專利名稱：：豬科動物或羊用抗口蹄疫病毒藥劑以及豬科動物或羊的口蹄疫的預(yù)防或治療方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及含有3-氧代-3，4-二氳-2-吡嗪甲酰胺(以下稱T-1105)或其鹽的豬科動物或羊(以下稱"豬科動物等")用抗口蹄疫病毒藥劑、含有T-1105或其鹽的豬科動物等用銅料以及豬科動物等的口蹄疫的預(yù)防和治療方法等的處理方法。
背景技術(shù)：
：口蹄疫是對家畜中的牛、豬及羊等偶蹄類動物傳染力很強的疾病之一，會引起家畜的發(fā)育障礙、運動障礙等，是使家畜商品價值驟降的家畜特異性感染病，但對人不具感染性。對于世界畜牧業(yè)來說，無論是在出口國還是進口國的立場上，口蹄疫都位居最應(yīng)該警戒且最重要的家畜傳染病。口蹄疫是國際性傳染病，目前仍在亞洲、非洲及南美洲等世界各地廣為流行。日本也于2000年發(fā)生了口蹄疫。一旦口蹄疫發(fā)生，由于口蹄疫病毒的傳染性極強，對于防止其傳播會伴有巨大的困難。一旦口蹄疫發(fā)生，對畜牧業(yè)的打擊將會極其巨大。因此，在包括口蹄疫預(yù)防及治療等的處理上，全世界付出了極大的努力?？刂瓶谔阋叩膶Σ哂校瑖?yán)格的進口管制、衛(wèi)生管理、檢疫的實施以及罹患動物的屠宰，在大流行時，則在地區(qū)水平或發(fā)病周邊區(qū)域?qū)嵤┳鳛轭A(yù)防手段的使用滅活疫苗的預(yù)防接種程序。然而，口蹄疫的早期發(fā)現(xiàn)很難，且會以非?？斓乃俣葌鞑?，疫苗接種無法及時到位。而且病毒容易發(fā)生變異，僅以疫苗的接種無法完全防止感染。也就是說，目前并不存在針對偶蹄目動物中豬科動物等的優(yōu)良的口蹄疫治療方法。國際公開第WO00/10569號小冊子上記栽到，T-1105具有優(yōu)良的抗流感病毒作用(專利文獻l)。'然而，對于豬科動物等用的抗口蹄疫病毒藥劑以及對豬科動物等的口蹄疫的預(yù)防或治療方法等的處理方法，還未見具體地公開。專利文獻l:國際公開第WO00/10569號小冊子
發(fā)明內(nèi)容發(fā)明要解決的課題優(yōu)良的豬科動物等用抗口蹄疫病毒藥劑以及對豬科動物等的口蹄疫的預(yù)防或治療方法等處理方法受到強烈的需求。解決課題的方法在此情況下，本發(fā)明人進行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，含有T-1105或其鹽的抗口蹄疫病毒藥劑對豬科動物具有很強的口蹄疫治療效果，在對豬科動物的口蹄疫的治療等的處理方面有效，從而完成了本發(fā)明。進而發(fā)現(xiàn)，含有T-1105或其鹽的抗口蹄疫病毒藥劑對羊(綿羊)具有很強的口蹄疫治療效果，在對羊的口蹄疫的治療等的處理方面有效，從而完成了本發(fā)明。發(fā)明效果含有T-1105或其鹽的抗口蹄疫病毒藥劑在對豬科動物等的口蹄疫的預(yù)防和治療等的處理方面有效。具體實施例方式以下對本發(fā)明進行詳細說明。在本說明書中，只要未特別指出，當(dāng)T-1105或其鹽存在溶劑化物和水合物時，也可以使用它們的溶劑化物和水合物。并且，也可以使用各種形狀的結(jié)晶。作為T-1105的鹽來說，可舉出通常已知的在羥基上形成的鹽。作為在羥基上形成的鹽，可舉出與鈉和鉀等堿金屬形成的鹽；與釣和鎂等堿土金屬形成的鹽；銨鹽；以及與三甲胺、三乙胺、三丁胺、吡啶、N，N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶，N-甲基嗎啉、二乙胺、二環(huán)己胺、普魯卡因、二千胺、N-苯乙胺、l-二苯羥曱胺(ephenamine)、N，N'-二節(jié)基乙二胺等含氮有機堿形成的鹽。上述鹽中，作為優(yōu)選的鹽，可舉出藥理學(xué)可接受的鹽，進一步優(yōu)選與鈉之間的鹽。針對屬于口蹄病毒屬的口蹄疫病毒，本發(fā)明的含有T-1105或其鹽的豬科動物等用的抗口蹄疫病毒藥劑顯示出優(yōu)良的抗病毒作用。作為口蹄疫病毒，可舉出血清型為A、O及C的歐洲型；血清型為Asial的亞洲型和血清型為SAT1、SAT2及SAT3的非洲型、以及它們的亞型。特別是針對血清型為A、O和C、以及出現(xiàn)在亞洲的Asial的病毒，本發(fā)明的含有T-1105或其鹽的豬科動物等用的抗口蹄疫病毒藥劑具有更為優(yōu)良的效果。