專利名稱：甲胎蛋白和免疫調諧劑的共同施用以治療多發(fā)性硬化的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及使用甲胎蛋白包括其功能片段、類似物和衍生物與一種或多種免疫調
諧劑的施用結合用于治療多發(fā)性硬化的治療方法。
背景技術：
多發(fā)性硬化(MS)是特征在于中樞神經系統(tǒng)(CNS)的神經不可逆變性的神經疾病。 盡管潛在原因不明，但MS中的神經變性是神經脫髓鞘的直接結果(即，髓鞘質與神經剝離， 所述髓鞘質是通常在外層排列且使神經隔離的蛋白質)。隨著狀況進展，炎癥斑和瘢痕形成 發(fā)展，這干擾神經功能。從而，MS患者逐漸喪失機體的感覺和運動功能。
隨著腦和機體其他部分之間的交流變得被破壞，MS可以為從相對良性，到有點殘 廢，到破壞性。盡管脫髓鞘的確切機制未確定，但許多研究者相信MS是自身免疫疾病—— 其中機體通過其免疫系統(tǒng)發(fā)動針對其自己組織的防御性攻擊的疾病。在MS的情況下，恰 恰是神經隔離髓鞘質變得被攻擊。隨著髓鞘質逐步變性且最終消失，沿著神經傳播的電 脈沖減速。在疾病后期，神經自身變得受損。隨著越來越多的神經受影響，患者經歷由神 經系統(tǒng)控制的功能的進行性干擾，所述功能例如視力、言語、走路、書寫和記憶。在美國約 250， 000-350， 000人患有MS。大多數人在20-40歲時經歷其第一次MS癥狀，但MS已早在 15歲和晚至60歲得到診斷。MS是進行性破壞，除非患者接受有效停止或減緩惡化的醫(yī)學 治療。盡管一些個體短期處理良好，但隨著時間過去MS患者總是變得被疾病更顯著損害。
MS已知用各種治療方式進行治療，包括I型干擾素(IFN)，例如IFN-P-la和 IFN- P -lb (參見例如，Goodin， Int. M. S. J. ， 12 (3) :96-108， 2005)。盡管一般良好耐受且有 效，但干擾素治療可以導致患者中產生中和抗體，這顯著減少治療的功效。因此，仍需要用 于治療MS的新的有效治療方法。本發(fā)明解決了這個和其他相關需要。

發(fā)明內容
本發(fā)明提供了通過給患者使用治療有效量的甲胎蛋白(AFP)或其生物活性片段、
衍生物或類似物，和治療有效量的免疫調諧劑來治療具有MS的患者的方法。 在上述方法的相關實施方案中，AFP或其生物活性片段、衍生物或類似物或免疫調
諧劑每日、每周、每兩周或每月進行施用。在上述方法的不同實施方案中，AFP或其生物活
性片段、衍生物或類似物以約0. 5mg-400mg/劑進行施用，或免疫調諧劑以約50 y g-300mg/
劑進行施用。 在該方法的不同實施方案中，AFP或其生物活性片段、衍生物或類似物和免疫調 諧劑同延地(coextensively)，例如在分開劑型中或在相同劑型中進行施用，或分開進行施用。 在該方法的相關實施方案中，AFP或其生物活性片段、衍生物或類似物在免疫調諧 劑之前或之后進行施用。 在所有方法的不同實施方案中，AFP或其生物活性片段、衍生物或類似物或免疫調諧劑靜脈內、肌內、經口、通過吸入、腸胃外、腹膜內、動脈內、經皮、舌下、經鼻、在栓劑中、經 口含化、脂質體、脂肪地(adiposally)、眼內、皮下、鞘內、局部或通過局部施用進行施用。在 另外的實施方案中，AFP(或其生物活性片段、衍生物或類似物)和免疫調諧劑通過2種不 同施用途徑進行施用，或通過相同施用途徑進行施用。 在該方法的相關實施方案中，除AFP(或其生物活性片段、衍生物或類似物)和免 疫調諧劑外，一種或多種次級試劑(例如，緩解疾病的抗風濕性藥物(DMARD)、皮質類固醇、 或非類固醇抗炎藥(NSAID))施用于患者。 在該方法的不同實施方案中，AFP(或其生物活性片段、衍生物或類似物)和免疫 調諧劑的施用導致一種或多種MS癥狀的嚴重程度中的喪失或減少(例如，麻剌感、麻木、 震顫、平衡喪失、一肢或數肢中的無力、視力模糊或復視、言語不清、吞咽問題、麻痹、缺乏協(xié) 調、認知困難、疲勞、肌痙攣、眩暈、呼吸問題和癲癇發(fā)作；例如一種或多種MS癥狀的嚴重程 度中至少20%的減少)。 本發(fā)明進一步提供了包含治療有效量的AFP(或其生物活性片段、衍生物或類似 物)和免疫調諧劑以治療患者中的多發(fā)性硬化的組合物。在一個實施方案中，除AFP(或其 生物活性片段、衍生物或類似物)和免疫調諧劑外，一種或多種次級試劑(例如，DMARD、皮 質類固醇或NSAID)存在于組合物中。 本發(fā)明還提供了試劑盒，其包含治療有效量的AFP(或其生物活性片段、衍生物或 類似物)、治療有效量的免疫調諧劑、和關于給具有多發(fā)性硬化的患者施用AFP和免疫調諧 劑的說明書。在本發(fā)明的試劑盒的幾個實施方案中，AFP(或其生物活性片段、衍生物或類 似物)和免疫調諧劑配制用于2種不同的施用途徑，或配制用于相同施用途徑。在相關實 施方案中，試劑盒進一步包含一種或多種次級試劑(例如，DMARD、皮質類固醇或NSAID)用 于與AFP和免疫調諧劑組合用于施用于患者。 在上述組合物和試劑盒的不同實施方案中，AFP(或其生物活性片段、衍生物或類
似物)和/或免疫調諧劑配制用于靜脈內、經口、吸入、腸胃外、腹膜內、動脈內、經皮、舌下、
經鼻、在栓劑中、經口含化、脂質體、脂肪的、眼內、皮下、鞘內、局部或局部施用。 在本發(fā)明的所有方面的不同實施方案中，AFP是人重組AFP或非糖基化AFP。在本
發(fā)明的所有方面的另外實施方案中，免疫調諧劑是肽或蛋白質(例如，干擾素-P-la、干擾
素-e -lb、干擾素-a 、干擾素-Y和干擾素-t 、以及乙酸格拉太咪爾(Copaxone ))、
抗體(例如，那他珠單抗(nataluzinab)、達利珠單抗(daclizumab)、利妥?，敗BT-874和 阿來組單抗(alemtuz咖ab))，小分子(例如，BG 12 (延胡索酸鹽)、芬戈莫德(fingolimod) (FTY-720)、米托蒽醌(mixoxantrone) ( Novantrone )、拉喹莫德(laquinimod)、特立 氟胺(teriflunomide)和阿伐他汀)、或圖5中列出的試劑之一。
定義 在本申請中，當2種治療劑"同延地施用"時，試劑的施用時間段可以完全重疊或 至少部分重疊。當2種試劑的施用不是同延地時，2種治療劑優(yōu)選在不重疊的時間段中進 行施用；施用優(yōu)選在2種治療劑之一的生物活性時間段內發(fā)生，即，在后面施用的試劑遞送 時，較早施用的試劑在患者中保留其生物活性的至少相當大部分。在其中2種治療劑不是 同延地施用的其他情況下，一種試劑可以在另一種試劑的生物活性時間段外進行施用。
如本文所使用的，術語"甲胎蛋白"或"AFP"指具有與成熟人AFP(SEQ ID NO :1)基本上相同的氨基酸序列的多肽，或編碼多肽的核酸(NCBI登記號NMJ)01134 ;SEQ ID NO : 2)。成熟人AFP是591個氨基酸的蛋白質(參見SEQ ID NO :1)，起因于609個氨基酸前 體的切割(GenBank登記號NP_001125)，以去除18氨基酸信號序列。本發(fā)明的AFP具有與 SEQ ID N0:1基本上相同的氨基酸序列。AFP并不限于全長序列；它還包括AFP的生物活 性片段。本發(fā)明的AFP也包括任何重組人AFP(無論是否具有與天然存在的形式相同的翻 譯后修飾)和人AFP的生物活性變體(例如，AFP的非糖基化形式，參見例如，美國專利號 7， 208， 576)。 在一些實施方案中，本發(fā)明的AFP可以包含SEQ ID NO :1的氨基酸序列的修飾，包 括一些氨基酸殘基的置換(例如，保守置換)、缺失或添加。例如，重組人AFP在引入本文作 為參考的美國專利號7， 208， 576中得到描述，其包含在SEQ ID NO :1的位置233處的天冬 酰胺至谷氨酰胺置換。術語"甲胎蛋白"還包含本文描述的AFP的任何衍生物或類似物。
本發(fā)明的AFP具有與天然人AFP相同或基本上相同的生物活性(例如，至少 50%，優(yōu)選至少60%、70%或80%，和更優(yōu)選至少90%、95%或99%或更多)。例如， 本發(fā)明的AFP，如同天然人AFP，顯示與人白細胞結合的能力和抑制自身免疫反應的能 力。用于測試AFP活性的白細胞結合測定在本文和例如Parker等人，Protein Express. Purification38 :177-183,2004中得到描述。關于本發(fā)明的AFP所需的自身免疫抑制活 性可以通過測定AFP抑制人自身混合淋巴細胞反應(AMLR)的能力或通過測定AFP在動物 模型中抑制實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)的能力加以證實。此種活性可以通過本文 描述的測定加以驗證。本發(fā)明的功能AFP在Parker等人同上中描述的測定中展示至少 40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%或100X天然人AFP與人單核細胞結合的能 力，和至少40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%或100%天然人八？？抑制自身免疫 反應的能力。后面一種活性通過在美國專利號5， 965， 528中描述的測定中抑制人AMLR進 行顯示，或在可替代方法中，通過在小鼠模型中抑制EAE發(fā)展進行顯示(參見例如，Fritz 等人，J. Immunol. 130 :1024， 1983 ;Naiki等人，Int. J. Immunopharmacol. 13 :235， 1991 ;禾口 Goverman， Lab.Anim. Sci. ，46 :482，1996)。 本發(fā)明的AFP片段可以使用本文描述的一種或多種測定(例如，AMLR測定、AFP與 單核細胞結合測定、使用EAE小鼠模型的實驗、和脾細胞測定)進行測定。 一般生物活性的 AFP片段長度包含SEQ IDN0:1的至少5個鄰接氨基酸，或至少8個鄰接氨基酸，優(yōu)選地至 少10、20或50個鄰接氨基酸，更優(yōu)選地至少100個鄰接氨基酸，和最優(yōu)選地至少200、300、 400個或更多鄰接氨基酸。例如，美國專利號6， 818， 741公開了人AFP的8氨基酸片段(氨 基酸471-478 ;EMTPVNPG ;SEQ IDNO :3)以及包含這種8聚體的其他AFP片段。本發(fā)明的活 性AFP片段可以進一步包含在有限數目位置處的氨基酸置換、缺失或添加，只要AFP片段具 有與其在SEQ ID N0:1內的相應序列至少90%的同一性。對于本申請中的序列比較目的， SEQ ID N0:1的相應序列被視為具有與給定AFP片段相同數目的氨基酸。例如，對應于SEQ ID NO :1的446-479區(qū)段(LSEDKLLACGEGAADIIIGHLCIRHEMTPVNPGV ;SEQ IDNO :4)的34聚 體AFP肽可以包含由SEQ ID NO :1的446-479區(qū)段改變的至多3個氨基酸。生物活性AFP 片段中的序列偏離的一個此種例子在美國專利號5， 707， 963中發(fā)現，所述專利公開了在2 個氨基酸殘基(SEQ ID NO :4的氨基酸9和22)處具有靈活性的人AFP的34氨基酸片段 (SEQ ID NO :4) 。 AFP片段的一些其他例子包括結構域I (成熟人AFP的氨基酸2-198 ;SEQID NO :5)，結構域II(成熟人AFP的氨基酸199-390 ;SEQ ID NO :6)，結構域III (成熟人AFP的氨基酸391-591 ;SEQ ID NO :7)，結構域I+II (成熟人AFP的氨基酸2-390 ;SEQ IDNO :8)，結構域II+III (成熟人AFP的氨基酸199-591 ;SEQ IDNO :9)，和人AFP片段I (成熟人AFP的氨基酸267-591 ;SEQ ID NO :10)。 