專利名稱：雜交瘤細胞株1c11、其產(chǎn)生的抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及雜交瘤細胞株1C11、其產(chǎn)生的抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
黃曲霉毒素主要是由黃曲霉和寄生曲霉分泌產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，是能引起人畜 各種損害的天然有毒化合物。黃曲霉毒素目前已發(fā)現(xiàn)20余種，其中最主要的是黃曲霉毒素 Bi, B2, Gl 禾口 G2。黃曲霉毒素污染食品及飼料后，直接或間接進入人類食品鏈，威脅人類的健康和 生命安全，危害程度與黃曲霉毒素的攝入量成正比。黃曲霉毒素廣泛存在于大米、玉米、花 生、芝麻、大豆、菜籽等農(nóng)產(chǎn)品和魚肉等食品中，而且往往是多種黃曲霉毒素同時存在，為此 世界各國都規(guī)定了黃曲霉毒素總量(B1+B2+G1+G2)在食品及飼料中的最大允許含量并作 為強制性標準。我國屬于黃曲霉毒素污染較重的地區(qū)，因此加強對食品及飼料中黃曲霉毒 素總量的檢測、特別是速測，及時了解和掌握食品及飼料的衛(wèi)生信息，對保障我國食品消費 安全具有重要意義?，F(xiàn)有黃曲霉毒素的檢測方法包括薄層層析法、精密儀器分析法和免疫學分析法。 其中薄層層析法是檢測黃曲霉毒素最常用的檢測方法，其不需要特殊的儀器設(shè)備，一股實 驗室都可進行，但試劑用量大、操作繁瑣、其它組分干擾嚴重、準確性差，不能準確定量，且 對實驗人員和周圍環(huán)境污染危害較大，不適于現(xiàn)場快速檢測。精密儀器分析法包括熒光分 光光度法和高效液相色譜法，其靈敏度高，準確性好，但儀器昂貴，要求黃曲霉毒素樣品純 化程度高，樣品前處理過程繁瑣，耗時長，對實驗環(huán)境要求高，難以實現(xiàn)快速檢測。近些年發(fā) 展起來的免疫分析技術(shù)克服了前兩者的缺點，具有特異性強、靈敏度高、樣品前處理簡單、 成本低、對實驗人員和周圍環(huán)境的污染危害小、適于現(xiàn)場批量檢測等優(yōu)點。免疫分析是利用 抗原和抗體的特異性的結(jié)合反應(yīng)和抗體、抗原上的標記物的生物、物理或化學放大作用來 對超微量殘留物進行定性、定量檢測，所以，要研究建立針對黃曲霉毒素總量的任何一種免 疫學檢測技術(shù)，都必須先制得抗黃曲霉毒素總量的抗體。目前，國內(nèi)外已有很多針對單一組 分的黃曲霉毒素單克隆或多克隆抗體的報道，但針對黃曲霉毒素總量的抗體尚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的問題是提供雜交瘤細胞株1C11、其產(chǎn)生的抗黃曲霉毒素通用單 克隆抗體及其應(yīng)用。本發(fā)明提供了雜交瘤細胞株1C11，該細胞株已于2010年7月13日保藏于中 國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是，中國，武漢，武漢大學，保藏編號為CCTCC N0.C201013。其具有序列表中SEQ Gene NO. 1所示的抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體重鏈可 變區(qū)編碼基因序列和序列表中SEQ Gene NO. 2所示的抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體輕鏈可變區(qū)編碼基因序列。抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體，它由保藏編號為CCTCC NO. C201013的雜交瘤細胞 株ICll分泌產(chǎn)生。其重鏈可變區(qū)具有序列表中SEQ Protein NO. 1所示的氨基酸序列；輕 鏈可變區(qū)具有序列表中SEQ Protein NO. 2所示的氨基酸序列。該抗黃曲霉毒素通用單克 隆抗體可以識別黃曲霉毒素Bl、B2、Gl、G2?？