專利名稱：多發(fā)性硬化的治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般涉及用于治療和/或預(yù)防多發(fā)性硬化(MQ的方法。根據(jù)本發(fā)明， GM-CSF的拮抗物在多發(fā)性硬化的治療中可以是有效的。GM-CSF的拮抗物包括，但不限于， 對(duì)GM-CSF或GM-CSF受體特異性的抗體。
背景技術(shù)：
多發(fā)性硬化(MS)，也稱作播散性硬化或播散性腦脊髓炎，是其中免疫系統(tǒng)攻擊中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNQ的自身免疫病。實(shí)質(zhì)上，MS通過損壞髓磷脂而影響腦和脊髓中神經(jīng)細(xì)胞互相聯(lián)系的能力。當(dāng)失去髓磷脂后，軸突不再有效地傳導(dǎo)信號(hào)。已描述了 MS的4個(gè)主要亞型(Neurology (1996)46 ；901-911 ；還參見

圖1)。復(fù)發(fā)緩解型亞型的特征是不可預(yù)測(cè)的復(fù)發(fā)，隨后幾月到幾年無疾病活動(dòng)性的新體征的相對(duì)靜息 (緩解)時(shí)期。繼發(fā)性進(jìn)行性MS描述了具有初始復(fù)發(fā)緩解型MS的那些人，且其然后開始在急性發(fā)作之間具有進(jìn)行性神經(jīng)衰退，而不具有任何確定的緩解時(shí)期。原發(fā)性進(jìn)行性亞型描述了在其起始MS癥狀之后從沒有緩解的患者，特征為從發(fā)病開始的傷殘(disability)的進(jìn)展，無緩解和改善或僅有偶發(fā)的和輕微的緩解和改善。最后，進(jìn)行性復(fù)發(fā)型MS描述了從發(fā)病起具有持續(xù)的神經(jīng)退化但還遭受明顯的重疊發(fā)作的那些個(gè)體。還存在MS的多種非典型病例。MS的癥狀是多方面的且通常在惡化(復(fù)發(fā))的間歇性急性期、在神經(jīng)功能逐步進(jìn)行性退化中出現(xiàn)，或在二者的組合中出現(xiàn)。常見的為感覺中樞癥狀、視覺癥狀、小腦癥狀和運(yùn)動(dòng)癥狀。MS患者可遭受幾乎任何神經(jīng)癥狀或體征，包括感覺的改變(感覺遲鈍和感覺異常)、肌無力、肌痙攣、運(yùn)動(dòng)困難；協(xié)調(diào)和平衡困難；語言或吞咽問題；視覺問題；疲勞、急性或慢性疼痛、和膀胱和腸困難。不同程度的認(rèn)知損害和抑郁的情感癥狀或不安情緒也是常見的。MS通常在30多歲的成人中出現(xiàn)，但其也可出現(xiàn)在兒童中，且原發(fā)性進(jìn)行性亞型在 50多歲的人中更常見。如許多自身免疫疾患一樣，該疾病在女性中更常見，且趨勢(shì)可能在漸
+曰O在MS中，免疫系統(tǒng)攻擊神經(jīng)系統(tǒng)，可能地是暴露于與其自身具有相似結(jié)構(gòu)的分子的結(jié)果。MS損害最常涉及靠近小腦室、腦干、基底神經(jīng)節(jié)和脊髓的白質(zhì)區(qū)域；和視神經(jīng)。白質(zhì)細(xì)胞的功能是在處理信號(hào)的灰質(zhì)區(qū)域和機(jī)體的其它部分之間傳送信號(hào)。MS破壞少突膠質(zhì)細(xì)胞，該細(xì)胞負(fù)責(zé)構(gòu)建和維持脂肪層——稱作髓鞘——其協(xié)助神經(jīng)元傳送電信號(hào)。MS導(dǎo)致髓磷脂變薄或完全缺失，且隨疾病進(jìn)展導(dǎo)致神經(jīng)元延伸或軸突的截?cái)?橫斷)。修復(fù)的過程稱作髓鞘再生，發(fā)生在疾病的早期階段，但少突膠質(zhì)細(xì)胞不能完全重建細(xì)胞的髓鞘。重復(fù)發(fā)作導(dǎo)致連續(xù)較少的有效的髓鞘再生，直至在受損的軸突周圍形成疤痕樣斑。
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除脫髓鞘之外，疾病的另一個(gè)病理標(biāo)志是炎癥。T細(xì)胞將髓磷脂識(shí)別為外源的且將其視作侵入病毒來攻擊。這觸發(fā)了炎癥過程，刺激了其它免疫細(xì)胞和可溶性因子如細(xì)胞因子和抗體。存在用于多發(fā)性硬化的一些療法，但已知沒有治愈的。不同的療法用于急性發(fā)作的控制，以緩和疾病并控制MS的作用。對(duì)于急性癥狀的發(fā)作的控制，常規(guī)療法是靜脈施用或口服施用皮質(zhì)類固醇。該治療在短期緩解癥狀中是有效的，但對(duì)患者的長(zhǎng)期恢復(fù)沒有顯著作用。根據(jù)MS的確切性質(zhì)和亞型不同，使用了用于疾病緩解治療的大量療法。用于復(fù)發(fā)-緩解型MS的治療包括干擾素(干擾素β -Ia和干擾素β -lb)、醋酸格拉默(Copaxone ； 通過將其自身替換為免疫系統(tǒng)攻擊的靶標(biāo)而保護(hù)髓磷脂蛋白的多肽的混合物)、米托蒽醌 (免疫抑制劑，也用于癌癥化療)和那他珠單抗(Tysabri ；人源化的單克隆抗體，細(xì)胞粘附分子α 4-整聯(lián)蛋白)。用于繼發(fā)性進(jìn)行性MS和進(jìn)行性復(fù)發(fā)型MS的治療包括米托蒽醌、那他珠單抗和干擾素-P-lMbetaferon)。另外，還使用了主要探索性治療。MS與導(dǎo)致一系列進(jìn)行性損害和障礙的多種癥狀和功能性缺陷相關(guān)聯(lián)。為控制MS的影響，大量療法是已知的，并按照具體病例可能所需來使用。已知一些細(xì)胞因子參與多發(fā)性硬化，所述細(xì)胞因子包括粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(Ponomarev 等人；J Immunol (2007) 178 ；39-48 ；McQualter 等人；J Exp Med. (2001) 194 ；873-82)。粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)是作為白細(xì)胞生長(zhǎng)因子發(fā)揮作用的細(xì)胞因子。GM-CSF刺激干細(xì)胞產(chǎn)生粒細(xì)胞(嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞)和單核細(xì)胞。單核細(xì)胞退出循環(huán)并遷移到組織中，由此它們成熟為巨噬細(xì)胞。因此，其為天然免疫/炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)的一部分，由此小量巨噬細(xì)胞的激活可快速導(dǎo)致其數(shù)量的增加，這是抗感染的關(guān)鍵過程。在胞外發(fā)現(xiàn)GM-CSF的活性形式為可溶性單體。具體地， GM-CSF已被鑒定為如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的自身免疫疾患中的炎癥介導(dǎo)者，導(dǎo)致增加的促炎細(xì)胞因子、趨化因子和蛋白酶產(chǎn)生，且從而最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)破壞。發(fā)明概述本發(fā)明證明，拮抗GM-CSF的作用是治療MS的有效方法。具體地，抗GM-CSF或其受體的抗體是MS治療中有效的干預(yù)點(diǎn)。因此，本發(fā)明提供了，例如，用于在受治療者中治療多發(fā)性硬化的方法，所述方法包括向所述受治療者施用有效量的GM-CSF拮抗物的步驟。