專利名稱：一種富集純化五味子中五味子醇甲的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種五味子醇甲的純化方法，特別是涉及一
種利用大孔吸附樹脂富集純化五味子中五味子醇甲的方法。
背景技術(shù)：
五味子，俗稱山花椒、秤砣子、藥五味子、面藤、五梅子等，唐等《新修本草》載"五味 皮肉甘酸，核中辛苦，都有咸味"，故有五味子之名。古醫(yī)書稱它室藉、玄及、會及，最早列于 神農(nóng)本草經(jīng)上品，中藥功效在于滋補(bǔ)強(qiáng)壯之力，藥用價值極高。五味子是多年生落葉藤本， 植株可供觀賞。為木蘭科植物五味子(Schisandra chinensis (Turcz.) Baill.)習(xí)稱"北五 味子"，或華中五味子(Schisandra sphenantheraRehd. etWils.)習(xí)稱"南五味子"的干燥成 熟果實。珍曾謂"五味今有南北之分，南產(chǎn)者色紅，北產(chǎn)者色黑，人滋補(bǔ)藥必用北產(chǎn)者良"。 中國藥典2000年版將五味子和南五味子分別收載為兩個品種。五味子只特指北五味子的 干燥成熟果實。而南五味子特指華中五味子的干燥成熟果實。莖長4 8米，小枝灰褐色， 葉倒卵形至橢圓形，生于老枝上的簇生，在幼枝上的互生。開乳白色或淡紅色小花，單性，雌 雄同株或異株，單生或簇生于葉腋，有細(xì)長花梗。夏秋結(jié)漿果，球形，聚合成穗狀，成熟時呈 紫紅色。五味子喜肥喜光，要求疏松、肥沃而濕潤的土壤。幼苗期需一定的陰濕環(huán)境，開花 結(jié)果期則要求通風(fēng)透光。主要用種子繁殖。因種子堅硬，光滑有油層，播前需將種子洗凈層 積處理。遼寧省在4月下旬至5月上旬播種。條播每畝播種5千克左右。苗期須搭蔭棚。 第2年或第3年秋季落葉后定植，至第2年搭支架或依天然樹供枝條攀援。每年冬季植株 休眠后至春季萌發(fā)前進(jìn)行剪。夏季需防治葉枯病和巻葉蟲。定植后3 5年進(jìn)入旺果期。 秋后果實呈紫紅色時采摘，曬干或陰干。干燥果實略呈球形或扁球形，直徑5 8毫米。外 皮鮮紅色，紫紅色或暗紅色。顯油潤，有不整齊的皺縮。果內(nèi)柔軟，常數(shù)個粘連一起；內(nèi)含種 子1 2枚，腎形，棕黃色，有光澤，堅硬，種仁白色。果肉氣微弱而特殊，味酸。種子破碎后 有香氣，味辛而苦。以紫紅色、粒大、肉厚、有油性及光澤者為佳。主產(chǎn)遼寧、吉林、黑龍江、 河北等地，商品習(xí)稱〃 北五味子〃 ，五味子含有豐富的有機(jī)酸、維生素、類黃酮、植物固醇及 有強(qiáng)效復(fù)原作用的木酚素(例如五味子醇甲、五味子乙素或五味子脂素)，它也是兼具精、 氣、神三大補(bǔ)益的少數(shù)藥材之一，能益氣強(qiáng)肝、增進(jìn)細(xì)胞排除廢物的效率、供應(yīng)更多氧氣、營 造和運(yùn)用能量、提高記憶力及性持久力。古時候，俄羅斯獵人每次遠(yuǎn)行狩獵之前必定服用五 味子以強(qiáng)身補(bǔ)氣。 五味子醇甲是一種對人類健康有顯著保健作用的天然活性物質(zhì)，已引起國際社會 的普遍關(guān)注。經(jīng)科學(xué)研究及臨床應(yīng)用證明，五味子醇甲具有保肝及再生肝臟組織、保護(hù)及增 強(qiáng)心臟機(jī)能、養(yǎng)陰固精，男女皆宜、增進(jìn)智能健全；增強(qiáng)體能耐力；抗防自由基侵害、延緩老 化過程，滋補(bǔ)和增強(qiáng)腎臟機(jī)能。人體測試結(jié)果顯示，五味子醇甲對于患有因病毒所引起之慢 性肝炎者(包括A型、B型、C型、D型和E型)尤其有效。事實上，根據(jù)中國的一項臨床試 驗報告顯示，它在治療肝炎病人方面有76%成功率，而且沒有任何副作用。近年來，人們發(fā) 現(xiàn)天然植物五味子中含有大量的五味子醇甲，從中提取五味子醇甲并且取得了可喜進(jìn)展，由于其原料五味子為中藥，原料來源較廣。名稱為"五味子提取五味子醇甲的方法"的專利 中請中便公開了將五味子經(jīng)水提醇沉正交試驗法優(yōu)化提取五味子甲醇工藝流程。上述專利 文獻(xiàn)中的五味子醇甲提取工藝主要是經(jīng)過用水煎煮直接提醇后經(jīng)醇沉工藝等步驟提取而 成，其分離效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)不如大孔吸附樹脂處理后在進(jìn)行硅膠柱層析分離的效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服常規(guī)技術(shù)提取率相對較低、提取純度低等缺點，提供一種
