專利名稱：微波提取葡萄細(xì)胞中花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物有效成分提取領(lǐng)域，特別是涉及一種微波提取葡萄細(xì)胞中花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷方法。
背景技術(shù)：
幾十年前科學(xué)工作者在葡萄科植物中發(fā)現(xiàn)一種為防止葡萄腐爛而產(chǎn)生的一種植物抗毒素，即白藜蘆醇(Resveratrol，簡(jiǎn)稱Res)及其葡萄糖苷白藜蘆醇苷(Piceid)?，F(xiàn)代藥理研究表明，這類化合物具有抗腫瘤、抗心血管疾病、治療突變、抗氧化、抗菌抗炎、保肝、 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及雌激素調(diào)節(jié)等生物藥理活性，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化妝品等行業(yè)。現(xiàn)在至少在21個(gè)科、31個(gè)屬的72種植物中發(fā)現(xiàn)有白藜蘆醇存在(Jang Μ,Cai L,Udeani G 0， et al. Cancer chemo-preventive activity of resveratrol,a natural product derived from grape [J] . Science, 1997, 275 (10) :218-220.)。但從文獻(xiàn)報(bào)道情況來(lái)看，目前研究最多，最被關(guān)注的只有葡萄、花生等少數(shù)幾種可食用的植物和虎杖等中藥材。有一些白藜蘆醇是從葡萄皮、籽等天然植物資源中提取得到。但天然植物的種植占用大量耕地，容易造成水土流失及生態(tài)環(huán)境惡化；種植過(guò)程中使用的農(nóng)藥、化肥會(huì)在提取物中殘留，直接影響產(chǎn)品的安全性；同時(shí)植物中的白藜蘆醇含量很低，導(dǎo)致提取純化成本偏高；因植物生長(zhǎng)受環(huán)境影響較大，白藜蘆醇的含量不穩(wěn)定，導(dǎo)致提取獲得的產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定。目前天然白藜蘆醇多以中藥材虎杖(根)為原料提取得到，但從虎杖中提取的白藜蘆醇存在大黃素毒性的問(wèn)題， 同時(shí)由于白藜蘆醇誘人的市場(chǎng)前景，世界各地都在爭(zhēng)奪虎杖資源，可以預(yù)見不久的將來(lái)，虎杖資源將面臨萎縮，造成與藥爭(zhēng)源的嚴(yán)重局面。因此，資源問(wèn)題將是制約白藜蘆醇產(chǎn)業(yè)發(fā)展的巨大障礙。花青素(anthocyanin)是葡萄中一種重要的次生代謝產(chǎn)物，為肉眼可見的水溶性色素，結(jié)構(gòu)上屬于總酚中的類黃酮物質(zhì)(參見Kong JM, Chia LS, Goh NK, Chia TF and BrouillardR. Analysis and biological activities of anthocyanins. Phytochem,2003, 64 :923-933.)?；ㄇ嗨靥崛∥镆话銥椴煌ㄇ嗨胤肿拥幕旌衔?，它們具有不同的羥基化、 甲基化禾口酉先基化禾呈度(# JAL Zhangff and Furusaki S. Production of anthocyanins by plant cell cultures. Biotechnol Bioprocess Eng,1999,4:231-252 ；Kong JM, Chia LS, Goh NK, Chia TF and Brouillard R. Analysis and biologicalactivities of anthocyanins.Phytochem,2003,64 :923-933 ；Nyman NA and Kumpulainen JT.Determination of anthocyanins in berries and red wine by High-Performance LiquidChromatography. J Agric Food Chem，2001，49 :4183-4187.)。葡萄細(xì)胞培養(yǎng)物中積累的花青素是矢車菊素(cyanidin)、飛燕草素(delphinidin)、芍藥色素(peonidin)、 牽牛花素(petimidin)、錦葵色素(malvidin)的各種糖苷，主要為矢車菊素_3_葡萄糖苷(cyanidin-3-glucoside)、芍藥色素 _3_ 葡萄糖苷(peonidin-3-glucoside)、錦葵色素-3-葡萄糖苷(malvidin-3-glucoside)以及矢車菊素_3_對(duì)香豆酰葡萄糖苷(cyani din-3-p-coumaroylglucoside)、茍藥色素 _3_ 對(duì)香豆酉先葡萄 Ρ (peonidin-3-p-coumaroylglucoside)禾口 奏色素 _3_ 對(duì)香豆酉先葡萄糖昔(malvidin-3-p-coumaroylglucosi de)(參見Curtin C, Zhang W and Franco C. Manipulating anthocyanincomposition in Vitis vinifera suspension cultures by elicitation with jasmonic acid and lightirradiation. Biotechnol Lett, 2003, 25 :1131-1135.)