在另一方面，本發(fā)明考慮了用于在受治療者中預(yù)防多發(fā)性硬化的方法，所述方法包括向所述受治療者施用有效量的GM-CSF拮抗物的步驟。在另一方面，本發(fā)明涉及一種組合物，所述組合物包括能夠拮抗GM-CSF在多發(fā)性硬化中的病生理作用的GM-CSF拮抗物，所述組合物還包括一種或多種藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑。在另一方面，本發(fā)明涉及一種組合物，所述組合物包括在多發(fā)性硬化的治療中有用的GM-CSF拮抗物，所述組合物還包括一種或多種藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑。在本發(fā)明的特定的方面，GM-CSF拮抗物是對(duì)GM-CSF特異性的抗體。在本發(fā)明的可選的方面，GM-CSF拮抗物是對(duì)GM-CSF受體特異性的抗體。在其它方面，本發(fā)明涉及GM-CSF拮抗物用于制備治療多發(fā)性硬化的藥物的用途。在其它方面，本發(fā)明提供了用于治療多發(fā)性硬化的GM-CSF拮抗物。在整個(gè)說明書中，除非上下文另外要求，否則詞語“包含(comprise)”、“具有(have)“和“包括(include)”和其相應(yīng)的變化形式諸如“包含(comprises) ”、“包含 (comprising) ”、“具有(has) ”、“具有(having) ”、“包括(includes) ”和“包括(including)，， 將理解為表示含有所指的元素或整數(shù)、或元素或整數(shù)的組，但不排除任何其它元素或整數(shù)、 或元素或整數(shù)的組。附圖簡(jiǎn)述^！描繪了 MS的4個(gè)主要亞型的進(jìn)行性類型。Sl顯示了 GM-CSF拮抗物在MOG誘導(dǎo)的MS的EAE模型中的效力(預(yù)防性治療)。 顯示了 0-15天的累積EAE評(píng)分。A 用媒介物(PBS)處理的動(dòng)物；B 用10mg/kg MOR-GM處理的動(dòng)物；C 用20mg/kgM0R-GM處理的動(dòng)物；D 用50mg/kg MOR-GM處理的動(dòng)物；E 用0. 5mg/ kg地塞米松處理的動(dòng)物；F 用50mg/kg MOR-NOGM (同種型對(duì)照抗體)處理的動(dòng)物；G 在第 14天第一次處理的用50mg/kg MOR-GM處理的動(dòng)物(治療性治療)。* 與同種型對(duì)照抗體相比P < 0. 05。$ 與PBS處理相比P < 0. 05。Ml顯示了用MOR-GM處理后疾病發(fā)病的延遲。A 用媒介物(PBS)處理的動(dòng)物；B 用 10mg/kg MOR-GM 處理的動(dòng)物；C 用 20mg/kgM0R_GM 處理的動(dòng)物；D 用 50mg/kg MOR-GM 處理的動(dòng)物；E 用0. 5mg/kg地塞米松處理的動(dòng)物；F 用50mg/kg MOR-NOGM(同種型對(duì)照抗體)處理的動(dòng)物；G 在第14天第一次治療的用50mg/kg MOR-GM處理的動(dòng)物(治療性治療)。* 與同種型對(duì)照抗體相比P < 0. 05。$ 與PBS處理相比P < 0. 10。Mi顯示了用本發(fā)明的化合物處理之后在脊髓的骶骨部分中炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)。A 用50mg/kg MOR-NOGM處理的動(dòng)物(同種型對(duì)照抗體；預(yù)防性處理)；B 用50mg/kg MOR-GM 處理的動(dòng)物(預(yù)防性處理)；C 用50mg/kg MOR-GM處理的動(dòng)物(治療性處理)；D 用0. 5mg/ kg地塞米松處理的動(dòng)物(預(yù)防性處理)。每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)指示一個(gè)個(gè)體動(dòng)物的評(píng)分。與同種型對(duì)照抗體相比P < 0. 10。* 與同種型對(duì)照抗體相比P < 0. 05。M5顯示了脊髓的骶骨部分中脫髓鞘的程度。A 用50mg/kgM0R-N0GM處理的動(dòng)物 (同種型對(duì)照抗體；預(yù)防性處理)；B 用50mg/kgM0R-GM處理的動(dòng)物(預(yù)防性處理)；C 用 50mg/kg MOR-GM處理的動(dòng)物(治療性處理)；D 用0. 5mg/kg地塞米松處理的動(dòng)物(預(yù)防性處理)。每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)指示一個(gè)個(gè)體動(dòng)物的評(píng)分。* :與同種型對(duì)照抗體相比P <0.05。發(fā)明詳述本發(fā)明證明了 GM-CSF是用于MS治療的有效靶標(biāo)。在這方面，本發(fā)明在一方面提供了利用GM-CSF拮抗物在MS領(lǐng)域帶來預(yù)防性或治療性利益的方法。本發(fā)明提供了治療性方法，所述方法包括向需要這種治療的受治療者施用治療有效量的GM-CSF拮抗物。如本文所用的，“治療有效量”或“有效量”指引發(fā)期望的生物響應(yīng)必需的GM-CSF拮抗物的量。根據(jù)本發(fā)明，治療有效量是治療和/或預(yù)防多發(fā)性硬化必需的 GM-CSF拮抗物的量。如本文所用的，“GM-CSF拮抗物”包括最寬泛含義的GM-CSF拮抗物；抑制GM-CSF的活性或功能、或通過任何其它途徑對(duì)GM-CSF施加治療性作用的任何分子。術(shù)語GM-CSF拮抗物包括，但不限于，特異性結(jié)合GM-CSF的抗體、對(duì)GM-CSF特異性的抑制性核酸或?qū)M-CSF 特異性的有機(jī)小分子。術(shù)語GM-CSF拮抗物的含義還包括與GM-CSF受體特異性結(jié)合的抗體、 對(duì)GM-CSF受體特異性的抑制性核酸或?qū)M-CSF受體特異性的有機(jī)小分子。術(shù)語GM-CSF 拮抗物還指非抗體支架分子，比如纖連蛋白支架、錨蛋白、maxybody/avimer、蛋白A衍生的分子、蛋白表位模擬物(PEM)或類似物。抑制性核酸包括但不限于，反義DNA、三鏈體形成寡核苷酸、外部指導(dǎo)序列、SiRNA 和微小RNA。有用的抑制性核酸包括與對(duì)照相比，減少編碼GM-CSF的RNA表達(dá)至少20%、 30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或95%的那些抑制性核酸。抑制性核酸和產(chǎn)生它們的方法是本領(lǐng)域中熟知的。siRNA設(shè)計(jì)軟件是可獲得的。對(duì)GM-CSF或GM-CSF受體特異性的有機(jī)小分子(SMOL)可經(jīng)由天然產(chǎn)物篩查或化學(xué)文庫的篩查來鑒定。通常SMOL的分子量低于500道爾頓，更通常從160到480道爾頓。 SMOL的其它典型性質(zhì)是以下一種或多種·分配系數(shù)log P在從-0. 4至+5. 6的范圍中·摩爾折射率從40至130·原子的數(shù)目從20至70綜述參見Ghose 等人(1999) J Combin Chem 1，55-68 和 Lipinski 等人(1997) Adv Drug Del Rev :23，3-25。優(yōu)選地，用于本發(fā)明的GM-CSF拮抗物是對(duì)GM-CSF特異性或?qū)M-CSF受體特異性的抗體。