專利名稱：丙型肝炎病毒抑制劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明大體涉及抗病毒化合物，更具體涉及可抑制由丙型肝炎病毒(HCV)編碼的NS5A蛋白的功能的化合物、包含所述化合物的組合物以及抑制NS5A蛋白的功能的方法。

背景技術：
HCV是主要的人類病原體，其在世界范圍內感染估計一億七千萬人-大致是1型人類免疫缺陷病毒感染數(shù)量的5倍。這些HCV感染個體中相當大的部分發(fā)展成嚴重的進行性肝臟疾病，包括肝硬化(cirrhosis)和肝細胞癌(hepatocellular carcinoma)。
目前，最有效的HCV療法使用α-干擾素和利巴韋林的組合，其在40％的患者中產(chǎn)生持續(xù)的效果。最新的臨床結果證明，作為單一療法，PEG化的α-干擾素優(yōu)于未修飾的α-干擾素。然而，即使就涉及PEG化α-干擾素和利巴韋林組合的實驗性治療方案而言，相當多的患者也沒有出現(xiàn)病毒載量的持續(xù)減少。因此，就開發(fā)用于治療HCV感染的有效療法而言，存在明顯和迫切的需要。
HCV是正鏈RNA病毒?；趯λ茢喟被嵝蛄羞M行的比較和5’-非翻譯區(qū)的廣泛相似性，已經(jīng)把HCV歸類為黃病毒科(Flaviviridae family)中獨立的屬。黃病毒科的所有成員都具有包封的病毒體(enveloped virion)，其含有的正鏈RNA基因組通過翻譯單一的連續(xù)的可讀框而編碼所有已知的病毒專屬性蛋白質。
在整個HCV基因組的核苷酸和所編碼的氨基酸序列中發(fā)現(xiàn)了相當程度的異質性。已經(jīng)表征了至少6種主要的基因型，并且已經(jīng)描述了多于50種的亞型。HCV的主要基因型在世界范圍內的分布是不同的，并且HCV遺傳異質性的臨床重要性仍然是難以確定的，盡管對基因型對發(fā)病和治療的可能影響行了大量的研究。
單鏈HCV RNA基因組的長度大約是9500個核苷酸，并且具有單一的可讀框(ORF)，其編碼由大約3000個氨基酸組成的單一的大的多蛋白。在被感染的細胞中，這種多蛋白在多個位點被細胞蛋白酶和病毒蛋白酶裂解，從而產(chǎn)生結構蛋白和非結構(NS)蛋白。就HCV來說，成熟的非結構蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)的產(chǎn)生受到兩種病毒蛋白酶的影響。認為第一種病毒蛋白酶是金屬蛋白酶，并且在NS2-NS3接合處進行裂解；第二種病毒蛋白酶是包含在NS3的N-末端區(qū)域內的絲氨酸蛋白酶(也稱為NS3蛋白酶)，并且介導NS3下游的所有隨后裂解，既在NS3-NS4A裂解位點以順式進行裂解，又在其余的NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NS5B位點以反式進行裂解。NS4A蛋白似乎具有多種功能，其充當NS3蛋白酶的輔因子，并且可能有助于NS3及其它病毒復制酶組分的膜定位。NS3蛋白與NS4A形成復合物，這似乎是在所有位點進行加工活動由此提高蛋白質水解效率所必需的。NS3蛋白還顯示出三磷酸核苷酶和RNA解旋酶活性。NS5B(本文也稱為HCV聚合酶)是依賴于RNA的RNA聚合酶，在HCV的復制中涉及所述酶。
選擇性抑制HCV病毒復制的可用于治療HCV感染患者的化合物是期望的。具體而言，可有效抑制NS5A蛋白功能的化合物是期望的。HCV NS5A蛋白描述在例如Tan，S.-L.，Katzel，M.G.Virology 2001，284，1-12和Park，K.-J.；Choi，S.-H，J.Biological Chemistry 2003中。


發(fā)明內容
在第一個方面，本發(fā)明提供了式(I)化合物或其藥用鹽
其中 A和B各自為苯基； D和E各自為含有一個、兩個或三個獨立選自氮、氧和硫的雜原子的五元芳族環(huán)；條件是D和E中的至少一個不是咪唑； R1和R2獨立選自氫和R3-C(O)-；以及 每個R3獨立選自烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、烷基、烷基羰基烷基、芳基、芳基烯基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳基氧基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烯基、(環(huán)烷基)烷基、環(huán)烷基氧基烷基、鹵代烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烯基、雜環(huán)基烷氧基、雜環(huán)基烷基、雜環(huán)基氧基烷基、羥基烷基、-NRcRd、(NRcRd)烯基、(NRcRd)烷基和(NRcRd)羰基。
在第一個方面的第一個實施方案中，本發(fā)明提供了式(I)化合物或其藥用鹽，其中D和E中的一個是咪唑。
在第一個方面的第二個實施方案中，本發(fā)明提供了式(I)化合物或其藥用鹽，其中D和E中的至少一個選自吡唑、三唑和噁二唑。
在第一個方面的第三個實施方案中，本發(fā)明提供了式(I)化合物或其藥用鹽，其中R3選自烷氧基和芳基烷基。
在第二個方面，本發(fā)明提供了式(II)化合物或其藥用鹽
其中 D和E各自為含有一個、兩個或三個獨立選自氮、氧和硫的雜原子的五元芳族環(huán)；條件是D和E中的至少一個不是咪唑； R1和R2獨立選自氫和R3-C(O)-；以及 每個R3獨立選自烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、烷基、烷基羰基烷基、芳基、芳基烯基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳基氧基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烯基、(環(huán)烷基)烷基、環(huán)烷基氧基烷基、鹵代烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烯基、雜環(huán)基烷氧基、雜環(huán)基烷基、雜環(huán)基氧基烷基、羥基烷基、-NRcRd、(NRcRd)烯基、(NRcRd)烷基和(NRcRd)羰基。
在第三個方面，本發(fā)明提供了式(III)化合物或其藥用鹽