?；ㄇ嗨鼐哂兄匾纳碜饔?，它賦予了植物花瓣和果實(shí)以顏色，可以吸引動(dòng)物進(jìn)行授粉和種子傳播；花青素又是一種強(qiáng)效的自由基清除劑，其抗自由基氧化能力是維生素C的20倍，是維生素E的50倍，具有提高人體免疫力、預(yù)防各種心腦血管疾病、預(yù)防癌癥、美容護(hù)膚之功效(參見Kong JM, Chia LS, Goh NK, Chia TF andBrouillard R. Analysis and biological activities of anthocyanins. Phytochem, 2003,64 :923-933 ；Springob K, Nakajima J, Yamazaki M and Saito K. Recent advances in the biosynthesis andaccumulation of anthocyanins. Nat Prod Rep, 2003, 20 :288-303 ；Fauconneau B,ffaffo-TeguoP. Huguet F,Barrier L,Decendit A,Merillon JM. Compounds from Vitis vinifera cell cultures using invitro tests. Life Sci, 1997,61 :2103-2110 ；Kamei H, Kojima Τ, Makato H, Koide Τ, Umeda Τ, Yukawa Tand Terabe K.Suppression of tumor cell growth by anthocyanins in vitro. Cancerlnvest,1995,13:590-594 ；Lugasi A.Potential health-protective effects of food-derived flavonoids. OrvHetil,2000,141(32) :1751-1760 ；Martinez-Valverde I， Periago MJ and Ros G. . Nutritional importanceof phenolic compounds in the diet. Arch Latinoam Nutr,2000,50(1) :5-18 ；Karakaya S.Bioavailabilityof phenolic compounds. Crit Rev Food Sci Nutr，2004，44 (6) :453-464)。目前，花青素已被廣泛用作葡萄酒、飲料中的添加劑，并應(yīng)用于化妝品、保健品和醫(yī)藥領(lǐng)域中。植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是上世紀(jì)50年代基于高等植物細(xì)胞全能性及具有合成積累次生代謝產(chǎn)物潛力的理論而發(fā)展起來(lái)的一種生物技術(shù)。迄今為止，全世界已對(duì)近1000種植物進(jìn)行過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)方面的研究，生產(chǎn)的天然產(chǎn)物產(chǎn)品包括藥品、香料、色素、食品、化妝品等 500多種。利用植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)珍惜名貴藥用植物的替代品或其活性成分，是一條可以獲得珍惜名貴中藥材資源的行之有效的重要途徑。通過(guò)植物細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)植物次生代謝產(chǎn)物具有如下突出優(yōu)點(diǎn)不對(duì)自然資源和環(huán)境產(chǎn)生破壞；不會(huì)發(fā)生種植原料的人為污染如農(nóng)藥、重金屬殘留；不受自然環(huán)境的影響如地域、氣候、種植時(shí)間等；不會(huì)由于植物資源的逐漸減少而引起成本波動(dòng)；可以工廠化生產(chǎn)，因而供應(yīng)、產(chǎn)量、質(zhì)量、價(jià)格等都有保障。通過(guò)查閱國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)資料，發(fā)現(xiàn)關(guān)于“白藜蘆醇和白藜蘆醇苷提取”方面的文獻(xiàn)和專利已有報(bào)道。如中國(guó)專利CN1251361與法國(guó)專利FR2795964的提取工藝為在粉末狀虎杖原料中加入復(fù)合酶在恒溫下進(jìn)行酶解反應(yīng)，48-72小時(shí)獲得酶解原料，再用溶劑萃取、 濃縮獲得白藜蘆醇的半成品，放置M-120小時(shí)，并攪拌，然后用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，再經(jīng)進(jìn)一步純化處理，制得白藜蘆醇和白藜蘆醇苷。中國(guó)專利CN1621401A的提取方法是將經(jīng)過(guò)浸泡處理48-72小時(shí)后的虎杖干燥根莖粗粉加入一定量的有機(jī)溶劑回流提取2 次，回收溶劑后，采用不同極性的溶劑進(jìn)行回流操作，回收部分溶劑，離心，沉淀經(jīng)水和吸附劑處理后得到高純度白藜蘆醇結(jié)晶?！短烊划a(chǎn)物研究與開發(fā)》(2007*-12-19)發(fā)表的“虎杖中白藜蘆醇、白藜蘆醇苷及大黃素的綜合提取工藝研究”是將虎杖粗粉以80%乙醇為提取劑，液固比為12 1，在70°C下加熱回流提取2次，每次提取池。總的來(lái)說(shuō)，這類方法工藝操作復(fù)雜，周期長(zhǎng)，產(chǎn)品質(zhì)量較低。
