專利名稱：2-氨基酰-β-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及咔啉羧酸的衍生物，尤其涉及具有抗腫瘤活性的2-氨基酰-(3-咔啉-3-甲酰色 氨酸芐酯及其制備方法，本發(fā)明還進(jìn)一步涉及該2-氨基酰-P-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯作為抗 腫瘤劑的應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
惡性腫瘤是一種嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的常見(jiàn)病和多發(fā)病，人類(lèi)因惡性腫瘤而引起的死亡 率是所有疾病死亡率的第二位，僅次于心腦血管疾病。腫瘤的治療方法有手術(shù)治療，放射 治療和藥物治療(化學(xué)治療)。目前，化學(xué)治療仍然是臨床治療腫瘤的主要手段。尋找抗 腫瘤藥物是新藥研究的熱點(diǎn)之一。發(fā)明人認(rèn)識(shí)到，在P-咔啉-3-羧酸的3位引入色氨酸節(jié)酯 并在2位引入氨基酸可能產(chǎn)生抗腫瘤作用。按照這種構(gòu)想，發(fā)明人提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是提供一類(lèi)具有抗腫瘤活性的化合物；
本發(fā)明的目的之二是提供一種制備上述具有抗腫瘤活性化合物的方法；
本發(fā)明的上述目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的
具有抗腫瘤活性的通式I化合物<formula>formula see original document page 3</formula>
式中AA選自苯丙氨酸殘基、丙氨酸殘基、甘氨酸殘基、精氨酸殘基、天冬氨酸殘基、 異亮氨酸殘基、蛋氨酸殘基、絲氨酸殘基、酪氨酸殘基、蘇氨酸殘基、亮氨酸殘基、色氨 酸殘基、纈氨酸殘基、芐基組氨酸殘基、脯氨酸殘基、谷氨酰胺殘基、NW-節(jié)氧羰基賴氨
酸或?qū)?甲基芐基半胱氨酸。
一種制備上述具有抗腫瘤活性通式I化合物的方法，該方法包括
背景技術(shù)：
(1) (在甲醛和濃硫酸存在下)將L-色氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)閜-咔啉-3-羧酸；
(2) (在節(jié)醇和多聚磷酸存在下)將P-昨啉-3-羧酸轉(zhuǎn)變?yōu)橼?咔啉-3-羧酸芐酯；
(3) 將Boc-氨基酸引到(3-咔啉-3-羧酸芐酯的2位；
(4) 將2-Boc-氨基酰-(3-咔啉-3-羧酸芐酯轉(zhuǎn)化為2-Boc-氨基酰-卩-咔啉-3-羧酸；
(5) 將2-Boc-氨基酰-P-咔啉-3-羧酸與色氨酸芐酯偶聯(lián)，即得。
其中，步驟(3)中所述的Boc-氨基酸選自Boc-丙氨酸、Boc-丙氨酸、Boc-甘氨酸、 Boc-精氨酸、Boc-天冬氨酸、Boc-異亮氨酸、Boc-蛋氨酸、Boc-絲氨酸、Boc-酪氨酸、Boc-蘇氨酸、Boc-亮氨酸、Boc-色氨酸、Boc-纈氨酸、Boc-芐基組氨酸、Boc-脯氨酸、Boc-谷 氨酰胺、Boc-N、節(jié)氧羰基賴氨酸或Boc-對(duì)-甲基芐基半胱氨酸；
本發(fā)明的又一目的是提供一種治療腫瘤的藥用組合物，該藥用組合物由治療上有效劑 量的本發(fā)明通式I化合物與藥學(xué)上可接受的賦型劑或者輔加劑組成，即將有效量的本發(fā)明 通式I化合物與藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑配合后，按本領(lǐng)域常規(guī)的制劑方法將其制備 成任意一種適宜的藥物組合物。通常該組合物適合于口服給藥和注射給藥，也適合其他的 給藥方法。該組合物可以是片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、綻劑、栓劑，或口服液等液體 制劑形式。根據(jù)不同的給藥方法，本發(fā)明藥物組合物可以含有O. 1%-99%重量，優(yōu)選10-60% 重量的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明在小鼠S180肉瘤模型上評(píng)價(jià)通式1化合物的抗腫瘤活性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā) 明通式l化合物具有優(yōu)秀的抗腫瘤活性，可作為抗腫瘤劑應(yīng)用。


圖1本發(fā)明通式I化合物的結(jié)構(gòu)式。
圖2本發(fā)明通式I化合物的合成路線圖；i)甲醛，濃硫酸，25'C; ii)芐醇，多聚磷 酸，90°C; iii)THF， DCC， HOBt， NMM，冰??；iv)Pd/C,氫氣；v)THF， DCC, HOBt， NMM，色氨酸芐酯，冰??；vi)4N/氯化氫-乙酸乙酯，冰浴.通式l的AA選自苯丙氨酸、 丙氨酸、甘氨酸、精氨酸、天冬酰胺酰、異亮氨酸、蛋氨酸、絲氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、 亮氨酸、色氨酸、纈氨酸、芐基組氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺酰、N①-芐氧羰基賴氨酸、對(duì)-甲基芐基半胱氨酸或N-芐基組氨酸。
具體實(shí)施例方式
為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實(shí)施例。這些實(shí)施例完全是例證性的，它們僅用來(lái)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。
實(shí)施例l制備P-昨啉-3-羧酸
