專(zhuān)利名稱(chēng)：1-N-乙基慶大霉素C_1a硫酸鹽的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥用原料的制備方法，具體涉及一種1-N-乙基慶大霉素Cla硫酸 鹽的制備方法。
背景技術(shù)：
中國(guó)專(zhuān)利文獻(xiàn)CN1040177C (申請(qǐng)?zhí)?3112412. 3)公開(kāi)了一種含1_N_乙基慶大霉 素Cla或其鹽的藥用制劑及制備方法。首先，由慶大霉素Cla制備3，2’，6’ -三-N-乙酰基慶大霉素Cla，即在室溫下，將慶 大霉素Cla溶解于水和非質(zhì)子極性的有機(jī)溶劑(如二甲基甲酰胺、二甲基亞砜等)中，然后加 入乙酸鈷，再滴加乙酸酐的四氫呋喃溶液直至反應(yīng)結(jié)束。后處理是將反應(yīng)液用水稀釋?zhuān)?通入強(qiáng)酸性的732 (H+)樹(shù)脂柱吸附，然后依次進(jìn)行水洗、氨水解析、減壓濃縮，再用YPR- II 大孔樹(shù)脂柱純化，用乙醇洗脫，最后經(jīng)濃縮凍干得到3，2’，6’ -三-N-乙?；鶓c大霉素Cla， 該步驟收率不到75%。然后，由3，2’，6’ -三-N-乙?；鶓c大霉素Cla制備1_N_乙基慶大霉素Cla的，即直 接用乙醛對(duì)3，2’，6’ -三-N-乙?；鶓c大霉素Cla進(jìn)行N-烷基化，然后用硼氫化鈉水溶液還 原得到3，2，，6，-三-N-乙?；?1-N-乙基慶大霉素Cla，然后用YPR- II大孔樹(shù)脂柱純化， 再用氫氧化鈉水解得到1-N-乙基慶大霉素Cla水解液，水解液冷卻稀釋后先采用強(qiáng)酸性的 732 (H+)樹(shù)脂吸附，再用高濃度的氨水解析，濃縮后再用YPR- II大孔樹(shù)脂純化，最后再用乙 醇洗脫，得到1-N-乙基慶大霉素Cla洗脫液。該步驟沒(méi)有對(duì)3，2’，6’ -三-N-乙?；鶓c大霉 素Cla中的3個(gè)羥基進(jìn)行保護(hù)，會(huì)導(dǎo)致羥基也發(fā)生烷基化等副反應(yīng)，從而影響收率。最后，制備1-N-乙基慶大霉素Cla硫酸鹽，即將1-N-乙基慶大霉素Cla洗脫液減 壓濃縮后加入硫酸，然后再加入活性炭，在60°C攪拌保溫30分鐘，過(guò)濾，最后將濾液凍干得 1-N-乙基慶大霉素Cla硫酸鹽，最終的重量收率為45%(摩爾收率不到30%)。該步驟是先得 到含有1-N-乙基慶大霉素Cla硫酸鹽的濾液，然后對(duì)濾液進(jìn)行凍干得到1-N-乙基慶大霉素 Cla硫酸鹽，因此操作比較復(fù)雜，要求較高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)上述不足，提供一種收率較高的1-N-乙基慶大霉素Cla硫酸 鹽的制備方法。實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案步驟如下一種1-N-乙基慶大霉素Cla硫酸鹽的制備方法， 具有以下步驟①在15°C 25°C的溫度下將慶大霉素Cla ( I )和乙酸鋅在甲醇溶劑中進(jìn) 行配位反應(yīng)，形成慶大霉素Cla_Zn配合物；②然后將步驟①的體系的溫度降至0°C 10°C， 攪拌下向步驟①的體系中滴加由乙酸酐、三乙胺以及四氫呋喃組成的混合液而發(fā)生生成 3，2’，6’ -三-N-乙?；鶓c大霉素Cla-Zn配合物的?；磻?yīng)，滴完后繼續(xù)攪拌反應(yīng)lh 2h， 然后加水、減壓蒸餾得到含有3，2’，6’ -三-N-乙?；鶓c大霉素Cla-Zn配合物的濃縮液；③ 對(duì)步驟②得到的濃縮液進(jìn)行后處理得到3，2’，6’ -三-N-乙?；鶓c大霉素Cla( II);④將步驟
