專利名稱：第一屋塵螨2類過(guò)敏原用于治療對(duì)第二屋塵螨2類過(guò)敏原的過(guò)敏癥的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及Der f 2過(guò)敏原組合物在制備用于預(yù)防或治療對(duì)Der p 2的過(guò)敏癥的疫苗中的用途，還涉及Der p 2過(guò)敏原組合物在制備用 于治療對(duì)Der f 2的過(guò)敏癥的疫苗中的用途。
背景技術(shù)：
在采用西方生活方式的國(guó)家，過(guò)敏是一個(gè)主要的健康問(wèn)題。而且， 過(guò)敏性疾病在這些國(guó)家的流行日益增加。雖然一般來(lái)說(shuō)不認(rèn)為過(guò)敏是 威脅生命的疾病，但哮喘每年就造成大量的死亡。尤其在青少年中有 大約30%的異常流行，說(shuō)明他們的生活質(zhì)量有很大下降、工作的時(shí)間 和金錢(qián)上也受到很大損失，這需要在西方世界對(duì)主要健康問(wèn)題進(jìn)行分 類。
過(guò)敏癥是一種復(fù)雜的疾病。許多因素都促進(jìn)致敏事件的發(fā)生。這 些因素之一是個(gè)體的易感性，其是由幾個(gè)基因之間不完全清楚的相互 作用決定的。另一個(gè)重要因素是暴露于特定閾值以上的過(guò)敏原。若千 環(huán)境因素可能對(duì)致敏過(guò)程很重要，其中包括污染、孩童時(shí)代感染、寄 生蟲(chóng)感染、腸微生物等。 一旦個(gè)體被致敏且建立過(guò)敏性免疫反應(yīng)，哪 怕只有很微量的過(guò)敏原的存在都會(huì)高效地轉(zhuǎn)為癥狀。
過(guò)敏性疾病的自然過(guò)程常伴隨有兩種水平的惡化。首先是癥狀和 病情嚴(yán)重程度發(fā)展，而且疾病也在發(fā)展，例如從花粉熱發(fā)展到哮喘。 第二，刺激性過(guò)敏原(offending allergen)發(fā)生擴(kuò)散，導(dǎo)致過(guò)敏性 多重反應(yīng)。慢性炎癥導(dǎo)致粘膜防御機(jī)制普遍減弱，引起非特異性刺激 并最終破壞粘膜組織。嬰兒主要致敏因素是食物，即牛奶，引起濕滲 或腸胃紊亂；然而最常見(jiàn)的是他們隨生長(zhǎng)而自發(fā)地失去這些癥狀。這些嬰兒在之后的年歲中有發(fā)生吸入過(guò)敏癥的危險(xiǎn)。
最重要的過(guò)敏原來(lái)源發(fā)現(xiàn)于我們呼吸的空氣中具有特定大小的最 普遍的顆粒。這些來(lái)源是極為普遍的，并且包括草類花粉和屋塵螨排
泄顆粒，這二者合起來(lái)占到所有過(guò)敏癥的大約50%。具有普遍的重要 作用的還有動(dòng)物皮屑，即貓和狗的皮屑；以及其他花粉，如艾屬植物 花粉；和微真菌，如鏈格孢屬。在特定的地區(qū)還有其他花粉起主導(dǎo)作 用，如中北歐的樺樹(shù)花粉、美國(guó)中東部的豚草屬及日本的日本香柏 (Japanese cedar)花粉。昆蟲(chóng)(即蜜蜂和胡蜂毒液)和食物分別占 了所有過(guò)敏癥的大約2%。
過(guò)敏癥，即I型超敏反應(yīng)是由對(duì)外源非病原物質(zhì)的不適當(dāng)?shù)拿庖?反應(yīng)而引起的。過(guò)敏癥的重要臨床表現(xiàn)包括哞喘、花粉熱、濕滲和胃 腸紊亂。過(guò)敏性反應(yīng)很迅速，在與刺激性過(guò)敏原接觸20分鐘內(nèi)達(dá)到最 強(qiáng)。而且，過(guò)敏性反應(yīng)在這個(gè)意義上是特異的特定個(gè)體會(huì)對(duì)特定的 一種或多種過(guò)敏原致敏，而這個(gè)個(gè)體不一定對(duì)其他已知引起過(guò)敏性疾 病的物質(zhì)表現(xiàn)出過(guò)敏性反應(yīng)。過(guò)敏性表型的特征是靶標(biāo)器官的粘膜產(chǎn) 生明顯炎癥，以及血液循環(huán)中及肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面出現(xiàn) IgE家族的過(guò)敏原特異性抗體。
過(guò)敏性攻擊由外源過(guò)敏原與過(guò)敏原特異性IgE抗體的反應(yīng)而起 始，此時(shí)抗體結(jié)合于肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面的高親和性的IgE 特異性受體上。肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞含有預(yù)先形成的協(xié)調(diào)子，即 組胺、類胰蛋白酶和其他物質(zhì)，這些物質(zhì)在兩個(gè)或更多結(jié)合了受體的 IgE進(jìn)行交聯(lián)時(shí)就會(huì)釋放。IgE抗體通過(guò)與一個(gè)過(guò)敏原分子的結(jié)合同時(shí) 發(fā)生交聯(lián)。因此，只有一個(gè)抗體結(jié)合表位的外源物質(zhì)無(wú)法起始過(guò)敏性 反應(yīng)。在肥大細(xì)胞上結(jié)合了受體的IgE的交聯(lián)還會(huì)導(dǎo)致釋放信號(hào)分子， 這些分子負(fù)責(zé)將嗜酸性粒細(xì)胞、過(guò)敏原特異性T細(xì)胞和其他類型的細(xì) 胞吸引到過(guò)敏性應(yīng)答的位點(diǎn)。這些細(xì)胞與過(guò)敏原、IgE及效應(yīng)子細(xì)胞 相互作用，導(dǎo)致遭遇過(guò)敏原后12-24小時(shí)內(nèi)發(fā)生新一輪癥狀(后期反 應(yīng))。
處理過(guò)敏性疾病包括診斷和治療，其中治療又包括預(yù)防性治療。過(guò)敏癥的診斷涉及證實(shí)過(guò)敏原特異性IgE及鑒別過(guò)敏原來(lái)源。在很多 情況下，詳細(xì)的病史就足夠診斷出過(guò)敏癥且能鑒別出刺激性過(guò)敏原來(lái) 源物質(zhì)。最常見(jiàn)的情況下，診斷卻要由客觀的測(cè)量來(lái)支持，如皮試、 血檢或應(yīng)激測(cè)試。
治療的選擇主要分為三大類。第一種選擇是避開(kāi)過(guò)敏原或減少暴 露。而避開(kāi)過(guò)敏原在例如食物過(guò)敏原的情況下是顯而易見(jiàn)的，但是在 屋塵螨過(guò)敏原的情況下這個(gè)手段就很難或很貴，或者在花粉過(guò)敏原的 情況下這是不可能實(shí)現(xiàn)的。第二種治療選擇也是使用最廣泛的，就是 經(jīng)典對(duì)癥藥物(symptomatic drug )，如抗組胺藥物和類固醇的處方。 對(duì)癥藥物安全有效，但不能改變疾病的本質(zhì)誘因，也不能控制疾病傳 播。第三種治療選擇是特異性過(guò)敏癥免疫，其在大多數(shù)情況下能減少 或減輕所針對(duì)過(guò)敏原引起的過(guò)敏性癥狀
