專(zhuān)利名稱(chēng)：Notch1受體結(jié)合劑和其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包含結(jié)合人類(lèi)Notch受體的試劑的組合物和使用所述組合物來(lái)表征、 診斷和治療癌和其它疾病的方法。特別地，本發(fā)明提供與人類(lèi)Notchl受體的胞外域的非配 體結(jié)合近膜區(qū)特異性結(jié)合并抑制腫瘤生長(zhǎng)的抗體。本發(fā)明還提供治療癌的方法，所述方法 包括施用治療有效量的抗體，所述抗體與人類(lèi)Notchl受體蛋白的胞外域的非配體結(jié)合近 膜區(qū)特異性結(jié)合，并抑制腫瘤生長(zhǎng)。
背景技術(shù)：
癌是發(fā)達(dá)國(guó)家中死亡的一個(gè)主要原因，僅在美國(guó)每年就導(dǎo)致超過(guò)500，000例死 亡。在美國(guó)每年超過(guò)1百萬(wàn)人診斷患有癌，并且總體來(lái)說(shuō)據(jù)估計(jì)超過(guò)三分之一的人在其一 生中會(huì)患上某種形式的癌。雖然存在超過(guò)200種不同類(lèi)型的癌，但其中四種_乳癌、肺癌、 結(jié)腸直腸癌和前列腺癌_占所有新病例的超過(guò)一半(Jemal等，2003，CancerJ. Clin. 55 5-26)。癌起因于控制正常組織發(fā)育和維持的機(jī)制的失調(diào)，并且越來(lái)越多地認(rèn)為干細(xì)胞起 中心作用(Beachy等，2004，Nature 432 324)。正常動(dòng)物發(fā)育期間，大多數(shù)組織或所有組織 的細(xì)胞源自正常的稱(chēng)為干細(xì)胞的前體(Morrison等，1997，Cell 88 :287_98 ；Morrison等， 1997, Curr. Opin. Immunol. 9-216-21 ；Morrison 等，1995, Annu. Rev. Cell. Dev. Biol. 11 35-71)。干細(xì)胞是具有以下特征的細(xì)胞(1)具有廣泛的增殖能力；2)能夠進(jìn)行不對(duì)稱(chēng)細(xì)胞 分裂從而產(chǎn)生增殖和/或發(fā)育潛能減少的一種或多種子代；和(3)能夠進(jìn)行對(duì)稱(chēng)細(xì)胞分裂 以用于自我更新或自我維持。通過(guò)干細(xì)胞分化進(jìn)行的成體細(xì)胞更新的眾所周知的實(shí)例是造 血系統(tǒng)，在造血系統(tǒng)中，發(fā)育未成熟的前體(造血干細(xì)胞和祖細(xì)胞)響應(yīng)于分子信號(hào)從而形 成各種類(lèi)型的血細(xì)胞和淋巴樣細(xì)胞。包括腸、乳腺導(dǎo)管系統(tǒng)和皮膚的細(xì)胞在內(nèi)的其它細(xì)胞， 由在各組織中的小群干細(xì)胞不斷補(bǔ)充，并且最近的研究表明大多數(shù)其它成體組織也擁有干 細(xì)胞，包括腦。實(shí)體瘤由不均一的細(xì)胞群組成。例如，乳癌是癌細(xì)胞和正常細(xì)胞的混合物，包括 間葉細(xì)胞(間質(zhì)細(xì)胞)、炎性細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞。癌的經(jīng)典模型認(rèn)為表型不同的癌細(xì)胞群都 具有增殖和產(chǎn)生新腫瘤的能力。在經(jīng)典模型中，腫瘤細(xì)胞的不均一性是由環(huán)境因素以及 癌細(xì)胞內(nèi)持續(xù)進(jìn)行的突變所致，產(chǎn)生各種致瘤細(xì)胞的群體。該模型基于所有的腫瘤細(xì)胞群 體都會(huì)具有某種程度致瘤潛能的想法。(Pandis等，1998，Genes，Chromosomes & Cancer 12 122-129 ；Kuukasjrvi 等，1997，Cancer Res. 57 1597-1604；Bonsing 等，1993，Cancer 71:382_391；Bonsing 等，2000, Genes Chromosomes &Cancer 82 :173_183 ；Beerman H 等， 1991，Cytometry 12 147-54 ；Aubele M & WernerM，1999，Analyt. Cell. Path. 19 53 ；Shen L 等，2000，Cancer Res. 60 3884)。用于觀察到的實(shí)體瘤細(xì)胞不均一性的替代性模型是實(shí)體瘤由“實(shí)體瘤干細(xì)胞”(或 來(lái)自于實(shí)體瘤的“癌干細(xì)胞”)產(chǎn)生，所述“實(shí)體瘤干細(xì)胞”(或來(lái)自于實(shí)體瘤的“癌干細(xì)胞”) 隨后通過(guò)幾輪對(duì)稱(chēng)和不對(duì)稱(chēng)細(xì)胞分裂而進(jìn)行混亂發(fā)育(chaotic development)。在該干細(xì)胞模型中，實(shí)體瘤含有亞類(lèi)不同且有限(甚至可能是稀少)的細(xì)胞，所述細(xì)胞與正?！案杉?xì) 胞”的共有性質(zhì)是它們廣泛地增殖，和有效地同時(shí)產(chǎn)生另外的實(shí)體瘤干細(xì)胞(自我更新)和 缺乏致瘤潛能的實(shí)體瘤的大多數(shù)腫瘤細(xì)胞。事實(shí)上，長(zhǎng)壽干細(xì)胞群內(nèi)的突變可以引起癌干 細(xì)胞的形成，該癌干細(xì)胞是腫瘤生長(zhǎng)和維持的基礎(chǔ)，并且其存在是目前治療方法失敗的原 因。癌的干細(xì)胞性質(zhì)首次披露于血癌，急性骨髓性白血病(AML)中(Lapidot等，1994， Nature 367:645-8)。最近已經(jīng)證明惡性人類(lèi)乳部腫瘤類(lèi)似地?fù)碛猩倭开?dú)特的癌干細(xì)胞 群，其經(jīng)富 集而具有在免疫缺陷小鼠中形成腫瘤的能力。發(fā)現(xiàn)與未分級(jí)腫瘤細(xì)胞相比， ESA+，CD44+，CD24-/low, Lin-細(xì)胞群的致瘤細(xì)胞富集 50 倍(Al-Hajj 等，2003，PNAS 100 3983-8)。預(yù)期分離致瘤性癌細(xì)胞的能力允許研究作為這些細(xì)胞中致瘤性基礎(chǔ)的關(guān)鍵生物 學(xué)途徑，并因此預(yù)示為癌癥患者開(kāi)發(fā)更好的診斷檢驗(yàn)和治療。本發(fā)明正是針對(duì)該目的。正常干細(xì)胞和癌干細(xì)胞都具有增殖和自我更新的能力，因此調(diào)節(jié)正常干細(xì)胞發(fā) 育的許多基因促進(jìn)腫瘤發(fā)生并不令人驚奇(Reya等綜述，2001，Nature 414 105-111和 Taipale & Beachy, 2001, Nature 411 :349_354)。本發(fā)明將諸如 Notchl 等 Notch 受體鑒定 為在癌干細(xì)胞的維持中涉及Notch信號(hào)傳導(dǎo)途徑的癌干細(xì)胞的標(biāo)記物，并鑒定為通過(guò)消除 這些致瘤細(xì)胞來(lái)治療癌的靶標(biāo)。Notch信號(hào)傳導(dǎo)途徑是胚胎模式形成、胚后組織維持和干細(xì)胞生物學(xué)的幾種關(guān)鍵 調(diào)節(jié)方式之一。更特別的是，Notch信號(hào)傳導(dǎo)參與相鄰細(xì)胞命運(yùn)之間的側(cè)抑制過(guò)程，并且在 不對(duì)稱(chēng)細(xì)胞分裂期間在細(xì)胞命運(yùn)確定中起重要作用。失調(diào)的Notch信號(hào)傳導(dǎo)與許多人類(lèi)癌 有關(guān)，在這些癌中Notch信號(hào)傳導(dǎo)可以改變腫瘤細(xì)胞的發(fā)育命運(yùn)，將其維持在未分化的增 殖狀態(tài)(Brennan和Brown，2003，Breast Cancer Res. 5 :69)。因此，通過(guò)篡奪控制著正常 發(fā)育和由干細(xì)胞群進(jìn)行的組織修復(fù)的體內(nèi)平衡機(jī)制，可以導(dǎo)致癌形成。首先在果蠅突變體中鑒定出Notch受體，所述果蠅突變體患有單倍不足，導(dǎo)致翅 緣處的缺刻，而功能喪失型產(chǎn)生胚胎致死“神經(jīng)性”表型，該表型中表皮的細(xì)胞命運(yùn)轉(zhuǎn)變成 神經(jīng)組織(Moohr, 1919，Genet. 4 252 ；Poulson, 1937，PNAS 23 133 ；Poulson, 1940，J. Exp. Zool. 83 :271)。Notch受體是單跨膜的跨膜受體，在大型胞外域內(nèi)含有許多串聯(lián)的表皮生 長(zhǎng)因子(EGF)-樣重復(fù)和三個(gè)富含半胱氨酸的Notch/LIN-12重復(fù)(LNR) (Wharton等，1985， Cell 43 567 ；Kidd 等，1986，Mol. Cell. Biol. 6 3094 ；Artavanis 等綜述，1999，Science 284:770)。本文還將LNR和胞外域的另外的約103個(gè)氨基酸的C末端尾稱(chēng)為“近膜區(qū)”。該 區(qū)域已知也被稱(chēng)為Notch負(fù)調(diào)節(jié)區(qū)(NRR)。哺乳動(dòng)物Notch受體經(jīng)過(guò)切割以形成成熟受體，然后進(jìn)行配體結(jié)合從而激活下游 的信號(hào)傳導(dǎo)。成熟期間弗林蛋白酶(furin)-樣蛋白酶切割Notch受體的前體，從而產(chǎn)生 近膜異二聚體，該近膜異二聚體包含結(jié)合在一起處于自身抑制狀態(tài)的非共價(jià)連接的細(xì)胞外 亞基和跨膜亞基。配體結(jié)合解除了這種抑制并且誘導(dǎo)Notch受體被ADAM-型金屬蛋白酶和 Y-分泌酶切割，其中Y-分泌酶將胞內(nèi)域(I⑶)釋放到細(xì)胞質(zhì)中，使得其易位到細(xì)胞核從 而激活基因轉(zhuǎn)錄。ADAM進(jìn)行的切割發(fā)生在位于近膜負(fù)調(diào)節(jié)區(qū)(NRR)內(nèi)的非配體結(jié)合切割域 內(nèi)(參見(jiàn)圖1A)。Notchl受體中該區(qū)域包括約氨基酸1427 約氨基酸1732。 已經(jīng)鑒定出4種哺乳動(dòng)物Notch蛋白(Notchl、Notch2、Notch3和Notch4)，這些受 體中的突變總是導(dǎo)致發(fā)育異常和人類(lèi)病變，所述發(fā)育異常和人類(lèi)病變包括如以下詳述的幾種癌癥(Gridley, 1997，Mol. Cell. Neurosci. 9 103 Joutel & Tournier-Lasserve, 1998， Semin. Cell. Dev. Biol. 9 :619_25)。Notch受體受Delta，Serrated, Lag-2 (DSL)家族的單次跨膜配體激活。哺乳動(dòng)物 中存在 5 種已知的 Notch 配體Delta-樣 1 (DLLl) ,Delta-樣 3 (DLL3) ,Delta-樣 4 (DLL4)、 Jagged 1和Jagged 2，其特征在于DSL域和在胞外域內(nèi)的串聯(lián)的EGF-樣重復(fù)。Notch受 體的胞外域與通常位于相鄰細(xì)胞上的其配體的胞外域相互作用，導(dǎo)致Notch的2個(gè)蛋白 水解切割；一個(gè)由ADAM (A Disintegrin And Metallop印tidase，解整合素-金屬肽酶) 蛋白酶介導(dǎo)的胞外切割和一個(gè)由Y分泌酶介導(dǎo)的跨膜域內(nèi)的切割。后一切割產(chǎn)生Notch 胞內(nèi)域(ICD)，該Notch胞內(nèi)域然后進(jìn)入細(xì)胞核，在細(xì)胞核中其激活CBF1，Suppressor of Hairless [Su (H) ]，Lag-2 (CSL)家族的轉(zhuǎn)錄因子，上述家族的轉(zhuǎn)錄因子作為主要下游效應(yīng)子 增加Hairy和Split增強(qiáng)子[E(spl)]家族的細(xì)胞核堿性螺旋-環(huán)-螺旋轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄 (Artavanis 等，1999, Science 284 770 ；Brennan 禾口 Brown, 2003, Breast Cancer Res. 5 69 ；Iso 等，2003，Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 23 :543)。