其中 D和E各自為含有一個、兩個或三個獨立選自氮、氧和硫的雜原子的五元芳族環(huán)；條件是D和E中的至少一個不是咪唑；以及條件是D和E這兩者各自通過碳原子被取代； R1和R2獨立選自氫和R3-C(O)-；以及 每個R3獨立選自烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、烷基、烷基羰基烷基、芳基、芳基烯基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳基氧基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烯基、(環(huán)烷基)烷基、環(huán)烷基氧基烷基、鹵代烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烯基、雜環(huán)基烷氧基、雜環(huán)基烷基、雜環(huán)基氧基烷基、羥基烷基、-NRcRd、(NRcRd)烯基、(NRcRd)烷基和(NRcRd)羰基。
在第三個方面的第一個實施方案中，本發(fā)明提供了式(III)化合物或其藥用鹽，其中 D和E獨立選自咪唑、吡唑、三唑和噁二唑；條件是D和E中的至少一個不是咪唑；以及條件是D和E這兩者各自通過碳原子被取代；以及 R3選自烷氧基和芳基烷基。
在第四個方面，本發(fā)明提供了一種組合物，其包含式(I)化合物或其藥用鹽以及藥用載體。在第四個方面的第一個實施方案中，所述組合物還包含一種或兩種具有抗HCV活性的額外化合物。在第四個方面的第二個實施方案中，所述額外化合物中的至少一種為干擾素或利巴韋林。在第四個方面的第三個實施方案中，所述干擾素選自干擾素α2B、PEG化的(pegylated)干擾素α、同感干擾素(consensus interferon)、干擾素α2A及淋巴細胞樣干擾素τ(lymphoblastiod interferon tau)。
在第四個方面的第四個實施方案中，本發(fā)明提供了一種組合物，其包含式(I)化合物或其藥用鹽、藥用載體以及一種或兩種具有抗HCV活性的額外化合物，其中所述額外化合物中的至少一種選自白細胞介素2、白細胞介素6、白細胞介素12、可提高1型輔助T細胞應答發(fā)展的化合物、干擾RNA、反義RNA、咪喹莫特(Imiqimod)、利巴韋林、5’-單磷酸肌苷脫氫酶抑制劑、金剛烷胺及金剛乙胺。
在第四個方面的第五個實施方案中，本發(fā)明提供了一種組合物，其包含式(I)化合物或其藥用鹽、藥用載體以及一種或兩種具有抗HCV活性的額外化合物，其中所述額外化合物中的至少一種可有效抑制靶標的功能以治療HCV感染，所述靶標選自HCV金屬蛋白酶(HCV metalloprotease)、HCV絲氨酸蛋白酶(HCV serine protease)、HCV聚合酶(HCV polymerase)、HCV解螺旋酶(HCV helicase)、HCV NS4B蛋白(HCV NS4B protein)、HCV進入(HCV entry)、HCV組裝(HCV assembly)、HCV釋出(HCV egress)、HCV NS5A蛋白(HCV NS5A protein)和IMPDH。
在第五個方面，本發(fā)明提供了治療患者中HCV感染的方法，其包括向所述患者給藥治療有效量的式(I)化合物或其藥用鹽。在第五個方面的第一個實施方案中，所述方法還包括在給藥式(I)化合物或其藥用鹽之前、之后或同時給藥一種或兩種具有抗HCV活性的額外化合物。在第五個方面的第二個實施方案中，所述額外化合物中的至少一種為干擾素或利巴韋林。在第五個方面的第三個實施方案中，所述干擾素選自干擾素α2B、PEG化的干擾素α、同感干擾素、干擾素α2A及淋巴細胞樣干擾素τ。
在第六個方面，本發(fā)明提供了治療患者中HCV感染的方法，其包括向所述患者給藥治療有效量的式(I)化合物或其藥用鹽以及在給藥式(I)化合物或其藥用鹽之前、之后或同時給藥一種或兩種具有抗HCV活性的額外化合物，其中所述額外化合物中的至少一種選自白細胞介素2、白細胞介素6、白細胞介素12、可提高1型輔助T細胞應答發(fā)展的化合物、干擾RNA、反義RNA、咪喹莫特、利巴韋林、5’-單磷酸肌苷脫氫酶抑制劑、金剛烷胺及金剛乙胺。
在第七個方面，本發(fā)明提供了治療患者中HCV感染的方法，其包括向所述患者給藥治療有效量的式(I)化合物或其藥用鹽以及在給藥式(I)化合物或其藥用鹽之前、之后或同時給藥一種或兩種具有抗HCV活性的額外化合物，其中所述額外化合物中的至少一種可有效抑制靶標的功能以治療HCV感染，所述靶標選自HCV金屬蛋白酶、HCV絲氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白質、HCV進入、HCV組裝、HCV釋出、HCV NS5A蛋白和IMPDH。
本發(fā)明的其它方面可包括本申請所述實施方案的合適組合。
其它方面和實施方案可參見本申請?zhí)峁┑恼f明書。
本發(fā)明的說明書應該被解釋為與化學鍵的法則和原理一致。在一些情況下，可能需要的是，為了在任何給定的位置適應取代基而除去氫原子。
應該理解的是，本發(fā)明所包括的化合物是就用作藥物而言適宜穩(wěn)定的那些化合物。
應該理解的是，在分子中具體位置的任何取代基或變量的定義獨立于在該分子中其它位置的該取代基或變量的定義。例如，當u為2時，兩個R1基團中的每個可以相同或不同。
將本說明書中引用的所有專利、專利申請和參考文獻完整引入本申請作為參考。在不一致的情況下，以本發(fā)明(包括定義)為準。
在本說明書中使用的以下術語具有下面指明的意義。
除非上下文明顯指明，本申請使用的單數(shù)形式“一個(a)”、“一個(an)”和“所述(the)”包括復數(shù)形式。
除非另有說明，本發(fā)明中的所有芳基、環(huán)烷基和雜環(huán)基可如在它們的分別定義中所各自描述的那樣被取代。例如，芳基烷基中的芳基部分可如在術語“芳基”的定義中所述的那樣被取代。
本申請使用的術語“烯基”是指具有兩個至六個碳原子的含有至少一個碳-碳雙鍵的直鏈或支鏈基團。
本申請使用的術語“烯基氧基”是指通過氧原子與母體分子部分相連的烯基。
本申請使用的術語“烯基氧基羰基”是指通過羰基與母體分子部分相連的烯基氧基。
本申請使用的術語“烷氧基”是指通過氧原子與母體分子部分相連的烷基。
本申請使用的術語“烷氧基烷基”是指被一個、兩個或三個烷氧基取代的烷基。
本申請使用的術語“烷氧基烷基羰基”是指通過羰基與母體分子部分相連的烷氧基烷基。
本申請使用的術語“烷氧基羰基”是指通過羰基與母體分子部分相連的烷氧基。
本申請使用的術語“烷氧基羰基烷基”是指被一個、兩個或三個烷氧基羰基取代的烷基。
本申請使用的術語“烷基”是指從含有一個至六個碳原子的直鏈或支鏈的飽和烴衍生的基團。
本申請使用的術語“烷基羰基”是指通過羰基與母體分子部分相連的烷基。
本申請使用的術語“烷基羰基烷基”是指被一個、兩個或三個烷基羰基取代的烷基。
本申請使用的術語“烷基羰基氧基”是指通過氧原子與母體分子部分相連的烷基羰基。
本申請使用的術語“烷基硫基”是指通過硫原子與母體分子部分相連的烷基。
本申請使用的術語“烷基磺?；笔侵竿ㄟ^磺酰基與母體分子部分相連的烷基。
本申請使用的術語“芳基”是指苯基或其中一個或兩個環(huán)是苯基的二環(huán)稠合環(huán)系。二環(huán)稠合環(huán)系由與四至六元芳族或非芳族碳環(huán)稠合的苯基構成。本發(fā)明的芳基可通過基團中的任何可取代的碳原子與母體分子部分相連。芳基的代表性實例包括但不限于茚滿基、茚基、萘基、苯基和四氫萘基。本發(fā)明的芳基任選被一個、兩個、三個、四個或五個取代基取代，所述取代基獨立選自烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、第二個芳基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、鹵素、鹵代烷氧基、鹵代烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜環(huán)基羰基、羥基、羥基烷基、硝基、-NRxRy、(NRxRy)烷基和氧代，其中所述芳基烷基中的烷基部分和所述雜環(huán)基烷基中的烷基部分是未取代的，以及其中所述第二個芳基、所述芳基烷基中的芳基部分、所述芳基羰基中的芳基部分、所述雜環(huán)基、所述雜環(huán)基烷基中的雜環(huán)基部分和所述雜環(huán)基羰基中的雜環(huán)基部分任選進一步被一個、兩個或三個獨立選自以下的取代基取代烷氧基、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷氧基、鹵代烷基和硝基。
本申請使用的術語“芳基烯基”是指被一個、兩個或三個芳基取代的烯基。
本申請使用的術語“芳基烷氧基”是指通過烷氧基與母體分子部分相連的芳基。
本申請使用的術語“芳基烷氧基烷基”是指被一個、兩個或三個芳基烷氧基取代的烷基。
本申請使用的術語“芳基烷氧基烷基羰基”是指通過羰基與母體分子部分相連的芳基烷氧基烷基。
本申請使用的術語“芳基烷氧基羰基”是指通過羰基與母體分子部分相連的芳基烷氧基。
本申請使用的術語“芳基烷基”是指被一個、兩個或三個芳基取代的烷基。所述芳基烷基中的烷基部分任選進一步被一個或兩個獨立選自以下的額外基團取代烷氧基、烷基羰基氧基、鹵素、鹵代烷氧基、鹵代烷基、雜環(huán)基、羥基和-NRcRd，其中所述雜環(huán)基任選進一步被一個或兩個獨立選自以下的取代基取代烷氧基、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基、未取代的芳基烷氧基羰基、鹵素、鹵代烷氧基、鹵代烷基、羥基和-NRxRy。
本申請使用的術語“芳基烷基羰基”是指通過羰基與母體分子部分相連的芳基烷基。
本申請使用的術語“芳基羰基”是指通過羰基與母體分子部分相連的芳基。
本申請使用的術語“芳基氧基”是指通過氧原子與母體分子部分相連的芳基。
本申請使用的術語“芳基氧基烷基”是指被一個、兩個或三個芳基氧基取代的烷基。
本申請使用的術語“芳基氧基羰基”是指通過羰基與母體分子部分相連的芳基氧基。
本申請使用的術語“芳基磺?；笔侵竿ㄟ^磺?；c母體分子部分相連的芳基。
本申請使用的術語“Cap”和“cap”是指位于式(I)化合物中的吡咯烷環(huán)的氮原子上的基團。應該理解的是，“Cap”或“cap”也可以是指以下試劑，所述試劑為形成式(I)化合物中的最終“cap”的前體，并且用作反應中的原料之一以將基團附加到吡咯烷的氮上，由此得到最終產(chǎn)物即含有官能化的吡咯烷的化合物，所述官能化的吡咯烷將存在于式(I)化合物中。
本申請使用的術語“羰基”是指-C(O)-。
本申請使用的術語“羧基”是指-CO2H。
本申請使用的術語“氰基”是指-CN。
本申請使用的術語“環(huán)烯基”是指具有三個至十四個碳原子和0個雜原子的非芳族的部分不飽和的單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)環(huán)系。環(huán)烯基的代表性實例包括但不限于環(huán)己烯基、八氫萘基和降冰片烯基(norbornylenyl)。
本申請使用的術語“環(huán)烷基”是指具有三個至七個碳原子和0個雜原子的飽和的單環(huán)烴環(huán)系。環(huán)烷基的代表性實例包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)戊基和環(huán)己基。本發(fā)明的環(huán)烷基任選被一個、兩個、三個、四個或五個取代基取代，所述取代基獨立選自烷氧基、烷基、芳基、氰基、鹵素、鹵代烷氧基、鹵代烷基、雜環(huán)基、羥基、羥基烷基、硝基和-NRxRy，其中所述芳基和所述雜環(huán)基任選進一步被一個、兩個或三個獨立選自以下的取代基取代烷氧基、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷氧基、鹵代烷基、羥基和硝基。
本申請使用的術語“(環(huán)烷基)烯基”是指被一個、兩個或三個環(huán)烷基取代的烯基。
本申請使用的術語“(環(huán)烷基)烷基”是指被一個、兩個或三個環(huán)烷基取代的烷基。
本申請使用的術語“環(huán)烷基氧基”是指通過氧原子與母體分子部分相連的環(huán)烷基。
本申請使用的術語“環(huán)烷基氧基烷基”是指被一個、兩個或三個環(huán)烷基氧基取代的烷基。
本申請使用的術語“環(huán)烷基磺?；笔侵竿ㄟ^磺酰基與母體分子部分相連的環(huán)烷基。
本申請使用的術語“甲?；笔侵?CHO。
本申請使用的術語“鹵代(halo)”和“鹵素(halogen)”是指F、Cl、Br或I。
本申請使用的術語“鹵代烷氧基”是指通過氧原子與母體分子部分相連的鹵代烷基。
本申請使用的術語“鹵代烷氧基羰基”是指通過羰基與母體分子部分相連的鹵代烷氧基。
本申請使用的術語“鹵代烷基”是指被一個、兩個、三個或四個鹵素原子取代的烷基。
本申請使用的術語“雜環(huán)基”是指含有一個、兩個、三個或四個獨立選自氮、氧和硫的雜原子的四元、五元、六元或七元環(huán)。所述四元環(huán)具有0個雙鍵，所述五元環(huán)具有0個至二個雙鍵，以及所述六元環(huán)和所述七元環(huán)具有0個至三個雙鍵。術語“雜環(huán)基”還包括二環(huán)基團，其中雜環(huán)基環(huán)與苯基、單環(huán)環(huán)烯基、單環(huán)環(huán)烷基或另一個單環(huán)雜環(huán)基稠合。本發(fā)明的雜環(huán)基可通過所述基團中的碳原子或氮原子與母體分子部分相連。雜環(huán)基的實例包括但不限于苯并噻吩基、呋喃基、咪唑基、二氫吲哚基、吲哚基、異噻唑基、異噁唑基、嗎啉基、噁唑基、哌嗪基、哌啶基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、吡咯并吡啶基、吡咯基、噻唑基、噻吩基和硫嗎啉基。本發(fā)明的雜環(huán)基任選被一個、兩個、三個、四個或五個取代基取代，所述取代基獨立選自烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、芳基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、鹵素、鹵代烷氧基、鹵代烷基、第二個雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜環(huán)基羰基、羥基、羥基烷基、硝基、-NRxRy、(NRxRy)烷基和氧代，其中所述芳基烷基中的烷基部分和所述雜環(huán)基烷基中的烷基部分是未取代的，以及其中所述芳基、所述芳基烷基中的芳基部分、所述芳基羰基中的芳基部分、所述第二個雜環(huán)基、所述雜環(huán)基烷基中的雜環(huán)基部分和所述雜環(huán)基羰基中的雜環(huán)基部分任選進一步被一個、兩個或三個獨立選自以下的取代基取代烷氧基、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷氧基、鹵代烷基和硝基。
本申請使用的術語“雜環(huán)基烯基”是指被一個、兩個或三個雜環(huán)基取代的烯基。
本申請使用的術語“雜環(huán)基烷氧基”是指通過烷氧基與母體分子部分相連的雜環(huán)基。
本申請使用的術語“雜環(huán)基烷氧基羰基”是指通過羰基與母體分子部分相連的雜環(huán)基烷氧基。
本申請使用的術語“雜環(huán)基烷基”是指被一個、兩個或三個雜環(huán)基取代的烷基。所述雜環(huán)基烷基中的烷基部分任選進一步被一個或兩個獨立選自以下的額外基團取代烷氧基、烷基羰基氧基、芳基、鹵素、鹵代烷氧基、鹵代烷基、羥基和-NRcRd，其中所述芳基任選進一步被一個或兩個獨立選自以下的取代基取代烷氧基、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基、未取代的芳基烷氧基羰基、鹵素、鹵代烷氧基、鹵代烷基、羥基和-NRxRy。
本申請使用的術語“雜環(huán)基烷基羰基”是指通過羰基與母體分子部分相連的雜環(huán)基烷基。
本申請使用的術語“雜環(huán)基羰基”是指通過羰基與母體分子部分相連的雜環(huán)基。
本申請使用的術語“雜環(huán)基氧基”是指通過氧原子與母體分子部分相連的雜環(huán)基。
本申請使用的術語“雜環(huán)基氧基烷基”是指被一個、兩個或三個雜環(huán)基氧基取代的烷基。
本申請使用的術語“雜環(huán)基氧基羰基”是指通過羰基與母體分子部分相連的雜環(huán)基氧基。
本申請使用的術語“羥基”是指-OH。
本申請使用的術語“羥基烷基”是指被一個、兩個或三個羥基取代的烷基。
本申請使用的術語“羥基烷基羰基”是指通過羰基與母體分子部分相連的羥基烷基。
本申請使用的術語“硝基”是指-NO2。
本申請使用的術語“-NRcRd”是指通過氮原子與母體分子部分相連的兩個基團即Rc和Rd。Rc和Rd獨立選自氫、烯基氧基羰基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺?；⒎蓟?、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基、芳基磺?；?、環(huán)烷基、環(huán)烷基磺酰基、甲?；?、鹵代烷氧基羰基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷氧基羰基、雜環(huán)基烷基、雜環(huán)基烷基羰基、雜環(huán)基羰基、雜環(huán)基氧基羰基、羥基烷基羰基、(NReRf)烷基、(NReRf)烷基羰基、(NReRf)羰基、(NReRf)磺?；?C(NCN)OR’和-C(NCN)NRxRy，其中R’選自烷基和未取代的苯基，以及其中所述芳基烷基中的烷基部分、所述芳基烷基羰基中的烷基部分、所述雜環(huán)基烷基中的烷基部分和所述雜環(huán)基烷基羰基中的烷基部分任選進一步被一個-NReRf基團取代，以及其中所述芳基、所述芳基烷氧基羰基中的芳基部分、所述芳基烷基中的芳基部分、所述芳基烷基羰基中的芳基部分、所述芳基羰基中的芳基部分、所述芳基氧基羰基中的芳基部分、所述芳基磺?；械姆蓟糠?、所述雜環(huán)基、所述雜環(huán)基烷氧基羰基中的雜環(huán)基部分、所述雜環(huán)基烷基中的雜環(huán)基部分、所述雜環(huán)基烷基羰基中的雜環(huán)基部分、所述雜環(huán)基羰基中的雜環(huán)基部分和所述雜環(huán)基氧基羰基中的雜環(huán)基部分任選進一步被一個、兩個或三個獨立選自以下的取代基取代烷氧基、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷氧基、鹵代烷基和硝基。
本申請使用的術語“(NRcRd)烯基”是指被一個、兩個或三個-NRcRd基團取代的烯基。
本申請使用的術語“(NRcRd)烷基”是指被一個、兩個或三個-NRcRd基團取代的烷基。所述(NRcRd)烷基中的烷基部分任選進一步被一個或兩個選自以下的額外基團取代烷氧基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基硫基、芳基烷氧基烷基羰基、羧基、雜環(huán)基、雜環(huán)基羰基、羥基和(NReRf)羰基；其中所述雜環(huán)基任選進一步被一個、兩個、三個、四個或五個取代基取代，所述取代基獨立選自烷氧基、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷氧基、鹵代烷基和硝基。
本申請使用的術語“(NRcRd)羰基”是指通過羰基與母體分子部分相連的-NRcRd基團。
本申請使用的術語“-NReRf”是指通過氮原子與母體分子部分相連的兩個基團即Re和Rf。Re和Rf獨立選自氫、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷基、未取代的環(huán)烷基、未取代的(環(huán)烷基)烷基、未取代的雜環(huán)基、未取代的雜環(huán)基烷基、(NRxRy)烷基和(NRxRy)羰基。
本申請使用的術語“(NReRf)烷基”是指被一個、兩個或三個-NReRf基團取代的烷基。
本申請使用的術語“(NReRf)烷基羰基”是指通過羰基與母體分子部分相連的(NReRf)烷基。
本申請使用的術語“(NReRf)羰基”是指通過羰基與母體分子部分相連的-NReRf基團。
本申請使用的術語“(NReRf)磺?；笔侵竿ㄟ^磺酰基與母體分子部分相連的-NReRf基團。
本申請使用的術語“-NRxRy”是指通過氮原子與母體分子部分相連的兩個基團即Rx和Ry。Rx和Ry獨立選自氫、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基羰基、未取代的芳基烷基、未取代的環(huán)烷基、未取代的雜環(huán)基和(NRx’Ry’)羰基，其中Rx’和Ry’獨立選自氫和烷基。
本申請使用的術語“(NRxRy)烷基”是指被一個、兩個或三個-NRxRy基團取代的烷基。
本申請使用的術語“(NRxRy)羰基”是指通過羰基與母體分子部分相連的-NRxRy基團。
本申請使用的術語“氧代”是指＝O。
本申請使用的術語“磺酰基”是指-SO2-。
在本發(fā)明的化合物中存在不對稱中心。這些中心通過符號“R”或“S”來指定，這取決于手性碳原子上的取代基的構型。應該理解的是，本發(fā)明包括所有立體化學異構形式或其混合物，所述立體化學異構形式或其混合物具有抑制NS5A的能力。化合物的單獨立體異構體可從含有手性中心的市售原料來合成制備，或如下制備制備對映異構產(chǎn)物的混合物，接著進行分離(例如轉化為非對映異構體的混合物，接著進行分離、重結晶或色譜技術，或在手性色譜柱上直接分離對映異構體)。具有具體立體化學的起始化合物要么是市售的，要么是可通過本領域已知的技術來制備和拆分的。
本發(fā)明的某些化合物還可按不同的穩(wěn)定構象形式存在，這些形式是可分離的。由于圍繞不對稱單鍵的受限旋轉(例如因為位阻或環(huán)張力)而導致的扭轉不對稱(torsional asymmetry)可使不同的構象異構體得以分離。本發(fā)明包括這些化合物的每種構象異構體及其混合物。
術語“本發(fā)明的化合物”以及等效表達方式意在包括式(I)化合物以及其藥用對映異構體、非對映異構體和鹽。類似地，在上下文允許的情況下，當提及中間體時意在包括其鹽。
本發(fā)明的化合物可按藥用鹽的形式存在。本申請使用的術語“藥用鹽”表示本發(fā)明化合物的鹽形式或兩性離子形式，這些形式是水溶性或水可分散性的或是油溶性或油可分散性的，這些形式在合理的醫(yī)藥判斷范圍內適用于與患者的組織接觸而不引起過度的毒性、刺激性、變態(tài)反應或其它問題或并發(fā)癥，這與合理的益處/風險比例相稱，并且這些形式就其預期的用途而言是有效的。所述鹽可在化合物的最終分離和純化期間制備，或可通過使合適的氮原子與合適的酸反應來單獨制備。代表性的酸加成鹽包括乙酸鹽、己二酸鹽、海藻酸鹽、枸櫞酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、二葡糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、均三甲基苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、萘磺酸鹽、煙酸鹽、萘-2-磺酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽(palmoate)、果膠酸鹽(pectinate)、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、三氯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、磷酸鹽、谷氨酸鹽、碳酸氫鹽、對甲苯磺酸鹽和十一烷酸鹽等?？捎糜谛纬伤幱眉映甥}的酸的實例包括無機酸(如鹽酸、氫溴酸、硫酸和磷酸)以及有機酸(如草酸、馬來酸、琥珀酸和枸櫞酸)。
堿加成鹽可在化合物的最終分離和純化期間如下制備使羧基與合適的堿如金屬陽離子的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽反應，或使羧基與氨、有機伯胺、有機仲胺或有機叔胺反應。藥用鹽中的陽離子包括鋰離子、鈉離子、鉀離子、鈣離子、鎂離子和鋁離子以及無毒的季胺陽離子如銨根離子、四甲基銨根離子、四乙基銨根離子、甲胺季胺陽離子、二甲胺季胺陽離子、三乙胺季胺陽離子、三乙胺季胺陽離子、二乙胺季胺陽離子、乙胺季胺陽離子、三丁胺季胺陽離子、吡啶季胺陽離子、N，N-二甲基苯胺季胺陽離子、N-甲基哌啶季胺陽離子、N-甲基嗎啉季胺陽離子、二環(huán)己胺季胺陽離子、普魯卡因(procaine)季胺陽離子、二芐胺季胺陽離子、N，N-二芐基苯乙胺季胺陽離子和N，N’-二芐基乙二胺季胺陽離子。可用于形成堿加成鹽的其它代表性有機胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶和哌嗪。
當治療有效量的式(I)化合物及其藥用鹽可按化學物質原形式(rawchemical)給藥而用于治療時，其可按藥物組合物的形式提供活性成分。因此，本發(fā)明還提供了藥物組合物，其包含治療有效量的式(I)化合物或其藥用鹽以及一種或多種藥用載體、稀釋劑或賦形劑。本申請使用的術語“治療有效量”是指各種活性組分的總量，所述總量足以顯示出有意義的患者益處(例如病毒載量的持續(xù)減少)。所述術語當用于單獨給藥的一種活性成分時是指所述成分的單獨量。所述術語當用于組合時是指引起治療效果的各活性成分的組合量而不論是組合給藥、連續(xù)給藥或同時給藥。式(I)化合物及其藥用鹽如上文所述。載體、稀釋劑或賦形劑就與制劑中的其它成分相容而言必須是可接受的，并且就其接受者而言必須是沒有害處的。本發(fā)明的另一個方面還提供了制備藥物制劑的方法，其包括將式(I)化合物或其藥用鹽與一種或多種藥用載體、稀釋劑或賦形劑混合。本申請使用的術語“藥用”是指這樣的化合物、材料、組合物和/或劑型，它們在合理的醫(yī)藥判斷范圍內適用于與患者的組織接觸而不引起過度的毒性、刺激性、變態(tài)反應或其它問題或并發(fā)癥，這與合理的益處/風險比例相稱，并且就其預期的用途而言是有效的。
藥物制劑可按單位劑量形式提供，其在每單位劑量中含有預定量的活性成分。本發(fā)明化合物的以下劑量水平即約0.01至約250毫克/千克體重(“mg/kg”)/日優(yōu)選約0.05至約100mg/kg體重/日在對HCV介導的疾病進行預防和治療的單一療法中是典型的。通常，本發(fā)明的藥物組合物可每日給藥約1至約5次，或可選擇地，可按連續(xù)輸注的形式給藥。上述給藥可用作慢性療法或急性療法?？膳c載體物質組合以制備單一劑型的活性成分的量將基于以下因素而變化所治療的病癥、所述病癥的嚴重程度、給藥時間、給藥途徑、所用化合物的排泄速率、治療的持續(xù)時間以及患者的年齡、性別、體重和狀態(tài)。優(yōu)選的單位劑量制劑是這樣的單位劑量制劑，所述制劑含有本申請上文所述的日劑量或亞日劑量或其適當分數(shù)的活性成分。一般而言，治療開始于基本上小于化合物最佳劑量的小劑量。此后，劑量以小的增幅增加，直到實現(xiàn)對病情的最佳效果。一般而言，化合物以如下的濃度水平給藥是最期望的，所述水平通?？商峁┯行У目共《窘Y果而不引起任何有害或有毒的副作用。
當本發(fā)明的組合物包含本發(fā)明的化合物和一種或多種額外的治療藥物或預防藥物的組合時，所述化合物和所述額外的藥物通常都以如下的劑量水平存在，所述劑量水平為單一療法給藥方案中所通常給藥的劑量的約10至150％，更優(yōu)選為約10至80％。
可對藥物制劑進行調整以通過任何適當?shù)耐緩絹斫o藥，所述途徑為例如口服(包括口腔或舌下)途徑、直腸途徑、經(jīng)鼻途徑、局部(包括口腔、舌下或透皮)途徑、陰道途徑或腸胃外(包括皮下注射或輸注、皮內注射或輸注、肌內注射或輸注、關節(jié)內注射或輸注、滑膜內注射或輸注、胸骨內注射或輸注、鞘內注射或輸注、病灶內注射或輸注、靜脈內注射或輸注或皮內注射或輸注)途徑。所述制劑可通過藥學領域已知的任何方法來制備，所述方法為例如將活性成分與載體或賦形劑混合?？诜o藥或注射給藥是優(yōu)選的。
針對口服給藥而調整的藥物制劑可按以下形式提供離散的單位形式(如膠囊劑或片劑)；粉末劑或顆粒劑；在含水或不含水液體中的溶液劑或混懸劑；可食用的泡沫劑(foam)或攪打劑(whip)；或水包油型液態(tài)乳劑或油包水型乳劑。
例如，就以片劑或膠囊劑形式進行的口服給藥而言，可將活性藥物組分與口服的無毒的藥用惰性載體如乙醇、甘油、水等混合。粉末劑如下制備將化合物研磨至合適的微細尺寸，然后與經(jīng)類似研磨的藥物載體如可食用的碳水化合物(如淀粉或甘露醇)混合。矯味劑、防腐劑、分散劑和著色劑也可存在。
膠囊劑如下制備如上所述制備粉末混合物，然后填充到成形的明膠殼中?？蓪⒅鲃┖蜐櫥瑒┤缒z體二氧化硅、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或固體聚乙二醇加到粉末混合物中，然后進行填充操作。也可加入崩解劑或增溶劑如瓊脂、碳酸鈣或碳酸鈉以改善膠囊劑被攝入時的藥物利用度。
此外，當期望或需要時，也可將合適的粘合劑、潤滑劑、崩解劑和著色劑摻到混合物中。合適的粘合劑包括淀粉、明膠、天然糖(如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味劑、天然膠和合成膠(如阿拉伯膠、西黃蓍膠或海藻酸鈉)、羧甲基纖維素、聚乙二醇等。在這些劑型中使用的潤滑劑包括油酸鈉、氯化鈉等。崩解劑包括但不限于淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤土、黃原膠等。片劑如下配制例如制備粉末混合物，制?；蝾A壓，加入潤滑劑和崩解劑，然后壓制成片劑。粉末混合物如下制備將經(jīng)合適研磨的化合物與上述稀釋劑或基質以及任選的粘合劑(如羧甲基纖維素、海藻酸鹽、凝膠或聚乙烯吡咯烷酮)、溶液延遲劑(solution retardant)(如石蠟)、吸收促進劑(如季胺鹽)和/或吸收劑(如膨潤土、高嶺土或磷酸二鈣)混合。粉末混合物可與粘合劑如糖漿、淀粉糊、阿拉伯膠液、纖維素溶液或聚合物溶液一起濕法制粒，然后擠壓過篩。作為可選擇的制粒方法，粉末混合物可通過壓片機來處理，結果是不完全成形的預壓片破裂成顆粒。可通過加入硬脂酸、硬脂酸鹽、滑石或礦物油來對顆粒進行潤滑以防止與片劑成形模粘連。然后將經(jīng)潤滑的混合物壓制成片劑。本發(fā)明的化合物也可與自由流動的惰性載體組合，并在不經(jīng)歷制?；蝾A壓步驟的情況下直接壓制成片劑?？商峁┩该鞯幕虿煌该鞯谋Ｗo性包衣，所述包衣由以下包衣層構成由蟲膠形成的隔離包衣層、由糖或聚合物形成的包衣層和由蠟形成的光亮包衣層。可將染料加到這些包衣中以區(qū)分不同的單位劑量。
口服流體如溶液劑、糖漿劑和酏劑可按劑量單位形式來制備，從而使給定的量含有預定量的化合物。糖漿劑可通過將化合物溶于經(jīng)合適矯味的水溶液中來制備，而酏劑通過使用無毒的媒介物來制備。也可加入增溶劑和乳化劑(如乙氧基化的異硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚)、防腐劑、矯味添加劑(如薄荷油、天然甜味劑、糖精或其它人造甜味劑)等。
當適當時，可對用于口服給藥的劑量單位制劑進行微囊化。也可例如通過將顆粒物質用聚合物、蠟等包衣或包埋到聚合物、蠟等中來制備制劑以延長或維持釋放。
式(I)化合物及其藥用鹽也可按脂質體遞送系統(tǒng)的形式給藥，所述脂質體遞送系統(tǒng)為例如小單層脂囊(small unilamellar vesicle)、大單層脂囊(largeunilamellar vesicle)和多層脂囊(multilamellar vesicle)。脂質體可由各種磷脂如膽固醇、硬脂酰胺或磷脂酰膽堿來形成。
式(I)化合物及其藥用鹽也可通過使用單克隆抗體作為與化合物分子偶聯(lián)的單獨載體來遞送。化合物也可與作為靶向藥物載體的可溶性聚合物偶聯(lián)。這些聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羥基丙基甲基丙烯酸酰胺苯酚(polyhydroxypropylmethacrylamidephenol)、聚羥基乙基天冬氨酸酰胺苯酚(polyhydroxyethylaspartamidephenol)或取代有棕櫚?；木垩趸蚁┚圪嚢彼?polyethyleneoxidepolylysine substituted with palitoylresidue)。此外，化合物可與可用于實現(xiàn)藥物的控制釋放的一類生物可降解的聚合物偶聯(lián)，這類聚合物為例如聚乳酸、聚ξ-己內酯、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮醛、聚二氫吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝膠的交聯(lián)共聚物或水凝膠的兩親性嵌段共聚物。
針對透皮給藥而調整的藥物制劑可按離散的貼劑形式存在，其意在與接受者的表皮緊密接觸且保持延長的時段。例如，如Pharmaceutical Research1986，3(6)，318中所一般描述，活性成分可通過離子電滲法(iontophoresis)從貼劑中遞送。
可將針對局部給藥而調整的藥物制劑配制成軟膏劑、乳膏劑、混懸劑、洗液、粉末劑、溶液劑、糊劑、凝膠劑、噴霧劑、氣霧劑或油劑。
就治療眼部或其它外部組織如口和皮膚而言，制劑優(yōu)選以軟膏劑或乳膏劑的形式施用。當配制成軟膏劑時，活性成分可與石蠟或水可混溶性軟膏劑基質一起使用?？蛇x擇地，可將活性成分與水包油型乳膏劑基質或油包水型基質一起配制成乳膏劑。
進行調整以適于局部給藥至眼部的藥物制劑包括滴眼劑，其中將活性成分溶于或懸浮于合適的載體尤其是含水溶劑中。
進行調整以適于在口中局部給藥的藥物制劑包括錠劑、含錠劑(pastille)和口腔洗劑。
進行調整以適于直腸給藥的藥物制劑可按栓劑或灌腸劑的形式提供。
進行調整以適于鼻部給藥的藥物制劑(其中載體為固體)包括粒度范圍為例如20至500微米的一系列粉末，其按照吸入的方式來給藥，即從接近鼻的裝有粉末的容器中經(jīng)由鼻道而快速吸入。用于以鼻噴霧劑或滴鼻劑的形式給藥的合適制劑(其中載體為液體)包括活性成分的含水溶液或油溶液。
進行調整以適于吸入給藥的藥物制劑包括微細顆粒的粉塵或氣霧，其可通過各種類型的計量劑量的加壓的氣霧器、噴霧器或吸入器來產(chǎn)生。
進行調整以適于陰道給藥的藥物制劑可按陰道栓劑、棉塞劑、乳膏劑、凝膠劑、糊劑、泡沫劑或噴霧劑的形式提供。
進行調整以適于腸胃外給藥的藥物制劑包括含水和不含水的無菌注射溶液劑，其可含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和使制劑與所預期接受者的血液等滲的溶質；和含水和不含水的無菌混懸劑，其可包含助懸劑和增稠劑。所述制劑可存在于單位劑量容器或多劑量容器例如密封的安瓿和小瓶中，并可在冷凍干燥的(凍干的)狀態(tài)下貯存，其恰恰在使用前僅需要加入無菌液態(tài)載體例如注射用水。現(xiàn)用現(xiàn)配的注射溶液劑和混懸劑可從無菌粉末、顆?；蚱瑒﹣碇苽?。
應該理解的是，除了上文具體提及的成分之外，在已考慮到所涉及制劑的類型的情況下，所述制劑還可包括本領域中的其它常規(guī)物質，例如適于口服給藥的那些制劑可包括矯味劑。
術語“患者”既包括人類也包括其它哺乳動物。
術語“治療”是指(i)在可能易患疾病、障礙和/或病癥但尚未診斷患有所述疾病、障礙和/或病癥的患者中預防所述疾病、障礙和/或病癥；(ii)抑制所述疾病、障礙和/或病癥，即阻止其發(fā)展；以及(iii)減輕所述疾病、障礙和/或病癥，即引起所述疾病、障礙和/或病癥的消退。
本發(fā)明的化合物也可與環(huán)孢菌素例如環(huán)孢菌素A一起給藥。已在臨床試驗中顯示出環(huán)孢菌素A具有抗HCV活性(Hepatology 2003，38，1282、Biochem.Biophys.Res.Commun.2004，313，42和J.Gastroenterol.2003，38，567)。
下表1列出了可與本發(fā)明的化合物一起給藥的化合物的一些示例性實例。本發(fā)明的化合物可在組合療法中與其它具有抗HCV活性的化合物同時給藥或分開給藥，或通過將各化合物組合成組合物來給藥。
表1 本發(fā)明的化合物也可用作實驗室試劑。所述化合物在提供以下研究工具中是有幫助的，這些研究工具用于設計病毒復制測定、驗證動物測定系統(tǒng)和進行結構生物學研究以進一步提高對HCV疾病機理的認識。此外，本發(fā)明的化合物可例如通過競爭性抑制作用而用于建立或確定其它抗病毒化合物的結合位點。
本發(fā)明的化合物也可用于處理或預防物質的病毒污染，因此降低了與這些物質(例如血液、組織、手術器械和手術外衣、實驗室儀器和實驗室外衣以及血液采集裝置和物質或輸血裝置和物質)發(fā)生接觸的實驗室人員或醫(yī)務人員或患者感染病毒的風險。
當具有式(I)的化合物通過合成性過程或通過代謝性過程(包括發(fā)生在人類或動物體內(在體內)的那些代謝性過程或發(fā)生在體外的過程)來制備時，本發(fā)明旨在包括具有式(I)的化合物。

具體實施例方式 在本申請中(尤其包括在以下示例性實施例中)使用的縮寫是本領域技術人員公知的。所使用的一些縮寫如下TEA和NEt3表示三乙胺；DMF表示N，N-二甲基甲酰胺；THF表示四氫呋喃；HATU表示O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基

