專利名稱：一種從新鮮虎杖中制備高純度白藜蘆醇的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從新鮮虎杖中制備高純度白藜蘆醇方法，尤其是一種采用膜分
離，生物酶解、氧化鋁吸附等工序制備白藜蘆醇的方法。
背景技術(shù)：
白藜蘆醇 別名虎杖甙元 化學(xué)名:(E) -5- [2- (4-羥苯基)-乙烯基]-1 ， 3-苯二酚;3， 5， 4 "-三羥基芪;芪
三酷sTrans-3-4' -trihydroxystilbene 分子式C14H1203 分子量228. 25 分子結(jié)構(gòu) 物理性質(zhì)無(wú)味、白色晶體粉末；難溶于水，易溶于乙醇，丙酮等有機(jī)溶劑。
白藜蘆醇是一種天然的抗氧化劑，可降低血液粘稠度，抑制血小板凝結(jié)和血管舒張，保持血液暢通，可預(yù)防癌癥的發(fā)生及發(fā)展，具有抗動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病，缺血性心臟病，高血脂的防治作用。抑制腫瘤的作用還具有雌激素樣作用，可用于治療乳腺癌等疾病。被醫(yī)學(xué)界稱為"第二抗癌植物藥"。 白藜蘆醇是蒽醌萜類化合物，主要來(lái)源于寥科植物虎杖的根莖，可是虎杖中含量
極低，目前市場(chǎng)上的白藜蘆醇主要是虎杖苷分解制備的。 虎杖苷 別名云杉新甙，白藜蘆醇甙 化學(xué)名禾爾3，4' _5_Trihydroxystilbene_3_beta_D_glucopyranoside 分子式。2。112208 分子量390.40 分子結(jié)構(gòu)
301 物理性質(zhì)易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯和堿性水溶液，微溶于水。
目前用虎杖苷制備白藜蘆醇的方法，多是酸水解或生物酶解。酸水解反應(yīng)劇烈，工藝不易控制，現(xiàn)已被生物酶解所代替，生物酶解過(guò)程緩和，收率高，成本低。生物酶解多半采用虎杖打碎加濕加入生物酶，放置酶解，此過(guò)程周期長(zhǎng)。還有醇提酶解，回收試劑造成能源浪費(fèi)，成本較高。也有堿水提取酶解及微波、超聲輔助設(shè)備的應(yīng)用，提取率大大提高，如2008-第25巻第5期《化學(xué)工業(yè)與工程》刊登了 "纖維素酶_微波提取虎杖中白藜蘆醇的工藝"，文獻(xiàn)中采用了微波提取的方法提取過(guò)程中大量的多糖溶出，造成了酶的用量增大，成本增加。高純度的白藜蘆醇制備也多是有機(jī)試劑萃取和柱層析方法，如中國(guó)專利授權(quán)號(hào)CN1090603C "—種從虎杖中提取純化白藜蘆醇的新方法"，公開的方法中，應(yīng)用了乙酸乙酯萃取法；再如中國(guó)專利授權(quán)號(hào)CN1269831C "虎杖苷和白藜蘆醇的新制備方法"，公開的方法中應(yīng)用聚酰胺層析法和活性炭脫色等工序，這些方法造成回收試劑困難、周期長(zhǎng)、收率低、產(chǎn)業(yè)化程度低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種從新鮮虎杖中制備高純度白藜蘆醇的方法。
該方法能夠降低生產(chǎn)成本，提高產(chǎn)品收率，便于工業(yè)化操作。 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提取技術(shù)方案如下 1)提取將新鮮虎杖粉碎30-60目，加入飽和石灰水溶液浸泡提取，提取液調(diào)節(jié)pH為6-7 ; 2)膜分離提取液通過(guò)超濾膜截留分離，收集透過(guò)液，把透過(guò)液再通過(guò)截留分子量為100-200納濾膜濃縮，得虎杖苷濃縮液； 3)酶解轉(zhuǎn)化將濃縮液調(diào)節(jié)ra至4. 5-5. 5，加入生物酶，保溫酶解，濃縮，得白藜蘆醇粗品； 4)氧化鋁柱吸附將白藜蘆醇粗品乙醇溶解，加入氧化鋁柱吸附雜質(zhì)，得柱液，加水放置結(jié)晶，干燥，即得。 原料選用為新鮮虎杖。新鮮虎杖中虎杖苷含量最高，高達(dá)2.5%而干燥的虎杖中虎杖苷含量只有1.8-2.5%。 浸泡提取條件為加飽和石灰水量為用量為原料重量4-6倍，浸泡溫度60-80°C，浸泡時(shí)間1-2小時(shí)，浸泡提取次數(shù)為2-3次。