目前國(guó)內(nèi)外多采用傳統(tǒng)的加熱回流提取方法，未見有采用微波法提取葡萄細(xì)胞中白藜蘆醇及白藜蘆醇苷的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種微波提取葡萄細(xì)胞中花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷方法。本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下一種微波提取葡萄細(xì)胞中花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷方法，包括如下步驟按料液質(zhì)量比為1 1-10的比例，向以植物細(xì)胞培養(yǎng)方式得到的葡萄細(xì)胞中加入體積濃度為 0% -50%的乙醇水溶液，使用微波提取設(shè)備，在溫度為30-90°C，功率為100-1000W的條件下攪拌提取0. 5-lOmin，提取1_4次，得到的提取液在45_70°C，在真空度< -65cmHg的條件下減壓濃縮，得提取物浸膏，干燥，得到含有花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的粉末。優(yōu)選的是植物細(xì)胞培養(yǎng)方式為固體培養(yǎng)或懸浮培養(yǎng)。料液質(zhì)量比為1 5。乙醇水溶液的體積濃度為20 %。提取功率為600W。提取溫度為45-75°C。提取時(shí)間為anin。提取次數(shù)為1次。減壓濃縮的溫度為60°C。本發(fā)明的方法克服了傳統(tǒng)方法存在的溶劑提取時(shí)間長(zhǎng)、溶劑消耗量大，溶劑殘留量多，能耗高，成本高，操作過(guò)程復(fù)雜，難以擴(kuò)大化，生產(chǎn)實(shí)用性差，提取率相對(duì)較低，產(chǎn)品質(zhì)量不高等缺點(diǎn)。本發(fā)明的方法加熱均勻，提取時(shí)間縮短，節(jié)能，溶劑消耗量少，提取效率高， 選擇性較好，工藝簡(jiǎn)單，污染小并且設(shè)備簡(jiǎn)單，投資少。


圖1為微波輸出功率對(duì)提取率的影響；圖2為微波處理時(shí)間對(duì)提取率的影響；圖3為乙醇濃度對(duì)提取率的影響；圖4為料液比對(duì)提取率的影響。
具體實(shí)施例方式下面的實(shí)施例可以使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更全面的理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。本發(fā)明所使用的原料可選用任何含花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的葡萄細(xì)胞，也可選用天津艾賽博生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的葡萄細(xì)胞；所用的細(xì)胞株為葡萄細(xì)胞株(Vitisvinifera)，是從幼小的葡萄果實(shí)誘導(dǎo)愈傷組織，將愈傷組織轉(zhuǎn)入液體培養(yǎng)基懸浮培養(yǎng)，經(jīng)過(guò)多年的細(xì)胞株篩選和代謝調(diào)控，獲得一系列可高產(chǎn)花青素、白藜蘆醇苷和白藜蘆醇的細(xì)胞株和培養(yǎng)條件。葡萄細(xì)胞的誘導(dǎo)方法參見Cormier F, Do CB, NicolasY.Anthocyanin production inselected cell lines of grape (Vitis νinifera L )· In-vitro Cell. Dev. Biol. Plant. 1994 ；30 :171_173。葡萄細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的方法參見Zhang W, Curtin C，Kikuchi M，F(xiàn)ranco C. Integration of jasmonicacid and light irradiation for enhancement of anthocyanin biosynthesis in Vitis vinifera suspensioncultures. Plant Sci. 2002 ；162 :459_468。下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，以助于理解而非限制本發(fā)明的內(nèi)容。