4③得到的3，2’，6’ -三-N-乙酰基慶大霉素Cla與六甲基二硅胺烷在三氯甲烷溶劑中，在濃 硫酸的催化作用下加熱至回流而發(fā)生生成3，2’，6’ -三-N-乙?；?5，2”，4”-三(三甲基硅 基)慶大霉素Cla (III)的硅烷化反應(yīng)，直至反應(yīng)完全；⑤將步驟④得到的3，2’，6’ -三-N-乙 酰基-5，2”，4”-三(三甲基硅基)慶大霉素Cla與乙醛在二氯甲烷溶劑中在8V 12°C的 溫度下進(jìn)行生成3，2’，6’ -三-N-乙?；?5，2”，4”-三(三甲基硅基)乙亞胺慶大霉素Cla (IV)的N-烷基化反應(yīng)；接著再與硼氫化鉀發(fā)生生成3，2’，6’ -三-N-乙?；?5，2”，4”-三 (三甲基硅基)-1-N-乙基慶大霉素Cla (V)的還原反應(yīng)，直至反應(yīng)完全；⑥用NaOH溶液水 解步驟⑤得到的3，2’，6’ -三-N-乙?；?5，2”，4”-三(三甲基硅基)-1-N-乙基慶大霉素 Cla得到1-N-乙基慶大霉素Cla的水解液；⑦對(duì)步驟⑥得到的1-N-乙基慶大霉素Cla水解液 進(jìn)行后處理得到1-N-乙基慶大霉素Cla (VI)成品；⑧將步驟⑦得到的1-N-乙基慶大霉素 Cla加入到無(wú)水乙醇或者無(wú)水甲醇中攪拌溶解，然后在15°C 25°C的溫度下滴加濃硫酸而 發(fā)生生成1-N-乙基慶大霉素Cla硫酸鹽的反應(yīng)，直至溶液的pH為5 6時(shí)停止滴加，然后 繼續(xù)攪拌反應(yīng)lh 2h ；⑨將步驟⑧的反應(yīng)后的物料過(guò)濾，用無(wú)水乙醇洗滌濾餅，最后真空 干燥濾餅得到1-N-乙基慶大霉素Cla硫酸鹽(vn)。上述步驟①中所述的乙酸鋅與慶大霉素Cla的重量比為1 1 1 1.5;所述的 慶大霉素Cla與甲醇的重量體積比(g/mL)為1 10 1 15。上述步驟②中所述的乙酸酐與慶大霉素Cla的摩爾比為3 1 5 1。上述步驟③中所述的后處理是將步驟②得到的濃縮液加水稀釋?zhuān)缓髮?duì)稀釋液 進(jìn)行納濾處理，直至稀釋液中鋅離子濃度< lOug/mL，再將納濾液進(jìn)行減壓濃縮，最后噴霧 干燥得到3，2’，6’ -三-N-乙?；鶓c大霉素Cla。上述步驟③中所述的后處理是將步驟②得到的濃縮液通入層析分離柱中上樣， 然后用純化水沖洗，再用乙醇水溶液解析，收集層析分離柱出口的有效成分，將收集液減壓 濃縮，最后冷凍干燥得到3，2’，6’ -三-N-乙?；鶓c大霉素Cla。上述步驟③中上樣的流速為30mL/h 70mL/h ；沖洗的時(shí)間為8h 12h，沖洗的流 速為150mL/h 250mL/h ；用于解析的乙醇水溶液的濃度為30wt%，解析的流速為80mL/h 120mL/h。上述步驟④中的六甲基二硅胺烷與3，2’，6’ -三-N-乙?；鶓c大霉素Cla的摩爾比 為1. 5 1 5 1 ；濃硫酸與3，2’，6’ -三-N-乙酰基慶大霉素Cla的摩爾比為1 20 1 30;步驟⑤的乙醛與步驟④中的3，2’，6’_三-N-乙?；鶓c大霉素Cla的摩爾比為 0.5 1 2 1 ；步驟⑤的還原反應(yīng)在硼酸緩沖液中進(jìn)行，所述的硼酸緩沖液的pH為9 10。上述步驟⑦中所述的后處理是將水解液通入弱酸性的樹(shù)脂分離柱中上柱，然后 用純化水洗柱8h 9h，再用氨水溶液解析，至出口無(wú)旋光時(shí)換成乙醇水溶液解析，收集出 口處純度> 90%的有效組分，收集液經(jīng)濃縮、干燥后得到1-N-乙基慶大霉素Cla。所述的氨 水溶液的濃度為0. lmol/L 0. 4mol/L ；所述的乙醇水溶液的濃度為25wt% 40wt%。上述步驟④中，在硅烷化反應(yīng)完全后，蒸干三氯甲烷溶劑而得到 3，2’，6’ -三-N-乙?；?5，2”，4” -三(三甲基硅基)慶大霉素Cla ；步驟⑤的N-烷基化反 應(yīng)是直接將步驟④得到的體系降溫至20°C 25°C，加入二氯甲烷，繼續(xù)降溫至8°C 12°C， 再加入乙醛，攪拌下發(fā)生生成3，2’，6’ -三-N-乙?；?5，2”，4” -三(三甲基硅基)乙亞胺