在本申請中，術語"氨基酸"指天然存在的和合成氨基酸，以及以類似于天然存在的氨基酸的方式起作用的氨基酸類似物和氨基酸模擬物。天然存在的氨基酸是由遺傳密碼編碼的那些，以及隨后修飾的那些氨基酸，例如羥脯氨酸、Y-羧基谷氨酸和O-磷酸絲氨酸。氨基酸類似物指具有與天然存在的氨基酸相同的基本化學結構的化合物，即與氫結合的a碳、羧基、氨基和R基，例如高絲氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亞砜、甲硫氨酸甲基锍。此種類似物具有經修飾的R基(例如，正亮氨酸)或經修飾的肽主鏈(例如，肽模擬物，例如AFP擬肽)，但保留與天然存在的氨基酸相同的基本化學結構。氨基酸模擬物指這樣的化合物，其具有與氨基酸的一般化學結構不同的結構，但能夠以類似于天然存在的氨基酸的方式起作用。 關于氨基酸序列，技術人員將認識到，當改變導致用其他化學上相似的氨基酸置換一個或多個氨基酸時，改變、添加或缺失序列中的單個氨基酸或小百分比的氨基酸的、對于多肽序列的個別置換、缺失或添加構成"保守修飾的變體"。提供功能上相似氨基酸的保守置換表是本領域眾所周知的。此種保守修飾的變體加上并且不排除本發(fā)明的多態(tài)變體、種間同源物和等位基因。 下述8個組各自包含彼此為保守置換的氨基酸(1)丙氨酸(A)、甘氨酸(G) ;(2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E) ;(3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q) ;(4)精氨酸(R)、賴氨酸(K);(5)異亮氨酸(1)、亮氨酸(U、甲硫氨酸(M)、纈氨酸(V) ;(6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W) ;(7)絲氨酸(S)、蘇氨酸(T);和(8)半胱氨酸(C)、甲硫氨酸(M)(參見例如，Creighton， Proteins(1984))。 術語"生物活性"意指具有已知與天然存在的或合成肽、多肽、蛋白質、抗體、化合物、小分子或其片段、衍生物或類似物(例如，AFP或免疫調諧劑)相關的一種或多種活性。
術語"緩解疾病的抗風濕性藥物"或"DMARD"指用于治療炎性疾病的治療劑。當以治療有效量施用時，DMARD可以用于治療、預防或減少患者中的炎性疾病的一種或多種癥狀或進展。本領域已知的DMARD的例子包括金諾芬、金硫葡糖、硫唑嘌呤、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、環(huán)孢菌素、D-青霉胺、硫代蘋果酸金鈉(注射金)、羥氯喹、來氟洛米、氨甲蝶呤、米諾環(huán)素、麥考酚酸嗎啉乙酯或柳氮磺吡啶。"皮質類固醇"意指特征在于氫化環(huán)戊烷多氫菲環(huán)系統(tǒng)的任何天然存在的或合成化合物。天然存在的皮質類固醇一般由腎上腺皮質產生。合成皮質類固醇可以是鹵化的。示例性皮質類固醇在本文中得到描述。 如本文所使用的，"免疫調諧劑"指(1)干擾素，或肽或蛋白質，其具有與干擾素(例如，人干擾素)序列的全部或部分基本上相同(例如，至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或甚至100%相同的)的氨基酸序歹lj，例如IFN-a (例如，IFN- a -la ;參見整體引入本文作為參考的美國專利申請?zhí)?0070274950) 、 IFN- a -lb (SEQID NO:ll)、 IFN-a-2a(參見整體引入本文作為參考的PCT申請?zhí)朩0 07/044083)和IFN-a-2b(SEQ ID NO : 12)) 、 IFN-P (例如，在整體引入本文作為參考的美國專利號7， 238， 344中描述的；IFN_P-la(如在整體引入本文作為參考的美國專利號6， 962， 978中描述的)和IFN-P-lb(如整體引入本文作為參考的美國專利號4， 588， 585 ;4， 959， 314 ;4,737,462 ;和4， 450， 103中描述的)、IFN-y (例如SEQ ID NO :13)和IFN_ t (如整體引入本文作為參考的美國專利號5， 738， 845以及美國專利申請?zhí)?0040247565和20070243163
中描述的)，或肽，例如乙酸格拉太咪爾(Copaxone ) ; (2)小分子(例如，bg12(延
胡索酸鹽)、芬戈莫德(FTY-720)、拉喹莫德、特立氟胺或阿伐他汀，或展示與干擾素相同或基本上相同的生物活性的分子(例如，在小鼠模型中抑制EAE的能力中人IFN-a 、人IFN-P、人IFN-y或人IFN-t的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%的活性)；(3)抗體(例如，單克隆抗體(例如，a4整聯(lián)蛋白結合抗體，例如那他珠單抗(nataluzimab) ;IL_2受體結合抗體，例如達利珠單抗；CD20結合抗體，例如利妥?，敚籌L-12結合抗體，例如ABT-874 ;和CD52結合抗體，例如阿來組單抗)、多克隆抗體或抗體融合蛋白的全部或部分)；(4)肽(例如MBP-8289、NBI-5788和T細胞受體肽(NeurOVaX ));或(5)DNA疫苗(例如，BNT-3009-01)。非限制性示例性免疫調諧劑具有減少(例如，至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、90%或甚至100% )一種或多種MS癥狀的嚴重程度的能力，或預防、抑制或減少(例如，至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、90%或甚至100% )患者中的MS進展(例如，神經脫髓鞘和一種或多種MS癥狀的頻率或嚴重程度)的能力。 所需免疫調諧劑是這樣的蛋白質，其與人IFN-a 、 -13 、 - y或-t具有至少50%(更優(yōu)選至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或甚至100% )氨基酸序列同一性，且在小鼠模型中抑制EAE能力方面具有人IFN-P -la的至少50% (更優(yōu)選至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100% )活性。本發(fā)明含義內的免疫調諧劑包含天然存在的干擾素以及重組產生的干擾素。重組產生的干擾素可以包含對于一個或多個氨基酸殘基的修飾，包括缺失、添加和置換，或它可以包含不同模式的翻譯后修飾(例如，糖基化、聚乙二醇化(PEGylation)等)。適合于與本發(fā)明一起使用的非限
制性示例性免疫調諧劑包括Rebi產(iFN-e -la) 、Avonex ' (ifn-p -la) 、Betaseron
(IFN- p -lb) 、 TauferonTM(IFN- t ) 、Rofer。n-A (IFN— a _2a) 、Intron-A (IFN— a _2b)、
Rebetron (ifn-q -2b) 、Alferon-N (ifn-q -n3) 、Peg-Intron (與單甲氧聚乙二醇
共價綴合的ifn- a -2b) 、Infergen (與ifn- a -2b具有88%同源性的非天然存在的i型干擾素)、Actimmune (IFN_ Y _lb) 、Pegasys (聚乙二醇化ifn- a -ia) 、Copaxone (乙酸格拉太咪爾)和Movantron⑧(米托蒽醌)。免疫調諧劑的另外例子在圖5中列出；
一種或多種這些免疫調諧劑可以與AFP組合，以產生本發(fā)明的組合物用于在治療MS的方法
中使用，如本文所述。 術語"多發(fā)性硬化"或"MS"指其中由于脫髓鞘，中樞神經系統(tǒng)(腦和脊髓)的神
經變性的疾病。蛋白質髓鞘質通常提供關于神經的覆蓋或隔離。"非類固醇抗炎藥"或"NSAID"意指預防或減少炎癥的非類固醇試劑。NSAIDs的例子包括甲氧萘丙酸鈉、雙氯芬酸鈉、雙氯芬酸鉀、阿司匹林、舒林酸、二氟尼柳、吡羅昔康、吲哚美辛、布洛芬、萘丁美酮、三水楊酸膽堿鎂、水楊酸鈉、雙水楊酸、非諾洛芬鈣、氟比洛芬、
9酮洛芬、甲氯滅酸鈉、美洛昔康、奧沙普嗪、舒林酸、托美汀和C0X-2抑制劑，例如羅非克西、塞來昔布、伐地昔布(valdecoxib)或羅美昔布(lumiracoxib)。 術語"基本同一性"或"基本上相同的"在使多核苷酸或多肽序列與參考序列比較的背景中使用時，指多核苷酸或多肽序列與參考序列相同，或具有指定百分比的核苷酸或氨基酸殘基的事實，當2個序列進行最佳比對時，所述指定百分比的核苷酸或氨基酸殘基在參考序列內的相應位置處是相同的。例如，如使用BLAST或BLAST 2.0序列比較算法用缺省參數，或通過人工比對和目視檢查(參見例如NCBI網站)測量的，當在參考序列的全長上就最大對應進行比較且比對時，與參考序列"基本上相同的"氨基酸序列與參考序列(例如，如SEQ ID N0:1中所示的成熟人AFP氨基酸序列，或其片段，或干擾素)具有至少約60%同一'性，優(yōu)選65% 、70% 、75% 、80% 、85% 、90% 、91% 、92% 、93% 、94% 、95% 、96%、97%、98%、99%或更高百分比同一性(最高達100% )。"協(xié)同作用"意指甲胎蛋白(或其生物活性片段、衍生物或類似物)和一種或多種免疫調諧劑以治療有效量施用用于治療MS顯示加性療效(例如，在MS消退中至少1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%或70%或更多改善，或一種或多種MS癥狀的嚴重程度或頻率中至少1% 、5% 、10% 、15% 、20% 、25% 、30% 、35%、40%、45%、50%、60%或70%減少；參見，"治療")，這超過當AFP或一種或多種免疫調諧劑單獨施用時觀察到的那種。協(xié)同作用也可以意指AFP(或其生物活性片段、衍生物或類似物)和一種或多種免疫調諧劑以組合施用，允許AFP、一種或多種免疫調諧齊U、或兩者以與單獨施用時所需的AFP或一種或多種免疫調諧劑的量相比較，達到治療中相同或基本上相似結果正常所需的更低劑量施用(例如，至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45X、50X、60X或90X較低劑量的AFP、一種或多種免疫調諧齊[J、或兩者)。AFP(或其生物活性片段、衍生物或類似物)和一種或多種免疫調諧劑之間的協(xié)同作用可以在下述情況中觀察到相對于在不存在AFP的情況下以相同濃度施用時一種或多種免疫調諧劑的毒性，當與AFP結合施用時，其中一種或多種免疫調諧劑毒性減少(例如，至少5 % 、 10 % 、 15 % 、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%或更多)。協(xié)同作用也可以在AFP(或其生物活性片段、衍生物或類似物)和一種或多種免疫調諧劑的共同施用后發(fā)生，其中共同施用允許一種或多種免疫調諧劑的劑量中超過用于治療MS而正常施用的增加(例如，至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、85 % 、90 % 、95 % 、 100 %或更多)，而無在一種或多種免疫調諧劑增加劑量時正常預期或觀察到的毒性。"治療"意指一種或多種MS癥狀(例如，麻剌感、麻木、震顫、平衡喪失、一肢或數肢中的無力、視力模糊或復視、言語不清、吞咽問題、麻痹、缺乏協(xié)調、認知困難(例如，記憶力和注意力下降)、疲勞、肌痙攣、眩暈、呼吸問題和癲癇發(fā)作)的進展、嚴重程度或頻率中的減少(例如，至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或甚至100% )，或預防或減少(例如，至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或甚至100% )人患者中的MS進展(例如，神經的脫髓鞘和一種或多種MS癥狀的頻率或嚴重程度)。 治療劑(例如，本發(fā)明的AFP、免疫調諧劑、DMARD、皮質類固醇、NSAID或其他試劑)的"治療有效量"是足以實現對于給定狀況或疾病的所需療效的試劑的量。量可以依賴于達到的效果而變。例如，單獨的用于治療MS的免疫調諧劑的"治療有效量"可以不同于與AFP(或其生物活性片段、衍生物或類似物；例如，當與AFP組合施用時，免疫調諧劑的治療有效量可以減少)組合治療MS使用的免疫調諧劑的"治療有效量"。