哺乳動(dòng)物中還可以存在涉 及果蠅中鑒定出的胞質(zhì)蛋白Deltex的替代性細(xì)胞內(nèi)途徑(Martinez等，2002，Curr. Opin. Genet. Dev. 12 :524_33)，并且該Deltex-依賴(lài)性途徑可以起到抑制Wnt靶基因表達(dá)的作用 (Brennan 等，1999，Curr. Biol. 9 :707_710 ；Lawrence 等，2001，Curr. Biol. 11 :375_85)。造血干細(xì)胞(HSC)是體內(nèi)了解最清楚的干細(xì)胞，并且Notch信號(hào)傳導(dǎo)涉及其正常 維持以及白血病轉(zhuǎn)化(Kopper & Hajdu, 2004, Pathol. Oncol. Res. 10 :69_73)。HSC 是稀少 的細(xì)胞群體，存在于成體骨髓內(nèi)的間質(zhì)小生境(stromal niche)中。這些細(xì)胞的特征在于 獨(dú)特的基因表達(dá)圖譜和連續(xù)產(chǎn)生更加分化的祖細(xì)胞以重建整個(gè)造血系統(tǒng)的能力。HSC和祖 細(xì)胞中的Notchl信號(hào)傳導(dǎo)的組成型激活能夠在體外和長(zhǎng)期重建測(cè)試中建立了同時(shí)產(chǎn)生淋 巴樣細(xì)胞和骨髓細(xì)胞的永生化細(xì)胞系(Varnum-Finney等，2000，Nat. Med. 6 1278-81)，并 且Jaggedl的存在增加相對(duì)于HSC富集的人類(lèi)骨髓細(xì)胞群的移植(Karanu等，2000, J. Exp. Med. 192 1365-72) ο最近，已經(jīng)在體內(nèi)于HSC中證明了 Notch信號(hào)傳導(dǎo)，并且其顯示參與抑 制HSC分化。另外，Notch信號(hào)傳導(dǎo)似乎是Wnt-介導(dǎo)的HSC自我更新所需要的(Duncan等， 2005，Nat. Immunol. 6 314)。Notch信號(hào)傳導(dǎo)途徑還在神經(jīng)干細(xì)胞的維持中起關(guān)鍵作用，并且涉及其正常維 持禾口腦癌(Kopper & Hajdu，2004，Pathol. Oncol. Res. 10 :69_73 ；Purow 等，2005，Cancer Res. 65. 2353 :2353_63 ；Hallahan 等，2004，Cancer Res. 64 :7794_800)。神經(jīng)干細(xì)胞在發(fā)育 期間產(chǎn)生哺乳動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)中的所有神經(jīng)元細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，并且最近已經(jīng)在成體腦 中得到鑒定(Gage, 2000, Science 287:1433-8)。Notchl 缺陷型小鼠、Notch 靶基因 Hesl、 3和5缺陷型小鼠；和Notch信號(hào)傳導(dǎo)早衰蛋白1 (PSl)的調(diào)節(jié)子缺陷型小鼠顯示胚胎神經(jīng) 干細(xì)胞數(shù)量減少。另外，在PSl雜合小鼠腦中成體神經(jīng)干細(xì)胞減少(Nakamura等，2000， J. Neurosci. 20 :283_93 ；Hitoshi 等，2002，Genes Dev. 16 :846_58)。神經(jīng)干細(xì)胞的減少似 乎是由于其過(guò)早分化成神經(jīng)元(Hatakeyama等，2004，Dev. 131 :5539_50)，表明Notch信號(hào) 傳導(dǎo)調(diào)節(jié)神經(jīng)干細(xì)胞分化和自我更新。 異常Notch信號(hào)傳導(dǎo)涉及許多人類(lèi)癌。人類(lèi)中的Notchl基因首次在T-細(xì)胞急 性淋巴母細(xì)胞白血病亞類(lèi)中鑒定為可導(dǎo)致Notch途徑激活的易位的基因座(Ellisen等， 1991，Cell66 :649_61)。小鼠模型中T細(xì)胞內(nèi)的Notchl信號(hào)傳導(dǎo)的組成型激活類(lèi)似地產(chǎn)生τ-細(xì)胞淋巴瘤，表明了發(fā)病原因(Robey等，1996，Cell87 :483_92 ；Pear等，1996， J. Exp. Med. 183 :2283_91 ；Yan 等，2001，Blood98 :3793_9 ；Bellavia 等，2000，EMBO J. 19 3337-48)。最近已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)生異常Notchl信號(hào)傳導(dǎo)的Notchl點(diǎn)突變、插入和缺失經(jīng)常存 在于兒童和成人T細(xì)胞急性淋巴母細(xì)胞白血病/淋巴瘤中(Pear Mster，2004，Curr. Opin. Hemato1. 11 :416_33)。小鼠乳腺瘤病毒在乳腺瘤的Notchl和Notch4基因座中的頻繁插入以及所導(dǎo)致 的活化Notch蛋白片段首先涉及乳癌中的Notch信號(hào)傳導(dǎo)(Gallahan & Callahan，1987， J . Virol. 61. 66-74 ；Brennan & Brown，2003， Breast Cancer Res. 5 69, Politi ·，2004， Semin Cancer Biol. 14 :341_7)。轉(zhuǎn)基因小鼠中的進(jìn)一步研究已經(jīng)確認(rèn)了 Notch在正常乳 腺發(fā)育期間的導(dǎo)管分支(ductal branching)中的作用，并且在乳房上皮細(xì)胞中Notch4的 組成型激活形式抑制上皮分化和導(dǎo)致腫瘤發(fā)生(Jhappan等，1992，Genes & Dev. 6345-5 ； GalIahan等，1996，Cancer Res. 561775-85，Smith等，1995，Cell Growth Differ6 563-77, Soriano 等，2000，Int. J. Cancer 86 :652_9，Uyttendaele 等，1998，DevBiol. 196. 204-17 ； Politi 等，2004，Semin Cancer Biol. 14 341-7)。目前 Notch 在人類(lèi)乳癌中作用的證 據(jù)局限于Notch受體在乳癌中的表達(dá)及其與臨床結(jié)果的關(guān)聯(lián)性(Weijzen等，2002，Nat. Med. 8 979-86, Parr 等，2004，Int. J. Mol. Med. 14 :779_86)。另外，在宮頸癌(Zagouras 等，1995，PNAS 92 :6414-8)、腎細(xì)胞癌(Rae 等，2000，Int. J. Cancer88 :726_32)、頭頸鱗 狀細(xì)胞癌(Leethanakul 等，2000，Oncogene 19 :3220_4)、子宮內(nèi)膜癌(Suzuki 等，2000， Int. J. Oncol. 17 1 131-9)和神經(jīng)母細(xì)胞瘤(van Limpt 等，2000，Med. Pediatr. Oncol. 35 554-8)中已經(jīng)觀察到Notch途徑的過(guò)表達(dá)，表明Notch在許多贅生物的發(fā)生中具有潛在作 用。令人感興趣的是，Notch信號(hào)傳導(dǎo)可能在結(jié)腸的Ape-突變贅生性細(xì)胞的未分化狀態(tài)的 維持中起作用(van Es & Clevers, 2005, Trends inMol. Med. 11 :496_502)。Notch途徑還涉及血管發(fā)育的多個(gè)方面，包括增殖、遷移、平滑肌分化、血管發(fā)生和 動(dòng)脈-靜脈分化(Iso 等，2003，Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 23 543)。例如，在動(dòng)脈 發(fā)育和卵黃囊血管形成中，Notchl/4和Jaggedl的純合型無(wú)效突變以及DLL4的雜合喪失 導(dǎo)致嚴(yán)重但是可變的缺陷。另外，DLL 1-缺陷和Notch-2-減效小鼠胚胎顯示出血，這可 能是由于血管結(jié)構(gòu)的不良發(fā)育(Gale等，2004，PNAS, 101 15949-54 ；Krebs等，2000，Genes Dev. 14 1343-52 ；Xue 等，1999，Hum. Mel. Genet 8 723-30 ；Hrabe de Angelis 等，1997， Nature 386 :717_21 ；McCright 等，2001，Dev. 128 :491_502)。人類(lèi)中，Jagged 1 的突變與 阿拉吉耶綜合征(Alagille syndrome，一種包括血管缺陷的發(fā)育障礙)相關(guān)，Notch 3的突 變是遺傳性血管性癡呆(Cadasil)(其中血管體內(nèi)平衡有缺陷)的原因(Joutel等，1996， Nature 383707-10)。將N0tchl、N0tch4、DLLl和DLL4鑒定為在癌干細(xì)胞(相對(duì)于正常乳腺上皮)中表 達(dá)的基因表明，靶向Notch途徑不僅能夠幫助消除大多數(shù)非致瘤性癌細(xì)胞，還能夠幫助消 除負(fù)責(zé)實(shí)體瘤的形成和復(fù)發(fā)的致瘤性細(xì)胞。另外，由于血管發(fā)生在腫瘤形成和維持中的顯 著作用，靶向Notch途徑還可以有效地抑制血管發(fā)生，使癌缺乏營(yíng)養(yǎng)物，并有助于其消除。已經(jīng)報(bào)道了抗-Notch抗體及其作為抗癌治療劑的可能應(yīng)用。例如參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利 申請(qǐng)公開(kāi)第2008/0131434號(hào)和第2009/0081238號(hào)，通過(guò)參考將其中每一篇整體并入本文。 還參見(jiàn)國(guó)際公開(kāi) WO 2008/057144、WO 2008/076960 和 WO 2008/50525。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供可與Notchl受體的胞外域的非配體結(jié)合近膜區(qū)結(jié)合的試劑，以及包 含所述試劑的組合物，例如藥物組合物。本發(fā)明還提供使用所述試劑靶向癌干細(xì)胞的方法。 在某些實(shí)施方式中，所述方法包括減少癌干細(xì)胞在腫瘤中的頻率，減少癌干細(xì)胞在腫瘤中 的數(shù)量，減少腫瘤的致瘤性，和/或通過(guò)減少癌干細(xì)胞在腫瘤中的數(shù)量或頻率來(lái)減少腫瘤 的致瘤性。本發(fā)明還提供在治療癌和/或抑制腫瘤生長(zhǎng)中使用所述試劑的方法。在一方面，本發(fā)明提供與Notchl受體(例如人類(lèi)Notchl)的胞外域的非配體結(jié)合 近膜區(qū)特異性結(jié)合的抗體。在某些實(shí)施方式中，Notchl受體的非配體結(jié)合近膜區(qū)包含人類(lèi) Notchl受體的約氨基酸1427 約氨基酸1732。在某些實(shí)施方式中，Notchl受體的近膜區(qū) 包含SEQ ID NO :2。在特定實(shí)施方式中，所述抗體與至少一個(gè)其它Notch受體家族成員的 胞外域的非配體結(jié)合近膜區(qū)特異性結(jié)合。在某些實(shí)施方式中所述抗體是Notchl的拮抗劑。在某些實(shí)施方式中，所述抗體通 過(guò)Notchl受體的激活抑制信號(hào)傳導(dǎo)。在某些實(shí)施方式中，所述抗體抑制Notchl活性。在 某些實(shí)施方式中，所述抗體抑制所述近膜區(qū)內(nèi)的切割。在特定實(shí)施方式中，所述抗體抑制 Notchl受體的切割(例如通過(guò)金屬蛋白酶在S2位點(diǎn)的切割)和/或通過(guò)配體結(jié)合抑制 Notchl受體的激活。在某些實(shí)施方式中，所述抗體抑制Notchl的胞內(nèi)域(ICD)的釋放或形 成。在特定實(shí)施方式中，所述抗體抑制腫瘤生長(zhǎng)。在特定實(shí)施方式中，本發(fā)明提供與人類(lèi)Notchl的胞外域的非配體結(jié)合 近膜區(qū)結(jié)合的抗體，所述抗體包含含有RGYWIE(SEQ ID NO 15)的重鏈⑶R1、含有 QILPGTGRTNYNEKFKG (SEQ ID NO 16)的重鏈 CDR2 和 / 或含有 FDGNYGYYAMDY (SEQ ID NO 17)的重鏈 CDR3 ；和 / 或(b)含有 RSSTGAVTTSNYAN(SEQ ID NO 18)的輕鏈 CDR1、含有 GTNNRAP (SEQ ID NO: 19)的輕鏈 CDR2 和 / 或含有 ALWYSNHWVFGGGTKL(SEQ ID NO 20)的 輕鏈CDR3。