專利名稱：一種花色苷單體矢車菊-3-葡萄糖苷的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及添加劑領(lǐng)域，尤其是一種花色苷單體矢車菊-3-葡萄糖苷的制備方 法。
背景技術(shù)：
黑莓是歐美地區(qū)廣泛栽培的四大小果類果樹的重要種類之一，1993年世界糧農(nóng)組 織(FAO)將其推薦為世界上第三代水果。黑莓果實柔軟多汁、酸甜爽口、色澤艷麗、風(fēng)味醇 美，并且富含營養(yǎng)成分，如花色苷、維生素C、維生素E、微量元素、氨基酸等，經(jīng)常食用有延 年益壽、輕身駐顏的神奇功效，在國外被稱為“生命之果”，近年來，黑莓在我國的種植范圍 逐年擴大，國內(nèi)外市場供不應(yīng)求。據(jù)測定，黑莓果中花色苷含量高達(dá)180mg/100g，花色苷為多酚類成分，具有預(yù)防血 栓、抗癌、抗氧化、抗真菌、抗突變、延緩衰老等重要的生理活性，可作為天然色素、天然抗氧 化劑以及營養(yǎng)補充劑加以應(yīng)用。目前已有報道黑莓中含有矢車菊-3-葡萄糖苷和矢車菊-3-蕓香糖苷兩種花色苷 成分，通常采用傳統(tǒng)的固-液柱色譜分離技術(shù)分離得到黑莓中花色苷單體成分。采用固-液 柱色譜分離技術(shù)分離黑莓中花色苷單體成分時，常把硅膠作為固定相填充在色譜柱內(nèi)，樣 品在被流動相洗脫的過程中會因吸附在固定相上而不能完全被洗脫，從而造成色譜柱對產(chǎn) 品有死吸附的缺陷；同時，色譜柱對流動相溶劑的要求較高，需要色譜純級別，成本較高。另 一方面，現(xiàn)有的處于實驗室研究水平的液_液逆流色譜分離技術(shù)所采用的溶劑體系由甲基 叔丁基醚、乙腈、正丁酸、三氟乙酸和水五種溶劑組成，其中乙腈和三氟乙酸的價格高、毒性 大，溶劑難以循環(huán)再利用，不利于花色苷的大量制備，因此有待于開發(fā)一種能克服現(xiàn)有技術(shù) 缺陷的花色苷單體矢車菊-3-葡萄糖苷的制備方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種花色苷單體矢車菊-3-葡萄糖苷的制備方法，所述制 備方法以黑莓為原料，將其打漿、浸提濃縮、除雜(糖、酸等成分)、純化，得到花色苷單體矢 車菊-3-葡萄糖苷。本發(fā)明的制備方法成本低、回收率高、進(jìn)樣量大，且操作簡便。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的一種花色苷單體矢車菊-3-葡萄糖苷 的制備方法，包括如下步驟
A、原料預(yù)處理將經(jīng)過挑選、清洗的黑莓果打漿，得到黑莓果漿；
B、粗提配制1%鹽酸乙醇(ν/ν)溶液，按料液比為1:10的比例，將配好的鹽酸乙醇溶 液加入到黑莓果漿中，常溫浸提、過濾三次，然后合并濾液并將濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在40 50°C真空蒸發(fā)，濃縮濾液至膏狀，得到黑莓浸膏，并回收乙醇；
C、裝柱將經(jīng)乙醇處理的大孔吸附樹脂裝入樹脂柱中，再用去離子水沖洗；
D、除雜將黑莓浸膏用少量去離子水溶解得到黑莓上柱液，并注入樹脂柱中，然后用去 離子水洗滌樹脂，再用60%的乙醇將花色苷成分從樹脂上解吸下來，將所得到的解吸液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在40 50°C真空蒸發(fā)，得到花色苷粗品，同時回收乙醇；