利用大孔吸附樹脂富集純化五味子中五味子醇甲的方法。 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是 —種利用大孔吸附樹脂富集純化五味子中五味子醇甲的方法，其步驟如下
(1)將干五味子粉碎后用有機(jī)劑提??； (2)將經(jīng)步驟(1)處理的五味子提取液抽濾，得提取液并減壓回收溶劑的初提物；(3)將所獲初提物用水加熱溶解，加入乙酸乙醇萃取，用堿調(diào)其ra值為7.0
11. 00，靜置、抽濾、減壓濃縮得五味子醇甲粗提物； (4)將所得五味子醇甲粗提物用大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附； (5)用不同濃度的乙醇對大孔吸附樹脂進(jìn)行洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集五 味子醇甲各階段洗脫液； (6)將五味子醇甲各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得五味子醇甲半成品，其含量為 35%以上； (7)將所得五味子醇甲半成品上硅膠層析柱，并以乙酸乙酯、氯仿以不同體積比例 進(jìn)行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集五味子醇甲各階段洗脫液； (8)將所收集的五味子醇甲洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得五味子醇 甲，其含量在98%以上。 所述的步驟(1)中，五味子粉碎后過10 80目篩在進(jìn)行有機(jī)溶劑提取。 在所述的步驟(1)中，有機(jī)溶劑為丙酮、乙酸乙酯、10 100%乙醇中的一種或一
種以上，提取時間為4 48小時。 所述的步驟(1)中，有機(jī)溶劑提取的方法為浸泡法、回流提取法、滲漉法、煎煮法、 連續(xù)提取法中的一種或一種以上。 所述的步驟(1)中，加入有機(jī)溶劑的體積為五味子粉碎體積的5 20倍。 在所述的(3)中，加入乙酸乙酯的量按體積計算為提取物水溶液的5 20倍，調(diào)
節(jié)PH值所用的堿為氫氧化納或氨水。 步驟(4)中所用的大孔吸附樹脂為天津南開大學(xué)所產(chǎn)生的X-5、NKA-9、 S-8、
D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-I1型樹脂中的一種，吸附為靜態(tài)吸附或動態(tài)吸附。 步驟(5)中所述的洗脫為用10 90%的乙醇進(jìn)行洗脫。 在步驟(5)和(7)中，所采取的檢測方法均為薄層色譜法跟蹤檢測。 步驟(7)中所采取的乙酸乙酯與氯仿的體積為1 7 : 1。 本發(fā)明應(yīng)用大孔吸附技術(shù)分離純化五味子醇甲，對五味子醇甲的吸附選擇性良 好，吸附快解析也快，吸附容量較大；提取方便快捷，原料來源豐富，生產(chǎn)成本低廉，分離效 果明顯，提取純度高，可以得到含量35%以上的五味子醇甲半成品和含量98%以上的五味
4子醇甲終產(chǎn)品，克服了常規(guī)提取率相對較低、提取純度低的缺點。 本發(fā)明選用理化性質(zhì)穩(wěn)定、表面積較大、交換速度較快、機(jī)械強(qiáng)度高、抗污染能力 強(qiáng)、熱穩(wěn)定性好的大孔吸附樹脂，不容于酸、堿及有機(jī)媒，對有機(jī)物選擇性較好，不受無機(jī)鹽 類及強(qiáng)離子低分子化合物存在的影響，可以通過物理吸附從溶液中有選擇地吸附五味子醇 甲，吸附快、解析也快，吸附容量較大。
具體實施例方式
實施例1 :一種利用大孔吸附樹脂富集純化五味子中五味子醇甲的方法，其步驟 如下 (1)將干五味子粉碎后過60目篩，用五味子粉體積10倍的乙酸乙酯浸漬提取48 小時； (2)將經(jīng)步驟(1)處理的五味子提取液抽濾，得提取液并減壓回收溶劑的初提物；
(3)將所獲初提物用水加熱溶解，加入體積為提取物水溶液體積20倍的乙酸乙醇 進(jìn)行萃取，然后用堿調(diào)其K1值為9.0，靜置、抽濾、減壓回收溶劑得五味子醇甲粗提物；
