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一種三磷酸腺苷的晶膠吸附層析分離方法

文檔序號(hào):3537327閱讀:361來(lái)源:國(guó)知局
專(zhuān)利名稱(chēng):一種三磷酸腺苷的晶膠吸附層析分離方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種三磷酸腺苷的晶膠吸附層析分離方法,尤其是一種利用超大孔連續(xù)床晶膠吸附層析技術(shù)從發(fā)酵液中分離三磷酸腺苷(ATP)的方法。
背景技術(shù)
ATP是生物細(xì)胞內(nèi)的高能物質(zhì),是機(jī)體能量利用和儲(chǔ)存的中心,參與體內(nèi)脂肪、蛋白質(zhì)、糖類(lèi)和核酸等的代謝,其二鈉鹽在臨床上廣泛用于心肌疾病、腦溢血、肌肉萎縮、肝炎等疾病的輔助治療。
ATP可通過(guò)葉綠體光合磷酸化法轉(zhuǎn)化、酵母或產(chǎn)氨短菌等微生物發(fā)酵、酶轉(zhuǎn)化以及從動(dòng)物組織提取等方式進(jìn)行制備。微生物發(fā)酵法是目前工業(yè)上生產(chǎn)ATP的主要方法。其主要工藝過(guò)程包括培養(yǎng)發(fā)酵、菌體過(guò)濾、雜蛋白沉淀、活性炭吸附、陰離子交換層析、去熱原、結(jié)晶精制、干燥等多個(gè)步驟,工藝過(guò)程復(fù)雜,成本高。特別是,ATP吸附層析分離過(guò)程常用陰離子交換樹(shù)脂,而常規(guī)粒狀陰離子交換樹(shù)脂介質(zhì)的孔隙尺寸在納米或亞微米范圍,ATP的吸附主要通過(guò)擴(kuò)散傳質(zhì),達(dá)到吸附平衡需要的時(shí)間長(zhǎng)。因而,料液在工業(yè)吸附層析柱內(nèi)停留的時(shí)間常常長(zhǎng)達(dá)數(shù)天至十多天,增大了過(guò)程成本。另外,環(huán)境溫度較高時(shí)(如高于25~30℃的夏季),料液很容易變質(zhì),導(dǎo)致生產(chǎn)操作無(wú)法順利進(jìn)行,嚴(yán)重影響了生產(chǎn)效率和ATP產(chǎn)品的質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種用超大孔連續(xù)床晶膠吸附層析技術(shù)(Supermacroporous Cryogel Chromatography,簡(jiǎn)稱(chēng)晶膠層析)迅速高效地分離ATP的新方法。
為達(dá)到發(fā)明目的本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種三磷酸腺苷的晶膠吸附層析分離方法,所述方法如下(1)將含有三磷酸腺苷的混合液調(diào)pH為酸性,以0.1~30cm/min流速上超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)床柱,進(jìn)行吸附;所述晶膠介質(zhì)為陰離子交換晶膠介質(zhì),所述陰離子交換晶膠介質(zhì)的孔徑為5~400μm、孔隙率為50~98%、功能基團(tuán)為胺基或其衍生基團(tuán);(2)以去離子水或pH值1~6的稀酸溶液為沖洗液沖洗床柱,除去晶膠介質(zhì)內(nèi)殘留的混合液;(3)用洗脫液進(jìn)行洗脫,收集含三磷酸腺苷的洗脫峰,得到所述的三磷酸腺苷,所述的洗脫液為含有0.001~3M堿金屬鹽的稀酸溶液。