六氟磷酸鹽；Et表示乙基；Boc或BOC表示叔丁氧基羰基；Me表示甲基；EtOH表示乙醇；DMSO表示二甲基亞砜；MeOH表示甲醇；MeLi表示甲基鋰；tBuLi或tert-BuLi表示叔丁基鋰；TFA表示三氟乙酸；Et2O表示乙醚；Ph表示苯基；OAc表示乙酸鹽或乙酸酯；DME表示1，2-二甲氧基乙烷；DEPBT表示3-(二乙氧基磷?；趸?-1，2，3-苯并三嗪-4(3H)-酮；iPr2EtN或DIPEA表示二異丙基乙胺；EDCI表示1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽；DMAP表示4-二甲基氨基吡啶；DBU表示1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯；t-Bu表示叔丁基；以及HMDS表示六甲基二甲硅烷基氮烷(hexamethyldisilazide)。
現(xiàn)結合某些實施方案來描述本發(fā)明，所述實施方案不是旨在限制本發(fā)明的范圍。相反地，本發(fā)明涵蓋可包括在權利要求書的范圍內的所有可選擇形式、變化形式和等價形式。由此，以下實施例(包括具體的實施方案)將闡述本發(fā)明的一種實踐，其中應該理解的是，所述實施例出于闡述某些實施方案的目的，并且呈現(xiàn)這些實施例以提供這樣的內容，其被相信是最有用的并且是有關本發(fā)明操作和概念方面的容易理解的描述。
原料可得自商業(yè)來源或通過本領域技術人員已知的充分建立的文獻方法來制備。
實施例 中間體4的制備(S)-2-(5-(4-溴苯基)-1H-吡唑-3-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
步驟1在0℃向4-溴苯基乙炔(1)(0.917g，5.06mmol)于THF(20mL)中的溶液中滴加乙基溴化鎂溶液(濃度為3M的THF溶液，1.8mL，5.4mmol)。10分鐘后，移開冷卻浴，將混合物在室溫攪拌1小時。然后將反應混合物再冷卻至0℃，然后加到N-(叔丁氧基羰基)-L-脯氨酸N’-甲氧基-N’-甲基酰胺[N-(tert-butoxycarbonyl)-L-proline-N’-methoxy-N’-methylamide](2)(0.970g，3.76mmol)于THF(10mL)中的溶液中。將反應混合物溫熱至室溫，攪拌2小時，然后用飽和NH4Cl淬滅?；旌衔镉靡宜嵋阴?H2O稀釋，然后分離各層。水相用乙酸乙酯(2×)反萃取，對合并的有機層進行洗滌(H2O和鹽水)，干燥(Na2SO4)，并過濾。真空除去溶劑，殘余物經(jīng)快速色譜(己烷∶乙酸乙酯，4∶1)純化，得到中間體(3)，其為奶油色固體(1.26g，89％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.71-7.73(m，2H)，4.26-4.32(m，1H)，3.39-3.49(m，2H)，2.20-2.32(m，1H)，1.81-2.00(m，3H)，1.36，1.31(s，9H，比例為2∶3的旋轉異構體)。LCMS針對C18H20BrNO3的分析計算值為377；觀測值為278(M+H-Boc)+。
步驟2將(S)-2-(3-(4-溴苯基)丙炔?；?吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(3)(0.759g，2.01mmol)和水合肼(濃度為55％w/w的水溶液，0.19mL，2.15mmol)于乙醇(10mL)中的混合物在80℃加熱16小時。然后除去溶劑，殘余物用乙酸乙酯/H2O分配。水相用乙酸乙酯(2×)反萃取，對合并的有機層進行洗滌(H2O和鹽水)，干燥(Na2SO4)，并過濾。真空除去溶劑，得到中間體(4)，其為無色泡沫(0.812g，定量；1H NMR顯示存在殘余的乙酸乙酯)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.0(s，0.4H)，12.8(s，0.6H)，7.54-7.73(m，4H)，6.50(s，1H)，4.8(m，1H)，3.50(寬單峰，1H)，2.17(寬單峰，1H)，1.84-1.88(m，3H)，1.38，1.18(s，9H，比例為2∶3的旋轉異構體)。LCMS針對C18H22BrN3O2的分析計算值為391；觀測值為392(M+H)+。
中間體8的制備(S)-2-(5-(4-碘苯基)-1H-吡唑-3-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
步驟1向((4-碘苯基)乙炔基)三甲基甲硅烷(5)(2.07g，6.23mmol)于甲醇(40mL)中的溶液中加入K2CO3(8.0g，57.9mmol)，然后將反應混合物攪拌48小時。然后真空除去揮發(fā)物，將殘余物在乙酸乙酯和H2O之間分配。分離各層，水相用乙酸乙酯(2×)反萃取。對合并的有機層進行洗滌(H2O和鹽水)，干燥(Na2SO4)，并過濾。真空除去溶劑，在-20℃使殘余物在己烷中結晶(收集兩批)，得到1-乙炔基-4-碘苯(6)，其為無色固體(0.92g，64％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.66(表現(xiàn)為d，J＝8.6Hz，2H)，7.20(表現(xiàn)為d，J＝8.5Hz，2H)，1.54(s，1H)。
步驟2在-78℃向1-乙炔基-4-碘苯6(0.908g，3.98mmol)于THF(20mL)中的溶液中加入乙基溴化鎂(濃度為3M的乙醚溶液，1.39mL，4.18mmol)。10分鐘后，移開冷卻浴，將溶液在室溫攪拌1小時。然后將反應混合物再冷卻至0℃，加到N-(叔丁氧基羰基)-L-脯氨酸N’-甲氧基-N’-甲基酰胺2(0.970g，3.76mmol)于THF(10mL)中的溶液中。將反應混合物溫熱至室溫，繼續(xù)攪拌12小時，然后混合物用飽和NH4Cl淬滅?；旌衔镉靡宜嵋阴?H2O稀釋，分離各層，水相用乙酸乙酯(2×)反萃取。對合并的有機層進行洗滌(H2O和鹽水)，干燥(Na2SO4)，過濾，并真空除去溶劑。得到的殘余物經(jīng)快速色譜(己烷∶乙酸乙酯，4∶1)純化，得到(S)-2-(3-(4-碘苯基)丙炔?；?吡咯烷-1-甲酸叔丁酯7(0.908g，71％)，其為黃色油狀物，所述油狀物在靜置時固化。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.72-7.76(m，2H)，7.26-7.30(m，2H)，4.49(dd，J＝8.8，4.3Hz，0.3H)，4.29(dd，J＝8.5，5.5Hz，0.7H)，3.59(表現(xiàn)為t，J＝6.7Hz，2H)，2.20-2.33(m，1H)，1.85-2.10(m，3H)，1.45，1.40(s，9H，比例為2∶3的旋轉異構體)。LCMS針對C18H20INO3的分析計算值為425；觀測值為326(M+H-Boc)+。
步驟3將(S)-2-(3-(4-碘苯基)丙炔?；?吡咯烷-1-甲酸叔丁酯7(0.905g，2.13mmol)和肼(濃度為55％w/w的水溶液，0.21mL，2.25mmol)于乙醇(20mL)中的溶液在85℃加熱3小時。然后真空除去溶劑，殘余物用H2O/乙酸乙酯分配。分離各層，水相用乙酸乙酯(2×)反萃取，對合并的有機層進行洗滌(H2O和鹽水)，干燥(Na2SO4)，并過濾。真空除去溶劑，得到標題化合物8(0.966g，定量)，其為無色泡沫。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.70(表現(xiàn)為d，J＝8.2Hz，2H)，7.51(表現(xiàn)為d，J＝8.2Hz，2H)，6.36(s，1H)，4.94-5.02(m，1H)，3.38-3.55(m，2H)，2.25-2.29(m，2H)，1.89-2.05(m，2H)。LCMS針對C18H22IN3O2的分析計算值為439；觀測值為340(M+H-Boc)+。
中間體9a的制備4，4’-二(3-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-吡唑-5-基)聯(lián)苯
步驟1在-78℃向(S)-2-(5-(4-溴苯基)-1H-吡唑-3-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(4)(0.187g，0.476mmol)于THF(5mL)中的溶液中先后加入MeLi(甲基鋰)(濃度為1.6M的Et2O(乙醚)溶液，0.31mL，0.496mmol)和叔丁基鋰(濃度為1.7M的戊烷溶液，0.64mL，1.09mmol)。10分鐘后，經(jīng)由套管加入新鮮熔化的ZnCl2(0.091g，0.668mmol)于THF(2mL)中的溶液。將溶液攪拌30分鐘，然后移開冷卻浴，使溶液溫熱至室溫。向該混合物中加入(S)-2-(5-(4-碘苯基)-1H-吡唑-3-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(8)(0.305g，0.694mmol)和Pd(PPh3)4(四(三苯基膦)鈀)(0.032g，0.0277mmol)，然后將混合物在70℃在氬氣下加熱12小時。冷卻至室溫后，加入飽和NH4Cl，然后混合物用乙酸乙酯/H2O分配。分離水相，然后用乙酸乙酯(2×)反萃取，對合并的有機層進行洗滌(H2O和鹽水)，干燥(Na2SO4)，并過濾。真空除去溶劑，殘余物經(jīng)快速色譜(0-100％乙酸乙酯/己烷)純化，然后使用制備性HPLC(CH3CN∶H2O∶NH4OAc)再純化，得到油狀物，其為期望的產(chǎn)物(9)和起始芳基碘化物(8)的混合物(通過LCMS確定為約1∶1)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.80(寬單峰，2H)，7.73(寬單峰，2H)，7.61-7.66(m，2H)，7.52-7.57(m，2H)，6.50(s，2H)，4.8(m，2H，部分被溶劑模糊)，3.61-3.63(m，2H)，3.47-3.51(m，2H)，2.30-2.35(m，2H)，1.93-2.03(m，6H)，1.47(s，6H)，1.28(s，12H)。LCMS針對C36H44N6O4的分析計算值為624；觀測值為625(M+H)+。
將中間體(9)溶于CH2Cl2(2mL)和TFA(2mL)中，然后在室溫攪拌1小時。真空除去溶劑，粗殘余物經(jīng)制備性HPLC(CH3CN∶H2O∶TFA)純化，得到4，4’-二(3-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-吡唑-5-基)聯(lián)苯9a的TFA鹽(0.08g，26％)，其為白色固體。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.81(表現(xiàn)為AB q中的A，J＝8.5Hz，4H)，7.78(表現(xiàn)為AB q中的B，J＝8.5Hz，4H)，6.80(s，2H)，4.78(dd，(表現(xiàn)為t)，J＝7.3，8.1Hz，2H)，3.40-3.51(m，4H)，2.47-2.55(m，2H)，2.14(m，6H)。LCMS針對C28H28N6的分析計算值為424；觀測值為425(M+H)+。
中間體16的制備(S)-2-(5-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
步驟1在0℃歷時40分鐘將無水HCl氣體鼓泡通過4-碘苯甲腈12(2.22g，9.74mmol)于無水甲醇(80mL)中的溶液，然后將混合物攪拌48小時。真空除去溶劑(容器用氬氣反填充以避免引入濕氣)，將殘余物溶于無水甲醇(40mL)中。然后在室溫向該溶液中加入水合肼(濃度為55％w/w的水溶液，3.0mL，33.9mmol)，將混合物攪拌1小時，然后真空除去溶劑。殘余物用無水THF研磨，對混合物進行過濾以除去不溶性鹽。得到的4-碘亞氨芐基肼(4-iodobenzimidohydrazide)(13)的THF溶液直接用于下一步。
步驟2在氬氣下向冷卻至-10℃的(S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-甲酸(14)(1.81g，8.39mmol)于THF(30mL)中的溶液中先后加入NEt3(1.2mL，8.6mmol)和氯甲酸異丁酯(1.1mL，8.5mmol)。將混合物在-10℃攪拌20分鐘，然后在氬氣下一邊冷卻一邊過濾。向得到的溶液中滴加先前步驟中制備的4-碘亞氨芐基肼的THF溶液。將反應混合物攪拌2小時，然后真空除去溶劑。將約一半的粗物質(約4.19mmol)吸收在二甲苯(40mL)中，然后將混合物置于預加熱至185℃的油浴中。30分鐘后，將反應混合物冷卻，真空除去溶劑，殘余物經(jīng)柱色譜(己烷∶乙酸乙酯，2∶1)純化，然后結晶(己烷-乙酸乙酯)，得到(S)-2-(5-(4-碘苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，其為無色固體(15)(0.438g，24％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.91(s，1H)，7.74-7.88(m，4H)，4.84-4.93(m，1H)，3.51-3.55(m，1H)，3.33-3.37(m，1H，部分被H2O峰模糊)，2.21-2.32(m，1H)，1.87-1.91(m，3H)，1.38(s，4H)，1.13(s，5H)。LCMS針對C17H21N4O2的分析計算值為440；觀測值為441(M+H)+。
步驟3(S)-2-(5-(4-碘苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(15)(0.210g，0.476mmol)、聯(lián)硼酸二頻哪醇酯(bis(pinacolato)diboron)(0.261g，1.03mmol)、KOAc(乙酸鉀)(0.136g，1.39mmol)和Pd(PPh3)4(0.025g，0.0217mmol)于二氧雜環(huán)己烷(5mL)中的混合物用氬氣氣流脫氣15分鐘。然后將混合物在85℃加熱12小時，此時向其中再加入0.130g(0.5mmol)聯(lián)硼酸二頻哪醇酯和0.012g(0.011mmol)Pd(PPh3)4，然后再加熱36小時。將冷卻的混合物倒入乙酸乙酯/H2O中，然后分離各層。水相用乙酸乙酯(2×)反萃取，對合并的有機層進行洗滌(H2O和鹽水)，干燥(Na2SO4)，并過濾。真空除去溶劑，殘余物經(jīng)快速色譜(己烷∶乙酸乙酯，1∶1)純化，得到(S)-2-(5-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(16)(0.161g，77％)，其為無色固體。1H NMR顯示所述物質混雜有約5-10％的聯(lián)硼酸二頻哪醇酯，但是其按原樣用于隨后的步驟。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ14.23(s，0.3H)，13.92(s，0.7H)，7.99(表現(xiàn)為AB四重峰中的A，d，J＝7.4Hz，2H)，7.73(表現(xiàn)為AB四重峰中的B，d，J＝7.4Hz，4H)，4.81-4.93(m，1H)，3.53(寬單峰，1H)，3.35-3.39(m，1H)，1.38(s，3H)，1.30(s，12H)，1.13(s，6H)。LCMS針對C23H33BN4O4的分析計算值為440；觀測值為441(M+H)+。
中間體19的制備(S)-2-(5-(4’-(2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)聯(lián)苯-4-基)-1H-吡唑-3-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
一般方法A將(S)-2-(5-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(17)(方案9；0.138g，0.314mmol)、(S)-2-(5-(4-碘苯基)-1H-吡唑-3-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯8(0.141g，0.321mmol)、NaHCO3(0.110g，1.31mmol)和Pd(PPh3)4(0.024g，0.0208mmol)于DME(3mL)和H2O(1mL)的混合物中的混合物在80℃在氬氣下加熱12小時。冷卻的混合物用乙酸乙酯/H2O稀釋，分離各層，水相用乙酸乙酯(2×)反萃取。對合并的有機層進行洗滌(H2O和鹽水)，干燥(Na2SO4)，過濾，并真空除去溶劑。得到的殘余物經(jīng)快速色譜(先后為己烷∶乙酸乙酯2∶1和乙酸乙酯∶甲醇9∶1)純化，得到(S)-2-(5-(4’-(2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)聯(lián)苯-4-基)-1H-吡唑-3-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(19)(0.084g，43％)，其為黃色固體。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.01，12.69，12.20，11.91，11.85(s，1H)，7.63-7.85(m，8H)，7.50-7.56(m，1H)，6.52(s，1H)，4.75-4.94(m，2H)，3.42-3.58(m，2H)，3.30-3.39(m，2H，部分被H2O信號模糊)，2.10-2.28(m，2H)，1.81-2.01(m，6H)，1.40(s，7H)，1.20-1.23(m，6H)，1.13-1.15(m，5H)。LCMS針對C36H44N6O4的分析計算值為624；觀測值為625(M+H)+。
以下中間體也使用上文的一般方法A來制備
中間體26的制備(S)-4-(5-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-1，3，4-噁二唑-2-基)苯基硼酸
步驟1向4-碘苯甲酰基肼(22)(1.20g，4.58mmol)、(S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-甲酸(14)(1.03g，4.79mmol)和i-Pr2NEt(2.0mL，11.2mmol)于DMF(75mL)中的溶液中分批加入3-(二乙氧基磷?；趸?-1，2，3-苯并三嗪-4(3H)-酮(DEPBT)(2.00g，6.68mol)。將反應混合物在室溫攪拌2小時，然后將其倒入H2O/乙酸乙酯中。分離各層。水相用乙酸乙酯(2×)萃取，對合并的有機層進行洗滌(H2O和鹽水)，干燥(Na2SO4)，然后過濾。真空除去溶劑，殘余物經(jīng)快速色譜(己烷∶乙酸乙酯，1∶1)純化，得到二?；?23)，其為無色泡沫(1.99g，99％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.52(s，0.5H)，10.39(s，0.5H)，9.94(d，J＝7.9Hz，1H)，7.88(表現(xiàn)為dd，J＝8.5，5.2Hz，2H)，7.64(表現(xiàn)為d，J＝8.5Hz，2H)，4.18(不能解析的ddd，1H)，3.37-3.43(m，1H)，3.24-3.29(m，1H)，2.10-2.17(m，1H)，1.75-1.96(m，3H)，1.38(s，4.5H)，1.37(s，4.5H)。LCMS針對C17H22IN3O4的分析計算值為459；觀測值為460(M+H)+。
步驟2在室溫向先前步驟中制備的二?；?23)、PPh3(三苯基膦)(1.71g，6.54mmol)和i-Pr2NEt(2.30mL，12.97mmol)于CH3CN(50mL)中的混懸液中加入六氯乙烷(1.41g，5.97mmol)。將反應混合物在室溫攪拌1.5小時，然后真空除去溶劑，殘余物用乙酸乙酯/H2O分配。分離各層，水相用乙酸乙酯(2×)反萃取，對合并的有機層進行洗滌(H2O和鹽水)，并干燥(Na2SO4)。真空除去溶劑，殘余物經(jīng)柱色譜(己烷∶乙酸乙酯，3∶1)純化，得到(S)-2-(5-(4-碘苯基)-1，3，4-噁二唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯24(1.89g，99％)，其為無色油狀物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.98(表現(xiàn)為AB四重峰中的A，d，J＝8.4Hz，2H)，7.74(表現(xiàn)為AB四重峰中的A，d，J＝8.4Hz，2H)，5.02-5.06(m，1H)，3.47-3.53(m，1H)，3.36-3.41(m，1H)，2.26-2.32(m，1H)，1.91-2.09(m，3H)，1.37(s，4H)，1.17(s，5H)。LCMS針對C17H20IN3O3的分析計算值為441；觀測值為442(M+H)+。
步驟3(S)-2-(5-(4-碘苯基)-1，3，4-噁二唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(24)(0.574g，1.30mmol)、聯(lián)硼酸二頻哪醇酯(0.665g，2.62mmol)、KOAc(0.641g，6.53mmol)和Pd(PPh3)4(0.076g，0.0658mmol)于二氧雜環(huán)己烷(5mL)中的混合物用氬氣氣流脫氣15分鐘。然后將混合物在100℃加熱12小時，冷卻至室溫，然后倒入乙酸乙酯/H2O中。分離各層，水相用乙酸乙酯(2×)反萃取，對合并的有機層進行洗滌(H2O和鹽水)，干燥(Na2SO4)，然后過濾。真空除去溶劑，殘余物經(jīng)快速色譜(己烷∶乙酸乙酯，1∶1)純化，得到標題硼酸酯(25)和標題硼酸(26)的混合物。該混合物經(jīng)制備性HPLC(CH3CN∶H2O∶TFA)再純化，得到(S)-4-(5-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-1，3，4-噁二唑-2-基)苯基硼酸26，其為無色固體(0.101g，22％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.31(寬單峰，2H)，7.94-8.00(m，4H)，5.03-5.10(m，1H)，3.37-3.42(m，2H)，2.31-2.40(m，1H)，1.92-2.04(m，3H)，1.38(s，3H)，1.18(s，6H)。LCMS針對C17H22BN3O5的分析計算值為359；觀測值為360(M+H)+。
中間體29的制備(S)-2-(5-(4’-(5-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-1，3，4-噁二唑-2-基)聯(lián)苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
(S)-4-(5-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-1，3，4-噁二唑-2-基)苯基硼酸(27)(0.090g，0.251mmol)、(S)-2-(5-(4-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(28)(方案9；0.098g，0.250mmol)、NaHCO3(0.076g，0.906mmol)和Pd(PPh3)4(0.019g，0.016mmol)于DME(3mL)和H2O(1mL)的混合物中的混合物用氬氣氣流脫氣15分鐘，然后將混合物在80℃加熱12小時。冷卻的混合物用乙酸乙酯/H2O稀釋，分離各層，水相用乙酸乙酯(2×)反萃取。對合并的有機層進行洗滌(H2O和鹽水)，干燥(Na2SO4)，過濾，然后真空除去溶劑。殘余物經(jīng)制備性HPLC(CH3CN∶H2O∶NH4OAc)純化，得到標題化合物29(0.045g，29％)，其為淡黃色玻璃狀物。LCMS針對C35H42N6O5的分析計算值為626；觀測值為627(M+H)+。
實施例30的制備(1R，1’R)-2，2’-((2S，2’S)-2，2’-(5，5’-(聯(lián)苯-4，4’-二基)二(1H-吡唑-5，3-二基))二(吡咯烷-2，1-二基))二(2-氧代-1-苯基乙烷-2，1-二基)二氨基甲酸二甲酯
一般方法B(2S，2’S)-2，2’-(5，5’-(聯(lián)苯-4，4’-二基)二(1H-吡唑-5，3-二基))二(吡咯烷-1-甲酸)二叔丁酯(9)(0.080g，0.12mmol)于CH2Cl2(2.5mL)中的溶液用TFA(2.5mL)處理。將混合物在室溫攪拌1小時，然后真空除去溶劑。殘余物經(jīng)制備性HPLC(CH3CN∶H2O∶TFA)純化，得到4，4’-二(3-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-吡唑-5-基)聯(lián)苯(9a)的TFA鹽，其為無色固體(0.080g，19％)。1HNMR(400MHz，CD3OD)δ7.81(表現(xiàn)為AB四重峰中的A，d，J＝8.6Hz，4H)，7.78(表現(xiàn)為AB四重峰中的B，d，J＝8.6Hz，4H)，6.80(s，2H)，4.78(表現(xiàn)為t，J＝7.3，8.1Hz，2H)，3.41-3.50(m，4H)，2.48-2.55(m，2H)，2.14-2.37(m，6H)。LCMS針對C26H28N6的分析計算值為424；觀測值為425(M+H)+。
在室溫向4，4’-二(3-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-吡唑-5-基)聯(lián)苯(9a)的TFA鹽(0.040g，0.0613mmol)、(R)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-苯基乙酸Cap-4(0.033g，0.158mmol)和HATU(0.061g，0.160mmol)于DMF(2mL)中的溶液中加入i-Pr2NEt(0.21mL，1.23mmol)。將混合物在室溫攪拌4小時，然后粗反應混合物直接經(jīng)制備性HPLC(CH3CN∶H2O∶TFA)純化，然后經(jīng)制備性HPLC(CH3CN∶H2O∶NH4OAc)再純化，得到標題化合物(30)(0.014g，29％)，其為白色蓬松固體。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.05-13.30(m，1H)，12.63-12.85(m，1H)，7.73-7.81(m，9H)，7.30-7.43(m，8H)，7.03(寬單峰，1H)，6.93(m，0.7H)，6.76(s，0.3H)，6.62(s，0.7H)，6.43(s，0.3H)，5.87(s，0.5H)，5.44-5.49(m，2H)，5.31(寬單峰，0.5H)，5.05-5.18(m，1.7H)，4.71-4.73(m，0.3H)，3.91(s，1H)，3.71-3.75(m，1H)，3.55(s，3H)，3.53(s，3H)，3.53(m，模糊的，1H)，3.18(s，1H)，1.88-2.01(m，8H)。LCMS針對C46H46N8O6的分析計算值為809；觀測值為810(M+H)+。
以下實施例也使用一般方法B和適當?shù)聂人醽碇苽?