傳統(tǒng)特異性過(guò)敏癥免疫是過(guò)敏性疾病的一種病因治療。此方法干 預(yù)了基礎(chǔ)免疫機(jī)制，導(dǎo)致病人免疫狀態(tài)的長(zhǎng)期改善。因此，特異性過(guò) 敏癥免疫的保護(hù)性作用還延伸到治療階段以后，這一點(diǎn)與對(duì)癥藥物治 療相反。 一些病人接受治療后痊愈，且另外大多數(shù)病人的疾病嚴(yán)重程 度和癥狀緩解，或者至少病情惡化停滯。因此，特異性過(guò)敏癥免疫有 預(yù)防作用，這降低了花粉熱發(fā)展為哮喘的風(fēng)險(xiǎn)，也降低了得新的致敏 的風(fēng)險(xiǎn)。
成功過(guò)敏癥免疫的免疫學(xué)機(jī)理的細(xì)節(jié)還不清楚。已知特異性免疫 應(yīng)答，如產(chǎn)生針對(duì)特定病原體的抗體是一種適應(yīng)性免疫應(yīng)答。這種應(yīng) 答與先天免疫應(yīng)答有區(qū)別，后者是對(duì)病原體產(chǎn)生的非特異性反應(yīng)。過(guò) 敏癥疫苗肯定是與這種適應(yīng)性免疫反應(yīng)應(yīng)答，這種應(yīng)答包括到具有抗 原特異性的細(xì)胞及分子，如T細(xì)胞和產(chǎn)生抗體的B細(xì)胞。B細(xì)胞若沒(méi) 有相應(yīng)特異性T細(xì)胞的協(xié)助下無(wú)法成熟形成產(chǎn)生抗體的細(xì)胞。參與刺 激過(guò)敏性免疫應(yīng)答的T細(xì)胞主要是Th2型的。有人認(rèn)為，Thl和Th2 細(xì)胞之間建立新的平衡對(duì)特異性過(guò)敏癥免疫的免疫機(jī)制很有利，而且 是重要的。這是由Th2細(xì)胞的減少，Th2向Thl細(xì)胞的轉(zhuǎn)變?cè)斐傻倪€ 是由Thl細(xì)胞的上調(diào)造成的，還存在爭(zhēng)議。最近有人提出調(diào)控型T細(xì)胞對(duì)過(guò)敏癥免疫的機(jī)制是重要的。根據(jù)這個(gè)模型，調(diào)控型T細(xì)胞，即 Th3或Trl細(xì)胞，下調(diào)了具有相應(yīng)抗原特異性的Thl及Th2兩種細(xì)胞。 盡管這還不明確，但一般認(rèn)為活性疫苗必須有能力刺激過(guò)敏原特異性 T細(xì)胞，優(yōu)選是TH1細(xì)胞。
特異性過(guò)敏癥免疫有很大的價(jià)值但沒(méi)有被廣泛應(yīng)用，其中主要有 兩點(diǎn)原因。 一個(gè)原因是傳統(tǒng)免疫程序很不方便，包括重復(fù)免疫，即在 幾個(gè)月的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行注射。另 一個(gè)更重要原因是有產(chǎn)生過(guò)敏性副反應(yīng) 的風(fēng)險(xiǎn)。針對(duì)傳染原的普通免疫通過(guò)單次或少數(shù)幾次次高劑量免疫接 種有效地進(jìn)行。這個(gè)策略卻不能用到過(guò)敏癥免疫上，因?yàn)橐呀?jīng)出現(xiàn)病 原性免疫應(yīng)答。
因此傳統(tǒng)的特異性過(guò)敏癥免疫要通過(guò)在一個(gè)長(zhǎng)期時(shí)間段內(nèi)進(jìn)行多 次皮下免疫接種而得以進(jìn)行。這個(gè)過(guò)程分為兩個(gè)階段，劑量上升階段 和維持階段。在劑量上升階段使用的劑量不斷增加，典型的是從微量 開(kāi)始，在16周的時(shí)間內(nèi)完成。達(dá)到推薦維持的劑量時(shí)，將此劑量就用 于維持階段，典型的是每六周進(jìn)行一次注射。每次注射之后病人必須 留下接受30分鐘的醫(yī)療觀察，因?yàn)榭赡苡羞^(guò)敏性副反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，這種 反應(yīng)雖然一般來(lái)說(shuō)極少見(jiàn)但有可能威脅到生命。另外，診所應(yīng)當(dāng)配有 支持緊急治療的設(shè)備。毫無(wú)疑問(wèn)，基于不同施用途徑的疫苗會(huì)消除或 減小目前基于皮下的疫苗所固有的過(guò)敏性副反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，也會(huì)促進(jìn)更 廣泛應(yīng)用，甚至可能使人們能在家自己進(jìn)行免疫。
30多年來(lái)，人們一直嘗試為特異性過(guò)敏癥免疫改進(jìn)疫苗，其中包 括各式各樣的方法。有幾種方法是通過(guò)修飾IgE的反應(yīng)性處理過(guò)敏原 本身。
已存在多種商品，如Alutard⑧SQ含有純化的Der p或Der f提 取物作為活性物質(zhì)，其用來(lái)治療對(duì)與用作活性物質(zhì)相同的過(guò)敏原組合 物的過(guò)敏癥。
Hales等人，CIinical and Experimental Al lergy， 2000， 30巻, 927-933頁(yè)，描述了一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)研究，其顯示了對(duì)來(lái)自Der p和Der f 的1類和7類過(guò)敏原的增殖及IL-5細(xì)胞因子的應(yīng)答，表明來(lái)自每個(gè)物種的全部純化的過(guò)敏原間有著很大程度的T細(xì)胞交叉反應(yīng)。
Smith等人，J Allergy Clin Immunol, 2001 Jun， 107 (6): 977-84，
描述了一項(xiàng)關(guān)于塵螨2類過(guò)敏原之間抗原性交叉反應(yīng)的分子基礎(chǔ)的研
究。這篇文章公開(kāi)了如下事實(shí)由于保守的抗原表面，Derp2和Der
f 2具有過(guò)敏性交叉反應(yīng)。
本發(fā)明的目的是提供治療屋塵螨過(guò)敏癥的改進(jìn)方法。
發(fā)明概述
本發(fā)明達(dá)到的目標(biāo)涉及Der f 2過(guò)敏原組合物在制備用于預(yù)防或 治療對(duì)Der p 2的過(guò)敏癥的疫苗中用途，以及Der p 2過(guò)敏原組合物 在制備用于預(yù)防或治療對(duì)Der f 2的過(guò)敏癥的疫苗中的用途。