此類抗體可以是任何類型，比如鼠抗體、大鼠抗體、嵌合抗體、人源化抗體或人類抗體。因此，“人類”抗體或功能性的人類抗體片段定義為非嵌合的(例如，非“人源化的”) 和非(全部地或部分地)來自非人物種的抗體。人類抗體或功能性抗體片段可來源于人類或可以是合成的人類抗體?！昂铣傻娜祟惪贵w”在本文定義為具有整個(gè)或部分地計(jì)算機(jī)模擬地來源于基于已知人類抗體序列的分析的合成序列的序列的抗體。人類抗體序列或其片段的計(jì)算機(jī)模擬設(shè)計(jì)可例如通過分析人類抗體或抗體片段序列數(shù)據(jù)庫并利用從其獲得的數(shù)據(jù)設(shè)計(jì)多肽序列來實(shí)現(xiàn)。人類抗體或功能性抗體片段的另一實(shí)例是由從人類來源抗體序列文庫(即，這種文庫是基于從人類天然來源獲取的抗體)分離的核酸編碼的抗體或功能性抗體片段。“人源化抗體”或功能性人源化抗體片段在本文定義為(i)來源于非人類來源 (例如，帶有異源免疫系統(tǒng)的轉(zhuǎn)基因小鼠)，該抗體是基于人類種系序列；或(ii)嵌合的，其中可變結(jié)構(gòu)域來源于非人類來源，恒定結(jié)構(gòu)域來源于人類來源；或(iii) CDR-嫁接的，其中可變結(jié)構(gòu)域的CDR來自非人類來源，而可變結(jié)構(gòu)域的一個(gè)或多個(gè)構(gòu)架為人類來源，恒定結(jié)構(gòu)域(如果存在)為人類來源。術(shù)語“嵌合抗體”或功能性嵌合抗體片段在本文定義為具有來源于或?qū)?yīng)于見于一種物種的序列的恒定抗體區(qū)和來源于另一物種的可變抗體區(qū)的抗體分子。優(yōu)選地，恒定抗體區(qū)來源于或?qū)?yīng)于見于人類如，見于人類種系或體細(xì)胞的序列，可變抗體區(qū)(如，VH、 VL、CDR或FR區(qū))來源于見于非人類動(dòng)物如，小鼠、大鼠、兔或倉鼠的序列。如本文所用的，如果抗體能夠區(qū)分一種抗原(在本文是GM-CSF，或可選地GM-CSF 受體)與一種或多種參考抗原，則認(rèn)為這樣的抗體“特異性結(jié)合”、“特異性結(jié)合”、“對(duì)...特異性”或“特異性識(shí)別”這樣的抗原，因?yàn)榻Y(jié)合特異性不是絕對(duì)的，而是相對(duì)的性質(zhì)。參考抗原可以是用作參考點(diǎn)的一種或多種緊密相關(guān)的抗原，如，IL3、IL5、IL-4、IL13或M-CSF。 以其最通用形式(且當(dāng)未提及具體參考時(shí))，“特異性結(jié)合”是指抗體區(qū)分目標(biāo)抗原與無關(guān)抗原的能力，如例如根據(jù)以下方法之一確定的。所述方法包括但不限于，蛋白質(zhì)印跡、 ELISA-檢驗(yàn)、RIA-檢驗(yàn)、ECL-檢驗(yàn)、IRMA-檢驗(yàn)和肽掃描。例如，可進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)ELISA測(cè)定。
6評(píng)分可通過標(biāo)準(zhǔn)顯色進(jìn)行(如，第二抗體以辣根過氧化物，四甲基聯(lián)苯胺以過氧化氫進(jìn)行顯色)。某些孔中的反應(yīng)通過光密度，例如在450nm的光密度評(píng)分。典型的背景(=陰性反應(yīng))可以是0. IOD ；典型的陽性反應(yīng)可以是10D。這表示陽性/陰性的差異可以大于10 倍。通常，結(jié)合特異性的確定不是通過利用單個(gè)參考抗原，而是利用一組約三種到五種無關(guān)抗原進(jìn)行，諸如奶粉、BSA、鐵傳遞蛋白或類似無關(guān)抗原。另外，“特異性結(jié)合”可能涉及抗體區(qū)分其靶抗原不同部分的能力，如，區(qū)分GM-CSF或GM-CSF受體的不同結(jié)構(gòu)域或區(qū)域、或區(qū)分GM-CSF或GM-CSF受體的一個(gè)或多個(gè)關(guān)鍵氨基酸殘基或氨基酸殘基段。而且，本文所用的“免疫球蛋白”(Ig)在此定義為屬于類IgG、IgM、IgE、IgA或 IgD(或其任何亞類)的蛋白，包括所有常規(guī)已知的抗體和其功能性片段。因此，抗體/免疫球蛋白的“功能性片段”定義為保留抗原結(jié)合區(qū)的抗體/免疫球蛋白的片段(如，IgG可變區(qū))。抗體的“抗原結(jié)合區(qū)”通常見于抗體的一個(gè)或多個(gè)高變區(qū)，即，CDR-l、-2、和/或-3 區(qū)；然而，可變“構(gòu)架”區(qū)也可在抗原結(jié)合中起重要作用，諸如通過提供CDR的支架。優(yōu)選地，“抗原結(jié)合區(qū)”至少包含可變輕(VL)鏈的氨基酸殘基4至103和可變重(VH)鏈的氨基酸殘基5至109，更優(yōu)選地包含VL的氨基酸殘基3至107和VH的氨基酸殘基4至111，尤其優(yōu)選地是完整VL鏈和VH鏈(VL的氨基酸位置1至109和VH的氨基酸位置1至113 ；按照TO 97/08320編號(hào))。用于本發(fā)明的優(yōu)選免疫球蛋白類是IgG。本發(fā)明的“功能性片段” 包括F(ab' )2片段、Fab片段、scFv或包含單免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域或單結(jié)構(gòu)域抗體多肽的構(gòu)建體的結(jié)構(gòu)域，如，單重鏈可變結(jié)構(gòu)域或單輕鏈可變結(jié)構(gòu)域?？筛脑霧(ab' )2或？油以使在Chi結(jié)構(gòu)域和Q結(jié)構(gòu)域之間發(fā)生的分子間二硫化物相互作用最小或完全去除。本發(fā)明的抗體可來源于基于計(jì)算機(jī)模擬設(shè)計(jì)并由合成產(chǎn)生的核酸編碼的氨基酸序列的重組抗體文庫?？贵w序列的計(jì)算機(jī)模擬設(shè)計(jì)例如，通過分析人類序列數(shù)據(jù)庫并利用從其獲得的數(shù)據(jù)設(shè)計(jì)多肽序列來實(shí)現(xiàn)。用于設(shè)計(jì)和獲得計(jì)算機(jī)模擬產(chǎn)生的序列的方法描述于，例如，Knappik 等人，J. Mol. Biol. (2000)296 :57 ；Krebs 等人，J. Immunol. Methods. (2001)254 67, Rothe 等人，J. Mol. Biol. (2008) 376 :1182 ；和授予 Knappik 等人的美國專利第6，300, 064號(hào)中，其全部?jī)?nèi)容在此通過引用并入。對(duì)GM-CSF特異性的任何抗體可用在本發(fā)明。示例抗體包括含如SEQ ID N0:1中所描繪的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列或如SEQ ID NO :2中所描繪的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列的抗體。其它示例抗體包括來源于包含如SEQ ID NO :1中所描繪的重鏈可變區(qū)或如SEQ ID NO :2中所描繪的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列的抗體的抗體。又一些其它示例性抗體包括與包括如SEQ ID NO :1中所描繪的重鏈可變區(qū)或如SEQ ID NO :2中所描繪的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列的抗體具有相同特異性和/或結(jié)合相同表位的抗體。又一些其它示例性抗體包括含與如SEQ ID NO :1中所描繪的序列至少70%、至少80%、至少90%或至少95%同源的重鏈可變區(qū)的抗體。又一些其它示例性抗體包括含與如SEQ ID NO :2中所描繪的序列至少 70%、至少80%、至少90%或至少95%同源的輕鏈可變區(qū)的抗體。SEQ ID No. 1 Met Glu Leu lie Met Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly Val HisSer Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro GlyAla Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr AspTyr Asn lie His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Asp Trp