圖1顯示成熟人AFP的氨基酸(SEQ ID NO :1)和人AFP的mRNA核酸序列(SEQ ID
NO :2) 。 N指示在成熟人AFP氨基酸序列中的天冬酰胺233糖基化位點。 圖2顯示包括成熟人AFP的氨基酸2-198(結構域I;SEQ ID N0:5)、氨基酸
199-390 (結構域II ;SEQ ID NO :6)、氨基酸391-591 (結構域III ;SEQ ID NO :7)、氨基酸
2-390 (結構域I+II ;SEQ ID NO :8)、氨基酸199-591 (結構域II+III ;SEQ ID NO :9)、和氨
基酸261-591 (人AFP片段1 :SEQ ID NO :10)的AFP生物活性片段的氨基酸序列。 圖3顯示人IFN- a -lb (SEQ ID NO : 11)和IFN- a -2b (SEQ ID NO : 12)的氨基酸序列。 圖4顯示人IFN- Y (SEQ ID NO :13)的氨基酸序列。
圖5是免疫調諧劑表。
具體實施例方式
本發(fā)明提供了用于MS的組合治療。這種組合治療涉及給有此需要的患者共同施用一種或多種免疫調諧劑與AFP(或其生物活性片段、衍生物或類似物)，各自以治療有效量。在另一個方面，本發(fā)明提供了包括一種或多種免疫調諧劑與AFP(或其生物活性片段、衍生物或類似物)的藥物組合物，各自以治療有效量用于治療MS。此種組合物任選包括一種或多種藥學上可接受的賦形劑，并且配制用于靜脈內、肌內、經口、通過吸入、腸胃外、腹膜內、動脈內、經皮、舌下、經鼻、通過使用栓劑、經口含化、脂質體、脂肪地、眼內、皮下、鞘內、局部或通過局部施用進行施用。在進一步的方面，本發(fā)明提供了用于治療MS的試劑盒，其包括治療有效量的免疫調諧劑和AFP(或其生物活性片段、衍生物或類似物)，連同用于給患者施用免疫調諧劑和AFP(或其生物活性片段、衍生物或類似物)的正確說明書。
多發(fā)性硬化的診斷和監(jiān)控 MS可以通過觀察患者中的一種或多種癥狀進行診斷。MS的癥狀可以是單個或多個，并且在強度方面可以從輕微到嚴重，并且在持續(xù)時間方面從短到長。從癥狀的完全或部分緩解在約70% MS患者中早期發(fā)生。視覺障礙通常是MS的第一個癥狀，但它們通常消退?；颊呖赡茏⒁獾揭暳δ：驈鸵?、紅-綠失真或突盲(sudden blindness)。通常早期注意到導致協(xié)調和平衡困難的肌無力。肌痙攣、疲勞、麻木和剌痛是常見癥狀。可能存在感覺喪失、言語障礙、震顫、眩暈或偶然地聽力喪失。50%的患者經歷精神改變例如注意力下降、注意力缺陷、一定程度的記憶喪失、或判斷損害。其他癥狀可以包括抑郁、躁狂抑郁、偏執(zhí)狂、或稱為大笑_流淚綜合征的無法控制的大笑和流淚沖動。隨著疾病惡化，患者可能經歷性功能障礙或腸和膀胱控制下降。對于約60%患者，熱看起來使MS癥狀加劇，并且用冷水浴或游泳發(fā)現緩解。妊娠看起來減少發(fā)作次數。 不存在用于MS的單個測試。醫(yī)生特別是神經病學家可以考慮詳細的醫(yī)療史，并且可以執(zhí)行全面的體格和神經學檢查，以診斷MS。用于MS的測試可以包括例如用靜脈內釓的磁共振成像(MRI)或磁共振掃描(MRS)，這2者幫助鑒定、描述且注明在MS患者中出現的腦 中的損傷(即斑)的日期。另一種電生理測試——誘發(fā)電位檢查通過神經傳播的沖動，以 測定沖動是正常還是太慢地移動；比沖動通過神經的正常移動慢是MS的指示。最后，圍繞 脊髓的腦脊液的檢查可以用于鑒定腦或脊髓中漂浮的異?；瘜W物質或細胞，這暗示MS的 存在?？偟膩碚f，這3種測試加強了MS的診斷。MS也可以通過鑒定患者中的一種或多種下 述癥狀進行診斷麻剌感、麻木、震顫、平衡喪失、一肢或數肢中的無力、視力模糊或復視、言 語不清、吞咽問題、麻痹、缺乏協(xié)調、認知困難(例如，記憶力和注意力下降)、疲勞、肌痙攣、 眩暈、呼吸問題和癲癇發(fā)作。 上文描述的所有方法也用于監(jiān)控患者中的MS進展，以及用于監(jiān)控在使用本發(fā)明 的組合物和方法治療后MS的消退(例如，一種或多種MS癥狀的嚴重程度或頻率中的消退 或減少，從而使得可以評估由患者接受的治療的效力。此外，患者可以就治療后MS中的改 善進行評估(例如， 一種或多種MS癥狀或功能中的改善)，其中使用本領域已知的一種或 幾禾中方法(參見例如，Expanded Disability Status Scale (EDSS) ， Kurtzke， Neurology 33:1444-1452,1983;和Multiple Sclerosis SeverityScore (MSSS) ， Roxburgh等人， Neurology 64:1144-1151,2005。 一種或多種這些癥狀中的改善(例如， 一種或多種MS癥 狀的出現、持續(xù)時間或嚴重程度中的減少)指示通過本發(fā)明的組合物和方法的療效。
通過施用本發(fā)明的組合物治療MS的方法 本發(fā)明提供了通過共同施用治療有效量的AFP(或其生物活性片段、衍生物或類 似物)和一種或多種免疫調諧劑治療患者中的MS的方法；本發(fā)明的組合物可以但不需要還 包括另外的治療劑，例如下文描述的那些。本發(fā)明的組合物可以施用于患者以治療、預防、 改善、抑制人患者中的一種或多種MS癥狀的進展，或減少人患者中的一種或多種MS癥狀的 嚴重程度。AFP(或其生物活性片段、衍生物或類似物)和一種或多種免疫調諧劑可以以單 劑或多劑同延地或分別地進行施用。AFP(或其生物活性片段、衍生物或類似物)和一種或 多種免疫調諧劑可以配制用于相同施用途徑，或配制用于不同施用途徑。
可以使用本發(fā)明的組合物進行治療的MS癥狀的例子包括麻剌感、麻木、震顫、平 衡喪失、一肢或數肢中的無力、視力模糊或復視、言語不清、吞咽問題、麻痹、缺乏協(xié)調、認知 困難(例如，記憶力和注意力下降)、疲勞、肌痙攣、眩暈、呼吸問題和癲癇發(fā)作。這些MS癥 狀及其在治療過程中的消退可以由醫(yī)生在體格檢查過程中進行測量。用于診斷MS或測定 MS嚴重程度的另外測試在下文描述。 醫(yī)生可以基于患者中MS的嚴重程度、發(fā)生或進展(例如，基于一種或多種MS癥狀 的嚴重程度)，調整施用于患者的AFP (或其生物活性片段、衍生物或類似物)和/或一種或 多種免疫調諧劑的劑量(例如，增加或減少劑量) 當施用于MS患者時，本發(fā)明的組合治療優(yōu)選顯示出協(xié)同作用。
本發(fā)明的組合物 本發(fā)明提供了包括AFP (或其生物活性片段、衍生物或類似物)和一種或多種免疫 調諧劑的用于治療MS的組合物。本發(fā)明的組合物可以配制用于任何施用途徑(例如，本文 描述的制劑)，并且可以以單劑或多劑施用于有此需要的受試者。本發(fā)明的組合物還可以進 一步包括次級試劑，例如一種或多種DMARD、 NSAID或皮質類固醇，如下文討論的。
用于在本發(fā)明的組合物和方法中使用的AFPs
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甲胎蛋白(或其生物活性片段、衍生物或類似物)可以用于本發(fā)明的組合治療方 法中。為了本發(fā)明的目的，可以施用天然存在的人AFP和重組產生的AFP多肽(包括活性 AFP片段)。天然存在的人AFP可以通過從例如臍帶或臍帶血清中純化來獲得；而重組AFP 多肽或片段可以通過原核或真核表達系統(tǒng)來獲得，例如美國專利號5， 384， 250和美國專利 號7， 208， 576中描述的那些。使用不同的表達系統(tǒng)可以導致重組蛋白質的翻譯后修飾中的 差異。例如，天然存在的人AFP是可變糖基化的蛋白質。相比之下，當通過原核宿主細胞產 生時，重組AFP可以是未糖基化的，或當通過真核宿主細胞產生時，可以是略微不同糖基化 的?？商娲兀亟MAFP可以進行基因修飾以消除糖基化(例如，通過消除糖基化位點)， 與它在其中產生的表達系統(tǒng)無關。人AFP可通過各種商業(yè)供應商獲得，包括Fitzgerald Industries International(Concord, MA) 、 CellSciences(Canton, MA) 禾口 Biodesign International(Saco， ME)。 此外，可能采用眾所周知的化學合成方法以合成AFP多肽或片段，特別是如果AFP 片段是長度相對短的肽的話，例如具有少于100或50個氨基酸的肽。 與其起源或翻譯后修飾的存在或不存在無關，任何AFP多肽都可以用于本發(fā)明 中，只要多肽具有相對于天然存在的AFP相同或基本上相同的生物活性(例如，至少40%， 優(yōu)選至少50%、55%、65%、70%和75%，和更優(yōu)選至少80 % 、85 % 、90 % 、95 % 、99 %或 100X或更多天然存在的AFP的生物活性)。本發(fā)明的AFP的生物活性可以通過使用下文更 詳細描述的一種或多種測定進行評估。 類似地，人AFP的片段可以用于本發(fā)明的組合物和治療方法中，只要片段保留天 然存在的人AFP的基本上相同的生物活性(例如，如使用本文描述的一種或多種測定來測 定的)。人AFP的片段可以通過本領域技術人員已知的方法來產生，例如蛋白酶剪切或重組 表達，或可以起因于正常蛋白質加工(例如，從新生多肽中去除不是生物活性所必需的氨 基酸)?；瘜W方法也可以用于合成活性AFP片段。 適合于用于在實踐本發(fā)明中使用的重組人AFP片段包括結構域I(SEQ ID N0:1的氨基酸2(Thr)-198(Ser) (SEQ ID NO :5))，結構域II(SEQ ID N0:1的 氨基酸199(Ser)-390(Ser) (SEQ ID NO :6))，結構域III(SEQ ID N0:1的氨基酸 391 (Gin)-591 (Val) (SEQID NO :7))，結構域I+II (SEQ ID NO : 1的氨基酸2 (Thr)-390 (Ser) (SEQ ID NO :8))，結構域II+III(SEQ ID NO : 1的氨基酸199 (Ser)-591 (Val) (SEQ ID NO: 9))，和rHuAFP片段I(SEQ ID NO :1的氨基酸267 (Met)-591 (Val) (SEQ ID NO:IO))。已知 AFP片段的其他例子可以在例如整體引入本文作為參考的美國專利號5， 707， 963和美國專 利號6，818， 741中發(fā)現。 還設想了全長人AFP的功能衍生物或類似物或其片段的用途。如上所述，此種衍 生物或類似物可以通過氨基酸序列差異(例如，添加、缺失、保守或非保守置換)，或通過不 影響序列的修飾(例如，翻譯后修飾)或兩者而不同于全長天然人AFP或其部分。本發(fā)明 的衍生物/類似物將一般顯示出與全部或部分天然人AFP氨基酸序列(SEQ ID N0:1)至少 90 % ，更優(yōu)選至少95 % ，或甚至99 %的氨基酸同一性。 由于翻譯后修飾(這正常不改變一級序列)，AFP衍生物/類似物可以不同于天然 存在的人AFP，所述翻譯后修飾包括多肽的體內或體外化學衍生，例如乙?；螋然?；此種 修飾可以在多肽合成或加工過程中或用分離的修飾酶處理后發(fā)生。還包括了環(huán)化肽分子和類似物，其包含除L-氨基酸外的殘基，例如D-氨基酸或非天然存在的或合成氨基酸，例如 P或Y氨基酸，或具有非天然側鏈的L-氨基酸(參見例如，Noren等人，Science 244 :182， 1989)。用于非天然氨基酸位點特異性摻入蛋白質的蛋白質主鏈內的方法在例如Ellman等 人，Science 255 :197， 1992中得到描述。還包括了具有經修飾的肽鍵的化學合成多肽或肽 (例如，如美國專利號4， 897， 445和美國專利號5， 059， 653中描述的非肽鍵)或經修飾的側 鏈，以獲得如本文所描述的所需藥學性質。有用的衍生物和類似物使用領域公認的方法就 生物活性進行鑒定，例如本文描述的那些。