本發(fā)明基于如下新的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Der p 2和Der f 2具有體內(nèi)T 細(xì)胞交叉反應(yīng)，即，實(shí)驗(yàn)表明rDer p 2和rDer f 2能刺激分離自rDer f 2致敏小鼠的T細(xì)胞進(jìn)行增殖。本發(fā)明還基于如下的驚人實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn) 在預(yù)防對(duì)Der f 2的過(guò)敏癥方面，Der p 2實(shí)際上比Der f 2本身還 要有效，反之亦然，即實(shí)驗(yàn)證明rDer p 2 SLIT處理后進(jìn)行rDer f 2 的攻擊產(chǎn)生顯著的耐受誘導(dǎo)，這與rDer f 2 SLIT處理后進(jìn)行rDer f 2攻擊的結(jié)果相反，反之亦然。
因此，本發(fā)明提供了只使用Der p過(guò)敏原物種和Der f物種之一 來(lái)預(yù)防或治療對(duì)這兩種物種的過(guò)敏癥的可能，而且為達(dá)到該目的有可 能使用這兩種物種中的任一種。而且，在使用一種物種來(lái)治療對(duì)另一 種物種的過(guò)敏癥中，對(duì)所述的另一種物種的過(guò)敏癥的預(yù)防或治療效果 比用相同物種進(jìn)行的治療效果有所提高。
本發(fā)明還涉及Der f 2過(guò)敏原組合物，其用作預(yù)防或治療對(duì)Der p 2的過(guò)敏癥的疫苗。同樣的，本發(fā)明還涉及Der p 2過(guò)敏原組合物， 其用作預(yù)防或治療對(duì)Der f 2的過(guò)敏癥的疫苗。
本發(fā)明還涉及預(yù)防或治療對(duì)Der p 2的過(guò)敏癥的方法，其包括將 含有Der f 2組合物的疫苗施用至受試者的步驟。同樣的，本發(fā)明涉 及預(yù)防或治療對(duì)Der f 2的過(guò)敏癥的方法，其包括將含有Der p 2組合物的疫苗施用至受試者的步驟。 附圖簡(jiǎn)述
圖U顯示了小鼠腹腔內(nèi)注射rDer f 2進(jìn)行兩次免疫接種且在體 外用rDer f 2或rDer p 2重刺激后的T細(xì)胞應(yīng)答。


圖1B顯示了小鼠腹腔內(nèi)注射rDer f 2進(jìn)行三次免疫接種且在體 外用rDer f 2或rDer p 2重剌激后的T細(xì)胞應(yīng)答。
圖2A顯示了小鼠模型實(shí)驗(yàn)的處理方案的時(shí)間表，該實(shí)驗(yàn)研究了 SLIT處理對(duì)耐受誘導(dǎo)的作用。
圖2B顯示了經(jīng)使用rDer f 2或rDer p 2的SLIT處理之后進(jìn)行 rDer f 2攻擊的小鼠的T細(xì)胞應(yīng)答。
圖2C顯示了經(jīng)^使用rDer f 2或rDer p 2的SLIT處理之后進(jìn)行 rDer p 2攻擊的小鼠的T細(xì)胞應(yīng)答。
發(fā)明詳述
Der f 2及Der p 2組合物
本發(fā)明的過(guò)敏原組合物可以為過(guò)敏原提取物、過(guò)敏原提取物的純 化級(jí)分、修飾的過(guò)敏原、重組過(guò)敏原或重組過(guò)敏原的突變體的形式。 過(guò)敏性提取物本來(lái)可能含有同 一種過(guò)敏原的一種或多種異構(gòu)體，而重 組過(guò)敏原典型情況下只有某個(gè)過(guò)敏原的一種異構(gòu)體。突變的過(guò)敏原可 能為低IgE結(jié)合的突變體，例如，根據(jù)WO 99/47680， WO 02/40676或 WO 03/096869 A2的低IgE結(jié)合過(guò)敏原。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式 中，過(guò)敏原組合物為過(guò)敏原提取物、過(guò)敏原提取物的純化級(jí)分或重組 過(guò)敏原。
過(guò)敏原可以以等摩爾的量存在，或其比例可以優(yōu)選地變化到多至 1: 20。
預(yù)防和治療過(guò)敏癥
特異性過(guò)敏癥免疫(Specific allergy vaccination ， SAV)， 之前稱作特異性免疫治療或脫敏，從本世紀(jì)初，就已經(jīng)用于治療I型IgE介導(dǎo)的過(guò)敏性疾病。
通過(guò)SAV得到的一般優(yōu)點(diǎn)為a )減輕過(guò)敏性癥狀及減少藥物的使 用，b)提高眼、鼻和肺對(duì)過(guò)敏原的耐受及c)降低皮膚反應(yīng)性(早期 和晚期反應(yīng))。
通過(guò)SAV得到的改進(jìn)的背后基本機(jī)制還不知道，但從最近10年進(jìn) 行的大量SAV研究中可以提取出很多共同特征l)總IgE的量在治療 期間沒(méi)有改變，2)過(guò)敏原特異性IgE的量在提高劑量時(shí)有短暫升高， 然后回落到初始(治療前)水平，3)表位特異性和IgE親和力保持不 變，4》過(guò)敏原特異性IgG，尤其是IgG4在SAV過(guò)程中迅速增加，5) 明顯起始了一種新的Th0/1/Reg反應(yīng)，以及6) Th2應(yīng)答似乎未改變。 在SAV誘導(dǎo)的作用和特異性IgG的產(chǎn)生之間沒(méi)有相關(guān)性。
SAV誘導(dǎo)了一種新的免疫應(yīng)答，其在治療期間成熟(ThO/1 T細(xì)胞 被募集，起始產(chǎn)生過(guò)敏原特異性IgX (X可以是Al、 A2、 Gl、 G2、 G3、 G4、 M或D)。由于新抗體應(yīng)答的親和力(或數(shù)量/親和力)，IgX逐 漸成熟，可以有效地與IgE竟?fàn)庍^(guò)敏原，阻止"正常的，，基于TM的 過(guò)敏性應(yīng)答，后者的特征為肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面上的結(jié)合有 受體的IgE進(jìn)行交聯(lián)。因此，臨床癥狀逐漸減輕。
據(jù)信本發(fā)明中實(shí)行的預(yù)防性治療至少部分地通過(guò)與上文揭示的 SAV的4幾制相同的才幾制起作用。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，所述疫苗用于預(yù)防或治療對(duì)此過(guò)敏 原未致敏的受試者的過(guò)敏癥。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，所述疫 苗用于預(yù)防或治療對(duì)此過(guò)敏原致敏的受試者的過(guò)敏癥。