EJiK 按正丁醇有機酸水的體積比為100 1 10 100的比例制備色譜純化 溶劑體系，用高速逆流色譜儀將花色苷粗品進(jìn)行純化，得到花色苷單體矢車菊-3-葡萄糖 苷。所述的花色苷單體矢車菊-3-葡萄糖苷的制備方法，步驟C中所述大孔吸附樹脂 為AB-8型大孔吸附樹脂。所述的花色苷單體矢車菊-3-葡萄糖苷的制備方法，步驟E中所述的溶劑體系為 正丁醇有機酸水=100 1 100。所述的花色苷單體矢車菊-3-葡萄糖苷的制備方法，步驟E中所述的有機酸為甲酸。所述的花色苷單體矢車菊-3-葡萄糖苷的制備方法，步驟E中所述有機酸為乙酸。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比有如下優(yōu)點
1、本發(fā)明的花色苷單體矢車菊-3-葡萄糖苷的制備方法采用高速逆流色譜純化矢車 菊-3-葡萄糖苷，其溶劑體系由正丁醇、有機酸(甲酸/乙酸)和水組成，因涉及的原料成本 低、毒性小從而降低了成本，提高了上相(正丁醇)的循環(huán)使用率及儀器的操作彈性和連續(xù) 性，減少了有毒有害成分在產(chǎn)品中的殘留，安全性高，質(zhì)量可控。2、本發(fā)明的花色苷單體矢車菊-3-葡萄糖苷的制備方法所采用的分離手段及高 速逆流色譜(HSCCC)純化技術(shù)純化花色苷單體矢車菊-3-葡萄糖苷工藝，拓寬了高速逆流 色譜兩相溶劑體系中有機酸(甲酸/乙酸)的種類和用量。3、本發(fā)明的花色苷單體矢車菊-3-葡萄糖苷的制備方法操作簡便、可連續(xù)進(jìn)樣制 備產(chǎn)品，提取分離純化過程中所使用的乙醇、正丁醇等有機溶劑可循環(huán)利用，大孔吸附樹 脂可重復(fù)使用；高速逆流色譜純化所使用的溶劑體系由正丁醇、有機酸和水組成，固定相 和流動相均為液相，可借助于氣體的壓力清除在色譜儀內(nèi)可能的殘留物，克服了現(xiàn)有技術(shù) 固-液柱色譜固定相對產(chǎn)品有死吸附的缺陷。因此，本發(fā)明既有效地降低了矢車菊-3-葡 萄糖苷單體的制備成本，又減少了其制備過程中有機廢料的排放，產(chǎn)品可廣泛用于食品、藥 品、化妝品等領(lǐng)域。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作一詳細(xì)描述。實施例1 一種花色苷單體矢車菊-3-葡萄糖苷的制備方法，包括如下步驟
A、原料預(yù)處理將經(jīng)過挑選、清洗的黑莓果打漿，得到黑莓果漿；
如果不是時令季節(jié)，原料可以用黑莓冷凍果，需先將冷凍果解凍然后進(jìn)行挑選、清洗。 黑莓冷凍果可購于北京市林業(yè)科學(xué)院。本實施例的打漿設(shè)備采用本領(lǐng)域通用的螺旋榨汁 機。
B、粗提配制1%鹽酸乙醇(ν/ν)溶液，按料液比1:10的比例，將配好的鹽酸乙醇溶液 加入到黑莓果漿中，常溫浸提(24小時)、過濾三次，經(jīng)三次浸提和過濾后黑莓果漿基本呈無 色，然后合并濾液并將濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在40 50°C真空蒸發(fā)，濃縮濾液至膏狀，得到黑 莓浸膏，并回收乙醇；
本實施例的乙醇(95%的工業(yè)乙醇)、鹽酸(分析純)均購于北京化工廠，在乙醇中加入鹽酸一方面可以促使花色苷從黑莓細(xì)胞組織中完全地、快速地溶出；另一方面可以維持花色 苷的結(jié)構(gòu)，防止花色苷降解，此外，還可以水解花色苷的?；畲笙薅鹊氐玫街挥刑腔?花色苷。本實施例的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器型號為Laborate 4000，購于德國海道夫公司。C、裝柱將經(jīng)乙醇處理的大孔吸附樹脂裝入樹脂柱中，再用去離子水沖洗；