將400mL水放入500mL圓底燒瓶中，緩慢加入0.2mL濃硫酸。在得到的稀硫酸水溶液中 加入5.0g (24.5 mmoD L-色氨酸并超聲振蕩至L-色氨酸完全溶解。往得到的溶液中加入 10ml35。/。的甲醛溶液。反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢?小時(shí)，薄層層析監(jiān)測(cè)到Z-色氨酸點(diǎn)消失終止反 應(yīng)。往反應(yīng)溶液中緩慢滴加濃氨水，調(diào)反應(yīng)混合物至pH6，靜置半小時(shí)。減壓濾出生成的 沉淀并用水洗，將濾出的無(wú)色固體平鋪于表面皿，置于空氣中干燥后得5.05g (95.4%) (3-咔啉-3-羧酸，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/e) 217[M+H]+。
實(shí)施例2制備P-咔啉-3-羧酸芐酯磷酸鹽
將150mL節(jié)醇放入250mL圓底燒瓶中，加入多聚磷酸20g， 10gP-咔啉-3-羧酸,90攝氏度 反應(yīng)8小時(shí)左右，薄層監(jiān)測(cè)原料基本消失時(shí)停反應(yīng)，降穩(wěn)，將反應(yīng)混合液倒入放有500ml水 和700ml乙醚的混合液中，攪拌12小時(shí)，減壓過(guò)濾并用水和乙醚洗滌得到15g (75.4%)標(biāo) 題化合物，為淡黃色固體。ESI-MS (m/e) 307[M+H]+。
實(shí)施例3制備p-咔啉-3-羧酸芐酯
將10gP-咔啉-3-羧酸芐酯磷酸鹽放入250mL圓底燒瓶中，加入150ml乙酸乙酯,加入三乙 胺調(diào)節(jié)pHll,超聲，待固體全部溶解后薄層監(jiān)測(cè)原料基本消失時(shí)，置于250mL分液漏斗中， 用飽和硫酸氫鉀洗滌三次后用無(wú)水硫酸鈉干燥，常壓過(guò)濾，濾液減壓濃縮后析晶，得到6.5g (85.4%)標(biāo)題化合物，為無(wú)色晶體。ESI-MS (m/e) 307[M+H]+。
實(shí)施例4制備Boc-氨基酸
將O.lmol氨基酸溶解于150mL2N/NaOH水溶液中。冰浴攪拌下往該溶液中加入 0.13molBoc20的THF溶液。反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢?8小時(shí)，薄層層析監(jiān)測(cè)至氨基酸消失， 終止反應(yīng)，減壓濃縮，殘留物置于250mL分液漏斗中，乙醚萃取3次，醚層棄去，水層用 飽和硫酸氫鉀調(diào)節(jié)pH2，用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯用無(wú)水硫酸鈉干燥0.5h，常壓過(guò)濾， 濾液減壓濃縮至干，析出Boc-氨基酸，為無(wú)色固體。實(shí)施例5制備18種2-叔丁氧羰基氨基酰-P-咔啉-3-羧酸芐酯
0.005mol叔丁氧羰基氨基酸用60ml無(wú)水THF溶解在100ml茄瓶中，冰浴下加入 0.005molDCC， 0.005molHOBt，反應(yīng)約30分鐘后，加入0.004mol卩-咔啉-3-羧酸節(jié)酯并用 NMM調(diào)節(jié)pH至9， TLC監(jiān)測(cè)原料消失后終止反應(yīng)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至干。得到的殘 余物用lOOmL乙酸乙酯溶解、置于250ml分液漏斗中、依次用飽和碳酸氫鈉水溶液洗(30mL X3)、飽和氯化鈉水溶液洗(30mLX3) 、 5%硫酸氫鉀水溶液洗(30mLX3)、飽和氯 化鈉水溶液洗G0mLX3)、飽和碳酸氫鈉水溶液洗(30mLX3)、飽和氯化鈉水溶液洗 (30mLX3)。合并的乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾、濾液減壓濃縮至干，得到18 種2-叔丁氧羰基氨基酰-P-咔啉-3-羧酸芐酯，為無(wú)色固體。
實(shí)施例6制備18種2-叔丁氧羰基氨基酰-p-咔啉-3-羧酸
將2-叔丁氧羰基氨基酰-p-咔啉-3-羧酸芐酯用20ml乙醇溶解溶解在100ml茄瓶中，冰 浴下滴加10ml4N/NaOH,TLC監(jiān)測(cè)原料消失時(shí)停反應(yīng)，減壓濃縮至干，用飽和硫酸氫鉀調(diào) 節(jié)pH2，用乙酸乙酯萃取4次，酯層合并后用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓濃縮至干，得 到18種2-叔丁氧羰基氨基酰-P-昨啉-3-羧酸。
實(shí)施例7制備18種2-叔丁氧羰基氨基酰-P-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯
0.004mol2-叔丁氧羰基氨基酰-(3-咔啉-3-羧酸用40ml無(wú)水THF溶解在100ml茄瓶中， 冰浴下加入0.004molDCC和0.004molHOBt反應(yīng)約30分鐘后，加入0.0044mol色氨酸節(jié) 酯并用NMM調(diào)節(jié)pH至9， TLC監(jiān)測(cè)原料消失后終止反應(yīng)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至干。 得到的殘余物用100mL乙酸乙酯溶解、置于250ml分液漏斗中、依次用飽和碳酸氫鈉水溶 液洗(30mLX3)、飽和氯化鈉水溶液洗(30mLX3) 、 5%硫酸氫鉀水溶液洗G0mLX3)、 飽和氯化鈉水溶液洗G0mLX3)、飽和碳酸氫鈉水溶液洗(30mLX3)、飽和氯化鈉水 溶液洗(30mLX3)。合并的乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾、濾液減壓濃縮至干， 得到18種2-叔丁氧羰基氨基酰-(3-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯，為無(wú)色固體。實(shí)施例8制備18種2-氨基酰-p-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯
0.003mol2-叔丁氧羰基氨基酰-P-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯用盡量少的無(wú)水乙酸乙酯溶 解在100tnl茄瓶中，冰浴下滴加10ml4N/氯化氫-乙酸乙酯溶液，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)，待原料 點(diǎn)消失后終止反應(yīng)，加入80ml石油醚，有大量固體析出，靜止，傾出液體層，反復(fù)3次 后用乙醚替換石油醚重復(fù)操作，乙醚洗過(guò)3次的固體減壓過(guò)濾，得到18種2-氨基酰-卩-咔 啉-3-甲酰色氨酸芐酯。