lieGlyTyrlieAlaProTyrSerGlyGlyThrGly Tyr Asn Gln Glu
PheLysAsnArgAlaThrLeuThrValAspLysSer Ser Ser ThrAla
TyrMetGluLeuArgSerLeuThrSerAspAspSerAlaValTyrTyr
CysAlaArgArgAspArgPheProTyrTyrPheAspTyrTrpGlyGln
ThrThrLeuArgValSerSerValSerGlySer
SEQID No.2
MetGlyPheLysMetGluSerGlnlieGlnValPheValTyrMetLeu
LeuTrpLeuSerGlyValAspGlyAsplieValMetlieGlnSerGln
LysPheValSerThrSerValGlyAspArgValAsnlieThrCysLys
AlaSerGlnAsnValGlySerAsnValAlaTrpLeuGlnGlnLysPro
GlyGlnSerProLysThrLeulieTyrSerAlaSerTyrArgSerGly
ArgValProAspArgPheThrGlySerGlySerGlyThrAsPPhelie
LeuThrlieThrThrValGlnSerGluAspLeuAlaGluTyrPheCys
GlnGlnPheAsnArgSerProLeuThrPheGlySerGlyThrLysLeu
GluLeuLysArgAlaAspAlaAlaProThrValSerliePheProPro
SerSerLysGlyGluPhe
可用于本發(fā)明的可選的示例性抗體是包括如SEQ ID No.3中所描繪的重
區(qū)的氨基酸序列或如SEQ ID No. :4中所描繪的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列的抗體。其它示例性抗體包括來源于包括如SEQ ID No. :3中所描繪的重鏈可變區(qū)或如SEQ ID No. :4中所描繪的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列的抗體的抗體。又一些其它示例性抗體包括與包括如SEQ ID No. :3中所描繪的重鏈可變區(qū)或如SEQ ID No. :4中所描繪的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列的抗體具有相同特異性和/或結(jié)合相同的表位的抗體。又一些其它示例性抗體包括含與 SEQ ID No. :3中所描繪的序列至少70%、至少80%、至少90%或至少95%同源的重鏈可變區(qū)的抗體。又一些其它示例性抗體包括含與SEQ ID No. :4中所描繪的序列至少70%、 至少80%、至少90%或至少95%同源的輕鏈可變區(qū)的抗體。SEQ ID NO. 3 QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMNWVRQAPGKGLEWVSGIENKYAGGATYYAASVKGR FTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGFGTDFffGQGTLVTVSSSEQ IDNo. 4DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDSIGKKYAYWYQQKPGQAPVLVIYKKRPSGIPERFSGSNSGNTAT LTISGTQAEDEADYYCSAffGDKGMVFGGGTKLTVLGQ可用于本發(fā)明的可選的示例性抗體是包括選自以下的H-CDR3序列的抗體Ser Gly Leu lie Phe Asp Tyr Trp Leu Asp1510(SEQ ID NO. 5)，Ser Gly Leu lie lie Asp Ala Leu Ser Pro1510(SEQ ID NO. 6)，Thr Ser Leu Met Ser lie Tyr Phe Asp Tyr
1510(SEQ ID NO. 7)，Ser Gly Leu Leu Phe Leu Tyr Phe Asp Tyr1510(SEQ ID NO. 8)，Ser Gly Leu lie Asn Leu Gly Met His Pro1510(SEQ ID NO. 9)，Ser Gly Leu lie Phe Asp Ala Leu Arg Asp1510(SEQ ID NO. 10)，Ser Gly Leu lie Phe Asp Lys Leu Thr Ser1510(SEQ ID NO. 11)，Ser Gly Leu lie Asn Leu His Phe Asp Thr1510(SEQ ID NO. 12)，Ser Thr His Phe Ser Ala Tyr Phe Asp Tyr1510(SEQ ID NO. 13)，Ser Gly Leu lie Met Asp Lys Leu Asp Asn1510(SEQ ID NO. 14)，Ser Gly Leu lie lie Asp Asn Leu Asn Pro1510(SEQ ID NO. 15)，禾ロSer Gly Leu lie Ala Val Tyr phe Asp Tyr1510(SEQ ID NO. 16).優(yōu)選地，包括選自SEQ ID NO. 5-16中任ー個(gè)的H-⑶R3序列的抗體另外包括以下 的H-CDRl序列Asp Tyr Leu Leu His15(SEQ ID NO. 16),和/或以下的H-CDR2序列Trp Leu Asn Pro Tyr Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gin151015GlyArg Asn lie Leu Asn 10
(SEQ ID NO. 19)，
0118](SEQ ID NO. 17)，
0119]和/或以下的L-⑶Rl序列
0120]Arg Ala Ser Gln Asn Ile
0121]15
0122](SEQ ID NO. 18)，
0123]和/或以下的L-⑶R2序列
0124]Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser
0125]15
0126]
0127]和/或以下的L-⑶R3序列
0128]Gln Gln Ser Tyr Ser Met Pro Ars Thr
0129]15
0130](SEQ ID NO. 20).