在# 多地理區(qū)域，Der p和Der f屋塵螨兩種物種都存在于環(huán)境 中。相應(yīng)的，人群就分為對(duì)兩種物種都致敏的亞群、對(duì)兩種物種中一 種致敏而對(duì)另一種未致敏的亞群以及對(duì)兩種物種都不致敏的亞群。對(duì) 這兩種物種或其中之一未致敏的個(gè)體當(dāng)然可能某一天變成致敏。受試 者變成致敏不一定意味著該受試者具有過(guò)敏癥的任何臨床癥狀，但存 在這種臨床癥狀有時(shí)產(chǎn)生的風(fēng)險(xiǎn)。因此，當(dāng)兩種物種都存在于環(huán)境中 時(shí)，預(yù)防性或治療性處理對(duì)兩種物種產(chǎn)生的過(guò)敏癥是相關(guān)及必須的。根據(jù)本發(fā)明，這種對(duì)兩種物種的過(guò)敏癥的處理可以通過(guò)用兩種物種中 任一個(gè)而實(shí)現(xiàn)。
當(dāng)只有Der p和Der f屋塵螨兩種物種之一存在于環(huán)境中時(shí)，根 據(jù)本發(fā)明，用另 一個(gè)物種進(jìn)行預(yù)防性或治療性處理更有利。 疫苗制劑
本發(fā)明的疫苗可以是任何傳統(tǒng)的疫苗制劑，包括適用于腸胃外或 粘膜施用的疫苗。 腸胃外施用
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，通過(guò)腸胃外施用進(jìn)行所述處理。腸胃 外施用包括靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、皮下、真皮內(nèi)、表皮/透皮及腹 膜內(nèi)施用。配制以注射方式施用的疫苗使其適于有針或無(wú)針注射。
疫苗的制備一般是本領(lǐng)域熟知的。過(guò)敏原可以適當(dāng)與輔料混合， 這些輔料是藥用的并且還與活性成分兼容。合適的輔料的例子有水、 鹽水、葡萄糖、甘油、乙醇等，及它們的組合。疫苗可能另外還含有 其他物質(zhì)如濕潤(rùn)劑、乳化劑、緩沖劑或加強(qiáng)疫苗效果的佐劑。
疫苗可以與以下常常被用作這種制劑的輔料恰當(dāng)?shù)刂苿?，例如?用級(jí)的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。
疫苗的施用方式應(yīng)使其與劑量制劑相匹配，且施用數(shù)量是治療有 效的并具有免疫原性的。疫苗中包含的活性成分的量取決于待治療的 受試者(即受試者免疫系統(tǒng)對(duì)治療產(chǎn)生反應(yīng)的能力)、施用途徑及受 試者的年齡、體重。 一般地，治療可以例如由治療方案構(gòu)成，其包括 劑量上升階段(其中劑量慢慢增加)和維持階段(其中病人接受固定 的維持劑量)。劑量上升可以包括例如10-20次施用，每周或每?jī)芍?進(jìn)行施用。在維持劑量時(shí)病人例如是每月或兩個(gè)月進(jìn)行治療，持續(xù)多 至三年的時(shí)間。這樣的方式預(yù)斯會(huì)達(dá)到預(yù)防性或治療性作用所需要的 水平。
在腸胃外施用的情況下，例如通過(guò)皮下注射，治療包括至少一次 施用，優(yōu)選的是l-40次施用。合適的劑量變化范圍是大約0. OOOlpg -lOOOjiig。用SQ-u表示則劑量在20 SQ-u - 100000 SQ-u范圍內(nèi)變化。在本發(fā)明的方法的一個(gè)特定實(shí)施方式中，在第一個(gè)治療輪次結(jié)束 后進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)附加的治療輪次，由此進(jìn)一步重刺激(增強(qiáng))免疫
系統(tǒng)。這種附加的治療輪次例如包含了有限次的施用，例如1-10次， 優(yōu)選的為1-5次，施用是在一段例如一到四周的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行。病人可 能例如每年接受一或二次這種附加的治療輪次。這種治療方案的優(yōu)勢(shì) 在于它非常有效，而同時(shí)將腸胃外非施用的次數(shù)限制到最低。將腸胃 外施用的次數(shù)減少到最低是希望得到的，因?yàn)檫@種施用必須由專家進(jìn) 行，而且還需要一段時(shí)間的施用后看護(hù)。 粘膜施用
進(jìn)行過(guò)敏癥疫苗施用的粘膜可以是任何合適的粘膜，施用包括經(jīng) 口 (通過(guò)消化系統(tǒng)的粘膜)、鼻、陰道、舌下、眼睛、直腸、尿道、 乳房?jī)?nèi)、肺、耳(即經(jīng)耳施用)和口腔施用，尤其是口腔和舌下施用 (口腔粘膜施用)。過(guò)敏癥疫苗可以是以下形式噴劑、氣霧劑、混 合物、懸浮液、分散劑、乳劑、凝膠、糊劑、糖漿、乳骨劑、軟膏、 植入劑(耳、眼、皮膚、鼻、直腸、陰道)，乳房?jī)?nèi)制劑、陰道栓劑 (vagitories)、松劑或子宮檢劑(uteritories )。
據(jù)推測(cè)通過(guò)自然暴露于過(guò)敏原的粘膜進(jìn)行疫苗的粘膜施用是優(yōu)選 的。因此，對(duì)于空氣傳播粘膜抗原性物質(zhì)的過(guò)敏癥，優(yōu)選地通過(guò)呼吸 系統(tǒng)施用，尤其是口腔粘膜施用。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，受試者接受的免疫方案包括每天施 用疫苗。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，免疫方案包括每?jī)商焓┯谩?每三天施用或每四天施用。例如，免疫方案包括在超過(guò)4周，優(yōu)選的 為超過(guò)8周、更優(yōu)選的為超過(guò)12周、更優(yōu)選的為超過(guò)16周、更優(yōu)選 的為超過(guò)20周、更優(yōu)選的為超過(guò)24周、更優(yōu)選的為超過(guò)30周以及最 優(yōu)選的為超過(guò)36周的一段時(shí)間內(nèi)進(jìn)行疫苗的施用。
施用的時(shí)間段可以是連續(xù)的時(shí)間段。備選地，施用的時(shí)間段是不 連續(xù)的時(shí)間段，其被一個(gè)或多個(gè)非施用時(shí)間段打斷。優(yōu)選的是，(總) 非施用時(shí)間段短于(總)施用時(shí)間段。