實(shí)施例9 2-苯丙氨酰-p-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯(Ia)的數(shù)據(jù)
1.971g (四步反應(yīng)總收率60%)，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/e) 639[M+H]+。 ^ NMR (DMSO): S/ppm= 10.98 (m, 2H), 8.89 (m， 1H)， 8.69 (m, 2H)， 8.40 (s, 1H), 7.25(m ,19H) , 5.78 (m, 2H), 5.08 (m,lH), 4.85 (m，2H),4.58 (q, J=7.5 Hz, 1H), 4.47(q， J=7.0 Hz,lH), 3.25 (m, 3H), 3.13 (m， 1H), 3.05 (m, 1H),2.19(m, 1H) ; 13CNMR (DMSO) S/ppm=171.52， 170.92， 169.65, 161.20， 156.30， 142.23, 137.85, 136.26, 133.65， 131.24, 129.51, 129.55, 129.01, 128.5, 128.00, 127.62, 127.04, 126.72, 126.00, 123.42, 122.93， 122.54， 121.36, 120.48， 119.20, 118.52, 113.26， 112.50, 110.89, 110.06， 74.23, 64.58， 54.82， 53.24, 42.25, 36.68, 35.23, 24.62， 21.05。
實(shí)施例10 2-丙氨酰-p-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯(lb)的數(shù)據(jù)
1.65g (四步反應(yīng)總收率60%)，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/e) 564[M+H]+^HNMR (DMSO) 5/ppm= 10.97 (m, 2H), 8.78 (m, IH), 8.46 (m, 3H), 7.25 (m, 14H), 5.68 (m, 2H), 5.19 (m， 1H), 4.79 (m, IH) , 4.48 (m, IH), 3.31 (m, IH), 3.20 (m, IH), 3,10 (m, 1H),2.95(m, IH), 1.41 (m, 3H); 13CNMR(DMSO) S/ppm=171.20, 170.23, 169.81, 169.33, 141.32, 137.00, 136.21, 131.25, 129.30, 127.80, 127.30, 127.02, 123.32, 122.20, 121.1， 120.56, 119.03, 112.25, 111.24, 108.22, 66.22， 64.35, 55.23, 48.52, 36.23, 33.00, 21.52,20.21 。
實(shí)施例112-甘氨酰-p-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯(Ic)的數(shù)據(jù)
1.75g(四步反應(yīng)總收率64%)，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/e)550[M+H]+^HNMR(DMSO) S/ppm= 10.96 (m, J=7.6 Hz,lH), 8.68 (m, J=7.5 Hz, IH)， 8.36 (m, 3H)， 7.25 (m, 14H), 5.65 (d, J=6.5 Hz, 2H) , 5.06 (d， J-13.5 Hz ,IH), 4.95 (m, J=6.0 Hz ,IH), 4.87 (m, J=10.5 Hz ,2H), 4.50(m, J=3.5 Hz ,IH), 4.20 (m, 2H), 3.16 (m, J-5.6 Hz ， 2H), 2.9 (m, J=6.5 Hz , 1H); 13CNMR(DMSO):S/ppm=l 72.51， 171.22， 169.53， 170.21， 138.20, 138.91， 132.22， 131.22, 129.76， 129.35， 128.27， 124.50， 123.40， 122.24， 121.18， 119.57， 113.24, 110.32， 71.25， 66.55， 65.35， 58.25， 57.57， 36.26， 33.24， 23.43。
實(shí)施例12 2-硝基精氨酰-p-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯(Id)的數(shù)據(jù)
2.321g(四步反應(yīng)總收率60。/。)，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/e) 694[M+H]+。 ^NMR(DMSO): S/ppm= 10.82 (m, 2H), 8.70 (m, 1H),8.43 (m, 4H), 8.05 (m, 2H), 7.48 (t, J=9.0 Hz, 1H),7.19 (m, 13H), 5.73 (m, 2H)， 5.10(m ,IH), 4.75 (m，2H), 4.68 (m, 1H),4.49 (m， 1H), 4.35(m, 1H), 3.32(m, 2H),3.21 (m, 2H),3.10(m, lH),1.75(m， 4H); 13CNMR (DMSO) S/ppm=170.32, 169.85, 169.52, 162.35， 143.57， 138.59， 137.82, 132.25， 131.57， 129.68， 129.24, 128.59, 128.02, 127.44, 127.10, 125.36, 123.52, 123.24, 121.52, 121.01, 119.68, 113.25， 113.58, 112.92, 112.35, 110.25， 70.15, 65.98, 56.64, 51.52, 37.32, 36.12, 33.52, 32.30， 24.52,24.32。