在某些實(shí)施方式中，所述抗體包含重鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包括(a)含有 RGYffIE (SEQ ID NO 15)的重鏈⑶R1，或包含1、2、3或4個(gè)氨基酸取代的其變體；(b)含有 QILPGTGRTNYNEKFKG (SEQ ID NO 16)的重鏈CDR2，或包含1、2、3或4個(gè)氨基酸取代的其變 體；和/或(c)含有FDGNYGYYAMDY (SEQ ID NO 17)的重鏈CDR3，或包含1、2、3或4個(gè)氨基 酸取代的其變體。在某些其它實(shí)施方式中，所述抗體包含(或還包含)輕鏈可變區(qū)，所述輕 鏈可變區(qū)包括(a)含有RSSTGAVTTSNYAN(SEQ ID NO 18)的輕鏈CDRl，或包含1、2、3或4 個(gè)氨基酸取代的其變體；(b)含有GTNNRAP (SEQ ID NO 19)的輕鏈CDR2，或包含1、2、3或4 個(gè)氨基酸取代的其變體；和/或(c)含有ALWYSNHWVFGGGTKL(SEQ ID NO 20)的輕鏈⑶R3， 或包含1、2、3或4個(gè)氨基酸取代的其變體。在某些實(shí)施方式中，所述氨基酸取代是保守性 氨基酸取代。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供通過(guò)雜交瘤細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體，52M51，所述雜 交瘤細(xì)胞系于2008年8月7日根據(jù)布達(dá)佩斯條約的規(guī)定保藏在位于10801University Boulevard, Manassas, VA, USA的美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)，并賦予保藏號(hào) PTA-9405。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供通過(guò)DNA編碼的抗體52M51的人源化版本， 52M51H4L3，所述DNA于2008年10月15日根據(jù)布達(dá)佩斯條約的規(guī)定保藏在ATCC，并賦予保 藏號(hào)PTA-9549。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供的抗體所結(jié)合的表位與抗體52M51所結(jié)合的表位相同。在另一方面，本發(fā)明提供與人類(lèi)Notchl的胞外域的非配體結(jié)合近膜區(qū)結(jié)合的抗 體，所述抗體包含由DNA編碼的抗體“52R43”，或由抗體“52R43”組成，或基本上由抗體 “52R43”組成，所述DNA于2008年10月15日根據(jù)布達(dá)佩斯條約的規(guī)定保藏在ATCC，并賦 予保藏號(hào)PTA-9548。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了與52R43競(jìng)爭(zhēng)以與人類(lèi)Notchl的胞 外域的非配體結(jié)合近膜區(qū)特異性結(jié)合的抗體。還提供了包含52R43的藥物組合物和治療癌 的方法，所述方法包括施用治療有效量的52R43抗體。在特定實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了與上述實(shí)施方式和/或方面，以及本文別處所 述其它方面/實(shí)施方式中所述的任何抗體競(jìng)爭(zhēng)以與人類(lèi)Notchl的胞外域的非配體結(jié)合近 膜區(qū)特異性結(jié)合(例如在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合檢測(cè)中)的抗體。還提供了包含本文所述抗體的藥物 組合物和治療癌的方法，所述方法包括施用治療有效量的所述抗體。在上述方面或?qū)嵤┓绞?、以及本文別處所述其它方面和/或?qū)嵤┓绞街懈黜?xiàng)的特 定實(shí)施方式中，所述抗體是重組抗體。在某些實(shí)施方式中，所述抗體是單克隆抗體、嵌合抗 體、人源化抗體或人類(lèi)抗體。在特定實(shí)施方式中，所述抗體是抗體片段。在特定實(shí)施方式中， 所述抗體或抗體片段是單價(jià)、單特異性、雙價(jià)、雙特異性或多特異性的。在特定實(shí)施方式中， 所述抗體與細(xì)胞毒性基團(tuán)(cytotoxic moiety)綴合。在特定實(shí)施方式中，所述抗體是分離 的。在其它實(shí)施方式中，所述抗體基本上是純化的。還提供了包含本文所述抗體的藥物組合物和治療癌的方法，所述方法包括施用治 療有效量的本文所述抗體。在特定實(shí)施方式中，所述藥物組合物還包含藥學(xué)上可接受的載 體。在另一方面，本發(fā)明提供了多肽。在某些實(shí)施方式中，多肽是抗體(例如特異性結(jié) 合Notchl的抗體)、抗體的重鏈或輕鏈，和/或抗體的片段。在某些實(shí)施方式中，多肽是分 離的。在特定實(shí)施方式中，多肽基本上是純化的。在某些實(shí)施方式中，多肽包含氨基酸序列 SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :14、SEQ ID NO :24、SEQ ID NO 28 或 SEQ ID NO :32。在某些實(shí) 施方式中，多肽包含氨基酸序列SEQ ID NO 14或SEQID NO :24和/或氨基酸序列SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:28或SEQ ID NO :32。在某些實(shí)施方式中，多肽包含氨基酸序列SEQ ID N0:14或SEQ ID NO :24的至少一部分，和/或氨基酸序列SEQ ID NO :8、SEQ ID NO 28 或SEQ ID NO :32的至少一部分。還提供了同時(shí)包含多肽和藥學(xué)上可接受的載劑的藥物組 合物，以及產(chǎn)生所述多肽的細(xì)胞系。在某些實(shí)施方式中，所述多肽包含(a)與SEQ ID NO: 14或SEQ ID N0:24具有至 少約80%序列同一性的多肽；和/或(b)與SEQ ID N0:8、SEQ ID NO 28或SEQ ID NO 32 具有至少約80%序列同一性的多肽。在特定實(shí)施方式中，多肽是抗體(例如，與人類(lèi)Notchl 的胞外域的非配體結(jié)合近膜區(qū)特異性結(jié)合的抗體)。在特定實(shí)施方式中，所述多肽包含與 SEQ ID NO :14、SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :8、SEQID NO 28 或 SEQ ID NO 32 具有至少約 85%，至少約90%，至少約95%，至少約98%，或約100%序列同一性的多肽。在特定實(shí)施 方式中，所述多肽包含52M51抗體的重鏈可變區(qū)和/或輕鏈可變區(qū)。在某些實(shí)施方式中，所 述多肽包含人源化52M51抗體的重鏈可變區(qū)和/或輕鏈可變區(qū)。在某些實(shí)施方式中，所述 多肽包含抗體52R43的重鏈可變區(qū)和/或輕鏈可變區(qū)。在另一方面，本發(fā)明提供編碼上述方面以及本文所述其它方面/實(shí)施方式的任何抗體和/或多肽的多核苷酸分子。在某些實(shí)施方式中，表達(dá)載體包含所述多核苷酸分子。在 其它實(shí)施方式中，宿主細(xì)胞包含所述表達(dá)載體。在某些實(shí)施方式中，宿主細(xì)胞包含所述多核 苷酸分子。在某些實(shí)施方式中，所述宿主細(xì)胞是細(xì)胞系或雜交瘤細(xì)胞系。在特定實(shí)施方式 中，所述雜交瘤細(xì)胞系產(chǎn)生52M51抗體或人源化52M51抗體。在其它方面，本發(fā)明提供了抑制細(xì)胞中Notchl的活性的方法，所述方法包括使所 述細(xì)胞與有效量的上述方面和實(shí)施方式，以及本文別處所述其它方面/實(shí)施方式中所述的 任何抗體或多肽接觸。在特定實(shí)施方式中，所述細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞。在另一方面，本發(fā)明提供了抑制受試對(duì)象中腫瘤生長(zhǎng)的方法，所述方法包括對(duì)受 試對(duì)象施用治療有效量的上述方面和實(shí)施方式，以及本文別處所述其它方面/實(shí)施方式中 所述的任何抗體或多肽。在某些實(shí)施方式中，所述腫瘤包含癌干細(xì)胞。在某些實(shí)施方式中， 所述方法包括使用抗體靶向所述癌干細(xì)胞。在特定實(shí)施方式中，所述方法包括減少癌干細(xì) 胞在腫瘤中的頻率，減少癌干細(xì)胞在腫瘤中的數(shù)量，減少腫瘤的致瘤性，和/或通過(guò)減少癌 干細(xì)胞在腫瘤中的數(shù)量或頻率來(lái)減少腫瘤的致瘤性。在某些實(shí)施方式中，所述方法包括抑 制Notchl受體的活性和/或抑制腫瘤生長(zhǎng)。在特定實(shí)施方式中，所述腫瘤選自由乳腫瘤、 結(jié)直腸腫瘤、肝腫瘤、腎腫瘤、肺腫瘤、胰腺腫瘤、卵巢腫瘤、前列腺腫瘤以及頭頸部腫瘤組 成的組。在另一方面，本發(fā)明提供一種治療受試對(duì)象的癌的方法。在某些實(shí)施方式中，所述 方法包括對(duì)受試對(duì)象施用治療有效量的上述方面和實(shí)施方式，以及本文別處所述其它方面 /實(shí)施方式中所述的任何抗體或多肽。在某些實(shí)施方式中，待治療的癌是乳癌、結(jié)直腸癌、肝 癌(h印atic cancer)、腎癌、肝臟癌(liver cancer)、肺癌、胰腺癌、胃腸癌、黑色素瘤、卵巢 癌、前列腺癌、宮頸癌、膀胱癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤以及頭頸部癌。在上述方面或?qū)嵤┓绞健⒁约?本文別處所述其它方面和/或?qū)嵤┓绞街懈髑闆r的特定實(shí)施方式中，所述治療癌的方法包 括抑制腫瘤生長(zhǎng)。在另外方面，本發(fā)明提供了抑制受試對(duì)象中腫瘤生長(zhǎng)的方法，所述方法包括對(duì)受 試對(duì)象施用治療有效量的與人類(lèi)Notchl的胞外域的非配體結(jié)合近膜區(qū)特異性結(jié)合的抗 體，其中結(jié)合抑制Notchl的活性。在其它方面，本發(fā)明提供通過(guò)減少癌干細(xì)胞在腫瘤中的頻率或數(shù)量來(lái)減少包含癌 干細(xì)胞的腫瘤的致瘤性的方法，所述方法包括使所述腫瘤與有效量的抑制Notchl活性的 抗體接觸。在上述方面或?qū)嵤┓绞?、以及本文所述其它方面?或?qū)嵤┓绞街懈髑闆r的特定 實(shí)施方式中，所述方法還包括對(duì)受試對(duì)象施用至少一種其它抗癌劑和/或治療劑。在上述 方面或?qū)嵤┓绞?、以及本文別處所述其它方面和/或?qū)嵤┓绞街懈髑闆r的特定實(shí)施方式 中，將所述抗體或多肽與用于癌的其它治療對(duì)受試對(duì)象組合施用。在特定實(shí)施方式中，所述 用于癌的其它治療包括放射治療、化學(xué)治療和/或其它抗體治療劑。在特定實(shí)施方式中，所 述化學(xué)治療包括紫杉醇(taxol)、伊立替康、吉西他濱和/或奧沙利鉬。在特定實(shí)施方式中， 所述其它抗體治療劑是特異性結(jié)合第二人類(lèi)Notch受體(例如，Notch2)或人類(lèi)Notch受 體配體(例如DLL4或JAG1)的抗體。在特定實(shí)施方式中，所述其它抗體治療劑是特異性結(jié) 合VEGF的抗體。在特定實(shí)施方式中，治療的受試對(duì)象是人。本發(fā)明還提供治療人類(lèi)的癌的方法，其中包含癌干細(xì)胞的所述癌的特征不在于癌干細(xì)胞過(guò)表達(dá)一種或多種Notch受體，所述方法包括對(duì)人類(lèi)施用治療有效量的抗體，所述 抗體與Notchl受體的胞外域的近膜區(qū)結(jié)合并且阻斷Notchl受體的配體激活。本發(fā)明還提供治療人類(lèi)的癌的方法，所述方法包括對(duì)人類(lèi)施用治療有效量的(a) 結(jié)合Notchl受體并抑制過(guò)表達(dá)Notch受體的癌干細(xì)胞的生長(zhǎng)的第一抗體；和(b)結(jié)合 Notchl受體并阻斷Notch受體的配體激活的第二抗體。本發(fā)明還提供另一治療癌的方法，其中所述癌選自由乳癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、前列 腺癌、肺癌、直腸癌和結(jié)直腸癌組成的組，所述方法包括施用治療有效量的阻斷Notchl受 體的配體激活的抗體。本發(fā)明另外提供結(jié)合Notchl并阻斷Notchl受體的配體激活的人源化抗體；包 含所述人源化抗體和藥學(xué)上可接受的載體的組合物；以及包含綴合有細(xì)胞毒性劑的人源化 抗體的免疫綴合物。