專利名稱：對血清淀粉樣蛋白p組分特異性的抗原結(jié)合蛋白的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及結(jié)合血清淀粉樣蛋白P組分(SAP)的抗原結(jié)合蛋白(諸如抗體)、編碼這種抗原結(jié)合蛋白的多核苷酸、包含所述抗原結(jié)合蛋白的藥物組合物和生產(chǎn)方法。本發(fā)明也涉及這種抗原結(jié)合蛋白在治療或預(yù)防與淀粉樣蛋白沉著有關(guān)的疾病中的用途，所述疾病包括全身性淀粉樣變性、局部性淀粉樣變性、阿爾茨海默氏病和II型糖尿病。
背景技術(shù)：
淀粉樣變性是由異常的不溶性蛋白纖維(稱作淀粉樣蛋白纖絲)在組織中的胞外積累造成的一種嚴(yán)重的且通常致命的疾病。這些源自不同形式的疾病中的超過20種不同的蛋白，但是所有淀粉樣蛋白纖絲共有共同的交叉-β核心結(jié)構(gòu)，且都通過通?？扇苄?的前體蛋白的錯誤折疊而衍生出(Pepys, M. B. (2006)Annu. Rev. Med. ,57 :223-241)。一種正常的非纖絲的血漿蛋白(即血清淀粉樣蛋白P組分(SAP))也總是存在于淀粉樣沉著物中，這是因為它與所有類型的淀粉樣蛋白纖絲的親和的(avid)特異性的鈣依賴性的結(jié)合(Pepys 等人(1979)Clin. Exp. Immunol. ,38 :284-293 ；Pepys 等人(1997)Amyloid Int.J. Exp. Clin. Invest.，4 :274-295)。人SAP是血漿中的一種組成蛋白，其濃度為約20_40mg/l (Nelson等人(1991)Cl in. Chim. Acta, 200 191-200)，在正常個體和具有除了淀粉樣變性以外的疾病的患者的組合的血漿和血管外隔室中共有約50-100mg SAP (Hawkins等人(1990) J. Clin. Invest.，86 :1862-1869)。在具有淀粉樣變性的患者中，SAP也特異性地聚集在淀粉樣沉著物中，且在具有廣泛的全身性淀粉樣變性的個體中，在淀粉樣蛋白中可能存在多達(dá)20，000mgSAP (Pepys等人(1994) PNAS, 91 =5602-5606)，所述SAP可逆地結(jié)合纖絲，并與流體相SAP集合達(dá)成平衡。對循環(huán)SAP的正常生理功能知之甚少，但是動物實驗和體外研究提示在宿主防御中的作用(Noursadeghi等人(2000)PNAS，97 :14584-14589))。SAP也是一種與彈性纖維和腎小球基膜有關(guān)的正常組織基質(zhì)組分，盡管不知道它的功能。在淀粉樣變性中，胞外淀粉樣沉著物如下造成疾病通過漸進(jìn)性積累，直到它們損傷它們占據(jù)的任何組織的結(jié)構(gòu)并從而損傷所述組織的功能(Pepys, M. B. (2006)Annu. Rev.Med. ,57 =223-241)。對淀粉樣蛋白沉著存在非常罕見的任何炎癥性或‘異物’應(yīng)答，所述應(yīng)答在組織中局部地看到，或由炎癥的全身性標(biāo)志物提示。全身性淀粉樣變性可以涉及任何器官，通常是致命的，并在發(fā)達(dá)國家中造成約1/1000的死亡。局限性的淀粉樣蛋白(局限于單個解剖學(xué)位置或組織類型)也可以是非常嚴(yán)重的，例如腦淀粉樣蛋白血管病是出血性中風(fēng)的一個重要原因。淀粉樣變性的臨床表現(xiàn)是非常多樣化的，在出現(xiàn)顯著的器官損傷之前很難作出診斷。超過20種不同的淀粉樣蛋白纖絲蛋白負(fù)責(zé)不同形式的淀粉樣變性，但是大幅減少各種淀粉樣蛋白纖絲前體蛋白的豐度的治療確實會停止淀粉樣蛋白積累，且所述沉著物可能退化。不幸的是，有效的措施并非總是可用的，并且當(dāng)它們確實存在時，是有毒的或危險的，且見效緩慢(Pepys, M. B (2006) Annu. Rev. Medd. ,57 :223-241)。因此，存在對這樣的療法的重大的未獲滿足的醫(yī)學(xué)需要所述療法會安全地促進(jìn)建立的淀粉樣沉著物的清除。