實(shí)施例13 2-天冬酰胺酰-p-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯(Ie)的數(shù)據(jù)
1.487g(四步反應(yīng)總收率45。/。)，為無(wú)色固體。ESI+-MS (m/e) 607[M+H]+。 ！HNMR (DMSO): S/ppm= 10.96 (m, 2H), 8.82 (m, 1H), 8.54 (m, 3H), 7.25 (m， 14H), 5.69 (m, 2H), 5.08(m ,IH) , 4.85 (m,2H), 4.78 (m， 1H),4.61 (m， 1H), 4.41(q, J=7.0 Hz, 1H), 3.37(m, 1H), 3.19(m, 2H), 2. 80 (m, 2H)， 1.11 (t, J=7.0 Hz,lH), 0.87(m, 1H) ; 13CNMR (DMSO): S/ppm=173.20， 172.52, 171.20,170.58, 139.51, 139.22,131.57, 131.28, 130.25,129.58, 128.62, 128.24， 127.25, 124.56,123.52,122.65,121.94,121.67,112,36, 111.52, 110.94,110.58, 75.18, 68.54， 66.85, 50.23, 44.26, 36.25, 33.52， 24.76。
實(shí)施例14 2-異亮氨酰-p-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯(If)的數(shù)據(jù)
1.51g (四步反應(yīng)總收率50%)，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/e)606[M+H]+ HNMR(DMSO): 5/ppm= 10.98 (m, 2H), 8.91 (m, 1H), 8.41 (m, 3H), 7.24 (m, 14H), 5.80(m ,2H) ， 5.12 (m, 1H)， 4.90 (m,2H)， 4.71 (m，lH)，4.49 (m, 2H), 3.31(m, 1H), 3.20 (m, 2H), 3.05 (m, 1H), 1.95 (m, 1H),1.52(m, 1H),1.05(t， J=7.5 Hz,3H) ，0.87(m, 3H) ; 13CNMR (DMSO): 5/ppm=171.82, 170.52,
169.72, 169.23, 138.52, 138.04, 136.23, 131.26, 129.65, 129.0, 128.51, 128.01, 127.62, 127.26,122.6, 122.09, 120.48, 119.30, 111.23, 110.92, 71.82, 66.35, 56.38, 52.24, 45.62, 36.62, 35.02, 24.58, 23.10, 22.56, 22.14。
實(shí)施例15 2-蛋氨酰-p-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯(Ig)的數(shù)據(jù)
L492g(四步反應(yīng)總收率48。/。)，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/e) 624[M+H]+。 ^NMR (DMSO): 5/ppm= 10.99 (m, 2H), 8.88 (m, 1H),8.56 (m, 3H)， 7.26 (m, 14H), 5.72(m ，2H), 5.09(m ,IH), 4.88 (m,2H), 4.72 (m, 1H)，4.48 (m, 1H),4.43(m, 1H), 3.20(m, 2H), 3.06(m, 2H),2.70 (m, 1H)，2.07(s, 3H)， 1.24(m, lH),l.ll(t, J=7.0 Hz,lH); 13CNMR (DMSO): S/ppm=171.52, 170.45, 169.47， 169.25, 141.62, 136.80, 136.54, 131.21, 130.20, 129.54, 128.34, 128.02， 127.05, 123.15, 122.35, 120.10， 119.15, 112.58, 111.07， 110.28, 109.86， 68.59, 64.58, 54.32, 51.24, 36.28, 34.36, 31.07, 29.87, 22.35, 17.84。
實(shí)施例16 2-絲氨酰-p-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯(Ih)的數(shù)據(jù)
1.537g (四步反應(yīng)總收率53%),為無(wú)色固體。ESI-MS (m/e) 580[M+H]+。 & NMR (DMSO): 5/ppm= 10.93 (m, J=5.4 Hz,lH), 10.88 (m, J=7.9 Hz, IH), 8.78 (m, J=7.15 Hz, IH), 8.37 (m, J尸8.5Hz,3H)，7.30 (m, 14H), 5.70 (m, J=6.3 Hz, IH), 5.12 (m, J=8.6 Hz ,IH), 4.87 (m, J=11.0 Hz ,2H), 4.70 (m, J=15.3 Hz ,IH), 4,48(m, J=15.0 Hz ,IH), 4.35 (tn, J=6.6 Hz , IH), 3.83 (m, J=6.5 Hz , 2H), 3.20 (m, J=7.5 Hz , 3H) ; 13CNMR (DMSO): 5/ppm=172.56,170.24,169.84, 169.25, 143.25, 138.67, 138.25, 134.56, 132.21, 129.87, 129.58, 129.24, 128.51, 125.35, 125.01, 124.52, 123.21, 122.74, 121.01, 114.30, 114.01, 113.25, 112.08, 71.14, 66.58, 65.39, 58.24, 57.68， 36.24, 33.21,23.45。