本實施例的步驟C中所述大孔吸附樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂；先將AB-8大孔吸附 樹脂用95%的乙醇浸泡24小時，然后用95%的乙醇進(jìn)行洗滌，再用去離子水清洗；將經(jīng)過處 理的AB-8大孔吸附樹脂緩慢裝入樹脂柱中，再用去離子水沖洗，至柱中顆粒干凈，不再沉 降為止。本實施例的AB-8大孔吸附樹脂購于河北滄州寶恩吸附材料科技有限公司。D、除雜將黑莓浸膏用少量去離子水溶解得到黑莓上柱液，并用恒流泵注入到樹 脂柱中，令樹脂吸附黑莓中的花色苷成分，用去離子水洗滌樹脂，除去水溶性的糖、酸等成 分，再用60%的乙醇將花色苷成分從樹脂上解吸下來，并將得到的解吸液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在 40 50°C真空蒸發(fā)除去乙醇，得到花色苷粗品，同時回收乙醇。本實施例所采用的恒流泵型號BT1-100，購自上海琪特分析儀器有限公司。AB-8大孔吸附樹脂的作用是在水相環(huán)境下，可以吸附花色苷等黃酮類成分，而對 糖、酸等水溶性較大的成分不吸附，因此，可以對黑莓浸膏(黑莓粗提物)進(jìn)行初分離。EJiK 按正丁醇有機酸水的體積比為100 1 10 100的比例制備色譜 純化溶劑體系，用高速逆流色譜儀將花色苷粗品進(jìn)行純化，得到高純度(95%以上)花色苷 單體矢車菊-3-葡萄糖苷。本實施例色譜純化的溶劑體系中各溶劑體積比的比例，即正丁醇有機酸水為 100 1 100。本實施例溶劑體系中的有機酸為甲酸，也可以是乙酸。高速逆流色譜儀的操作參數(shù)溫度25°C，正轉(zhuǎn)(FWD)，轉(zhuǎn)速850rpm，黑莓上柱液流 速為2mL/min，上樣量200mg。高速逆流色譜純化操作可連續(xù)進(jìn)樣，配制的溶劑體系上相(正 丁醇)可重復(fù)使用。本實施例所使用的純化設(shè)備為高速逆流色譜儀，型號為HSCCC-300A，購自上海同 田生物科技有限公司。所述一種花色苷單體矢車菊-3-葡萄糖苷的制備方法，以加工IOOOg黑莓果原料 為例，其制備步驟如下
A、將經(jīng)過挑選、清洗的黑莓果打漿，置于榨汁機中打漿，得到黑莓果漿；
B、粗提配制1%鹽酸乙醇溶液，按料液比1 10(w/v)，將配好的鹽酸乙醇溶液IOL加 入IOOOg黑莓果漿中，常溫浸提24小時后過濾；在濾渣中再加入1%鹽酸乙醇溶液10L，第 二次浸提24小時后過濾；在濾渣中再加入1%鹽酸乙醇溶液10L，第三次浸提24小時后過 濾；經(jīng)三次浸提和過濾后黑莓果漿基本呈無色，將三次過濾的濾液合并，然后將約30L濾液 用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在40 50°C真空蒸發(fā)，濃縮濾液至膏狀，得到黑莓浸膏，并回收乙醇。C、裝柱將經(jīng)乙醇處理的200g AB-8大孔吸附樹脂緩慢裝入樹脂柱中，再用去離 子水沖洗，至柱中顆粒干凈，不再沉降為止。D、除雜將黑莓浸膏用少量去離子水完全溶解得到黑莓上柱液，用恒流泵注入樹脂柱中，令樹脂吸附黑莓中的花色苷成分，然后用去離子水洗樹脂柱除去水溶性的糖、酸等 成分，再用乙醇解吸樹脂上吸附的花色苷成分，并將得到的解吸液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在40 50°C真空蒸發(fā)除去溶劑乙醇，得到花色苷粗品，同時回收乙醇；
