專利名稱：一種從黃芩根中提取黃芩苷和黃芩素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種黃芩苷和黃芩素的提取方法，尤其是涉及ー種從黃芩根中非柱色譜分離和純化黃芩苷和黃芩素的方法。
背景技術(shù)：
黃芩為常用中藥之一，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血安胎等功效。黃芩的主要成分為黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷和漢黃芩素等黃酮類化合物，其中，黃芩苷和黃芩素是黃芩及其制劑的主要質(zhì)量控制指標(biāo)成分，現(xiàn)代藥理研究證明，黃芩苷和黃芩素不僅具有明顯的抗菌消炎、抗過(guò)敏、抗氧化、抗癌和抗病毒等作用，而且對(duì)治療心血管疾病也具有一定的作用。因此，黃芩苷和黃芩素的分離純化成了人們爭(zhēng)相研究的熱點(diǎn)。目前，對(duì)黃芩苷和黃芩素分離純化工藝的研究有很多報(bào)道，如沉淀洗滌法、酸沉法、超濾法、柱色譜法、大孔樹脂法、制備型高效液相色譜法等。此外，對(duì)黃芩素成分的分離純化還常常采用酸水解、熱裂解和酶 催化水解等方法，將黃芩苷制備成黃芩素。這些方法，都存在如下幾個(gè)問(wèn)題ー是產(chǎn)品純度不高，純化產(chǎn)物往往為幾個(gè)甚至幾十個(gè)化合物的混合體；ニ是工作量大，要得到純度較高的產(chǎn)品，一般要經(jīng)過(guò)多種方法、多次分離，步驟繁雜；三是設(shè)備要求高，成本高，不易放大，難以實(shí)現(xiàn)大規(guī)模エ業(yè)化生產(chǎn)。而現(xiàn)有技術(shù)中還沒(méi)有能從黃芩提取液中同時(shí)非柱色譜分離和純化黃芩苷和黃芩素的エ藝。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是，克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供ー種操作簡(jiǎn)單、快速，成本低，能實(shí)現(xiàn)エ業(yè)化生產(chǎn)的提取黃芩苷和黃芩素的方法。本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是，一種提取黃芩苷和黃芩素的方法，包括以下步驟
(1)溶劑超聲提取稱取黃芩根粉末，按照每克黃芩根粉末加入100 200ml的提取溶齊U，然后加入酸，調(diào)節(jié)pH為3 5，超聲提取20 50min，在9000 — IlOOOrpm下離心3 6 min,得上清液；
所述提取溶劑是有機(jī)溶劑與水的混合物；
所述酸優(yōu)選有機(jī)酸，更優(yōu)選甲酸或こ酸；
(2)Fe304磁性納米粒子吸附按每100毫升上清液加入2.O 5. O g Fe3O4磁性納米粒子，攪拌，超聲分散2. O — 5. Omin，在10 — 30°C恒溫振蕩儀上振蕩IOmin 30min，磁鐵分離，使溶液分成上下兩相，黃芩苷和黃芩素選擇性吸附在下層的Fe3O4磁性納米粒子表面；
(3)解吸附吸干上清液，往Fe3O4磁性納米粒子中加入與上清液等體積的黃芩苷洗脫液，在10 — 30°C恒溫振蕩儀上振蕩IOmin 30min，磁鐵分離，得到黃芩苷上清液；再往Fe3O4磁性納米粒子中加入與上清液等體積的黃芩素洗脫液，在10 — 30°C恒溫振蕩儀上振蕩IOmin 30min,磁鐵分離,得到黃岑素上清液；