AFP活性測定 如上所述，適合于用于本發(fā)明的組合物和方法中的AFP多肽及其片段、衍生物和 類似物包括保留與天然存在的AFP相同或基本上相同的生物活性的那些。
AFP多肽或片段、衍生物或類似物活性的第一種測定是測量其與人外周單核細胞 上的細胞受體特異性結合的能力。適合于這個目的的結合測定在Parker等人，Protein Express. Purification 38 :177-183， 2004中得到描述。簡言之，競爭測定形式用于就其與 U937細胞——人單核細胞細胞系特異性結合的能力測試候選AFP多肽、片段、衍生物或類 似物。細胞維持在具有10X胎牛血清的RPMI培養(yǎng)基中。在結合測定前，細胞用無血清培 養(yǎng)基洗滌2次，并且在磷酸緩沖鹽水(PBS)中調整至2.5X106細胞/ml。天然人AFP(SEQ ID N0:1)或非糖基化的人AFP(參見例如，SEQ ID NO : 12，其中例如，殘基233是谷氨酰胺) 在正確反應中用可檢測標記例如熒光素進行標記，隨后為例如通過凝膠過濾去除未附著的 標記材料。在用熒光素標記人AFP的情況下，使蛋白質與溶于二甲亞砜中的熒光素-5-異 硫氰酸酯溶液在黑暗中混合1小時，隨后為凝膠過濾以去除未結合的染料。標記的人AFP 在-2(TC下貯存于20^甘油中直至使用。對于結合測定，一定數目的U937細胞(例如， 2. 5X106細胞/ml濃度的40iil細胞懸浮液)與和各自為一組終濃度(例如，20、 10、5、2. 5、 1. 25和0. 625 ii M)的未標記的人AFP或未標記的候選AFP多肽或片段、衍生物或類似物一 起的預定量的標記人AFP (例如，以0. 5 ii M的終濃度)混合，以測定關于人AFP和候選AFP 多肽或片段、衍生物或類似物的ICs。值。在結合過程結束時，細胞隨后用PBS進行洗滌，并 且懸浮于新鮮PBS中，從而使得保留在U937細胞上的標記AFP可以例如通過流式細胞術進 行測量。 AFP多肽或片段、衍生物或類似物活性的第二種測定是其在AMLR或EAE的小鼠 模型中抑制自身免疫反應的能力的測量。用于測試AMLR及其抑制的方法是本領域已知 的。例如，美國專利號5， 965， 528和6， 288， 034描述了如下的AMLR系統(tǒng)人外周血單核細 胞(PBMC)的分離、其分級分離成非T細胞群體和AMLR，根據標準程序進行。簡言之，通過 使1. 5X1()8PMBC經過商業(yè)抗Ig親和柱(US Biotek Laboratories, Seattle, WA)分離應 答T細胞，并且使2X10S應答細胞隨后與來自單個供體的2X105自身137&-輻射的(2500 拉德)非T剌激細胞一起培養(yǎng)。所采用的培養(yǎng)基由RPMI-1640組成，所述RPMI-1640補 充有20mMHEPES(Invitrogen)、5X10—5M 2-巰基乙醇(BDH， Montreal, QC) 、4mM L-谷氨 酰胺(Invitrogen)、100U/ml青霉素(Invitrogen)和100 y g/ml硫酸鏈霉素，其中添加 對于應答T細胞供體自身的10X新鮮人血清用于AMLR。在培養(yǎng)開始時加入各種濃度的 純化重組人AFP、人血清清蛋白、抗人AFP單克隆抗體克隆#164(在培養(yǎng)中125 y g/ml終 濃度)(LeincoTechnologies， St. Louis， M0) 。 AMLR培養(yǎng)物在37 。C下在95 %空氣和5 %C02中溫育4-7天。在指示時間間隔時，通過用1 y Ci 3H-胸苷(比活性56-80Ci/mmole ; ICN Radioisotopes, Cambridge, MA)的6小時脈沖來測定DNA合成。在多種樣品采集器 (Skatron， Sterling, VA)上收獲培養(yǎng)物，并且3H_TdR的摻入在Packard 2500TR液體閃爍計 數器中進行測量。結果表示為一式三份或一式四份培養(yǎng)物的平均cpm士平均值的標準誤。
在本發(fā)明范圍內的候選AFP多肽或片段、衍生物或類似物的免疫抑制活性可以通 過其抑制人自身混合淋巴細胞反應(AMLR)的能力進行評估。一般地，候選AFP多肽、片段或 衍生物就其抑制由自身非T細胞剌激的自身反應淋巴細胞的增殖應答的能力進行測試，這 通過4-7天的時間過程自始至終測量淋巴細胞自身增殖(autoproliferation)實現。AMLR 以劑量依賴性方式的抑制通過在T細胞自身增殖峰時執(zhí)行的來自劑量應答研究的結果得 到證實，其中AFP多肽或片段、衍生物或類似物在培養(yǎng)開始時加入。此外，平行生存力研究 可以用于確定AFP多肽或片段、衍生物或類似物對人自身反應T細胞的抑制活性并非是由 于非特異性細胞毒性效應。 AFP多肽或片段、衍生物或類似物活性的第三種測定可以使用實驗性自身免疫性 腦脊髓炎(EAE)的髓鞘少突膠質細胞糖蛋白(MOG)小鼠模型來進行。在這種體內測定中， 遺傳易感小鼠品系用在完全弗氏佐劑(CFA)中乳化的MOG進行皮下免疫接種，這導致在動 物中發(fā)展EAE。候選AFP多肽或片段、衍生物或類似物每天施用于所選擇的小鼠組，在MOG 開始施用于動物之前、同時或之后開始。監(jiān)控在這些動物中的EAE癥狀，并且在一定時間段 例如30天內與對照組(例如，僅接受鹽水注射的那些)中的那些進行比較。每只動物中的 EAE嚴重程度基于限定臨床癥狀給出1-5的得分；組中動物的平均得分指示組的疾病狀態(tài)。 與對照相比較，生物活性的AFP蛋白質或片段將減少接受MOG的動物中的EAE嚴重程度(例 如，在處理30天后，疾病嚴重程度中至少50%的減少)。 依賴在本發(fā)明范圍內的候選AFP抑制炎癥細胞因子的能力的第四種測定是可用 的，所述炎癥細胞因子由來自首次用于實驗的小鼠的促分裂原剌激的脾細胞的體外培養(yǎng)誘 導(例如，如在Hooper禾口 Evans， J. R印rod. Immunol. 16 :83—961， 1989 ;禾口 Kruisbeek， in Current Protocolsin Immunology, Vol. 1， Section 3. 1. 1-3. 1. 5， 2000中描述的)。在漸增 濃度的AFP的存在下，脾細胞用植物凝集素(PHA)、伴刀豆球蛋白(conconalavin)A(ConA) 或脂多糖(LPS)剌激24小時。人血清清蛋白用作關于測定的陰性對照。10點劑量應答研 究已顯示生物活性的AFP以可再現形式抑制或基本上抑制PHA誘導的IFN-y分泌。
用于在本發(fā)明的組合物和方法中使用的免疫調諧劑 本發(fā)明的組合物還包括用于在MS治療中使用的一種或多種免疫調諧劑。如本 文所定義的，免疫調諧劑是(1)與人IFN-a (例如，IFN-a-la、 IFN-a-lb、 IFN-a-2a 和IFN-a -2b ;分另U為SEQ ID N0S :11、 12、 13禾P 14)、人IFN—P (例如，IFN—P -la和 IFN-P-lb ;分別為SEQ ID N0S :15和16)、人IFN-y (例如，SEQ ID NO :17)或人IFN-t (例 如，SEQID NO :18)具有基本上相同(例如，至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、 97%、98%、99%或甚至100%相同)的氨基酸序列的蛋白質，或肽，例如乙酸格拉太咪爾
(Copaxone ) ; (2)小分子(例如，bg 12(延胡索酸鹽)、芬戈莫德(fty-720)、拉喹莫
德、特立氟胺或阿伐他汀，或展示與干擾素相同或基本上相同的生物活性的分子(例如，在
小鼠模型中抑制EAE的能力中人IFN-a 、人IFN-P 、人IFN-y或人IFN-t至少50%、60%、 70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%的活性);(3)抗體(例如，單克隆抗體(例如，
15a 4整聯(lián)蛋白結合抗體，例如那他珠單抗；IL-2受體結合抗體，例如達利珠單抗；CD20結合 抗體，例如利妥希瑪；IL_12結合抗體，例如ABT-874 ;和CD52結合抗體，例如阿來組單抗)、 多克隆抗體或抗體融合蛋白的全部或部分)；(4)肽(例如MBP-8289、NBI-5788和T細胞受
體肽(Neurovax ));或(5)dna疫苗(例如，bnt-3009-oi)。免疫調諧劑的另外例子在
圖5中列出。 相對于未接受免疫調諧劑的那些MS患者或接受安慰劑的那些患者，優(yōu)選的免疫 調諧劑具有減少(例如，至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、 70%、80%、90%或甚至100% ) —種或多種MS癥狀的嚴重程度的能力，或預防或減少(例 如，至少10% 、 15% 、20% 、25% 、30% 、35% 、40% 、45% 、50% 、60% 、70% 、80% 、90%或甚至 100% )人患者中的MS進展(例如，神經的脫髓鞘和一種或多種MS癥狀的頻率或嚴重程 度)的能力。 免疫調諧劑的非限制性例子包括這樣的蛋白質，其與人IFN-a 、 -|3 、 - y或-t 具有至少50% (更優(yōu)選至少60%、70%、75%、80%、90%、95%或100% )氨基酸序列同一 性，且在小鼠模型中抑制EAE能力方面具有人IFN-P -la的至少50% (更優(yōu)選至少50%、 60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%)活性，這類似于用于驗證AFP活性的測定 系統(tǒng)。免疫調諧劑的非限制性例子包括天然純化的干擾素和重組產生的干擾素。