實(shí)施例17 2-酪氨酰-p-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯(Ii)的數(shù)據(jù)
1.438g (四步反應(yīng)總收率44%)，無(wú)色固體。ESI-MS (m/e) 654[M+H]+。111 NMR (DMSO) S/ppm= 10.96 (m, 2H), 9.43 (d, J=5.5 Hz, IH), 8.74 (m, IH), 8.42 (m, 3H), 7.25 (m, 18H), 5.79(m ,3H) , 5.05 (m, IH)， 4.82 (m,2H), 4.55 (q, J=7.1 Hz, IH), 4.49 (m, IH), 3.31(m, IH), 3.10 (m, 2H); 13CNMR(DMSO) S/ppm =171.25， 170.91, 170.35, 169.53, 156.32, 142.58, 137.81136.92， 133.65,131.25,129.58,129.01， 128.42,127.52,127.00,123.40， 122.91,121.36,120.42, 119.01,115.36,112.58,111.23,109.65, 68.25,65.28, 55.86， 55.36,43.26， 36.28,33.25,23.48。
實(shí)施例18 2-蘇氨酰-p-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯(Ij)的數(shù)據(jù)
1.66g(四步反應(yīng)總收率56。/。)目標(biāo)化合物，為無(wú)色固體。ESI+-MS (m/e) 594[M+H]+。 薩R (DMSO): S/ppm= 10.95 (m, 2H), 8.82 (m, 1H),8.44 (d， J-7.1 Hz,2H), 8.30 (s, 1H), 7.22 (m, 14H), 5.99(s ,IH), 5.75(m ，2H), 5.11 (m, 1H)， 4.82 (m,2H), 4.48 (m， 1H)，4.34 (m， 1H)， 4.1 l(m， 1H), 3.29(m, 1H), 3.20(m, 1H)，3.10 (m, lH),l,25(m， 3H), l.ll(t, J=7.1 Hz,lH); I3CNMR (DMSO): S/ppm=171.82, 170.52, 170.12， 169.67, 142.56， 138.45, 136.52, 131.54, 131.25, 130.25, 128.95, 128.54, 127.45, 127.00, 122.22， 121.52, 120.54, 119.05, 113.54,
112.24, 111.14, 108.51， 72.56, 71.56, 65.35， 55.69, 38.57, 33.21, 22.56,19.21。
實(shí)施例19 2-亮氨酰-p-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯(Ik)的數(shù)據(jù)
1.63g (四步反應(yīng)總收率55%)，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/e) 606[M+H]+ 。 ^ NMR (DMSO) S/ppm= 11.05 (m， 1H), 10.93 (m, 1H), 8.75 (m， 1H), 8.55 (s, 1H), 8.35 (s, 2H), 7.25 (m, 14H), 5.77 (d, J=7.0 Hz, 2H) , 5.05 (m, 2H), 4.85 (m, 2H), 4.68 (m, 1H), 4.29 (m, 1H), 3.15 (m, 3H), 1.89 (m, 1H), 1.65 (m, 2H), 1.04(d, J=6.5 Hz ,2H), 0.95 (m, 2H), 0.88 (d, J=6.5 Hz , 2H); 13CNMR (DMSO): 5/ppm=17L82， 171.23, 170.26, 169.87, 143.25, 137.58, 136.56, 131.24，
130.25, 129.36, 128.94, 128.00， 127.05, 124.61, 123.22, 122.15, 121.45, 120.21， 115.01, 111.08, 110.56, 71.24, 66.38, 56.32, 52.21, 45.62, 36.63, 35.01, 24.58, 23.15, 22.59, 22.04。
實(shí)施例20 2-色氨酰-p-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯(II)的數(shù)據(jù)
2.54g(四步反應(yīng)總收率75。/。)目標(biāo)化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/e) 679[M+H]+。 工HNMR (DMSO): S/ppm= 11.05 (m, 3H)， 8.73 (m, 1H),8.59 (s, 2H), 8.28 (s， IH), 7.34 (m， J=7.5 Hz, 4H),7.25 (m, 19H), 5.82 (m, 2H), 5.15(m ,IH), 4.98 (m,lH), 4.85 (m, 2H),4.58 (m, IH), 4.48(t, J=7.0 Hz,lH), 3.34(m, 1H),3.20 (m, 1H)，3.09(m, 1H) ; 13CNMR (DMSO) 5/ppm=171.20, 170.31,169.38, 142.25,137.58,137.21,136.91, 131.25, 130.25， 129.58, 128.47，127.96, 127.52, 127.24, 123.56, 123.01, 122.24, 121.28， 120.56, 119.68, 119.05, 112.58, 112.10， 111.21,111.01,109.35, 69.25, 64.92, 55.62, 54.26, 36.24, 35.32, 33.21， 32.30。