5慶大霉素Cla的N-烷基化反應(yīng)；步驟⑤中，在還原反應(yīng)完全后，加熱回流蒸干二氯甲烷溶劑 而得到3，2’，6’ -三-N-乙?；?5，2”，4”-三(三甲基硅基)-I-N-乙基慶大霉素Cla ；步 驟⑥的水解是直接對(duì)步驟⑤得到的體系加入NaOH溶液，加熱回流對(duì)3，2’，6’ -三-N-乙酰 基-5，2”，4”-三(三甲基硅基)-I-N-乙基慶大霉素Cla進(jìn)行水解直至水解完全后，降溫而 得到I-N-乙基慶大霉素Cla的水解液。
反應(yīng)方程式如下
本發(fā)明具有的積極效果是(1)本發(fā)明選用乙酸鋅與慶大霉素Cla中的1-氨基、2”-羥 基、3”-氨基以及4”-羥基形成非常穩(wěn)定的慶大霉素Cla-Zn配合物，然后再對(duì)未配位的3-氨 基、2’-氨基、6’-氨基進(jìn)行乙?；磻?yīng)，這樣可以提高收率。這是因?yàn)殇\離子具有d1(l電子構(gòu) 型，從而與慶大霉素Cla分子中的氨基-羥基形成正四面體構(gòu)型，正四面體構(gòu)型能量最低，配 體間排斥力最小，因此非常穩(wěn)定。而鈷離子具有d7電子構(gòu)型、銅離子具有d9電子構(gòu)型，它們 均與慶大霉素Cla分子中的氨基-羥基形成平面正方形結(jié)構(gòu)，其穩(wěn)定性降低。(2)本發(fā)明的 配位反應(yīng)在甲醇溶劑中進(jìn)行，其收率也要高于在非質(zhì)子極性的有機(jī)溶劑(如二甲基甲酰胺、 二甲基亞砜等)中進(jìn)行的收率。(3)本發(fā)明的配位反應(yīng)在室溫下進(jìn)行，而?；磻?yīng)的溫度控 制在10°C以下，這是由于乙酸酐與慶大霉素Cla-Zn配合物的?；磻?yīng)是明顯的放熱反應(yīng)， 一方面降低反應(yīng)溫度可以使化學(xué)平衡向放熱反應(yīng)方向移動(dòng)，即向生成3，2’，6’ -三-N-乙 ?；鶓c大霉素Cla-Zn配合物的方向移動(dòng)，提高收率；另一方面，還可以防止反應(yīng)液因局部過(guò) 熱而破壞配合物的結(jié)構(gòu)。(4)本發(fā)明的酰化反應(yīng)中加入三乙胺，這樣可以加快反應(yīng)的進(jìn)行，提高收率。(5)本發(fā)明在后處理中采用納濾處理，使鋅離子濃度< lOug/mL，從而有效破壞 3，2’，6’ -三-N-乙?；鶓c大霉素Cla-Zn配合物而得到3，2’，6’ -三-N-乙?；鶓c大霉素 Cla0該處理既比用樹(shù)脂吸附、氨水解析、樹(shù)脂純化等簡(jiǎn)單，而且使3，2’，6’ -三-N-乙酰基 慶大霉素Cla-Zn配合物幾乎完全轉(zhuǎn)化為3，2’，6’ -三-N-乙?；鶓c大霉素Cla，大大提高了 收率。(6)本發(fā)明在N-烷基化反應(yīng)之前用六甲基二硅胺烷對(duì)3，2’，6’ -三-N-乙酰基慶大 霉素Cla的3個(gè)醇羥基進(jìn)行硅烷化保護(hù)反應(yīng)，這樣可以避免羥基的烷基化副反應(yīng)，從而大大 提高了收率。(7)本發(fā)明在硅烷化保護(hù)反應(yīng)中采用濃硫酸作為催化劑，因?yàn)樵诜撬軇w 系中，濃硫酸的離解是很少的，酸分子和羰基氧原子間易形成氫鍵，使C=O鍵的極化作用增 強(qiáng)，羰基碳上的正電荷增多，更有利于親核試劑——胺的進(jìn)攻；同時(shí)，濃硫酸還有助于把羥 基從過(guò)渡態(tài)碳四面體上脫下來(lái)，加速了脫水過(guò)程。但是，過(guò)量的濃硫酸也會(huì)使目標(biāo)氨基質(zhì)子 化，減少了游離氨基的濃度，減低了其親核進(jìn)攻的能力，因此本發(fā)明選擇的濃硫酸摩爾數(shù)與 3，2’，6’-三-N-乙?；鶓c大霉素Cla的摩爾數(shù)之比1 20 1 30。(8)在酸性環(huán)境中亞 胺易被水解，在堿性環(huán)境中亞胺也易被水解，為了避免亞胺在被硼氫化鉀還原的過(guò)程中被 水解，我們選用了 PH值為9 10的硼酸緩沖液作為反應(yīng)介質(zhì)，從而避免了亞胺被水解，提 高了收率。