(4)將所得五味子醇甲提物用大孔吸附樹脂層析柱上進(jìn)行吸附，所用的大孔樹脂 為天津南開大學(xué)所生產(chǎn)的NKA-II型樹脂； (5)用10%、20| %、30%、40%、50% | 、60%、70%、80% | 、90%的乙醇在大孔吸附 樹脂層柱中依次進(jìn)行梯度洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集五味子醇甲各階段洗脫液；
(6)將五味子醇甲各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得到含量為35%以上五味子醇甲 半成品； (7)將所得五味子醇甲半成品上硅膠層析柱，并用乙酸乙酯、氯仿依次以1 : 1、
2 : i、3 : i、4 : i、5 : i、6 : i、7 : i的體積比進(jìn)行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收
集五味子醇甲各階段洗脫液； (8)將所收集的五味子醇甲洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得到含量 98%以上五味子醇甲。 實施案例2 :—種利用大孔吸附樹脂富集純化五味子中五味子醇甲的方法，其步 驟如下 (1)將干五味子粉碎后過IO目篩，用五味子粉體積20倍的丙酮浸漬提取12小時， 然后回流提取4小時； (2)將經(jīng)步驟(1)處理的五味子提取液抽濾，得提取液并減壓回收溶劑的初提物；
(3)將所獲初提物用水加熱溶解，加入體積為提取物水溶液體積10倍的乙酸乙醇 進(jìn)行萃取，然后用氨水調(diào)其K1值為7. 0，靜置、抽濾、減壓濃縮得五味子醇甲粗提物；
(4)將所得五味子醇甲粗提物用大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附，所用的大孔樹脂為天津 南開大學(xué)所生產(chǎn)的D4006型樹脂； (5)用10%、30%、50% | 、70% 、90%的乙醇在大孔吸附樹脂進(jìn)行洗脫，用薄層色 譜法跟蹤檢測，收集五味子醇甲各階段洗脫液； (6)將五味子醇甲各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得到含量35%以上五味子醇甲半 成品； (7)將所得五味子醇甲半成品上硅膠層析柱，并用乙酸乙酯、氯仿依次以1 : 1、
52 : i、3 : i、4 : i、5 : i、6 : i、7 : i的體積比進(jìn)行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收 集五味子醇甲各階段洗脫液； (8)將所收集的五味子醇甲洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得到含量 98%以上五味子醇甲。 實施案例3 :—種利用大孔吸附樹脂富集純化五味子中五味子醇甲的方法，其步 驟如下 (1)將干五味子粉碎后過80目篩，用五味子粉體積15倍的75%乙醇同提取6小 時； (2)將經(jīng)步驟(1)處理的五味子提取液抽濾，得提取液并減壓回收溶劑的初提物；
(3)將所獲初提物用水加熱溶解，加入體積為提取物水溶液體積10倍的乙酸乙醇 進(jìn)行萃取，然后用氫氧化納水溶液調(diào)其K1值為11.0，靜置、抽濾、減壓濃縮得五味子醇甲粗 提物； (4)將所得五味子醇甲粗提物用大孔吸附樹脂層析柱子、上進(jìn)行吸附，所用的大孔 樹脂為天津南開大學(xué)所生產(chǎn)的NKA-9型樹脂； (5)用20% 、40% 、60% | 、80 %的乙醇在大孔吸附樹脂層析柱子中依次進(jìn)行梯度 洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集五味子醇甲各階段洗脫液； (6)將五味子醇甲段洗脫液濃縮回收乙醇，得到含量35%以上五味子醇甲半成