實(shí)施例212-纈氨酰-p-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯(Im)的數(shù)據(jù)
1.25g(四步反應(yīng)總收率45。/。)，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/e)592[M+H]+ HNMR(DMSO): 5/ppm= 10.96 (m, J=3.1 Hz,2H)， 8.71 (m， 1H), 8.35 (m, 3H), 7.20 (m， 1H), 5.65(d, J=7.0 Hz,2H) , 5.11 (d, J=16.5 Hz ,IH), 4.85 (m,2H), 4.5 (m， 1H), 4.38(d, J=13.5 Hz ,IH), 3.30 (m, 1H)， 3.21 (m, 2H)， 3.05 (m, 1H), 2.19(m, 1H), 1.05(m, 6H) ; 13CNMR (DMSO): S/ppm=171.53， 170.20, 169.85, 169.21, 143.32, 137.52, 132.21, 131.57, 131.01, 130.52, 129.54, 129.21, 128.84， 128.39, 125.32, 123.31, 122.47, 120.02, 113.54, 113.10, 112.27, 110.24, 71.62, 65.01, 58.63, 56.21， 36.24, 33.25， 24.25, 19.2。
實(shí)施例22 2-節(jié)基組氨酰-p-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯(In)的數(shù)據(jù)
2.264g(四步反應(yīng)總收率63。/。)，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/e) 720[M+H]+。 ^NMR(DMSO): S/ppm= 11.20 (m, 1H), 10.93 (m, 1H)， 8.98 (m, 1H), 8.64 (m， 3H), 7.55 (m， 1H), 5.18(m ,20H)， 5.71 (m， 2H), 5.35 (m,2H), 5.08 (m, 2H),4.89 (m, 1H)， 4.70 (m， 2H), 4.41(m, 1H), 3.58 (m， 2H), 3.21(m, 3H), 1.67(m, 1H); 13CNMR (DMSO): S/ppm=171.02, 170.25, 169.87, 1269.24, 145.68,
138.25, 137.95, 135.62, 131.86, 131.24, 130.25, 129.52, 129.13, 128.72, 128.53, 127.72, 126.32,
125.26, 123.32， 122.65, 122.23， 119.95, 119.26,113.25， 112.54, 110.82, 71.25, 65.38, 58.86, 56.32， 54.62, 37.65, 36.22, 33.26, 23.57。
實(shí)施例23 2-脯氨酰-P-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯(Io)的數(shù)據(jù)
0.881g (四步反應(yīng)總收率30%)目標(biāo)化合物，為無(wú)色固體。ESI+-MS (m/e) 590[M+H]+。 !H畫(huà)R(DMSO): S/ppm= 10.95 (m, 2H), 10.18 (s, 1H),8.82 (d, J=7.5 Hz,lH), 8.58 (m, 1H), 7.48 (m, 1H), 7.35 (m, 4H), 7.25 (m, 3H), 7.16 (m, 4H), 6.09 (m ，2H), 5.65(m ，2H), 5.10 (m, 1H), 4.86 (m,2H), 4.72 (m, 1H),4.50 (m, 1H), 3.29(m, 2H), 3.18(m， 2H), 3.05 (m, 1H), 2.48(m, 1H), 1.91(m, 1H); 13CNMR (DMSO): S/ppm=171.51， 170.56, 170.28, 138.52, 138.28, 132.26,129.4, 129.00, 128.52, 127.68, 127.28， 127.04, 123.36， 122.67, 122.21, 120.58, 120.14, 119.18, 112.62， 111.12, 108.24, 70.15, 65.89, 59.68, 56.63, 47.28, 37.24, 35.69, 33.21, 26.31, 23.30。
實(shí)施例24 2-谷氨酰胺酰-p-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯(Ip)的數(shù)據(jù)
1.707g(四步反應(yīng)總收率55。/。)，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/e) 621[M+H]+。 ！HNMR (DMSO): 5/ppm= 11.00 (d, J=15.1 Hz,lH), 10.52 (s, 1H), 8.78 (m, 1H)， 8.54 (m, 3H)， 7.25 (m, 14H), 5.72 (m， 2H), 5.10(m ，1H) , 4.85 (m,2H), 4.66 (s, 1H),4.48 (m, 1H), 4.38(s, 1H), 3.22(m, 1H), 3.10(m， 1H)， 3. 00 (m, 1H), 2.48 (m, 1H), 2.35(m， 1H)，2.15(m, 2H) ; 13CNMR (DMSO): 5/ppm=174.25,171.56, 171.28, 171.05, 143.65, 138.42， 135.64, 132.92， 129.25, 128.52, 127.75, 127.42, 127.05,125.32,124.36,123.27, 122.64， 122.24, 121.45,119.05， 113.65, 112.15, 108.32, 71.45, 65.58, 55.62, 54.26, 37.51, 35.24, 33.28, 22.13。