干擾素的重組生產在生物醫(yī)學研究領域中常規(guī)實踐且用于各種臨床目的。例 如，人IL-P-la，天然地166氨基酸糖蛋白，已在中國倉鼠卵巢細胞系中作為八丫01^乂@ (Biogen， Cambridge, MA)或Rebi嚴(Serono， Geneva,瑞士 )進行生產，其可以呈現與其天 然存在的人配對物的那種不同的糖基化模式。 類似地，IFN-P -lb已在大腸桿菌(E. coli)細胞株中作為Betaseron⑧(Berlex， Wayne，NJ)或Betaferon(Schering AG， Berlin,德國)進行重組生產。盡管天然存在的人 IFN-13 -lb也是糖基化蛋白質，但細菌生產的IFN-13 -lb則不是。此外，在一些情況下，在人 IFN-P -lb的位置17處的半胱氨酸殘基由絲氨酸置換，以阻止不需要的二硫鍵形成。在其 他情況下，人IFN-P -lb的第一個氨基酸甲硫氨酸缺失，從而使得重組蛋白質僅具有165個 氨基酸。另一種已知修飾形式的人IFN是TauferonTM(P印gen，Alameda，CA)，其與人IFN-a 共享約55X序列同源性且適合于經口施用。這種修飾的人IFN蛋白質在例如引入本文作為 參考的W005/044297中得到描述。 其為重組干擾素的非限制性示例性免疫調諧劑包括Rofen)n-A⑧(ifn-a -2a)、 Intron-A (iFN-a-2b)、 Rebetron (iFN-a-2b)、 Alferon-N (iFN-a-n3)、 Peg-Intron (與單甲氧聚乙二醇共價綴合的iFN-a -2b) 、Infergen (與iFN-a -2b具 有88%同源性的非天然存在的i型干擾素)、Aetimmune (IFN_ y _lb)和Pegasys⑧(聚
乙二醇化IFN- a -la)。 本發(fā)明的另外免疫調諧劑包括Copaxone 、^Jovantr(m 、拉喹莫德、特立氟
胺、阿伐他汀、那他珠單抗(natalizumab)、達利珠單抗、利妥?，?、ABT_874、阿來組單抗、 MBP-8289、 NBI-5788、NeurOVax⑧和BNT-3009_01。
用于在本發(fā)明的組合治療中使用的補充治療劑
除AFP (或其生物活性片段、衍生物或類似物)和一種或多種免疫調諧劑外，本發(fā) 明的組合治療還可以但不需要包括一種或多種次級試劑的共同施用，例如下文列出的那 勝。 緩解疾病的抗風濕性藥物(DMARDs) 幾種藥物是本領域已知的，并且目前用于治療具有炎癥病癥的患者。若需要，本發(fā) 明的組合物可以與一種或多種DMARDs結合進行施用?？梢栽诒景l(fā)明中使用的DMARDs的非 限制性例子包括但不限于金諾芬、金硫葡糖、硫唑嘌呤、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、環(huán)孢菌素、 D-青霉胺、硫代蘋果酸金鈉(注射金)、羥氯喹、來氟洛米、氨甲蝶呤、米諾環(huán)素、麥考酚酸嗎 啉乙酯或柳氮磺吡啶。 氨甲蝶呤是可以在本發(fā)明的組合治療方法的一個實施方案中使用的DMARD例子。 氨甲蝶呤也稱為甲氨蝶呤、RHEUMATREX⑧(LederlePharmaceutical)或FOLEX① (Aventis)，是競爭地且可逆地抑制二氫葉酸還原酶(DHFR)的抗代謝物，所述酶是葉酸合 成代謝途徑的部分。 關于氨甲蝶呤的化學名稱是N-[4-[[(2，4-二氨基-6-蝶啶基)甲基]甲氨基] 苯甲酰基]-L-谷氨酸，盡管它通常以鈉鹽形式存在于藥物組合物中，并且它在此種組合物 中的量通過與游離酸等價進行測定。因此，當組合物被說成包含10mg氨甲蝶呤時，更大重 量的氨甲蝶呤鈉鹽可能存在于組合物中。氨甲蝶呤是已使用多年的普通藥物且通過各種供 應商商購可得。例如，氨甲蝶呤由Pfizer和Wyeth制造和銷售。
非類固醇抗炎藥(NSAIDs) 若需要，本發(fā)明的組合物可以與一種或多種NSAIDs結合進行施用?？梢栽诒景l(fā)明 中使用的NSAIDs的非限制性例子包括甲氧萘丙酸鈉、雙氯芬酸鈉、雙氯芬酸鉀、阿司匹林、 舒林酸、二氟尼柳、吡羅昔康、吲哚美辛、布洛芬、萘丁美酮、三水楊酸膽堿鎂、水楊酸鈉、雙 水楊酸、非諾洛芬鈣、氟比洛芬、酮洛芬、甲氯滅酸鈉、美洛昔康、奧沙普嗪、舒林酸、托美汀 和C0X-2抑制劑，例如羅非克西、塞來昔布、伐地昔布或羅美昔布。
皮質類固醇 若需要，本發(fā)明的組合物可以與一種或多種皮質類固醇結合進行施用。皮質類固 醇是特征在于氫化環(huán)戊烷多氫菲環(huán)系統(tǒng)的天然存在的或合成化合物。天然存在的皮質類 固醇一般由腎上腺皮質產生。合成皮質類固醇可以是鹵化的?？梢栽诒景l(fā)明中使用的示 例性皮質類固醇包括阿爾孕酮、6_ a -氟潑尼松龍、6_ a -甲基潑尼松龍、6_ a -甲基潑尼松 龍21-乙酸酯、6-0-甲基潑尼松龍21-半琥珀酸鈉鹽、6-0-9-0-二氟潑尼松龍21-乙 酸酯17-丁酸酯、安西法爾、倍氯美松、倍氯美松雙丙酸酯、倍氯美松雙丙酸酯一水合物、 6-13 _羥基氫化可的松、倍他米松、倍他米松-17-戊酸酯、布地奈德、氯倍他索、丙酸氯倍 他索、氯倍他松、氯可托龍、氯可托龍?zhí)匚焖狨ァ⒖傻乃伞⒋姿峥傻乃?、可托多松、地夫可特?21-脫氧氫化可的松、地潑羅酮、地西龍、丙縮羥強龍、去氧米松(desoximethasone)、地塞 米松、地塞米松-21-乙酸酯、二氟松、二氟松、雙醋二氟松、二氟米松、朵西貝他索、氟氫可 的松、氟米松、特戊酸氟米松、氟甲氧縮松、氟尼縮松、氟輕松、醋酸氟輕松、9-氟可的松、氟 羥雄烯二酮(fluorohydroxyandrostenedione)、氟米龍、氫氟縮松醋酸酯、氟甲睪酮、氟甲 叉龍(flupredidene)、氟潑尼龍、丙酮縮氟氫羥龍、氟甲酰龍、氯氟舒松、鹵米松、鹵潑尼松、 hyrcanoside、氫化可的松、醋酸氫化可的松、丁酸氫化可的松、氫化可的松環(huán)戊丙酸酯、氫
17化可的松磷酸鈉、氫化可的松琥珀酸鈉、丙丁酸氫化可的松(hydrocortisone probutate)、 戊酸氫化可的松、6-羥基地塞米松、異氟潑尼松、醋酸異氟潑尼松、異潑尼登、甲氯松、甲 基潑尼松龍、乙酸甲基潑尼松龍、甲基潑尼松龍琥珀酸鈉、帕拉米松、醋酸帕拉米松、潑尼 松龍、醋酸潑尼松龍、間磺苯酸潑尼松龍、潑尼松龍磷酸鈉、潑尼松龍叔丁乙酯、潑尼松 龍-21-半琥珀酸酯游離酸、潑尼松龍-21-乙酸酯、潑尼松龍-21 (13 -D-葡糖苷酸)、潑尼 松、潑尼立定、普西縮松、曲拉縮松、去炎松、曲安奈德、曲安奈德21-棕櫚酸酯、雙醋酸去炎 松、丙酮縮去炎松己酸酯和渥曼青霉素。特別希望的皮質類固醇是潑尼松龍、可的松、地塞 米松、氫化可的松、甲基潑尼松龍、氟替卡松、潑尼松、去炎松和二氟松。
藥物組合物 本發(fā)明的藥物組合物包含治療有效量的AFP(或其生物功能片段、衍生物或類似 物)和/或一種或多種免疫調諧劑?；钚猿煞諥FP和一種或多種免疫調諧劑，可以在相同 藥物組合物中進行施用，或者它們可以存在于2種分開的藥物組合物中，將2者施用于患者 (例如同延地或非同延地)。組合物可以配制用于在多種藥物遞送系統(tǒng)中使用。 一種或多 種藥學上可接受的賦形劑或載體也可以包括在組合物中用于正確的制劑。用于在本發(fā)明中 使用的合適制齊ll在Remington' s PharmaceuticalSciences， Mack Publishing Company, Philadelphia, PA，第17版(1985)中發(fā)現。關于藥物遞送方法的簡要綜述，參見，Langer， Science 249:1527-1533(1990)。 藥物組合物預期用于腸胃外、鼻內、局部、經口或局部施用，例如通過經皮方法，用 于預防和/或治療處理。通常，藥物組合物腸胃外(例如，通過靜脈內、肌內或皮下注射)、 或通過經口攝入或通過在受MS影響的區(qū)域處局部應用進行施用。因此，本發(fā)明提供了用 于腸胃外施用的組合物，其包含溶解或懸浮于可接受載體優(yōu)選地水性載體中的AFP (或其 生物活性片段、衍生物或類似物)和一種或多種免疫調諧劑，所述載體例如，水、緩沖水、鹽 水、PBS等。組合物可以包含如接近生理條件所需的藥學上可接受的輔助物質，例如pH調 整和緩沖劑、張力調整劑、濕潤劑、去污劑等。本發(fā)明還提供了用于經口遞送的組合物，其可 以包含惰性成分例如粘合劑或填充劑用于配制片劑、膠囊等。此外，本發(fā)明提供了用于局部 施用的組合物，其可以包含惰性成分例如溶劑或乳化劑用于配制乳膏、軟膏等。在本發(fā)明的 不同實施方案中，AFP和一種或多種免疫調諧劑可以在相同或分開組合物中配制，用于經由 相同或2種不同的施用途徑進行施用。 這些組合物可以通過常規(guī)滅菌技術進行滅菌，或可以進行無菌過濾。所得到的水 溶液可以包裝用于就這樣使用，或凍干，凍干制劑在施用前與無菌水性載體組合。制劑的pH 一般將是3-11，更優(yōu)選5-9或6-8，和最優(yōu)選7-8，例如7_7. 5。所得到的固體形式的組合物 可以在多個單劑單位中進行包裝，各自包含固定量的AFP(或其生物活性片段、衍生物或類 似物)和一種或多種免疫調諧劑，例如片劑或膠囊的密封包裝中。固體形式的組合物也可 以在用于靈活量的容器中進行包裝，例如在設計用于局部應用乳膏或軟膏的可擠壓管中。
可以施用包含有效量的AFP (或其生物活性片段、衍生物或類似物)和一種或多種 免疫調諧劑的組合物，用于預防和/或治療處理。在預防應用中，包含AFP(或其生物活性 片段、衍生物或類似物)和/或一種或多種免疫調諧劑的組合物施用于易感或在其他方面 處于發(fā)展MS危險中的患者。此種量定義為"預防有效劑量"。在這種用途中，精確量再次依 賴于患者的健康狀態(tài)，但一般為約0. 5mg-約4Q0mg AFP (或其生物活性片段、衍生物或類似物)/劑(例如，10mg、50mg、100mg、200mg、300mg或400mg/劑)禾口約0. 1 ii g_約300mg — 種或多種免疫調諧劑/劑(例如，lOii g、30ii g、50ii g、0. lmg、10mg、50mg、100mg或200mg/ 劑)。AFP和/或免疫調諧劑的劑量可以每小時、每天、每周、每月或每年一次或多次(例如， 每小時、每天、每周、每月或每年2、4、5、6、7、8、9、10、11或12次)預防地施用于患者。更通 常地，每周單劑的AFP和/或免疫調諧劑施用于患者。 在治療應用中，組合物施用于已患有MS的患者(例如，人患者)，其量足以治愈或 至少部分阻止或緩解疾病及其并發(fā)癥的一種或多種癥狀。足以實現這個目的的量定義為 "治療有效劑量"。對于這個用途有效的量可以依賴于疾病或狀況的嚴重程度和患者的一般 狀態(tài)，但一般為約0. 5mg-約400mg AFP (或其生物活性片段、衍生物或類似物)/劑(例如， 10mg、50mg、100mg、200mg、300mg或400mg/劑)和約0. 1 ii g-約1. 2g —種或多種免疫調諧 齊U/齊U (例如，10ii g、30ii g、50ii g、0. lmg、10mg、50mg、100mg、200mg、300mg、500mg、700mg或 1. Og/劑)。AFP和/或免疫調諧劑的劑量可以每小時、每天、每周、每月或每年一次或多次 (例如，每小時、每天、每周、每月或每年2、4、5、6、7、8、9、10、11或12次)治療地施用于患 者。更通常地，每周單劑的AFP和/或免疫調諧劑施用于患者。 在幾個實施方案中，患者可以接受每周一次或多次(例如，每周2、3、4、5、6或7次 或更多次)約0. 5-約400mg/劑的AFP (或其生物活性片段、衍生物或類似物)，優(yōu)選地每周 一次或多次約5mg-約300mg/劑，和甚至更加優(yōu)選地每周一次或多次約5mg-約200mg/齊U。 患者還可以接受約50mg-約800mg的每兩周劑量的AFP (或其生物活性片段、衍生物或類似 物)，或約50mg-約1， 200mg的每月劑量的AFP (或其生物活性片段、衍生物或類似物)。