此外，有些其它的病癥中總是存在淀粉樣沉著物，最重要的是阿爾茨海默氏病(AD)和II型糖尿病，其中淀粉樣蛋白沉著對疾病的發(fā)病機(jī)制(具體地，分別是認(rèn)知功能和胰島功能的喪失)的貢獻(xiàn)尚不清楚(Pepys,M. B. (2006)Annu. Rev. Med. , 57 =223-241) 但是，在體內(nèi)的任意別處的淀粉樣沉著物經(jīng)證實是病原性的，并且AD的腦沉著物和II型糖尿病的胰島淀粉樣沉著物可能也是有害的。由于在全身性淀粉樣變性中清除淀粉樣沉著物的治療確定地是治療性的(Pepys,M. B. (2006) Annu. Rev. Med. ,57 :223-241)，在 AD 和 II 型糖尿病中去除淀粉樣沉著物也應(yīng)當(dāng)是臨床上有益的。SAP的結(jié)合會穩(wěn)定化淀粉樣蛋白纖絲,保護(hù)它們免于體外蛋白酶解(Tennent等人，(1995)PNAS，92 :4299-4303)，可以在體外增強(qiáng)淀粉樣蛋白微纖維生成(Myers等人，(2006)，Biochemistry, 45 :2311-2321)，并在體內(nèi)促成全身性淀粉樣變性的發(fā)病機(jī)制(Botto等人，(1997)Nature Med.，3 :855-859)。與它在所有淀粉樣沉著物中的普遍存在相關(guān)聯(lián)，SAP的這些性質(zhì)使它成為有吸引力的治療靶標(biāo)?！W洲專利申請EP 0915088公開了 D-脯氨酸衍生化合物，它們是SAP與淀粉樣蛋白纖絲的結(jié)合的競爭性抑制劑，還公開了它們的生產(chǎn)方法。在EP 0915088中公開的一種優(yōu)選的化合物是(R)-I-[6-[(R)-2-羧基-吡咯烷-I-基]-6-氧代-己?；鵠吡咯烷-2-羧酸(CPHPC)。國際專利申請WO 03/051836公開了 D-脯氨酸衍生化合物的前體藥物。國際專利申請WO 2004/099173公開了甘油環(huán)狀丙酮酸酯衍生物，它們是SAP與淀粉樣蛋白纖絲的結(jié)合的競爭性抑制劑。國際專利申請WO 04/059318描述了據(jù)宣稱會增強(qiáng)纖維細(xì)胞形成的方法，所述方法包括提供會結(jié)合SAP的組合物。這樣的組合物包括抗-SAP抗體和CPHPC。WO 04/059318沒有公開與淀粉樣蛋白沉著有關(guān)的疾病的治療。此外，令人注目的臨床和體內(nèi)證據(jù)證實，SAP和它的消耗都對人類的纖維化沒有任何作用(Tennent等人，(2007)ArthritisRheum. ,56 :2013-2017 ；Pepys,M. B. ,Tennent, G. A.和Denton,C.P· (2007)Reply to Letterfrom Pilling, D. , Buckley, C. D., Salmon, M.和 Gomer, R. G., Serum amyloid P andfibrosis in systemic sclerosis comment on the article by Tennent等人ArthritisRheum. ,56 :4229-4230)。在上述專利中公開的二 -D-脯氨酸化合物CPHPC會被人SAP高親和力地結(jié)合，且意圖用作在體內(nèi)從淀粉樣沉著物去除SAP并從而促進(jìn)它們的清除的藥物。SAP對CPHPC的結(jié)合會觸發(fā)肝臟對所述復(fù)合物的快速清除，在施用藥物的時段內(nèi)消耗幾乎所有的循環(huán)SAP，并去除許多、但并非所有的淀粉樣蛋白結(jié)合的SAP(P印ys等人，(2002)Nature，417 254-259)。在初步臨床研究(Gillmore 等人，(2010)Brit. J. Haematol.，doi :10. 1111/j. 1365-2141. 2009. 08036. x)中，CPHPC的施用似乎會阻止淀粉樣蛋白積累，但是它沒有產(chǎn)生淀粉樣蛋白消退，并且因為CPHPC沒有從淀粉樣沉著物完全去除所有SAP，需要另一種方案。