(9)本發(fā)明在后處理時(shí)采用弱酸性樹(shù)脂分離，從而提高了收率。(10)本發(fā)明由 I-N-乙基慶大霉素Cla得到I-N-乙基慶大霉素Cla硫酸鹽的方法是先得到含有I-N-乙基 慶大霉素Cla硫酸鹽的濾餅，最后只需要對(duì)濾餅進(jìn)行真空干燥即可，操作簡(jiǎn)單，而且收率高。 (11)本發(fā)明中得到3，2’，6’ -三-N-乙酰基慶大霉素Cla的收率高達(dá)90%以上，得到1_N_乙 基慶大霉素Cla的收率高達(dá)45%以上，得到I-N-乙基慶大霉素Cla硫酸鹽的收率高達(dá)40%以 上。
具體實(shí)施例方式(實(shí)施例1)
①在15°C 25°C的溫度下向三口反應(yīng)瓶中加入IOOOmL的甲醇溶劑、90g的慶大霉素 Cla (0.2mol)以及IlOg的乙酸鋅，攪拌使其充分溶解，慶大霉素Cla ( I )與乙酸鋅發(fā)生配位 反應(yīng)得到慶大霉素Cla-Zn配合物。②將步驟①的體系的溫度降至0°C 10°C，攪拌下向步驟①的體系中滴加由 85mL乙酸酐(0. 9mol)、350mL三乙胺以及150mL四氫呋喃組成的混合液，而發(fā)生生成 3，2’，6’ -三-N-乙?；鶓c大霉素Cla-Zn配合物的酰化反應(yīng)，滴完繼續(xù)攪拌保溫反應(yīng)lh。然 后向反應(yīng)后的物料中加入300mL的純化水，再放置到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中在60°C的溫度下抽真空 減壓蒸餾至得到含有3，2’，6’ -三-N-乙?；鶓c大霉素Cla-Zn配合物的300mL的濃縮液，然 后降溫至30°C。③對(duì)步驟②得到的濃縮液進(jìn)行后處理通入層析分離柱中以50mL/h的流速進(jìn)行 上樣，上樣結(jié)束后用純化水以200mL/h的流速?zèng)_洗10h，然后用濃度為30wt%的乙醇水溶液 以100mL/h的流速進(jìn)行解析，收集層析分離柱出口的有效成分(即有旋光的部分)，將收集液 放置到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中在60°C的溫度下真空減壓濃縮至50mL的濃縮液，最后將濃縮液放置 到冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥得到108g粉狀的3，2’，6’ -三-N-乙酰基慶大霉素Cla(II),收率 達(dá)93. 9%,純度達(dá)92%。
④在已干燥的帶回流裝置的三口瓶中加入IOOmL的三氯甲烷溶劑、20mL的六甲 基二硅胺烷(0. 104mol)以及0.05mL的起催化作用的濃硫酸(98wt%)，然后加入15g步 驟③制得的3，2’，6’ -三-N-乙?；鶓c大霉素Cla (0. 026mol),加熱至回流而發(fā)生生成 3，2’，6’ -三-N-乙?；?5，2”，4” -三(三甲基硅基)慶大霉素Cla的硅烷化反應(yīng)，直至 反應(yīng)完全，加熱回流的時(shí)間為5h。然后，蒸干三氯甲烷溶劑，得到3，2’，6’ -三-N-乙酰 基-5，2”，4”-三(三甲基硅基)慶大霉素Cla (III)。⑤將步驟④的體系降溫至20°C 25°C，加入IOOmL的二氯甲烷，繼續(xù)降溫至10°C， 加入1. 5mL的乙醛，攪拌下發(fā)生生成3，2’，6’ -三-N-乙?；?5，2”，4”-三(三甲基硅基)乙 亞胺慶大霉素Cla(IV)的N-烷基化反應(yīng)。然后加入20mL的pH為9 10的硼酸緩沖液(該 硼酸緩沖液由0. 6g硼酸、15mL水以及5ml濃度為20wt%的NaOH溶液組成)，再加入2. 8g的 硼氫化鉀，攪拌下發(fā)生生成3，2’，6’ -三-N-乙?；?5，2”，4”-三(三甲基硅基)-1-Ν-乙基 慶大霉素Cla的還原反應(yīng)1. 