另外，本發(fā)明提供編碼所述人源化抗體的分離的多核苷酸；包含所述核酸的載體； 包含所述核酸或載體的宿主細(xì)胞；以及生產(chǎn)所述人源化抗體的方法，所述方法包括培養(yǎng)包 含所述核酸的宿主細(xì)胞，從而表達(dá)所述核酸，并且可選地還包括從宿主細(xì)胞培養(yǎng)物(例如 從宿主細(xì)胞培養(yǎng)基)回收所述人源化抗體。本發(fā)明還涉及包含與一個(gè)或多個(gè)加利車(chē)霉素分子綴合的結(jié)合Notch的抗體的免 疫綴合物，和所述綴合物在治療表達(dá)Notch的癌，例如其中癌干細(xì)胞過(guò)表達(dá)Notch的癌中的 應(yīng)用。可以使用本發(fā)明的治療組合物(例如，結(jié)合Notchl受體的胞外域的近膜區(qū)的抗 體)治療的實(shí)體瘤的實(shí)例包括，但不限于肉瘤和癌，例如纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、軟 骨肉瘤、骨源性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管內(nèi)皮肉瘤、滑膜瘤、 間皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、鱗狀 細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓樣癌、支氣 管癌、腎細(xì)胞癌、肝瘤、膽管癌、絨毛膜癌、精原細(xì)胞瘤、胚胎性癌、維爾姆斯瘤、宮頸癌、睪丸 瘤、肺癌、小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、顱咽管 瘤、室鼓膜瘤、松果體瘤、成血管細(xì)胞瘤、聽(tīng)神經(jīng)瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦膜瘤、黑素瘤、成神 經(jīng)細(xì)胞瘤和成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤。在根據(jù)馬庫(kù)什組或可選擇要素的其它分組描述了本發(fā)明的方面或?qū)嵤┓绞降那?況下，本發(fā)明不僅包括作為整體列出的整個(gè)組，還個(gè)別地包括該組的各成員和主要組的所 有可能亞組，以及缺少一個(gè)或多個(gè)組成員的主要組。本發(fā)明還預(yù)見(jiàn)到明確排除要求保護(hù)的 發(fā)明中任何組成員中的一個(gè)或多個(gè)。


圖1-抑制Notch信號(hào)傳導(dǎo)的靶向Notch的近膜區(qū)的抗體的鑒定。(A) Notch受體和52M抗原區(qū)的圖示。所述52M抗原包括Notchl受體在受體成熟期 間經(jīng)受弗林蛋白酶切割和在配體結(jié)合后經(jīng)受ADAM (A Disintegrin AndMetallop印tidase， 解整合素-金屬肽酶)蛋白酶切割的區(qū)域。隨后通過(guò)Y-分泌酶進(jìn)行的加工引起在細(xì)胞核 中激活基因轉(zhuǎn)錄的Notch的胞內(nèi)域(ICD)的釋放。(B)在可溶性Notch配體(hDLL4_fc)和 Notchl受體抗體存在下所培養(yǎng)的Notchl-HeLa細(xì)胞生成的熒光素酶水平(y軸)。來(lái)自帶有或不帶有hDLL4-Fc的未轉(zhuǎn)染(NT)細(xì)胞的結(jié)果示于χ軸的最左邊。52Μ Notchl受體抗體 沿著χ軸顯示，并且與DBZ ( 一種Notch γ -分泌酶抑制劑(GSI))和21M18 ( 一種抗-DLL4 抗體)比較。熒光素酶活性下降表明，Notchl受體抗體52M51、52M63、52M74和52M80都顯 著地抑制Notch信號(hào)傳導(dǎo)。(C)在可溶性Notch配體(hDLL4-fc)和Notchl受體抗體存在 下所培養(yǎng)的Notchl-HeLa細(xì)胞生成的熒光素酶水平(y軸)。來(lái)自帶有或不帶有hDLL4_Fc 的未轉(zhuǎn)染(NT)細(xì)胞的結(jié)果示于χ軸的最左邊。52M51鼠類(lèi)雜交瘤產(chǎn)生的抗體和人源化變 體52M51-H4/L3以所示的各種濃度沿著χ軸顯示。熒光素酶活性下降表明，親本鼠類(lèi)抗體 52Μ51和人源化變體都顯著地抑制Notch信號(hào)傳導(dǎo)。(D)對(duì)表達(dá)Notchl的HeLa細(xì)胞進(jìn)行配 體-介導(dǎo)的刺激后的ICD形成的蛋白質(zhì)印跡分析。在不存在DLL4配體(-DLL4)時(shí)產(chǎn)生最 小ICD，但是DLL4的存在刺激形成。雖然存在DLL4，但是抗體52M51、52M63、52M74和52M80 將I⑶形成減少 至背景水平。圖2 =Notchl受體抗體52M51抑制體內(nèi)的腫瘤形成。(A)用對(duì)照抗體(正方形)、或抗Notchl抗體52M51 (三角形)治療注射有C8結(jié) 腸腫瘤細(xì)胞的N0D/SCID小鼠，并且測(cè)定腫瘤隨時(shí)間(χ軸，天)的體積(y軸，mm3)。與對(duì)照 相比，用52M51抗體進(jìn)行的治療顯著地(p = 0. 0006)抑制腫瘤生長(zhǎng)。(B)對(duì)于對(duì)照(左) 或52M51(右)治療的小鼠在48天和55天時(shí)測(cè)定的來(lái)自(A)中動(dòng)物的各腫瘤體積測(cè)定結(jié) 果。用線劃定各實(shí)驗(yàn)組的平均值。(C)對(duì)照抗體(黑色正方形)或如圖IB所示的不抑制 Notch信號(hào)傳導(dǎo)的抗-Notchl抗體52M1 (黑色三角形)和52M2(灰色圓形)治療注射有 PE13乳腫瘤細(xì)胞的N0D/SCID小鼠。測(cè)定腫瘤隨時(shí)間(χ軸，天)的體積(y軸，mm3)。與對(duì) 照治療的動(dòng)物相比時(shí)，用52M1和52M2進(jìn)行的治療不能影響腫瘤生長(zhǎng)。(D)用對(duì)照抗體(正 方形)或如圖IB所示的不抑制Notch信號(hào)傳導(dǎo)的抗-Notchl抗體52M8(三角形)治療注 射有PE13乳腫瘤細(xì)胞的N0D/SCID小鼠。測(cè)定腫瘤隨時(shí)間(χ軸，天)的體積(y軸，mm3)。 當(dāng)與對(duì)照治療的動(dòng)物相比時(shí)，用52M8進(jìn)行的治療不能影響腫瘤生長(zhǎng)。圖3 抗-Notchl受體抗體52R43抑制體內(nèi)的腫瘤生長(zhǎng)。(A)用對(duì)照抗體(正方形)或抗-Notchl抗體52R43 (圓形)治療注射有M2黑色 素瘤腫瘤細(xì)胞的N0D/SCID小鼠，并且測(cè)定腫瘤隨時(shí)間(χ軸，天)的體積(y軸，mm3)。⑶用 對(duì)照抗體(正方形)或抗-Notchl抗體52R43 (圓形)治療注射有Lu24肺腫瘤細(xì)胞的NOD/ SCID小鼠，并且測(cè)定腫瘤隨時(shí)間(χ軸，天)的體積(y軸，mm3)。(C)用對(duì)照抗體(正方形) 或抗-Notchl抗體52R43 (圓形)治療注射有PN8胰腺腫瘤細(xì)胞的N0D/SCID小鼠，并且測(cè) 定腫瘤隨時(shí)間(χ軸，天)的體積(y軸，mm3)。(D)用對(duì)照抗體(正方形)、抗-Notchl抗體 52R43(實(shí)心圓形)、紫杉醇(三角形)或52R43和紫杉醇(空心圓形)治療注射有Tl乳腫 瘤細(xì)胞的N0D/SCID小鼠，并且測(cè)定腫瘤隨時(shí)間(χ軸，天)的體積(y軸，mm3)。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供了結(jié)合一種或多種人類(lèi)Notch受體的新型試劑，包括但不限于諸如抗 體等多肽。所述Notch-結(jié)合劑包括人類(lèi)Notch受體的拮抗劑。還提供了相關(guān)的多肽和多 核苷酸，包含Notch-結(jié)合劑的組合物，以及制備N(xiāo)otch-結(jié)合劑的方法。還提供了使用所述 新型Notch-結(jié)合劑的方法，例如抑制腫瘤生長(zhǎng)和/或治療癌的方法。本發(fā)明還鑒定了與人類(lèi)Notchl受體的胞外域的非配體結(jié)合近膜區(qū)特異性結(jié)合并抑制體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)的分子(例如抗體)。已經(jīng)將是配體結(jié)合充要條件的Notch的配體結(jié)合 區(qū)，鑒定為EGF重復(fù)11和12，表明Notch受體的該區(qū)在Notch信號(hào)傳導(dǎo)和腫瘤發(fā)生中是 重要的(Rebay 等，1991，Cell 67 687 ；Lei 等，2003，Dev. 130-6411，Hambleton 等，2004， Structure 12 2173)。預(yù)料之外的是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在人類(lèi)Notch受體的胞外域的配體結(jié)合域 外部結(jié)合的抗體抑制體內(nèi)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)(參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)第2008/0131434號(hào)，通過(guò)引 用將其整體并入本文)。因此，在一種或多種人類(lèi)Notch受體-Notchl、Notch2、Notch3和 Notch4-的胞外域的配體結(jié)合域外部結(jié)合的抗體具有作為潛在的癌治療劑的價(jià)值?，F(xiàn)在已經(jīng)鑒定出與Notchl的胞外域的近膜區(qū)特異性結(jié)合的單克隆抗體，包括單 克隆抗體52M51 (實(shí)施例1)。還產(chǎn)生了人源化52M51抗體(實(shí)施例2)。包括52M51和52M51 的人源化變體在內(nèi)的幾種抗體，雖然與Notchl在配體結(jié)合區(qū)外的區(qū)域中結(jié)合，但是抑制配 體-誘導(dǎo)的Notchl信號(hào)傳導(dǎo)(實(shí)施例3，圖IB和圖1C)?，F(xiàn)在還已經(jīng)表明幾種抗體抑制 Notch胞內(nèi)域(I⑶)的形成的能力(實(shí)施例3和圖1D)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)52M51在異種移植物模型 中抑制體內(nèi)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)(實(shí)施例5以及圖2A和圖2B)。另外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)另一抗體52R43 在多種異種移植物模型中抑制體內(nèi)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)(實(shí)施例7和圖3A-圖3D)。定義本文使用的Notch受體的“拮抗劑”是包括部分或全部阻斷、抑制或中和Notch途 徑的生物學(xué)活性的任何分子的術(shù)語(yǔ)。合適的拮抗劑分子特別包括拮抗性抗體或抗體片段。 本文使用術(shù)語(yǔ)“拮抗劑”來(lái)包括部分或全部阻斷、抑制活中和Notch受體的表達(dá)的任何分 子。使用術(shù)語(yǔ)“抗體”來(lái)指通過(guò)至少一個(gè)位于免疫球蛋白分子的可變區(qū)內(nèi)的抗原識(shí)別 位點(diǎn)，識(shí)別和特異性結(jié)合諸如蛋白、多肽、肽、糖類(lèi)、多核苷酸、脂質(zhì)或上述物質(zhì)的組合等靶 標(biāo)的免疫球蛋白分子。如本文所用，該術(shù)語(yǔ)包括完整的多克隆抗體、完整的單克隆抗體、抗 體片段(例如Fab、Fab'、F(ab' ) 2和Fv片段)、單鏈Fv (scFv)突變體、由至少兩個(gè)完整 抗體產(chǎn)生的諸如雙特異性抗體等多特異性抗體、單價(jià)或單特異性抗體、嵌合抗體、人源化抗 體、人類(lèi)抗體、包含抗體的抗原決定部分的融合蛋白、任何其它包含抗原識(shí)別位點(diǎn)的經(jīng)修飾 免疫球蛋白分子，只要所述抗體顯示所需的生物活性?；诜謩e稱(chēng)為α、δ、ε、Y和μ 的抗體重鏈恒定域的同一性，抗體可以是五個(gè)主要種類(lèi)免疫球蛋白中的任一種IgA、IgD、 IgE、IgG 和 IgM，或其亞類(lèi)(同型)(例如，IgGU IgG2、IgG3、IgG4、IgAl 和 IgA2)。不同種 類(lèi)的免疫球蛋白具有不同的眾所周知的亞基結(jié)構(gòu)和三維構(gòu)造?？贵w可以是裸露的或與諸如 毒素、放射性同位素等其它分子綴合。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“抗體片段”表示完整抗體的一部分，和表示完整抗體的抗原性 決定可變區(qū)。抗體片段的實(shí)例包括，但不限于Fab、Fab'、F(ab' ) 2和Fv片段、線性抗體、 單鏈抗體和由抗體片段形成的多特異性抗體?！癋v抗體”是指含有完整抗原識(shí)別和抗原結(jié)合位點(diǎn)的最小抗體片段，可以是其中 一個(gè)重鏈和一個(gè)輕鏈可變域形成非共價(jià)二聚體的雙鏈，也可以是其中一個(gè)重鏈和一個(gè)輕 鏈可變域通過(guò)柔性肽連接子共價(jià)連接的單鏈(scFv)，從而使得2條鏈以類(lèi)似的二聚結(jié)構(gòu)連 接。在該構(gòu)造中各可變域的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)相互作用從而限定出Fv 二聚體的抗原結(jié)合 特異性。作為選擇，可以使用單可變域(或Fv的一半)來(lái)識(shí)別和結(jié)合抗原，雖然通常而言 親和性較低。