本發(fā)明另一個(gè)的實(shí)施方式中，每天一次對(duì)病人進(jìn)行疫苗施用。備選地，每天兩次對(duì)病人進(jìn)行疫苗施用。疫苗可以是單劑量的疫苗。 口腔粘膜施用
口腔粘膜施用能通過(guò)使用任何可用的口腔粘膜施用制劑而進(jìn)行， 其中包括溶液、懸浮液、快速分散劑型、滴液和錠劑。
在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施條件中，使用了舌下免疫療法(SLIT)， 在這種情況下快速分散劑型、滴液和錠劑是優(yōu)選的制劑。
快速分散劑型的例子公開(kāi)于US-A-5, 648， 093、 W0 00/51568、 W0 02/13858、 W099/21579、W0 00/44351、 US+4， 371， 516及EP-278 877 還有 W0 2004/047794和 W0 2004/075875 ,以受讓人名稱為 ALK-Abel16 A/S提交。優(yōu)選的快速分散劑型是通過(guò)凍干法生產(chǎn)的。 優(yōu)選的基質(zhì)形成試劑為魚(yú)明膠及改性淀粉。
水溶液或快速分散片形式的過(guò)敏癥疫苗(比較WO 04/047794 )尤 其適合于口腔和舌下施用。
經(jīng)典的增量脫敏可用于本發(fā)明，其中將快速分散固體劑形式的過(guò) 敏原的劑量增加到某個(gè)特定的最大值。這種劑型每單位劑量的優(yōu)選效 價(jià)為150-1000000 SQ-u/劑型,更優(yōu)選的效價(jià)為500-500000 SQ-u/劑 型且更優(yōu)選的為1000-250000 SQ-u/劑型，甚至優(yōu)選的為1500-125000 SQ-u/劑型，最優(yōu)選的為1500-75000 SQ-u/劑型。
在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方式中，劑型為重復(fù)的單次劑量，優(yōu)選的在 1500-75000 SQ-u/劑型的范圍內(nèi)。
本發(fā)明方法中使用的過(guò)敏癥疫苗可以是任何適于粘膜表面施用的 制劑，包括噴劑、氣霧劑、混合物、片劑(腸衣及非腸衣)、膠嚢(硬 質(zhì)及軟質(zhì)、腸衣及非腸衣)、懸浮液、分散劑、顆粒、粉末、溶液、 乳劑、咀嚼片、滴劑、凝膠、糊劑、糖漿、乳膏劑、錠劑(粉末、顆 ?；蚱瑒?、快速分散片、滴液、氣體、蒸汽、軟膏劑、粘劑、埋植 劑(耳、眼、皮膚、鼻、直腸及陰道)、乳房?jī)?nèi)制備劑、陰道栓劑 (vagitories)，檢劑或子宮檢劑(uteritories )。
需要理解的是本發(fā)明的疫苗還可含有適合此種制劑的附加佐劑和 其他輔料。這些附加佐劑和輔料是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，包括溶劑、乳化劑、潤(rùn)濕劑、增塑劑、染料、填料、防腐劑、粘度調(diào)節(jié)劑、緩沖 劑、粘膜粘附物質(zhì)等。制劑策略的例子是本領(lǐng)域技術(shù)人員中熟知的。 佐劑
過(guò)敏癥疫苗包含的佐劑可以為任何傳統(tǒng)佐劑，包括含氧金屬鹽類、
熱不穩(wěn)定的腸毒素(LT )、霍亂毒素(CT )，霍亂毒素B亞基(cholera toxin B subunit ， CTB)、多聚化脂質(zhì)體、突變毒素(如LTK63和 LTR72)、微嚢劑、白細(xì)胞介素(如IL-ip、 IL-2、 IL-7、 IL-12、 INFy)、 GM-CSF、 MDF衍生物、CpG寡聚核苷酸、LPS、 MPL、磷腈、Adju-Phos⑧、 葡聚糖、抗原制劑、脂質(zhì)體、DDE、 DHEA、 DMPC、 DMPG、 D0C/明砜 復(fù)合體、弗氏不完全佐劑、ISC0Ms⑧、LT口服佐劑、胞壁酰二肽、單 磷酰酯質(zhì)A、胞壁酰三肽及磷脂酰乙醇胺。
含氧金屬鹽類可以是提供所需作用的任何含氧金屬鹽類。在一個(gè) 優(yōu)選的實(shí)施方式中，含氧金屬鹽類的陽(yáng)離子選自Al、 K、 Ca、 Mg、 Zn、 Ba、 Na、 U、 B、 Be、 Fe、 Si、 Co、 Cu、 Ni、 Ag、 Au、及Cr。在一個(gè) 優(yōu)選的實(shí)施方式中，含氧金屬鹽類的陰離子選自硫酸根、氫氧根、 磷酸根、硝酸根、碘酸根、溴酸根、碳酸根、水合物、醋酸根、檸檬 酸根、草酸根、酒石酸根及其混合的形式。實(shí)例有氫氧化鋁、磷酸鋁、 硫酸鋁、硫酸鉀鋁、磷酸釣、Maalox(氬氧化鋁和氬氧化鎂的混合物)、 氫氧化鈸、氫氧化鋅、碳酸鋅、氯化鋅及硫酸鋇。
定義
與本發(fā)明相關(guān)的用到以下定義
術(shù)語(yǔ)"Derf，，指叫{故粉塵螨(Dermaphagoides farinae)的屋塵 螨物種。術(shù)語(yǔ)"Derf 2"指根據(jù)過(guò)敏原命名分委員會(huì)的過(guò)敏原命名法 屬于2類的Der f過(guò)敏原，過(guò)敏原命名分委員會(huì)在國(guó)際免疫學(xué)會(huì)聯(lián)合 會(huì)(International Union of Immunological Societies ， I. U. I. S.) 及世界衛(wèi)生組織(World Health Organisation W. H. 0.)主持下運(yùn)作。
術(shù)語(yǔ)"Der p，，指叫做戶塵螨(Dermaphagoides pteronyss inus ) 的屋塵螨物種。術(shù)語(yǔ)"Derp2"指根據(jù)過(guò)敏原命名分委員會(huì)的過(guò)敏原命名法屬于2類的Der f過(guò)敏原，過(guò)敏原命名分委員會(huì)在國(guó)際免疫學(xué) 協(xié)會(huì)聯(lián)合會(huì)(International Union of Immunological Societies (I.U. I.S.))及世界衛(wèi)生組織(World Health Organisation (W. H. 0.)) 主持下運(yùn)作。
術(shù)語(yǔ)"治療"表示部分或完全治愈或減輕癥狀，或抑制癥狀的誘因。
術(shù)語(yǔ)"預(yù)防"指任何類型的預(yù)防性治療，包括部分或完全預(yù)防或 抑制癥狀的發(fā)展或癥狀誘因的發(fā)展。
術(shù)語(yǔ)"口腔粘膜施用"指一種施用途徑，其中將劑型置于舌下或 口腔任何其他地方(口腔施用)，以使活性成分與病人的口腔粘膜或 咽部粘膜接觸，使活性成分產(chǎn)生局部或全身作用?？谇徽衬な┯猛緩?的一個(gè)實(shí)例為舌下施用。
術(shù)語(yǔ)"舌下施用"指一種施用途徑，其中劑型置于舌下，以產(chǎn)生 活性物質(zhì)的局部或全身效應(yīng)。
