專利名稱：：一種葡聚四糖烷基苷類化合物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及有生物活性的、可作醫(yī)藥用途的一種葡聚四糖垸基苷類化合物的制備方法，具體地說是十二烷基(3-D-葡萄吡喃糖基-(l—3)-[p-D-葡萄吡喃糖基-(1">6)]-^>葡萄吡喃糖基-(1~>6)-P-D-葡萄吡喃糖苷的制備方法。
背景技術(shù)：
：根據(jù)目前所知，能增強(qiáng)動(dòng)物免疫能力并具有抗腫瘤活性的糖，大多為多糖，如香菇多糖、靈芝多糖、裂裥多糖等由實(shí)用菌中提取的多糖，或中草藥中提取的多糖。己研究清楚的、有明確免疫、抗腫瘤活性的寡糖并不多。研究認(rèn)為，糖的抑制腫瘤作用是通過人體的免疫系統(tǒng)來實(shí)現(xiàn)的，機(jī)體中免疫活性細(xì)胞的種類主要有單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)、淋巴細(xì)胞系統(tǒng)和粒細(xì)胞系統(tǒng)等。當(dāng)機(jī)體具有正常的生理功能時(shí)，這些免疫活性細(xì)胞能吞噬并清除衰亡突變細(xì)胞(如癌細(xì)胞)、各種病原體(如細(xì)菌、真菌、寄生蟲)等。部分專家認(rèn)為，人人體內(nèi)都有癌細(xì)胞存在。帶有癌細(xì)胞的健康人不患癌癥主要是因?yàn)槿梭w中的免疫活性細(xì)胞的存在使癌細(xì)胞的繁殖速度與清除衰亡細(xì)胞速度處于一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，若這一動(dòng)態(tài)平衡因機(jī)體免疫系統(tǒng)的損傷而破壞，則癌細(xì)胞的繁殖速度就會(huì)大大高于被吞噬清除的速度，表現(xiàn)為癌癥的發(fā)作。普通的化療藥物沒有專一性，在殺害腫瘤細(xì)胞的同時(shí)也將大量正常細(xì)胞殺死，對(duì)人體有較大的毒副作用，也損傷了患者的元?dú)猓鎏砹瞬∪送耆祻?fù)的難度。糖的抗癌作用不是通過直接殺死癌細(xì)胞，它是通過宿主中介而起作用，即刺激機(jī)體的各種免疫活性細(xì)胞的成熟、分化和繁殖，使機(jī)體免疫系統(tǒng)恢復(fù)平衡，由機(jī)體的本身抗體去清除、吞噬癌細(xì)胞，它對(duì)人體細(xì)胞無任何毒害作用。最新研究表明寡糖具有與相應(yīng)多糖相似或更優(yōu)良的生理功能，如抗癌藥物香菇多糖的核心結(jié)構(gòu)片段-香菇寡糖(六糖)-具有比香菇多糖更優(yōu)良的抗癌活性(參見JunNing，WenhuiZhang,YuetaoYi，GuangbinYang，ZhikuiWu，JieYi，F(xiàn)anzuoKong，2003,11(10):2193-2203);肝素多糖降解成肝素寡糖后生理功能明顯增強(qiáng)，銷售價(jià)格也翻了幾倍。據(jù)此，為了研究寡糖的結(jié)構(gòu)與抗癌活性的關(guān)系，我們?cè)O(shè)計(jì)、合成了十二烷基七糖苷(參見衡林森，李志民.一類非天然活性寡糖類化合物及其制備方法和應(yīng)用[P].中國(guó)專利ZL200510020578.4.2005-10-26.)，此后又設(shè)計(jì)、合成了十二烷基B-D-葡萄吡喃糖基-(1—3)-[B-0-葡萄吡喃糖基-(1-6)]-B-0-葡萄吡喃糖基-(1-6)-B-D-葡萄吡喃糖苷(參見呂海斌，蔣曉慧，衡林森.十二烷基3-D-葡萄吡喃糖基-(l—3)-[B-D-葡萄吡喃糖基-(1—6)]-B-0-葡萄吡喃糖基-(1—6)-B-D-葡萄吡喃糖苷的合成.化學(xué)研究與應(yīng)用，2007，19(6):637-640)，動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果顯示，該化合物對(duì)荷S180小鼠腫瘤抑制作用比十二垸基七糖苷對(duì)荷S180小鼠腫瘤抑制作用更好；但文獻(xiàn)報(bào)道的合成路線較長(zhǎng)，收率較低。文獻(xiàn)報(bào)道以3-0-烯丙基-6-0-乙?；?2，4-二-0-苯甲?