國際專利申請WO 2009/000926公開了與對SAP特異性的抗體相組合的特定化合物用于治療或預(yù)防淀粉樣變性的用途，所述化合物會從循環(huán)中消耗SAP，諸如D-脯氨酸衍生物，尤其是CPHPC。相關(guān)的國際專利申請PCT/EP2008/011135涉及多種小鼠單克隆抗體，所述抗體可以與特定化合物組合地使用，用于治療或預(yù)防淀粉樣變性，所述化合物會從循環(huán)中消耗SAP,諸如D-脯氨酸衍生物，尤其是CPHPC。因此，本領(lǐng)域需要抗體、特別是人源化的或人的抗體，所述抗體會特異性地靶向SAP，并在具有與淀粉樣蛋白沉著有關(guān)的疾病的患者(特別是人患者)中提供改善的治療效果，以便保持器官功能和延長壽命。

發(fā)明內(nèi)容
在第一個方面，本發(fā)明提供了一種抗原結(jié)合蛋白，其特異性地結(jié)合SAP，并與參照抗體競爭結(jié)合SAP，所述參照抗體包含SEQ ID NO :7的重鏈可變區(qū)序列和SEQ ID NO :9的輕鏈可變區(qū)序列。在本發(fā)明的第二個方面，提供了一種抗原結(jié)合蛋白，其結(jié)合SAP，并包含在SEQ IDNO 3中所述的⑶RH3或⑶RH3的功能變體。
在本發(fā)明的第三個方面，提供了一種特異性地結(jié)合SAP的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白是嵌合的或人源化的抗體，所述抗體包含SEQ ID NO :7的可變結(jié)構(gòu)域序列的對應(yīng)⑶RH3或⑶RH3的功能變體。在本發(fā)明的第四個方面，提供了一種抗原結(jié)合蛋白，其特異性地結(jié)合SAP，且包含含有SEQ ID NO 7的Kabat殘基95-101的結(jié)合單元H3或結(jié)合單元H3的功能變體。在本發(fā)明的第五個方面，提供了一種抗原結(jié)合蛋白，其特異性地結(jié)合SAP，且包含選自SEQ ID NO 27-31的重鏈可變區(qū)；和/或選自SEQ ID NO :34-36的輕鏈可變區(qū)；或具有75%或更大序列同一性的變體重鏈可變區(qū)或輕鏈可變區(qū)。在本發(fā)明的第六個方面，提供了一種抗原結(jié)合蛋白，其特異性地結(jié)合SAP，且包含SEQ ID NO :62的重鏈；和/或SEQ ID NO :64的輕鏈；或具有75%或更大序列同一性的變體重鏈或輕鏈。本發(fā)明也提供了編碼本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白的核酸分子、包含它們的表達(dá)載體、和能夠生產(chǎn)本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白的宿主細(xì)胞。在本發(fā)明的另一個方面，提供了一種藥物組合物，其包含本文定義的抗原結(jié)合蛋白。本發(fā)明也提供了預(yù)防和/或治療易感或遭受與淀粉樣蛋白沉著有關(guān)的疾病的受試者的方法，所述方法包括下述步驟給所述受試者施用預(yù)防或治療有效量的抗原結(jié)合蛋白。提供了本文定義的抗原結(jié)合蛋白用于預(yù)防和/或治療易感或遭受與淀粉樣蛋白沉著有關(guān)的疾病的受試者的用途。也提供了本文定義的抗原結(jié)合蛋白用于生產(chǎn)藥物的用途，所述藥物用于預(yù)防和/或治療易感或遭受與淀粉樣蛋白沉著有關(guān)的疾病的受試者。