陰離子交換超大孔晶膠介質(zhì)的制備可通過(guò)結(jié)晶致孔、聚合反應(yīng)和孔內(nèi)接枝方法實(shí)現(xiàn)。首先,將聚合物單體、交聯(lián)劑、催化劑的水溶液裝入層析柱(如常規(guī)層析玻璃柱),在冷凍條件下進(jìn)行結(jié)晶致孔,得到超大孔晶膠基質(zhì)。然后,將帶有陰離子交換功能基團(tuán)的接枝單體溶液注入晶膠基質(zhì),在催化劑作用下進(jìn)行孔內(nèi)接枝聚合反應(yīng),得到陰離子交換超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)。晶膠基質(zhì)的制備方法可參照文獻(xiàn)中介紹的方法(Yao et al.,Chem.Eng.Sci.61,6701-6708,2006);基質(zhì)孔內(nèi)接枝聚合反應(yīng)也可參照文獻(xiàn)(Savina et al.,J.Chromatogr.A 1092,199-205,2005)。具體過(guò)程見(jiàn)后面的實(shí)例。
所述陰離子交換晶膠介質(zhì)優(yōu)選為叔胺或季胺型陰離子交換晶膠介質(zhì)。
所述胺基或其衍生基團(tuán)優(yōu)選為下列之一①-N+(CH3)3、②-N(CH3)2、③-N(C2H5)2。
所述步驟(2)中沖洗液流速0.1~20cm/min。
所述步驟(3)中的洗脫為梯度洗脫,洗脫液流速0.1~20cm/min,步驟如下先用含堿金屬鹽0.001~0.06M、pH1~6的稀酸溶液I進(jìn)行洗脫,再用含堿金屬鹽0.1~3M、pH1~6的稀酸溶液II進(jìn)行洗脫,收集含三磷酸腺苷的洗脫峰,得到所述的三磷酸腺苷。
所述稀酸溶液、稀酸溶液I、稀酸溶液II各自獨(dú)立為下列之一①鹽酸溶液、②硫酸溶液、③乙酸溶液、④檸檬酸溶液。
所述堿金屬鹽優(yōu)選為NaCl或KCl。
所述步驟(1)中含有三磷酸腺苷的混合液為啤酒酵母發(fā)酵液。
具體的,所述方法如下(1)將含有三磷酸腺苷的啤酒酵母發(fā)酵液調(diào)pH為2~3,以2~10cm/min流速上超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)床柱,進(jìn)行吸附;所述晶膠介質(zhì)為陰離子交換晶膠介質(zhì),所述陰離子交換晶膠介質(zhì)的孔徑為5~400μm、孔隙率為50~98%、功能基團(tuán)為下列之一①-N+(CH3)3、②-N(CH3)2、③-N(C2H5)2;(2)用沖洗液以2~10cm/min流速?zèng)_洗床柱,除去晶膠介質(zhì)內(nèi)殘留的混合液;所述沖洗液為下列之一①去離子水、②pH2~4的鹽酸溶液、③pH2~4的硫酸溶液、④pH2~4的乙酸溶液、⑤pH2~4的檸檬酸溶液;(3)用洗脫液以2~10cm/min流速進(jìn)行梯度洗脫先用含NaCl或KCl 0.001~0.06M、pH1~6的稀酸溶液I進(jìn)行洗脫,再用含NaCl或KCl 0.1~3M、pH1~6的稀酸溶液II進(jìn)行洗脫,收集含三磷酸腺苷的洗脫峰,得到所述的三磷酸腺苷;所述稀酸溶液I、稀酸溶液II各自獨(dú)立為下列之一①鹽酸溶液、②硫酸溶液、③乙酸溶液、④檸檬酸溶液。
與現(xiàn)有ATP分離技術(shù)相比,本發(fā)明提供的方法的特色是利用晶膠層析實(shí)現(xiàn)了ATP的直接分離。晶膠層析方法是2002年出現(xiàn)的新型生物分離技術(shù),可在高流速下從含有微生物細(xì)胞的復(fù)雜料液系統(tǒng)中直接分離目標(biāo)物。晶膠介質(zhì)為整體狀介質(zhì),與常規(guī)粒狀介質(zhì)不同。晶膠介質(zhì)內(nèi)有很多尺寸在數(shù)十至數(shù)百微米的超大孔隙,可允許發(fā)酵液中的微生物細(xì)胞順利通過(guò),而料液中的目標(biāo)物則吸附在孔隙內(nèi)表面,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)層析分離。