裹S曲霉毒素通用單克隆抗體在黃曲霉毒素總量測定中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的雜交瘤細胞株ICll是采用兩步篩選法獲得的，其具體步驟為將 BALB/c小鼠經(jīng)黃曲霉毒素完全抗原AFBl-BSA免疫4_6次后，用2倍于前一次免疫劑量的黃 曲霉毒素完全抗原AFBl-BSA作最后一次加強免疫，3天后進行細胞融合，采用ELISA方法 分兩步進行篩選融合細胞第一步采用間接ELISA法篩選出抗黃曲霉毒素而不抗載體蛋白 BSA的陽性孔；第二步采用間接競爭ELISA法對第一步篩選出的陽性孔培養(yǎng)液進行檢測，用 黃曲霉毒素B1，B2，G1和G2共4種作為競爭原，選擇吸光值和靈敏度均較高的孔，采用有限 稀釋法進行克隆，克隆后10天左右采用同樣的兩步篩選法進行檢測，如此重復(fù)克隆2-3次 后，最終篩選獲得雜交瘤細胞株ICl 1。本發(fā)明提供的抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體的制備方法，步驟如下將獲得的雜 交瘤細胞株ICll注射預(yù)先用福氏不完全佐劑處理過的BALB/c小鼠，收集含有抗黃曲霉毒 素通用單克隆抗體的小鼠腹水，純化即得抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體。本發(fā)明的有益效果在于(1)本發(fā)明提供的雜交瘤細胞株ICll可以用于制備高效價黃曲霉毒素抗體，鼠 腹水抗體酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)法測得的效價可達5. 12X106，即鼠腹水抗體稀釋 5. 12X IO6倍時的溶液測定結(jié)果為陽性。(2)本發(fā)明提供的抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體靈敏度高，對黃曲霉毒素Bi，B2, Gl和G2的50%抑制濃度即IC5tl依次為1.2，1.3，2.2和18. 0pg/mL，是目前所報導(dǎo)的對四 種黃曲霉毒素靈敏度最高的抗體。(3)本發(fā)明提供的抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體可用于測定黃曲霉毒素總量，即 黃曲霉毒素Bi，B2, Gl和G2的總含量，實際應(yīng)用價值大。


圖1為本發(fā)明的快速檢測黃曲霉毒素總量的免疫層析試紙的正視圖。圖中1紙 板、2吸水墊；3檢測墊；4金標墊；5樣品墊；6質(zhì)控線；7檢測線。圖2為本發(fā)明的快速檢測黃曲霉毒素總量的免疫層析試紙的左視圖。圖中1紙 板；2吸水墊；3檢測墊；4金標墊；5樣品墊。圖3為實施例4中應(yīng)用本發(fā)明提供的抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體制備的試紙條 檢測樣品的結(jié)果判定圖。圖中1對照試紙條；2檢測試紙條；3質(zhì)控線；4檢測線。
具體實施例方式實施例1 雜交瘤細胞株ICll的制備1.動物免疫購買6周齡BALB/c小鼠6只，免疫市售的黃曲霉毒素完全抗原AFB1-BSA。第一次免疫將黃曲霉毒素完全抗原與等量福氏完全佐劑乳化后，于小鼠頸背部皮下多點注射。第 二次免疫于4周后進行，采用福氏不完全佐劑與等量黃曲霉毒素完全抗原乳化，于小鼠腹 腔注射。第三次免疫與第二次免疫間隔4周，免疫方式與其相同，第四次免疫于第三次免 疫3周后進行，免疫方式與第二次免疫相同，同樣為腹腔注射。4次免疫劑量相同，均為每 鼠40 μ g/mL。前3次每次免疫后8天，尾靜脈采血，分離血清，采用間接ELISA法監(jiān)測小鼠 血清效價。第4次免疫后8天，尾靜脈采血，分離血清，采用間接ELISA法監(jiān)測小鼠血清效 價，并用間接競爭ELISA法測定小鼠血清靈敏度，選擇效價、靈敏度均相對較高的血清對應(yīng) 的小鼠進行最后一次加強免疫，免疫劑量為之前的2倍。黃曲霉毒素完全抗原AFBl-BSA購于Sigma-Aldrich公司。2.