本文所用的“單克隆抗體”是指涉及高度特異性識(shí)別和結(jié)合單抗原決定簇(或 表位)的同源性抗體群。這與通常包括針對(duì)不同抗原決定簇的不同抗體的多克隆抗體相 反。術(shù)語(yǔ)“單克隆抗體”包括完整的全長(zhǎng)單克隆抗體以及抗體片段(例如，F(xiàn)ab、Fab'、 F(ab' )2、Fv)、單鏈(scFv)突變體、包含抗體部分的融合蛋白和任何其它包含抗原識(shí)別位 點(diǎn)的經(jīng)修飾免疫球蛋白分子。另外，“單克隆抗體”是指以包括但不限于通過(guò)雜交瘤、噬菌體 選擇、重組表達(dá)和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物在內(nèi)的任何數(shù)量的方式制得的此類(lèi)抗體。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“人源化抗體”是指非人類(lèi)(例如鼠類(lèi))抗體的形式，其為含有 最小非人類(lèi)序列的特異性免疫球蛋白鏈、嵌合免疫球蛋白或其片段。通常而言，人源化抗體 是其中互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的殘基被非人類(lèi)物種(例如小鼠、大鼠、兔、倉(cāng)鼠等)的具有所需 特異性、親和性和/或能力的CDR的殘基置換的人類(lèi)免疫球蛋白。在某些情況下，人類(lèi)免疫 球蛋白的Fv框架區(qū)(FR)殘基被來(lái)自非人類(lèi)物種的具有所需特異性、親和性和/或能力的 抗體中的相應(yīng)殘基置換。可以通過(guò)在Fv框架區(qū)中和/或在經(jīng)置換的非人類(lèi)殘基內(nèi)取代另 外的殘基而進(jìn)一步修飾所述人源化抗體，從而改進(jìn)和優(yōu)化抗體特異性、親和性和/或能力。 通常，人源化抗體會(huì)包含基本上不少于(all of)至少一個(gè)，通常兩個(gè)或三個(gè)可變域，所述可 變域含有所有，或基本上所有的與非人類(lèi)免疫球蛋白對(duì)應(yīng)的CDR區(qū)，而所有，或基本上所有 的FR區(qū)是人類(lèi)免疫球蛋白共有序列的FR區(qū)。所述人源化抗體還可以包含免疫球蛋白(通 常為人類(lèi)免疫球蛋白)恒定區(qū)或域(Fe)的至少一部分。用于產(chǎn)生人源化抗體的方法的實(shí) 例描述于美國(guó)專(zhuān)利第5，225，539號(hào)，通過(guò)參考將其并入本文?？贵w的“可變區(qū)”是指單獨(dú)的或組合的抗體輕鏈的可變區(qū)和/或抗體重鏈的可變 區(qū)。重鏈和輕鏈的可變區(qū)各由通過(guò)三個(gè)還稱(chēng)為高變區(qū)的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)連接的四個(gè)框架 區(qū)(FR)組成。各鏈中的⑶R通過(guò)FR鄰近(in close proximity)保持在一起，并且與來(lái)自另 一鏈的CDR幫助形成抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)。至少有兩種用于確定CDR的技術(shù)(1)基于跨物 禾中序歹Ij變異個(gè)生的方法(艮P，Kabat 等，Sequences of Proteins of Immunological Interest， 第 5 版，1991，National Institutes of Health, Bethesda Md.)；禾口(2)基于抗原-抗體 復(fù)合物的晶體學(xué)研究的方法(ΑΙ-lazikani等，1997，J. Molec. Biol. 273 :927_948)。另外， 本領(lǐng)域有時(shí)使用這兩種方法的組合來(lái)確定⑶R。本文使用的術(shù)語(yǔ)“人類(lèi)抗體”是指由人類(lèi)產(chǎn)生的抗體或通過(guò)使用本領(lǐng)域已知的任 何技術(shù)制備的具有與由人類(lèi)產(chǎn)生的抗體相應(yīng)的氨基酸序列的抗體。人類(lèi)抗體的該定義包括 完整或全長(zhǎng)抗體、其片段和/或包含至少一個(gè)人類(lèi)重鏈和/或輕鏈多肽的抗體，例如，包含 鼠類(lèi)輕鏈和人類(lèi)重鏈多肽的抗體。術(shù)語(yǔ)“嵌合抗體”是指其中免疫球蛋白分子的氨基酸序列源自?xún)蓚€(gè)以上物種的抗 體。通常而言，輕鏈和重鏈的可變區(qū)對(duì)應(yīng)于源自一個(gè)哺乳動(dòng)物物種(例如，小鼠、大鼠、兔 等)的具有所需特異性、親和性和/或能力的抗體的可變區(qū)，而恒定區(qū)與源自另一物種(通 常是人類(lèi))的抗體中的序列具有同源性，從而避免引發(fā)該物種中的免疫應(yīng)答。術(shù)語(yǔ)嵌合抗 體包括單價(jià)、雙價(jià)和多價(jià)抗體。術(shù)語(yǔ)“表位”或“抗原決定簇”在本文中可相互替換地使用，并且是指抗原的能夠被 特定抗體識(shí)別和特異性結(jié)合的那部分。當(dāng)抗原是多肽時(shí)，表位可由連續(xù)的氨基酸形成和由 通過(guò)蛋白的三級(jí)折疊而并置的不連續(xù)氨基酸形成。當(dāng)?shù)鞍鬃冃詴r(shí)通常會(huì)保留由連續(xù)的氨基 酸形成的表位(還稱(chēng)為線性表位)，而當(dāng)?shù)鞍鬃冃詴r(shí)通常會(huì)失去通過(guò)三級(jí)折疊形成的表位(還稱(chēng)為構(gòu)象性表位)。在單獨(dú)空間構(gòu)象中表位通常包括至少3個(gè)，或更經(jīng)常至少5個(gè)或8 個(gè)至10個(gè)氨基酸?？贵w與表位或受體“選擇性結(jié)合”或“特異性結(jié)合”是指抗體與該表位或受體的反 應(yīng)或結(jié)合比與其它物質(zhì)(包括不相關(guān)蛋白)的反應(yīng)或結(jié)合更頻繁、更迅速、持久性更高、親 和性更高或上述情況的某些組合?！斑x擇性結(jié)合”或“特異性結(jié)合”例如是指，抗體與蛋白結(jié) 合的Kd為約0. ImM以下，有時(shí)為約ΙμΜ以下，有時(shí)為約0. 1 μ M以下或有時(shí)為約0. 01 μ M以 下。由于不同物種中同源性蛋白之間的序列同一性，特異性結(jié)合可以包括識(shí)別超過(guò)一個(gè)物 種中Notch受體的抗體。應(yīng)該理解，在特定實(shí)施方式中，與第一靶標(biāo)特異性結(jié)合的抗體或結(jié) 合部分可以與第二靶標(biāo)特異性結(jié)合或不與第二靶標(biāo)特異性結(jié)合。這樣，“特異性結(jié)合”不必 然地要求(盡管其可以包括)專(zhuān)一性結(jié)合，即，與單個(gè)靶標(biāo)的結(jié)合。通常而言，但不是必然 地，結(jié)合是指特異性結(jié)合。通過(guò)其中所研究的免疫球蛋白抑制參照抗體與通用抗原的特異性結(jié)合的檢測(cè)來(lái) 確定抗體之間的競(jìng)爭(zhēng)。已知許多類(lèi)型的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合檢測(cè)，例如固相直接或間接放射免疫 檢測(cè)(RIA)、固相直接或間接酶免疫檢測(cè)(EIA)、夾心競(jìng)爭(zhēng)檢測(cè)(參見(jiàn)Stahh等，Methods in Enzymology 9 :242_253 (1983))；固相直接生物素-親和素 EIA (參見(jiàn) Kirkland 等， J. Immunol. 137 =3614-3619 (1986))；固相直接標(biāo)記的檢測(cè)、固相直接標(biāo)記的夾心檢測(cè)(參 見(jiàn) Harlow 禾口 Lane, “ Antibodies, A Laboratory Manual, “ Cold Spring Harbor Press (1988))；使用 125I 標(biāo)簽的固相直接標(biāo)記 RIA (參見(jiàn) Morel 等，Molec. Immunol. 25(1) 7-15(1988))；固相直接生物素-親和素 EIA (Cheung 等，Virology 176:546-552(1990))； 和直接標(biāo)記的 RIA (Moldenhauer 等，Scand. J Immunol 32 :77_82 (1990))。通常而言，所述 檢測(cè)包括使用與固體表面或攜帶未標(biāo)記的測(cè)試免疫球蛋白和經(jīng)標(biāo)記的參照免疫球蛋白中 任一的細(xì)胞結(jié)合的經(jīng)純化抗原。通過(guò)確定在測(cè)試免疫球蛋白的存在下與固體表面或細(xì)胞結(jié) 合的標(biāo)簽的量來(lái)測(cè)定競(jìng)爭(zhēng)性抑制。通常測(cè)試免疫球蛋白是過(guò)量存在的。通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)檢測(cè)鑒定 出的抗體(競(jìng)爭(zhēng)性抗體)包括與參照抗體結(jié)合相同表位的抗體，和與相鄰表位結(jié)合的抗體， 該相鄰表位與參照抗體所結(jié)合的表位足夠近，從而使得出現(xiàn)空間位阻。通常而言，當(dāng)競(jìng)爭(zhēng)性 抗體過(guò)量存在時(shí)，其會(huì)將參照抗體與通用抗原的特異性結(jié)合抑制至少50%或75%。術(shù)語(yǔ)“分離的”或“純化的”是指實(shí)質(zhì)上或基本上不含在該材料的天然狀態(tài)下通常 附帶的組分的材料。通常使用諸如聚丙烯酰胺凝膠電泳或高效液相色譜等分析化學(xué)技術(shù)確 定純度和均一性。作為制劑中存在的主要物種(species)的蛋白(例如抗體)或核酸是基 本上純的。特別地，在某些實(shí)施方式中，將包含基因的分離的核酸與開(kāi)放閱讀框分離，所述 開(kāi)放閱讀框天然地位于所述基因側(cè)翼并且編碼除了由所述基因編碼的蛋白之外的蛋白。將 分離的抗體與其它非免疫球蛋白和其它具有不同抗原結(jié)合特異性的免疫球蛋白分離。其還 可以指核酸或蛋白具有至少85 %的純度、具有至少95 %的純度和在某些實(shí)施方式中，具有 至少99%的純度。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“癌(cancer) ”或“癌性的(cancerous) ”是指或描述其中一群細(xì) 胞的特征在于失調(diào)的細(xì)胞生長(zhǎng)的哺乳動(dòng)物中的生理狀況。癌的實(shí)例包括，但不限于，癌、淋 巴瘤、母細(xì)胞瘤、肉瘤和白血病。更特別地，所述癌的實(shí)例包括，但不限于，鱗狀細(xì)胞癌、小細(xì) 胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、肺腺癌、肺鱗狀細(xì)胞癌、腹膜癌、肝細(xì)胞癌、胃腸癌、胰腺癌、成膠質(zhì) 細(xì)胞瘤、宮頸癌、卵巢癌、肝臟癌、膀胱癌、肝細(xì)胞瘤、乳癌、結(jié)腸癌、結(jié)直腸癌、子宮內(nèi)膜癌或子宮癌、唾液腺癌、腎癌、肝臟癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌和各種類(lèi)型的頭頸癌。本文所用的“腫瘤”和“贅生物”是指任何由過(guò)度的細(xì)胞生長(zhǎng)或增殖導(dǎo)致的組織的 團(tuán)塊，其可以是良性的(非癌的)或惡性的(癌的)，包括癌前病變。術(shù)語(yǔ)“增殖性障礙”和“增殖性疾病”是指與異常細(xì)胞增殖有關(guān)的障礙，如癌。