術(shù)語(yǔ)"SQ-u，，指SQ-單位SQ-單位按照ALK-Abel16 A/S的"SQ生 物效能"-標(biāo)準(zhǔn)化方法確定，其中IOO， 000 SQ單位等同于標(biāo)準(zhǔn)皮下維持 劑量。 一般的，根據(jù)過(guò)敏原來(lái)源(提取物由此產(chǎn)生)和所使用的生產(chǎn) 過(guò)程，lmg的提取物含有100， 000到1， 000， 000的SQ-單位。精確的 過(guò)敏原的量可由免疫的方法確定，即測(cè)定總的主過(guò)敏原含量和總過(guò)敏 原活性。
術(shù)語(yǔ)"過(guò)敏癥"指由免疫學(xué)機(jī)制介導(dǎo)的、對(duì)環(huán)境過(guò)敏原產(chǎn)生的任 何類型的超敏反應(yīng)，包括I-IV型超敏反應(yīng)，其中包括過(guò)敏性鼻炎、哮 喘及特應(yīng)性皮炎。
術(shù)語(yǔ)"未致敏"指待治療的受試者沒(méi)有顯示出對(duì)施用的過(guò)敏原的 特異性IgE應(yīng)答。本發(fā)明涉及到的詞句"沒(méi)有顯示出對(duì)過(guò)敏原的特異 性IgE應(yīng)答"指在傳統(tǒng)免疫測(cè)定中檢測(cè)不到一定水平的過(guò)敏原特異性 IgE抗體。
詞句"對(duì)Der p 2的過(guò)敏癥"指對(duì)環(huán)境中這樣的Der p或其他含 有Der p 2的組合物的過(guò)敏癥。詞句"對(duì)Der f 2的過(guò)敏癥，，指對(duì)環(huán)境中這樣的Der f或其他含 有Der f 2的組合物的過(guò)敏癥。
實(shí)施例
實(shí)施例1:用重組DER F 2和DER P2進(jìn)行SLIT治療 方法和材料
從大腸桿菌(E. coli)中表達(dá)和純化rDer f 2和rDer p 2 用PCR反應(yīng)擴(kuò)增編碼Der f 2和Der p 2的cDNA，所使用的引物 為derp2D0ndel: gcgcgccatatggatcaagtcgatgtcaaag， derp2UPxhoI: gcgcgcctcgag ttaatcgcggattttagcatg, derf2D0ndel: gcgcgccatatg gatcaggtcgatgtcaaag， derf2UPxhol: gcgcgcctcgag ttaatcgcggattt tagcgtg,且以攜帶Der f 2和Der p 2的cDNA的質(zhì)粒(pCo06和pColO) 為模板。將PCR產(chǎn)物克隆入pETDuet-1載體，產(chǎn)生一個(gè)額外的N末端 曱硫氨酸。將此載體引入大腸桿菌菌抹BL21 (DE3)。通過(guò)加入lmM 異丙基-P-硫代半乳糖苷(IPTG) ， 37。C下孵育過(guò)夜誘導(dǎo)rDer f 2和 rDer p 2蛋白的表達(dá)。將純化的包涵體在8M尿素，20 mM Tris pH 8. 5 中溶解過(guò)夜。通過(guò)將迅速稀釋到尿素終濃度為0.65M，并在室溫孵育1 小時(shí)，使蛋白質(zhì)重折疊。通過(guò)離心去除沉淀的蛋白質(zhì)。重折疊的蛋白 質(zhì)通過(guò)5ml的HiTrapQ HP柱子(Amersham Biosciences )在20 mM Tris pH 8.5條件下進(jìn)行純化。正確折疊的蛋白質(zhì)在90 mM NaCl下洗脫。 用10mM腿HCO3通過(guò)Superdex 75 HiLoad 16/60柱子進(jìn)一步純化rDer f 2和rDer p 2。純化蛋白進(jìn)4亍凍干。 過(guò)敏原提取物
Der f過(guò)敏原提取物中的Der f l:Der f 2比例為1: 0.45，而 Der p過(guò)敏原提取物中的Der p 1: Der p 2比例為1: 1.22。
Der f和 Der p提取物濃度是根據(jù)它們的Der f 2或Der p 2含量給出的， 而不是總提取蛋白濃度。
圓二色性(CD)
使用0. lcm的正方形石英杯通過(guò)OLISDSMCD-分光光度計(jì)(Bogart,
16GA， USA)測(cè)量CD光鐠。在15。C、 190-265 nm范圍內(nèi)記錄光鐠。所用 的樣品濃度大約為300 Mg/ml，溶于10mM磷酸二氫鈉pH7. 0中。 小鼠
6-8周的雌性SJL小鼠購(gòu)自Taconic。小鼠在無(wú)特定病原體的環(huán)境 中，12小時(shí)光照12小時(shí)黑暗循環(huán)下籠養(yǎng)。本報(bào)告中描述的所有實(shí)驗(yàn) 都依據(jù)丹麥法律進(jìn)行。
免疫接種
對(duì)幾組小鼠進(jìn)行免疫接種，多至三次腹腔內(nèi)注射吸附于氫氧化鋁 的重組過(guò)敏原。在最后一次免疫接種后的10-12天處死小鼠，收集血 液并制備血清。
SLIT治療
小鼠被給予SLIT治療，以日劑量一種或多種以下物質(zhì)rDerf2、 rDer p 2或緩沖液，每周5天，共2-4周，如結(jié)果部分所示。 T細(xì)胞增殖及細(xì)胞因子產(chǎn)生
在RPMI-1640 (BioWhittaker， Belgium)將脾臟被撕成單細(xì)胞懸 液并用RPMI-1640洗滌三次。將含有50 g/Ml慶大霉素(Gibco， UK)， 1% Nutridoma (Roche， Germany) 1.5 mM —硫代甘油(Sigma)及1% 胎牛血清(Gibco， UK)的RPMI-1640中的3 x 105個(gè)細(xì)胞加到平底96 孔培養(yǎng)板(Nunc)的每個(gè)孔中，細(xì)胞由不同濃度的rDer p或rDer f 進(jìn)行刺激。細(xì)胞在37。C和5% C02下進(jìn)行培養(yǎng)。通過(guò)以下方法測(cè)量增 殖，加入O. 5jaCi的3H-胸腺嘧啶到每個(gè)孔，再培養(yǎng)18小時(shí)，之后將 細(xì)胞收集到Tomtec96孔板收集器(Tomtec， USA)上，使用Wallac Microbeta 1450液體閃爍計(jì)數(shù)器(Wallac， Finland)計(jì)數(shù)摻入的》文射 標(biāo)記。
數(shù)據(jù)分析
實(shí)驗(yàn)組之間的差異通過(guò)非配對(duì)Mann-Whitney測(cè)試進(jìn)行評(píng)估。使用 GraphPad Prism (Graphpad Software, CA， USA)計(jì)算出小于或等于 0. 05的概率被認(rèn)為是顯著的。