0131]可用于本發(fā)明的可選的示例性抗體是包括以下的L-CDRl序列的抗體
0132]Arg Ala Ser His Arg Val Ser Ser Asn Tyr Leu Ala
0133]1510(SEQ
0134]ID Ν0· 21)，
0135]和/或以下的L-⑶R2序列
0136]Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr
0137]15
0138]和/或以下的L-CDR3序列
0139]Gln Gln Tyr Ala Ser Ser Pro
0140]15
0141]和/或以下的H-⑶Rl序列
0142]Gly Tyr lie Phe Pro Thr Phe Ala
0143]15
0144](SEQ ID NO. 24),
0145]和/或以下的H-⑶R2序列
0146]Ser lie Asn Thr Ala Ser Gly Lys
0147]15
0148](SEQ ID N0. 25)，
0149]和/或以下的H-⑶R3序列
0150]Asp Arg Phe Gln Asn lie Met Ala
0151]15
0152](SEQ ID NO. 26).
0153]優(yōu)選地所述抗體包括SEQ ID NO. 21-26的所有CRD。
0154]GM-CSF受體是促紅細(xì)胞生成素(haematopoietin)受體超家族的成員。它是異二聚體的，由α亞基和β亞基組成。α亞基對(duì)GM-CSF是高度特異性的，而β亞基是與其它細(xì)胞因子受體包括IL3和IL5共有的。這反映在β受體亞基的組織分布較廣泛。α亞
(SEQ ID Ν0. 22)，
Val Thr
(SEQ ID N0. 23)，
Leu His 10
Thr Lys Phe Ser Thr Lys Phe Gln 1015
Thr lie Leu Asp Val 10基，GM-CSFR α，主要表達(dá)于骨髓細(xì)胞和非促紅細(xì)胞生成素細(xì)胞，比如嗜中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜曙紅粒細(xì)胞、樹突細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和呼吸道上皮細(xì)胞。全長(zhǎng)GM-CSFR α是400個(gè)氨基酸的I型膜糖蛋白，屬于I型細(xì)胞因子受體家族，由22個(gè)氨基酸的信號(hào)肽(位置1-22)、 298個(gè)氨基酸的胞外結(jié)構(gòu)域(位置23-320)、位置321-345的跨膜結(jié)構(gòu)域和短的55個(gè)氨基酸的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域組成。信號(hào)肽被裂解以提供GM-CSFRa的成熟形式，為378個(gè)氨基酸的蛋白。人類和鼠GM-CSFRa的cDNA克隆是可獲得的，并且在蛋白水平，受體亞基具有36%的同一性。GM-CSF能夠以相對(duì)低的親和力與單獨(dú)α亞基結(jié)合(Kd 1_5ηΜ)，但根本不結(jié)合單獨(dú)β亞基。然而，α亞基和β亞基二者的存在導(dǎo)致高親和力配體-受體復(fù)合體(Kd >> IOOpM)。GM-CSF信號(hào)傳導(dǎo)如下發(fā)生通過初始與GM-CSFRa鏈結(jié)合，然后與較大亞基即共有的β鏈交聯(lián)產(chǎn)生高親和力相互作用，這將JAK-STAT途徑磷酸化。
對(duì)GM-CSF特異性的任何抗體可用于本發(fā)明。示例性抗體包括含SEQ ID No. 27-45中任一個(gè)中所描繪的H-CDR3序列的氨基酸序列的抗體。其它示例性抗體包括來源于包括SEQ ID No. :27-45中任一個(gè)中所描繪的H-⑶R3序列的氨基酸序列的抗體的抗體。 又一些其它示例性抗體包括與包括SEQ ID No. :27-45中任一個(gè)中所描繪的H-⑶R3序列的氨基酸序列的抗體具有相同的特異性和/或結(jié)合相同表位的抗體。又一些其它示例性抗體包括含與SEQ ID No. :27-45中任一個(gè)中所描繪的H-⑶R3序列至少70%、至少80%、至少 90%或至少95%同源的H-⑶R3序列的抗體。
0156]SEQID No 27 0157]ValGly Ser PheSerGly lie AlaTyrArgPro0158]5100159]SEQID No 28 0160]ValGly Ser PheSerGly Pro AlaLeuArgPro0161]5100162]SEQID No 29 0163]ValGly Ser PheSerPro Pro ThrTyrGlyTyr0164]5100165]SEQID No 30 0166]<400>450167]ValGly Ser PheSerGly Tyr ProTyrArgPro0168]5100169]SEQID No 31 0170]ValGly Ser PheSerPro Leu ThrLeuGlyLeu0171]5100172]SEQID No 32 0173]ValGly Ser PheSerGly Pro ValTyrGlyLeu0174]5100175]SEQID No 33 0176]ValGly Ser PheSerPro Pro AlaTyrArgPro0177]510SEQ ID No 34 Val Gly Ser Phe
SEQ ID No 35 Val Gly Ser Phe
SEQ ID No 36 Val Gly Ser Phe
SEQ ID No 37 Val Gly Ser Phe
SEQ ID No 38 Val Gly Ser Phe
SEQ ID No 39 Leu Gly Ser Val
SEQ ID No 40 Ala Gly Ser Ile
SEQ ID No 41 Val Gly Ser Phe
SEQ ID No 42 Val Gly Ser Phe
SEQ ID No 43 Val Gly Ser Phe
SEQ ID No 44 Val Gly Ser Val
SEQ ID No 45 Val Gly Ser Phe
Ser 5
Ser 5
Ser 5
Ser 5
Ser 5
Thr 5
Pro 5
Ser 5
Ser 5
Ser 5
Ser 5
Ser 5
Pro Val Thr Tyr
Gly Leu Ala Tyr