所述黃芩苷洗脫液是含こ胺體積百分比為O. 01% 一 I. 0%的有機(jī)溶劑；所述黃芩素洗脫液是含こ酸體積百分比為O. 1% 一 8. 0%的有機(jī)溶剤。(4)干燥純化將步驟(3)所得黃芩苷上清液和黃芩素上清液分別減壓蒸發(fā)，分別得到黃芩苷、黃芩素含量為70-90%的深黃色粉末。進(jìn)ー步，步驟(I)中，所述有機(jī)溶劑是甲醇、こ醇、こ腈、丙酮或石油醚中的至少ー種。進(jìn)ー步，步驟(I)中，所述有機(jī)溶劑與水的混合物，有機(jī)溶劑與水的體積比為2 5: I。進(jìn)ー步，步驟(3)中，所述有機(jī)溶劑是甲醇、こ醇、こ腈、丙酮或石油醚中的至少ー種。使用本發(fā)明，操作簡(jiǎn)單，通過(guò)吸附、解吸附兩步即可實(shí)現(xiàn)黃芩苷和黃芩素的分離純 化。整個(gè)過(guò)程省時(shí)省力，分離速度快，特異性強(qiáng)，F(xiàn)e3O4納米粒子選擇性吸附黃芩提取液中的黃芩苷和黃芩素，經(jīng)磁場(chǎng)分離、洗脫液解吸附，分別得到了純度達(dá)到90%以上的黃芩苷和黃芩素，避免使用大量非極性有機(jī)溶劑，也避免劇烈機(jī)械振動(dòng)所帯來(lái)的原料和能耗的損失，避免使用昂貴的制備色譜設(shè)備，以及繁瑣耗時(shí)的大孔吸附柱色譜，有效降低成本。此外，本發(fā)明中所用的吸附劑為Fe3O4磁性納米粒子，磁響應(yīng)好，在外加磁場(chǎng)作用下可以輕易實(shí)現(xiàn)固液分離，F(xiàn)e3O4磁性納米粒子經(jīng)過(guò)解吸附再生以后，可以循環(huán)利用，解決了其他方法中吸附載體回收困難的問(wèn)題，能有效的降低生產(chǎn)成本。該方法兩步即得到產(chǎn)品，產(chǎn)品純度高，無(wú)需進(jìn)行任何特殊處理，解決了傳統(tǒng)方法中多次分離仍得不到純度高成品的問(wèn)題，易于實(shí)現(xiàn)エ業(yè)化生產(chǎn)。


圖I為實(shí)施例I各組分的高效液相色譜圖(圖中的I代表吸附前黃芩原液的液相色譜圖；2代表吸附后黃芩上清液的液相色譜圖；3代表黃芩苷洗脫液的液相色譜圖；4代表黃芩素洗脫液的液相色譜圖；組分a為黃芩苷、組分b為黃芩素)。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)ー步詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例I
本實(shí)施例包括以下步驟
(1)溶劑超聲提取稱取1.0g黃芩根粉末，加入100 ml提取溶劑，加入甲酸，調(diào)節(jié)pH為5,超聲提取30min,在10000 rpm離心5 min,得到提取液；
所述提取溶劑是こ腈與水的混合物，其中こ腈與水的體積比為4:1 ;
(2)Fe304磁性納米粒子吸附往步驟(I)所得提取液中加入3.0g Fe3O4磁性納米粒子，攪拌，超聲分散2 min，在25°C恒溫振蕩儀上振蕩20 min，磁鐵分離，使溶液分成上下兩相，黃芩苷和黃芩素選擇性吸附在下層的Fe3O4納米粒子表面；
(3)解吸附吸干上清液，往Fe3O4磁性納米粒子中加入100ml黃芩苷洗脫液，在25°C恒溫振蕩儀上振蕩洗脫20 min,磁鐵分離，得到黃芩苷上清液，洗脫率達(dá)到95% ;再往磁性Fe3O4納米粒子中加入100 ml黃芩素洗脫液，在25°C恒溫振蕩儀上振蕩洗脫20 min，磁鐵分離，得到黃芩素上清液，洗脫率達(dá)到97% ；所述的黃芩苷洗脫液是含こ胺體積百分比為0.01%的こ腈溶液，黃芩素洗脫液是含こ酸體積百分比為O. 3%的こ腈溶液；