圖I顯示了鼠抗體SAP-E和SAP-K在I μ g/mL的人SAP包被濃度時的結(jié)合曲線。圖2顯示了鼠抗體SAP-E和SAP-K在5 μ g/mL的人SAP包被濃度時的結(jié)合曲線。圖3顯示了嵌合抗體cSAP-E和cSAP-K的結(jié)合曲線。嵌合抗體的曲線輪廓與等效雜交瘤的曲線輪廓相同。圖 4 顯示了 SAP-K HOLO、SAP-K H1L0、SAP_K H2L0 和 SAP-K H3L0 與 SAP-K 嵌合體相比較的結(jié)合曲線，以及SAP-E HlLl與SAP-E嵌合體相比較的結(jié)合曲線。還測試了無關(guān)的人I gGI K抗體作為陰性對照。圖5顯示了在含有SAP-E嵌合體的競爭ELISA中的純化的SAP-K和SAP-E鼠單克隆抗體。圖6顯示了在含有SAP-K嵌合體的競爭ELISA中的純化的SAP-K和SAP-E鼠單克隆抗體。圖7顯示了單 克隆小鼠抗體SAP-E和SAP-K與人SAP的結(jié)合的免疫放射分析，所述人SAP被固定化的綿羊多克隆抗-人SAP抗體捕獲。圖8顯示了單克隆抗-人SAP抗體SAP-E的表位作圖。圖9顯示了被SAP-K識別的人SAP上的表位的定位(A，以黑色突出顯示)和被SAP-E識別的人SAP上的表位的定位(B，以白色顯示)。圖10顯示了全人血清中的人源化的單克隆抗-人SAP抗體的C3活化。圖11顯示了全人血清中的低劑量的人源化的單克隆抗-人SAP抗體的C3活化。圖12顯示了補(bǔ)充了純的人SAP的全小鼠血清中的人源化的單克隆抗-人SAP抗體的C3活化。
具體實施例方式本發(fā)明提供了一種抗原結(jié)合蛋白，其結(jié)合血清淀粉樣蛋白P組分(SAP)例如人SAP作為它的特異性抗原(即SAP結(jié)合蛋白)。在本發(fā)明的治療性應(yīng)用中，所述抗原結(jié)合蛋白會活化身體從組織中清除異常碎片的有效機(jī)理。所述抗原結(jié)合蛋白可以是抗體，例如單克隆抗體。本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白不是鼠抗體。在一個實施方案中，本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白不是鼠抗原結(jié)合蛋白。具體地，本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白是嵌合的、人源化的或人的抗原結(jié)合蛋白。“血清淀粉樣蛋白P組分”或“SAP”表示穿透素(pentraxin)家族的同源五聚的血衆(zhòng)糖蛋白。每個分子由5個相同的原體(protomer)組成,每個原體具有扁平的β-瑞士卷狀折疊(jelly rol fold)和單個α螺旋,所述原體非共價地結(jié)合成具有環(huán)狀五聚體對稱性的圓盤樣環(huán)(Hutchinson 等人，(2000)Mol. Med. ,6 :482-493) ;Pepys 等人，(2002)Nature, 417 :254-259)。本文使用的術(shù)語“SAP”也包括由人基因APCS (染色體1 ;位置Iq21_q23)或在其它生物體中的同源基因編碼的單個亞基，例如具有在SEQ ID NO :43中所述的序列的人SAP多肽亞基以及SAP的天然五聚體形式和SAP的保留在體內(nèi)結(jié)合淀粉樣蛋白纖絲的生物活性的任意片段和變體。本發(fā)明的SAP結(jié)合蛋白可以結(jié)合上述的不同形式的SAP中的任一種或任意組合。在一個具體實施方案中，本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白會結(jié)合人SAP。當(dāng)SAP與任意類型的淀粉樣蛋白纖絲結(jié)合且在體內(nèi)的任意胞外位置中時，本發(fā)明的SAP結(jié)合蛋白可以結(jié)合所述SAP。本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白也可以結(jié)合天然的未結(jié)合的SAP。在治療方法中使用本發(fā)明的SAP結(jié)合蛋白的一個基本方面是，在循環(huán)中的SAP的濃度與施用SAP結(jié)合蛋白之前的它的正常值相比必須降低了至少90%。具體地，這可以通過下述化合物來實現(xiàn)減少循環(huán)SAP的量的化合物，和具體地，導(dǎo)致循環(huán)SAP的消耗的化合物，在這里定義為“SAP消耗的化合物”(“SAP depleting compounds”)。這樣的化合物是被SAP結(jié)合的配體，且是SAP與淀粉樣蛋白纖絲的結(jié)合的競爭性抑制劑，諸如D-脯氨酸衍生物和甘油環(huán)狀丙酮酸酯衍生物。D-脯氨酸衍生物公開在EP 0915088(它通過引用整體并入本文)中，術(shù)語“D-脯氨酸衍生物”包括前體藥物，諸如在WO 03/051836(它也通過引用整體并入本文)中公開的那些。預(yù)見到下式的D-脯氨酸