Pro lie Thr Tyr
Gly Trp Ala Phe
Gly Trp Ala Phe
Ala Trp Ala Phe
Gly 10
Leu
Arg Pro 10
Gly 10
Asp 10
Asp 10
Asp 10
Leu
Tyr
Tyr
Tyr
Gly Trp Ala Phe Asp Tyr 10
Pro Leu Thr Met
Pro Leu Thr Met
Gly Pro Ala Leu
Arg lie Thr Tyr
Gly 10
Gly 10
His 10
Gly 10
Leu
Leu
Leu
Phe
Pro Leu Thr Leu Gly Leu 10
可用于本發(fā)明的對(duì)GM-CSF特異性的另外的抗體包括含SEQ ID No. 46-56中任一項(xiàng)所描繪的H-⑶R3序列的氨基酸序列的抗體。其它示例性抗體包括來源于包括SEQ ID No. 46-56中任一項(xiàng)所描繪的H-⑶R3序列的氨基酸序列的抗體的抗體。又一些其它示例
12性抗體包括與包括SEQ ID No. 46-56中任一項(xiàng)所描繪的H-⑶R3序列的氨基酸序列的抗體具有相同的特異性和/或結(jié)合相同表位的抗體。又一些其它示例性抗體包括含與SEQ ID No. 46-56中任一項(xiàng)所描繪的H-⑶R3序列至少70%、至少80%、至少90%或至少95%同源的H-⑶R3序列的抗體。SEQ ID No 46 EGGYSYGYFDYSEQ ID No 47 DKffLDGFDYSEQ ID No 48 DRffLDAFDISEQ ID No 49 APYDffTFDYSEQ ID No 50 DRffLDAFEISEQ ID No 51 QRYYYSMDVSEQ ID No 52 RPffELPFDYSEQ ID No 53 NGDYVFTYFDYSEQ ID No 54 FGYFGYYFDYSEQ ID No 55 DPYTSGFDYSEQ ID No 56 EDTAMDYFDY本發(fā)明的組合物可用于治療性或預(yù)防性應(yīng)用。因此本發(fā)明包括含有發(fā)明性抗體 (或功能性抗體片段)和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑的藥物組合物。在一個(gè)相關(guān)的方面， 本發(fā)明提供了用于治療多發(fā)性硬化的方法。所述方法包括向需要該施用的受治療者施用有效量的含有如本文所描述或考慮的發(fā)明性抗體的藥物組合物。在某些方面，本發(fā)明提供了用于在受治療者中治療多發(fā)性硬化的方法，所述方法包括向所述受治療者施用GM-CSF拮抗物的步驟。在這一上下文中使用的“受治療者”是指任何哺乳動(dòng)物，包括嚙齒動(dòng)物諸如小鼠或大鼠、和靈長(zhǎng)類諸如食蟹猴(Macaca fascicularis)、獼猴(Macaca mulatta)或人類(Homo sapiens)。優(yōu)選地受治療者是靈長(zhǎng)類，最優(yōu)選地是人類。在某些方面，本發(fā)明提供了用于治療多發(fā)性硬化的方法，所述方法包括向受治療者施用GM-CSF拮抗物的步驟，其中所述GM-CSF拮抗物能夠以低于約ΙΟΟηΜ，更優(yōu)選地為低于約60nM，且進(jìn)一步更優(yōu)選地為低于約30nM的親和力結(jié)合GM-CSF。進(jìn)一步優(yōu)選地是以低于約ΙΟηΜ，且更優(yōu)選地為低于約3nM的親和力結(jié)合GM-CSF的抗體。
在某些方面，本發(fā)明提供了用于治療多發(fā)性硬化的方法，所述方法包括向受治療者施用GM-CSF拮抗物的步驟，其中所述GM-CSF拮抗物與抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合GM-CSF，其中所述抗體的重鏈包括SEQ ID No. :3的氨基酸序列。在可選的方面，本發(fā)明提供了用于治療多發(fā)性硬化的方法，所述方法包括向受治療者施用GM-CSF拮抗物的步驟，其中所述GM-CSF拮抗物與抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合GM-CSF，其中所述對(duì)GM-CSF特異性的抗體的輕鏈包括SEQ ID No. :4的氨基酸序列。在某些方面，本發(fā)明提供了用于治療多發(fā)性硬化的方法，所述方法包括向受治療者施用GM-CSF拮抗物的步驟，其中所述GM-CSF拮抗物是對(duì)GM-CSF特異性的抗體且其中所述對(duì)GM-CSF特異性的抗體與大鼠和/或獼猴(Hiacaca)GM-CSF交叉反應(yīng)，如通過溶液平衡滴定(SET)和/或TFl增殖測(cè)定所測(cè)定的。在某些方面，本發(fā)明提供了包括能夠拮抗GM-CSF在多發(fā)性硬化中的病生理作用的GM-CSF拮抗物的組合物，所述組合物還包括一種或多種藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑。本發(fā)明的抗-GM-CSF抗體可拮抗GM-CSF在多發(fā)性硬化中的任何作用。在某些方面，本發(fā)明提供了包括能夠減少髓磷脂層的脫髓鞘的GM-CSF拮抗物的組合物，所述組合物還包括一種或多種藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑。在某些方面，本發(fā)明提供了包括能夠減少炎性細(xì)胞流入脊髓的GM-CSF拮抗物的組合物，所述組合物還包括一種或多種藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑。在某些方面，本發(fā)明提供了用于在受治療者中治療或預(yù)防多發(fā)性硬化的方法，所述方法包括向受治療者施用有效量的GM-CSF的拮抗物的步驟，其中所述施用延遲了多發(fā)性硬化的發(fā)病。在另一方面，本發(fā)明提供了在受治療者中預(yù)防多發(fā)性硬化的方法，所述方法包括向所述受治療者施用GM-CSF拮抗物。該上下文所用的“預(yù)防”指目的為預(yù)防疾病的發(fā)病或延遲疾病的發(fā)病的方法。在某些方面，本發(fā)明提供了用于在受治療者中治療或預(yù)防多發(fā)性硬化的方法，所述方法包括向受治療者施用有效量的GM-CSF的拮抗物的步驟，其中所述施用降低了 T細(xì)胞的增殖。