；?a-D-葡萄吡喃糖基三氯乙酰亞氨酯為單糖供體與十二醇偶聯(lián)，再選擇性脫去6位乙?；玫絾翁鞘荏w，單糖受體與三氯乙酰亞氨酯的三糖供體偶聯(lián)成四糖，該四糖脫去烯丙基得到未完全保護(hù)的四糖，再脫去四糖上的所有保護(hù)基便得到目標(biāo)化合物。但從葡萄糖開始為原料需要9步反應(yīng)才能制得單糖受體，從葡萄糖開始為原料需要11步反應(yīng)才能制得三糖供體，總共需要25步反應(yīng)才能制得目標(biāo)化合物。因此，對(duì)該化合物的合成方法進(jìn)行改進(jìn)，縮短合成路線，降低合成費(fèi)用是很有必要的。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種十二烷基P-D-葡萄吡喃糖基-(l43)-[P-D-葡萄吡喃糖基-(l46)]-l3-D-葡萄吡喃糖基-(1—6)-P-D-葡萄吡喃糖苷的簡(jiǎn)便、實(shí)用的制備方法。本發(fā)明采用乙酰基作為糖基供體的離去基團(tuán)，和醇受體反應(yīng)制得目標(biāo)化合物。本發(fā)明先以D-葡萄糖為起始原料，經(jīng)五步反應(yīng)制得單糖受體6，然后以路易斯酸做催化劑，在弱極性溶劑中與三糖供體7偶聯(lián)制得帶保護(hù)基的四糖8，再去保護(hù)即得到所需要的四糖9。合成路線如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>所述的催化劑路易斯酸可用任一可行的路易斯酸，優(yōu)選的為三氟化硼-乙醚、三甲基硅三氟甲磺酸酯等。所述的弱極性溶劑無特別限制，可選二氯甲烷、乙醚、乙腈、甲苯等。本發(fā)明所述的制備方法，以葡萄糖為起始原料，經(jīng)5步反應(yīng)即制得單糖受體6;以葡萄糖為起始原料，經(jīng)9步反應(yīng)制得即三糖供體7,總共需要16步反應(yīng)便能制得目標(biāo)化合物。與文獻(xiàn)報(bào)道的方法相比，使其合成反應(yīng)的步驟縮短了九步，總收率提高了54%。此外，本發(fā)明采用乙酰基作為糖基供體的離去基團(tuán)，而文獻(xiàn)報(bào)道的方法采用的是三氯乙酰亞氨酯作為糖基供體的離去基團(tuán)。由于三氯乙酰亞氨酯糖基供體容易分解，所以不宜長(zhǎng)時(shí)間保存。因此，本發(fā)明既可減少合成反應(yīng)步驟，又便于長(zhǎng)時(shí)間保存，具有極大的實(shí)用價(jià)值。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)地說明。實(shí)施例l1、單糖受體6的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>(1)、單糖5的制備在反應(yīng)器中，加入D-葡萄糖1(3.60g，20.0mmol)、三苯甲基氯(6.69g,24.0mmol)和吡啶40毫升，加熱到7(TC，攪拌反應(yīng)8小時(shí)生成2，冷卻到or，加入苯甲酰氯(10.3mL，88mmol),室溫?cái)嚢璺磻?yīng)24小時(shí)，加入二氯甲烷100毫升，依次用水、1NHC1、飽和NaHC03/H20洗，無水Na2S04干燥，旋干得到3,將3用40毫升二氯甲烷使其溶解，向此溶液中加入20毫升乙酸酐、20毫升冰乙酸和10毫升濃硫酸，室溫反應(yīng)2小時(shí)后，加入150毫升二氯甲烷，然后在攪拌下加入200毫升水，靜置分層后棄去水相，然后用飽和碳酸氫鈉溶液將有機(jī)相中的酸洗去，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥后，旋干得到4，將4、十二醇(4.4克，24毫摩爾)、二氯甲烷100毫升、三氟化硼乙醚溶液6毫升加入反應(yīng)器中，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)后，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、食鹽水溶液、水洗滌，濃縮后上硅膠柱精制，用石油醚/乙酸乙酯(7/1)作為淋洗液，收集