(4)干燥純化將步驟(3)所得黃芩苷上清液和黃芩素上清液分別減壓蒸發(fā)，得到O. 10g黃岑苷深黃色粉末、O. 20 g黃岑素深黃色粉末,其中黃岑苷的含量為87%,黃岑素的含量為 80%ο圖I為本實(shí)施例各組分的高效液相色譜圖
圖中的I代表吸附前黃芩原液的液相色譜圖；2代表吸附后黃芩上清液的液相色譜圖； 3代表黃芩苷洗脫液的液相色譜圖；4代表黃芩素洗脫液的液相色譜圖；組分a為黃芩苷、組分b為黃芩素。說(shuō)明通過(guò)比較圖I中的I和2可以發(fā)現(xiàn)，2中的組分a和組分b的色譜峰明顯減少，而其它峰幾乎不變，說(shuō)明黃芩中主要是組分a和組分b吸附在Fe3O4磁性納米粒子表面，而其它組分幾乎不被吸附；從3和4可以看出，吸附在Fe3O4磁性納米粒子表面的組分a黃芩苷和組分b黃芩素分別被成功洗脫下來(lái)。實(shí)施例2
本實(shí)施例包括以下步驟
(1)溶劑超聲提取稱取5.O g黃芩根粉末，加入800 ml提取溶劑，加入こ酸，調(diào)節(jié)pH為4,超聲提取30 min,在IOOOOrpm離心5 min,得到上清液；所述提取溶劑是甲醇與水的混合物，甲醇與水的體積比為3: I ；
(2)Fe3O4磁性納米粒子吸附往步驟(I)所得上清液中加入20. O g Fe3O4磁性納米粒子，攪拌，超聲分散2 min，在25°C恒溫振蕩儀上振蕩20 min，磁鐵分離，使溶液分成上下兩相，黃芩苷和黃芩素選擇性吸附在下層的Fe3O4納米粒子表面；
(3)解吸附吸干上清液，往Fe3O4納米粒子中加入800ml黃芩苷洗脫液，在25°C恒溫振蕩儀上振蕩洗脫20 min,磁鐵分離，得到黃芩苷上清液，黃芩苷洗脫率達(dá)到93% ;再往Fe3O4納米粒子中加入800 ml黃芩素洗脫液，在25°C恒溫振蕩儀上振蕩洗脫20 min，磁鐵分離，得到黃芩素上清液，黃芩素洗脫率達(dá)到94% ；
所述黃芩苷洗脫液是含こ胺體積百分比為O. 05%的甲醇溶液，黃芩素洗脫液是含こ酸體積百分比為I. 0%的甲醇溶液；
(4)干燥純化將步驟(3)所得黃芩苷上清液和黃芩素上清液分別減壓蒸發(fā)，可以得到O. 40 g黃岑苷深黃色粉末、O. 9 g黃岑素深黃色粉末,其中黃岑苷的含量為85%,黃岑素的含量為81%。實(shí)施例3
本實(shí)施例包括以下步驟
(1)溶劑超聲提取稱取10.0g黃芩根粉末，加入2000 ml提取溶劑，然后加入甲酸，調(diào)節(jié)pH為3,超聲提取30min,在10000 rpm離心5 min,得到上清液；所述提取溶劑是丙酮與水的混合物，丙酮與水的體積比為4: I ；
(2)Fe304磁性納米粒子吸附往步驟(I)所得上清液中加入40g Fe3O4磁性納米粒子，攪拌，超聲分散2 min，在25°C恒溫振蕩儀上振蕩20 min，磁鐵分離，使溶液分成上下兩相，黃芩苷和黃芩素選擇性吸附在下層的Fe3O4納米粒子表面；
(3)解吸附吸干上清液，往Fe3O4磁性納米粒子中加入2000ml黃芩苷洗脫液，在25°C恒溫振蕩儀上振蕩洗脫20 min,磁鐵分離，得到黃芩苷上清液，洗脫率達(dá)到93% ;再往Fe3O4納米粒子中加入2000 ml黃芩素洗脫液，在25°C恒溫振蕩儀上振蕩20 min,磁鐵分離，得到黃芩素上清液，洗脫率達(dá)到94%;
所述黃芩苷洗脫液是含こ胺體積百分比為O. 1%的丙酮溶液，黃芩素洗脫液是含こ酸體積百分比為5. 0%的丙酮溶液； (4)干燥純化將步驟(3)所得黃芩苷上清液和黃芩素上清液分別減壓蒸發(fā)，得到I. Og黃岑苷深黃色粉末、2. I g黃岑素深黃色粉末，其中黃岑苷的含量為85%,黃岑素的含量為80%。
權(quán)利要求