本發(fā)明中所述的豬科動物是指脊推動物門哺乳綱偶蹄目豬科動物，具體地，可舉出家豬和野豬，特別優(yōu)選豬。T-1105或其鹽可以經(jīng)注射用蒸餾水或生理鹽水等稀釋之后作為注射劑對豬科動物等非口服給藥，或者可以按照公知的制劑學(xué)制造方法，根據(jù)需要使用制劑學(xué)允許的稀釋劑、賦形劑，制成片劑、大型丸劑、粉末、顆粒劑、細粒劑、膠嚢、乳劑、液體制劑、混懸劑、預(yù)混劑、糖漿、糊劑或氣霧劑等動物用制劑，口服或非口服給藥。對于T-1105或其鹽、或者其動物用制劑，可以根據(jù)需要使其混合在飼料中使用，例如，可以添加到包括干草、稻草類、牧草類、青刈飼料作物類、根果菜類、野草類、樹葉類及青貯飼料等粗飼料；以及谷類、油粕類和復(fù)合飼料等濃縮祠料等祠料中使用。并且，可以添加到飲用水等中使用。作為優(yōu)選的給藥形式，可舉出制成包括肌肉注射、皮下注射及腹腔內(nèi)注射等的注射劑的給藥形式以及將T-1105混合在飼料內(nèi)而混食口服的給藥形式。對于本發(fā)明的豬科動物等用的抗口蹄疫病毒藥劑以及豬科動物等用飼料，例如，可以將T-1105或其鹽用固態(tài)或液態(tài)的栽體通過稀釋或包覆等方法進行穩(wěn)定化，例如制成片劑、大型丸劑、粉末、顆粒劑、細粒劑、膠嚢、乳劑、液體制劑、混懸劑、預(yù)混劑、糖漿、糊劑或氣霧劑等，或者使其分散于載體中之后或者直接添加至飼料或嵌料中來制造。作為固體載體，可舉出乳糖、蔗糖、淀粉、小麥粉、玉米粉、麩子、大豆油粕、脫脂米糠、菜籽油粕、豆腐粕、纖維素、酵母菌、魚粉、花生榨渣、貝殼粉及碳酸鉤等，作為液態(tài)載體，可舉出水、生理鹽水及生理學(xué)上無害的有機溶劑。并且，根據(jù)需要，也可以添加諸如乳化劑、分散劑、助懸劑、潤濕劑、濃縮劑、膠凝劑及增溶劑等的輔助劑。本發(fā)明藥劑也可以是預(yù)混合的形式。此外，也可以配合防腐劑、滅菌劑、驅(qū)蟲劑、抗氧化劑、著色劑、芳香劑、抗菌劑、抗生素、酶制劑、乳酸菌制劑、退熱劑、鎮(zhèn)痛劑和消炎劑等。也可以配合其他動物藥。而且，可以配合各種維生素類、礦物類及氨基酸類等。本發(fā)明的豬科動物等用的抗口蹄疫病毒藥劑是以口蹄疫的預(yù)防或/和治療等處理為目的給藥至豬科動物等家畜或動物的。尤其優(yōu)選應(yīng)用于豬。對于給藥劑量，可以根據(jù)對象動物的年齡、體重、癥狀和給藥途徑進行適當(dāng)選擇，舉例來說，可以相對于動物的體重以l天l~2000mg/kg的劑量分l次至多次給藥。也可以根據(jù)癥狀增加給藥次數(shù)。另外，對給藥期間無特別限制，但一般通過1~10天的給藥就能獲得足夠的效果，且也可以間斷性的給藥。實施例下面，列舉試驗例對本發(fā)明進行說明，但本發(fā)明并不限定于此。本發(fā)明的T-1105或其鹽可以通過購買市售品得到，或者通過公知方法或基于公知方法的方法以及將這些方法進行組合來制造。另外，試驗例l~3是在獨立行政法人、農(nóng)業(yè).食品產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究機構(gòu)、動物衛(wèi)生研究所(東京都)實施的。試驗例l體外抗口蹄疫病毒作用(1)測定T-1105對口蹄疫病毒(0/JPN/2000株)的效果。將口蹄疫病毒(0/JPN/2000林)吸附(3rc，l小時)于豬源腎臟繼代細胞，以達到約30~100個/盤。除去病毒液，用已調(diào)節(jié)為pH7.4的MEM培養(yǎng)基進行清洗之后，覆蓋將T-1105從20]ug/mL經(jīng)二次稀釋的含有2%牛血清加1.5y。甲基纖維素的MEM培養(yǎng)基。培養(yǎng)3天，并用含O.2%結(jié)晶紫的10%中性緩沖福爾馬林將細胞固定后，進行染色，對空斑進行計數(shù)。與未添加藥劑組的空斑數(shù)進行比較，求得5oy?？瞻咝纬梢种坡?IC5。)。結(jié)果為l.6pg/mL。(2)測定T-1105對口蹄疫病毒(A、C及Asia1)的效果。A、C和Asial的病毒濃度分別為10TCID5。、10TCID"和l015TCID5。，將病毒吸附于IBRS-2細胞(37°C，l小時)后，添加被從20ng/mL二次稀釋了的T-1105，48小時之后用含0.2%結(jié)晶紫的10%中性緩沖福爾馬林將細胞固定后，進行染色。