細胞融合于最后一次加強免疫3天后，采用50%聚乙二醇即PEG(分子量為1450)作融合 劑，按常規(guī)方法進行細胞融合，具體步驟無菌條件下殺死免疫小鼠，分離脾細胞，與鼠源骨 髓瘤細胞SP2/0以5 1的個數(shù)比混合，用RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)液洗混合細胞，用50% PEG 融合，融合后1分鐘加滿RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)液，離心，移去上清，小鼠脾細胞和鼠源骨髓瘤 細胞SP2/0形成的融合細胞用72mLRPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)液重懸，將重懸起來的細胞滴加到 96孔細胞培養(yǎng)板內(nèi)，2滴/孔，置37°C二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)，所述的RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)液 為含有20%胎牛血清，2%生長因子和次黃嘌呤-氨基蝶呤-胸腺嘧啶核苷即HAT。上述SP2/0購于上海泛柯生物科技有限公司；RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)液購于Hyclone 公司；1 %次黃嘌呤_氨基蝶呤_胸腺嘧啶核苷即HAT購于Sigma-Aldrich公司。3.細胞株的篩選及克隆待細胞融合后第12天左右，細胞集落長到占孔底1/2大小，培養(yǎng)液變黃，即可進行 抗體檢測。采用ELISA方法對有雜交瘤細胞生長的培養(yǎng)孔進行篩選，篩選分兩步進行，第一 步采用間接ELISA法篩選出抗黃曲霉毒素而不抗載體蛋白BSA的陽性孔；第二步采用間接 競爭ELISA法對第一步篩選出的陽性孔進行檢測，用黃曲霉毒素Bi，B2, Gl和G2共4種作 為競爭原，選擇吸光值和靈敏度均較高的孔(吸光值較高指競爭原為0的孔即陽性對照孔 的最終測定值較高，靈敏度較高指抑制率為50%時的競爭原濃度亦即IC5tl值較小)，采用有 限稀釋法進行克隆，克隆后10天左右采用同樣的兩步法進行檢測，如此重復(fù)克隆2-3次后， 獲得雜交瘤細胞株ICl 1。實施例2 雜交瘤細胞株ICll抗體可變區(qū)序列測定(1)提取總RNA 采用天根公司的總RNA提取試劑盒并按照說明書提取可產(chǎn)生雜交 瘤細胞株系ICll的總RNA ；(2)合成cDNA :以步驟1獲得的總RNA為模板，oligo (dT) 15為引物，按照 SuperScript -2II反轉(zhuǎn)錄酶說明書進行反轉(zhuǎn)錄，合成cDNA第一鏈；引物oligo (dT) 15由 Invitrogen 購得；(3)PCR法克隆可變區(qū)基因根據(jù)GENEBANK中小鼠抗體基因序列的保守位點設(shè) 計引物，以cDNA為模版擴增抗體輕、重鏈可變區(qū)基因。PCR程序為94°C 30s,55°C lmin、 72°C lmin，擴增30個循環(huán)，最后72°C延伸lOmin。PCR產(chǎn)物經(jīng)過1 %的瓊脂糖凝膠電泳分離 后，用試劑盒純化回收DNA片段，連接到載體pMDIS-T中，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5 α感受態(tài)細胞， 挑取陽性克隆，送至上海桑尼生物科技有限公司進行測序。其中引物的序列分別為重鏈可變區(qū)弓丨物為 5' -AGG TSM ARC TGC AGS AGT CffG G-3' (22mer)禾口 5' -TGA GGAGAC GGT GAC CGT GGT CCC TTG GCC CC-3，(32mer)其中 S、M、R 禾口 W 為兼并堿基，M = A/C，R = A/G，S = C/G, W = A/T，輕鏈可變區(qū)引物為 5，-GAC ATT GAG CTC ACC CAG CTTGGT GCC-3，(24mer) 和 5，-CCG TTT CAG CTC CAG CTT GGT CCC-3，(24mer)。