實(shí)施例25 2-N"-芐氧羰基賴氨酰-p-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯(Iq)的數(shù)據(jù)
2.420g(四步反應(yīng)總收率6P/。)目標(biāo)化合物，為無(wú)色固體。ESI+-MS (m/e) 756[M+H]+。 工HNMR (DMSO): S/ppm= 11.10 (m, 1H), 10.92 (d, J-6.5 Hz,lH), 8.70 (m, 1H), 8.44 (m, 3H)， 7.47 (m, 1H), 7.4l(m ，12H), 7.05(m ，6H) , 5.75 (d, J=7.0Hz, 2H), 5.19 (m,lH), 5.00 (m, 2H),4.90 (m， 2H), 4.68(m, 1H), 4.49(m, 1H), 4.45(m, 1H), 3.32 (m, 1H),3.18(m, 2H), 3.12(m, 3H),1.82(s, 1H) ,1.48(m， 4H); 13CNMR (DMSO): S/ppm=171.62, 170.45, 169.76, 169.25, 158.52, 143.23, 142.52, 142.21, 137.82, 136.52, 132.52, 131.20, 130.52， 130.21, 129.50, 129.17, 128.92,128.02,127.53, 127.34, 127.03,124.35,123.23,122.21, 120.15, 119.25, 113.25， 111.10, 110.52， 69.87, 68.79, 65.57， 56.63, 54.68,43.21, 36.54, 3632, 33.82, 30.12, 23.56, 23.24。
實(shí)施例26 2-對(duì)-甲基芐基半胱氨酰-P-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯(Ir)的數(shù)據(jù)
2. 520g (四步反應(yīng)總收率70%)，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/e)700M+H]+。 tHNMR(DMSO): S/ppm= 10.98 (m, 2H), 8.89 (m, 1H),8.74 (s, 2H), 8.56 (s, 1H)， 7.49 (m, 1H)，7.19 (m, 17H), 5.78 (m, 2H)， 5.20(m ，2H) ， 4.79 (m,2H), 4.68 (m, 1H),4.49 (q, J=7.0 Hz, 1H), 3.75(m, 2H), 3.24(m, 1H),3.U (m, 1H),3.05(m, 1H)，2.91(m, 2H), 2.25(m, 3H); 13CNMR (DMSO): 5/ppm=171.80，170.12， 169.58， 145.21,138.25,136.87, 131.05， 130.25， 129.28, 128.93, 128.34， 127.56,127.26, 122.25, 121.05, 120.15, 115.28, 112.26, 111.28, 110.26, 71.26, 66.59, 56.84, 52.28, 45.69， 36.58: 35.24, 24.25, 23.16, 22.58, 22.12。
實(shí)驗(yàn)例1本發(fā)明化合物的抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)
1) 受試樣品本發(fā)明實(shí)施例9-26所制備的化合物(Ia-Ir); 陽(yáng)性對(duì)照品阿糖胞苷
2) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠，雄性，體重20士2g(r士s);每10只小鼠一組，空白及陽(yáng)性對(duì)照 各一組。
3) 劑量設(shè)置
本發(fā)明的化合物及陽(yáng)性對(duì)照設(shè)為8.9umol/kg，均采用腹腔單次給藥。
4) 藥物配制
本發(fā)明的化合物在水中難溶，實(shí)驗(yàn)時(shí)加入少量的吐溫80潤(rùn)濕助溶，逐漸加入0.5% CMC-Na溶液至所需濃度。陽(yáng)性對(duì)照品阿糖胞苷用生理鹽水溶解。
5) 給藥方案
本發(fā)明的化合物每天腹腔給藥一次，0.2ml/鼠，連續(xù)給藥7天，共給藥7次。 陰性對(duì)照每天一次，0.2ml0.5XCMC/鼠，連續(xù)給藥7天，共給藥7次。 陽(yáng)性對(duì)照腹腔給藥。每天一次腹腔給藥一次，0.2ml/鼠，連續(xù)給藥7天，共給藥7次。
6) 動(dòng)物模型
采用體內(nèi)抗腫瘤腋皮下接種模型在無(wú)菌條件下抽取接種7d，后取生長(zhǎng)旺盛Sw腹水 瘤瘤液，用生理鹽水稀釋成(1:2)的液體充分混合，將腫瘤細(xì)胞懸液用新鮮配制的0.2%臺(tái)盼 藍(lán)染色,混勻后按白細(xì)胞計(jì)數(shù)方法計(jì)數(shù)，染藍(lán)色者為死細(xì)胞，不染色者為活細(xì)胞，按如下公 式計(jì)算細(xì)胞濃度和細(xì)胞存活率。
細(xì)胞濃度-4大方格內(nèi)活細(xì)胞數(shù)/4xl0、稀釋倍數(shù)-細(xì)胞數(shù)/ml
細(xì)胞存活率=活細(xì)胞數(shù)/(活細(xì)胞數(shù)+死細(xì)胞數(shù)>100%
將存活率大于90%的瘤液用勻漿法制備成1><107個(gè)/1111的細(xì)胞懸液，于相應(yīng)宿主腋皮下 接種0.21111/鼠，制成實(shí)體瘤動(dòng)物模型。
7) 實(shí)體瘤抑瘤率和體重增長(zhǎng)的測(cè)定
各組連續(xù)給藥7天后，于第8天脫頸椎處死小鼠,稱取體重(處死體重)，然后用鑷子固定
小鼠右腋腫瘤生長(zhǎng)部位，剪開(kāi)皮膚，暴露腫瘤，鈍性剝離，稱重，按如下公式計(jì)算抑瘤率。抑瘤率％=[(陰性對(duì)照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)+陰性對(duì)照組平均瘤重]xl00%