抗體Der f或Der p特異性血清IgGl、 IgG2a、 IgG2b、 IgE和IgA的 水平使用ADVIA Centauer平臺(tái)(Bayer Diagnostics, Tarrytown, New York)進(jìn)行測(cè)量。共價(jià)掇合至順磁性粒子的羊抗鼠Ig(Southern Biotechnology, Birmingham, Alabama) 被用來(lái)捕捉不同血清Ig-同 型抗原。結(jié)合于固相上的Ig可以與液相中純化的生物素化的Der f 或Der p提取物，或重組Der f 2或Der p 2反應(yīng)，再用吖，定酯標(biāo)記 的鏈霉親和素檢測(cè)其化學(xué)發(fā)光。
純化和結(jié)構(gòu)的結(jié)果及討論 rDer f 2和rDer p 2的純化
使用的是大腸桿菌Der f 2和Der p 2表達(dá)系統(tǒng)。大腸桿菌能夠
生產(chǎn)大量的蛋白質(zhì)，并且重組蛋白質(zhì)的起始表達(dá)量很高，大約產(chǎn)量為 lOOmg包涵體/升細(xì)胞培養(yǎng)物。然而，重折疊時(shí)，>90%的蛋白質(zhì)沉淀。 沉淀的蛋白通過(guò)離心去除。剩下的蛋白質(zhì)中，非正確折疊的蛋白質(zhì)與 正確折疊的蛋白質(zhì)通過(guò)陰離子色譜分離。從大腸桿菌中得到的重折疊 并純化的rDer f 2和rDer p在SDS-PAGE上得到一個(gè)漂亮的單一條帶。 通過(guò)CD光譜學(xué)驗(yàn)證蛋白質(zhì)折疊。將純化的天然Der f 2和Der p 2 的CD光譜和純化的折疊的重組Der f 2和Der p 2的CD光語(yǔ)進(jìn)行比 較。CD光語(yǔ)顯示了天然和重組過(guò)敏原都有表征P鏈蛋白質(zhì)的最大和最 小值。天然和重組過(guò)敏原的曲線稍微不同。因?yàn)橹亟M過(guò)敏原是重折疊 了，所以可能該蛋白質(zhì)有一個(gè)微小的部分折疊不正確。而且，過(guò)敏原 的分子量通過(guò)質(zhì)譜來(lái)證實(shí)，而蛋白質(zhì)總體的折疊通過(guò)蛋白質(zhì)與人螨特 異性IgE(human mite specific IgE ， RIE)的結(jié)合來(lái)測(cè)試。
T細(xì)胞應(yīng)答及SLIT治療誘導(dǎo)的耐受的結(jié)果 引言
已顯示1類和2類過(guò)敏原使超過(guò)80%的具有屋塵螨過(guò)敏癥的病人 致敏。已經(jīng)克隆并表征了幾個(gè)重組過(guò)敏原，包括Der f 2和Der p 2， 這些過(guò)敏原顯示與本原過(guò)敏原相似的過(guò)敏活性。與屋塵螨提取物相比，重組過(guò)敏原含有已知量的過(guò)敏原，沒(méi)有附加的過(guò)敏原及物質(zhì)，如LPS。 因此，重組單過(guò)敏原可用于對(duì)由屋塵螨引起的過(guò)敏性疾病的診斷和免 疫療法。小鼠模型在研究重組過(guò)敏原免疫治療中的用途很重要，例如 可用來(lái)確定誘導(dǎo)對(duì)提取物的耐受所需要的不同過(guò)敏原的范圍。重組螨 過(guò)敏原在研究螨過(guò)敏原交叉反應(yīng)性時(shí)也是非常有用的，因?yàn)檫@些過(guò)敏 原不是和其他過(guò)敏原和物質(zhì)同時(shí)施用的。本文研究了是否可能使用重 組Der f 2建立鼠口服耐受模型，以研究rDer f 2和rDer p 2的T 細(xì)胞交叉反應(yīng)性。而且還研究了用重組過(guò)敏原Der f 2和Der p 2的 SLIT治療對(duì)T細(xì)胞應(yīng)答的效果。
對(duì)用重組Der f 2進(jìn)行免疫接種產(chǎn)生的T細(xì)胞應(yīng)答 研究了 rDer f 2對(duì)T細(xì)胞應(yīng)答的免疫作用。SJL小鼠分別腹腔內(nèi) 注射接種二次和三次10|u g的rDer f 2，隨后用10 ju g/ml重組Der f 2或Der p 2進(jìn)^f亍體外重刺激。重組Der f 2 i秀導(dǎo)T細(xì)胞應(yīng)答，相 對(duì)于原始(naive)小鼠，此應(yīng)答在接種兩次(圖1A)和三次(圖1B) 時(shí)明顯更高。在免疫接種之后觀察到很低水平的過(guò)敏原特異性血清 IgE、 IgGl和IgG2a (數(shù)據(jù)未顯示)。基于這些結(jié)果，選擇了 SLIT治 療后三次腹腔內(nèi)注射重組過(guò)敏原進(jìn)行攻擊的方案。
為研究rDer f 2和rDer p 2之間的T細(xì)胞的交叉反應(yīng)性，4吏用 兩種過(guò)敏原對(duì)T細(xì)胞進(jìn)4亍重刺激(圖1 ) 。 rDer f 2和rDer p 2 二 者都可以刺激rDer f 2致敏小鼠中T細(xì)胞的擴(kuò)增。這證明了 rDer f 2 和rDer p 2之間的體內(nèi)T細(xì)胞交叉反應(yīng)性。
SLIT治療誘導(dǎo)Der f 2攻擊的SJL小鼠產(chǎn)生耐受 在制定了免疫接種日程后，研究SLIT治療對(duì)SJL小鼠的作用。用 10jug的rDer f2、 rDer p2或緩沖液舌下處理SJL小鼠，每周五天， 共四周。接著腹腔內(nèi)注射rDer f 2或者rDer p 2進(jìn)行攻擊(圖2A )。 最后一次攻擊后的十天到十二天，確定脾細(xì)胞中過(guò)敏原特異性的體外 T細(xì)胞增殖，并收集血清用來(lái)確定特異性抗體水平。另外，在SLIT之 后、第一次攻擊之前收集血液樣品用于血清抗體分析。
用rDer f 2進(jìn)4亍SLIT治療，隨后進(jìn)4亍rDer f 2的攻擊(圖2B)或用rDer p 2進(jìn)行SLIT治療，隨后進(jìn)行rDer p 2的攻擊(圖2C ) 似乎相對(duì)于緩沖液治療組對(duì)T細(xì)胞增殖沒(méi)有作用。然而對(duì)rDer f 2 攻擊的小鼠進(jìn)行rDer p 2SLIT治療相對(duì)于緩沖液治療組導(dǎo)致顯著的耐 受誘導(dǎo)(圖2B)。與此類似，用rDer f 2 SLIT治療及其后rDer p 2 攻擊相對(duì)于緩沖液治療的小鼠組導(dǎo)致T細(xì)胞應(yīng)答減少(圖2C)，然而 并不顯著。這表明SLIT治療在使用與攻擊相同的過(guò)敏原進(jìn)行治療的情 況下，對(duì)T細(xì)胞應(yīng)答沒(méi)有作用，但似乎當(dāng)SLIT治療使用來(lái)自另一螨物 種相應(yīng)的過(guò)敏原時(shí)有作用。在SLIT和第一次攻擊之間以及三次攻擊之 后，所有組的抗體水平都類似并且很低。 討論