得到的基因序列結(jié)果重鏈可變區(qū)編碼基因序列長357bp，序列如SEQ ID NO :1所 示，根據(jù)所獲得的基因序列推導(dǎo)出該基因序列所編碼的重鏈可變區(qū)由119個氨基酸組成， 序列如SEQ GENE ID N0:3所示。輕鏈可變區(qū)編碼基因序列長311bp，序列如SEQ GENE ID NO :2所示，根據(jù)所獲得的基因序列推導(dǎo)出該基因序列所編碼的輕鏈可變區(qū)由101個氨基酸 組成，序列如SEQ GENE ID NO: 4所示。實施例3 抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體的制備、純化以及其亞型及特性鑒定將實施例2獲得的雜交瘤細胞株ICll注射預(yù)先用福氏不完全佐劑處理過的BALB/ c小鼠，收集該小鼠的腹水，采用辛酸_硫酸銨法純化抗體，具體操作為用雙層濾紙過濾小 鼠腹水，4°C，12000r/min離心15min，吸取上清，將所得腹水上清與4倍體積的醋酸鹽緩沖 液混合，攪拌下緩慢加入正辛酸，每毫升腹水所需的正辛酸體積為33 μ L，室溫混合30min， 4°C靜置2h，然后4°C，12000r/min離心30min，棄沉淀，將得到的上清液用雙層濾紙過濾后， 加入1/10濾液體積的摩爾濃度為0. lmol/L和pH值為7. 4的磷酸鹽緩沖液，用2mol/L的 氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)該混合液的PH值至7. 4，4°C預(yù)冷，緩慢加入硫酸銨至硫酸銨終濃度為 0. 277g/mL，4°C靜置2h，然后4°C，12000r/min離心30min，棄上清，將所得沉淀用原腹水體 積1/10的0. Olmol/L磷酸鹽緩沖液重懸，裝入透析袋，對純水透析，將充分透析好的蛋白溶 液置_70°C冰箱冷凍，之后用冷凍干燥機凍干，收集凍干粉，即得純化好的抗黃曲霉毒素通 用單克隆抗體，將抗體置-20°C冰箱中備用；所述的醋酸鹽緩沖液為0. 29g醋酸鈉，0. 141mL醋酸，加水定容至IOOmL所得；所 述的0. lmol/L的磷酸鹽緩沖液為0. 8g氯化鈉，0. 29g十二水磷酸氫二鈉，0. 02g氯化鉀，磷 酸二氫鉀0. 02g，加水定容至IOOmL所得。用市售亞型鑒定試劑盒鑒定雜交瘤細胞株ICll分泌的抗黃曲霉毒素通用單克隆 抗體的亞型為IgG2a。用間接競爭ELISA法鑒定其對黃曲霉毒素B1，B2，G1和G2的靈敏度 分別為 1. 2,1. 3,2. 2 和 18. 0pg/mL、交叉反應(yīng)率分別為 100. 0%,94. 3%,54. 5%和 6. 7%0實施例4 抗體應(yīng)用將雜交瘤細胞株ICll分泌的抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體用于制備快速檢測黃 曲霉毒素總量的高靈敏度免疫層析試紙條，制備方法包括以下步驟(1)吸水墊的制備將吸水紙剪裁成長16mm寬3mm的規(guī)格，即得吸水墊；(2檢測墊的制備檢測線的包被將黃曲霉毒素Bl-牛血清白蛋白的偶聯(lián)物AFBl-BSA配制成0. lmg/mL的包被液A ； 于距硝酸纖維素膜上沿15mm的位置，用點噴方式將包被液A橫向包被于硝酸纖維素膜上， 得到檢測線，每厘米檢測線所需黃曲霉毒素Bl-牛血清白蛋白的偶聯(lián)物的包被量為80ng， 然后于37°C條件下干燥15分鐘；所述的包被液A為10mg市售黃曲霉毒素Bl-牛血清白蛋白偶聯(lián)物AFB1-BSA，Ig牛血清白蛋白，Ig蔗糖，0. 02g疊氮化鈉，0. 8g氯化鈉，0. 29g十二水磷酸氫二鈉，0. 02g氯化 鉀，0. 02g磷酸二氫鉀，加水定容至IOOmL所得。質(zhì)控線的包被將兔抗鼠多克隆抗體配成0. 5mg/mL的包被液B ；于距檢測線5mm的位置，用點噴 方式將包被液B橫向包被于硝酸纖維素膜上，得質(zhì)控線，每厘米質(zhì)控線所需的兔抗鼠多克 隆抗體的包被量為200ng，然后于37°C條件下干燥15分鐘；所述的包被液B為將50mg兔抗鼠多克隆抗體，0. 