其吸附主要利用對(duì)流傳遞,傳質(zhì)阻力小,吸附和層析分離十分迅速。該方法將離心、過(guò)濾、濃縮和層析分離等幾個(gè)步驟集成為一步實(shí)現(xiàn),可減化傳統(tǒng)分離步驟,縮短處理時(shí)間,降低過(guò)程成本。本方法將現(xiàn)有ATP分離過(guò)程中的菌體過(guò)濾、沉淀、活性碳吸附、陰離子交換層析等多個(gè)步驟簡(jiǎn)化為通過(guò)晶膠吸附層析一步實(shí)現(xiàn),處理流速高,料液在柱內(nèi)停留時(shí)間短。
本發(fā)明方法的有益效果主要體現(xiàn)在工藝簡(jiǎn)單,分離迅速,處理量大,得到的ATP純度高,分離過(guò)程成本低。另外,本發(fā)明提供的ATP分離方法中,操作壓力低(優(yōu)選操作條件下柱內(nèi)壓降梯度在0.001~0.02atm/cm左右),規(guī)模化生產(chǎn)十分容易;而且,晶膠介質(zhì)可方便地進(jìn)行再生,重復(fù)使用,進(jìn)一步降低了成本。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述,但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此實(shí)施例1用0.05M的鹽酸,將含有ATP的啤酒酵母發(fā)酵液(以腺苷一磷酸、葡萄糖、磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、氯化鎂、硫酸銨等為底物,用啤酒酵母發(fā)酵所得,菌體濃度約10g/L,濕重,下同)的pH調(diào)為1,作為待分離用的料液,其OD600值為0.32,ATP含量12mg/mL。料液溶質(zhì)中,ATP占總?cè)苜|(zhì)的46%(重量百分比),腺苷二磷酸(ADP)占28%(重量百分比),腺苷一磷酸(AMP)占16%(重量百分比),其它可溶性雜質(zhì)占10%(重量百分比),下同。選擇內(nèi)徑26mm、高150mm的陰離子交換晶膠層析柱(孔徑5~80μm,孔隙率50%,功能基團(tuán)-N(CH3)2,聚丙烯酰胺基晶膠骨架,自制)。晶膠介質(zhì)的制備如下將9g丙烯酰胺、2g甲雙叉丙烯酰胺、0.5g過(guò)硫酸銨、0.3g四甲基乙二胺溶于75mL水,裝入層析柱,在冷凍條件下(-20℃)進(jìn)行結(jié)晶致孔和聚合反應(yīng)(48h),得到超大孔晶膠基質(zhì)。然后,將50mL 0.5M的接枝單體CH2=CHCO2(CH2)2N(CH3)2注入晶膠基質(zhì),于63℃下反應(yīng)24h,得到陰離子交換晶膠介質(zhì)。
用鹽酸溶液(pH1)平衡晶膠床柱,將410mL料液以5cm/min流速上入晶膠床柱,用流動(dòng)式紫外檢測(cè)器監(jiān)測(cè)層析過(guò)程(UV 254nm)。在5cm/min流速下用400mL去離子水沖洗床柱,沖出柱內(nèi)的發(fā)酵液和未吸附的雜質(zhì)。然后,用1000mL含有0.001M NaCl的鹽酸溶液(pH1)進(jìn)行洗脫,以除去吸附在晶膠介質(zhì)中的雜質(zhì),洗脫流速2cm/min;以150mL含有0.5M NaCl的鹽酸溶液(pH1)進(jìn)行洗脫,收集ATP洗脫峰,洗脫流速2cm/min。
用高效液相色譜(HPLC,5μm、4.6mm×250mm的WatersSymmetryShield RP C18分析柱,柱溫25℃,流動(dòng)相為50mM的磷酸鉀緩沖液,pH6.5,流速1mL/min,紫外檢測(cè)波長(zhǎng)259nm,進(jìn)樣量20μL,外標(biāo)法定量)對(duì)收集的ATP進(jìn)行分析,ATP收率91%,純度95.5%。