在各個濃度上，如果4孔中1孔以上觀察到對細胞病變效果的抑制，則該濃度判定為有效。結(jié)果示于表l。口蹄疫病毒血清型25%以上抑制濃度(ng/mL)Asia10.625A0.313C1.25T-1105顯示了針對口蹄疫病毒的優(yōu)良的效果。試驗例2U)T-1105的藥代動力學(xué)試驗(豬、牛)對豬(普通級，體重10kg，2頭)以及牛(日本黑毛和牛，體重200kg,2頭)進行了1%T-1105復(fù)合飼料的口服給藥，給藥劑量為100mg/kg。在給藥后2小時和8小時，用經(jīng)肝素潤洗的注射筒從各動物的頸靜脈采血1.5mL，然后迅速進行離心分離(4°C，2000rpm，IO分鐘)，將250iuL血漿分別注入到l.5mL微管內(nèi)。以使用了空白血漿的標(biāo)準(zhǔn)曲線為基礎(chǔ)，測定了T-1105的濃度。其中，為制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，向200^L空白血漿中添加5倍濃度的T-1105溶液50iiL，實施與血漿前處理操作相同的操作。分別向250juL血漿試樣和250jiL標(biāo)準(zhǔn)曲線用血漿試樣中添加500jiL曱醇并攪拌，并將所得溶液進行離心分離(lOOOOrpm，4°C，IO分鐘)。收集上清液，經(jīng)除蛋白處理之后，進行減壓干燥。用500pL的HPLC流動相溶解殘渣，并進行離心分離(3000rpm，l(TC，IO分鐘)，收集上清液，作為測定樣品。以下述HPLC條件進行測定。分析柱Develosil0DS-MG-5(4.6mmI.D.x250mm),野村化學(xué)林式會社制保護柱Develosil0DS-MG-5(4.0mml.D.xlOmm),野村化學(xué)林式會社制柱溫40°CHPLC流動相甲醇/lmol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.G)/蒸餾水/TBA-Br(50:50:900:1.6，v/v/v/w)流速1.OmL/min檢測波長350nm進樣量100pL自動進樣器溫度預(yù)設(shè)溫度10。C分析時間約18分鐘制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，由峰面積求取血漿試樣中各個個體的T-1105濃度，并計算其平均值。試驗例2(2)T-1105的藥代動力學(xué)試驗(羊)對羊(考力代羊，體重63kg和67kg,2頭)進行了1%T-1105復(fù)合飼料的口服給藥，給藥劑量為100mg/kg。在給藥后的2小時及8小時，使用經(jīng)肝素潤洗的注射筒從各個個體的頸靜脈采血l.5mL，然后迅速進行離心分離(4°C，2000rpm，IO分鐘)，將250fiL血漿分別注至l.5mL微管中。向血漿試樣中添加50(^L甲醇并攪拌，并進行離心分離(10000rpm，4°C，IO分鐘)。收集上清液，經(jīng)除蛋白處理之后，進行減壓干燥。用500jiL的HPLC流動相溶解殘淹，并進行離心分離(3000rpm，IO'C，IO分鐘)，收集上清液，作為測定樣品。以與試驗例2(1)相同的條件進行測定。用標(biāo)準(zhǔn)液制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，由峰面積求出血漿試樣中各個個體的T-1105濃度，并計算其平均值。試驗例2(1)和(2)的結(jié)果示于表2。<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>T-l105在豬及羊體內(nèi)維持了高血藥濃度，顯示了優(yōu)良的藥代動力學(xué)性能。試驗例3混食給藥的有效性試驗使用豬全身感染模型評價了T-1105對口蹄疫的治療效果。對豬(普通級，體重10kg，給藥組2頭(豬編號1和2)、非給藥組2頭(豬編號3和4))將口蹄疫病毒106TCIDs。接種于前肢足墊處，以誘發(fā)感染。在接種病毒l小時前按200mg/kg的劑量進行T-1105的口服混食給藥，在之后的6.5天期間，l天2次M00mg/kg/天)給藥。在接種病毒后8天內(nèi)觀察臨床癥狀的變化。同時，在接種病毒后3天內(nèi)，測定血漿和鼻拭子中病毒量的變化。臨床癥狀的變化示于表3，血漿中的病毒量示于表4,鼻拭子中的病毒量示于表5。