E、純化按正丁醇甲酸水的體積比為100 1 100的比例制備IOL色譜純化溶 劑體系溶液，用高速逆流色譜儀將花色苷粗品進(jìn)行純化，得到高純度(95%以上)花色苷單 體矢車菊-3-葡萄糖苷。 高速逆流色譜儀操作參數(shù)溫度25°C，正轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)速850rpm，流速為2mL/min，上樣 量200mg，將上述得到的花色苷粗品注入高速逆流色譜法進(jìn)行純化，即得到高純度的矢車 菊-3-葡萄糖苷，純化體系中甲酸可用乙酸代替，色譜操作可連續(xù)進(jìn)樣，配制的溶劑體系上 相(正丁醇)可重復(fù)使用。
權(quán)利要求
一種花色苷單體矢車菊 3 葡萄糖苷的制備方法，其特征在于包括如下步驟A、原料預(yù)處理將經(jīng)過挑選、清洗的黑莓果打漿，得到黑莓果漿；B、粗提配制1%鹽酸乙醇(v/v)溶液，按料液比為110的比例，將配好的鹽酸乙醇溶液加入到黑莓果漿中，常溫浸提、過濾三次，然后合并濾液并將濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在40～50℃真空蒸發(fā)，濃縮濾液至膏狀，得到黑莓浸膏，并回收乙醇；C、裝柱將經(jīng)乙醇處理的大孔吸附樹脂裝入樹脂柱中，再用去離子水沖洗；D、除雜將黑莓浸膏用少量去離子水溶解得到黑莓上柱液，并注入樹脂柱中，然后用去離子水洗滌樹脂，再用60%的乙醇將花色苷成分從樹脂上解吸下來，將所得到的解吸液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在40～50℃真空蒸發(fā)，得到花色苷粗品，同時回收乙醇；E、純化按正丁醇∶有機酸∶水的體積比為100∶1～10∶100的比例制備色譜純化溶劑體系，用高速逆流色譜儀將花色苷粗品進(jìn)行純化，得到花色苷單體矢車菊 3 葡萄糖苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的花色苷單體矢車菊-3-葡萄糖苷的制備方法，其特征在于 步驟C中所述大孔吸附樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的花色苷單體矢車菊-3-葡萄糖苷的制備方法，其特征在于 步驟E中所述的溶劑體系為正丁醇有機酸水=100 1 100。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的花色苷單體矢車菊-3-葡萄糖苷的制備方法，其特征在于 步驟E中所述的有機酸為甲酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的花色苷單體矢車菊-3-葡萄糖苷的制備方法，其特征在于 步驟E中所述有機酸為乙酸。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種花色苷單體矢車菊-3-葡萄糖苷的制備方法。所述制備方法以黑莓為原料，將其打漿、浸提濃縮、除雜、純化，得到花色苷單體矢車菊-3-葡萄糖苷。本發(fā)明的制備方法采用高速逆流色譜純化矢車菊-3-葡萄糖苷，其溶劑體系由正丁醇、有機酸和水組成，原料成本低、毒性小從而降低了成本，提高了上相的循環(huán)使用率及儀器的操作彈性和連續(xù)性，減少了有毒有害成分在產(chǎn)品中的殘留，安全性高，質(zhì)量可控且操作簡便。
文檔編號C07H1/08GK101987856SQ20101056333
公開日2011年3月23日 申請日期2010年11月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月29日
發(fā)明者張東升, 李浡, 王彥輝, 辛秀蘭, 陳亮 申請人:北京電子科技職業(yè)學(xué)院