PR (7)將所得五味子醇甲半成品上硅膠層析柱，并用乙酸乙酯、氯仿依次以i : i、 2 : i、3 : i、4 : i、5 : i、6 : i、7 : i的體積比進(jìn)行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收 集五味子醇甲各階段洗脫液； (8)將所收集的五味子醇甲洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得到含量 98%以上五味子醇甲。 實施案例4 :一種利用大孔吸附樹脂富集純化五味子中五味子醇甲的方法，其步 驟如下 (1)將干五味子粉碎后過40目篩，用五味子粉體積10倍的50%的乙醇滲漉提取 24小時； (2)將經(jīng)步驟(1)處理的五味子提取液抽濾，得提取液并減壓回收溶劑的初提物；
(3)將所獲初提物用水加熱溶解，加入體積為提取物水溶液體積10倍的乙酸乙醇 進(jìn)行萃取，然后用氨水調(diào)其K1值為9. 0，靜置、抽濾、減壓濃縮得五味子醇甲粗提物；
(4)將所得五味子醇甲粗提取物在大孔吸附樹脂層析柱上進(jìn)行吸附，所用的大孔 樹脂為天津南開大學(xué)所生產(chǎn)的H103型樹脂； (5)用10% 、20 I % 、30% 、40% 、50% | 、60 % 、70 % 、80 % |、90%的乙醇在大孔吸 附樹脂層析柱中依次進(jìn)行梯度洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集五味子醇甲各階段洗脫 液； (6)將五味子醇甲各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得到含量35%以上五味子醇甲半 成品； (7)將所得五味子醇甲半成品上硅膠層析柱，并用乙酸乙酯、氯仿依次以1 : 1、
2 : i、3 : i、4 : i、5 : i、6 : i、7 : i的體積比進(jìn)行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收
6集白五味子醇甲各階段洗脫液； (8)將所收集的五味子醇甲洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得到含量 98%以上五味子醇甲。 實施案例5 :—種利用大孔吸附樹脂富集純化五味子中五味子醇甲的方法，其步 驟如下 (1)將干五味子粉碎后過60目篩，用五味子粉體積10倍的丙酮連續(xù)提取4小時；
(2)將經(jīng)步驟(1)處理的五味子提取液抽濾，得提取液并減壓回收溶劑的初提物；
(3)將所獲初提物用水加熱溶解，加入體積為提取物水溶液體積15倍的乙酸乙醇 進(jìn)行萃取，然后用氨水調(diào)其K1值為10.0，靜置、抽濾、減壓回收溶劑得五味子醇甲粗提物；
(4)將所得五味子醇甲粗提物用大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附，所用的大孔樹脂為天津 南開大學(xué)所生產(chǎn)的AB-8型樹脂； (5)用15%、25%、35% | 、45%、55%、65%、75%、85%的乙醇在大孔吸附樹脂進(jìn) 行洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集五味子醇甲各階段洗脫液； (6)將五味子醇甲各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得到含量35%以上五味子醇甲半 成品； (7)將所得五味子醇甲半成品上硅膠層析柱，并用乙酸乙酯、氯仿依次以1 : 1、
2 : i、3 : i、4 : i、5 : i、6 : i、7 : i的體積比進(jìn)行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收
集五味子醇甲各階段洗脫液； (8)將所收集的五味子醇甲洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得到含量 98%以上五味子醇甲。
權(quán)利要求