實(shí)施例2用0.1M的檸檬酸,將含有ATP的啤酒酵母發(fā)酵液的pH調(diào)為3,作為待分離用的料液(OD600為0.21,ATP含量8mg/mL)。用檸檬酸溶液(pH3),對(duì)內(nèi)徑55mm、高100mm的晶膠床柱(孔徑20~150μm,孔隙率74%,功能基團(tuán)-N(C2H5)2,聚丙烯酰胺基晶膠骨架,自制)進(jìn)行平衡。晶膠介質(zhì)的制備如下將10g丙烯酰胺、0.5g甲雙叉丙烯酰胺、1.2g過(guò)硫酸銨、1g四甲基乙二胺溶于230mL水,裝入層析柱,在冷凍條件下(-30℃)進(jìn)行結(jié)晶致孔和聚合反應(yīng)(60h),得到超大孔晶膠基質(zhì)。然后,將200mL 0.2M的接枝單體CH2=C(CH3)CO2CH2CH2N(C2H5)2,注入晶膠基質(zhì),于53℃下反應(yīng)12h,得到陰離子交換晶膠介質(zhì)。
將280mL料液以2cm/min流速上入晶膠床柱。于2cm/min流速下用600mL檸檬酸溶液(pH3)沖洗床柱后,依次用2L含0.02M KCl的檸檬酸溶液(pH3)、300mL含3M KCl的乙酸溶液(pH3)進(jìn)行洗脫,收集ATP洗脫峰,洗脫流速2cm/min。ATP收率92%,純度94.1%。
實(shí)施例3用0.01M的鹽酸,將含有ATP的啤酒酵母發(fā)酵液的pH調(diào)為5,作為待分離用的料液(OD600為0.26,ATP含量9.7mg/mL)。用鹽酸溶液(pH5),對(duì)內(nèi)徑100mm、高200mm的晶膠柱(孔徑80~400μm,孔隙率98%,功能基團(tuán)-N+(CH3)3,聚丙烯酰胺基晶膠骨架,自制)進(jìn)行平衡。晶膠介質(zhì)的制備如下將40g丙烯酰胺、10g甲雙叉丙烯酰胺、6g過(guò)硫酸銨、10g四甲基乙二胺溶于1.5L水,裝入層析柱,在冷凍條件下(-55℃)進(jìn)行結(jié)晶致孔和聚合反應(yīng)(64h),得到超大孔晶膠基質(zhì)。然后,將2L 0.5M的接枝單體CH2=C(CH3)CO2CH2CH2N(CH3)3Cl,注入晶膠基質(zhì),于52℃下反應(yīng)7h,得到陰離子交換晶膠介質(zhì)。
將2L料液以6cm/min流速上入晶膠床柱,在8cm/min流速下用4L去離子水沖洗后,依次用6L含0.01M NaCl的鹽酸溶液(pH5)、2.5L含0.5MNaCl的鹽酸溶液(pH5)進(jìn)行洗脫,收集ATP洗脫峰,洗脫流速6cm/min。ATP收率84%,純度89.2%。
實(shí)施例4用0.01M的鹽酸,將含有ATP的啤酒酵母發(fā)酵液的pH調(diào)為2,作為待分離用的料液(OD600為0.18,ATP含量7.2mg/mL)。用鹽酸溶液(pH2),對(duì)內(nèi)徑150mm、高500mm的晶膠柱(孔徑20~150μm,孔隙率83%,功能基團(tuán)-N+(CH3)3,聚丙烯酰胺基晶膠骨架,自制)進(jìn)行平衡。晶膠介質(zhì)的制備如下將380g丙烯酰胺、40g甲雙叉丙烯酰胺、30g過(guò)硫酸銨、70g四甲基乙二胺溶于8L水,裝入層析柱,在冷凍條件下(-48℃)進(jìn)行結(jié)晶致孔和聚合反應(yīng)(72h),得到超大孔晶膠基質(zhì)。然后,將9L 1M的接枝單體CH2=C(CH3)CO2CH2CH2N(CH3)3Cl,注入晶膠基質(zhì),于57℃下反應(yīng)12h,得到陰離子交換晶膠介質(zhì)。
將15L料液以10cm/min流速上入晶膠床柱,在10cm/min流速下用25L去離子水沖洗后,依次用40L含0.01M NaCl的鹽酸溶液(pH2)、15L含2M NaCl的鹽酸溶液(pH2)進(jìn)行洗脫,收集ATP洗脫峰,洗脫流速10cm/min。ATP收率90%,純度98.2%。
