒光素的制備方法，包括以下步驟
a、反應(yīng)步驟
室溫下，在反應(yīng)容器中，將間苯二酚類物質(zhì)溶于甲基磺酸，再加入偏苯三酸酐，室溫?cái)嚢杈鶆?，加入四氯化錫，升溫至90-110 C，保溫6-10小時(shí)后，將反應(yīng)體系冷至室溫，得到反應(yīng)溶液；
偏苯三酸酐、間苯二酚類物質(zhì)、四氯化錫的摩爾比為I :2 :0. 2-0. 22
b、結(jié)晶步驟
將反應(yīng)溶液倒入冰水溶液中，攪拌10-15分鐘，產(chǎn)物沉淀析出，過濾，干燥，再用甲醇和己烷混合溶液(甲醇己烷的體積比為I: 4)進(jìn)行重結(jié)晶，過濾，干燥，得到6-羧基熒光素甲基磺酸加合物；
C、水解步驟
將6-羧基熒光素甲基磺酸加合物加入4 M NaOH水溶液中，室溫?cái)嚢?-2小時(shí)后， 得到6-羧基熒光素鈉鹽；6-羧基熒光素甲基磺酸加合物與NaOH的摩爾比為I: I. 2-1. 3 ；
再將6-羧基熒光素鈉鹽溶液加入6 N HCl水溶液中，室溫?cái)嚢?_2小時(shí)后，產(chǎn)物沉淀析出，干燥至恒重，得到自由酸式6-羧基熒光素，6-羧基熒光素鈉鹽與HCl的摩爾比為 I 0. 5-0. 6。
所述的間苯二酚類物質(zhì)的結(jié)構(gòu)式如下
權(quán)利要求
1.一種6-羧基熒光素的制備方法，包括以下步驟a、反應(yīng)步驟；b、結(jié)晶步驟；c、水解步驟。
2.根據(jù)權(quán)利要求I一種6-羧基突光素的制備方法,其特征在于所述的a、反應(yīng)步驟室溫下，在反應(yīng)容器中，將間苯二酚類物質(zhì)溶于甲基磺酸，再加入偏苯三酸酐，室溫?cái)嚢杈鶆?，加入四氯化錫，升溫至90-110 C，保溫6-10小時(shí)后，將反應(yīng)體系冷至室溫，得到反應(yīng)溶液；偏苯三酸酐、間苯二酚類物質(zhì)、四氯化錫的摩爾比為I :2 :0. 2-0. 22?！?.根據(jù)權(quán)利要求I一種6-羧基突光素的制備方法,其特征在于所述的b、結(jié)晶步驟將反應(yīng)溶液倒入冰水溶液中，攪拌10-15分鐘，產(chǎn)物沉淀析出，過濾，干燥，再用甲醇和己烷混合溶液(甲醇己烷的體積比為I: 4)進(jìn)行重結(jié)晶，過濾，干燥，得到6-羧基熒光素甲基磺酸加合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求I一種6-羧基突光素的制備方法,其特征在于所述的C、水解步驟將6-羧基熒光素甲基磺酸加合物加入4 M NaOH水溶液中，室溫?cái)嚢?_2小時(shí)后，得到 6_羧基熒光素鈉鹽；6_羧基熒光素甲基磺酸加合物與NaOH的摩爾比為I: I. 2-1. 3 ；再將6-羧基熒光素鈉鹽溶液加入6 N HCl水溶液中，室溫?cái)嚢?-2小時(shí)后，產(chǎn)物沉淀析出，干燥至恒重，得到自由酸式6-羧基熒光素，6-羧基熒光素鈉鹽與HCl的摩爾比為I : O. 5-0. 6。
4.根據(jù)權(quán)利要求I一種6-羧基突光素的制備方法,其特征在于所述的所述的間苯二酚類物質(zhì)的結(jié)構(gòu)式如下
全文摘要
本發(fā)明公開了一種6-羧基熒光素的制備方法，所述的方法包括以下步驟a、反應(yīng)步驟；b、結(jié)晶步驟；c、水解步驟。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，使用金屬催化劑四氯化錫(SnCl4)選擇性催化反應(yīng)，制備6-羧基熒光素，在分離純化中選擇合適的混合溶劑的比例及純化方法，將所需產(chǎn)物6-羧基熒光素與副產(chǎn)物5-羧基熒光素比例從1:1提高到2.6:1, 分離產(chǎn)率提高到原來的1.9倍 (從32%提高到61%左右)。大大降低了生產(chǎn)成本，減化了提純過程， 為制備廣泛用于熒光標(biāo)記生物大分子的6-羧基熒光素及其衍生物提供了一種高效實(shí)用的新工藝方法，具有很高的應(yīng)用價(jià)值。
文檔編號C07D311/80GK102942553SQ20121039000
公開日2013年2月27日 申請日期2012年10月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月15日
發(fā)明者石平 申請人:石平