在其他實施方案中，AFP可以以約O. 5mg/周-約400mg/周、約1. Omg/周-約 300mg/周、約5mg/周-約200mg/周、約10mg/周-約100mg/周、約20mg/周-約80mg/ 周、約100mg/周-約300mg/周或約100mg/周-約200mg/周的一般劑量范圍施用于患者。 AFP可以以約0. 5mg每隔一天-約100mg每隔一天、優(yōu)選地約5mg每隔一天-約75mg每隔 一天、更優(yōu)選地約10mg每隔一天-約50mg每隔一天、和甚至更加優(yōu)選地20mg每隔一天-約 40mg每隔一天的范圍進行施用。AFP還可以以約0. 5mg 3次/周-約100mg 3次/周，優(yōu) 選地約5mg 3次/周-約75mg 3次/周，更優(yōu)選地約10mg 3次/周-約50mg 3次/周， 和甚至更加優(yōu)選地約20mg 3次/周-約40mg 3次/周的范圍進行施用。
在幾個實施方案中，患者可以接受每周一次或多次(例如，每周2、3、4、5、6或7 次或更多次)約30 ii g-約300mg/劑的免疫調諧劑，優(yōu)選地每周一次或多次約30 y g-約 200mg/齊U，和更加優(yōu)選地每周一次或多次約30iig-約100mg/劑?；颊哌€可以接受約 30 ii g-約1. 2g的每兩周、每三周或每月劑量的免疫調諧劑，優(yōu)選地約50 ii g-約1， OOOmg的 劑量，更優(yōu)選地約100 ii g-約500mg的劑量。
在其中施用的免疫調諧劑是Avonex 的一些實施方案中，患者接受約isy g/
周-約75ii g/周，優(yōu)選地約20ii g/周-約50ii g/周，更優(yōu)選地約25ii g/周-約40ii g/周， 和甚至更加優(yōu)選地約30 ii g/周-40 ii g/周的一般劑量?；颊哌€可以接受約0. 5mg/周-約 100mg/周，優(yōu)選地約5mg/周-約75mg/周，更優(yōu)選地約10mg/周-約50mg/周，和甚至更加 優(yōu)選地約20mg/周-約40mg/周的AFP多肽(或其生物活性片段)。 在其中施用的免疫調諧劑是Betaseroi^的另一個示例性實施方案中，施用的一
般劑量可以是約6 ii g每隔一天-約2. Omg每隔一天，優(yōu)選地約50 ii g每隔一天-約1. Omg每隔一天，更優(yōu)選地約100 ii g每隔一天_約500 ii g每隔一天，和甚至更加優(yōu)選地約250 ii g 每隔一天_約500 g每隔一天的范圍。患者還可以接受約0. 5mg每隔一天-約lOOmg每 隔一天，優(yōu)選地約5mg每隔一天-約75mg每隔一天，更優(yōu)選地約10每隔一天-約50mg每 隔一天，和甚至更加優(yōu)選地約20mg每隔一天-約40mg每隔一天的AFP多肽(或其生物活 性片段)。 在另一個實施方案中，其中免疫調諧劑是Rebi產，施用的一般劑量可以是約
4. 4 ii g 3次/周-約100 ii g 3次/周，優(yōu)選地約10 ii g 3次/周-約75 ii g3次/周，更優(yōu) 選地約15 ii g 3次/周-約50 ii g 3次/周，和甚至更加優(yōu)選地約22 ii g3次/周-約44 ii g 3次/周的范圍?；颊哌€可以接受約0. 5mg 3次/周-約lOOmg 3次/周，優(yōu)選地約5mg 3 次/周_約75mg 3次/周，更優(yōu)選地約10mg 3次/周-約50mg 3次/周，和甚至更加優(yōu) 選地約20mg 3次/周-約40mg 3次/周的AFP多肽(或其生物活性片段)。 在另一個實施方案中，其中免疫調諧劑是TauferonTM，施用的一般劑量可以是約 0. lmg/天-約40mg/天，優(yōu)選地約0. lmg/天-約10mg/天，更優(yōu)選地約lmg/天-約10mg/ 天，和甚至更加優(yōu)選地約2mg/天-約5mg/天的范圍。患者還可以接受約0. 5mg 3次/ 周-約lOOmg 3次/周，優(yōu)選地約5mg 3次/周-約75mg 3次/周，更優(yōu)選地約10mg 3次 /周-約50mg 3次/周，和甚至更加優(yōu)選地約20mg 3次/周-約40mg 3次/周的AFP多 肽(或其生物活性片段)。 在另一個實施方案中，其中免疫調諧劑是11()^1"011-/|^，施用的一般劑量可以是
約2. 0 X 106IU/天-約36. 0 X 106IU/天，優(yōu)選地約3. 0 X 106IU/天-約36. 0 X 106IU/天，更 優(yōu)選地約5. 0 X 106IU/天-約30. 0 X 106IU/天，和甚至更加優(yōu)選地約5. 0 X 106IU/天-約 25.0Xl(flU/天的范圍?；颊哌€可以接受約O. 5mg 3次/周-約lOOmg 3次/周，優(yōu)選地 約5mg 3次/周-約75mg 3次/周，更優(yōu)選地約10mg 3次/周-約50mg 3次/周，和甚 至更加優(yōu)選地約20mg 3次/周-約40mg 3次/周的AFP多肽(或其生物活性片段)。 在另一個實施方案中，其中免疫調諧劑是111"011-八@，施用的一般劑量可以是約
5. 0X106IU/周-約35. 0X 106IU/周，優(yōu)選地約6. 0X106IU/周-約35. 0X 106IU/周，更 優(yōu)選地約6. 0 X 106IU/周-約30. 0 X 106IU/周，和甚至更加優(yōu)選地約25. 0 X 106IU/周-約 35.0Xl(flU/周的范圍?；颊哌€可以接受約O. 5mg 3次/周-約lOOmg 3次/周，優(yōu)選地 約5mg 3次/周-約75mg 3次/周，更優(yōu)選地約10mg 3次/周-約50mg 3次/周，和甚 至更加優(yōu)選地約20mg 3次/周-約40mg 3次/周的AFP多肽(或其生物活性片段)。 在另一個實施方案中，其中免疫調諧劑是Rebetroi^，施用的一般劑量可以是約
0. 5X106IU/周-約10. 0X106IU/周，優(yōu)選地約1. 0X106IU/周-約10. 0X106IU/周，更 優(yōu)選地約2. OX 106IU/周-約10. OX 106IU/周，和甚至更加優(yōu)選地約5. OX 106IU/周-約 10.0Xl(flU/周的范圍?；颊哌€可以接受約O. 5mg 3次/周-約100mg 3次/周，優(yōu)選地 約5mg 3次/周-約75mg 3次/周，更優(yōu)選地約10mg 3次/周-約50mg 3次/周，和甚 至更加優(yōu)選地約20mg 3次/周-約40mg 3次/周的AFP多肽(或其生物活性片段)。
在其中施用的免疫調諧劑是Peg-Introi^的一些實施方案中，患者接受約15 y g/
周-約150 ii g/周，優(yōu)選地約20 ii g/周-約150 ii g/周，更優(yōu)選地約50 ii g/周-約150 ii g/ 周，和甚至更加優(yōu)選地約50ii g/周-100ii g/周的一般劑量?；颊哌€可以接受約O. 5mg 3次
20/周-約lOOmg 3次/周，優(yōu)選地約5mg 3次/周-約75mg 3次/周，更優(yōu)選地約10mg 3 次/周_約50mg 3次/周，和甚至更加優(yōu)選地約20mg 3次/周-約40mg 3次/周的AFP 多肽(或其生物活性片段)。 在另一個實施方案中，其中免疫調諧劑是Alferon-N⑧,施用的一般劑量可以是約
0. 05 X 106IU/天-約15. 0 X 106IU/天，優(yōu)選地約0. 1 X 106IU/天-約15. 0 X 106IU/天，更 優(yōu)選地約1. 0 X 106IU/天-約15. 0 X 106IU/天，和甚至更加優(yōu)選地約2. 0 X 106IU/天-約 15.0Xl(flU/天的范圍?；颊哌€可以接受約O. 5mg 3次/周-約100mg 3次/周，優(yōu)選地 約5mg 3次/周-約75mg 3次/周，更優(yōu)選地約10mg 3次/周-約50mg 3次/周，和甚 至更加優(yōu)選地約20mg 3次/周-約40mg 3次/周的AFP多肽(或其生物活性片段)。 在其中施用的免疫調諧劑是Infergen⑧的一些實施方案中，患者接受約2i!g/
天-約30 ii g/天，優(yōu)選地約5 ii g/天-約30 ii g/天，更優(yōu)選地約5 ii g/天-約25 ii g/天， 和甚至更加優(yōu)選地約5 ii g/天-20 ii g/天的一般劑量。患者還可以接受約0. 5mg 3次/ 周-約100mg 3次/周，優(yōu)選地約5mg 3次/周-約75mg 3次/周，更優(yōu)選地約10mg 3次 /周-約50mg 3次/周，和甚至更加優(yōu)選地約20mg 3次/周-約40mg 3次/周的AFP多 肽(或其生物活性片段)。 在另一個實施方案中，其中免疫調諧劑是Actimmune ，施用的一般劑量可以是
約0. 5 X 106IU/周-約30. 0 X 106IU/周，優(yōu)選地約1. 0 X 106IU/周-約30. 0 X 106IU/周，更 優(yōu)選地約5. OX 106IU/周-約30. OX 106IU/周，和甚至更加優(yōu)選地約5. OX 106IU/周-約
io. oxio6iu/周的范圍。ActimmuiW^也可以以約40y g/周-約eooy g/周，優(yōu)選地約
100 y g/周-約600 ii g/周，更優(yōu)選地約150 y g/周-約600 ii g/周，和甚至更加優(yōu)選地約 200 y g/周-約600 ii g/周的范圍進行施用?；颊哌€可以接受約0. 5mg 3次/周-約lOOmg 3次/周，優(yōu)選地約5mg 3次/周-約75mg 3次/周，更優(yōu)選地約10mg 3次/周-約50mg 3次/周，和甚至更加優(yōu)選地約20mg3次/周-約40mg 3次/周的AFP多肽(或其生物活 性片段)。 在另一個實施方案中，其中免疫調諧劑是Pegasys⑧，施用的一般劑量可以是約
10 y g/周-約300 ii g/周，優(yōu)選地約50 ii g/周-約300 ii g/周，更優(yōu)選地約50 ii g/周-約 200 g/周，和甚至更加優(yōu)選地約100 y g/周-約200 y g/周的范圍?；颊哌€可以接受約 0. 5mg 3次/周-約lOOmg 3次/周，優(yōu)選地約5mg 3次/周-約75mg 3次/周，更優(yōu)選地 約10mg 3次/周-約50mg 3次/周，和甚至更加優(yōu)選地約20mg 3次/周-約40mg 3次 /周的AFP多肽(或其生物活性片段)。 在另一個實施方案中，其中免疫調諧劑是^IovanU c)ne ，施用的一般劑量可以
是約0. 2mg/m7周-約80mg/m7周，優(yōu)選地約1. 0mg/m2/周-約80mg/m7周，更優(yōu)選地約 5. 0mg/m7周-約80mg/m7周，和甚至更加優(yōu)選地約20. 0mg/m2/周-約80mg/m7周的范圍。 患者還可以接受約0. 5mg 3次/周-約lOOmg 3次/周，優(yōu)選地約5mg 3次/周-約75mg 3次/周，更優(yōu)選地約10mg 3次/周-約50mg 3次/周，和甚至更加優(yōu)選地約20mg 3次/ 周-約40mg 3次/周的AFP多肽(或其生物活性片段)。 在另一個實施方案中，其中免疫調諧劑是Copaxone⑧，施用的一般劑量可以是
約0. lmg/天-約40mg/天，優(yōu)選地約1. Omg/天-約40mg/天，更優(yōu)選地約5. Omg/天-約
2140mg/天，和甚至更加優(yōu)選地約10. 0mg/天-約40mg/天的范圍?；颊哌€可以接受約0. 5mg 3次/周-約100mg3次/周，優(yōu)選地約5mg 3次/周-約75mg 3次/周，更優(yōu)選地約10mg 3次/周_約50mg 3次/周，和甚至更加優(yōu)選地約20mg 3次/周-約40mg3次/周的AFP 多肽(或其生物活性片段)。 在本發(fā)明的方法的非限制性實施方案中，AFP(或其生物活性片段、衍生物或類似