在某些方面，本發(fā)明提供了用于在受治療者中治療或預(yù)防多發(fā)性硬化的方法，所述方法包括向受治療者施用有效量的GM-CSF拮抗物，其中所述施用減少了 T細(xì)胞的IL17 釋放。用來測(cè)量和定量T細(xì)胞增殖和IL17的釋放的測(cè)定是本領(lǐng)域中已知的。在某些方面，本發(fā)明提供了包括在多發(fā)性硬化的治療中有用的GM-CSF拮抗物的組合物，所述組合物還包括一種或多種藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑。在其它方面，本發(fā)明提供了 GM-CSF拮抗物用于制備治療多發(fā)性硬化的藥物的用途。在其它方面，本發(fā)明提供了用于治療多發(fā)性硬化的GM-CSF拮抗物。在特定的方面，本發(fā)明的GM-CSF拮抗物是皮下施用的。在其它方面，本發(fā)明的 GM-CSF拮抗物是脊柱內(nèi)施用的。當(dāng)皮下施用或脊柱內(nèi)施用時(shí)，GM-CSF拮抗物可以是對(duì)多發(fā)性硬化的治療特別有效的。本發(fā)明的組合物優(yōu)選地是藥物組合物，所述藥物組合物包括GM-CSF拮抗物和藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑，以用于治療多發(fā)性硬化。所述載體、稀釋劑和賦形劑是本領(lǐng)域中已知的，且技術(shù)人員將發(fā)現(xiàn)最適合利用本發(fā)明的GM-CSF拮抗物治療受治療者的制劑和施用途徑。在某些方面，本發(fā)明提供了用于在受治療者中治療或預(yù)防多發(fā)性硬化的方法，所述方法包括向受治療者施用有效量的GM-CSF的拮抗物的步驟。在某些方面所述受治療者是人類。在可選的方面所述受治療者是嚙齒動(dòng)物，比如大鼠或小鼠。在某些方面，所述GM-CSF的拮抗物是對(duì)GM-CSF特異性的抗體。在特定的方面，所述對(duì)GM-CSF特異性的抗體的可變重鏈包括SEQ ID No. :3的氨基酸序列。在其它特定的方面，所述對(duì)GM-CSF特異性的抗體的可變輕鏈包括SEQ ID No. :4的氨基酸序列。在某些方面，所述GM-CSF的拮抗物是對(duì)GM-CSF受體特異性的抗體。在某些方面，所述GM-CSF的拮抗物的施用減少了髓磷脂層的脫髓鞘。在其它方面，所述GM-CSF的拮抗物的施用減少了炎性細(xì)胞流入脊柱。在又一些其它方面，所述GM-CSF的拮抗物的施用減少了 T細(xì)胞的增殖。在又一些其它方面，所述GM-CSF的拮抗物的施用減少了 T細(xì)胞的IL17釋放。在又一些其它方面，所述施用延遲了多發(fā)性硬化的發(fā)病。在某些方面，所述GM-CSF的拮抗物是皮下施用或脊柱內(nèi)施用的。在某些方面，本發(fā)明提供了用于治療或預(yù)防多發(fā)性硬化的GM-CSF的拮抗物。在某些方面，所述治療或預(yù)防包括向受治療者施用有效量的GM-CSF的拮抗物的步驟。在某些方面，所述受治療者是人類。在可選的方面，所述受治療者是嚙齒動(dòng)物，比如大鼠或小鼠。在某些方面，所述GM-CSF的拮抗物是對(duì)GM-CSF特異性的抗體。在某些方面，所述對(duì)GM-CSF特異性的抗體的可變重鏈包括SEQ ID No. :3的氨基酸序列。在某些方面，所述對(duì)GM-CSF特異性的抗體的可變輕鏈包括SEQ ID No. :4的氨基酸序列。在某些方面，所述GM-CSF的拮抗物是對(duì)GM-CSF受體特異性的抗體。在某些方面，利用所述GM-CSF的拮抗物進(jìn)行的治療或預(yù)防減少了髓磷脂層的脫髓鞘。在其它方面，利用所述GM-CSF的拮抗物進(jìn)行的治療或預(yù)防減少了炎性細(xì)胞流入脊柱。在其它方面，用所述GM-CSF的拮抗物的治療或預(yù)防減少了 T細(xì)胞的增殖。在其它方面，用所述GM-CSF的拮抗物的治療或預(yù)防減少了 T細(xì)胞的IL17釋放。在其它方面，用所述GM-CSF的拮抗物的治療或預(yù)防延遲了多發(fā)性硬化的發(fā)病。在某些方面，所述GM-CSF的拮抗物是皮下施用或脊柱內(nèi)施用的。
實(shí)施例實(shí)施例1 本發(fā)明中所用的示例性抗體和動(dòng)物MOR-GM在本發(fā)明中用作示例性的GM-CSF拮抗物。MOR-GM是完全人類GM-CSF-特異性抗體(W0 06/122797)。MOR-GM的重鏈可變區(qū)顯示于SEQ ID No. :3中，輕鏈可變區(qū)顯示于 SEQ ID No. 4 中?？贵w22E9，一種抗小鼠GM-CSF抗體，曾用于其它實(shí)驗(yàn)中(AbD Serotec, Martiηsried/Germany ；Cat. No. 1023501)。
顯然地，任何其它GM-CSF拮抗物，例如包括選自SEQ ID No. :1_45的氨基酸片段的任何抗體可根據(jù)本發(fā)明來使用。iffi Dark Agouti ^H, 7-8 MS (Harlan Laboratories, Inc. , Indianapolis/ IN)飼養(yǎng)于21 士3°C、40-70%的相對(duì)濕度和12小時(shí)光/暗循環(huán)的清潔的常規(guī)條件下。大鼠成對(duì)飼養(yǎng)且自由獲取嚙齒動(dòng)物飼料(SSNIFF，Bio-Services，Hie Netherlands)。個(gè)體動(dòng)物通過標(biāo)記尾部來確認(rèn)身份。在實(shí)驗(yàn)開始之前，將大鼠飼養(yǎng)4周的時(shí)間。在實(shí)驗(yàn)起始之前對(duì)大鼠進(jìn)行隨機(jī)分組。在實(shí)驗(yàn)開始時(shí)，大鼠為11-12周齡且具有200-250g的重量。實(shí)施例2 在MOG誘導(dǎo)的MS的EAE模型中GM-CSF拮抗物的治療有效性為誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性的自身免疫腦脊髓炎(EAE)，在尾部的背側(cè)基底的兩側(cè)的兩個(gè)位點(diǎn)中通過用在200 μ 1的弗氏不完全佐劑(IFA)和IOnM NaAc ρΗ3. 0的1 1混合物中乳化的15 μ g的重組髓磷脂-少突膠質(zhì)細(xì)胞-糖蛋白(rMOG)進(jìn)行皮內(nèi)注射而使雄性DA大鼠免疫。