相應(yīng)組分，得到5(9.0克),產(chǎn)率64%(四步總收率)，[cx]d-6.2Q(c1.0，CHC13);!HNMR(400MHz，CDCl3):58.18國(guó)7.24(m，15H，Bz//)，5.86(t,1H，《/=9.8Hz)，5.59(t，1H，《/=9.8Hz)，5.49(dd,1H，《^8.0,9.6Hz)，4.79(d，1H，《/=8.0Hz，H-l)，4.35國(guó)4,25(m,2H)，4.00(m，1H)，3.93(m，1H)，3.53(m，lH)，2.05(s，3H)，1.30-1.10(m,20H,CH2C10^20CH3)，0.88(t，3H，《/=7.0Hz，CH2C〃3).元素分析實(shí)測(cè)值(理論值)%:C41H50O10:C，69.91(70.07);H，7.31(7.17)。(2)、單糖受體6的制備在反應(yīng)器中，加入5(0.98克，1.4毫摩爾)、二氯甲垸2毫升、無水甲醇40毫升、乙酰氯0.2毫升，室溫放置5小時(shí),三乙胺中和，蒸出溶瓶二氯甲烷溶樣上硅膠柱精制，用石油醚/乙酸乙酯(3/1)作為淋洗液，收集相應(yīng)組分，得到6C0.80克)，產(chǎn)率86%，[a]d-9.80(cl.0,CHCl3);'HNMR(400MHz，CDCl3):S7.97腳7.27(m,15H，Bz/T)，5.93(t，1H，J^9.8Hz),5.52-5.46(m，2H)，4.82(d,1H，7=7.6Hz，H-l),3.94(m，1H),3.86(dd，1H，^2.0，12.4Hz)，3.81-3.73(m，2H),3.53(m，1H)，1.52國(guó)1.05(m，20H，CH2C10^2。CH3)，0.88(t，3H，《/=7.2Hz,CH2C/f3).元素分析實(shí)測(cè)值(理論值)％:C39H4809:C，70.58(70.89);H，7.61(7.32)。2、三糖供體7的制備三糖供體4的制備,在本發(fā)明之前已有公開記載，可按公開文獻(xiàn)(JunNing，WenhuiZhang,YuetaoYi,GuangbinYang,ZhikuiWu，JieYi，F(xiàn)anzuoKong，歷owg.MW.CAew.2003,11(10):2193-2203)的方法制備。3、四糖9的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>(1)、四糖8的制備在反應(yīng)器中，加入7(1.46克，l.O毫摩爾)、6(0.66克，1.0毫摩爾)、二氯甲烷20毫升、三氟化硼乙醚2毫升，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、食鹽水溶液、水洗滌，濃縮后上硅膠柱精制，用石油醚/乙酸乙酯(3/l)作為淋洗液，收集相應(yīng)組分,得到8(1.65克)，產(chǎn)率80。/。，Mp72-73GC;[oc]d-15.20(c1.0，CHC13);1HNMR(400MHz,CDC13):S8.13-7.15(m，55H,BzH),6.07(t，1H,聲9.6Hz)，5.88-5.77(m,2H)，5.69-5.59(m，2H)，5.55-5.44(m，3H),5.35(m,1H)，5.01(d，1H,>8.0Hz)，4.83(d，1H，戶8.0Hz)，4.68(d，1H,J=8.0Hz)，4.63-4.55(m，3H)，4.50-4.43(m，3H)，4.28(m，1H)，4,09-4.05(m，2H),3.90-3.84(m，2H)，3.81-3.67(m，3H)，3.59(m，1H)，3.47(m，1H)，3.39-3.35(m,2H)，1.94(s，3H，COC//3),1.89(s,3H，COC//3)，1.49-0.99(m，20H，CH2C10^2oCH3)，0.88(t,3H，《/=7.2Hz，CH2C/f3);13CNMR(IOOMHz,CDC13):S169.40，168.07(2C，C(=0)CH3),166.11，166.04，165.89，165.79，165.72,165.39,165.31，165.16，165.11，165.03,165.00(11C，C(K))Ph)，133.63,128.18(Ph)，101.21，101.10，100.94，IOO郡C，C曙U，1b，1c，1d).