權(quán)利要求
1.一種非鼠的抗原結(jié)合蛋白，其特異性地結(jié)合SAP，并與參照抗體競爭結(jié)合SAP，所述參照抗體包含SEQ ID NO 7的重鏈可變區(qū)序列和SEQ ID NO 9的輕鏈可變區(qū)序列。
2.一種非鼠的抗原結(jié)合蛋白，其結(jié)合SAP，并包含在SEQ ID NO :3中所述的⑶RH3或⑶RH3的功能變體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗原結(jié)合蛋白，其另外包含一個或多個或所有選自下述的CDR :CDRHl (SEQ ID NO :1)、CDRH2 (SEQ ID NO : 12)、CDRLl (SEQ ID NO :4)、CDRL2 (SEQ IDNO 5)和 CDRL3 (SEQ ID NO 6);或 CDRHl、CDRH2、CDRLl、CDRL2 或 CDRL3 的功能變體。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的抗原結(jié)合蛋白，其中所述CDRH3功能變體是SEQID NO:3的變體，其中將 Ser 102 置換為 Tyr、His、Val、Ile、Asp 或 Gly。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的抗原結(jié)合蛋白，其中 (a)所述CDRHI功能變體是SEQ ID NO :I的變體，其中將Tyr 32置換為Ile、His、Phe、Thr、Asn、Cys、Glu 或 Asp ;將 Asn 33 置換為 Tyr、Ala、Trp、Gly、Thr、Leu 或 Val J^Met 34置換為 He、Val 或 Trp ;和 / 或?qū)?His 35 置換為 Glu, Asn, Gin、Ser、Tyr 或 Thr ； (b)所述CDRH2功能變體是SEQID NO :2的變體，其中將Tyr 50置換為Arg、Glu、Trp、Gly、Gin、Val、Leu、Asn、Lys 或 Ala ;將 Ile51 置換為 Leu、Val、Thr、Ser 或 Asn ;將 Tyr 52置換為 Asp、Leu、Asn 或 Ser ;將 Gly 53 置換為 Ala、Tyr、Ser、Lys、Thr 或 Asn ;將 Asp 54 置換為 Asn、Ser、Thr、Lys 或 Gly ;將 Asn 56 置換為 Tyr、Arg、Glu、Asp、Gly、Val、Ser 或 Ala ;和 / 或?qū)?Asn 58 置換為 Lys> Thr、Ser、Asp、Arg、Gly、Phe 或 Tyr ； (c)所述CDRLl功能變體是SEQID NO 4的變體，其中將Asn 28置換為Ser、Asp、Thr或 Glu JfIle 29 置換為 Val JfTyr 30 置換為 Asp、Leu、Val、Ile、Ser、Asn、Phe、His、Gly或 Thr ;將 Ser 31 置換為 Asn,Thr,Lys 或 Gly ;將 Tyr 32 置換為 Phe、Asn、Ala、His、Ser 或Arg ;將 Leu 33 置換為 Met、Val、Ile 或 Phe ;和 / 或?qū)?Ala 34 置換為 Gly、Asn、Ser、His、Val 或 Phe ； (d)所述⑶RL2功能變體是SEQID NO :5的變體，其中將Ala 51置換為Thr、Gly或Val ;和/或 (e)所述CDRL3功能變體是SEQID NO 6的變體，其中將Gln 89置換為Ser、Gly、Phe或 Leu ;將 His 90 置換為 Gln 或 Asn ;將 His 91 置換為 Asn、Phe> Gly、Ser、Arg、Asp、Thr>Tyr 或 Val ;將 Tyr 92 置換為 Asn、Trp> Thr、Ser、Arg、Gin、His、Ala 或 Asp ;將 Gly 93 置換為 Glu、Asn、His、Thr> Ser> Arg 或 Ala ;將 Ala 94 置換為 Asp、Tyr> Thr> Val、Leu、His、Asn、lie、Trp> Pro 或 Ser ;和 / 或?qū)?Leu 96 置換為 Pro、Tyr> Arg、lie、Trp 或 Phe。