物)和一種或多種免疫調諧劑施用于患者連續(xù)1、2、3或4小時；l、2、3或4次/天；每隔一
天或每兩天，每隔兩天，每隔三天，或每隔四天；1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次/周；每兩周； 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29 或30次/月;每兩月;1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次/6個月;1、2、3、4、5、6、7、8、9、10U1、 12、13、14、15、16、17、18、19或20次/年；或每半年。AFP (及其生物活性片段、衍生物或類 似物)和一種或多種免疫調諧劑可以在治療方案過程中以不同頻率進行施用(即，在MS的 晚期中以較高頻率施用(例如，在MS起始階段中每周施用1次和在MS的晚期每周施用3 次)或在MS的早期以較高頻率施用(例如，在MS起始階段過程中每周施用3次和在MS的 晚期每周施用1次))。在另外的實施方案中，AFP(或其生物活性片段、衍生物或類似物) 和一種或多種免疫調諧劑可以以相同頻率或不同頻率施用于患者。 達到所需療效需要的一種或多種免疫調諧劑和AFP(或其生物活性片段、衍生物 或類似物)的量依賴于眾多因素，例如所選擇的具體免疫調諧劑、施用方式和接受者的臨 床狀況。技術人員將能夠確定一種或多種免疫調諧劑和AFP(或其生物活性片段、衍生物或 類似物)的合適劑量以達到所需結果。 根據本發(fā)明的方法，AFP(或其生物活性片段、衍生物或類似物)和一種或多種免 疫調諧劑的共同施用指在相同一般時間段中使用2種活性成分，或使用相同的一般施用方 法。然而，不總是必需在確切相同的時間施用2者。例如，如果AFP和一種或多種免疫調諧 劑在2種分開的藥物組合物中施用于患有MS的患者，那么2種組合物無需在相同時間段過 程中或甚至在2個部分重疊的時間段過程中施用于患者。在一些情況下，第二種試劑(例 如，AFP)的施用可以在關于第一種試劑(例如，IFN-e-la)的施用時間段完成后不久開始， 或反之亦然。2個施用時間段的時間間隙可以是1天到1周或1個月。在一些情況下，一 種治療劑(例如，AFP)可以首先在分開的時間段中與第二種試劑(例如，IFN) —起施用， 并且隨后在后續(xù)時間段中不含第二種進行施用。這個類型的一般時間表可能需要在第一個 共同施用時間段中的較高劑量的第一種治療劑和在第二個時間段中的較低劑量，且反之亦 然。這同樣適用于第二種試劑。 包含有效量的AFP (或其生物活性片段、衍生物或類似物)和/或一種或多種免疫
調諧劑的組合物的單次或多次施用可以用由治療醫(yī)生選擇的劑量水平和模式來進行。劑量
和施用時間表可以基于患者中的多發(fā)性硬化嚴重程度進行確定且調整，根據由臨床醫(yī)生通
常實踐的方法或本文描述的那些，這可以在治療過程自始至終進行監(jiān)控。 關于次級試劑的劑量 除AFP(或其生物活性片段、衍生物或類似物)和一種或多種免疫調諧劑外，本發(fā) 明的組合治療還可以但不需要包括一種或多種次級試劑(例如，DMARD、 NSAID或皮質類固 醇)的共同施用。關于這些次級試劑的劑量在下文描述。 作為次級試劑，DMARD可以以下述范圍施用于患者約0. lmg-3， 000mg/劑一次或多次/周(例如，2、3、4、5、6、或7次或更多次/周)、0. lmg-2， 500mg/劑一次或多次/周、 0. lmg-2， 000mg/劑一次或多次/周、0. lmg-l， 500mg/劑一次或多次/周、0. lmg-l， 000mg/ 劑一次或多次/周、0. lmg-800mg/劑一次或多次/周、0. lmg-600mg/劑一次或多次/周、 0. lmg-500mg/劑 一 次或多次/周、0. lmg-400mg/劑 一 次或多次/周、0. lmg-300mg/劑 一次或多次/周、0. lmg-250mg/劑 一次或多次/周、0. lmg-200mg/劑 一次或多次/周、 0. lmg-150mg/劑一次或多次/周、0. lmg-100mg/劑一次或多次/周或0. lmg-50mg/劑一次 或多次/周。 作為次級試劑，NSAID可以以下述范圍施用于患者0. lmg-l， 500mg/劑一次或多 次/周(例如，2、3、4、5、6、或7次或更多次/周)、0. lmg-l， 200mg/劑一次或多次/周、 0. lmg-l， 000mg/劑一次或多次/周、0. lmg-800mg/劑一次或多次/周、0. lmg-600mg/劑 一次或多次/周、0. lmg-500mg/劑 一次或多次/周、0. lmg-400mg/劑 一次或多次/周、 0. lmg-300mg/劑 一 次或多次/周、0. lmg-200mg/劑 一 次或多次/周、0. lmg-150mg/劑 一次或多次/周、0. lmg-100mg/劑 一 次或多次/周、0. lmg-80mg/劑 一 次或多次/周、 0. lmg-60mg/劑一次或多次/周、0. lmg-40mg/劑一次或多次/周、0. lmg-20mg/劑一次或多 次/周或0. lmg-10mg/劑一次或多次/周。 作為次級試劑，皮質類固醇可以以下述范圍施用于患者0. lmg-l， 500mg/劑一次 或多次/周(例如，2、3、4、5、6、或7次或更多次/周)、0. lmg-l， 200mg/劑一次或多次/ 周、0. lmg-l， 000mg/劑一次或多次/周、0. lmg-800mg/劑一次或多次/周、0. lmg-600mg/ 劑一次或多次/周、0. lmg-500mg/劑一次或多次/周、0. lmg-400mg/劑一次或多次/周、 0. lmg-300mg/劑 一 次或多次/周、0. lmg-200mg/劑 一 次或多次/周、0. lmg-150mg/劑 一次或多次/周、0. lmg-100mg/劑 一 次或多次/周、0. lmg-80mg/劑 一 次或多次/周、 0. lmg-60mg/劑一次或多次/周、0. lmg-40mg/劑一次或多次/周、0. lmg-20mg/劑一次或多 次/周或0. lmg-10mg/劑一次或多次/周。
試劑盒 本發(fā)明還提供了用于治療MS的試劑盒。試劑盒一般包括包含AFP多肽(或其生 物活性片段、衍生物或類似物)的藥物組合物，以及包含一種或多種免疫調諧劑的藥物組 合物，各自以治療有效量用于治療MS。在可替代實施方案中，有效量的AFP(或其生物活性 片段、衍生物或類似物)和一種或多種免疫調諧劑可以存在于單一藥物組合物中。任選地， 一種或多種藥物組合物可以包含一種或多種藥學上可接受的賦形劑，或可以包含一種或多 種次級試劑(例如，DMARD、皮質類固醇或NSAID)。 優(yōu)選地，試劑盒包括單劑的一種或多種藥物組合物的多個包裝，所述藥物組合物 包含有效量的AFP(或其生物活性片段、衍生物或類似物)和/或一種或多種免疫調諧劑。 任選地，關于施用一種或多種藥物組合物所需的儀器或設備可以包括在試劑盒中。例如，本 發(fā)明的試劑盒可以提供包含有效量的AFP(或其生物活性片段、衍生物或類似物)的一個 或多個預裝注射器，和包含有效量的一種或多種免疫調諧劑的一個或多個預裝注射器或片 齊U。此外，試劑盒還可以包括另外組分，例如說明書或施用時間表用于患有MS的患者，以使 用包含AFP(或其生物活性片段、衍生物或類似物)和/或一種或多種免疫調諧劑的一種 或多種藥物組合物。本發(fā)明的試劑盒的不同實施方案還可以包含一種或多種次級試劑(例 如，NSAID、 DMARD或皮質類固醇)。
對于本領域技術人員顯而易見的是，在不背離本發(fā)明的精神或范圍的情況下，可 在本發(fā)明的組合物、方法和試劑盒中進行各種修飾和改變。因此，預期本發(fā)明包含本發(fā)明的 修飾和變化，前提是它們在附加權利要求及其等同方案的范圍內。
實施例 提供下述實施例僅用于舉例說明而不是限制。本領域技術人員將容易認識到可以 改變或修飾各種非關鍵參數，以產生基本上相同或相似的結果。
實施例1 :使用M0G-EAE小鼠模型的重組AFP的功能測試 重組形式的人AFP(根據美國專利申請公開號20040098755產生的rhAFP)的功效 實驗在小鼠模型中來進行，其中通過用髓鞘質抗原或肽(髓鞘少突膠質細胞蛋白質[M0G] 或蛋白脂質蛋白質[PLP])免疫接種遺傳易感小鼠品系來誘導實驗性自身免疫性腦脊髓炎 (EAE)。這個測定系統(tǒng)用于測定本發(fā)明的AFP多肽或生物活性AFP片段的功能性。
研究目的這些研究的目的是用預期作為用于MS的治療劑的測試化合物執(zhí)行，所 述MS是與主要組織相容性復合物(MHC)II類分子HLA-DR2直接相關的自身免疫疾病。就 其與人MS的關聯(lián)性選擇小鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)模型。
EAE模型描述和特征實驗性變應性腦脊髓炎(EAE)是中樞神經系統(tǒng)的脫髓鞘疾 病。它充當關于多發(fā)性硬化(MS)的動物模型(Goverman， Lab. Anim. Sci. 46 :482， 1996 ; Paterson，Clin. Immunol. Rev. 1 :581,1981)。 EAE可以呈現急性、慢性或復發(fā)-緩解疾病過 程，其依賴于誘導方法和使用的動物類型。疾病誘導導致逐步升高程度的上行性動物麻痹。 所產生的麻痹是使虛弱的，但并非疼痛的，并且大多數動物將顯示一定程度的恢復，即使在 EAE晚期。麻痹通常從虛弱的尾部開始，逐漸隨后為后肢無力進展至麻痹，并且較不頻繁地 前肢麻痹。EAE疾病進展可以用評分系統(tǒng)進行監(jiān)控，所述評分系統(tǒng)由正常狀況開始且當小鼠 變得瀕死時結束。因為疾病嚴重程度從動物到動物不等，所以不存在可靠預測動物是否恢 復的方法。因此，在這種動物模型中需要緊密監(jiān)控。EAE可以用中樞神經系統(tǒng)的組分(Levine和Sowinski， J. Immunol. 110 :139， 1973 ;Fritz等人，J. Immunol. 130 :1024， 1983)、或月太(Tuohy等人，J. Immunol. 140 :1868， 1988 ;McFarlin等人，Science179 :478， 1973 ;和Linington等人，Eur. J. Immunol. 23 : 1364， 1993)、并且還經由從EAE誘導動物到正常接受者的T細胞轉移(Yamamura等人， J.Neurol. Sci. 76 :269,1986)進行誘導。完全弗氏佐劑(CFA)必須與蛋白質或肽一起 使用，以有效觸發(fā)自身免疫應答。CFA通常與百日咳毒素組合使用(Lee， Proc.Soc.E鄧. Biol. Med. 89 :263， 1955 ;Kamradt等人，J. Immunol. 147 :3296， 1991)，以增加免疫接種的功 效。不可能施用止痛劑以減輕可能與CFA注射相關的任何疼痛，因為大多數止痛劑影響其 為模型的基本組分的免疫應答(Billiau， J. Leukoc. Biol. 70 :849,2001 ;Naiki等人，Int. J. Imm皿opharmacol. 13 :235， 1991)。
實驗設計和方法 實驗MS樣疾病綜合征的誘導6-8周齡的50只雌性小鼠(C57BL6)在第0天(左 腰椎旁區(qū))和第7天(右腰椎旁區(qū))時進行皮下免疫接種，其中使用在包含熱殺死的結 核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)H37RA的CFA中的髓鞘少突膠質細胞糖蛋白 (mM0G-35-55肽)乳劑(125yg/小鼠)。此外，小鼠在免疫接種后第0天和第2天時腹膜 內給予百日咳毒素(Ptx)。