中間體17的制備(S)-2-(5-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
步驟1歷時15分鐘將N，N-二異丙基乙胺(18mL，103.3mmol)滴加到N-Boc-L-脯氨酸(N經(jīng)叔丁氧羰基保護的L-脯氨酸)14(7.139g，33.17mmol)、HATU(13.324g，35.04mmol)、2-氨基-1-(4-溴苯基)乙酮的HCl鹽(8.127g，32.44mmol)和DMF(105mL)的非均相混合物中，然后在環(huán)境條件攪拌55分鐘。真空除去大部分揮發(fā)性組分，將得到的殘余物在乙酸乙酯(300mL)和水(200mL)之間分配。有機層用水(200mL)和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，并真空濃縮。由殘余物制備過篩的硅膠樣品(silica gel mesh)，然后進行快速色譜(硅膠；50-60％乙酸乙酯/己烷)，得到酮基酰胺(36)，其為白色固體(12.8g)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)δ8.25-8.14(m，1H)，7.92(brd，J＝8.0，2H)，7.75(br d，J＝8.6，2H)，4.61(dd，J＝18.3，5.7，1H)，4.53(dd，J＝18.1，5.6，1H)，4.22-4.12(m，1H)，3.43-3.35(m，1H)，3.30-3.23(m，1H)，2.18-2.20(m，1H)，1.90-1.70(m，3H)，1.40/1.34(兩者表現(xiàn)為br s，9H)。LC/MS針對[M+Na]+C18H23BrN2NaO4的分析計算值為433.07；觀測值為433.09。
步驟2將酮基酰胺(36)(12.8g，31.12mmol)和NH4OAc(乙酸銨)(12.0g，155.7mmol)于二甲苯(155mL)中的混合物在密封的管中在140℃中加熱2小時。真空除去揮發(fā)性組分，將殘余物在乙酸乙酯和水之間小心分配，之后加入足夠的飽和NaHCO3溶液，從而在搖動兩相系統(tǒng)后使水相的pH為稍微堿性。分離各層，水層用額外的乙酸乙酯萃取。合并的有機相用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，并真空濃縮。使得到的物質在乙酸乙酯/己烷中重結晶，得到兩批咪唑(28)，其為淡黃色致密固體，重5.85g。真空濃縮母液，并進行快速色譜(硅膠；30％乙酸乙酯/己烷)，得到額外的2.23g咪唑(28)。1HNMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)δ12.17/11.92/11.86(m，1H)，7.72-7.46/7.28(m，5H)，4.86-4.70(m，1H)，3.52(表現(xiàn)為br s，1H)，3.36(m，1H)，2.30-1.75(m，4H)，1.40/1.15(表現(xiàn)為br s，9H)。LC/MS針對[M+H]+C18H23BrN3O2的分析計算值為392.10；觀測值為391.96。HRMS針對[M+H]+C18H23BrN3O2的分析計算值為392.0974；觀測值為392.0959。
使用下述的手性HPLC條件來評價(28)的兩份樣品的光學純度(合并的兩批其ee(對映異構體過量)＞99％；得自快速色譜的樣品其ee＝96.7％)柱Chiralpak AD，10μm，4.6×50mm；溶劑2％乙醇/庚烷(等梯度)；流速1mL/min；波長220或254nm；以及相對保留時間2.83分鐘(R)和5.34分鐘(S) 步驟3將Pd(Ph3P)4(469mg，0.406mmol)加到下述壓力管中，所述壓力管含有溴化物(28)(4.008g，10.22mmol)、聯(lián)硼酸二頻哪醇酯(5.422g，21.35mmol)、乙酸鉀(2.573g，26.21mmol)和1，4-二氧雜環(huán)己烷(80mL)的混合物。反應燒瓶用氮氣凈化，蓋上蓋子，然后用油浴在80℃加熱16.5小時。過濾反應混合物，真空濃縮濾液。將粗物質在CH2Cl2(150mL)和水性介質(50mL水+10mL飽和NaHCO3溶液)之間小心分配。水層用CH2Cl2萃取，對合并的有機相進行干燥(MgSO4)，過濾，并真空濃縮。得到的物質用快速色譜(樣品用洗脫溶劑加載；20-35％乙酸乙酯/CH2Cl2)純化，得到混雜有頻哪醇的硼酸酯(17)，其為灰白色致密固體；(17)與頻哪醇的相對摩爾比為約10∶1(1H NMR)。樣品在暴露于高真空約2.5天后重3.925g。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)12.22/11.94/11.87(m，1H)，7.79-7.50/7.34-7.27(m，5H)，4.86-4.70(m，1H)，3.52(表現(xiàn)為br s，1H)，3.36(m，1H)，2.27-1.77(m，4H)，1.45-1.10(m，21H)。LC/MS針對[M+H]+C24H35BN3O4的分析計算值為440.27；觀測值為440.23。
實施例37的制備 步驟1(S)-2-(2-(4-溴苯基)-2-氧代乙基氨甲?；?吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制備
向2-氨基-1-(4-溴苯基)乙酮鹽酸鹽(1.10g，4.39mmol)、(S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-甲酸(1.02g，4.73mmol)和二異丙基乙胺(3.10mL，17.4mmol)于DMF(20mL)中的溶液中加入3-(二乙氧基磷?；趸?-(1，2，3)-苯并三嗪-4(3H)-酮(DEPBT，2.0g，6.68mmol)，然后將溶液攪拌2小時。將混合物倒入H2O-乙酸乙酯中，然后分離各層。水相用乙酸乙酯萃取兩次，對合并的有機層進行洗滌(H2O×2和鹽水)，干燥(Na2SO4)，并過濾。真空除去溶劑，殘余物經(jīng)快速柱色譜(1∶1己烷∶乙酸乙酯)純化，得到(S)-2-(2-(4-溴苯基)-2-氧代乙基氨甲?；?吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.02g，56％)，其為無色泡沫。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.16-8.21(m，1H)，7.90-7.92(m，2H)，7.73-7.75(m，2H)，4.59(dd，J＝5.7，18.4Hz，1H)，4.51(dd，J＝5.7，18.4Hz，1H)，4.13-4.19(m，1H)，3.24-3.27(m，2H，部分被H2O模糊)，2.05-2.12(m，1H)，1.74-1.81(m，3H)，1.39(s，3H)，1.33(3，6H)。LCMS針對C18H23BrN2O4的分析計算值為410；觀測值為411(M+H)+。
步驟2(S)-2-(5-(4-溴苯基)噁唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制備
向步驟1的產(chǎn)物(1.00g，2.43mmol)、PPh3(1.00g，3.71mmol)和二異丙基乙胺(1.3mL，7.28mmol)于CH3CN(30mL)中的溶液中分批加入固體形式的六氯乙烷(0.812g，3.43mmol)。將混合物攪拌12小時。TLC(3∶1己烷∶乙酸乙酯)顯示存在起始物質。因此，加入額外的PPh3(0.65g，2.43mmol)和六氯乙烷(0.575g，2.43mmol)，然后繼續(xù)攪拌4小時。真空除去溶劑，殘余物用乙酸乙酯-H2O稀釋，然后分離各層。水相用乙酸乙酯萃取兩次，對合并的有機層進行洗滌(H2O和鹽水)，干燥(Na2SO4)，并過濾。真空除去溶劑，殘余物經(jīng)快速柱色譜(3∶1己烷∶乙酸乙酯)純化，得到(S)-2-(5-(4-溴苯基)噁唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.605g，63％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.60-7.68(m，5H)，4.80-4.91(m，1H)，3.46-3.51(m，1H)，3.33-3.39(m，1H)，2.18-2.31(m，1H)，1.84-1.99(m，3H)，1.36(s，4H)，1.15(s，5H)。LCMS針對C18H21BrN2O3的分析計算值為392；觀測值為393(M+H)+。
步驟3(S)-2-(5-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基)噁唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制備
將步驟2的產(chǎn)物(0.60g，1.53mmol)、聯(lián)硼酸二頻哪醇酯(0.98g，3.84mmol)、KOAc(0.54g，5.48mmol)和Pd(PPh3)4(0.10g，0.087mmol)于二氧雜環(huán)己烷(20ml)中的混合物在100℃加熱12小時。將混合物倒入H2O-乙酸乙酯中，然后分離各層。水相用乙酸乙酯萃取兩次，對合并的有機層進行洗滌(H2O和鹽水)，干燥(Na2SO4)，并過濾。真空除去溶劑，殘余物經(jīng)快速柱色譜(2∶1己烷∶乙酸乙酯)純化，得到(S)-2-(5-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基)噁唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，其為淡橙色油狀物(742mg，＞100％)，所述油狀物的1H NMR顯示其混雜有約5-10％的氧化三苯基膦(triphosphine oxide)。所述物質在隨后的步驟中按原樣使用。LCMS針對C24H33BN2O5的分析計算值為440；觀測值為441(M+H)+。
步驟4(S)-2-(5-(4’-(5-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-2-基)聯(lián)苯-4-基)噁唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制備
將步驟3的產(chǎn)物(0.72g，1.63mmol)、步驟2的產(chǎn)物(0.64g，1.63mmol)、Pd(PPh3)4(0.094g，0.08mmol)和NaHCO3(0.41g，4.89mmol)于DME∶H2O(3∶1，20mL)中的混合物在90℃加熱12小時。將混合物倒入H2O-乙酸乙酯中，然后分離各層。水相用乙酸乙酯萃取兩次，對合并的有機層進行洗滌(H2O和鹽水)，干燥(Na2SO4)，并過濾。真空除去溶劑，殘余物經(jīng)快速柱色譜(先后為4∶1己烷∶乙酸乙酯和乙酸乙酯)純化，得到(S)-2-(5-(4’-(5-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-2-基)聯(lián)苯-4-基)噁唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，其為淡黃色玻璃狀物(431mg，42％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.85-12.21(m，1H)，7.66-7.84(m，9H)，7.01-7.84(m，1H)，4.74-5.05(m，2H)，3.48-3.54(m，2H)，3.35-3.40(m，2H)，2.13-2.34(m，2H)，1.82-2.02(m，6H)，1.39(s，6H)，1.18(s，6H)，1.16(s，3H)，1.14(s，3H)。LCMS針對C36H43N5O5的分析計算值為625；觀測值為626(M+H)+。
步驟52-((S)-吡咯烷-2-基)-5-(4’-(5-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-2-基)聯(lián)苯-4-基)噁唑的制備
在環(huán)境溫度向(S)-2-(5-(4’-(5-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-2-基)聯(lián)苯-4-基)噁唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(313mg，0.500mmol)于5mL甲醇中的溶液中加入HCl/二氧雜環(huán)己烷(5ml，20.00mmol)。30分鐘后，溶液變成黃色和非均相。2小時后，通過LC/MS進行的分析顯示反應結束。反應混合物用20mL乙醚稀釋，然后過濾，得到淡橙色固體，將其真空干燥，得到240mg期望的產(chǎn)物，其為三HCl鹽。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm1.93-2.23(m，5H)2.26-2.47(m，6H)2.63(s，1H)4.81-4.92(m，1H)4.97(t，J＝6.56Hz，1H)7.77-8.01(m，10H)。LCMS針對C36H43N5O5的分析計算值為426；觀測值為427(M+H)+。
步驟6實施例37的制備
向步驟5的產(chǎn)物(50mg，0.93mmol)和Cap-51(36.0mg，0.21mmol)于DMF(1.5mL)中的溶液中先后加入二異丙基乙胺(98μl，0.56mmol)和HATU(78mg，0.206mmol)。16小時后，將反應混合物濃縮，然后經(jīng)由制備性HPLC純化。使借助LC/MS測定的含有期望峰的級份通過Oasis MCX柱(用甲醇預處理)，用甲醇洗滌，然后用NH3/甲醇洗脫。真空濃縮，得到75mg實施例37，其為無色泡沫。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 0.75-1.01(m，12H)1.76-2.32(m，10H)3.54(s，6H)3.73-3.93(m，4H)4.00-4.14(m，J＝9.16Hz，2H)5.00-5.21(m，2H)7.22-7.42(m，J＝43.03Hz，2H)7.46-7.96(m，10H)。LC/MS針對C40H49N7O7的分析計算值為740；觀測值為741(M+H)+。
實施例38以類似的方式從2-((S)-吡咯烷-2-基)-5-(4’-(5-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-2-基)聯(lián)苯-4-基)噁唑和Cap 52開始來制備。

1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.03-1.16(m，6H)1.90-2.32(m，8H)3.16-3.21(m，3H)3.23(s，3H)3.38-3.52(m，3H)3.79-3.93(m，4H)4.24-4.37(m，2H)5.07(dd，J＝7.17，3.51Hz，1H)5.15(dd，J＝8.09，3.51Hz，1H)7.24-7.30(m，1H)7.36(d，J＝7.63Hz，1H)7.54(d，J＝1.53Hz，1H)7.60-7.64(m，1H)7.67-7.76(m，4H)7.75-7.87(m，4H)。LC/MS針對C40H49N7O9的分析計算值為772；觀測值為773(M+H)+。
LC條件(除非另有說明) 條件I 柱＝Phenomenex-Luna 3.0×50mm S10 開始％B＝0 最終％B＝100 梯度時間＝2分鐘 停止時間＝3分鐘 流速＝4mL/min 波長＝220nm 溶劑A＝0.1％TFA于10％甲醇/90％H2O中的溶液 溶劑B＝0.1％TFA于90％甲醇/10％H2O中的溶液 條件II 柱＝Phenomenex-Luna 4.6×50mm S10 開始％B＝0 最終％B＝100 梯度時間＝2分鐘 停止時間＝3分鐘 流速＝5mL/min 波長＝220nm 溶劑A＝0.1％TFA于10％甲醇/90％H2O中的溶液 溶劑B＝0.1％TFA于90％甲醇/10％H2O中的溶液 條件III 柱＝HPLC XTERRA C183.0×50mm S7 開始％B＝0 最終％B＝100 梯度時間＝3分鐘 停止時間＝4分鐘 流速＝4mL/min 波長＝220nm 溶劑A＝0.1％TFA于10％甲醇/90％H2O中的溶液 溶劑B＝0.1％TFA于90％甲醇/10％H2O中的溶液 吡咯烷cap的一般合成
將10％Pd/C(2.0g)于甲醇(10mL)中的混懸液加到(R)-2-苯基甘氨酸(10g，66.2mmol)、甲醛(33mL濃度為37wt％的水溶液)、1N HCl(30mL)和甲醇(30mL)的混合物中，然后歷時3小時暴露于H2(60psi)。反應混合物通過硅藻土(

)過濾，然后將濾液真空濃縮。使得到的粗物質在異丙醇中重結晶，得到Cap-1的HCl鹽，其為白色針狀物(4.0g)。旋光度-117.1°[c＝9.95mg/m的H2O溶液；λ＝589nm]。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，500MHz)δ7.43-7.34(m，5H)，4.14(s，1H)，2.43(s，6H)。LC(條件I)RT＝0.25。LC/MS針對[M+H]+C10H14NO2的分析計算值為180.10；觀測值為180.17。HRMS針對[M+H]+C10H14NO2的分析計算值為180.1025；觀測值為180.1017。


歷時幾分鐘將NaBH3CN(6.22g，94mmol)分批加到冷卻的(冰/水)(R)-2-苯基甘氨酸(6.02g，39.8mmol)和甲醇(100mL)的混合物中，然后攪拌5分鐘。歷時10分鐘滴加乙醛(10mL)，在相同的冷卻溫度繼續(xù)攪拌45分鐘，然后在環(huán)境溫度攪拌約6.5小時。反應混合物用冰-水浴冷卻下來，用水(3mL)處理，然后歷時約45分鐘滴加濃HCl，直到混合物的pH為約1.5-2.0，由此淬滅。移開冷卻浴，然后繼續(xù)攪拌，同時加入濃HCl以將混合物的pH維持在約1.5-2.0。將反應混合物攪拌過夜，過濾以除去白色混懸液，然后將濾液真空濃縮。使粗物質在乙醇中重結晶，分兩批得到Cap-2的HCl鹽，其為光亮白色固體(第一批4.16g；第二批2.19g)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)10.44(1.00，br s，1H)，7.66(m，2H)，7.51(m，3H)，5.30(s，1H)，3.15(br m，2H)，2.98(br m，2H)，1.20(表現(xiàn)為br s，6H)。第一批[α]25-102.21°(c＝0.357，H2O)；第二批[α]25-99.7°(c＝0.357，H2O)。LC(條件I)RT＝0.43分鐘。LC/MS針對[M+H]+C12H18NO2的分析計算值為208.13；觀測值為208.26。

將乙醛(5.0mL，89.1mmol)和10％Pd/C(720mg)于甲醇/H2O(4mL/1mL)中的混懸液先后加到冷卻的(約15℃)(R)-2-苯基甘氨酸(3.096g，20.48mmol)、1NHCl(30mL)和甲醇(40mL)的混合物中。移開冷卻浴，然后將反應混合物在H2氣囊下攪拌17小時。加入額外的乙醛(10mL，178.2mmol)，然后在H2氣氛下繼續(xù)攪拌24小時[注意在整個反應過程中H2的提供根據(jù)需要來補充]。反應混合物通過硅藻土(

)過濾，然后真空濃縮濾液。使得到的粗物質在異丙醇中重結晶，得到(R)-2-(乙基氨基)-2-苯基乙酸的HCl鹽，其為光亮白色固體(2.846g)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)δ14.15(br s，1H)，9.55(br s，2H)，7.55-7.48(m，5H)，2.88(br m，1H)，2.73(br m，1H)，1.20(表現(xiàn)為t，J＝7.2，3H)。LC(條件I)RT＝0.39分鐘；同質性指數(shù)(homogeneity index)＞95％。LC/MS針對[M+H]+C10H14NO2的分析計算值為180.10；觀測值為180.18。
將10％Pd/C(536mg)于甲醇/H2O(3mL/1mL)中的混懸液加到(R)-2-(乙基氨基)-2-苯基乙酸/HCl(1.492g，6.918mmol)、甲醛(20mL濃度為37wt％的水溶液)、1N HCl(20mL)和甲醇(23mL)的混合物中。將反應混合物在H2氣囊下攪拌約72小時，其中H2的提供根據(jù)需要來補充。反應混合物通過硅藻土(

)過濾，然后真空濃縮濾液。使得到的粗物質在異丙醇(50mL)中重結晶，得到Cap-3的HCl鹽，其為白色同體(985mg)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)δ10.48(br s，1H)，7.59-7.51(m，5H)，5.26(s，1H)，3.08(表現(xiàn)為br s，2H)，2.65(br s，3H)，1.24(br m，3H)。LC(條件I)RT＝0.39分鐘；同質性指數(shù)＞95％。LC/MS針對[M+H]+C11H16NO2的分析計算值為194.12；觀測值為194.18。HRMS針對[M+H]+C11H16NO2的分析計算值為194.1180；觀測值為194.1181。

歷時6分鐘將ClCO2Me(氯甲酸甲酯)(3.2mL，41.4mmol)滴加到冷卻的(冰/水)(R)-2-氨基-2-苯基乙酸叔丁酯/HCl(9.877g，40.52mmol)和二異丙基乙胺(14.2mL，81.52mmol)的THF(410mL)半溶液(semi-solution)中，然后在類似的溫度攪拌5.5小時。真空除去揮發(fā)性組分，將殘余物在水(100mL)和乙酸乙酯(200mL)之間分配。有機層用1N HCl(25mL)和飽和NaHCO3溶液(30mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，并真空濃縮。得到的無色油狀物用己烷研磨，過濾，然后用己烷(100mL)洗滌，得到(R)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-苯基乙酸叔丁酯，其為白色固體(7.7g)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)7.98(d，J＝8.0，1H)，7.37-7.29(m，5H)，5.09(d，J＝8，1H)，3.56(s，3H)，1.33(s，9H)。LC(條件I)RT＝1.53分鐘；同質性指數(shù)為約90％。LC/MS針對[M+Na]+C14H19NNaO4的分析計算值為288.12；觀測值為288.15。
歷時7分鐘將TFA(16mL)滴加到冷卻的(冰/水)上述產(chǎn)物的CH2Cl2(160mL)溶液中，移開冷卻浴，然后將反應混合物攪拌20小時。因為脫保護仍未完全，所以加入額外的TFA(1.0mL)，再繼續(xù)攪拌2小時。真空除去揮發(fā)性組分，得到的油狀殘余物用乙醚(15mL)和己烷(12mL)處理，得到沉淀物。過濾沉淀物，然后用乙醚/己烷(比例為約1∶3；30mL)洗滌并真空干燥，得到Cap-4，其為蓬松白色固體(5.57g)。旋光度-176.9°[c＝3.7mg/mL的H2O溶液；λ＝589nm]。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)δ12.84(brs，1H)，7.96(d，J＝8.3，1H)，7.41-7.29(m，5H)，5.14(d，J＝8.3，1H)，3.55(s，3H)。LC(條件I)RT＝1.01分鐘；％同質性指數(shù)＞95。LC/MS針對[M+H]+C10H12NO4的分析計算值為210.08；觀測值為210.17。HRMS針對[M+H]+C10H12NO4的分析計算值為210.0766；觀測值為210.0756。

將(R)-2-苯基甘氨酸(1.0g，6.62mmol)、1，4-二溴丁烷(1.57g，7.27mmol)和Na2CO3(2.10g，19.8mmol)于乙醇(40mL)中的混合物在100℃加熱21小時。將反應混合物冷卻至環(huán)境溫度，然后過濾，將濾液真空濃縮。將殘余物溶于乙醇中，然后用1N HCl酸化至pH 3-4，真空除去揮發(fā)性組分。得到的粗物質經(jīng)反相HPLC(水/甲醇/TFA)純化，得到Cap-5的TFA鹽，其為半粘稠白色泡沫(1.0g)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5，500MHz)δ10.68(br s，1H)，7.51(m，5H)，5.23(s，1H)，3.34(表現(xiàn)為br s，2H)，3.05(表現(xiàn)為br s，2H)，1.95(表現(xiàn)為br s，4H)。RT＝0.30分鐘(條件I)；同質性指數(shù)＞98％。LC/MS針對[M+H]+C12H16NO2的分析計算值為206.12；觀測值為206.25。

Cap-6的TFA鹽通過使用制備Cap-5的方法從(R)-2-苯基甘氨酸和1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷來合成。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5，500MHz)δ12.20(br s，1H)，7.50(m，5H)，4.92(s，1H)，3.78(表現(xiàn)為br s，4H)，3.08(表現(xiàn)為br s，2H)，2.81(表現(xiàn)為br s，2H)。RT＝0.32分鐘(條件I)；＞98％。LC/MS針對[M+H]+C12H16NO3的分析計算值為222.11；觀測值為222.20。HRMS針對[M+H]+C12H16NO3的分析計算值為222.1130；觀測值為222.1121。

將對甲苯磺酰氯(8.65g，45.4mmol)的CH2Cl2(200mL)溶液滴加到冷卻的(-5℃)(S)-2-羥基-2-苯基乙酸芐酯(10.0g，41.3mmol)、三乙胺(5.75mL，41.3mmol)和4-二甲基氨基吡啶(0.504g，4.13mmol)的CH2Cl2(200mL)溶液中，同時維持溫度在-5℃和0℃之間。將反應混合物在0℃攪拌9小時，然后在冰箱(-25℃)中貯存14小時。使其解凍至環(huán)境溫度，然后用水(200mL)、1NHCl(100mL)和鹽水(100mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，并真空濃縮，得到2-苯基-2-(對甲苯磺酰氧基)乙酸芐酯，其為粘稠油狀物，所述油狀物在靜置時固化(16.5g)。未檢驗產(chǎn)物的手性完整性，產(chǎn)物不經(jīng)進一步純化就用于下一步。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5，500MHz)δ7.78(d，J＝8.6，2H)，7.43-7.29(m，10H)，7.20(m，2H)，6.12(s，1H)，5.16(d，J＝12.5，1H)，5.10(d，J＝12.5，1H)，2.39(s，3H)。RT＝3.00(條件III)；同質性指數(shù)＞90％。LC/MS針對[M+H]+C22H20NaO5S的分析計算值為419.09；觀測值為419.04。
將2-苯基-2-(對甲苯磺酰氧基)乙酸芐酯(6.0g，15.1mmol)、1-甲基哌嗪(3.36mL，30.3mmol)和N，N-二異丙基乙胺(13.2mL，75.8mmol)的THF(75mL)溶液在65℃加熱7小時。將反應混合物冷卻至環(huán)境溫度，然后真空除去揮發(fā)性組分。將殘余物在乙酸乙酯和水之間分配，有機層用水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，并真空濃縮。得到的粗物質經(jīng)快速色譜(硅膠，乙酸乙酯)純化，得到2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基乙酸芐酯，其為橙色-棕色粘稠油狀物(4.56g)。手性HPLC分析(Chiralcel OD-H)顯示樣品為對映異構體的混合物(比例為38.2比58.7)。對映異構體的分離如下進行將產(chǎn)物溶于120mL乙醇/庚烷(1∶1)中，然后注射(5mL/注射)在手性HPLC柱(Chiracel OJ，5cmID×50cm L，20μm)上，用85∶15庚烷/乙醇以75mL/min洗脫，在220nm監(jiān)測。對映異構體1(1.474g)和對映異構體2(2.2149g)以粘稠油狀物的形式回收。1HNMR(CDCl3，δ＝7.26，500MHz)7.44-7.40(m，2H)，7.33-7.24(m，6H)，7.21-7.16(m，2H)，5.13(d，J＝12.5，1H)，5.08(d，J＝12.5，1H)，4.02(s，1H)，2.65-2.38(表現(xiàn)為br s，8H)，2.25(s，3H)。RT＝2.10(條件III)；同質性指數(shù)＞98％。LC/MS針對[M+H]+C20H25N2O2的分析計算值為325.19；觀測值為325.20。
將2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基乙酸芐酯的任一對映異構體(1.0g，3.1mmol)的甲醇(10mL)溶液加到10％Pd/C(120mg)于甲醇(5.0mL)中的混懸液中。在小心的監(jiān)測下將反應混合物暴露于氫氣氣囊且保持＜50分鐘。反應結束后，催化劑立即通過硅藻土(

)過濾，真空濃縮濾液，得到混雜有苯基乙酸的Cap-7，其為褐色泡沫(867.6mg；質量超過理論收率)。產(chǎn)物不經(jīng)進一步純化就用于下一步。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5，500MHz)δ7.44-7.37(m，2H)，7.37-7.24(m，3H)，3.92(s，1H)，2.63-2.48(表現(xiàn)為bs，2H)，2.48-2.32(m，6H)，2.19(s，3H)。RT＝0.31(條件II)；同質性指數(shù)＞90％。LC/MS針對[M+H]+C13H19N2O2的分析計算值為235.14；觀測值為235.15。HRMS針對[M+H]+C13H19N2O2的分析計算值為235.1447；觀測值為235.1440。
如下所述，Cap-8和Cap-9的合成根據(jù)Cap-7的合成通過使用用于SN2取代步驟(即針對Cap-8的4-羥基哌啶和針對Cap-9的(S)-3-氟吡咯烷)的適當?shù)陌泛陀糜诜蛛x各立體異構中間體的經(jīng)修改的條件來進行。

中間體2-(4-羥基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸芐酯的對映異構體分離通過使用以下條件來進行將所述化合物(500mg)溶于乙醇/庚烷(5mL/45mL)中。將得到的溶液注射(5mL/注射)在手性HPLC柱(Chiracel OJ，2cm ID×25cm L，10μm)上，用80∶20庚烷/乙醇以10mL/min洗脫，在220nm監(jiān)測，得到186.3mg對映異構體1和209.1mg對映異構體2，其為淡黃色粘稠油狀物。這些芐基酯按照制備Cap-7的方法來氫解，得到Cap-8。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5，500MHz)7.40(d，J＝7，2H)，7.28-7.20(m，3H)，3.78(s 1H)，3.46(m，1H)，2.93(m，1H)，2.62(m，1H)，2.20(m，2H)，1.70(m，2H)，1.42(m，2H)。RT＝0.28(條件II)；同質性指數(shù)＞98％。LC/MS針對[M+H]+C13H18NO3的分析計算值為236.13；觀測值為236.07。HRMS針對[M+H]+C13H18NO3的分析計算值為236.1287；觀測值為236.1283。