實(shí)施例1—種微波提取葡萄細(xì)胞中花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷方法，包括如下步驟將固體培養(yǎng)方式得到的新鮮葡萄細(xì)胞進(jìn)行抽濾，按料液質(zhì)量比為1 4的比例，將葡萄細(xì)胞與體積濃度為30%乙醇水溶液混合，使用微波提取設(shè)備，在80°C，微波功率500W 條件下，提取5min，過(guò)濾，重復(fù)提取4次，合并4次提取液在60°C，真空度< -65cmHg條件下， 減壓濃縮成浸膏，干燥，得到含有花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的粉末。實(shí)施例2一種微波提取葡萄細(xì)胞中花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷方法，包括如下步驟將固體培養(yǎng)方式得到的新鮮葡萄細(xì)胞進(jìn)行抽濾，按料液質(zhì)量比為1 7的比例，將葡萄細(xì)胞與水混合，使用微波提取設(shè)備，在90°C，微波功率1000W條件下，提取lOmin，過(guò)濾， 重復(fù)提取2次，合并2次提取液，在60°C，真空度< -65cmHg條件下，減壓濃縮成浸膏，干燥， 得到含有花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的粉末。實(shí)施例3 一種微波提取葡萄細(xì)胞中花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷方法，包括如下步驟將懸浮培養(yǎng)方式得到的新鮮葡萄細(xì)胞進(jìn)行抽濾，按料液質(zhì)量比為1 10的比例， 將葡萄細(xì)胞與體積濃度為40 %的乙醇水溶液混合，使用微波提取設(shè)備，在60°C，微波功率 200W條件下，提取lmin，過(guò)濾，重復(fù)提取3次，合并3次提取液，在60°C，真空度彡-65cmHg 條件下，減壓濃縮成浸膏，干燥，得到含有花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的粉末。實(shí)施例4 一種微波提取葡萄細(xì)胞中花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷方法，包括如下步驟將懸浮培養(yǎng)方式得到的新鮮葡萄細(xì)胞進(jìn)行抽濾，按料液質(zhì)量比1 8的比例，將葡萄細(xì)胞與體積濃度為50%的乙醇水溶液混合，使用微波提取設(shè)備，在50°C，微波功率300W 條件下，提取8min，過(guò)濾，提取液在60°C，真空度< -65cmHg條件下，減壓濃縮成浸膏，干燥， 得到含有花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的粉末。實(shí)施例5 一種微波提取葡萄細(xì)胞中花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷方法，包括如下步驟將懸浮培養(yǎng)方式得到的新鮮葡萄細(xì)胞進(jìn)行抽濾，按料液質(zhì)量比1 5的比例，將葡萄細(xì)胞與體積濃度為20%的乙醇水溶液，使用微波提取設(shè)備，在75°C，微波功率600W條件下，提取2min，過(guò)濾，重復(fù)提取1次，提取液在60°C，真空度< -65cmHg條件下，減壓濃縮成浸膏，干燥，得到含有花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的粉末。實(shí)施例6:一種微波提取葡萄細(xì)胞中花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷方法，包括如下步驟
將懸浮培養(yǎng)方式得到的新鮮葡萄細(xì)胞進(jìn)行抽濾，按料液質(zhì)量比1 5的比例，將葡萄細(xì)胞與體積濃度為10%的乙醇水溶液，使用微波提取設(shè)備，在75°C，微波功率900W條件下，提取2min，過(guò)濾，提取液在60°C，真空度< -65cmHg條件下，減壓濃縮成浸膏，干燥，得到含有花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的粉末。實(shí)施例7 一種微波提取葡萄細(xì)胞中花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷方法，包括如下步驟將懸浮培養(yǎng)方式得到的新鮮葡萄細(xì)胞進(jìn)行抽濾，按料液質(zhì)量比1 2的比例，將葡萄細(xì)胞與體積濃度為40%的乙醇水溶液，使用微波提取設(shè)備，在30°C，微波功率400W條件下，提取0. 5min,過(guò)濾，重復(fù)提取2次，合并2次提取液，在60°C，真空度彡-65cmHg條件下， 減壓濃縮成浸膏，干燥，得到含有花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的粉末。