一種利用大孔吸附樹脂富集純化五味子中五味子醇甲的方法，其特征在于，其步驟如下(1)將干五味子粉碎后用純化水加熱提取；(2)將經(jīng)比周(1)處理的五味子提取液過濾，得初提物；(3)將所收獲初提物用水加熱溶解，加入乙醇萃取，用堿調(diào)其PH值為7.0～11.0，靜置、抽濾、減壓濃縮得五味子醇甲粗提物；(4)將所得五味子醇甲粗提物用大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附；(5)用不同濃度乙醇水溶液對大孔吸附樹脂進(jìn)行洗脫，收集五味子醇甲段洗脫液；(6)將五味子醇甲洗脫液濃縮回收洗脫劑，得五味子醇甲半成品；(7)將所得五味子醇甲半成品上硅膠層析柱，并以乙酸乙酯、氯防以不同體積比進(jìn)行洗脫，收集五味子醇甲各階段洗脫液；(8)將所收集到得五味子醇甲洗脫液進(jìn)行精制的五味子醇甲。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的利用大孔吸附樹脂富集純化五味子中五味子醇甲的方法 其特質(zhì)是所述的步驟(1)中，五味子粉后過10 80目師再進(jìn)行有機(jī)溶劑提取。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的利用大孔吸附樹脂富集純五味子中五味子醇甲的方法， 其特征是在所屬的步驟(1)中，有機(jī)溶劑為丙酮，乙酸乙酯，10 100%乙醇中的一種或一 種以上，提取時間為4 48小時。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用大孔吸附樹脂富集純化五味子中五味子醇甲的方法，其 特征是所述的步驟(1)中，有機(jī)溶劑提取的方法為浸漬法、回流提取法，滲漉法、煎煮法、 連續(xù)提取法中的一種或一種以上。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用大孔吸附樹脂富集純化五味子中五味子醇甲的方法，其 特征是；所屬的步驟(1)中，加入有機(jī)溶劑的體積為五味子粉體積的5 20倍。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的利用大孔吸附樹脂富集純化五味子中五味子醇甲的方法，其 特征是在所述的步驟(3)中，加入乙酸乙酯的量按體積計為提取物水溶液的5 20倍，調(diào) 節(jié)PH值所用的堿為氫氧化鈉和氨水。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的利用大孔吸附樹脂富集純化五味子中五味子醇甲的方法， 其特征是步驟(4)中所述吸附為靜態(tài)吸附或動態(tài)吸附步驟(5)中所述的洗脫為用10 90 %的乙醇水溶液進(jìn)行洗脫。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的利用大孔吸附樹脂富集純化五味子中五味子醇甲的方法，其 特征是在步驟(5)和(7)中，洗脫過程中采用薄層色譜法跟蹤檢測。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的利用大孔吸附樹脂富集純化五味子中五味子醇甲的方法，其 特征是步驟(7)中所采用乙酸乙酯與氯仿得體積比為1 7 : 1。
10. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的利用大孔吸附樹脂富集純化五味子中五味子醇甲的方法， 其特征是在步驟(8)中，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法進(jìn)行精制。
全文摘要
本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種利用大孔吸附樹脂富集純化五味子中五味子醇甲的方法。其特點是應(yīng)用大孔吸附技術(shù)分離純化五味子醇甲，對五味子醇甲的吸附選擇性良好，吸附快解析也快，吸附容量較大；提取方便快捷，原料來源豐富，生產(chǎn)成本低廉，分離效果明顯，提取純度高，可以得到含量35％以上的五味子醇甲半成品和含量98％以上的五味子醇甲終產(chǎn)品，克服了常規(guī)提取率相對較低、提取純度低的缺點。本發(fā)明選用理化性質(zhì)穩(wěn)定、表面積較大、交換速度較快、機(jī)械強(qiáng)度高、抗污染能力強(qiáng)、熱穩(wěn)定性好的大孔吸附樹脂，可以通過物理吸附從溶液中有選擇地吸附五味子醇甲，吸附快、解析也快，吸附容量較大。
文檔編號C07C41/36GK101786945SQ20091021688
公開日2010年7月28日 申請日期2009年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月28日
發(fā)明者姚德利, 姚德坤, 姚航, 閆峰 申請人:大興安嶺科麗爾生物工程有限責(zé)任公司