疾病監(jiān)控在第一次免疫接種后 IO天開始觀察到起始病征(無力的尾部或麻 痹)。主動免疫接種的小鼠根據確定的等級就EAE臨床病征每天進行評估，直到第30天
O無疾病
l尾部無力 21個或2個無力后肢，足以損害復原(righting)或1肢麻痹
3截癱 4四肢麻痹(quadr即l egic)
5瀕死或死亡 將50只小鼠隨機分成各10只小鼠的5個組。10只小鼠的一個組接受鹽水注射，
以充當未經處理的EAE疾病對照。4種化合物在剩余4個組中進行評估。 小鼠用100 iil測試rhAFP或對照材料每天進行IP注射。這些化合物是1-500 y g
rhAFP; 1-500 iig人血清清蛋白(對照)。此外，針對特定白細胞子集(例如，CD4+細胞)
的耗盡抗體在一些研究中用作一種或多種另外的對照。 小鼠在這個研究中用于評估在MS的實驗模型EAE中rhAFP對疾病進展的作用。如
果沒有治療，那么預期許多動物將發(fā)展EAE病征和癥狀，即進行性腦病和麻痹。 除在30天時間過程中就疾病進展每天監(jiān)控動物外，在研究結束時處死動物，并且
收獲中樞神經系統(tǒng)組織(腦和脊髓)用于浸潤性、引起疾病的細胞(即，CD4+T細胞)的免
疫組織化學分析。 此外，6-10天短期研究用于評估rhAFP施用對疾病誘導期的一種或多種作用。在 這些較短期研究中，收獲引流淋巴結細胞用于免疫學細胞子集的FACs分析，包括但不限 于T細胞、CD4+細胞、調節(jié)T細胞及其活化標記。來自每個處理組的收獲細胞的級分就對 剌激實驗對象組的體外增殖應答進行評估，以評估針對免疫抗原(Ag)M0G35-55的Ag特異 性回憶應答、和針對促分裂原實驗對象組(伴刀豆球蛋白A、PHA、LPS)的Ag非特異性應答。 來自相同方式的培養(yǎng)物結構的上清液就細胞因子(IL-2、IL-4、IFN-y等)進行分析。
實施例2 :AFP和干擾素13 la在MOG-EAE小鼠模型中的協(xié)同作用
重組人AFP和干擾素13 la用于治療EAE的協(xié)同作用在利用用于MS的MOG-EAE或 PLP-EAE小鼠模型的研究中進行測試。 —般實驗設計等同于實施例1。簡言之，6-8周齡的70只雌性小鼠(C57BL6)在 第0天(左腰椎旁區(qū))和第7天(右腰椎旁區(qū))時進行皮下免疫接種，其中使用在包含熱 殺死的結核分枝桿菌H37RA的CFA中的髓鞘少突膠質細胞糖蛋白(mM0G-35-55肽)乳劑 (125iig/小鼠)。 將70只小鼠隨機分成各10只小鼠的7個組。10只小鼠的一個組接受鹽水注射，以 充當未經處理的EAE疾病對照。6種不同制劑在剩余6個組中進行評估。組1小鼠接受安 慰劑；組2接受10 ii g/天的rhAFP ;組3接受100 y g/天的rhAFP ;組4接受0. 1 y g/天的 IFN- P -la ;組5接受1 ii g/天的IFN- P -la ;組6接受分別為10 y g和0. 1 y g/天的rhAFP 和IFN-P -la ;和組7接受分別為100 ii g禾口 1 ii g/天的rhAFP和IFN-Ha。施用為通過 每天注射(ip或皮下)從第0天直到在第60天實驗結束時。在研究的持續(xù)時間，根據如實 施例1中所述的等級，所有組每天就疾病癥狀進行評分。 在第60天時，所有小鼠實施安樂死，并且收獲各種器官和血液(例如，脾、膝、后和前爪)用于免疫組織化學和免疫學分析。
其他實施方案 盡管本發(fā)明已結合其具體實施方案進行描述，但應當理解它能夠進一步修飾，并 且本申請預期包含本發(fā)明的任何變化、用途或適應，所述任何變化、用途或適應遵循一般而
言的本發(fā)明原理的，并且包括來自在本發(fā)明所屬領域的已知或常規(guī)實踐內且可以用于上文 闡述的基本特征的本公開內容的此種背離。 本說明書中提及的所有出版物和專利申請都引入本文作為參考，其程度與每個獨 立出版物或專利申請?zhí)貏e且個別指出整體引入作為參考相同。
權利要求
一種用于治療具有多發(fā)性硬化(MS)的患者的方法，其包括給所述患者施用治療有效量的甲胎蛋白(AFP)或其生物活性片段、衍生物或類似物，和治療有效量的免疫調諧劑。
2. 權利要求1的方法，其中所述AFP或其生物活性片段是人重組AFP。
3. 權利要求1的方法，其中所述AFP或其生物活性片段是非糖基化的。
4. 權利要求1的方法，其中所述免疫調諧劑是蛋白質。
5. 權利要求4的方法，其中所述蛋白質是干擾素或乙酸格拉太咪爾。
6. 權利要求5的方法，其中所述干擾素選自干擾素-!3-la、干擾素-l3-lb、干擾 素-a、干擾素-Y、干擾素-T。
7. 權利要求l的方法，其中所述免疫調諧劑是抗體。
8. 權利要求7的方法，其中所述抗體選自那他珠單抗、達利珠單抗、利妥?，?、ABT-874 和阿來組單抗。
9. 權利要求l的方法，其中所述免疫調諧劑是小分子。
10. 權利要求9的方法，其中所述小分子是BG12、芬戈莫德、米托蒽醌、拉喹莫德、特立 氟胺或阿伐他汀。
11. 權利要求1的方法，其中所述AFP或其生物活性片段、衍生物或類似物每天、每周、 每兩周或每月進行施用。
12. 權利要求11的方法，其中所述AFP或其生物活性片段、衍生物或類似物每天進行施用。
13. 權利要求1的方法，其中所述AFP或其生物活性片段、衍生物或類似物以約0. 5mg 或400mg/劑進行施用。
14. 權利要求l的方法，其中所述免疫調諧劑每天、每周、每兩周或每月進行施用。
15. 權利要求1的方法，其中所述免疫調諧劑以約50ii g-300mg/劑進行施用。
16. 權利要求l的方法，其中所述AFP和所述免疫調諧劑同延地進行施用。
17. 權利要求l的方法，其中所述AFP和所述免疫調諧劑在分開劑型中進行施用。
18. 權利要求l的方法，其中所述AFP和所述免疫調諧劑在相同劑型中進行施用。
19. 權利要求l的方法，其中所述AFP和所述免疫調諧劑分開進行施用。
20. 權利要求l的方法，其中所述AFP在所述免疫調諧劑前進行施用。
21. 權利要求l的方法，其中所述AFP在所述免疫調諧劑后進行施用。
22. 權利要求1的方法，其中所述AFP或所述免疫調諧劑靜脈內、肌內、經口、通過吸 入、腸胃外、腹膜內、動脈內、經皮、舌下、經鼻、在栓劑中、經口含化、脂質體、脂肪地、眼內、 皮下、鞘內、局部或通過局部施用進行施用。
23. 權利要求l的方法，其中所述AFP和所述免疫調諧劑通過2種不同的施用途徑進行 施用。
24. 權利要求l的方法，其中所述AFP和所述免疫調諧劑通過相同施用途徑進行施用。
25. 權利要求1的方法，其進一步包括給所述患者施用緩解疾病的抗風濕性藥物 (DMARD)、皮質類固醇、或非類固醇抗炎藥(NSAID)中的一種或多種。
26. 權利要求l的方法，其中所述施用導致一種或多種MS癥狀的嚴重程度中的喪失或 減少。
27. 權利要求26的方法，其中所述一種或多種MS癥狀選自麻剌感、麻木、震顫、平衡喪失、一肢或數肢中的無力、視力模糊或復視、言語不清、吞咽問題、麻痹、缺乏協(xié)調、認知困 難、疲勞、肌痙攣、眩暈、呼吸問題和癲癇發(fā)作。
28. —種組合物，其包含治療有效量的甲胎蛋白(AFP)或其生物活性片段、衍生物或類 似物和免疫調諧劑，以治療患者中的多發(fā)性硬化。
29. 權利要求28的組合物，其中所述AFP或其生物活性片段是人重組AFP。
30. 權利要求28的組合物，其中所述AFP或其生物活性片段是非糖基化的。
31. 權利要求28的組合物，其中所述免疫調諧劑是蛋白質。
32. 權利要求31的組合物，其中所述蛋白質是干擾素或乙酸格拉太咪爾。
33. 權利要求32的組合物，其中所述干擾素選自干擾素-13 -1&、干擾素-13 -llK干擾 素-a、干擾素-Y、干擾素-T。
34. 權利要求28的組合物，其中所述免疫調諧劑是抗體。
35. 權利要求34的組合物，其中所述抗體選自那他珠單抗、達利珠單抗、利妥?，敗?ABT-874和阿來組單抗。
36. 權利要求28的組合物，其中所述免疫調諧劑是小分子。
37. 權利要求36的組合物，其中所述小分子是BG12、芬戈莫德、米托蒽醌、拉喹莫德、特 立氟胺或阿伐他汀。
38. 權利要求28的組合物，其配制用于靜脈內、肌內、經口、通過吸入、腸胃外、腹膜內、 動脈內、經皮、舌下、經鼻、在栓劑中、經口含化、脂質體、脂肪、眼內、皮下、鞘內、局部或局部施用。
39. 權利要求28的組合物，其進一步包含緩解疾病的抗風濕性藥物(DMARD)、皮質類固 醇、或非類固醇抗炎藥(NSAID)中的一種或多種。
40. —種試劑盒，其包含(i) 治療有效量的甲胎蛋白(AFP)或其生物活性片段、衍生物或類似物；(ii) 治療有效量的免疫調諧劑；禾口(iii) 用于給具有多發(fā)性硬化的患者施用所述AFP或其生物活性片段、衍生物或類似 物和所述免疫調諧劑的說明書。
41. 權利要求40的試劑盒，其中所述AFP或其生物活性片段是人重組AFP。
42. 權利要求40的試劑盒，其中所述AFP或其生物活性片段是非糖基化的。
43. 權利要求40的試劑盒，其中所述免疫調諧劑是蛋白質。
44. 權利要求43的試劑盒，其中所述蛋白質是干擾素或乙酸格拉太咪爾。
45. 權利要求44的試劑盒，其中所述干擾素選自干擾素_ 13 -1&、干擾素-13 -llK干擾 素-a、干擾素-Y、干擾素-T。
46. 權利要求40的試劑盒，其中所述免疫調諧劑是抗體。
47. 權利要求46的試劑盒，其中所述抗體選自那他珠單抗、達利珠單抗、利妥?，敗?ABT-874和阿來組單抗。
48. 權利要求40的試劑盒，其中所述免疫調諧劑是小分子。
49. 權利要求48的試劑盒，其中所述小分子是BG12、芬戈莫德、米托蒽醌、拉喹莫德、特 立氟胺或阿伐他汀。
50. 權利要求40的試劑盒，其中所述AFP或其生物活性片段、衍生物或類似物，和/或所述免疫調諧劑配制用于靜脈內、肌內、經口、通過吸入、腸胃外、腹膜內、動脈內、經皮、舌 下、經鼻、在栓劑中、經口含化、脂質體、脂肪、眼內、皮下、鞘內、局部或局部施用。
51. 權利要求50的試劑盒，其中所述AFP和所述免疫調諧劑配制用于2種不同的施用 途徑。
52. 權利要求50的試劑盒，其中所述AFP和所述免疫調諧劑配制用于相同施用途徑。
53. 權利要求40的試劑盒，其進一步包含緩解疾病的抗風濕性藥物(DMARD)、皮質類固 醇、或非類固醇抗炎藥(NSAID)中的一種或多種。
54. —種試劑盒，其包含(i) 權利要求28的組合物；禾口(ii) 用于給具有多發(fā)性硬化(MS)的患者施用所述組合物的說明書。
55. 權利要求54的試劑盒，其中所述組合物配制用于靜脈內、肌內、經口、通過吸入、腸 胃外、腹膜內、動脈內、經皮、舌下、經鼻、在栓劑中、經口含化、脂質體、脂肪、眼內、皮下、鞘 內、局部或局部施用。
56. 權利要求54的試劑盒，其進一步包含緩解疾病的抗風濕性藥物(DMARD)、皮質類固 醇、或非類固醇抗炎藥(NSAID)中的一種或多種。
全文摘要
本發(fā)明的特征在于通過給有此需要的患者施用甲胎蛋白多肽(或其生物活性片段、衍生物或類似物)和一種或多種免疫調諧劑用于治療多發(fā)性硬化的方法。還公開了包含甲胎蛋白多肽(或其生物活性片段、衍生物或類似物)和一種或多種免疫調諧劑的組合物和試劑盒。
文檔編號C07K19/00GK101743018SQ200780051406
公開日2010年6月16日 申請日期2007年12月19日 優(yōu)先權日2006年12月19日
發(fā)明者E·J·斯圖爾特, M·布里斯金 申請人:梅里麥克藥品公司