8) 統(tǒng)計(jì)方法
本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)均采用^檢驗(yàn)和方差分析，以(7±^)表示。
9) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
本發(fā)明的化合物對(duì)荷S^肉瘤的體內(nèi)抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示。在8.9pmol/kg劑 量下本發(fā)明的化合物經(jīng)腹腔連續(xù)7天給藥以后，對(duì)S180小鼠腫瘤有顯著的抑制作用。
表l本發(fā)明的化合物的抗腫瘤活性化合物瘤重、mg)抑瘤率％
CMC674.3±107.80
阿糖胞苷414.3±267.0**42.3±7.7"
Ia794.6±237.90.6±22.3
Ib428.1±129.7**37.1±12.5**
Ic376.8土124.4"44.5±12.7**
Id971.7土216.(T-43.5±16.4"
Ie310.2±141.5**55.3±16.4**
If182.0士104.4"73.0±7.3**
Ig512.1±114.1*24.1±10.3*
Ih443.4±240.9*36.1±8.7*
Ii617.7±164.48.7±6.6
Ij538.6±131.3*20.7士10.9'
Ik622.8±100.90.6±4.9
11654.1±368.22.9±26.9
Im620.5 ±220.00.6±11.7
In784.4士97.6"-17.3±9.0"
Io507.8±307.728.1±18.7
Ip443.4±131.9**34.5士13.4"
iq388.3士100.9"42.8±19.2**
Ir383.5±183.3**44.9士12.7"
注:與對(duì)照組比較，* P<0.05; **P<0.01 。
根據(jù)顯著性檢驗(yàn)的結(jié)果，選取兩個(gè)活性最強(qiáng)的化合物If和Ie進(jìn)行量效關(guān)系研究，測(cè)定它們?cè)?.89pmol/kg和0.089pmol/kg劑量下的抗癌活性，結(jié)果列入表2。結(jié)果表明If和Ie的抗 癌活性具有劑量依賴性。
表2: Ie和If在不同濃度下的抗癌活性
化合物劑量 抑瘤率％ 瘤重(mg) (pmol/kg)
0.0897.7±3.7622.8±176.2
Ie0.8929.4±8.5'475.8士132.0'
8.955.3士16.4**310.2士141.5'
0.08934.1±7.8**444.8士122.6'
If0.8953.8土8.1"311.4士116.6'
8.973.0土7.3"182.0土104,4'
CMC_—674,3±107.8
注:與對(duì)照組比較，* P<0.05; **P<0.01 。
權(quán)利要求
1、具有抗腫瘤活性的通式I化合物式中，AA選自苯丙氨酸殘基、丙氨酸殘基、甘氨酸殘基、精氨酸殘基、天冬氨酸殘基、異亮氨酸殘基、蛋氨酸殘基、絲氨酸殘基、酪氨酸殘基、蘇氨酸殘基、亮氨酸殘基、色氨酸殘基、纈氨酸殘基、芐基組氨酸殘基、脯氨酸殘基、谷氨酰胺殘基、Nω-芐氧羰基賴氨酸或?qū)?甲基芐基半胱氨酸。
2、 一種制備上述具有抗腫瘤活性通式I化合物的方法，該方法包括(1) 將L-色氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)閨3-咔啉-3-羧酸；(2) 將P-咔啉-3-羧酸轉(zhuǎn)變?yōu)橼?咔啉-3-羧酸芐酯；(3) 將Boc-氨基酸引到p-咔啉-3-羧酸節(jié)酯的2位，得到2-Boc-氨基酰-l3-咔啉-3-羧酸 芐酯；(4) 將2-Boc-氨基酰-(3-咔啉-3-羧酸芐酯轉(zhuǎn)化為2-Boc-氨基酰-卩-咔啉-3-羧酸；(5) 將2-Boc-氨基酰-P-咔啉-3-羧酸與色氨酸芐酯偶聯(lián)，即得。
3、 按照權(quán)利要求2的方法，其特征在于步驟(3)中所述的Boc-氨基酸選自Boc-丙氨酸、Boc-丙氨酸、Boc-甘氨酸、Boc-精氨酸、Boc-天冬氨酸、Boc-異亮氨酸、Boc-蛋 氨酸、Boc-絲氨酸、Boc-酪氨酸、Boc-蘇氨酸、Boc-亮氨酸、Boc-色氨酸、Boc-纈氨酸、 Boc-芐基組氨酸、Boc-脯氨酸、Boc-谷氨酰胺、Boc-N"-芐氧羰基賴氨酸或Boc-對(duì)-甲基芐 基半胱氨酸。
4、 一種治療腫瘤的藥物組合物，由治療上有效量的權(quán)利要求1的化合物和藥學(xué)上可 接受的載體或輔料組成。
5、 權(quán)利要求l所述的化合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了2-氨基酰-β-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明2-氨基酰-β-咔啉-3-甲酰色氨酸芐酯的結(jié)構(gòu)式為通式I所示，式中AA選自苯丙氨酸、丙氨酸、甘氨酸、精氨酸、天冬氨酸、異亮氨酸、氮氨酸、絲氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、亮氨酸、色氨酸、纈氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、N^ω-芐氧羰基賴氨酸或?qū)?甲基芐基半胱氨酸。本發(fā)明采用S₁₈₀小鼠模型評(píng)價(jià)了通式I化合物的抗腫瘤活性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通式I化合物具有優(yōu)秀的抗腫瘤作用，可作為抗腫瘤劑應(yīng)用。
文檔編號(hào)C07D471/00GK101597288SQ20081011440
公開(kāi)日2009年12月9日 申請(qǐng)日期2008年6月2日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月2日
發(fā)明者彭師奇, 梅升輝, 明 趙 申請(qǐng)人:北京大學(xué)