實(shí)施例8 一種微波提取葡萄細(xì)胞中花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷方法，包括如下步驟將懸浮培養(yǎng)方式得到的新鮮葡萄細(xì)胞進(jìn)行抽濾，按料液質(zhì)量比1 5的比例，將葡萄細(xì)胞與體積濃度為20%的乙醇水溶液，使用微波提取設(shè)備，在75°C，微波功率800W條件下，提取6min，過(guò)濾，提取液在70°C，真空度< -65cmHg條件下，減壓濃縮成浸膏，干燥，得到含有花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的粉末。實(shí)施例9 一種微波提取葡萄細(xì)胞中花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷方法，包括如下步驟將懸浮培養(yǎng)方式得到的新鮮葡萄細(xì)胞進(jìn)行抽濾，按料液質(zhì)量比1 6的比例，將葡萄細(xì)胞與體積濃度為50%的乙醇水溶液，使用微波提取設(shè)備，在45°C，微波功率700W條件下，提取3min，過(guò)濾，重復(fù)提取3次，合并3次提取液，在45°C，真空度< -65cmHg條件下，減壓濃縮成浸膏，干燥，得到含有花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的粉末。實(shí)施例10 一種微波提取葡萄細(xì)胞中花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷方法，包括如下步驟將懸浮培養(yǎng)方式得到的新鮮葡萄細(xì)胞進(jìn)行抽濾，按料液質(zhì)量比1 1的比例，將葡萄細(xì)胞與體積濃度為10%的乙醇水溶液，使用微波提取設(shè)備，在60°C，微波功率100W條件下，提取細(xì)in，過(guò)濾，提取液在60°C，真空度< -65cmHg條件下，減壓濃縮成浸膏，干燥，得到含有花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的粉末。試驗(yàn)例1.微波輸出功率對(duì)提取率的影響在選取提取最高溫度為75°C，微波處理時(shí)間為2min，乙醇濃度為20% (乙醇濃度是指乙醇水溶液的體積濃度，下同)，料液質(zhì)量比1 5的條件下，分別考察微波輸出功率 (以下簡(jiǎn)稱功率)為100、200、300、400、600、800、10001對(duì)白藜蘆醇、白藜蘆醇苷和花青素提取率的影響，結(jié)果見圖1-1，圖1-2和圖1-3。從圖1-1，圖1-2和圖1-3，可以看出白藜蘆醇，白藜蘆醇苷提取率均隨著微波功率的增加而增加，在600W是達(dá)到最大值。再增加微波功率，提取率都在最大值附近，花青素的提取率在400W即達(dá)到最大值，再增加微波功率，提取率都在最大值附件，從節(jié)能、安全角度考慮，又兼顧三種活性成分的提取率，故優(yōu)選600W作為微波提取功率。2.微波處理時(shí)間對(duì)提取率的影響
選取微波輸出功率600W，提取最高溫度為75°C，乙醇濃度為20%，料液質(zhì)量比 1 5的條件下，分別考察微波提取時(shí)間為l、2、3、5、6、8、10min對(duì)白藜蘆醇、白藜蘆醇苷和花青素提取率的影響，結(jié)果見圖2-1，圖2-2和圖2-3。微波處理時(shí)間對(duì)白藜蘆醇、白藜蘆醇和花青素的提取密切相關(guān)。處理時(shí)間短，提取不充分；時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，由于三種活性成分是熱不穩(wěn)定性物質(zhì)，會(huì)導(dǎo)致活性成分分解而使提取率下降。如圖2-1，圖2-2和圖2-3所示，隨著萃取時(shí)間的延長(zhǎng)，白藜蘆醇、白藜蘆醇苷和花青素的提取率增加，當(dāng)達(dá)到anin時(shí)，提取率達(dá)到最大值，直到5min提取率都在最大值附近，時(shí)間再延長(zhǎng)，提取率下降，從節(jié)能角度考慮選擇aiiin作為微波最佳提取時(shí)間。3.乙醇濃度對(duì)提取率的影響選取微波輸出功率600W，萃取最高溫度為75°C，料液質(zhì)量比1 5的條件下，微波處理2min、分別考察水、體積濃度為10%乙醇水溶液、20%乙醇水溶液、30%乙醇水溶液、 40%乙醇水溶液、50%乙醇水溶液對(duì)白藜蘆醇、白藜蘆醇苷和花青素提取率的影響，結(jié)果見圖3-1，圖3-2和圖3-3。不同的乙醇濃度具有不同的極性，根據(jù)相似相溶原理可知，不同極性的溶液勢(shì)必會(huì)影響到三種活性成分的提取效果，同時(shí)極性不同的溶液會(huì)影響微波加熱過(guò)程。從圖3-1、 圖3-2和圖3-3可以看出，隨乙醇濃度增加，提取率逐漸增大，乙醇濃度在20-50%時(shí)，提取率都在96%以上，之后隨著濃度的增加提取率下降，本著節(jié)約溶劑的考慮，故優(yōu)選乙醇水溶液濃度為20%。4.料液質(zhì)量比對(duì)提取率的影響選取微波輸出功率600W，萃取最高溫度為75°C，20%乙醇，微波處理aiiin，分別考察料液質(zhì)量比1 1、1 2、1 5、1 8、1 10對(duì)白藜蘆醇、白藜蘆醇苷和花青素提取率的影響，結(jié)果見圖4-1，圖4-2和圖4-3。由圖4-1，圖4-2和圖4-3可知，隨著料液比的增加，白藜蘆醇、白藜蘆醇苷和花青素提取率隨之增加，料液質(zhì)量比達(dá)到1 5時(shí)提取率最大，之后隨著料液質(zhì)量比的增加，提取率變化不大，考慮節(jié)約成本，確定料液質(zhì)量比為1 5是最好的。