調(diào)節(jié)pH的酸可選鹽酸、硫酸、磷酸的一種，優(yōu)選鹽酸。 膜分離條件為超濾膜為截留分子量1000-3000的超濾膜，超濾納都在常溫下進(jìn) 行，虎杖苷濃縮液體積為原料重量的4-5倍。 酶可選纖維素酶、13 -葡聚糖苷酶和淀粉酶的一種，優(yōu)選|3 _葡萄糖苷酶。 酶解轉(zhuǎn)化條件為保溫溫度為45_55°C，加酶量為原料量的0. 5_1%。，酶解時(shí)間
9-12小時(shí)。 氧化鋁為120-200目的中性氧化鋁。 乙醇溶解條件為90% _95%的乙醇，回流飽和溶解。 加水放置結(jié)晶條件為加水量為下柱液體積的1-1. 5倍，攪拌放置結(jié)晶。利用了白
藜蘆醇在低醇和水中溶解度極差的性質(zhì)。
綜上所述，本發(fā)明存在以下優(yōu)點(diǎn) 1)利用新鮮虎杖，可以減少虎杖在晾曬過(guò)程中虎杖苷的損失，可以提高產(chǎn)品收率。
2)利用膜分離可以出去大分子物質(zhì)，減少了酶的用量，提高了酶解效率和產(chǎn)品含 3)氧化鋁樹脂的應(yīng)用，除雜更徹底，產(chǎn)品收率高，純度高。 下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限 于下列實(shí)施方式。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1 : 新鮮虎杖粉碎到30目，取10kg(虎杖苷苷含量2.48%白藜蘆醇含量0.6% )，加 入40L飽和石灰水溶液中，加溫至8(TC，保溫1小時(shí)，過(guò)濾提取液，重復(fù)提取一次，合并提取 液用鹽酸調(diào)節(jié)pH至7，濾過(guò)加入截留分子量為1000 3000的超濾膜，收集透過(guò)液，透過(guò)液 再通過(guò)截留分子量為100-200納濾膜濃縮，收集濃縮液40L.，用鹽酸調(diào)節(jié)PH至4. 5，加溫至 5(TC，加入10克13 -葡聚糖苷酶攪拌均勻，保溫酶解9小時(shí)，濃縮酶解液，過(guò)濾干燥得白藜 戸醇粗品280克含量70%。白藜戸醇粗品用90%的乙醇回流飽和溶解，放置室溫加入中性 氧化鋁柱吸附雜質(zhì)，收集下柱液，加入等體積的水，放置結(jié)晶，過(guò)濾晶體，低溫干燥得178克 白藜蘆醇含量98%。
實(shí)施例2 : 新鮮虎杖粉碎到40目，取10kg(虎杖苷苷含量2.3X白藜蘆醇含量0.4X )，加 入60L飽和石灰水溶液中，加溫至6(TC，保溫1小時(shí)，過(guò)濾提取液，重復(fù)提取兩次，合并提取 液用鹽酸調(diào)節(jié)pH至8，濾過(guò)加入截留分子量為1000 3000的超濾膜，收集透過(guò)液，透過(guò)液 再通過(guò)截留分子量為100-200納濾膜濃縮，收集濃縮液50L.，用硫酸調(diào)節(jié)ra至5，加溫至 45t:，加入8克纖維素酶攪拌均勻，保溫酶解11小時(shí)，濃縮酶解液，過(guò)濾干燥得白藜蘆醇粗 品225克含量72%。白藜戸醇粗品用95%的乙醇回流飽和溶解，放置室溫加入中性氧化鋁 柱吸附雜質(zhì)，收集下柱液，加入等體積的水，放置結(jié)晶，過(guò)濾晶體，低溫干燥得155克白藜蘆 醇含量96%。
實(shí)施例3 : 新鮮虎杖粉碎到60目，取10kg(虎杖苷苷含量2. 5%白藜蘆醇含量0. 7% )，加入50L飽和石灰水溶液中，加溫至8(TC，保溫1. 5小時(shí)，過(guò)濾提取液，重復(fù)提取一次，合并提取 液用硫酸調(diào)節(jié)pH至7. 5，濾過(guò)加入截留分子量為1000 3000的超濾膜，收集透過(guò)液，透過(guò) 液再通過(guò)截留分子量為100-200納濾膜濃縮，收集濃縮液50L.，用鹽酸調(diào)節(jié)PH至5，加溫至 55t:，加入10克淀粉酶攪拌均勻，保溫酶解12小時(shí)，濃縮酶解液，過(guò)濾干燥得白藜蘆醇粗品 288克含量71%。白藜蘆醇粗品用90%的乙醇回流飽和溶解，放置室溫加入中性氧化鋁柱 吸附雜質(zhì)，收集下柱液，加入1.5倍柱體積的水，放置結(jié)晶，過(guò)濾晶體，低溫干燥得190克白 藜蘆醇含量98%。