6.一種特異性地結(jié)合SAP的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白是嵌合的或人源化的抗體，所述抗體包含SEQ ID N0:7的可變結(jié)構(gòu)域序列的對應(yīng)的⑶RH3或⑶RH3的功能變體。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗原結(jié)合蛋白，其另外包含一個或多個或所有選自下述的對應(yīng)CDR SEQ ID NO 7的可變結(jié)構(gòu)域序列的CDRHl或CDRH2 ;或SEQ ID NO 9的可變結(jié)構(gòu)域序列的 CDRLl、CDRL2、CDRL3 ;或 CDRHl、CDRH2、CDRLl、CDRL2 或 CDRL3 的功能變體。
8.一種抗原結(jié)合蛋白，其特異性地結(jié)合SAP，且包含含有SEQ ID NO 7的Kabat殘基95-101的結(jié)合單元H3，或結(jié)合單元H3的功能變體。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的抗原結(jié)合蛋白，其另外包含一個或多個或所有選自下述的結(jié)合單元含有SEQ ID NO 7的Kabat殘基31-32的H1，含有SEQ ID NO 7的Kabat殘基52-56 的 H2，含有 SEQ ID NO 9 的 Kabat 殘基 30-34 的 LI，含有 SEQ ID NO 9 的 Kabat 殘基50-55的L2，和含有SEQ ID NO :9的Kabat殘基89-96的L3 ;或結(jié)合單元H1、H2、L1、L2或L3的功能變體。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項所述的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白包含重鏈和/或輕鏈，其中 (a)所述重鏈框架包含下述殘基在位置2處的Val、Ile或Gly;在位置4處的Leu或Val ;在位置20處的Leu、lie、Met或Val ;在位置22處的Cys ;在位置24處的Thr、Ala、Val、Gly或Ser ;在位置26處的Gly ;在位置29處的lie、Phe、Leu或Ser ;在位置36處的Trp ;在位置47處的Trp或Tyr ;在位置48處的Ile、Met、Val或Leu ;在位置69處的He、Leu,Phe,Met 或 Val ;在位置 71 處的 VaUAla 或 Leu ;在位置 78 處的 Ala、Leu、Val、Tyr 或Phe ;在位置80處的Leu或Met ;在位置90處的Tyr或Phe ;在位置92處的Cys ;和/或在位置 94 處的 Arg、Lys> Gly、Ser、His 或 Asn ;和 / 或 (b)所述輕鏈框架包含下述殘基在位置2處的lie、Leu或Val;在位置3處的Val、Gin、Leu或Glu ;在位置4處的Met或Leu ;在位置23處的Cys ;在位置35處的Trp ;在位置36處的Tyr、Leu或Phe ;在位置46處的Leu、Arg或Val ;在位置49處的Tyr、His、Phe或Lys ;在位置71處的Tyr或Phe ;在位置88處的Cys ;和/或在位置98處的Phe。