5h。然后加熱回流蒸干二氯甲烷溶劑，得到3，2’，6’ -三-N-乙 ?；?5，2”，4”-三(三甲基硅基)-I-N-乙基慶大霉素Cla (V)0⑥向體系中加入120mL濃度為20wt%的NaOH溶液，加熱至回流而對(duì) 3，2’，6’ -三-N-乙?；?5，2”，4”-三(三甲基硅基)-I-N-乙基慶大霉素Cla進(jìn)行水解直 至水解完全，水解反應(yīng)的時(shí)間為24h。然后，降溫至40°C，得到I-N-乙基慶大霉素Cla水解 液。水解液做HPLC檢測(cè)，3，2’，6’ -三-N-乙酰基慶大霉素Cla的轉(zhuǎn)化率為70. 2%。⑦將步驟⑥得到的水解液進(jìn)行后處理將水解液通入揚(yáng)州制藥廠(chǎng)生產(chǎn)的型號(hào)為 HD- II的弱酸性樹(shù)脂分離柱中上柱，然后用純化水洗柱9h，再用0. 2mol/L的氨水溶液解 析，至出口無(wú)旋光時(shí)換成30wt%的乙醇水溶液解析，收集出口處純度> 90% (高壓液相色 譜HPLC法檢測(cè))的有效組分，將收集液放置到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中在60°C的溫度下真空減壓濃 縮至40mL，最后再真空冷凍干燥得6. Og的I-N-乙基慶大霉素Cla (VI)，收率為48. 2% (以 3，2’，6’ -三-N-乙?；鶓c大霉素Cla計(jì))。⑧在三口反應(yīng)瓶中加入50mL的無(wú)水乙醇，然后加入5g步驟⑦制得的1_N_乙基慶 大霉素Cla，攪拌使其充分溶解，然后在20°C下滴加8mol/L的濃硫酸而發(fā)生生成1_N_乙基 慶大霉素Cla硫酸鹽的反應(yīng)，控制滴加速度，有白色固體析出，當(dāng)溶液的pH在5 6時(shí)停止 滴加，繼續(xù)攪拌反應(yīng)lh。⑨將步驟⑧的反應(yīng)后的物料過(guò)濾，用少量無(wú)水乙醇洗滌濾餅，然后將濾餅在45°C 的溫度下真空干燥，得到7. 4g的I-N-乙基慶大霉素Cla硫酸鹽(VII)，收率為97. 8%，(以 I-N-乙基慶大霉素Cla計(jì))。
(實(shí)施例2)
本實(shí)施例其余與實(shí)施例1相同，不同之處在于步驟③將步驟②得到的濃縮液加水稀 釋至2000mL，然后用美國(guó)DE公司生產(chǎn)的DL8040型納濾膜對(duì)稀釋液進(jìn)行納濾處理，直至稀釋 液中鋅離子濃度< lOug/mL，再將納濾液放置到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中在60°C的溫度下真空減壓得 到50mL的濃縮液，最后將濃縮液噴霧干燥得到1 IOg粉狀的3，2’，6’ -三-N-乙酰基慶大霉 素Cla，收率達(dá)94. 9%，純度達(dá)92%。
(實(shí)施例3 實(shí)施例6)各實(shí)施例的制備方法與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于步驟②中所用的乙酸酐與 慶大霉素Cla的摩爾比不同，乙酸酐用量對(duì)反應(yīng)收率的影響見(jiàn)表1。
表 1
由表1可知，，增加乙酸酐的用量，反應(yīng)收率會(huì)有所增加，當(dāng)摩爾比達(dá)到4.5 1之后， 再增大乙酸酐的用量，其收率反而有所下降，因此乙酸酐與慶大霉素Cla最佳的摩爾比為 4. 5 1。
(實(shí)施例7 實(shí)施例13)
各實(shí)施例的制備方法與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于步驟④中所用的六甲基二 硅胺烷與3，2’，6’ -三-N-乙酰基慶大霉素Cla的摩爾比，各實(shí)施例的摩爾比以及對(duì)反應(yīng)的 影響見(jiàn)表2。表2