本文所用的“轉(zhuǎn)移”是指癌從原始位置擴(kuò)散或轉(zhuǎn)移到身體的其它區(qū)域的過(guò)程，并且 伴隨著位于新位置處的類(lèi)似的癌病變的發(fā)生?！稗D(zhuǎn)移”或“轉(zhuǎn)移性”細(xì)胞是失去與相鄰細(xì)胞 的粘附接觸并且經(jīng)由血流或淋巴從疾病的原發(fā)位置遷移從而侵襲鄰近的身體結(jié)構(gòu)的細(xì)胞。術(shù)語(yǔ)“癌干細(xì)胞”或“腫瘤干細(xì)胞”或“實(shí)體瘤干細(xì)胞”在本文中可相互替換地使 用，并且指具有以下性質(zhì)的實(shí)體瘤的細(xì)胞群(1)具有廣泛的增殖能力；2)能夠進(jìn)行不對(duì)稱(chēng) 細(xì)胞分裂從而產(chǎn)生增殖或發(fā)育潛能減少的一種以上分化子代；和(3)能夠進(jìn)行對(duì)稱(chēng)分裂以 用于自我更新或自我維持。當(dāng)連續(xù)移植到免疫妥協(xié)小鼠時(shí)，與不能形成腫瘤的大多數(shù)腫瘤 細(xì)胞相比，“癌干細(xì)胞”或“腫瘤干細(xì)胞”或“實(shí)體瘤干細(xì)胞”的這些性質(zhì)賦予這些癌干細(xì)胞 以形成可察覺(jué)的腫瘤的能力。癌干細(xì)胞以無(wú)序方式進(jìn)行自我更新而不是分化，從而形成具 有異常細(xì)胞類(lèi)型的腫瘤，當(dāng)發(fā)生突變時(shí)所述異常細(xì)胞類(lèi)型可以隨時(shí)間而改變。術(shù)語(yǔ)“癌細(xì)胞”或“腫瘤細(xì)胞”是指源自腫瘤的全部細(xì)胞群體，包括占腫瘤細(xì)胞群 大部分的非致瘤性細(xì)胞和致瘤性干細(xì)胞(癌干細(xì)胞)。如本文所用，“致瘤性的”是指實(shí)體瘤干細(xì)胞的功能特征，包括自我更新(產(chǎn)生另外 的致瘤性癌干細(xì)胞)的性質(zhì)和增殖以產(chǎn)生所有其它腫瘤細(xì)胞(產(chǎn)生分化的因而非致瘤性的 腫瘤細(xì)胞)的性質(zhì)，從而使實(shí)體瘤干細(xì)胞形成腫瘤。如本文所用，腫瘤的“致瘤性”是指當(dāng)連續(xù)移植到免疫妥協(xié)小鼠時(shí)，來(lái)自腫瘤的細(xì) 胞的隨機(jī)樣品形成可察覺(jué)的腫瘤的能力。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“干細(xì)胞癌標(biāo)記”或“癌干細(xì)胞標(biāo)記”或“腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記”或“實(shí) 體瘤干細(xì)胞標(biāo)記”是指基因，或由基因表達(dá)的蛋白、多肽、或肽，與非致瘤性細(xì)胞相比，所述 基因的表達(dá)水平(單獨(dú)或與其它基因組合)與致瘤性癌細(xì)胞的存在相關(guān)。該相關(guān)可以涉及 基因的表達(dá)增加或減少(例如，mRNA或由所述基因編碼的肽的水平增加或減少)。術(shù)語(yǔ)“癌干細(xì)胞基因標(biāo)簽”或“腫瘤干細(xì)胞基因標(biāo)簽”或“癌干細(xì)胞標(biāo)簽”在本文中 可相互替換地使用，來(lái)指包含與其它細(xì)胞或細(xì)胞群體(例如正常乳腺上皮組織)相比在癌 干細(xì)胞中差異性表達(dá)的基因的基因標(biāo)簽。在某些實(shí)施方式中癌干細(xì)胞基因標(biāo)簽包含與正常 乳腺上皮相比在癌干細(xì)胞中差異性表達(dá)的基因，所述表達(dá)差異成倍變化，例如表達(dá)減少/ 或增加2倍，并且可通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，例如根據(jù)多個(gè)樣品間的t檢驗(yàn)的P值來(lái)進(jìn)一步限制。 在另一實(shí)施方式中，將在癌干細(xì)胞中差異性表達(dá)的基因基于其表達(dá)與所選擇基因的相關(guān)性 以及表達(dá)改變的倍數(shù)或百分比，分成各種癌干細(xì)胞基因標(biāo)簽。癌干細(xì)胞標(biāo)簽是臨床變化方 面(包括但不限于轉(zhuǎn)移和死亡)是可回顧和前瞻性預(yù)期的。如本文所用術(shù)語(yǔ)“遺傳測(cè)試”是指對(duì)患者或患者腫瘤樣品的遺傳組成進(jìn)行分析的 程序。該分析可以包括檢測(cè)DNA、RNA、染色體、蛋白或代謝物，從而檢測(cè)可遺傳的或與身體 疾病相關(guān)的基因型或核型以用于臨床目的。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“活檢樣”或“活檢組織”是指出于確定所述樣品是否含有癌組 織的目的而從受試對(duì)象中取得的組織或流體的樣品。在某些實(shí)施方式中，由于受試對(duì)象疑 似患有癌而獲得活檢組織或流體。然后檢查活檢組織或流體是否存在癌。
如本文所用，術(shù)語(yǔ)“受試對(duì)象”是指任何動(dòng)物(例如，哺乳動(dòng)物)，包括但不限于人、 非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物和嚙齒類(lèi)動(dòng)物等，其是特定治療的接收者。通常而言，對(duì)于人類(lèi)受試對(duì)象， 術(shù)語(yǔ)“受試對(duì)象”和“患者”在本文中可相互替換地使用?！八帉W(xué)上可接受的，，是指由聯(lián)邦或州政府的管理機(jī)構(gòu)已批準(zhǔn)或可批準(zhǔn)的，或在美國(guó) 藥典或其它公知的藥典中列出的，以用于包括人類(lèi)在內(nèi)的動(dòng)物。“藥學(xué)上可接受的賦性劑、載體或佐劑”或“可接受的藥物載體”是指可以與本文公 開(kāi)的至少一種抗體一起對(duì)受試對(duì)象施用的賦性劑、載體或佐劑，并且其不破壞所述抗體的 藥理學(xué)活性，并且當(dāng)以足以遞送治療量的抗體的劑量進(jìn)行施用時(shí)是無(wú)毒的。另外，“藥學(xué)上 可接受的載體”在接受者受試對(duì)象中不觸發(fā)免疫應(yīng)答。實(shí)例包括，但不限于任何標(biāo)準(zhǔn)的藥物 載體，例如磷酸鹽緩沖的鹽水溶液、水、各種油/水乳液。某些用于氣溶膠或胃腸外施用的 稀釋劑是磷酸鹽緩沖的鹽水或生理(0.9% )鹽水?！八帉W(xué)上可接受的載劑”是指與本文公開(kāi)的至少一種抗體一起施用的稀釋劑、佐 劑、賦性劑或載體。術(shù)語(yǔ)“有效量”或“治療有效量”或“治療效果”是指對(duì)于“治療”受試對(duì)象或哺乳 動(dòng)物中的疾病或障礙有效的抗體、多肽、多核苷酸、小有機(jī)分子或其它藥物的量。在癌的情 況下，治療有效量的藥物具有治療效果并因此可以減少癌細(xì)胞的數(shù)量；降低致瘤性、致瘤頻 率或致瘤能力；減少癌干細(xì)胞的數(shù)量或頻率，減少腫瘤尺寸；抑制或停止癌細(xì)胞向周?chē)?官中的浸潤(rùn)(例如包括癌向軟組織和骨中的擴(kuò)散)；抑制和停止腫瘤轉(zhuǎn)移；抑制和停止腫 瘤生長(zhǎng)；某種程度上減輕與癌有關(guān)的一種或多種癥狀；減少發(fā)病率和死亡率；改進(jìn)生活質(zhì) 量；或所述效應(yīng)的組合。在諸如抗體等試劑防止生長(zhǎng)和/或殺死現(xiàn)有的癌細(xì)胞的情況下，可 將其稱(chēng)為具有細(xì)胞抑制性和/或細(xì)胞毒性。諸如“治療”或“處理”或“要治療”或“緩解”或“要緩解”等術(shù)語(yǔ)是指1)治愈、減 慢、減輕診斷的病理性狀況或障礙的癥狀，和/或使診斷的病理性狀況或障礙的進(jìn)展停止 的治療措施；和2)防止或減緩所靶向的病理性狀況或障礙的發(fā)展的預(yù)防性或防備性措施。 因此需要治療的受試對(duì)象包括已經(jīng)患有疾病的受試對(duì)象；有傾向患疾病的受試對(duì)象和要預(yù) 防疾病的受試對(duì)象。如果所述患者顯示出以下情況的一種或多種，則根據(jù)本發(fā)明的方法成 功地“治療” 了受試對(duì)象癌細(xì)胞的數(shù)量減少或完全不存在、腫瘤尺寸的減少；對(duì)癌細(xì)胞向 周?chē)鞴俚慕?rùn)(包括癌向軟組織和骨的擴(kuò)散)的抑制或不存在；腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制或不存 在；腫瘤生長(zhǎng)的抑制或不存在；減輕一種或多種與特定癌相關(guān)的癥狀；發(fā)病率和致死率降 低；生活質(zhì)量改進(jìn)；致瘤性降低；癌干細(xì)胞的數(shù)量或頻率減少；或上述效應(yīng)的某些組合。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“多核苷酸”或“核酸”是指由許多經(jīng)由磷酸二酯鍵連接的核苷 酸單元(核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸或相關(guān)的結(jié)構(gòu)變體)組成的聚合物，包括但不限于， DNA或RNA。該術(shù)語(yǔ)包括含有DNA和RNA的任何已知堿基類(lèi)似物的序列。術(shù)語(yǔ)“基因”是指包含產(chǎn)生多肽、前體或RNA(例如，rRNA, tRNA)所需的編碼序列 的核酸(例如DNA)序列。多肽可由全長(zhǎng)編碼序列或由所述編碼序列的任何部分編碼，只要 保留全長(zhǎng)多肽或片段的所需活性或功能性質(zhì)(例如酶促活性、配體結(jié)合、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫原 性等)。該術(shù)語(yǔ)還包括結(jié)構(gòu)基因的編碼區(qū)和在任一端以約Ikb以上的距離與5'和3'末端 的編碼區(qū)相鄰的序列，從而使得所述基因?qū)?yīng)于全長(zhǎng)mRNA的長(zhǎng)度。術(shù)語(yǔ)“基因”包括cDNA 和基因的基因組形式。
當(dāng)關(guān)于細(xì)胞、核酸、蛋白或載體使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)“重組”是指已經(jīng)通過(guò)導(dǎo)入異源核酸或 蛋白、改變天然核酸或蛋白而對(duì)所述細(xì)胞、核酸、蛋白或載體進(jìn)行修飾，或所述細(xì)胞源自如 此修飾的細(xì)胞。因此，例如重組細(xì)胞表達(dá)在天然(非重組)形式的細(xì)胞內(nèi)未發(fā)現(xiàn)的基因或 表達(dá)過(guò)表達(dá)或異常表達(dá)(例如表達(dá)為非天然存在的片段或剪接變體)的基因。本文的術(shù)語(yǔ) “重組核酸”是指以自然中正常未發(fā)現(xiàn)的形式的、通常通過(guò)例如使用聚合酶和內(nèi)切核酸酶操 作核酸，最初在體外形成的核酸。以此方式，實(shí)現(xiàn)了不同序列的可操作連接。因此，線性形 式的分離的核酸，或通過(guò)將通常不接合的DNA分子進(jìn)行連接而在體外形成的表達(dá)載體，都 認(rèn)為是用于本發(fā)明目的的重組體。應(yīng)該理解，一旦制得重組核酸并將其導(dǎo)入宿主細(xì)胞或生 物體中，其會(huì)非重組(即使用宿主細(xì)胞的體內(nèi)細(xì)胞機(jī)構(gòu)而不是體外操作)地復(fù)制；但是，所 述核酸一旦重組地產(chǎn)生，雖然隨后進(jìn)行非重組地復(fù)制，仍然被認(rèn)為是用于本發(fā)明目的的重 組體。類(lèi)似地，“重組蛋白”是使用重組技術(shù)(即，通過(guò)上述重組核酸的表達(dá))制備的蛋白。如本文所用，使用術(shù)語(yǔ)“載體”來(lái)指將DNA區(qū)段從一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到另一細(xì)胞的核酸 分子。載體通常源自質(zhì)粒、噬菌體或植物病毒或動(dòng)物病毒。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“基因表達(dá)”是指下述過(guò)程通過(guò)基因的“轉(zhuǎn)錄”(例如經(jīng)由RNA聚 合酶的酶促作用)將基因中編碼的遺傳信息轉(zhuǎn)化成RNA(例如，mRNA、rRNA、tRNA或snRNA)， 并且對(duì)于編碼蛋白的基因，通過(guò)mRNA的“翻譯”轉(zhuǎn)化成蛋白?？梢栽谠撨^(guò)程中的許多階段 對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行調(diào)節(jié)?！