<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>:無異常，+:跛行，不能站立T-1105非給藥組在接種病毒第2天以后，出現(xiàn)跛行、站立困難，足上形成水泡；與此相比，T-1105給藥組的動物均未出現(xiàn)外觀上的任何變化。<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>單位TCIDs。/1jliL鼻拭子液T-1105非給藥組的鼻拭子中病毒量急劇增加，而T-1105給藥組的鼻拭子中的病毒量幾乎未增加。T-1105在豬全身感染模型中顯示出優(yōu)良的治療效果。而且，T-1105給藥組的豬在給藥期間未發(fā)現(xiàn)有中毒的現(xiàn)象。試驗例4細胞毒性作用將含有規(guī)定濃度T-1105的培養(yǎng)液以100nL/孔的量添加至96孔板(IWAKI公司制)上。接著，用培養(yǎng)液調(diào)配Vero細胞濃度至2x1(^個/mL，將所得液體按100)iL/孔的量植入，在37'C、5%二氧化碳的條件下培養(yǎng)4天。培養(yǎng)結(jié)束時，按照XTT法(例如，癌癥研究(CANCERRESEARCH)，第48巻，p.4827-4833(1988年)等)測定活細胞數(shù)。T-1105的50。/。細胞生長抑制濃度(IC5。)為250(ag/mL以上。由上述結(jié)果可知，T-1105安全性高，且作為豬科動物等用的抗口蹄疫病毒藥劑，在由口蹄疫病毒引起的口蹄疫的治療上有效。制劑例l片劑將10g的T-1105與4.4g乳糖、4.4g結(jié)晶纖維素、1.Og羧曱基淀粉鈉及O.20g硬脂酸鎂混合，并將混合粉末壓片，使每片重200mg,得到每片含100mgT-1105的片劑。制劑例2(復(fù)合飼料)將30g的T-1105與2970g豬用市售飼料(JA全農(nóng)制)混合，得到1%T-1105復(fù)合飼料3000g。在復(fù)合飼料中T-1105穩(wěn)定，24小時不分解。產(chǎn)業(yè)實用性含有T-1105或其鹽的抗口蹄疫病毒藥劑在對豬科動物等的口蹄疫的預(yù)防或治療等的處理上有效。權(quán)利要求1.豬科動物用抗口蹄疫病毒藥劑，其特征在于，所述藥劑含有3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺或其鹽。2.權(quán)利要求l所述的抗口蹄疫病毒藥劑，其中，所述豬科動物為豬。3.豬科動物用祠料，其特征在于，所述飼料含有3-氧代-3，4-二氫-2-吡溱曱酰胺或其鹽。4.權(quán)利要求3所述的伺料，其中，所述豬科動物為豬。5.豬科動物的口蹄疫的處理方法，其特征在于，將有效量的3-氧代-3,4-二氫-2-吡溱曱酰胺或其鹽給予豬科動物。6.權(quán)利要求5所述的方法，其中，處理方法為預(yù)防或治療方法。7.權(quán)利要求5或6所述的方法，其中，所述豬科動物為豬。8.羊用抗口蹄疫病毒藥劑，其特征在于，所述藥劑含有3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪曱酰胺或其鹽。9.羊用伺料，其特征在于，所述飼料含有3-氧代-3，4-二氫-2-吡溱甲酰胺或其鹽。10.羊的口蹄疫的預(yù)防或治療方法，其特征在于，將有效量的3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺或其鹽給予羊。全文摘要本發(fā)明涉及含有3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺或其鹽的豬科動物用抗口蹄疫病毒藥劑。該藥劑對豬科動物的口蹄疫的預(yù)防或治療極為有效。并且，本發(fā)明還涉及含有3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺或其鹽的羊用抗口蹄疫病毒藥劑。該藥劑對羊的口蹄疫的預(yù)防或治療等也極為有效。文檔編號C07D241/08GK101454295SQ20078001995公開日2009年6月10日申請日期2007年5月29日優(yōu)先權(quán)日2006年5月31日發(fā)明者古田要介申請人:富山化學(xué)工業(yè)株式會社