理論上，lm。l的六甲基二硅胺烷可以使2m。l的醇羥基硅烷化，而每1分子的3，2’，6’一三一N一乙酰基慶大霉素C、。有3個(gè)醇羥基，因此，六甲基二硅胺烷與3，2’，6’-三-N-乙?；鶓c大霉素Cla的理論摩爾比為1.5 1。但從表2可以看出，按理論 量投入六甲基二硅胺烷進(jìn)行反應(yīng)，3，2’，6’ -三-N-乙?；鶓c大霉素Cla的轉(zhuǎn)化率不高，而加 大六甲基二硅胺烷的用量后，轉(zhuǎn)化率明顯提高，但超過(guò)一定值(4.0 1)后，轉(zhuǎn)化率不再提 高。因此六甲基二硅胺烷與3，2’，6’-三-N-乙?；鶓c大霉素Cla的摩爾比為4.0 1是最 佳的。
(實(shí)施例14 實(shí)施例17)
各實(shí)施例的制備方法與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于步驟中⑤所用的乙醛與步 驟④中所用的3，2’，6’ -三-N-乙酰基慶大霉素Cla的摩爾比，各實(shí)施例的摩爾比以及對(duì)反 應(yīng)的影響見(jiàn)表3。 表 3
從表3可以看出，加大乙醛的用量，雖然轉(zhuǎn)化率略有提高，但兩個(gè)副反應(yīng)產(chǎn)物ETM-I (3”-N-乙基慶大霉素Cla)和ETM-2 (1，3”- 二 -N-乙基慶大霉素Cla)的量也明顯增加，而 這兩個(gè)副反應(yīng)產(chǎn)物在下步分離當(dāng)中是很難去除的。因此，乙醛與3，2’，6’ -三-N-乙?；鶓c 大霉素Cla的摩爾比為1 1是最佳的。
(對(duì)比例1 對(duì)比例2)
各對(duì)比例的制備方法與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于將步驟①中所用的乙酸鋅 分別換成等摩爾的乙酸鈷、乙酸銅，得到的3，2’，6’ -三-N-乙?；鶓c大霉素Cla的收率和純 度見(jiàn)表4。表 4
由表4可知，采用乙酸鋅的收率最高，其次是乙酸鈷，乙酸銅最低，因此本發(fā)明采用乙 酸鋅作為過(guò)渡金屬乙酸鹽與慶大霉素Cla進(jìn)行配位反應(yīng)。
(對(duì)比例3 對(duì)比例5)
各對(duì)比例的制備方法與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于將步驟①中所用的溶劑甲 醇分別換成等體積的水、N，N’_ 二甲基甲酰胺、二甲亞砜，得到的3，2’，6’ -三-N-乙?；鶓c 大霉素Cla的收率和純度見(jiàn)表5。表 5
由表5可知，用水作為溶劑效果最差，用二甲亞砜或二甲基甲酰胺作為溶劑效果其次， 用甲醇作為溶劑效果最好，因此本發(fā)明采用甲醇作為溶劑。
(對(duì)比例6 對(duì)比例7)
各對(duì)比例的制備方法與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于將步驟⑦中所用的揚(yáng)州制 藥廠(chǎng)生產(chǎn)的型號(hào)為HD- II的弱酸性樹(shù)脂分別換成揚(yáng)州制藥廠(chǎng)生產(chǎn)的型號(hào)為732的強(qiáng)酸性樹(shù) 脂以及揚(yáng)州制藥廠(chǎng)生產(chǎn)的型號(hào)為YPR- II的大孔樹(shù)脂。得到的I-N-乙基慶大霉素Cla的重 量和收率見(jiàn)表3。表 6
從表6可以看出，使用本發(fā)明的HD- II弱酸性樹(shù)脂進(jìn)行分離能取得較好的效果，對(duì)收率 有明顯幫助。
權(quán)利要求