02g疊氮化鈉，0. 8g氯化鈉， 0. 29g十二水磷酸氫二鈉，0. 02g氯化鉀，0. 02g磷酸二氫鉀，加水定容至IOOmL所得。所述的硝酸纖維素膜長25mm，寬3mm。(3)樣品墊的制備將玻璃纖維膜剪裁成長13mm寬3mm的規(guī)格，放入封閉液A中浸濕，取出，于37°C條 件下干燥16小時，得樣品墊，然后置干燥器中室溫保存；所述的封閉液A為Ig牛血清白蛋白，2g蔗糖，0. 02g疊氮化鈉，0. 8g氯化鈉，0. 29g 十二水磷酸氫二鈉，0. 02g氯化鉀，0. 02g磷酸二氫鉀，加水定容至IOOmL所得。(4)金標墊的制備將玻璃纖維膜剪裁成長9mm寬3mm的規(guī)格，放入封閉液B中浸濕，取出，于37°C條 件下干燥16小時，于干燥好的玻璃纖維膜上，用點噴方式將納米金標記的抗黃曲霉毒素總 量通用單克隆抗體溶液橫向噴涂，每厘米噴涂長度所需納米金標記的抗黃曲霉毒素通用單 克隆抗體為144ng，然后真空冷凍干燥6h，置干燥器中室溫保存；所述的封閉液B為Ig牛血清白蛋白，0. ImL曲拉通X_100，0. 3g聚乙烯吡咯烷酮， 2g蔗糖，0. 02g疊氮化鈉，0. 8g氯化鈉，0. 29g十二水磷酸氫二鈉，0. 02g氯化鉀，0. 02g磷酸 二氫鉀，加水定容至IOOmL所得；所述的納米金標記的抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體溶液是采用不飽和標記法制 備的，其具體方法為量取50. OmL質(zhì)量濃度為0.01%的納米金溶液，用0. lmol/L碳酸鉀水 溶液調(diào)節(jié)溶液PH值為5. 5 ；在攪拌的狀態(tài)下緩慢加入2mL 0. lmg/mL的抗黃曲霉毒素通用 單克隆抗體水溶液，繼續(xù)攪拌30min ；加入質(zhì)量濃度為10%牛血清白蛋白水溶液至牛血清 白蛋白的終質(zhì)量濃度為1%，繼續(xù)攪拌30min ；于4°C放置2h后，1500r/min離心15min，取 上清液，棄沉淀；將上清液12000r/min離心30min，棄去上清液，加入50. OmL標記洗滌保存 液；再以12000r/min離心30min，棄去上清液，將沉淀用標記洗滌保存液重懸，得到5. OmL 濃縮物，置4°C冰箱備用，其中納米金標記的抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體溶液的質(zhì)量濃度 為 0. 04mg/mL ；所述納米金溶液中納米金的粒徑為15nm ；所述的0. lmol/L碳酸鉀水溶液為13. 8g碳酸鉀溶于純水定容至IOOOmL, 0. 22 μ m 濾膜過濾所得；所述的0. lmg/mL抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體水溶液為Img抗黃曲霉毒素 通用單克隆抗體溶解在IOmL純水中制成；所述的10%牛血清白蛋白水溶液為IOg牛血清 白蛋白溶解在IOOmL純水中，0. 22 μ m濾膜過濾所得；所述的標記洗滌保存液為2. Og聚乙 二醇-20000，0. 2g疊氮鈉，0. 1235克硼酸，純水定容至IOOOmL, 0. 22 μ m濾膜過濾所得；(5)試紙條的組裝在紙板的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊、金標墊和樣 品墊，相鄰各墊在連接處交疊連接，交疊長度為1mm，即得快速檢測黃曲霉毒素總量的高靈敏度免疫層析試紙條，見圖1和圖2。上述快速檢測黃曲霉毒素總量的高靈敏度免疫層析試紙條的應(yīng)用稱取已磨細1#和2#待測樣品，加入體積濃度為80%的甲醇水溶液，待測樣品與 甲醇水溶液的質(zhì)量體積比為3g/mL，混勻，在50°C水浴下超聲提取8分鐘，靜置10分鐘，將 上層清液即提取液用水稀釋2. 5倍，使稀釋液中甲醇的終濃度為32%，得樣品溶液，再取 100 μ L稀釋好的樣品溶液做為檢測液逐滴加入一快速檢測黃曲霉毒素總量的高靈敏度免 疫層析試紙條(作檢測試紙條)的樣品墊，同時取IOOyL水做為陰性對照液，逐滴加入另 一快速檢測黃曲霉毒素總量的高靈敏度免疫層析試紙條(作對照試紙條)的樣品墊，15分 鐘后讀取結(jié)果。