中間體2-((S)-3-氟吡咯烷-1-基)-2-苯基乙酸芐酯的非對映異構體分離通過使用以下條件來進行將所述酯(220mg)在手性HPLC柱(Chiracel OJ-H，0.46cm ID×25cm L，5μm)(用含有0.1％TFA的95％CO2/5％甲醇以10巴壓力以70mL/min流速在35℃洗脫)上分離。將各立體異構體的HPLC洗脫液濃縮，將殘余物溶于CH2Cl2(20mL)中，然后用水性介質(10mL水+1mL飽和NaHCO3溶液)洗滌。對有機相進行干燥(MgSO4)，過濾，并真空濃縮，得到92.5mg級份1和59.6mg級份2。這些芐基酯按照制備Cap-7的方法來氫解，從而制備Cap-9a和Cap-9b。Cap-9a(非對映異構體1；所述樣品為在反相HPLC(使用H2O/甲醇/TFA溶劑)上純化得到的TFA鹽)1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5，400MHz)7.55-7.48(m，5H)，5.38(雙多重峰，J＝53.7，1H)，5.09(br s，1H)，3.84-2.82(br m，4H)，2.31-2.09(m，2H)。RT＝0.42(條件I)；同質性指數(shù)＞95％。LC/MS針對[M+H]+C12H15FNO2的分析計算值為224.11；觀測值為224.14。Cap-9b(非對映異構體2)1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5，400MHz)7.43-7.21(m，5H)，5.19(雙多重峰，J＝55.9，1H)，3.97(s，1H)，2.95-2.43(m，4H)，2.19-1.78(m，2H)。RT＝0.44(條件I)。LC/MS針對[M+H]+C12H15FNO2的分析計算值為224.11；觀測值為224.14。

向D-脯氨酸(2.0g，17mmol)和甲醛(2.0mL濃度為37wt％的H2O溶液)于甲醇(15mL)中的溶液中加入10％Pd/C(500mg)于甲醇(5mL)中的混懸液。將混合物在氫氣氣囊下攪拌23小時。反應混合物通過硅藻土(

)過濾，然后真空濃縮，得到Cap-10，其為灰白色固體(2.15g)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5，500MHz)3.42(m，1H)，3.37(dd，J＝9.4，6.1，1H)，2.85-2.78(m，1H)，2.66(s，3H)，2.21-2.13(m，1H)，1.93-1.84(m，2H)，1.75-1.66(m，1H)。RT＝0.28(條件II)；同質性指數(shù)＞98％。LC/MS針對[M+H]+C6H12NO2的分析計算值為130.09；觀測值為129.96。

將(2S，4R)-4-氟吡咯烷-2-甲酸(0.50g，3.8mmol)、甲醛(0.5mL濃度為37wt％的H2O溶液)、12N HCl(0.25mL)和10％Pd/C(50mg)于甲醇(20mL)中的混合物在氫氣氣囊下攪拌19小時。反應混合物通過硅藻土(

)過濾，將濾液真空濃縮。使殘余物在異丙醇中重結晶，得到Cap-11的HCl鹽，其為白色固體(337.7mg)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5，500MHz)5.39(d m，J＝53.7，1H)，4.30(m，1H)，3.90(ddd，J＝31.5，13.5，4.5，1H)，3.33(dd，J＝25.6，13.4，1H)，2.85(s，3H)，2.60-2.51(m，1H)，2.39-2.26(m，1H)。RT＝0.28(條件II)；同質性指數(shù)＞98％。LC/MS針對[M+H]+C6H11FNO2的分析計算值為148.08；觀測值為148.06。

將L-丙氨酸(2.0g，22.5mmol)溶于10％碳酸鈉水溶液(50mL)中，然后向其中加入氯甲酸甲酯(4.0mL)的THF(50mL)溶液。將反應混合物在環(huán)境條件攪拌4.5小時，然后真空濃縮。將得到的白色固體溶于水中，然后用1N HCl酸化至pH為約2-3。得到的溶液用乙酸乙酯(3×100mL)萃取，對合并的有機相進行干燥(Na2SO4)，過濾，并真空濃縮，得到無色油狀物(2.58g)。500mg該物質經(jīng)反相HPLC(H2O/甲醇/TFA)純化，得到150mg Cap-12，其為無色油狀物。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5，500MHz)7.44(d，J＝7.3，0.8H)，7.10(br s，0.2H)，3.97(m，1H)，3.53(s，3H)，1.25(d，J＝7.3，3H)。

將L-丙氨酸(2.5g，28mmol)、甲醛(8.4g，37wt％)、1N HCl(30mL)和10％Pd/C(500mg)于甲醇(30mL)中的混合物在氫氣氣氛(50psi)下攪拌5小時。反應混合物通過硅藻土(

)過濾，然后將濾液真空濃縮，得到Cap-13的HCl鹽，其為油狀物，所述油狀物在真空靜置時固化(4.4g；質量超過理論收率)。產(chǎn)物不經(jīng)進一步純化就使用。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5，500MHz)δ12.1(br s，1H)，4.06(q，J＝7.4，1H)，2.76(s，6H)，1.46(d，J＝7.3，3H).。

步驟1將(R)-(-)-D-苯基甘氨酸叔丁酯(3.00g，12.3mmol)、NaBH3CN(0.773g，12.3mmol)、KOH(0.690g，12.3mmol)和乙酸(0.352mL，6.15mmol)的混合物在甲醇中在0℃攪拌。歷時5分鐘向該混合物中滴加戊二醛(2.23mL，12.3mmol)。對反應混合物進行攪拌，同時使其溫熱至環(huán)境溫度，然后在相同溫度繼續(xù)攪拌16小時。隨后除去溶劑，殘余物用10％NaOH水溶液乙酸乙酯分配。分離有機相，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮至干，得到澄清油狀物。該物質經(jīng)反相制備性HPLC(Primesphere C-18，30×100mm；CH3CN-H2O-0.1％TFA)純化，得到中間體酯(2.70g，56％)，其為澄清油狀物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.53-7.44(m，3H)，7.40-7.37(m，2H)，3.87(d，J＝10.9Hz，1H)，3.59(d，J＝10.9Hz，1H)，2.99(t，J＝11.2Hz，1H)，2.59(t，J＝11.4Hz，1H)，2.07-2.02(m，2H)，1.82(d，J＝1.82Hz，3H)，1.40(s，9H)。LC/MS針對C17H25NO2的分析計算值為275；觀測值為276(M+H)+。
步驟2向攪拌的中間體酯(1.12g，2.88mmol)于二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入TFA(3mL)。將反應混合物在環(huán)境溫度攪拌4小時，然后將其濃縮至干，得到淡黃色油狀物。油狀物使用反相制備性HPLC(Primesphere C-18，30×100mm；CH3CN-H2O-0.1％TFA)來純化。合并適當?shù)募壏?，然后真空濃縮至干。然后將殘余物溶于最小量的甲醇中，加載于MCX LP萃取柱(2×6g)上。柱用甲醇(40mL)沖洗，然后期望的化合物用2M氨/甲醇(50mL)洗脫。合并含有產(chǎn)物的級份，然后濃縮，將殘余物吸收在水中。將此溶液凍干，得到標題化合物(0.492g，78％)，其為淡黃色固體。1H NMR(DMSO-d6)δ7.50(s，5H)，5.13(s，1H)，3.09(br s，2H)，2.92-2.89(m，2H)，1.74(m，4H)，1.48(br s，2H)。LC/MS針對C13H17NO2的分析計算值為219；觀測值為220(M+H)+。

步驟12-溴-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙基酯 向α-溴苯基乙酸(10.75g，0.050mol)、(S)-(-)-1-苯基乙醇(7.94g，0.065mol)和DMAP(0.61g，5.0mmol)于無水二氯甲烷(100mL)中的混合物中一次性加入固體EDCI(12.46g，0.065mol)。將得到的溶液在室溫在氬氣下攪拌18小時，然后其用乙酸乙酯稀釋，洗滌(H2O×2和鹽水)，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮，得到淺黃色油狀物。對該油狀物進行快速色譜(SiO2/己烷-乙酸乙酯，4∶1)，得到標題化合物(11.64g，73％)，其為白色固體。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.53-7.17(m，10H)，5.95(q，J＝6.6Hz，0.5H)，5.94(q，J＝6.6Hz，0.5H)，5.41(s，0.5H)，5.39(s，0.5H)，1.58(d，J＝6.6Hz，1.5H)，1.51(d，J＝6.6Hz，1.5H)。
步驟2(R)-2-(4-羥基-4-甲基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙基酯 向2-溴-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙基酯(0.464g，1.45mmol)于THF(8mL)中的溶液中加入三乙胺(0.61mL，4.35mmol)，接著加入四丁基碘化銨(0.215g，0.58mmol)。將反應混合物在室溫攪拌5分鐘，然后加入4-甲基-4-羥基哌啶(0.251g，2.18mmol)于THF(2mL)中的溶液。將混合物在室溫攪拌1小時，然后將其在55-60℃(油浴溫度)加熱4小時。然后冷卻的反應混合物用乙酸乙酯(30mL)稀釋，洗滌(H2O×2和鹽水))，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。殘余物經(jīng)硅膠色譜(0-60％乙酸乙酯/己烷)純化，首先得到標題化合物的(S，R)-異構體(0.306g，60％)，其為白色固體，然后得到相應的(S，S)-異構體(0.120g，23％)，其也為白色固體。(S，R)-異構體1H NMR(CD3OD)δ7.51-7.45(m，2H)，7.41-7.25(m，8H)，5.85(q，J＝6.6Hz，1H)，4.05(s，1H)，2.56-2.45(m，2H)，2.41-2.29(m，2H)，1.71-1.49(m，4H)，1.38(d，J＝6.6Hz，3H)，1.18(s，3H)。LCMS針對C22H27NO3的分析計算值為353；觀測值為354(M+H)+。(S，S)-異構體1H NMR(CD3OD)δ7.41-7.30(m，5H)，7.20-7.14(m，3H)，7.06-7.00(m，2H)，5.85(q，J＝6.6Hz，1H)，4.06(s，1H)，2.70-2.60(m，1H)，2.51(dt，J＝6.6，3.3Hz，1H)，2.44-2.31(m，2H)，1.75-1.65(m，1H)，1.65-1.54(m，3H)，1.50(d，J＝6.8Hz，3H)，1.20(s，3H)。LCMS針對C22H27NO3的分析計算值為353；觀測值為354(M+H)+。
步驟3(R)-2-(4-羥基-4-甲基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸 向(R)-2-(4-羥基-4-甲基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙基酯(0.185g，0.52mmol)于二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入三氟乙酸(1mL)，然后將混合物在室溫攪拌2小時。隨后真空除去揮發(fā)物，殘余物經(jīng)反相制備性HPLC(Primesphere C-18，20×100mm；CH3CN-H2O-0.1％TFA)純化，得到標題化合物(TFA鹽)，其為淡藍色固體(0,128g，98％)。LCMS針對C14H19NO3的分析計算值為249；觀測值為250(M+H)+。

步驟12-(2-氟苯基)乙酸(S)-1-苯基乙基酯 將2-氟苯基乙酸(5.45g，35.4mmol)、(S)-1-苯基乙醇(5.62g，46.0mmol)、EDCI(8.82g，46.0mmol)和DMAP(0.561g，4.60mmol)于CH2Cl2(100mL)中的混合物在室溫攪拌12小時。然后濃縮溶劑，殘余物用H2O-乙酸乙酯分配。分離各相，水層用乙酸乙酯(2×)反萃取。對合并的有機相進行洗滌(H2O和鹽水)，干燥(Na2SO4)，過濾，并真空濃縮。殘余物經(jīng)硅膠色譜(Biotage/0-20％乙酸乙酯/己烷)純化，得到標題化合物，其為無色油狀物(8.38g，92％)。1HNMR(400MHz，CD3OD)δ7.32-7.23(m，7H)，7.10-7.04(m，2)，5.85(q，J＝6.5Hz，1H)，3.71(s，2H)，1.48(d，J＝6.5Hz，3H)。
步驟2(R)-2-(2-氟苯基)-2-(哌啶-1-基)乙酸(S)-1-苯基乙基酯 在0℃向2-(2-氟苯基)乙酸(S)-1-苯基乙基酯(5.00g，19.4mmol)于THF(1200mL)中的溶液中加入DBU(6.19g，40.7mmol)，然后將溶液溫熱至室溫，同時攪拌30分鐘。然后將溶液冷卻至-78℃，加入CBr4(13.5g，40.7mmol)于THF(100mL)中的溶液，使混合物溫熱至-10℃，在該溫度攪拌2小時。反應混合物用飽和NH4Cl水溶液淬滅，然后分離各層。水層用乙酸乙酯(2×)反萃取，對合并的有機相進行洗滌(H2O和鹽水)，干燥(Na2SO4)，過濾，并真空濃縮。向殘余物中加入哌啶(5.73mL，58.1mmol)，然后將溶液在室溫攪拌24小時。然后將揮發(fā)物真空濃縮，殘余物經(jīng)硅膠色譜(Biotage/0-30％乙醚/己烷)純化，得到非對映異構體的純混合物(通過1H NMR確定比例為2∶1)，其為黃色油狀物(2.07g，31％)，以及得到未反應的起始物質(2.53g，51％)。對非對映異構體混合物進行進一步色譜純化(Biotage/0-10％乙醚/甲苯)，得到標題化合物，其為無色油狀物(0.737g，11％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.52(ddd，J＝9.4，7.6，1.8Hz，1H)，7.33-7.40(m，1)，7.23-7.23(m，4H)，7.02-7.23(m，4H)，5.86(q，J＝6.6Hz，1H)，4.45(s，1H)，2.39-2.45(m，4H)，1.52-1.58(m，4H)，1.40-1.42(m，1H)，1.38(d，J＝6.6Hz，3H)。LCMS針對C21H24FNO2的分析計算值為341；觀測值為342(M+H)+。
步驟3(R)-2-(2-氟苯基)-2-(哌啶-1-基)乙酸 將(R)-2-(2-氟苯基)-2-(哌啶-1-基)乙酸(S)-1-苯基乙基酯(0.737g，2.16mmol)和20％Pd(OH)2/C(0.070g)于乙醇(30mL)中的混合物在室溫在大氣壓(H2氣囊)氫化2小時。然后溶液用氬氣吹洗，通過硅藻土(

)過濾，然后真空濃縮。這得到標題化合物，其為無色固體(0.503g，98％)。1HNMR(400MHz，CD3OD)δ7.65(ddd，J＝9.1，7.6，1.5Hz，1H)，7.47-7.53(m，1H)，7.21-7.30(m，2H)，3.07-3.13(m，4H)，1.84(br s，4H)，1.62(br s，2H)。LCMS針對C13H16FNO2的分析計算值為237；觀測值為238(M+H)+。

步驟1(R)-2-(4-羥基-4-苯基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙基酯 向2-溴-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙基酯(1.50g，4.70mmol)于THF(25mL)中的溶液中先后加入三乙胺(1.31mL，9.42mmol)和四丁基碘化銨(0.347g，0.94mmol)。將反應混合物在室溫攪拌5分鐘，然后加入4-苯基-4-羥基哌啶(1.00g，5.64mmol)于THF(5mL)中的溶液。將混合物攪拌16小時，然后其用乙酸乙酯(100mL)稀釋，洗滌(H2O×2和鹽水)，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。殘余物在硅膠柱(0-60％乙酸乙酯/己烷)上純化，得到非對映異構體的約2∶1混合物(通過1H NMR確定)。這些異構體的分離使用超臨界流體色譜(Chiralcel OJ-H，30×250mm；20％乙醇/CO2，35℃)來進行，首先得到標題化合物的(R)-異構體(0.534g，27％)，其為黃色油狀物，然后得到相應的(S)-異構體(0.271g，14％)，其也是黃色油狀物。(S，R)-異構體1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.55-7.47(m，4H)，7.44-7.25(m，10H)，7.25-7.17(m，1H)，5.88(q，J＝6.6Hz，1H)，4.12(s，1H)，2.82-2.72(m，1H)，2.64(dt，J＝11.1，2.5Hz，1H)，2.58-2.52(m，1H)，2.40(dt，J＝11.1，2.5Hz，1H)，2.20(dt，J＝12.1，4.6Hz，1H)，2.10(dt，J＝12.1，4.6Hz，1H)，1.72-1.57(m，2H)，1.53(d，J＝6.5Hz，3H)。LCMS針對C27H29NO3的分析計算值為415；觀測值為416(M+H)+。(S，S)-異構體1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.55-7.48(m，2H)，7.45-7.39(m，2H)，7.38-7.30(m，5H)，7.25-7.13(m，4H)，7.08-7.00(m，2H)，5.88(q，J＝6.6Hz，1H)，4.12(s，1H)，2.95-2.85(m，1H)，2.68(dt，J＝11.1，2.5Hz，1H)，2.57-2.52(m，1H)，2.42(dt，J＝11.1，2.5Hz，1H)，2.25(dt，J＝12.1，4.6Hz，1H)，2.12(dt，J＝12.1，4.6Hz，1H)，1.73(dd，J＝13.6，3.0Hz，1H)，1.64(dd，J＝13.6，3.0Hz，1H)，1.40(d，J＝6.6Hz，3H)。LCMS針對C27H29NO3的分析計算值為415；觀測值為416(M+H)+。
以下酯以類似的方式制備

用于確定保留時間的手性SFC條件 條件I 柱Chiralpak AD-H柱，4.62×50mm，5μm 溶劑含有0.1％DEA的90％CO2/10％甲醇 溫度35℃ 壓力150巴 流速2.0mL/min. UV在220nm監(jiān)測 注射1.0mg/3mL甲醇 條件II 柱Chiralcel OD-H柱，4.62×50mm，5μm 溶劑含有0.1％DEA的90％CO2/10％甲醇 溫度35℃ 壓力150巴 流速2.0mL/min. UV在220nm監(jiān)測 注射1.0mg/mL甲醇 Cap-17步驟2(R)-2-(4-羥基-4-苯基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸 向(R)-2-(4-羥基-4-苯基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙基酯(0.350g，0.84mmol)于二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入三氟乙酸(1mL)，然后將混合物在室溫攪拌2小時。隨后真空除去揮發(fā)物，殘余物經(jīng)反相制備性HPLC(Primesphere C-18，20×100mm；CH3CN-H2O-0.1％TFA)純化，得到標題化合物(TFA鹽)，其為白色固體(0.230g，88％)。LCMS針對C19H21NO3的分析計算值為311.15；觀測值為312(M+H)+。
以下羧酸以類似的方式以光學純的形式制備
用于確定保留時間的LCMS條件 條件I 柱Phenomenex-Luna 4.6×50mm S10 開始％B＝0 最終％B＝100 梯度時間＝4分鐘 流速＝4mL/min 波長＝220 溶劑A＝10％甲醇-90％H2O-0.1％TFA 溶劑B＝90％甲醇-10％H2O-0.1％TFA 條件II 柱Waters-Sunfire 4.6×50mm S5 開始％B＝0 最終％B＝100 梯度時間＝2分鐘 流速＝4mL/min 波長＝220 溶劑A＝10％甲醇-90％H2O-0.1％TFA 溶劑B＝90％甲醇-10％H2O-0.1％TFA 條件III 柱Phenomenex 10μ3.0×50mm 開始％B＝0 最終％B＝100 梯度時間＝2分鐘 流速＝4mL/min 波長＝220 溶劑A＝10％甲醇-90％H2O-0.1％TFA 溶劑B＝90％甲醇-10％H2O-0.1％TFA
步驟1(R，S)-2-(吡啶-4-基)-2-溴乙酸乙酯 在0℃在氬氣下向吡啶-4-基乙酸乙酯(1.00g，6.05mmol)于無水THF(150mL)中的溶液中加入DBU(0.99mL，6.66mmol)。歷時30分鐘將反應混合物溫熱至室溫，然后將其冷卻至-78℃。向該混合物中加入CBr4(2.21g，6.66mmol)，然后在-78℃繼續(xù)攪拌2小時。反應混合物然后用飽和NH4Cl水溶液淬滅，分離各相。對有機相進行洗滌(鹽水)，干燥(Na2SO4)，過濾，并真空濃縮。得到的黃色油狀物立即經(jīng)快速色譜(SiO2/己烷-乙酸乙酯，1∶1)純化，得到標題化合物(1.40g，95％)，其為稍微不穩(wěn)定的黃色油狀物。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.62(dd，J＝4.6，1.8Hz，2H)，7.45(dd，J＝4.6，1.8Hz，2H)，5.24(s，1H)，4.21-4.29(m，2H)，1.28(t，J＝7.1Hz，3H)。LCMS針對C9H10BrNO2的分析計算值為242和244；觀測值為243和245(M+H)+。
步驟2(R，S)-2-(吡啶-4-基)-2-(N，N-二甲基氨基)乙酸乙酯 在室溫向(R，S)-2-(吡啶-4-基)-2-溴乙酸乙酯(1.40g，8.48mmol)于DMF(10mL)中的溶液中加入二甲基胺(濃度為2M的THF溶液，8.5mL，17.0mmol)。反應結束(通過薄層色譜判斷)后，真空除去揮發(fā)物，殘余物經(jīng)快速色譜(Biotage，40+M SiO2柱；50％-100％乙酸乙酯/己烷)純化，得到標題化合物(0.539g，31％)，其為淡黃色油狀物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.58(d，J＝6.0Hz，2H)，7.36(d，J＝6.0Hz，2H)，4.17(m，2H)，3.92(s，1H)，2.27(s，6H)，1.22(t，J＝7.0Hz)。LCMS針對C11H16N2O2的分析計算值為208；觀測值為209(M+H)+。
步驟3(R，S)-2-(吡啶-4-基)-2-(N，N-二甲基氨基)乙酸 在室溫向(R，S)-2-(吡啶-4-基)-2-(N，N-二甲基氨基)乙酸乙酯(0.200g，0.960mmol)于THF-甲醇-H2O(1∶1∶1，6mL)的混合物中的溶液中加入粉末狀LiOH(0.120g，4.99mmol)。將溶液攪拌3小時，然后使用1N HCl將其酸化至pH 6。水相用乙酸乙酯洗滌，然后將其凍干，得到標題化合物的二鹽酸鹽，其為黃色固體(含有LiCl)。產(chǎn)物按原樣用于隨后的步驟。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.49(d，J＝5.7Hz，2H)，7.34(d，J＝5.7Hz，2H)，3.56(s，1H)，2.21(s，6H)。
以下實施例使用上文所述的方法以類似的方式制備



步驟1(R，S)-2-(喹啉-3-基)-2-(N，N-二甲基氨基)-乙酸乙酯 N，N-二甲基氨基乙酸乙酯(0.462g，3.54mmol)、K3PO4(1.90g，8.95mmol)、Pd(t-Bu3P)2(二(三叔丁基膦)鈀)(0.090g，0.176mmol)和甲苯(10mL)的混合物用氬氣鼓泡氣流脫氣15分鐘。然后將反應混合物在100℃加熱12小時，之后將其冷卻至室溫，倒入H2O中。混合物用乙酸乙酯(2×)萃取，對合并的有機相進行洗滌(H2O和鹽水)，干燥(Na2SO4)，過濾，并真空濃縮。殘余物首先經(jīng)反相制備性HPLC(Primesphere C-18，30×100mm；CH3CN-H2O-5mMNH4OAc)純化，然后經(jīng)快速色譜(SiO2/己烷-乙酸乙酯，1∶1)純化，得到標題化合物(0.128g，17％)，其為橙色油狀物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.90(d，J＝2.0Hz，1H)，8.32(d，J＝2.0Hz，1H)，8.03-8.01(m，2H)，7.77(ddd，J＝8.3，6.8，1.5Hz，1H)，7.62(ddd，J＝8.3，6.8，1.5Hz，1H)，4.35(s，1H)，4.13(m，2H)，2.22(s，6H)，1.15(t，J＝7.0Hz，3H)。LCMS針對C15H18N2O2的分析計算值為258；觀測值為259(M+H)+。
步驟2(R，S)-2-(喹啉-3-基)-2-(N，N-二甲基氨基)乙酸 將(R，S)-2-(喹啉-3-基)-2-(N，N-二甲基氨基)乙酸乙酯(0.122g，0.472mmol)和6M HCl(3mL)的混合物在100℃加熱12小時。真空除去溶劑，得到標題化合物的二鹽酸鹽(0.169g，＞100％)，其為淡黃色泡沫。未純化的物質不經(jīng)進一步純化就用于隨后的步驟。LCMS針對C13H14N2O2的分析計算值為230；觀測值為231(M+H)+。