為協(xié)助免疫，通過吸入含2-4%的異氟烷的氧氣和隊(duì)0的混合物而麻醉大鼠。與媒介物(PBQ處理相比較地和與用非特異性的/無關(guān)的同種型對(duì)照抗體 M0R-N0GM (50mg/kg)處理組相比較地檢驗(yàn)測(cè)試化合物MOR-GM的腹膜內(nèi)施用的效果。以3個(gè)劑量，即10mg/kg、20mg/kg和50mg/kg來檢驗(yàn)利用化合物MOR-GM進(jìn)行的預(yù)防性治療。在第 7天、第10天、第14天、第17天和第21天施用化合物。并且，在疾病發(fā)病之后開始首次治療的方案中檢驗(yàn)化合物(50mg/kg)的效力。在該情況中，在第14天、第17天和第21天施用化合物。陽性對(duì)照組包括用從第9天開始每天腹膜內(nèi)施用地塞米松(0.5mg/kg)處理的大鼠。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組包括12只動(dòng)物。在第17天和第21天(處理之前)和終點(diǎn)時(shí)從尾靜脈采集血樣品。每天測(cè)量每個(gè)大鼠的體重。利用以下的傷殘?jiān)u分系統(tǒng)每天對(duì)大鼠的EAE進(jìn)行評(píng)估0 無疾病0. 5 尾局部麻痹或部分麻痹1 完全尾麻痹2 后肢無力或部分麻痹2. 5 如2 一樣，但具有額外的前肢的受累3 后肢和/或機(jī)體的下部分的完全麻痹3. 5 如3 一樣，但具有額外的前肢的受累4 死于 EAE因?yàn)镋AE相關(guān)共病而需要被安樂死的大鼠在安樂死那天被指定為3. 5的值，且在整個(gè)監(jiān)測(cè)期所有隨后的天指定為4的評(píng)分?！白畲笈R床評(píng)分”指實(shí)驗(yàn)期間每個(gè)大鼠的最高EAE評(píng)分?！袄鄯e評(píng)分”是在確定的時(shí)期中對(duì)于給定的大鼠的所有EAE評(píng)分的總和(曲線下面積)。計(jì)算整個(gè)隨訪期、第一疾病期(第0-15天)和復(fù)發(fā)期(第16天-結(jié)束)的累積評(píng)分?！鞍l(fā)病日”指達(dá)到至少3的累積評(píng)分的3個(gè)連續(xù)日中的第一個(gè)。組織學(xué)分析將福爾馬林固定的組織包埋在石蠟中并用蘇木精/伊紅對(duì)5pm的組織切片進(jìn)行染色以能夠?qū)ρ仔约?xì)胞的浸潤(rùn)程度進(jìn)行半定量，或用根據(jù)Kluver-Barrera的Luxol堅(jiān)牢藍(lán)染色以進(jìn)行髓磷脂染色。以半定量的方式對(duì)來自脊髓的骶骨部分的三個(gè)非連續(xù)切片(間隔100 μ m)的炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)和脫髓鞘的程度進(jìn)行評(píng)價(jià)。利用如以下表中所描述的評(píng)分系統(tǒng)進(jìn)行組織學(xué)分級(jí)。組織學(xué)分級(jí)以盲法方式進(jìn)行。用于炎性細(xì)胞浸潤(rùn)入脊髓組織的半定量分級(jí)的組織學(xué)評(píng)分系統(tǒng)
權(quán)利要求
1.一種用于治療或預(yù)防多發(fā)性硬化的GM-CSF的拮抗物。
2.如權(quán)利要求1所述的拮抗物，其中所述治療或預(yù)防包括向受治療者施用有效量的 GM-CSF的拮抗物的步驟。
3.如權(quán)利要求2所述的拮抗物，其中所述受治療者是人類。
4.如權(quán)利要求2所述的拮抗物，其中所述受治療者是嚙齒動(dòng)物，比如大鼠或小鼠。
5.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的拮抗物，其中所述拮抗物是對(duì)GM-CSF特異性的抗體。
6.如權(quán)利要求5所述的拮抗物，其中所述對(duì)GM-CSF特異性的抗體的可變重鏈包括SEQ ID No. 3的氨基酸序列。
7.如權(quán)利要求5或6所述的拮抗物，其中所述對(duì)GM-CSF特異性的抗體的可變輕鏈包括 SEQ ID No. 4的氨基酸序列。
8.如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的拮抗物，其中所述拮抗物是對(duì)GM-CSF受體特異性的抗體。
9.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的拮抗物，其中所述治療或預(yù)防減少髓磷脂層的脫髓鞘。
10.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的拮抗物，其中所述治療或預(yù)防減少炎性細(xì)胞流入脊髓。
11.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的拮抗物，其中所述治療或預(yù)防減少T細(xì)胞的增殖。
12.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的拮抗物，其中所述治療或預(yù)防減少T細(xì)胞釋放 IL17。
13.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的拮抗物，其中所述治療或預(yù)防延遲多發(fā)性硬化的發(fā)病。
14.如權(quán)利要求2-13中任一項(xiàng)所述的拮抗物，其中所述GM-CSF的拮抗物是皮下施用或脊柱內(nèi)施用的。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于治療和/或預(yù)防多發(fā)性硬化(MS)的方法。GM-CSF的拮抗物，比如對(duì)GM-CSF或GM-CSF受體特異性的抗體，在多發(fā)性硬化的治療和/或預(yù)防中是有效的。
文檔編號(hào)C07K16/24GK102439039SQ201080019701
公開日2012年5月2日 申請(qǐng)日期2010年5月4日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月5日
發(fā)明者伊麗莎白·托馬森-沃爾夫, 斯特凡·施泰德爾, 曼紐拉·迪爾, 羅伯特·佛里森, 馬修·唐納姆 申請(qǐng)人:莫佛塞斯公司