元素分析實(shí)測(cè)值(理論值)％:C117H114034:C，67.79(68.08);H，5.78(5.57)。(2)、四糖9的制備在反應(yīng)器中，加入8(1.44克，0.7摩爾)、二氯甲垸5毫升、無水甲醇100毫升、通氨飽和，室溫放置10天，用薄層分析檢測(cè)反應(yīng)，反應(yīng)完成后，減壓濃縮后上硅膠柱精制，用無水乙醇作為淋洗液，收集相應(yīng)組分，得到粉末狀產(chǎn)物9(0.50克)，產(chǎn)率85%,[a]d:-32.20(c1.0，H2O);NMR(400MHz,D20):4.62-4.55(m，4H)，4.54陽4.51(m，3H)，4.31國(guó)3.95(m，2H)，3.80-3.62(m，4H),3.61畫3.48(m，3H),3.47-3.10(m，14H)，1.43-0.97(m，20H，CH2C10^2oCH3)，0.70(t，3H，7=5.6Hz，CH2C//3).13CNMR(100MHz，D2O):5103.48，103.35，103.16，102.79(4C，C-1A，1B，lc，1D).ESIMSforC36H66021(834.91):833.89[M-1]+.元素分析實(shí)測(cè)值(理論值)％:C36H66021:C,51.87(51.79);H，7.86(7.97)。實(shí)施例2動(dòng)物抑瘤試驗(yàn)取昆明小鼠60只、體重18—22g、雌雄兼用。取接種7—8天之腹水瘤按1:15稀釋計(jì)數(shù)、使終濃度為1000萬個(gè)S180瘤細(xì)胞/ml;每鼠腋下接種0.2ml。(含200萬個(gè)S180瘤細(xì)胞)、次日隨機(jī)均分5組合成的化合物94mg/kg、2mg/kg、lmg/kg、空白對(duì)照組及環(huán)磷酰胺(CY)40mg/kg組，藥物組每天給藥一次(尾靜脈注射iv),連續(xù)給藥10天，對(duì)照組則給予相應(yīng)體積的生理鹽水(NS)液，CY組間日給藥一次，末次給藥后停藥一天，脫頸處死動(dòng)物、稱體重、剖瘤稱重、按下公式計(jì)算腫瘤抑制率并用t檢驗(yàn)比較組間差異。'對(duì)照組平均瘤重-藥物組平均瘤重腫瘤抑制率％=--------------------------------------------X100對(duì)照組平均瘤重試驗(yàn)結(jié)果見表1。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>從試驗(yàn)結(jié)果可見合成的化合物9對(duì)荷S180小鼠腫瘤有明顯抑制作用(〈0.001)。權(quán)利要求1.一種葡聚四糖烷基苷類化合物9的制備方法，其特征在于以D-葡萄糖1為起始原料，經(jīng)五步反應(yīng)制得單糖受體6，然后以路易斯酸做催化劑，在弱極性溶劑中與三糖供體7偶聯(lián)制得帶保護(hù)基的四糖8，再去保護(hù)即得到所需要的四糖9，合成路線為2、按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的路易斯酸選自三氟化硼-乙醚、三甲基硅三氟甲磺酸酯。3、按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的弱極性溶劑選自二氯甲烷、乙醚、乙腈、甲苯。全文摘要本發(fā)明提供了十二烷基β-D-葡萄吡喃糖基-(1→3)-[β-D-葡萄吡喃糖基-(1→6)]-β-D-葡萄吡喃糖基-(1→6)-β-D-葡萄吡喃糖苷的一種簡(jiǎn)便、實(shí)用的制備方法，縮短了合成反應(yīng)步驟，提高了收率，極具實(shí)用價(jià)值。文檔編號(hào)C07H15/00GK101381385SQ20081023282公開日2009年3月11日申請(qǐng)日期2008年10月8日優(yōu)先權(quán)日2008年10月8日發(fā)明者坤劉,劉小琴,岳學(xué)榮,段江紅,燕沈,衡林森,賈云燦,趙曉玲申請(qǐng)人:重慶郵電大學(xué)