一種1 N 乙基慶大霉素C1a硫酸鹽的制備方法，其特征在于具有以下步驟①在15℃～25℃的溫度下將慶大霉素C1a和乙酸鋅在甲醇溶劑中進(jìn)行配位反應(yīng)，形成慶大霉素C1a Zn配合物；②然后將步驟①的體系的溫度降至0℃～10℃，攪拌下向步驟①的體系中滴加由乙酸酐、三乙胺以及四氫呋喃組成的混合液而發(fā)生生成3,2',6' 三 N 乙酰基慶大霉素C1a Zn配合物的?；磻?yīng)，滴完后繼續(xù)攪拌反應(yīng)1h～2h，然后加水、減壓蒸餾得到含有3,2',6' 三 N 乙?；鶓c大霉素C1a Zn配合物的濃縮液；③對(duì)步驟②得到的濃縮液進(jìn)行后處理得到3,2',6' 三 N 乙?；鶓c大霉素C1a；④將步驟③得到的3,2',6' 三 N 乙?；鶓c大霉素C1a與六甲基二硅胺烷在三氯甲烷溶劑中，在濃硫酸的催化作用下加熱至回流而發(fā)生生成3,2',6' 三 N 乙?；?5,2”,4” 三(三甲基硅基)慶大霉素C1a的硅烷化反應(yīng)，直至反應(yīng)完全；⑤將步驟④得到的3,2',6' 三 N 乙?；?5,2”,4” 三(三甲基硅基)慶大霉素C1a與乙醛在二氯甲烷溶劑中在8℃～12℃的溫度下進(jìn)行生成3,2',6' 三 N 乙?；?5,2”,4” 三(三甲基硅基)乙亞胺慶大霉素C1a的N 烷基化反應(yīng)；接著再與硼氫化鉀發(fā)生生成3,2',6' 三 N 乙?；?5,2”,4” 三(三甲基硅基) 1 N 乙基慶大霉素C1a的還原反應(yīng)，直至反應(yīng)完全；⑥用NaOH溶液水解步驟⑤得到的3,2',6' 三 N 乙?；?5,2”,4” 三(三甲基硅基) 1 N 乙基慶大霉素C1a得到1 N 乙基慶大霉素C1a的水解液；⑦對(duì)步驟⑥得到的1 N 乙基慶大霉素C1a水解液進(jìn)行后處理得到1 N 乙基慶大霉素C1a成品；⑧將步驟⑦得到的1 N 乙基慶大霉素C1a加入到無(wú)水乙醇或者無(wú)水甲醇中攪拌溶解，然后在15℃～25℃的溫度下滴加濃硫酸而發(fā)生生成1 N 乙基慶大霉素C1a硫酸鹽的反應(yīng)，直至溶液的pH為5～6時(shí)停止滴加，然后繼續(xù)攪拌反應(yīng)1h～2h；⑨將步驟⑧的反應(yīng)后的物料過(guò)濾，用無(wú)水乙醇洗滌濾餅，最后真空干燥濾餅得到1 N 乙基慶大霉素C1a硫酸鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的I-N-乙基慶大霉素Cla硫酸鹽的制備方法，其特征在于步 驟①中所述的乙酸鋅與慶大霉素Cla的重量比為1 1 1 1.5;所述的慶大霉素Cla與 甲醇的重量體積比(g/mL)為1 10 1 15。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的I-N-乙基慶大霉素Cla硫酸鹽的制備方法，其特征在于步 驟②中所述的乙酸酐與慶大霉素Cla的摩爾比為3 1 5 1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的I-N-乙基慶大霉素Cla硫酸鹽的制備方法，其特征在于 步驟③中所述的后處理是將步驟②得到的濃縮液加水稀釋?zhuān)缓髮?duì)稀釋液進(jìn)行納濾處 理，直至稀釋液中鋅離子濃度< lOug/mL，再將納濾液進(jìn)行減壓濃縮，最后噴霧干燥得到 3，2’，6’ -三-N-乙?；鶓c大霉素Cla。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的I-N-乙基慶大霉素Cla硫酸鹽的制備方法，其特征在于步驟 ③中所述的后處理是將步驟②得到的濃縮液通入層析分離柱中上樣，然后用純化水沖洗， 再用乙醇水溶液解析，收集層析分離柱出口的有效成分，將收集液減壓濃縮，最后冷凍干燥 得到3，2’，6’ -三-N-乙?；鶓c大霉素Cla0