步驟1(R)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸(S)-1-苯基乙基酯和(S)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸(S)-1-苯基乙基酯 向(RS)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸(2.60g，13.19mmol)、DMAP(0.209g，1.71mmol)和(S)-1-苯基乙醇(2.09g，17.15mmol)于CH2Cl2(40mL)中的混合物中加入EDCI(3.29g，17.15mmol)，然后將混合物在室溫攪拌12小時。然后真空除去溶劑，殘余物用乙酸乙酯-H2O分配。分離各層，水層用乙酸乙酯(2×)反萃取，對合并的有機相進行洗滌(H2O和鹽水)，干燥(Na2SO4)，過濾，并真空濃縮。殘余物經(jīng)硅膠色譜(Biotage/0-50％乙醚/己烷)純化。得到的純非對映異構體混合物然后經(jīng)反相制備性HPLC(Primesphere C-18，30×100mm；CH3CN-H2O-0.1％TFA)分離，首先得到(R)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸(S)-1-苯基乙基酯(0.501g，13％)，然后得到(S)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)-乙酸(S)-1-苯基乙基酯(0.727g。18％)，都是其TFA鹽。(S，R)-異構體1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.65-7.70(m，1H)，7.55-7.60(ddd，J＝9.4，8.1，1.5Hz，1H)，7.36-7.41(m，2H)，7.28-7.34(m，5H)，6.04(q，J＝6.5Hz，1H)，5.60(s，1H)，2.84(s，6H)，1.43(d，J＝6.5Hz，3H)。LCMS針對C18H20FNO2的分析計算值為301；觀測值為302(M+H)+。(S，S)-異構體1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.58-7.63(m，1H)，7.18-7.31(m，6H)，7.00(dd，J＝8.5，1.5Hz，2H)，6.02(q，J＝6.5Hz，1H)，5.60(s，1H)，2.88(s，6H)，1.54(d，J＝6.5Hz，3H)。LCMS針對C18H20FNO2的分析計算值為301；觀測值為302(M+H)+。
步驟2(R)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸 將(R)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸(S)-1-苯基乙基酯TFA鹽(1.25g，3.01mmol)和20％Pd(OH)2/C(0.125g)于乙醇(30mL)中的混合物在室溫在大氣壓(H2氣囊)氫化4小時。然后溶液用氬氣吹洗，通過硅藻土(

)過濾，真空濃縮。這得到標題化合物，其為無色固體(0.503g，98％)。1HNMR(400MHz，CD3OD)δ7.53-7.63(m，2H)，7.33-7.38(m，2H)，5.36(s，1H)，2.86(s，6H)。LCMS針對C10H12FNO2的分析計算值為197；觀測值為198(M+H)+。
S-異構體可按照類似的方式由(S)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸(S)-1-苯基乙基酯TFA鹽得到。

將(R)-(2-氯苯基)甘氨酸(0.300g，1.62mmol)、甲醛(35％水溶液，0.80mL，3.23mmol)和20％Pd(OH)2/C(0.050g)的混合物在室溫在大氣壓(H2氣囊)氫化4小時。然后溶液用氬氣吹洗，通過硅藻土(

)過濾并真空濃縮。殘余物經(jīng)反相制備性HPLC(Primesphere C-18，30×100mm；CH3CN-H2O-0.1％TFA)純化，得到標題化合物(R)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氯苯基)乙酸的TFA鹽，其為無色油狀物(0.290g，55％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.59-7.65(m，2H)，7.45-7.53(m，2H)，5.40(s，1H)，2.87(s，6H)。LCMS針對C10H12ClNO2的分析計算值為213；觀測值為214(M+H)+。

向冰冷的(R)-(2-氯苯基)甘氨酸(1.00g，5.38mmol)和NaOH(0.862g，21.6mmol)于H2O(5.5mL)中的溶液中滴加氯甲酸甲酯(1.00mL，13.5mmol)。將混合物在0℃攪拌1小時，然后通過加入濃HCl(2.5mL)將其酸化?；旌衔镉靡宜嵋阴?2×)萃取，對合并的有機相進行洗滌(H2O和鹽水)，干燥(Na2SO4)，過濾，并真空濃縮，得到標題化合物(R)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-(2-氯苯基)乙酸，其為黃色-橙色泡沫(1.31g，96％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.39-7.43(m，2H)，7.29-7.31(m，2H)，5.69(s，1H)，3.65(s，3H)。LCMS針對C10H10ClNO4的分析計算值為243；觀測值為244(M+H)+。

向2-(2-(氯甲基)苯基)乙酸(2.00g，10.8mmol)于THF(20mL)中的混懸液中加入嗎啉(1.89g，21.7mmol)，然后將溶液在室溫攪拌3小時。然后反應混合物用乙酸乙酯稀釋，然后用H2O(2×)萃取。對水相進行凍干，殘余物經(jīng)硅膠色譜(Biotage/0-10％甲醇/CH2Cl2)純化，得到標題化合物2-(2-(嗎啉代甲基)苯基)乙酸，其為無色固體(2.22g，87％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.37-7.44(m，3H)，7.29-7.33(m，1H)，4.24(s，2H)，3.83(br s，4H)，3.68(s，2H)，3.14(br s，4H)。LCMS針對C13H17NO3的分析計算值為235；觀測值為236(M+H)+。
以下實施例使用就Cap-41描述的方法類似地進行制備


將HMDS(1.85mL，8.77mmol)加到(R)-2-氨基-2-苯基乙酸對甲苯磺酸鹽(2.83g，8.77mmol)于CH2Cl2(10mL)中的混懸液中，然后將混合物在室溫攪拌30分鐘。一次性加入異氰酸甲酯(0.5g，8.77mmol)，然后繼續(xù)攪拌30分鐘。反應通過加入H2O(5mL)來淬滅，對得到的沉淀物進行過濾，用H2O和正己烷洗滌，并真空干燥。回收(R)-2-(3-甲基脲基)-2-苯基乙酸(1.5g；82％)，其為白色固體，所述固體不經(jīng)進一步純化就使用。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 2.54(d，J＝4.88Hz，3H)5.17(d，J＝7.93Hz，1H)5.95(q，J＝4.48Hz，1H)6.66(d，J＝7.93Hz，1H)7.26-7.38(m，5H)12.67(s，1H)。LCMS針對C10H12N2O3的分析計算值為208.08；觀測值為209.121(M+H)+；HPLCPhenomenex C-183.0×46mm，歷時2分鐘從0至100％B，保持時間為1分鐘，A＝90％水-10％甲醇-0.1％TFA，B＝10％水-90％甲醇-0.1％TFA，RT＝1.38分鐘，同質性指數(shù)為90％。

期望的產(chǎn)物按照就Cap-45a描述的方法來制備。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 0.96(t，J＝7.17Hz，3H)2.94-3.05(m，2H)5.17(d，J＝7.93Hz，1H)6.05(t，J＝5.19Hz，1H)6.60(d，J＝7.63Hz，1H)7.26-7.38(m，5H)12.68(s，1H)。LCMS針對C11H14N2O3的分析計算值為222.10；觀測值為223.15(M+H)+。HPLC XTERRA C-183.0×506mm，歷時2分鐘從0至100％B，保持時間為1分鐘，A＝90％水-10％甲醇-0.2％H3PO4，B＝10％水-90％甲醇-0.2％H3PO4，RT＝0.87分鐘，同質性指數(shù)為90％。


步驟1(R)-2-(3，3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸叔丁酯 歷時10分鐘向攪拌的(R)-2-氨基-2-苯基乙酸叔丁酯(1.0g，4.10mmol)和許尼希堿(Hunig’s base)(1.79mL，10.25mmol)于DMF(40mL)中的溶液中滴加二甲基氨甲酰氯(0.38mL，4.18mmol)。在室溫攪拌3小時后，將反應混合物減壓濃縮，將得到的殘余物溶于乙酸乙酯中。有機層用H2O、1N HCl水溶液和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并減壓濃縮。得到(R)-2-(3，3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸叔丁酯，其為白色固體(0.86g；75％)且不經(jīng)進一步純化就使用。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.33(s，9H)2.82(s，6H)5.17(d，J＝7.63Hz，1H)6.55(d，J＝7.32Hz，1H)7.24-7.41(m，5H)。LCMS針對C15H22N2O3的分析計算值為278.16；觀測值為279.23(M+H)+。HPLC Phenomenex LUNA C-184.6×50mm，歷時4分鐘從0至100％B，保持時間為1分鐘，A＝90％水-10％甲醇-0.1％TFA，B＝10％水-90％甲醇-0.1％TFA，RT＝2.26分鐘，同質性指數(shù)為97％。
步驟2(R)-2-(3，3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸 向攪拌的(R)-2-(3，3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸叔丁酯(0.86g，3.10mmol)于CH2Cl2(250mL)中的溶液中滴加TFA(15mL)，將得到的溶液在室溫攪拌3小時。然后用EtOAC∶己烷(5∶20)的混合物使期望的化合物從溶液中沉淀出來，濾出并減壓干燥。得到(R)-2-(3，3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸，其為白色固體(0.59g，86％)且不經(jīng)進一步純化就使用。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm2.82(s，6H)5.22(d，J＝7.32Hz，1H)6.58(d，J＝7.32Hz，1H)7.28(t，J＝7.17Hz，1H)7.33(t，J＝7.32Hz，2H)7.38-7.43(m，2H)12.65(s，1H)。LCMS針對C11H14N2O3的分析計算值為222.24；觀測值為223.21(M+H)+。HPLC XTERRAC-183.0×50mm，歷時2分鐘從0至100％B，保持時間為1分鐘，A＝90％水-10％甲醇-0.2％H3PO4，B＝10％水-90％甲醇-0.2％H3PO4，RT＝0.75分鐘，同質性指數(shù)為93％。


步驟1(R)-2-(3-環(huán)戊基脲基)-2-苯基乙酸叔丁酯 歷時10分鐘向攪拌的(R)-2-氨基-2-苯基乙酸鹽酸鹽(1.0g，4.10mmol)和許尼希堿(1.0mL，6.15mmol)于DMF(15mL)中的溶液中滴加異氰酸環(huán)戊基酯(0.46mL，4.10mmol)。在室溫攪拌3小時后，將反應混合物減壓濃縮，將得到的殘余物吸收在乙酸乙酯中。有機層用H2O和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并減壓濃縮。得到(R)-2-(3-環(huán)戊基脲基)-2-苯基乙酸叔丁酯，其為不透明油狀物(1.32g；100％)且不經(jīng)進一步純化就使用。1H NMR(500MHz，CD3Cl-D)δppm 1.50-1.57(m，2H)1.58-1.66(m，2H)1.87-1.97(m，2H)3.89-3.98(m，1H)5.37(s，1H)7.26-7.38(m，5H)。LCMS針對C18H26N2O3的分析計算值為318.19；觀測值為319.21(M+H)+。HPLC XTERRA C-183.0×50mm，歷時4分鐘從0至100％B，保持時間為1分鐘，A＝90％水-10％甲醇-0.1％TFA，B＝10％水-90％甲醇-0.1％TFA，RT＝2.82分鐘，同質性指數(shù)為96％。
步驟2(R)-2-(3-環(huán)戊基脲基)-2-苯基乙酸 向攪拌的(R)-2-(3-環(huán)戊基脲基)-2-苯基乙酸叔丁酯(1.31g，4.10mmol)于CH2Cl2(25mL)中的溶液中滴加TFA(4mL)和三乙基甲硅烷(1.64mL；10.3mmol)，然后將得到的溶液在室溫攪拌6小時。減壓除去揮發(fā)性組分，使粗產(chǎn)物在乙酸乙酯/戊烷中重結晶，得到(R)-2-(3-環(huán)戊基脲基)-2-苯基乙酸，其為白色固體(0.69g，64％)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.17-1.35(m，2H)1.42-1.52(m，2H)1.53-1.64(m，2H)1.67-1.80(m，2H)3.75-3.89(m，1H)5.17(d，J＝7.93Hz，1H)6.12(d，J＝7.32Hz，1H)6.48(d，J＝7.93Hz，1H)7.24-7.40(m，5H)12.73(s，1H)。LCMS針對C14H18N2O3的分析計算值為262.31；觀測值為263.15(M+H)+。HPLC XTERRA C-183.0×50mm，歷時2分鐘從0至100％B，保持時間為1分鐘，A＝90％水-10％甲醇-0.2％H3PO4，B＝10％水-90％甲醇-0.2％H3PO4，RT＝1.24分鐘，同質性指數(shù)為100％。


向攪拌的2-(芐基氨基)乙酸(2.0g，12.1mmol)于甲酸(91mL)中的溶液中加入甲醛(6.94mL，93.2mmol)。在70℃攪拌5小時后，將反應混合物減壓濃縮至20mL，白色固體沉淀出來。過濾后，收集母液，進一步減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物。經(jīng)反相制備性HPLC(Xterra 30×100mm，在220nm檢測，流速為35mL/min，歷時8分鐘從0至35％B，A＝90％水-10％甲醇-0.1％TFA，B＝10％水-90％甲醇-0.1％TFA)純化，得到TFA鹽形式的標題化合物2-(芐基(甲基)-氨基)乙酸(723mg，33％)，其為無色蠟狀物。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 2.75(s，3H)4.04(s，2H)4.34(s，2H)7.29-7.68(m，5H)。LCMS針對C10H13NO2的分析計算值為175.05；觀測值為180.20(M+H)+。

向攪拌的3-甲基-2-(甲基氨基)丁酸(0.50g，3.81mmol)于水(30mL)中的溶液中加入K2CO3(2.63g，19.1mmol)和芐基氯(1.32g，11.4mmol)。將反應混合物在環(huán)境溫度攪拌18小時。反應混合物用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，將水層減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物，其經(jīng)反相制備性HPLC(Xterra 30×100mm，在220nm檢測，流速為40mL/min，歷時6分鐘從20至80％B，A＝90％水-10％甲醇-0.1％TFA，B＝10％水-90％甲醇-0.1％TFA)純化，得到2-(芐基(甲基)氨基)-3-甲基丁酸TFA鹽(126mg，19％)，其為無色蠟狀物。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 0.98(d，3H)1.07(d，3H)2.33-2.48(m，1H)2.54-2.78(m，3H)3.69(s，1H)4.24(s，2H)7.29-7.65(m，5H)。LCMS針對C13H19NO2的分析計算值為221.14；觀測值為222.28(M+H)+。

將Na2CO3(1.83g，17.2mmol)加到L-纈氨酸(3.9g，33.29mmol)的NaOH(33mL濃度為1M的水溶液，33mmol)溶液中，得到的溶液用冰-水浴冷卻。歷時15分鐘滴加氯甲酸甲酯(2.8mL，36.1mmol)，移開冷卻浴，將反應混合物在環(huán)境溫度攪拌3.25小時。反應混合物用乙醚(50mL，3×)洗滌，水相用冰-水浴冷卻，用濃HCL酸化至pH范圍為1-2，然后用CH2Cl2(50mL，3×)萃取。對有機相進行干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)，得到Cap-51，其為白色固體(6g)。占優(yōu)勢的旋轉異構體的1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，500MHz)12.54(s，1H)，7.33(d，J＝8.6，1H)，3.84(dd，J＝8.4，6.0，1H)，3.54(s，3H)，2.03(m，1H)，0.87(m，6H)。HRMS針對[M+H]+C7H14NO4的分析計算值為為176.0923；觀測值為176.0922。

Cap-52按照就Cap-51的合成所述的操作從L-丙氨酸來合成。出于表征目的，一部分粗物質經(jīng)反相HPLC(H2O/甲醇/TFA)純化，得到Cap-52，其為無色粘稠油狀物。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，500MHz)12.49(br s，1H)，7.43(d，J＝7.3，0.88H)，7.09(表現(xiàn)為br s，0.12H)，3.97(m，1H)，3.53(s，3H)，1.25(d，J＝7.3，3H)。
Cap-53至Cap-64按照就Cap-51的合成所述的操作(如果有所改變則注明)從適當?shù)钠鹗荚蟻砗铣伞?br>



歷時5分鐘將氯甲酸甲酯(0.65mL，8.39mmol)滴加到冷卻的(冰-水)Na2CO3(0.449g，4.23mmol)、NaOH(8.2mL濃度為1M的H2O溶液，8.2mmol)和(S)-2-氨基-3-羥基-3-甲基丁酸(1.04g，7.81mmol)的混合物中。將反應混合物攪拌45分鐘，然后移開冷卻浴，再繼續(xù)攪拌3.75小時。反應混合物用CH2Cl2洗滌，水相用冰-水浴冷卻，用濃HCL酸化至pH范圍為1-2。真空除去揮發(fā)性組分，將殘余物吸收在MeOH/CH2Cl2的2∶1混合物(15mL)中，然后過濾，對濾液進行旋轉蒸發(fā)，得到Cap-65，其為白色半粘稠泡沫(1.236g)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)δ6.94(d，J＝8.5，0.9H)，6.53(br s，0.1H)，3.89(d，J＝8.8，1H)，2.94(s，3H)，1.15(s，3H)，1.13(s，3H)。
Cap-66和Cap-67通過使用就Cap-65的合成所述的操作從適當?shù)氖惺墼蟻碇苽洹?br>
1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)δ12.58(br s，1H)，7.07(d，J＝8.3，0.13H)，6.81(d，J＝8.8，0.67H)，4.10-4.02(m，1.15H)，3.91(dd，J＝9.1，3.5，0.85H)，3.56(s，3H)，1.09(d，J＝6.2，3H)。[注意僅記錄到NH的優(yōu)勢信號]。

1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)12.51(br s，1H)，7.25(d，J＝8.4，0.75H)，7.12(br d，J＝0.4，0.05H)，6.86(br s，0.08H)，3.95-3.85(m，2H)，3.54(s，3H)，1.08(d，J＝6.3，3H)。[注意僅記錄到NH的優(yōu)勢信號]。

將氯甲酸甲酯(0.38ml，4.9mmol)滴加到1N NaOH(水溶液)(9.0ml，9.0mmol)、1M NaHCO3(水溶液)(9.0ml，9.0mol)、L-天冬氨酸β-芐基酯(L-aspartic acid β-benzyl ester)(1.0g，4.5mmol)和二氧雜環(huán)己烷(9ml)的混合物中。將反應混合物在環(huán)境條件攪拌3小時，然后用乙酸乙酯(50ml，3×)洗滌。水層用12N HCl酸化至pH為約1-2，然后用乙酸乙酯(3×50ml)萃取。合并的有機層用鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾，并真空濃縮，得到Cap-68，其為淡黃色油狀物(1.37g；質量高于理論收率)，產(chǎn)物不經(jīng)進一步純化就使用。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，500MHz)δ12.88(br s，1H)，7.55(d，J＝8.5，1H)，7.40-7.32(m，5H)，5.13(d，J＝12.8，1H)，5.10(d，J＝12.9，1H)，4.42-4.38(m，1H)，3.55(s，3H)，2.87(dd，J＝16.2，5.5，1H)，2.71(dd，J＝16.2，8.3，1H)。LC(條件2)RT＝1.90分鐘。LC/MS針對[M+H]+C13H16NO6的分析計算值為282.10；觀測值為282.12。

將NaCNBH3(2.416g，36.5mmol)分批加到冷卻的(約15℃)丙氨酸(1.338g，15.0mmol)的水(17mL)/MeOH(10mL)溶液中。幾分鐘后，歷時4分鐘滴加乙醛(4.0mL，71.3mmol)，移開冷卻浴，將反應混合物在環(huán)境條件攪拌6小時。加入額外的乙醛(4.0mL)，然后將反應混合物攪拌2小時。將濃HCl緩慢加到反應混合物中，直到pH達到約1.5，將得到的混合物在40℃加熱1小時。真空除去大部分揮發(fā)性組分，殘余物用

50WX8-100離子交換樹脂純化(柱用水洗滌，然后所述化合物用稀NH4OH(其通過將18ml NH4OH和282ml水混合來制備)洗脫)，得到Cap-69(2.0g)，其為灰白色柔軟吸濕性固體。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)δ3.44(q，J＝7.1，1H)，2.99-2.90(m，2H)，2.89-2.80(m，2H)，1.23(d，J＝7.1，3H)，1.13(t，J＝7.3，6H)。
Cap-70至Cap-74x通過使用適當?shù)钠鹗荚习凑站虲ap-69的合成所述的操作來制備。



將NaBH3CN(1.6g，25.5mmol)加到冷卻的(冰/水浴)H-D-Ser-OBzlHCl(2.0g，8.6mmol)的水(25ml)/甲醇(15ml)溶液中。歷時5分鐘滴加乙醛(1.5ml，12.5mmol)，移開冷卻浴，將反應混合物在環(huán)境條件攪拌2小時。反應小心用12N HCl淬滅，并真空濃縮。將殘余物溶于水中，然后用反相HPLC(MeOH/H2O/TFA)純化，得到(R)-2-(二乙基氨基)-3-羥基丙酸芐酯TFA鹽，其為無色粘稠油狀物(1.9g)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，500MHz)δ9.73(br s，1H)，7.52-7.36(m，5H)，5.32(d，J＝12.2，1H)，5.27(d，J＝12.5，1H)，4.54-4.32(m，1H)，4.05-3.97(m，2H)，3.43-3.21(m，4H)，1.23(t，J＝7.2，6H)。LC/MS(條件2)RT＝1.38分鐘。LC/MS針對[M+H]+C14H22NO3的分析計算值為252.16；觀測值為252.19。
Cap-75 將NaH(0.0727g，1.82mmol，60％)加到冷卻的(冰-水)如上制備的(R)-2-(二乙基氨基)-3-羥基丙酸芐酯TFA鹽(0.3019g，0.8264mmol)的THF(3.0mL)溶液中，然后將混合物攪拌15分鐘。加入碘甲烷(56μL，0.90mmol)，然后繼續(xù)攪拌18小時，同時使冷卻浴解凍至環(huán)境條件。反應用水淬滅，然后加載到用MeOH預處理的MCX(6g)柱上，用甲醇洗滌，接著用2N NH3/甲醇洗脫化合物。真空除去揮發(fā)性組分，得到混雜有(R)-2-(二乙基氨基)-3-羥基丙酸的Cap-75，其為黃色半固體(100mg)。產(chǎn)物不經(jīng)進一步純化而按原樣使用。

將NaCNBH3(1.60g，24.2mmol)分批加到冷卻的(約15℃)(S)-4-氨基-2-(叔丁氧基羰基氨基)丁酸(2.17g，9.94mmol)的水/MeOH(各12mL)溶液中。幾分鐘后歷時2分鐘滴加乙醛(2.7mL，48.1mmol)，移開冷卻浴，將反應混合物在環(huán)境條件攪拌3.5小時。加入額外的乙醛(2.7mL，48.1mmol)，將反應混合物攪拌20.5小時。真空除去大部分MeOH組分，剩余的混合物用濃HCl處理，直到其pH達到約1.0，然后在40℃加熱2小時。真空除去揮發(fā)性組分，殘余物用4M HCl/二氧雜環(huán)己烷(20mL)處理，然后在環(huán)境條件攪拌7.5小時。真空除去揮發(fā)性組分，殘余物用

50WX8-100離子交換樹脂純化(柱用水洗滌，然后所述化合物用稀NH4OH(其由18ml NH4OH和282ml水制備)洗脫)，得到中間體(S)-2-氨基-4-(二乙基氨基)丁酸，其為灰白色固體(1.73g)。
歷時11分鐘將氯甲酸甲酯(0.36mL，4.65mmol)滴加到冷卻的(冰-水)Na2CO3(0.243g，2.29mmol)、NaOH(4.6mL濃度為1M的H2O溶液，4.6mmol)和上述產(chǎn)物(802.4mg)的混合物中。將反應混合物攪拌55分鐘，然后移開冷卻浴，再繼續(xù)攪拌5.25小時。反應混合物用等體積的水稀釋，然后用CH2Cl2(30mL，2×)洗滌，水相用冰-水浴冷卻，然后用濃HCL酸化至pH為2。然后真空除去揮發(fā)性組分，粗物質通過MCX樹脂(6.0g)(柱用水洗滌，然后樣品用2.0M NH3/MeOH洗脫)而轉化成游離堿，得到不純的Cap-76，其為灰白色固體(704mg)。1H NMR(MeOH-d4，δ＝3.29ppm，400MHz)δ3.99(dd，J＝7.5，4.7，1H)，3.62(s，3H)，3.25-3.06(m，6H)，2.18-2.09(m，1H)，2.04-1.96(m，1H)，1.28(t，J＝7.3，6H)。LC/MS針對[M+H]+C10H21N2O4的分析計算值為233.15；觀測值為233.24。