吧险{(diào)”或“激活”是指增加基因表達(dá)產(chǎn)物(例如，RNA或蛋白)的產(chǎn) 生的調(diào)節(jié)，而“下調(diào)”或“抑制”是指減少產(chǎn)生的調(diào)節(jié)。參與上調(diào)或下調(diào)的分子(例如轉(zhuǎn)錄 因子)通常分別稱(chēng)為“激活子”和“抑制子”。術(shù)語(yǔ)“多肽”或“肽”或“蛋白”或“蛋白片段”在本文中可相互替換地使用，來(lái)指氨 基酸殘基的聚合物。該術(shù)語(yǔ)適用于其中一種或多種氨基酸殘基為相應(yīng)天然存在的氨基酸的 人工化學(xué)模擬物的氨基酸聚合物，以及天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚 合物。術(shù)語(yǔ)“氨基酸”是指天然存在和合成的氨基酸，以及與天然存在的氨基酸功能類(lèi)似 的氨基酸類(lèi)似物和氨基酸模擬物。天然存在的氨基酸是由遺傳密碼編碼的氨基酸以及稍后 經(jīng)過(guò)修飾的那些氨基酸，例如羥脯氨酸、Y -羧基谷氨酸和ο-磷酸絲氨酸?！鞍被犷?lèi)似物” 是指與天然存在的氨基酸具有相同的基本化學(xué)結(jié)構(gòu)(例如與氫、羧基、氨基和R基團(tuán)結(jié)合的 α碳)的化合物，例如高絲氨酸、正亮氨酸、蛋氨酸亞砜、蛋氨酸甲基锍。所述類(lèi)似物可具有 經(jīng)修飾的R基團(tuán)(例如正亮氨酸)或經(jīng)修飾的肽主鏈，但是保持與天然存在的氨基酸相同 的基本化學(xué)結(jié)構(gòu)?！鞍被崮M物”是指具有與氨基酸的通?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)不同的結(jié)構(gòu)，但與天 然存在的氨基酸功能類(lèi)似的化合物?！氨Ｊ匦孕揎椬凅w”適用于氨基酸和核酸序列?！鞍被嶙凅w”是指氨基酸序列。 對(duì)于特定的核酸序列，保守性修飾變體是指編碼相同或基本上相同的氨基酸序列的那些核 酸，或當(dāng)所述核酸不編碼氨基酸序列時(shí)，是指基本上相同或相關(guān)(例如天然連續(xù))的序列。 由于遺傳編碼的簡(jiǎn)并性，大量功能上相同的核酸編碼大多數(shù)蛋白。例如，密碼子GCA、GCC、 GCG和GCU都編碼氨基酸丙氨酸。因此，在每個(gè)由密碼子規(guī)定丙氨酸的位置，該密碼子可 以改變成所述相應(yīng)密碼子中的另一個(gè)而不會(huì)改變所編碼的多肽。所述核酸變化是“沉默變 化”，其是保守性修飾變化的一種。編碼多肽的本文的每個(gè)核酸序列也描述了核酸的沉默變 化。認(rèn)識(shí)到的是，在某些背景下可以對(duì)核酸中的各密碼子(除了通常是蛋氨酸的唯一密碼色氨酸的唯一密碼子的TGG)進(jìn)行修飾以產(chǎn)生功能相同的分子。因此，編 碼多肽的核酸的沉默變化涉及關(guān)于表達(dá)產(chǎn)物的所述序列，而不是關(guān)于實(shí)際的探針序列的所 述序列。關(guān)于氨基酸序列，認(rèn)識(shí)到的是，在所編碼序列中改變、添加或缺失單個(gè)氨基酸或小 百分比的氨基酸的、對(duì)核酸、肽、多肽或蛋白序列進(jìn)行的各取代、缺失或添加，是“保守性修 飾變體”，包括其中改變導(dǎo)致氨基酸被化學(xué)上相似的氨基酸取代。提供功能相似的氨基酸的 保守性取代表是本領(lǐng)域眾所周知的(參見(jiàn)，例如表1)。還可以在Bowie等，1990，Science 247 1306-1310中發(fā)現(xiàn)關(guān)于哪一種氨基酸變化可能是表型上沉默的指南。所述保守性修 飾變體是除了本發(fā)明的多態(tài)變體、種間同源物和等位基因之外但不排除其的變體。通常而 言保守性取代包括1)丙氨酸(A)、甘氨酸(G) ；2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E) ；3)天冬酰胺 (N)、谷氨酰胺(Q) ；4)精氨酸(R)、賴(lài)氨酸(K)，5)異亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、蛋氨酸(M)、纈 氨酸(V) ；6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W) ；7)絲氨酸(S)、蘇氨酸(T)；和8)半胱 氨酸(C)、蛋氨酸(M)(參見(jiàn)，例如，Creighton，Proteins (1984))。如所示，變化通常為次要 性質(zhì)，例如不顯著影響蛋白的折疊或活性的保守性氨基酸取代。表1.保守性氨基酸取代
權(quán)利要求
1.一種分離的抗體，所述抗體與人類(lèi)NotChl受體的胞外域的非配體結(jié)合近膜區(qū)特異 性結(jié)合并且抑制腫瘤生長(zhǎng)。
2.如權(quán)利要求1所述的抗體，其中所述抗體與至少一個(gè)其它Notch受體的胞外域的非 配體結(jié)合近膜區(qū)特異性結(jié)合。
3.如權(quán)利要求1或2所述的抗體，其中所述抗體是Notchl的拮抗劑。
4.如權(quán)利要求1 3中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體抑制Notchl的激活。
5.如權(quán)利要求1 4中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體抑制所述近膜區(qū)內(nèi)的切割。
6.如權(quán)利要求1 5中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體抑制位于所述近膜區(qū)內(nèi)的S2 位點(diǎn)處的切割。
7.如權(quán)利要求1 6中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體抑制Notchl的胞內(nèi)域(ICD) 的釋放。
8.如權(quán)利要求1 7中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體是IgA、IgD、IgE、IgG或IgM 抗體。
9.如權(quán)利要求1 7中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體是IgGl抗體。
10.如權(quán)利要求1 7中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體是IgG2抗體。
11.如權(quán)利要求1 10中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體是單克隆抗體。
12.如權(quán)利要求1 11中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體是嵌合抗體。
13.如權(quán)利要求1 12中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體是人源化抗體。
14.如權(quán)利要求1 12中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體是人類(lèi)抗體。
15.如權(quán)利要求1 14中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體是抗體片段。
16.如權(quán)利要求1 15中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體是單價(jià)抗體。
17.如權(quán)利要求1 16中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述Notchl受體的非配體結(jié)合近膜 區(qū)包含 SEQ ID NO :2ο
18.如權(quán)利要求1 17中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體包含含有RGYWIE(SEQ ID NO 15)的重鏈 CDR1、含有 QILPGTGRTNYNEKFKG(SEQ ID NO 16)的重鏈 CDR2 和含有 FDGNYGYYAMDY (SEQ ID NO: 17)的重鏈 CDR3。
19.如權(quán)利要求18所述的抗體，其中所述抗體還包含含有RSSTGAVTTSNYAN(SEQ ID NO: 18)的輕鏈 CDRl、含有 GTNNRAP(SEQ IDNO 19)的輕鏈 CDR2 和含有 ALffYSNHWVFGGGTKL (SEQ ID NO. 20)的輕鏈 CDR3。
20.如權(quán)利要求1 17中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體包含含有 RSSTGAVTTSNYAN (SEQ ID NO: 18)的輕鏈 CDR1、含有 GTNNRAP (SEQ ID NO: 19)的輕鏈 CDR2 和含有 ALWYSNHWVFGGGTKL (SEQ ID NO. 20)的輕鏈 CDR3。
21.一種分離的抗體，所述抗體與人類(lèi)Notchl的胞外域的非配體結(jié)合近膜區(qū) 特異性結(jié)合，其中所述抗體包含含有RGYWIE(SEQ ID NO 15)的重鏈CDR1、含有 QILPGTGRTNYNEKFKG (SEQ ID NO 16)的重鏈 CDR2 和 / 或含有 FDGNYGYYAMDY (SEQ ID NO: 17)的重鏈CDR3。
22.如權(quán)利要求21所述的抗體，其中所述抗體還包含含有RSSTGAVTTSNYAN(SEQ ID NO 18)的輕鏈 CDRl、含有 GTNNRAP (SEQ ID NO 19)的輕鏈 CDR2 和 / 或含有 ALffYSNHWVFGGGTKL (SEQ ID NO. 20)的輕鏈 CDR3。
23.一種分離的抗體，所述抗體與人類(lèi)Notchl的胞外域的非配體結(jié)合近膜區(qū)特異 性結(jié)合，其中所述抗體包含含有RSSTGAVTTSNYAN(SEQ ID NO 18)的輕鏈⑶R1、含有 GTNNRAP (SEQ ID NO: 19)的輕鏈 CDR2 和 / 或含有 ALWYSNHWVFGGGTKL(SEQ ID NO. 20)的輕 鏈 CDR3。
24.一種分離的抗體，所述抗體與人類(lèi)Notchl的胞外域的非配體結(jié)合近膜區(qū)特異性結(jié) 合，其中所述抗體包含(a)含有RGYWIE (SEQ ID NO: 15)的重鏈 CDR1、含有 QILPGTGRTNYNEKFKG(SEQ ID NO: 16)的重鏈 CDR2 和含有 FDGNYGYYAMDY (SEQ ID NO 17)的重鏈 CDR3 ；禾口 / 或(b)含有RSSTGAVTTSNYAN(SEQ ID NO 18)的輕鏈 CDRl、含有 GTNNRAP (SEQ ID NO 19) 的輕鏈 CDR2 和含有 ALWYSNHWVFGGGTKL(SEQ ID NO. 20)的輕鏈 CDR3。
25.一種分離的抗體，所述抗體與人類(lèi)Notchl的胞外域的非配體結(jié)合近膜區(qū)特異性結(jié) 合，其中所述抗體包含重鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含(a)含有RGYWIE(SEQ ID NO 15) 的重鏈⑶Rl，或包含1、2、3或4個(gè)氨基酸取代的其變體；(b)含有QILPGTGRTNYNEKFKG(SEQ ID NO 16)的重鏈⑶R2，或包含1、2、3或4個(gè)氨基酸取代的其變體；和(c)含有 FDGNYGYYAMDY (SEQ ID NO 17)的重鏈⑶R3，或包含1、2、3或4個(gè)氨基酸取代的其變體。
26.如權(quán)利要求25所述的抗體，所述抗體還包含輕鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)包含 (a)含有RSSTGAVTTSNYAN(SEQ ID NO 18)的輕鏈CDR1，或包含1、2、3或4個(gè)氨基酸取代的 其變體；(b)含有GTNNRAP (SEQ ID NO 19)的輕鏈CDR2，或包含1、2、3或4個(gè)氨基酸取代的 其變體；和 / 或(c)含有 ALWYSNHWVFGGGTKL (SEQ ID NO 20)的輕鏈 CDR3，或包含 1、2、3 或 4個(gè)氨基酸取代的其變體。
27.一種分離的抗體，所述抗體與人類(lèi)Notchl的胞外域的非配體結(jié)合近膜區(qū)特異性 結(jié)合，其中所述抗體包含輕鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)包含(a)含有RSSTGAVTTSNYAN(SEQ ID NO 18)的輕鏈⑶Rl，或包含1、2、3或4個(gè)氨基酸取代的其變體；(b)含有GTNNRAP (SEQ ID N0 19)的輕鏈⑶R2，或包含1、2、3或4個(gè)氨基酸取代的其變體；和/或(c)含有 ALWYSNHWVFGGGTKL (SEQ ID NO 20)的輕鏈CDR3，或包含1、2、3或4個(gè)氨基酸取代的其變 體。