檢測結(jié)果1#檢測試紙條的質(zhì)控線顯示出紅色線條，而檢測線不顯色，則判為陽 性結(jié)果，表明待測樣品中的黃曲霉毒素總量即黃曲霉毒素Bi、Β2、Gl和G2的總含量高于 0. 5ng/g，見圖3-1 ；2#檢測試紙條的質(zhì)控線顯示出紅色線條，而檢測線顏色比對照試紙條 檢測線顏色淺，則判為陽性結(jié)果，表明待測樣品中的黃曲霉毒素總量即黃曲霉毒素Bi、B2、 Gl和G2的總含量高于或等于0. 5ng/g，見圖3_2。
權(quán)利要求
1.雜交瘤細胞株1C11，其特征在于它保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為 CCTCC NO. C201013。
2.抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體，其特征在于它由保藏編號為CCTCCN0.C201013的 雜交瘤細胞株ICll分泌產(chǎn)生。
3 權(quán)利要求2所述的抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體在黃曲霉毒素總量測定中的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求1所述的雜交瘤細胞株ICll的制備方法，其特征在于將BALB/c小鼠經(jīng)黃 曲霉毒素完全抗原AFBl-BSA免疫4-6次后，用2倍于前一次免疫劑量的黃曲霉毒素完全抗 原AFBl-BSA作最后一次加強免疫，3天后進行細胞融合，采用ELISA方法分兩步進行篩選融 合細胞第一步采用間接ELISA法篩選出抗黃曲霉毒素而不抗載體蛋白BSA的陽性孔；第 二步采用間接競爭ELISA法對第一步篩選出的陽性孔培養(yǎng)液進行檢測，用黃曲霉毒素Bi， B2, Gl和G2共4種作為競爭原，選擇吸光值和靈敏度均較高的孔，采用有限稀釋法進行克 隆，克隆后10天左右采用同樣的兩步篩選法進行檢測，如此重復(fù)克隆2-3次后，最終篩選獲 得雜交瘤細胞株ICl 1。
5.權(quán)利要求2所述的抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體的制備方法，其特征在于將獲得 的雜交瘤細胞株ICll注射預(yù)先用福氏不完全佐劑處理過的BALB/c小鼠，收集含有抗黃曲 霉毒素通用單克隆抗體的小鼠腹水，純化即得抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體。
全文摘要
本發(fā)明提供了雜交瘤細胞株1C11、其分泌產(chǎn)生的抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體及其應(yīng)用。該雜交瘤細胞株1C11可以用于制備高效價黃曲霉毒素抗體，鼠腹水抗體酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)法測得的效價可達5.12×106；該抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體靈敏度高，對黃曲霉毒素B1，B2，G1和G2的50％抑制濃度即IC50依次為1.2，1.3，2.2和18.0pg/mL，是目前所報導(dǎo)的對四種黃曲霉毒素靈敏度最高的抗體，其用于測定黃曲霉毒素總量，即黃曲霉毒素B1，B2，G1和G2的總含量，實際應(yīng)用價值大。
文檔編號C07K16/14GK101993855SQ20101024509
公開日2011年3月30日 申請日期2010年8月5日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月5日
發(fā)明者丁小霞, 姜俊, 張奇, 張文, 張道宏, 李培武, 李鑫, 陳小媚 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學院油料作物研究所