Cap-77的合成按照就Cap-7所述的操作如下進行使用用于SN2取代步驟的7-氮雜二環(huán)[2.2.1]庚烷，并使用以下條件來對中間體2-(7-氮雜二環(huán)[2.2.1]庚烷-7-基)-2-苯基乙酸芐酯進行對映異構體分離將所述中間體(303.7mg)溶于乙醇中，將得到的溶液注射在手性HPLC柱(Chiracel AD-H柱，30×250mm，5μm)上，在35℃用90％CO2-10％EtOH以70mL/min洗脫，得到124.5mg對映異構體1和133.8mg對映異構體2。這些芐基酯按照制備Cap-7的方法進行氫解，得到Cap-77。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)δ7.55(m，2H)，7.38-7.30(m，3H)，4.16(s，1H)，3.54(表現(xiàn)為br s，2H)，2.08-1.88(m，4H)，1.57-1.46(m，4H)。LC(條件1)RT＝0.67分鐘。LC/MS針對[M+H]+C14H18NO2的分析計算值為232.13；觀測值為232.18.HRMS針對[M+H]+C14H18NO2的分析計算值為232.1338；觀測值為232.1340。

將NaCNBH3(0.5828g，9.27mmol)加到(R)-2-(乙基氨基)-2-苯基乙酸(Cap-3的合成中的中間體；0.9923mg，4.60mmol)的HCl鹽和(1-乙氧基環(huán)丙氧基)三甲基甲硅烷(1.640g，9.40mmol)于MeOH(10mL)中的混合物中，然后半非均相混合物用油浴在50℃加熱20小時。加入更多的(1-乙氧基環(huán)丙氧基)三甲基甲硅烷(150mg，0.86mmol)和NaCNBH3(52mg，0.827mmol)，然后將反應混合物再加熱3.5小時。然后使其冷卻至環(huán)境溫度，用濃HCl酸化至pH為約2，過濾混合物，對濾液進行旋轉蒸發(fā)。將得到的粗物質吸收在異丙醇(6mL)中，然后加熱以實現(xiàn)溶解，濾出不溶部分，將濾液真空濃縮。所得粗物質中的約1/3用反相HPLC(H2O/MeOH/TFA)純化，得到Cap-78的TFA鹽，其為無色粘稠油狀物(353mg)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz；D2O交換后)δ7.56-7.49(m，5H)，5.35(S，1H)，3.35(m，1H)，3.06(表現(xiàn)為br s，1H)，2.66(m，1H)，1.26(t，J＝7.3，3H)，0.92(m，1H)，0.83-0.44(m，3H)。LC(條件1)RT＝0.64分鐘。LC/MS針對[M+H]+C13H18NO2的分析計算值為220.13；觀測值為220.21。HRMS針對[M+H]+C13H18NO2的分析計算值為220.1338；觀測值為220.1343。

歷時約50分鐘使臭氧鼓泡通過冷卻的(-78℃)Cap-55(369mg，2.13mmol)的CH2Cl2(5.0mL)溶液，直到反應混合物變成藍色。加入Me2S(甲硫醚)(10滴吸量管液滴)，將反應混合物攪拌35分鐘。-78℃冷卻浴用-10℃冷卻浴替代，再繼續(xù)攪拌30分鐘，然后真空除去揮發(fā)性組分，得到無色粘稠油狀物。
將NaBH3CN(149mg，2.25mmol)加到上述粗物質和嗎啉(500μL，5.72mmol)的MeOH(5.0mL)溶液中，然后將混合物在環(huán)境條件攪拌4小時。將其冷卻至冰-水溫度，用濃HCl處理，從而使其pH達到約2.0，然后攪拌2.5小時。真空除去揮發(fā)性組分，殘余物用MCX樹脂(MeOH洗滌；2.0NNH3/MeOH洗脫)和反相HPLC(H2O/MeOH/TFA)的組合進行純化，得到Cap-79，其含有未知量的嗎啉。
為了消耗嗎啉污染物，將上述物質溶于CH2Cl2(1.5mL)中，先后用Et3N(0.27mL，1.94mmol)和乙酸酐(0.10mL，1.06mmol)處理，然后在環(huán)境條件攪拌18小時。加入THF(1.0mL)和H2O(0.5mL)，繼續(xù)攪拌1.5小時。真空除去揮發(fā)性組分，使得到的殘余物通過MCX樹脂(MeOH洗滌；2.0NNH3/MeOH洗脫)，得到不純的Cap-79，其為棕色粘稠油狀物，所述油狀物不經(jīng)進一步純化就用于下一步。

歷時15分鐘將SOCl2(6.60mL，90.5mmol)滴加到冷卻的(冰-水)(S)-3-氨基-4-(芐基氧基)-4-氧代丁酸(10.04g，44.98mmol)和MeOH(300mL)的混合物中，移開冷卻浴，將反應混合物在環(huán)境條件攪拌29小時。真空除去大部分揮發(fā)性組分，將殘余物在EtOAc(150mL)和飽和NaHCO3溶液之間小心分配。水相用EtOAc(150mL，2×)萃取，對合并的有機相進行干燥(MgSO4)，過濾，并真空濃縮，得到(S)-2-氨基琥珀酸1-芐酯·4-甲酯，其為無色油狀物(9.706g)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)δ7.40-7.32(m，5H)，5.11(s，2H)，3.72(表現(xiàn)為t，J＝6.6，1H)，3.55(s，3H)，2.68(dd，J＝15.9，6.3，1H)，2.58(dd，J＝15.9，6.8，1H)，1.96(s，2H)。LC(條件1)RT＝0.90分鐘。LC/MS針對[M+H]+C12H16NO4的分析計算值為238.11；觀測值為238.22。
歷時1分鐘將Pb(NO3)2(6.06g，18.3mmol)加到(S)-2-氨基琥珀酸1-芐酯·4-甲酯(4.50g，19.0mmol)、9-溴-9-苯基-9H-芴(6.44g，20.0mmol)和Et3N(3.0mL，21.5mmol)的CH2Cl2(80mL)溶液中，然后將非均相混合物在環(huán)境條件攪拌48小時。對混合物進行過濾，濾液用MgSO4處理，再次過濾，并對最終濾液進行濃縮。對得到的粗物質進行Biotage純化(350g硅膠，CH2Cl2洗脫)，得到(S)-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)琥珀酸1-芐酯·4-甲酯，其為高度粘稠油狀物(7.93g)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)δ7.82(m，2H)，7.39-7.13(m，16H)，4.71(d，J＝12.4，1H)，4.51(d，J＝12.6，1H)，3.78(d，J＝9.1，NH)，3.50(s，3H)，2.99(m，1H)，2.50-2.41(m，2H，部分與溶劑重疊)。LC(條件1)RT＝2.16分鐘。LC/MS針對[M+H]+C31H28NO4的分析計算值為478.20；觀測值為478.19。
歷時10分鐘將LiHMDS(六甲基二甲硅烷基氨基鋰)(9.2mL濃度為1.0M的THF溶液，9.2mmol)滴加到冷卻的(-78℃)(S)-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)琥珀酸1-芐酯·4-甲酯(3.907g，8.18mmol)的THF(50mL)溶液中，然后攪拌約1小時。歷時8分鐘將MeI(碘甲烷)(0.57mL，9.2mmol)滴加到混合物中，然后繼續(xù)攪拌16.5小時，同時使冷卻浴解凍至室溫。用飽和NH4Cl溶液(5mL)淬滅后，真空除去大部分有機組分，將殘余物在CH2Cl2(100mL)和水(40mL)之間分配。對有機層進行干燥(MgSO4)，過濾，并真空濃縮，得到的粗物質用Biotage(350g硅膠；25％EtOAc/己烷)純化，得到3.65g 3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)琥珀酸1-芐酯·4-甲酯的2S/3S和2S/3R非對映異構體混合物，其比例為約1.0∶0.65(1H NMR)。此時未檢測優(yōu)勢異構體的立體化學，混合物不經(jīng)分離就用于下一步。部分1H NMR數(shù)據(jù)(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)主要非對映異構體δ4.39(d，J＝12.3，CH2中的1H)，3.33(s，3H，與H2O信號重疊)，3.50(d，J＝10.9，NH)，1.13(d，J＝7.1，3H)；次要非對映異構體δ4.27(d，J＝12.3，CH2中的1H)，3.76(d，J＝10.9，NH)，3.64(s，3H)，0.77(d，J＝7.0，3H)。LC(條件1)RT＝2.19分鐘。LC/MS針對[M+H]+C32H30NO4的分析計算值為492.22；觀測值為492.15。
歷時10分鐘將二異丁基氫化鋁(20.57ml濃度為1.0M的己烷溶液，20.57mmol)滴加到冷卻的(-78℃)以上制備的(2S)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)琥珀酸1-芐酯·4-甲酯(3.37g，6.86mmol)的THF(120mL)溶液中，然后在-78℃攪拌20小時。從冷卻浴中取出反應混合物，然后在攪拌下快速倒入約1M H3PO4/H2O(250mL)中，混合物用乙醚(100mL，2×)萃取。合并的有機相用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并真空濃縮。制備粗物質的過篩硅膠樣品，然后進行色譜純化(25％EtOAc/己烷；重力洗脫)，得到1.1g混雜有芐醇的(2S，3S)-4-羥基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸芐酯，其為無色粘稠油狀物，以及得到(2S，3R)-4-羥基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸芐酯，其為含有所述(2S，3R)立體異構體的不純物。后一樣品再接受相同的柱色譜純化條件，得到750mg純化的物質，其為白色泡沫。[注意在以上條件下(2S，3S)異構體在(2S，3R)異構體之前洗脫出來]。(2S，3S)異構體1HNMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)7.81(m，2H)，7.39-7.08(m，16H)，4.67(d，J＝12.3，1H)，4.43(d，J＝12.4，1H)，4.21(表現(xiàn)為t，J＝5.2，OH)，3.22(d，J＝10.1，NH)，3.17(m，1H)，3.08(m，1H)，約2.5(m，1H，與溶劑信號重疊)，1.58(m，1H)，0.88(d，J＝6.8，3H)。LC(條件1)RT＝2.00分鐘。LC/MS針對[M+H]+C31H30NO3的分析計算值為464.45；觀測值為464.22。(2S，3R)異構體1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)7.81(d，J＝7.5，2H)，7.39-7.10(m，16H)，4.63(d，J＝12.1，1H)，4.50(表現(xiàn)為t，J＝4.9，1H)，4.32(d，J＝12.1，1H)，3.59-3.53(m，2H)，3.23(m，1H)，2.44(dd，J＝9.0，8.3，1H)，1.70(m，1H)，0.57(d，J＝6.8，3H)。LC(條件1)RT＝1.92分鐘。LC/MS針對[M+H]+C31H30NO3的分析計算值為464.45；觀測值為464.52。
DIBAL(二異丁基氫化鋁)還原產(chǎn)物的相關立體化學指定基于對通過使用以下方案由各異構體制備的內酯衍生物進行的NOE研究來進行將LiHMDS(50μL濃度為1.0M的THF溶液，0.05mmol)加到冷卻的(冰-水)(2S，3S)-4-羥基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸芐酯(62.7mg，0.135mmol)的THF(2.0mL)溶液中，然后將反應混合物在類似的溫度攪拌約2小時。真空除去揮發(fā)性組分，將殘余物在CH2Cl2(30mL)、水(20mL)和飽和NH4Cl水溶液(1mL)之間分配。對有機層進行干燥(MgSO4)，過濾，并真空濃縮，對得到的粗物質進行Biotage(40g硅膠；10-15％EtOAc/己烷)純化，得到(3S，4S)-4-甲基-3-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)二氫呋喃-2(3H)-酮，其為無色固體膜(28.1mg)。以類似的方式將(2S，3R)-4-羥基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸芐酯加工成(3S，4R)-4-甲基-3-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)二氫呋喃-2(3H)-酮。(3S，4S)-內酯異構體1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)，7.83(d，J＝7.5，2H)，7.46-7.17(m，11H)，4.14(表現(xiàn)為t，J＝8.3，1H)，3.60(d，J＝5.8，NH)，3.45(表現(xiàn)為t，J＝9.2，1H)，約2.47(m，1H，部分與溶劑信號重疊)，2.16(m，1H)，0.27(d，J＝6.6，3H)。LC(條件1)RT＝1.98分鐘。LC/MS針對[M+Na]+C24H21NNaO2的分析計算值為378.15；觀測值為378.42。(3S，4R)-內酯異構體1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)，7.89(d，J＝7.6，1H)，7.85(d，J＝7.3，1H)，7.46-7.20(m，11H)，3.95(dd，J＝9.1，4.8，1H)，3.76(d，J＝8.8，1H)，2.96(d，J＝3.0，NH)，2.92(dd，J＝6.8，3，NCH)，1.55(m，1H)，0.97(d，J＝7.0，3H)。LC(條件1)RT＝2.03分鐘。LC/MS針對[M+Na]+C24H21NNaO2的分析計算值為378.15；觀測值為378.49。
將TBDMS-Cl(叔丁基二甲基甲硅烷基氯)(48mg，0.312mmol)和咪唑(28.8mg，0.423mmol)先后加到(2S，3S)-4-羥基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸芐酯(119.5mg，0.258mmol)的CH2Cl2(3ml)溶液中，將混合物在環(huán)境條件攪拌14.25小時。然后反應混合物用CH2Cl2(30mL)稀釋，用水(15mL)洗滌，對有機層進行干燥(MgSO4)，過濾，并真空濃縮。得到的粗物質用Biotage(40g硅膠；5％EtOAc/己烷)純化，得到(2S，3S)-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸芐酯(混雜有基于TBDMS的雜質)，其為無色粘稠油狀物(124.4mg)。以類似的方式將(2S，3R)-4-羥基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸芐酯加工成(2S，3R)-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸芐酯。(2S，3S)-甲硅烷基醚異構體1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)，7.82(d，J＝4.1，1H)，7.80(d，J＝4.0，1H)，7.38-7.07(m，16H)，4.70(d，J＝12.4，1H)，4.42(d，J＝12.3，1H)，3.28-3.19(m，3H)，2.56(dd，J＝10.1，5.5，1H)，1.61(m，1H)，0.90(d，J＝6.8，3H)，0.70(s，9H)，-0.13(s，3H)，-0.16(s，3H)。LC(條件1(其中運行時間延長至4分鐘))RT＝3.26分鐘。LC/MS針對[M+H]+C37H44NO3Si的分析計算值為578.31；觀測值為578.40。(2S，3R)-甲硅烷基醚異構體1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)，7.82(d，J＝3.0，1H)，7.80(d，J＝3.1，1H)，7.39-7.10(m，16H)，4.66(d，J＝12.4，1H)，4.39(d，J＝12.4，1H)，3.61(dd，J＝9.9，5.6，1H)，3.45(d，J＝9.5，1H)，3.41(dd，J＝10，6.2，1H)，2.55(dd，J＝9.5，7.3，1H)，1.74(m，1H)，0.77(s，9H)，0.61(d，J＝7.1，3H)，-0.06(s，3H)，-0.08(s，3H)。
將氫氣氣囊與(2S，3S)-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸芐酯(836mg，1.447mmol)和10％Pd/C(213mg)于EtOAc(16mL)中的混合物相連，然后將混合物在室溫攪拌約21小時，其中當需要時氣囊用H2再充填。反應混合物用CH2Cl2稀釋，然后通過硅藻土(

)墊過濾，墊用EtOAc(200mL)、EtOAc/MeOH(1∶1混合物，200mL)和MeOH(750mL)洗滌。將合并的有機相濃縮，由得到的粗物質制備過篩的硅膠樣品，然后進行快速色譜(EtOAc/i-PrOH(異丙醇)/H2O的8∶2∶1混合物)，得到(2S，3S)-2-氨基-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基丁酸，其為白色蓬松固體(325mg)。以類似的方式將(2S，3R)-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸芐酯加工成(2S，3R)-2-氨基-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基丁酸。(2S，3S)-氨基酸異構體1H NMR(甲醇-d4，δ＝3.29ppm，400MHz)，3.76(dd，J＝10.5，5.2，1H)，3.73(d，J＝3.0，1H)，3.67(dd，J＝10.5，7.0，1H)，2.37(m，1H)，0.97(d，J＝7.0，3H)，0.92(s，9H)，0.10(s，6H)。LC/MS針對[M+H]+C11H26NO3Si的分析計算值為248.17；觀測值為248.44。(2S，3R)-氨基酸異構體1H NMR(甲醇-d4，δ＝3.29ppm，400MHz)，3.76-3.75(m，2H)，3.60(d，J＝4.1，1H)，2.16(m，1H)，1.06(d，J＝7.3，3H)，0.91(s，9H)，0.09(s，6H)。針對[M+H]+C11H26NO3Si的分析計算值為248.17；觀測值為248.44。
將水(1mL)和NaOH(0.18mL濃度為1.0M的H2O溶液，0.18mmol)加到(2S，3S)-2-氨基-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基丁酸(41.9mg，0.169mmol)和Na2CO3(11.9mg，0.112mmol)的混合物中，然后用超聲波處理約1分鐘，以使反應物溶解。然后混合物用冰-水浴冷卻，歷時30秒加入氯甲酸甲酯(0.02mL，0.259mmol)，在類似的溫度繼續(xù)劇烈攪拌40分鐘，然后在環(huán)境溫度攪拌2.7小時。反應混合物用水(5mL)稀釋，用冰-水浴冷卻，然后用1.0N HCl水溶液(約0.23mL)逐滴處理?；旌衔镞M一步用水(10mL)稀釋，然后用CH2Cl2(15mL，2×)萃取。對合并的有機相進行干燥(MgSO4)，過濾，并真空濃縮，得到Cap-80a，其為灰白色固體。以類似的方式將(2S，3R)-2-氨基-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基丁酸加工成Cap-80b。Cap-80a1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)，12.57(br s，1H)，7.64(d，J＝8.3，0.3H)，7.19(d，J＝8.8，0.7H)，4.44(dd，J＝8.1，4.6，0.3H)，4.23(dd，J＝8.7，4.4，0.7H)，3.56/3.53(兩個單峰，3H)，3.48-3.40(m，2H)，2.22-2.10(m，1H)，0.85(s，9H)，約0.84(d，0.9H，與叔丁基信號重疊)，0.79(d，J＝7，2.1H)，0.02/0.01/0.00(三個重疊的單峰，6H)。LC/MS針對[M+Na]+C13H27NNaO5Si的分析計算值為328.16；觀測值為328.46。Cap-80b1H NMR(CDCl3，δ＝7.24ppm，400MHz)，6.00(br d，J＝6.8，1H)，4.36(dd，J＝7.1，3.1，1H)，3.87(dd，J＝10.5，3.0，1H)，3.67(s，3H)，3.58(dd，J＝10.6，4.8，1H)，2.35(m，1H)，1.03(d，J＝7.1，3H)，0.90(s，9H)，0.08(s，6H)。LC/MS針對[M+Na]+C13H27NNaO5Si的分析計算值為328.16；觀測值為328.53。粗產(chǎn)物不經(jīng)進一步純化就使用。

按照Falb et al.Synthetic Communications 1993，23，2839所描述的方案來制備。
Cap-82至Cap-85 Cap-82至Cap-85按照就Cap-51或Cap-13所述的操作從適當?shù)钠鹗荚蟻砗铣?。樣品顯示出與其對映異構體(即分別為Cap-4、Cap-13、Cap-51和Cap-52)類似的光譜分布。

在0℃向O-甲基-L-蘇氨酸(O-methyl-L-threonine)(3.0g，22.55mmol)和NaOH(0.902g，22.55mmol)于H2O(15mL)中的混合物中滴加ClCO2Me(氯甲酸甲酯)(1.74mL，22.55mmol)。將混合物攪拌12h，然后使用1N HCl酸化至pH為1。水相用EtOAc(2×250mL)和10％MeOH/CH2Cl2(250mL)萃取，將合并的有機相真空濃縮，得到無色油狀物(4.18g，97％)，其純度足以用于隨后的步驟。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ4.19(s，1H)，3.92-3.97(m，1H)，3.66(s，3H)，1.17(d，J＝7.7Hz，3H)。LCMS針對C7H13NO5的分析計算值為191；觀測值為190(M-H)-。

在0℃向L-高絲氨酸(L-homoserine)(2.0g，9.79mmol)和Na2CO3(2.08g，19.59mmol)于H2O(15mL)中的混合物中滴加ClCO2Me(0.76mL，9.79mmol)。將混合物攪拌48h，然后使用1N HCl酸化至pH為1。水相用EtOAc(2×250mL)萃取，將合并的有機相真空濃縮，得到無色固體(0.719g，28％)，其純度足以用于隨后的步驟。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.23(dd，J＝4.5，9.1Hz，1H)，3.66(s，3H)，3.43-3.49(m，2H)，2.08-2.14(m，1H)，1.82-1.89(m，1H)。LCMS針對C7H13NO5的分析計算值為191；觀測值為192(M+H)+。

將L-纈氨酸(1.0g，8.54mmol)、3-溴吡啶(1.8mL，18.7mmol)、K2CO3(2.45g，17.7mmol)和CuI(169mg，0.887mmol)于DMSO(10mL)中的混合物在100℃加熱12h。將反應混合物冷卻至室溫，倒入H2O(約150mL)中，然后用EtOAc(×2)洗滌。有機層用少量H2O萃取，合并的水相用6N HCl酸化至pH為約2。將體積減少至約三分之一，加入20g陽離子交換樹脂(Strata)。使?jié){液靜置20分鐘，然后加載到陽離子交換樹脂(Strata)墊(約25g)上。墊先后用H2O(200mL)、MeOH(200mL)和NH3(濃度為3M的MeOH溶液，2×200mL)洗滌。將適當?shù)募壏菡婵諠饪s，然后將殘余物(約1.1g)溶于H2O中，冷凍并凍干。得到標題化合物，其為泡沫(1.02g，62％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.00(寬單峰，1H)，7.68-7.71(m，1H)，7.01(寬單峰，1H)，6.88(d，J＝7.5Hz，1H)，5.75(寬單峰，1H)，3.54(s，1H)，2.04-2.06(m，1H)，0.95(d，J＝6.0Hz，3H)，0.91(d，J＝6.6Hz，3H)。LCMS針對C10H14N2O2的分析計算值為194；觀測值為195(M+H)+。

將L-纈氨酸(1.0g，8.54mmol)、5-溴嘧啶(4.03g，17.0mmol)、K2CO3(2.40g，17.4mmol)和CuI(179mg，0.94mmol)于DMSO(10mL)中的混合物在100℃加熱12h。將反應混合物冷卻至室溫，倒入H2O(約150mL)中，然后用EtOAc(×2)洗滌。有機層用少量H2O萃取，合并的水相用6N HCl酸化至pH為約2。將體積減少至約三分之一，加入20g陽離子交換樹脂(Strata)。使?jié){液靜置20分鐘，然后加載到陽離子交換樹脂(Strata)墊(約25g)上。墊先后用H2O(200mL)、MeOH(200mL)和NH3(濃度為3M的MeOH溶液，2×200mL)洗滌。將適當?shù)募壏菡婵諠饪s，然后將殘余物(約1.1g)溶于H2O中，冷凍并凍干。得到標題化合物，其為泡沫(1.02g，62％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)顯示混合物含有纈氨酸，沒有對純度進行評價。所述物質在隨后的反應中按原樣使用。LCMS針對C9H13N3O2的分析計算值為195；觀測值為196(M+H)+。

Cap-90按照就制備Cap-1所述的方法來制備。粗物質在隨后的步驟中按原樣使用。LCMS針對C11H15NO2的分析計算值為193；觀測值為192(M-H)-。
除非另有說明，以下cap按照就制備Cap-51所使用的方法來制備



Cap-117至Cap-123 就Cap-117至Cap-123的制備而言，Boc氨基酸是市售的，并通過用25％TFA的CH2Cl2溶液進行處理來脫保護。通過LCMS判斷反應結束后，真空除去溶劑，氨基酸的相應TFA鹽按照有關Cap-51的操作用氯甲酸甲酯進行氨甲?；?br>