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的I-N-乙基慶大霉素Cla硫酸鹽的制備方法，其特征在于步驟③中上樣的流速為30mL/h 70mL/h ；沖洗的時(shí)間為8h 12h，沖洗的流速為150mL/h 250mL/h ；用于解析的乙醇水溶液的濃度為30wt%，解析的流速為80mL/h 120mL/h。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的I-N-乙基慶大霉素Cla硫酸鹽的制備方法，其特征在于步 驟④中的六甲基二硅胺烷與3，2’，6’-三-N-乙?；鶓c大霉素Cla的摩爾比為1.5 1 5 1 ；濃硫酸與3，2’，6’ -三-N-乙?；鶓c大霉素Cla的摩爾比為1 20 1 30 ；步驟 ⑤的乙醛與步驟④中的3，2’，6’-三-N-乙?；鶓c大霉素Cla的摩爾比為0.5 1 2 1; 步驟⑤的還原反應(yīng)在硼酸緩沖液中進(jìn)行，所述的硼酸緩沖液的pH為9 10。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的I-N-乙基慶大霉素Cla硫酸鹽的制備方法，其特征在于步驟 ⑦中所述的后處理是將水解液通入弱酸性的樹(shù)脂分離柱中上柱，然后用純化水洗柱8h 9h，再用氨水溶液解析，至出口無(wú)旋光時(shí)換成乙醇水溶液解析，收集出口處純度> 90%的有 效組分，收集液經(jīng)濃縮、干燥后得到I-N-乙基慶大霉素Cla。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的I-N-乙基慶大霉素Cla硫酸鹽的制備方法，其特征在于所述 的氨水溶液的濃度為0. lmol/L 0. 4mol/L ；所述的乙醇水溶液的濃度為25wt% 40wt%。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至9之一所述的I-N-乙基慶大霉素Cla硫酸鹽的制備方法，其特 征在于步驟④中，在硅烷化反應(yīng)完全后，蒸干三氯甲烷溶劑而得到3，2’，6’ -三-N-乙酰 基-5，2”，4”-三(三甲基硅基)慶大霉素Cla ；步驟⑤的N-烷基化反應(yīng)是直接將步驟④得到的 體系降溫至20°C 25°C，加入二氯甲烷，繼續(xù)降溫至8°C 12°C，再加入乙醛，攪拌下發(fā)生 生成3，2’，6’ -三-N-乙?；?5，2”，4”-三(三甲基硅基)乙亞胺慶大霉素Cla的N-烷基化 反應(yīng)；步驟⑤中，在還原反應(yīng)完全后，加熱回流蒸干二氯甲烷溶劑而得到3，2’，6’ -三-N-乙 ?；?5，2”，4”-三(三甲基硅基)-I-N-乙基慶大霉素Cla ；步驟⑥的水解是直接對(duì)步驟⑤ 得到的體系加入NaOH溶液，加熱回流對(duì)3，2’，6’ -三-N-乙?；?5，2”，4” -三(三甲基硅 基)-I-N-乙基慶大霉素Cla進(jìn)行水解直至水解完全后，降溫而得到I-N-乙基慶大霉素Cla 的水解液。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種1-N-乙基慶大霉素C1a硫酸鹽的制備方法，具有以下步驟將慶大霉素C1a和乙酸鋅在甲醇溶劑中進(jìn)行配位反應(yīng)，然后滴加由乙酸酐、三乙胺以及四氫呋喃組成的混合液進(jìn)行酰化反應(yīng)，經(jīng)過(guò)后處理得到3,2',6'-三-N-乙?；鶓c大霉素C1a。然后與六甲基二硅胺烷在三氯甲烷溶劑中進(jìn)行硅烷化反應(yīng)，然后與乙醛在二氯甲烷溶劑中進(jìn)行N-烷基化反應(yīng)，再與硼氫化鉀進(jìn)行還原反應(yīng)，用NaOH溶液水解，經(jīng)過(guò)后處理得到1-N-乙基慶大霉素C1a。將1-N-乙基慶大霉素C1a加入到無(wú)水乙醇或者無(wú)水甲醇中攪拌溶解，然后滴加濃硫酸，再經(jīng)過(guò)后處理得到1-N-乙基慶大霉素C1a硫酸鹽。本發(fā)明的方法收率較高。
文檔編號(hào)C07H1/00GK101928312SQ20101013296
公開(kāi)日2010年12月29日 申請(qǐng)日期2010年3月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月26日
發(fā)明者封成軍, 李興剛, 畢曉明, 狄紹炎, 胡東輝, 蘇曉春 申請(qǐng)人:常州方圓制藥有限公司