實(shí)施例4 : 新鮮虎杖粉碎到60目，取10kg(虎杖苷苷含量2.4X白藜蘆醇含量0.5X )，加 入60L飽和石灰水溶液中，加溫至7(TC，保溫2小時(shí)，過(guò)濾提取液，重復(fù)提取兩次，合并提取 液用鹽酸調(diào)節(jié)pH至8，濾過(guò)加入截留分子量為1000 3000的超濾膜，收集透過(guò)液，透過(guò)液 再通過(guò)截留分子量為100-200納濾膜濃縮，收集濃縮液50L.，用鹽酸調(diào)節(jié)ra至5，加溫至 5(TC，加入5克13 -葡聚糖苷酶攪拌均勻，保溫酶解10小時(shí)，濃縮酶解液，過(guò)濾干燥得白藜 戸醇粗品245克含量73%。白藜戸醇粗品用95%的乙醇回流飽和溶解，放置室溫加入中性 氧化鋁柱吸附雜質(zhì)，收集下柱液，加入等體積的水，放置結(jié)晶，過(guò)濾晶體，低溫干燥得185克 白藜蘆醇含量98%。
權(quán)利要求
一種從新鮮虎杖中制備高純度白藜蘆醇方法，其特征在于包含以下步驟1)提取將含有虎杖苷的原料粉碎30-60目，加入飽和石灰水溶液浸泡提取，提取液調(diào)節(jié)pH為7-8；2)膜分離提取液濾過(guò)，通過(guò)超濾膜截留分離，收集透過(guò)液，透過(guò)液再通過(guò)截留分子量為100-200納濾膜濃縮，得虎杖苷濃縮液；3)酶解轉(zhuǎn)化將虎杖苷濃縮液調(diào)節(jié)PH至4.5-5.5，加入生物酶，保溫酶解，減壓濃縮，得白藜蘆醇粗品；4)氧化鋁柱吸附將白藜蘆醇粗品乙醇溶解，加入氧化鋁柱吸附雜質(zhì)，得下柱液，加水放置結(jié)晶，干燥，即得。
2. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述的原料為寥科植物新鮮虎杖。
3. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述的浸泡提取條件為加飽和石灰水量為用量為原料重量4-6倍，浸泡溫度60-8(TC，浸泡時(shí)間1-2小時(shí)，浸泡提取次數(shù)為2_3次。
4. 如權(quán)利要求所述的制備方法，其特征在于所述調(diào)節(jié)pH的酸可選鹽酸、硫酸、磷酸的一種，優(yōu)選鹽酸。
5. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述膜分離條件為超濾膜為截留分子量1000-3000的超濾膜，超濾納濾都在常溫下進(jìn)行，虎杖苷濃縮液體積為原料重量的4-5倍
6. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述酶可選纖維素酶、13 -葡聚糖苷酶和淀粉酶的一種，優(yōu)選P-葡萄糖苷酶。
7. 如權(quán)利要求l所述的制備方法，其特征在于所述酶解轉(zhuǎn)化條件為保溫溫度為45-55t:，加酶量為原料量的0. 5-1%。，酶解時(shí)間9-12小時(shí)
8. 如權(quán)利要求l所述的制備方法，其特征在于所述氧化鋁為120-200目的中性氧化鋁。
9. 如權(quán)利要求l所述的制備方法，其特征在于所述乙醇溶解為90%-95%的乙醇，回流飽和溶解。
10. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述加水量放置結(jié)晶條件加水量為下柱液體積的1-1. 5倍。
全文摘要
一種制備白藜蘆醇的方法，以新鮮虎杖為原料，粉碎后用飽和石灰水溶液加熱浸泡提取，提取液調(diào)節(jié)pH，超濾膜除大分子雜質(zhì)、納濾膜濃縮，濃縮液加入生物酶，保溫酶解9-12小時(shí)，所得粗品乙醇溶解，過(guò)氧化鋁樹脂除雜，加水放置結(jié)晶。采用該方法生產(chǎn)的產(chǎn)品含量高、收率高、成本低。該工藝易放大和產(chǎn)業(yè)化。
文檔編號(hào)C07C39/21GK101760483SQ200910234069
公開日2010年6月30日 申請(qǐng)日期2009年11月20日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月20日
發(fā)明者劉東鋒, 張翼, 楊成東 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司