Cap-124即(4S，5R)-5-甲基-2-氧代噁唑烷-4-甲酸的制備
L-蘇氨酸叔丁酯的鹽酸鹽按照有關Cap-51的操作來氨甲酰化。粗反應混合物用1N HCl酸化至pH為約1，混合物用EtOAc(2×50mL)萃取。將合并的有機相真空濃縮，得到無色油狀物，其在靜置時固化。將水層真空濃縮，得到的產(chǎn)物和無機鹽的混合物用EtOAc-CH2Cl2-MeOH(1∶1∶0.1)研磨，然后將有機相真空濃縮，得到無色油狀物，LCMS顯示其為期望的產(chǎn)物。將兩批合并，得到0.52g固體。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ4.60(m，1H)，4.04(d，J＝5.0Hz，1H)，1.49(d，J＝6.3Hz，3H)。LCMS針對C5H7NO4的分析計算值為145；觀測值為146(M+H)+。
Cap-125即(S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-(二甲基氨基)丁酸的制備
向Pd(OH)2(20％，100mg)、甲醛水溶液(37％wt，4ml)和乙酸(0.5mL)于甲醇(15mL)中的混懸液中加入(S)-4-氨基-2-(叔丁氧基羰基氨基)丁酸(1g，4.48mmol)。反應混合物用氫氣吹洗幾次，然后在室溫在氫氣氣囊的存在下攪拌過夜。反應混合物通過硅藻土(

)墊過濾，然后真空除去揮發(fā)性組分。得到的粗物質按原樣用于下一步。LC/MS針對C11H22N2O4的分析計算值為246；觀測值為247(M+H)+。
3-甲基-N-[(甲基氧基)羰基]-L-組氨酸(Cap-126)的制備
該操作是對用于制備Cap-51的操作的修改。在0℃向3-甲基-L-組氨酸(0.80g，4.70mmol)于THF(10mL)和H2O(10mL)中的混懸液中加入NaHCO3(0.88g，10.5mmol)。得到的混合物用ClCO2Me(0.40mL，5.20mmol)處理，然后將混合物在0℃攪拌。攪拌約2h后，LCMS顯示沒有起始原料剩余。反應混合物用6N HCl酸化至pH為2。
真空除去溶劑，將殘余物懸浮于20mL 20％MeOH/CH2Cl2中。對混合物進行過濾并濃縮，得到淡黃色泡沫(1.21g)。LCMS和1H NMR顯示所述物質為甲酯和期望的產(chǎn)物的9∶1混合物。將該物質吸收在THF(10mL)和H2O(10mL)中，冷卻至0℃，然后加入LiOH(249.1mg，10.4mmol)。攪拌約1h后，LCMS顯示沒有酯剩余。因此混合物用6N HCl酸化，真空除去溶劑。LCMS和1H NMR證實不存在酯。得到標題化合物，其為混雜有無機鹽的HCl鹽(1.91g，＞100％)。所述化合物不經(jīng)進一步純化就按原樣用在隨后的步驟中。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.84，(s，1H)，7.35(s，1H)，4.52(dd，J＝5.0，9.1Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.62(s，3H)，3.35(dd，J＝4.5，15.6Hz，1H，部分被溶劑模糊)，3.12(dd，J＝9.0，15.6Hz，1H)。LCMS針對C9H13N3O4的分析計算值為227.09；觀測值為228.09(M+H)+。
(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)丙酸(Cap-127)的制備
Cap-127按照上文有關Cap-126的方法從(S)-2-氨基-3-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)丙酸(1.11g，6.56mmol)、NaHCO3(1.21g，14.4mmol)和ClCO2Me(0.56mL，7.28mmol)開始來制備。得到標題化合物，其為混雜有無機鹽的HCl鹽(1.79g，＞100％)。LCMS和1H NMR顯示存在約5％的甲酯。粗混合物不經(jīng)進一步純化而按原樣使用。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.90(s，1H)，7.35(s，1H)，4.48(dd，J＝5.0，8.6Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.62(s，3H)，3.35(m，1H)，3.08(m，1H)。LCMS針對C9H13N3O4的分析計算值為227.09；觀測值為228(M+H)+。
(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-(1H-1，2，3-三唑-4-基)丙酸(Cap-128)的制備
步驟1(S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)戊-4-炔酸芐酯(cj-27b)的制備
在0℃向cj-27a(1.01g，4.74mmol)、DMAP(58mg，0.475mmol)和iPr2NEt(1.7mL，9.8mmol)于CH2Cl2(100mL)中的溶液中加入Cbz-Cl(芐氧羰基氯)(0.68mL，4.83mmol)。將溶液在0℃攪拌4h，洗滌(1N KHSO4和鹽水)，干燥(Na2SO4)，過濾，并真空濃縮。殘余物經(jīng)快速柱色譜(TLC，6∶1己烷∶EtOAc)純化，得到標題化合物(1.30g，91％)，其為無色油狀物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.35(s，5H)，5.35(d，br，J＝8.1Hz，1H)，5.23(d，J＝12.2Hz，1H)，5.17(d，J＝12.2Hz，1H)，4.48-4.53(m，1H)，2.68-2.81(m，2H)，2.00(t，J＝2.5Hz，1H)，1.44(s，9H)。LCMS針對C17H21NO4的分析計算值為303；觀測值為304(M+H)+。
步驟2(S)-3-(1-芐基-1H-1，2，3-三唑-4-基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸芐酯(cj-28)的制備
在室溫向(S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)戊-4-炔酸芐酯(0.50g，1.65mmol)、抗壞血酸鈉(0.036g，0.18mmol)、CuSO4·5H2O(0.022g，0.09mmol)和NaN3(0.13g，2.1mmol)于DMF-H2O(5mL，4∶1)中的混合物中加入BnBr(芐基溴)(0.24mL，2.02mmol)，然后將混合物溫熱至65℃。5h后LCMS顯示出低的轉化率。
加入另一批NaN3(100mg)，然后繼續(xù)加熱12h。將反應混合物倒入EtOAc和H2O中并搖動。分離各層，水層用EtOAc萃取3次。對合并的有機相進行洗滌(H2O×3和鹽水)，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。殘余物經(jīng)快速色譜(Biotage，40+M 0-5％MeOH/CH2Cl2；TLC，3％MeOH/CH2Cl2)純化，得到淡黃色油狀物，所述油狀物在靜置時固化(748.3mg，104％)。NMR與期望的產(chǎn)物相符，但表明存在DMF。所述物質不經(jīng)進一步純化而按原樣使用。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.84(s，1H)，7.27-7.32(m，10H)，5.54(s，2H)，5.07(s，2H)，4.25(m，1H)，3.16(dd，J＝1.0，5.3Hz，1H)，3.06(dd，J＝5.3，14.7Hz)，2.96(dd，J＝9.1，14.7Hz，1H)，1.31(s，9H)。LCMS針對C24H28N4O4的分析計算值為436；觀測值為437(M+H)+。
步驟2(S)-3-(1-芐基-1H-1，2，3-三唑-4-基)-2-(甲氧基羰基氨基)丙酸芐酯(cj-29)的制備
向(S)-3-(1-芐基-1H-1，2，3-三唑-4-基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸芐酯(0.52g，1.15mmol)于CH2Cl2中的溶液中加入TFA(4mL)。將混合物在室溫攪拌2h。將混合物真空濃縮，得到無色油狀物，所述油狀物在靜置時固化。將該物質溶于THF-H2O中，然后冷卻至0℃。先后加入固體NaHCO3(0.25g，3.00mmol)和ClCO2Me(0.25mL，3.25mmol)。攪拌1.5h后，混合物用6N HCl酸化至pH為約2，然后倒入H2O-EtOAc中。分離各層，水相用EtOAc萃取兩次。對合并的有機層進行洗滌(H2O和鹽水)，干燥(Na2SO4)，過濾，并真空濃縮，得到無色油狀物(505.8mg，111％，NMR顯示存在未經(jīng)鑒定的雜質)，其在真空靜置時固化。所述物質不經(jīng)進一步純化而按原樣使用。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.87(s，1H)，7.70(d，J＝8.1Hz，1H)，7.27-7.32(m，10H)，5.54(s，2H)，5.10(d，J＝12.7Hz，1H)，5.06(d，J＝12.7Hz，1H)，4.32-4.37(m，1H)，3.49(s，3H)，3.09(dd，J＝5.6，14.7Hz，1H)，2.98(dd，J＝9.6，14.7Hz，1H)。LCMS針對C21H22N4O4的分析計算值為394；觀測值為395(M+H)+。
步驟3(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-(1H-1，2，3-三唑-4-基)丙酸(Cap-128)的制備
在大氣壓在MeOH(5mL)中在Pd-C(82mg)的存在下將(S)-3-(1-芐基-1H-1，2，3-三唑-4-基)-2-(甲氧基羰基氨基)丙酸芐酯(502mg，1.11mmol)氫化12h?；旌衔锿ㄟ^硅藻土(

)過濾并真空濃縮。得到(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-(1H-1，2，3-三唑-4-基)丙酸，其為無色膠狀物(266mg，111％)，所述膠狀物混雜有約10％的甲酯。所述物質不經(jīng)進一步純化而按原樣使用。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.78(寬單峰，1H)，7.59(s，1H)，7.50(d，J＝8.0Hz，1H)，4.19-4.24(m，1H)，3.49(s，3H)，3.12(dd，J＝4.8Hz，14.9Hz，1H)，2.96(dd，J＝9.9，15.0Hz，1H)。LCMS針對C7H10N4O4的分析計算值為214；觀測值為215(M+H)+。
(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸(Cap-129)的制備
步驟1(S)-2-(芐基氧基羰基氨基)-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸(cj-31)的制備
將(S)-2-氧代氧雜環(huán)丁烷-3-基氨基甲酸芐酯(0.67g，3.03mmol)和吡唑(0.22g，3.29mmol)于CH3CN(12mL)中的混懸液在50℃加熱24h。將混合物冷卻至室溫且過夜，并過濾固體，得到(S)-2-(芐基氧基羰基氨基)-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸(330.1mg)。真空濃縮濾液，然后用少量CH3CN(約4mL)研磨，得到第二批(43.5mg)?？偸章蕿?70.4mg(44％)。m.p.(熔點)為165.5-168℃。文獻m.p.為168.5-169.5[Vederas et al.J.Am.Chem.Soc.1985，107，7105]。1HNMR(400MHz，CD3OD)δ7.51(d，J＝2.0，1H)，7.48(s，J＝1.5Hz，1H)，7.24-7.34(m，5H)，6.23m，1H)，5.05(d，12.7H，1H)，5.03(d，J＝12.7Hz，1H)，4.59-4.66(m，2H)，4.42-4.49(m，1H)。LCMS針對C14H15N3O4的分析計算值為289；觀測值為290(M+H)+。
步驟2(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸(Cap-129)的制備
在大氣壓在MeOH(5mL)中在Pd-C(45mg)的存在下將(S)-2-(芐基氧基羰基氨基)-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸(0.20g，0.70mmol)氫化2h。產(chǎn)物似乎不溶于MeOH中，因此反應混合物用5mL H2O和幾滴6N HCl稀釋。均相溶液通過硅藻土(

)過濾，真空除去MeOH。將剩余溶液冷凍并凍干，得到黃色泡沫(188.9mg)。將該物質懸浮于THF-H2O(1∶1，10mL)中，然后冷卻至0℃。向冷的混合物中小心加入NaHCO3(146.0mg，1.74mmol)(放出CO2)。氣體放出(約15分鐘)停止后，滴加ClCO2Me(0.06mL，0.78mmol)。將混合物攪拌2h，然后用6N HCl酸化至pH為約2并倒入EtOAc中。分離各層，水相用EtOAC(×5)萃取。對合并的有機層進行洗滌(鹽水)，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮，得到標題化合物，其為無色固體(117.8mg，79％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.04(s，1H)，7.63(d，J＝2.6Hz，1H)，7.48(d，J＝8.1Hz，1H)，7.44(d，J＝1.5Hz，1H)，6.19(表現(xiàn)為t，J＝2.0Hz，1H)，4.47(dd，J＝3.0，12.9Hz，1H)，4.29-4.41(m，2H)，3.48(s，3H)。LCMS針對C8H11N3O4的分析計算值為213；觀測值為214(M+H)+。
Cap-130即(R)-N-乙?；?苯基甘氨酸
Cap-130通過對市售的(R)-苯基甘氨酸進行酰化來制備，所述?；cCalmes，M.；Daunis，J.；Jacquier，R.；Verducci，J.Tetrahedron，1987，43(10)，2285中給出的操作類似。

步驟a將二甲基氨甲酰氯(0.92mL，10mmol)緩慢加到(S)-2-氨基-3-甲基丁酸芐酯鹽酸鹽(2.44g；10mmol)和許尼希堿(3.67mL，21mmol)于THF(50mL)中的溶液中。將得到的白色混懸液在室溫攪拌過夜(16小時)，然后減壓濃縮。將殘余物在乙酸乙酯和水之間分配。有機層用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并減壓濃縮。得到的黃色油狀物經(jīng)快速色譜(用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗脫)純化。將收集的級份真空濃縮，得到2.35g(85％)澄清油狀物。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 0.84(d，J＝6.95Hz，3H)0.89(d，J＝6.59Hz，3H)1.98-2.15(m，1H)2.80(s，6H)5.01-5.09(m，J＝12.44Hz，1H)5.13(d，J＝12.44Hz，1H)6.22(d，J＝8.05Hz，1H)7.26-7.42(m，5H)。LC(條件1)RT＝1.76分鐘；MS針對[M+H]+C16H22N2O3的分析計算值為279.17；觀測值為279.03。
步驟b向上文制備的中間體(2.35g；8.45mmol)的MeOH(50mL)溶液中加入Pd/C(10％；200mg)，得到的黑色混懸液用N2(3×)沖洗，然后置于1大氣壓H2下。將混合物在室溫攪拌過夜，然后通過微纖維過濾器(microfiberfilter)過濾以除去催化劑。然后將得到的澄清溶液減壓濃縮，得到1.43g(89％)Cap-131，其為白色泡沫，所述泡沫不經(jīng)進一步純化就使用。1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 0.87(d，J＝4.27Hz，3H)0.88(d，J＝3.97Hz，3H)1.93-2.11(m，1H)2.80(s，6H)3.90(dd，J＝8.39，6.87Hz，1H)5.93(d，J＝8.54Hz，1H)12.36(s，1H)。LC(條件1)RT＝0.33分鐘。MS針對[M+H]+C8H17N2O3的分析計算值為1898.12；觀測值為189.04。

Cap-132按照就Cap-131所述的方法從(S)-2-氨基丙酸芐酯鹽酸鹽來制備。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.27(d，J＝7.32Hz，3H)2.80(s，6H)4.06(qt，1H)6.36(d，J＝7.32Hz，1H)12.27(s，1H)。LC(條件1)RT＝0.15分鐘。MS針對[M+H]+C6H13N2O3的分析計算值為161.09；觀測值為161.00。

Cap-133按照就Cap-47所述的方法從(S)-2-氨基-3-甲基丁酸叔丁酯鹽酸鹽和氯甲酸2-氟乙基酯來制備。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 0.87(t，J＝6.71Hz，6H)1.97-2.10(m，1H)3.83(dd，J＝8.39，5.95Hz，1H)4.14-4.18(m，1H)4.20-4.25(m，1H)4.50-4.54(m，1H)4.59-4.65(m，1H)7.51(d，J＝8.54Hz，1H)12.54(s，1H)。

Cap-134按照就Cap-51所述的方法從(S)-二乙基丙氨酸((S)-diethylalanine)和氯甲酸甲酯來制備。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 0.72-0.89(m，6H)1.15-1.38(m，4H)1.54-1.66(m，1H)3.46-3.63(m，3H)4.09(dd，J＝8.85，5.19Hz，1H)7.24(d，J＝8.85Hz，1H)12.55(s，1H)。LC(條件2)RT＝0.66分鐘。MS針對[M+H]+C9H18NO4的分析計算值為204.12；觀測值為204.02。
生物活性 在本發(fā)明中使用HCV復制子測定，其如在共有的(commonly owned)PCT/US2006/022197和O’Boyle et.al.Antimicrob Agents Chemother.2005Apr；49(4)1346-53中所描述的那樣來制備、實施和驗證。
HCV 1b-377-neo復制子細胞(HCV 1b-377-neo replicon cell)用于測試本發(fā)明中所述的代表性化合物，所述細胞由于NS5A中的Y2065H突變而是對化合物A有抗性的細胞(描述于申請PCT/US2006/022197中)。經(jīng)測試的化合物被確定對耐受化合物A的細胞的抑制活性比對野生型細胞的抑制活性小約10倍，這顯示了兩個化合物系列之間的相關作用機理。由此，所述化合物就抑制HCV NS5A蛋白的功能而言是有效的，并且應該理解的是，所述化合物就組合而言如先前在申請PCT/US2006/022197和共有的WO/O4014852中所述的那樣是有效的。此外，所述化合物可有效對抗HCV1b基因型。還應該理解的是，本發(fā)明的化合物可抑制HCV的多個基因型。表2顯示了本發(fā)明的代表性化合物對抗HCV 1b基因型的EC50值。范圍如下A＝1-10μM；B＝100-999nM；C＝1-99nM；和D＝10-999pM。
表2


本發(fā)明的化合物可通過除NS5A抑制外的機理或不同于NS5A抑制的機理來抑制HCV。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物抑制HCV復制子，而在另一個實施方案中，本發(fā)明的化合物抑制NS5A。
本領域技術人員應該明白的是，本發(fā)明不限于前述示例性實施例，并且在不背離本發(fā)明基本屬性的情況下本發(fā)明可按其它具體形式來實施。因此期望的是，所述實施例在各個方面都應該被視為示例性的而非限制性的，應該參考所附的權利要求書而不是前述實施例，并且落入所述權利要求書的等價意義和范圍內的所有變化形式都應該包括在本發(fā)明的范圍內。
權利要求
1.式(I)化合物或其藥用鹽
其中
A和B各自為苯基；
D和E各自為含有一個、兩個或三個獨立選自氮、氧和硫的雜原子的五元芳族環(huán)；條件是D和E中的至少一個不是咪唑；
R1和R2獨立選自氫和R3-C(O)-；以及
每個R3獨立選自烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、烷基、烷基羰基烷基、芳基、芳基烯基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳基氧基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烯基、(環(huán)烷基)烷基、環(huán)烷基氧基烷基、鹵代烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烯基、雜環(huán)基烷氧基、雜環(huán)基烷基、雜環(huán)基氧基烷基、羥基烷基、-NRcRd、(NRcRd)烯基、(NRcRd)烷基和(NRcRd)羰基。
2.權利要求1的化合物或其藥用鹽，其中D和E中的一個是咪唑。
3.權利要求1的化合物或其藥用鹽，其中D和E中的至少一個選自吡唑、三唑和噁二唑。
4.權利要求1的化合物或其藥用鹽，其中R3選自烷氧基和芳基烷基。
5.式(II)化合物或其藥用鹽
其中
D和E各自為含有一個、兩個或三個獨立選自氮、氧和硫的雜原子的五元芳族環(huán)；條件是D和E中的至少一個不是咪唑；
R1和R2獨立選自氫和R3-C(O)-；以及
每個R3獨立選自烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、烷基、烷基羰基烷基、芳基、芳基烯基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳基氧基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烯基、(環(huán)烷基)烷基、環(huán)烷基氧基烷基、鹵代烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烯基、雜環(huán)基烷氧基、雜環(huán)基烷基、雜環(huán)基氧基烷基、羥基烷基、-NRcRd、(NRcRd)烯基、(NRcRd)烷基和(NRcRd)羰基。
6.式(III)化合物或其藥用鹽
其中
D和E各自為含有一個、兩個或三個獨立選自氮、氧和硫的雜原子的五元芳族環(huán)；條件是D和E中的至少一個不是咪唑；以及條件是D和E各自都通過碳原子被取代；
R1和R2獨立選自氫和R3-C(O)-；以及
每個R3獨立選自烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、烷基、烷基羰基烷基、芳基、芳基烯基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳基氧基烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烯基、(環(huán)烷基)烷基、環(huán)烷基氧基烷基、鹵代烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烯基、雜環(huán)基烷氧基、雜環(huán)基烷基、雜環(huán)基氧基烷基、羥基烷基、-NRcRd、(NRcRd)烯基、(NRcRd)烷基和(NRcRd)羰基。
7.權利要求6的化合物或其藥用鹽，其中
D和E獨立選自咪唑、吡唑、三唑和噁二唑；條件是D和E中的至少一個不是咪唑；以及條件是D和E各自都通過碳原子被取代；以及
R3選自烷氧基和芳基烷基。
8.一種組合物，其包含權利要求1的化合物或其藥用鹽以及藥用載體。
9.權利要求8的組合物，其還包含一種或兩種具有抗HCV活性的額外化合物。
10.權利要求9的組合物，其中所述額外化合物中的至少一種為干擾素或利巴韋林。
11.權利要求10的組合物，其中所述干擾素選自干擾素α2B、PEG化的干擾素α、同感干擾素、干擾素α2A及淋巴細胞樣干擾素τ。
12.權利要求9的組合物，其中所述額外化合物中的至少一種選自白細胞介素2、白細胞介素6、白細胞介素12、可提高1型輔助T細胞應答發(fā)展的化合物、干擾RNA、反義RNA、咪喹莫特、利巴韋林、5’-單磷酸肌苷脫氫酶抑制劑、金剛烷胺及金剛乙胺。
13.權利要求9的組合物，其中所述額外化合物中的至少一種可有效抑制靶標的功能以治療HCV感染，所述靶標選自HCV金屬蛋白酶、HCV絲氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV進入、HCV組裝、HCV釋出、HCV NS5A蛋白和IMPDH。
14.在患者中治療HCV感染的方法，其包括給藥所述患者治療有效量的權利要求1的化合物或其藥用鹽。
15.權利要求14的方法，其還包括在給藥權利要求1的化合物或其藥用鹽之前、之后或同時給藥一種或兩種具有抗HCV活性的額外化合物。
16.權利要求15的方法，其中所述額外化合物中的至少一種為干擾素或利巴韋林。
17.權利要求16的方法，其中所述干擾素選自干擾素α2B、PEG化的干擾素α、同感干擾素、干擾素α2A及淋巴細胞樣干擾素τ。
18.權利要求15的方法，其中所述額外化合物中的至少一種選自白細胞介素2、白細胞介素6、白細胞介素12、可提高1型輔助T細胞應答發(fā)展的化合物、干擾RNA、反義RNA、咪喹莫特、利巴韋林、5’-單磷酸肌苷脫氫酶抑制劑、金剛烷胺及金剛乙胺。
19.權利要求15的方法，其中所述額外化合物中的至少一種可有效抑制靶標的功能以治療HCV感染，所述靶標選自HCV金屬蛋白酶、HCV絲氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV進入、HCV組裝、HCV釋出、HCV NS5A蛋白和IMPDH。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有下式(I)的化合物或其藥用鹽，其中A和B各自為苯基；D和E各自為含有一個、兩個或三個獨立選自氮、氧和硫的雜原子的五元芳族環(huán)；條件是D和E中的至少一個不是咪唑；本發(fā)明還涉及治療丙型肝炎病毒(HCV)感染的組合物和方法。本發(fā)明還披露了含有所述化合物的藥物組合物和使用這些化合物治療HCV感染的方法。
文檔編號C07D403/04GK101754966SQ200880025131
公開日2010年6月23日 申請日期2008年5月15日 優(yōu)先權日2007年5月17日
發(fā)明者卡羅爾·巴錢德, 馬科南·貝爾馬, 丹尼爾·H·德翁, 安德魯·C·古德, 賈森·古德里奇, 勞倫斯·G·哈曼, 克林特·A·詹姆斯, 戴維·R·蘭利, 里科·拉沃伊, 奧馬·D·洛佩斯, 阿蘭·馬特爾, 尼古拉斯·A·米恩韋爾, 范·N·恩古延, 杰弗里·L·羅明, 愛德華·H·魯?shù)细? 勞倫斯·B·斯奈德, 丹尼斯·R·圣勞倫特, 楊?？? 王敢 申請人:百時美施貴寶公司