28.如權(quán)利要求25 27中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述氨基酸取代是保守性氨基酸取代。
29.一種分離的抗體，所述抗體與人類(lèi)Notchl的胞外域的非配體結(jié)合近膜區(qū)特異性 結(jié)合，其中所述抗體結(jié)合的所述近膜區(qū)內(nèi)的表位與抗體52M51結(jié)合的表位相同，所述抗體 52M51由以ATCC專(zhuān)利保藏號(hào)PTA-9405保藏的雜交瘤細(xì)胞系產(chǎn)生。
30.一種分離的抗體，所述抗體與人類(lèi)Notchl的胞外域的非配體結(jié)合近膜區(qū)特異性結(jié) 合并且抑制Notchl I⑶的形成，其中所述抗體抑制腫瘤生長(zhǎng)。
31.一種分離的抗體，所述抗體與權(quán)利要求1 30中任一項(xiàng)所述的抗體競(jìng)爭(zhēng)對(duì)人類(lèi) Notchl的胞外域的非配體結(jié)合近膜區(qū)的特異性結(jié)合。
32.—種分離的抗體，所述抗體在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合檢測(cè)中與權(quán)利要求1 30中任一項(xiàng)所述 的抗體競(jìng)爭(zhēng)對(duì)人類(lèi)Notchl的胞外域的非配體結(jié)合近膜區(qū)的特異性結(jié)合。
33.一種分離的抗體，所述抗體與抗體52M51競(jìng)爭(zhēng)對(duì)人類(lèi)Notchl的胞外域的非配體結(jié) 合近膜區(qū)的特異性結(jié)合。
34.一種分離的抗體，所述抗體與人類(lèi)Notchl的胞外域的非配體結(jié)合近膜區(qū)特異性結(jié) 合，其中所述抗體包含(a)與SEQ ID N0:14或SEQ ID NO :24具有至少90%序列同一性的 重鏈可變區(qū)；和/或(b)與SEQ ID NO :8、SEQ ID NO 28或SEQ ID NO 32具有至少90% 序列同一性的輕鏈可變區(qū)。
35.如權(quán)利要求34所述的抗體，其中所述重鏈可變區(qū)與SEQID N0:14或SEQID NO 24 具有至少95%的序列同一性；和/或(b)所述輕鏈可變區(qū)與SEQ ID NO :8、SEQ ID NO 28 或SEQ ID NO :32具有至少95%的序列同一性。
36.一種分離的多肽，所述多肽包含(a)具有氨基酸序列SEQID NO 14或SEQ ID NO 24的多肽；和/或(b)具有氨基酸序列SEQ ID NO :8、SEQ ID NO 28 或 SEQ ID NO 32 的多肽。
37.如權(quán)利要求36所述的多肽，其中所述多肽是抗體。
38.如權(quán)利要求36所述的多肽，其中所述多肽包含具有氨基酸序列SEQID NO :14的 多肽和具有氨基酸序列SEQ ID NO 8的多肽。
39.如權(quán)利要求36所述的多肽，其中所述多肽包含具有氨基酸序列SEQID NO :24的 多肽和具有氨基酸序列SEQ ID NO 28的多肽。
40.如權(quán)利要求36所述的多肽，其中所述多肽包含具有氨基酸序列SEQID NO :24的 多肽和具有氨基酸序列SEQ ID NO 32的多肽。
41.一種抗體，所述抗體包含的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)與以ATCC專(zhuān)利保藏號(hào) PTA-9549保藏的質(zhì)粒所編碼的多肽相同。
42.一種由雜交瘤細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體，所述雜交瘤細(xì)胞系以ATCC專(zhuān)利保藏號(hào)PTA-9405 保藏。
43.一種特異性結(jié)合人類(lèi)Notchl的抗體，所述抗體包含如權(quán)利要求36或37所述的多肽。
44.一種特異性結(jié)合人類(lèi)Notchl的抗體，所述抗體包含含有 SEQ ID NO 14 或 SEQ ID NO 24 的多肽；禾口含有 SEQ ID NO :8、SEQ ID NO 28 或 SEQ ID NO 32 的多肽。
45.一種藥物組合物，所述藥物組合物包含權(quán)利要求1 44中任一項(xiàng)所述的抗體或多 肽和藥學(xué)上可接受的載體。
46.一種藥物組合物，所述藥物組合物包含權(quán)利要求1 44中任一項(xiàng)所述的抗體或多 肽和至少一種其它抗癌劑。
47.一種分離的多核苷酸分子，所述多核苷酸分子包含編碼權(quán)利要求1 44中任一項(xiàng) 所述的抗體或多肽的多核苷酸。
48.一種表達(dá)載體，所述表達(dá)載體包含權(quán)利要求47所述的多核苷酸分子。
49.一種宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞包含權(quán)利要求48所述的表達(dá)載體。
50.一種宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞包含權(quán)利要求47所述的多核苷酸分子。
51.一種雜交瘤細(xì)胞系，所述雜交瘤細(xì)胞系以ATCC專(zhuān)利保藏號(hào)PTA-9405保藏。
52.一種細(xì)胞系，所述細(xì)胞系產(chǎn)生權(quán)利要求1 44中任一項(xiàng)所述的抗體。
53.一種抑制細(xì)胞中Notchl的活性的方法，所述方法包括使所述細(xì)胞與權(quán)利要求1 44中任一項(xiàng)所述的抗體或多肽接觸。
54.如權(quán)利要求53所述的方法，其中所述細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞。
55.一種抑制受試對(duì)象中的腫瘤生長(zhǎng)的方法，所述方法包括對(duì)所述受試對(duì)象施用治療 有效量的權(quán)利要求1 44中任一項(xiàng)所述的抗體或多肽。
56.一種減少受試對(duì)象的中包含癌干細(xì)胞的腫瘤的致瘤性的方法，所述方法包括對(duì)所 述受試對(duì)象施用治療有效量的權(quán)利要求1 44中任一項(xiàng)所述的抗體或多肽，其中通過(guò)所述 抗體或多肽的施用而使所述腫瘤中癌干細(xì)胞的頻率或數(shù)量減少。
57.如權(quán)利要求55或56所述的方法，其中所述腫瘤或腫瘤細(xì)胞選自由乳腫瘤、結(jié)直腸 腫瘤、肝腫瘤、腎腫瘤、肺腫瘤、胰腺腫瘤、卵巢腫瘤、前列腺腫瘤以及頭頸腫瘤組成的組。
58.一種治療受試對(duì)象中的癌的方法，所述方法包括對(duì)所述受試對(duì)象施用治療有效量 的權(quán)利要求1 44中任一項(xiàng)所述的抗體或多肽。
59.如權(quán)利要求58所述的方法，其中所述癌選自由乳癌、結(jié)直腸癌、肝臟癌、腎癌、肝 癌、肺癌、胰腺癌、胃腸癌、黑色素瘤、卵巢癌、前列腺癌、宮頸癌、膀胱癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤以及 頭頸癌組成的組。
60.如權(quán)利要求55 59中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述方法還包括對(duì)所述受試對(duì)象施 用至少一種其它抗癌劑/治療劑。
61.如權(quán)利要求60所述的方法，其中所述其它抗癌劑選自由紫杉醇、伊立替康、吉西他 濱和奧沙利鉬組成的組。
62.如權(quán)利要求60所述的方法，其中所述抗癌劑是其它抗體治療劑。
63.如權(quán)利要求62所述的方法，其中所述其它抗體治療劑包含與第二Notch受體特異 性結(jié)合的抗體。
64.如權(quán)利要求62所述的方法，其中所述其它抗體治療劑包含與VEGF特異性結(jié)合的抗體。
65.如權(quán)利要求62所述的方法，其中所述其它抗體治療劑包含與Notch受體配體特異 性結(jié)合的抗體。
66.如權(quán)利要求65所述的方法，其中所述NOTCH受體配體是DLL4。
67.如權(quán)利要求65所述的方法，其中所述NOTCH受體配體是JAGl。
68.如權(quán)利要求55 67中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗體與細(xì)胞毒性基團(tuán)綴合。
69.如權(quán)利要求55 68中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗體的施用與放射治療一起進(jìn)行。
70.如權(quán)利要求55 59中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗體的施用與化學(xué)治療一起進(jìn)行。
71.—種抑制受試對(duì)象中的腫瘤生長(zhǎng)的方法，所述方法包括對(duì)所述受試對(duì)象施用治療 有效量的抗體，所述抗體與人類(lèi)Notchl的胞外域的非配體結(jié)合近膜區(qū)特異性結(jié)合，其中結(jié) 合抑制Notchl的活性。
72.如權(quán)利要求71所述的方法，其中所述腫瘤選自由乳腫瘤、結(jié)直腸腫瘤、肝腫瘤、腎 腫瘤、肺腫瘤、胰腺腫瘤、卵巢腫瘤、前列腺腫瘤以及頭頸腫瘤組成的組。
73.如權(quán)利要求71或72所述的方法，其中所述受試對(duì)象是人類(lèi)。
74.如權(quán)利要求71 73中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗體是Notchl的拮抗劑。
75.如權(quán)利要求71 73中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗體是IgGl抗體。
76.如權(quán)利要求71 74中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗體是IgG2抗體。
77.如權(quán)利要求71 76中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗體是單克隆抗體。
78.如權(quán)利要求71 77中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗體是嵌合抗體。
79.如權(quán)利要求71 78中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗體是人源化抗體。
80.如權(quán)利要求71 78中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗體是人類(lèi)抗體。
81.如權(quán)利要求71 80中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗體是抗體片段。
82.如權(quán)利要求71 81中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗體與細(xì)胞毒性劑綴合。
83.如權(quán)利要求71 82中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述方法還包括施用適于實(shí)現(xiàn)聯(lián) 合治療的至少一種其它治療劑。
84.—種通過(guò)減少在含有癌干細(xì)胞的腫瘤中的癌干細(xì)胞的頻率或數(shù)量從而減少所述腫 瘤的致瘤性的方法，所述方法包括使所述腫瘤與治療有效量的抑制Notchl活性的抗體接 觸。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了用于診斷、表征、預(yù)后和治療癌的手段和方法，特別是靶向癌干細(xì)胞的手段和方法。本發(fā)明提供一種與人類(lèi)Notch受體的胞外域的非配體結(jié)合區(qū)特異性結(jié)合并且抑制腫瘤生長(zhǎng)的抗體，以及治療癌的方法，所述方法包括對(duì)受試對(duì)象施用所述抗體。
文檔編號(hào)C07K16/28GK102112490SQ200980126471
公開(kāi)日2011年6月29日 申請(qǐng)日期2009年7月8日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月8日
發(fā)明者奧斯丁·L·格尼, 富米考·塔卡達(dá)·阿克塞爾羅德, 莫林·菲奇·布魯恩斯, 蒂莫西·查爾斯·霍伊 申請(qǐng)人:昂考梅德藥品有限公司