5.最佳方案選擇根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，綜合考慮各種因素，本著節(jié)能、安全、高效的原則，確定最佳的工藝條件為乙醇水溶液體積濃度為20%，輸出功率為600W，微波處理時(shí)間為2min，提取溫度為75°C，料液質(zhì)量比為1 5。優(yōu)化工藝驗(yàn)證(以白藜蘆醇和花青素為例)準(zhǔn)確稱取抽濾的新鮮細(xì)胞10. OOg,加入20%乙醇50ml，設(shè)定微波輸出功率為 600W,提取最高溫度為75。C，攪拌提取2min，過(guò)濾，定容，稀釋，HPLC測(cè)定，白藜蘆醇提取率大于98%，紫外可見分光光度法測(cè)定提取物中花青素的色度值達(dá)到40多CV/g。準(zhǔn)確稱取抽濾的新鮮細(xì)胞10. 00g，加入20%乙醇50ml，加熱回流提取lh，過(guò)濾，定容，稀釋，HPLC測(cè)定，白藜蘆醇提取率為96. 37%，紫外可見分光光度法測(cè)定提取物中花青素的色度值達(dá)到30多CV/g?？梢娢⒉ㄌ崛iiin與有機(jī)溶劑加熱回流提取Ih的提取效果相當(dāng)，微波提取法可大大縮短提取時(shí)間，提高提取效率。濃縮時(shí)溫度對(duì)花青素、白藜蘆醇及白藜蘆醇苷的穩(wěn)定性有很大影響，經(jīng)試驗(yàn)，本發(fā)明確定濃縮溫度為45°C -60°C，真空度彡-65cmHg。
權(quán)利要求
1.微波提取葡萄細(xì)胞中花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷方法，其特征是包括如下步驟 按料液質(zhì)量比為1 1-10的比例，向以植物細(xì)胞培養(yǎng)方式得到的葡萄細(xì)胞中加入體積濃度為0% -50%的乙醇水溶液，使用微波提取設(shè)備，在溫度為30-90°C，功率為100-1000W的條件下攪拌提取0. 5-lOmin，提取1_4次，得到的提取液在45_70°C，在真空度< -65cmHg的條件下減壓濃縮，得提取物浸膏，干燥，得到含有花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的粉末。
2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的方法，其特征在于所述植物細(xì)胞培養(yǎng)方式為固體培養(yǎng)或懸浮培養(yǎng)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述料液質(zhì)量比為1 5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述乙醇水溶液的體積濃度為20%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述提取功率為600W。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是提取溫度為45-75°C。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是提取時(shí)間為aiiin。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是提取次數(shù)為1次。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是減壓濃縮的溫度為60°C。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種微波提取葡萄細(xì)胞中花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷方法，包括如下步驟向以植物細(xì)胞培養(yǎng)方式得到的葡萄細(xì)胞中加入乙醇水溶液，使用微波提取設(shè)備，在溫度為30-90℃，功率為100-1000W的條件下攪拌提取，得到的提取液減壓濃縮，得提取物浸膏，干燥，得到含有花青素、白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的粉末。本發(fā)明的方法克服了傳統(tǒng)方法存在的溶劑提取時(shí)間長(zhǎng)、溶劑消耗量大，溶劑殘留量多，能耗高，成本高，操作過(guò)程復(fù)雜，難以擴(kuò)大化，生產(chǎn)實(shí)用性差，提取率相對(duì)較低，產(chǎn)品質(zhì)量不高等缺點(diǎn)。本發(fā)明的方法加熱均勻，提取時(shí)間縮短，節(jié)能，溶劑消耗量少，提取效率高，選擇性較好，工藝簡(jiǎn)單，污染小并且設(shè)備簡(jiǎn)單，投資少。
文檔編號(hào)C07H15/203GK102351830SQ20111023489
公開日2012年2月15日 申請(qǐng)日期2011年8月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月16日
發(fā)明者呂昕澤, 吳秀禎, 張衛(wèi), 石萬(wàn)利, 胡雪艷, 龔衛(wèi)東 申請(qǐng)人:天津艾賽博生物技術(shù)有限公司