在本研究中，研究原始動(dòng)物的口服耐受主要是為了研究對(duì)T細(xì)胞 應(yīng)答的作用。在建立攻擊日程的過(guò)程中，觀察到rDerf2和rDer p 2 之間有T細(xì)胞的交叉反應(yīng)性。
rDer p 2 SLIT治療隨后進(jìn)行rDer f 2攻擊導(dǎo)致顯著的耐受誘導(dǎo)， 這與rDer f 2 SLIT治療相反。進(jìn)一步，在rDer f 2 SLIT治療隨后 進(jìn)行rDer p 2攻擊的相對(duì)實(shí)驗(yàn)中，T細(xì)胞應(yīng)答有不顯著的下調(diào)的趨勢(shì)。
人們推測(cè)rDer f 2 - rDer p 2 SLIT治療的作用的逆相關(guān)可能是 T細(xì)胞亞最優(yōu)刺激的結(jié)果。rDer f 2與rDer p 2的氨基酸序列相差 15個(gè)氨基酸，這些氨基酸沿著整個(gè)序列分布。因此，所得的來(lái)自Derf 2的T細(xì)胞配體是肽的混合物，其中一部分與來(lái)自Der p 2的肽混合 物相比，在氨基酸序列上有一個(gè)或多個(gè)差異。據(jù)推測(cè)這種變體肽可以 產(chǎn)生T細(xì)胞的亞最優(yōu)刺激。
重組過(guò)敏原能夠誘導(dǎo)T細(xì)胞耐受的事實(shí)說(shuō)明2類屋塵螨過(guò)敏原處于
分離形式時(shí)具有治療潛能。需要進(jìn)一步研究以驗(yàn)證重組螨過(guò)敏原能誘 導(dǎo)對(duì)于含有多種過(guò)敏原的螨提取物的耐受。使用高劑量重組過(guò)敏原在 更長(zhǎng)時(shí)間進(jìn)行研究及使用多種過(guò)敏原的SLIT治療可以得到重組過(guò)敏原 作為SLIT潛在候選的更多信息。重組2類屋塵螨過(guò)敏原Der f 2或者Der p 2 ，還有其他重組屋塵螨過(guò)敏原被證明是SLIT治療中螨提取物出色的 替代物。建立了使用Der f和Der p提取物的鼠口服耐受模型和重組Der f2。 rDerf2、 rDer p 2攻擊的小鼠中進(jìn)行使用單個(gè)過(guò)敏原rDer f 2和rDer p 2的SLIT治療似乎沒(méi)有誘導(dǎo)對(duì)相同的過(guò)敏原的耐受。相反rDer p 2 過(guò)敏原誘導(dǎo)對(duì)rDer f2的耐受，并且rDer p 2似乎誘導(dǎo)了對(duì)rDer f 2 的耐受。
權(quán)利要求
1.Der f 2過(guò)敏原組合物在制備用于預(yù)防或者治療對(duì)Der p 2的過(guò)敏癥的疫苗中的用途。
2、 Der p 2過(guò)敏原組合物在制備用于治療對(duì)Der f 2的過(guò)敏癥的 疫苗中的用途。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1或2的用途，其中所述過(guò)敏原組合物是過(guò)敏原提 取物、過(guò)敏原提取物的純化級(jí)分或者重組的過(guò)敏原。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的用途，其中所述疫苗適合于腸胃 外施用或粘膜施用。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4的用途，其中所述疫苗適合于粘膜施用。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5的用途，其中所述疫苗適合于口腔粘膜施用。
7、 根據(jù)權(quán)利要求6的用途，其中所述疫苗適合于舌下施用。
8、 根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的用途，其中所述疫苗用于在對(duì)所 述過(guò)敏原未致敏的受試者中預(yù)防或治療過(guò)敏癥。
9、 根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的用途，其中所述疫苗用于在對(duì)所 述過(guò)敏原致敏的受試者中預(yù)防或治療過(guò)敏癥。
10、 Der f 2過(guò)敏原組合物，其用作預(yù)防或治療對(duì)Der p 2的過(guò)敏 癥的疫苗。
11、 Der p 2過(guò)敏原組合物，其用作治療對(duì)Der f 2的過(guò)敏癥的疫苗。
12、 根據(jù)權(quán)利要求10或11的組合物，其中所述過(guò)敏原組合物是過(guò) 敏原提取物、過(guò)敏原提取物的純化級(jí)分或者重組的過(guò)敏原。
13、 根據(jù)權(quán)利要求10-12中任一項(xiàng)的組合物，其中所述疫苗適合于 腸胃外施用或粘膜施用。
14、 根據(jù)權(quán)利要求13的組合物，其中所述疫苗適合于粘膜施用。
15、 根據(jù)權(quán)利要求14的組合物，其中所述疫苗適合于口腔粘膜施用。
16、 根據(jù)權(quán)利要求15的組合物，其中所述疫苗適合于舌下施用。
17、 根據(jù)權(quán)利要求10-16中任一項(xiàng)的組合物，其用于在對(duì)所述過(guò)敏 原未致敏的受試者中預(yù)防或治療過(guò)敏癥。
18、 根據(jù)權(quán)利要求10-16中任一項(xiàng)的組合物，其用于在對(duì)所述過(guò)敏 原致敏的受試者中預(yù)防或治療過(guò)敏癥。
19、 預(yù)防或治療對(duì)Der p 2的過(guò)敏癥的方法，其包括將含有Der f 2組合物的疫苗施用于受試者的步驟。
20、 預(yù)防或治療對(duì)Der f 2的過(guò)敏癥的方法，其包括將含有Der p 2 組合物的疫苗施用于受試者的步驟。
全文摘要
本發(fā)明涉及使用Der f 2過(guò)敏原組合物在制備用于預(yù)防或治療對(duì)Derp 2的過(guò)敏癥的疫苗中的用途，還涉及使用Der p 2過(guò)敏原組合物在制備用于治療Der f 2的過(guò)敏癥的疫苗中的用途。
文檔編號(hào)C07K14/435GK101595126SQ200880003408
公開(kāi)日2009年12月2日 申請(qǐng)日期2008年1月30日 優(yōu)先權(quán)日2007年1月30日
發(fā)明者B·羅斯 申請(qǐng)人:阿爾卡貝洛股份公司