1.一種從黃芩根中提取黃芩苷和黃芩素的方法，其特征在于，包括以下步驟(1)溶劑超聲提取稱取黃芩根粉末，按照每克黃芩根粉末加入100 200ml的提取溶 劑，然后加入酸，調(diào)節(jié)pH為3 5，超聲提取20 50min，在9000 — llOOOrpm下離心3 6 min,得上清液；所述提取溶劑是有機(jī)溶劑與水的混合物；(2)Fe304磁性納米粒子吸附按每100毫升上清液加入2.0 5. 0 g Fe304磁性納米粒 子，攪拌，超聲分散2. 0 — 5. Omin，在10 — 30°C恒溫振蕩儀上振蕩lOmin 30min，磁鐵分 離，使溶液分成上下兩相，黃芩苷和黃芩素選擇性吸附在下層的Fe304磁性納米粒子表面；(3)解吸附吸干上清液，往Fe304磁性納米粒子中加入與上清液等體積的黃芩苷洗脫 液，在10 - 30°C恒溫振蕩儀上振蕩lOmin 30min，磁鐵分離，得到黃芩苷上清液；再往 Fe304磁性納米粒子中加入與上清液等體積的黃芩素洗脫液，在10 - 30°C恒溫振蕩儀上振 蕩lOmin 30min,磁鐵分離，得到黃岑素上清液；所述黃芩苷洗脫液是含乙胺體積百分比為0. 01% - 1. 0%的有機(jī)溶劑；所述黃芩素洗脫液是含乙酸體積百分比為0. 1% - 8. 0%的有機(jī)溶劑；(4)干燥純化將步驟(3)所得黃芩苷上清液和黃芩素上清液分別減壓蒸發(fā)，分別得到 黃芩苷、黃芩素含量為70-90%的深黃色粉末。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從黃芩根中提取黃芩苷和黃芩素的方法，其特征在于，步驟 (1)中，所述有機(jī)溶劑是甲醇、乙醇、乙腈、丙酮或石油醚中的至少一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從黃芩根中提取黃芩苷和黃芩素的方法，其特征在于，步 驟(1)中，所述有機(jī)溶劑與水的體積比為2 5: 1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從黃芩根中提取黃芩苷和黃芩素的方法，其特征在于，步 驟(1)中，所述酸為有機(jī)酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的從黃岑根中提取黃岑苷和黃岑素的方法，其特征在于，所述 有機(jī)酸為甲酸或乙酸。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從黃芩根中提取黃芩苷和黃芩素的方法，其特征在于，步 驟(3)中，所述有機(jī)溶劑是甲醇、乙醇、乙腈、丙酮或石油醚中的至少一種。
全文摘要
一種從黃芩根中提取黃芩苷和黃芩素的方法，其包括以下步驟(1)溶劑超聲提取；(2)Fe3O4磁性納米粒子吸附；(3)解吸附。本發(fā)明簡(jiǎn)單快速，通過(guò)外加磁場(chǎng)即可實(shí)現(xiàn)吸附載體與原料液的分離，通過(guò)不同的洗脫液可以選擇性洗脫黃芩苷和黃芩素，避免了原料和能耗的損失，有效降低成本，F(xiàn)e3O4磁性納米粒子可以循環(huán)使用，能有效節(jié)約成本。
文檔編號(hào)C07H17/07GK102659877SQ20121015024
公開日2012年9月12日 申請(qǐng)日期2012年5月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月16日
發(fā)明者周鵬, 張軍安, 張松, 李媛, 許光明, 陳波 申請(qǐng)人:湖南師范大學(xué)