11.根據(jù)權(quán)利要求ι- ο中任一項所述的抗原結(jié)合蛋白，其中所述重鏈框架包含下述殘基在位置2處的Val、在位置4處的Leu、在位置20處的Val、在位置22處的Cys、在位置24處的Ala、在位置26處的Gly、在位置29處的Phe、在位置36處的Trp、在位置47處的Trp、在位置48處的Met、在位置69處的He、在位置71處的Ala、在位置78處的Ala、在位置80處的Met、在位置90處的Tyr、在位置92處的Cys和在位置94處的Arg，和/或所述輕鏈框架包含下述殘基在位置2處的He、在位置3處的Gin、在位置4處的Met、在位置23處的Cys、在位置35處的Trp、在位置36處的Tyr、在位置46處的Leu、在位置49處的His、在位置71處的Phe、在位置88處的Cys和在位置98處的Phe。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-11中任一項所述的抗原結(jié)合蛋白，其另外包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域抗體框架，其與SEQ ID NO :25所示的框架區(qū)具有75%或更大序列同一性；和/或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域抗體框架，其與SEQ ID NO 32所示的框架區(qū)具有75%或更大序列同一性。
13.一種抗原結(jié)合蛋白，其特異性地結(jié)合SAP，且包含選自SEQ ID NO :27-31的重鏈可變區(qū)；和/或選自SEQ ID NO 34-36的輕鏈可變區(qū)；或具有75%或更大序列同一性的變體重鏈可變區(qū)或輕鏈可變區(qū)。
14.一種抗原結(jié)合蛋白，其特異性地結(jié)合SAP，且包含SEQ ID NO :62的重鏈；和/或SEQ ID NO :64的輕鏈；或具有75%或更大序列同一性的變體重鏈或輕鏈。
15.在權(quán)利要求1-14中的任一項中要求保護(hù)的抗原結(jié)合蛋白，其中所述SAP是在體內(nèi)結(jié)合淀粉樣蛋白纖絲的人SAP。
16.在權(quán)利要求1-15中的任一項中要求保護(hù)的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白結(jié)合人SAP的A面。
17.在權(quán)利要求1-16中的任一項中要求保護(hù)的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白會活化人補(bǔ)體系統(tǒng)。
18.根據(jù)權(quán)利要求1-5、8、9或15-17中任一項所述的抗原結(jié)合蛋白，它是嵌合的、人源化的或人的。
19.根據(jù)前述權(quán)利要求中的任一項所述的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白包含人IgG I或IgG3人恒定結(jié)構(gòu)域。
20.一種核酸分子，其編碼在權(quán)利要求1-19中的任一項中定義的抗原結(jié)合蛋白。
21.在權(quán)利要求20中要求保護(hù)的核酸分子，其中所述核酸序列包含SEQID NO:54和/或 SEQ ID NO 59o
22.在權(quán)利要求21中要求保護(hù)的核酸分子，其中所述核酸序列包含SEQID Ν0:61和/或 SEQ ID NO 63ο
23.—種表達(dá)載體,其包含在權(quán)利要求20-22中的任一項中定義的核酸分子。
24.一種重組宿主細(xì)胞，其包含在權(quán)利要求23中定義的表達(dá)載體。
25.一種用于生產(chǎn)在權(quán)利要求1-19中的任一項中定義的抗原結(jié)合蛋白的方法，所述方法包括下述步驟培養(yǎng)在權(quán)利要求24中定義的宿主細(xì)胞，和回收所述抗原結(jié)合蛋白。
26.—種藥物組合物，其包含在權(quán)利要求1-19中的任一項中定義的抗原結(jié)合蛋白和藥學(xué)上可接受的載體。
27.一種治療遭受與淀粉樣蛋白沉著有關(guān)的疾病的受試者的方法，所述方法包括下述步驟給所述受試者施用治療有效量的在權(quán)利要求1-19中的任一項中定義的抗原結(jié)合蛋白或根據(jù)權(quán)利要求26所述的組合物。
28.一種預(yù)防受試者的與淀粉樣蛋白沉著有關(guān)的疾病的方法，所述方法包括下述步驟給所述受試者施用預(yù)防有效量的在權(quán)利要求1-19中的任一項中定義的抗原結(jié)合蛋白或根據(jù)權(quán)利要求26所述的組合物。
29.根據(jù)權(quán)利要求27或28所述的方法，其中所述抗原結(jié)合蛋白將與SAP消耗的化合物一起施用。
30.用于治療或預(yù)防與淀粉樣蛋白沉著有關(guān)的疾病的、在權(quán)利要求1-19中的任一項中定義的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白將與SAP消耗的化合物一起施用。
31.一種用于治療或預(yù)防與淀粉樣蛋白沉著有關(guān)的疾病的SAP消耗的化合物，其中所述SAP消耗的化合物將與在權(quán)利要求1-19中的任一項中定義的抗原結(jié)合蛋白一起施用。
32.根據(jù)權(quán)利要求27、28或29所述的方法，根據(jù)權(quán)利要求29所述的抗原結(jié)合蛋白，或根據(jù)權(quán)利要求31所述的SAP消耗的化合物，其中所述抗原結(jié)合蛋白和SAP消耗的化合物的施用是相繼的。
33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法、抗原結(jié)合蛋白或SAP消耗的化合物，其中所述SAP消耗的化合物將首先施用。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法、抗原結(jié)合蛋白或SAP消耗的化合物，其中所述抗原結(jié)合蛋白將在基本上所有的在受試者中循環(huán)的SAP已經(jīng)被清除時施用。
35.根據(jù)權(quán)利要求27、28、29、31、33或34所述的方法，根據(jù)權(quán)利要求30、32、33或34所述的抗原結(jié)合蛋白，或根據(jù)權(quán)利要求31、32、33或34所述的SAP拮抗劑化合物，其中所述疾病選自全身性淀粉樣變性、局部性淀粉樣變性、阿爾茨海默氏病、II型糖尿病、透析相關(guān)的淀粉樣變性、單克隆免疫球蛋白鏈(AL)淀粉樣變性和腦淀粉樣蛋白血管病。
36.根據(jù)權(quán)利要求27、28、29、32、33、34或35所述的方法，根據(jù)權(quán)利要求30、32、33、34或35所述的抗原結(jié)合蛋白，或根據(jù)權(quán)利要求31、32、33、34或35所述的SAP消耗的化合物，其中所述SAP消耗的化合物是D-脯氨酸衍生物或甘油環(huán)狀丙酮酸酯衍生物。
37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法、抗原結(jié)合蛋白或SAP消耗的化合物，其中所述D-脯氨酸衍生物是CPHPC。
全文摘要
本發(fā)明涉及結(jié)合血清淀粉樣蛋白P組分(SAP)的抗原結(jié)合蛋白(諸如抗體)、編碼這種抗原結(jié)合蛋白的多核苷酸、包含所述抗原結(jié)合蛋白的藥物組合物和生產(chǎn)方法。本發(fā)明也涉及這種抗原結(jié)合蛋白在治療或預(yù)防與淀粉樣蛋白沉著有關(guān)的疾病中的用途，所述疾病包括全身性淀粉樣變性、局部性淀粉樣變性、阿爾茨海默氏病和II型糖尿病。
文檔編號C07K16/18GK102858371SQ201180017717
公開日2013年1月2日 申請日期2011年3月1日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月3日
發(fā)明者T·K·布欣德, S·K·福特, V·格馬舍夫斯基, A·P·路維斯, M·B·佩皮斯 申請人:葛蘭素集團(tuán)有限公司