實(shí)施例5用0.01M的鹽酸,將含有ATP的啤酒酵母發(fā)酵液的pH調(diào)為3,作為待分離用的料液(OD600為0.12,ATP含量5.9mg/mL)。用鹽酸溶液(pH3)對(duì)內(nèi)徑150mm、高300mm的晶膠床柱(孔徑50~250μm,孔隙率87%,功能基團(tuán)-N(C2H5)2,聚丙烯酰胺基晶膠骨架,自制)進(jìn)行平衡。晶膠介質(zhì)的制備如下將200g丙烯酰胺、32g甲雙叉丙烯酰胺、17g過(guò)硫酸銨、22g四甲基乙二胺溶于5L水,裝入層析柱,在冷凍條件下(-53℃)進(jìn)行結(jié)晶致孔和聚合反應(yīng)(36h),得到超大孔晶膠基質(zhì)。然后,將5L 1.5M的接枝單體CH2=C(CH3)CO2CH2CH2N(C2H5)2,注入晶膠基質(zhì),于65℃下反應(yīng)12h,得到陰離子交換晶膠介質(zhì)。
將10L料液以7cm/min流速上入晶膠床柱,在3cm/min流速下用15L鹽酸溶液(pH 3)沖洗床柱,依次用20L含0.04M NaCl的鹽酸溶液(pH3)、8L含0.1M NaCl的鹽酸溶液(pH3)進(jìn)行洗脫,收集ATP洗脫峰,洗脫流速4cm/min。ATP收率93%,純度97.5%。
實(shí)施例6用0.02M的硫酸,將含有ATP的啤酒酵母發(fā)酵液的pH調(diào)為4,作為待分離用的料液(OD600為0.45,ATP含量18mg/mL)。用稀硫酸溶液(pH4),對(duì)晶膠床柱(內(nèi)徑16mm、高60mm,孔徑30~300μm,孔隙率91%,功能基團(tuán)-N(CH3)2,聚丙烯酰胺基晶膠骨架,自制)進(jìn)行平衡。晶膠介質(zhì)的制備如下將0.55g丙烯酰胺、0.09g甲雙叉丙烯酰胺、0.089g過(guò)硫酸銨、0.064g四甲基乙二胺溶于11mL水,裝入層析柱,在冷凍條件下(-25℃)進(jìn)行結(jié)晶致孔和聚合反應(yīng)(24h),得到超大孔晶膠基質(zhì)。然后,將15mL 0.2M的接枝單體CH2=CHCO2(CH2)2N(CH3)2注入晶膠基質(zhì),于62℃下反應(yīng)4h,得到陰離子交換晶膠介質(zhì)。
將15mL料液以30cm/min流速上入晶膠床柱,在30cm/min流速下用90mL稀硫酸溶液(pH4)沖洗后,依次用200mL含0.06M KCl的硫酸溶液(pH4)、20mL含0.8M KCl的硫酸溶液(pH4)進(jìn)行洗脫,收集ATP洗脫峰,洗脫流速20cm/min。ATP收率71%,純度86.0%。
實(shí)施例7用0.01M的乙酸,將含有ATP的啤酒酵母發(fā)酵液的pH調(diào)為6,作為待分離用的料液(OD600為0.1,ATP含量4.6mg/mL)。用乙酸溶液(pH6),對(duì)內(nèi)徑10mm、高100mm的晶膠床柱(內(nèi)徑10mm、高100mm,孔徑10~90μm,孔隙率83%,功能基團(tuán)-N+(CH3)3,聚丙烯酰胺基晶膠骨架,自制)進(jìn)行平衡。晶膠介質(zhì)的制備如下將0.8g丙烯酰胺、0.1g甲雙叉丙烯酰胺、0.07g過(guò)硫酸銨、0.06g四甲基乙二胺溶于10mL水,裝入層析柱,在冷凍條件下(-15℃)進(jìn)行結(jié)晶致孔和聚合反應(yīng)(72h),得到超大孔晶膠基質(zhì)。然后,將10mL 0.5M的接枝單體CH2=C(CH3)CO2CH2CH2N(CH3)3Cl,注入晶膠基質(zhì),于58℃下反應(yīng)15h,得到陰離子交換晶膠介質(zhì)。
將20mL料液以0.1cm/min流速上入晶膠床柱,于0.1cm/min流速下用120mL去離子水沖洗床柱。然后,依次用280mL含0.03M KCl的乙酸溶液(pH6)、20mL含0.1M KCl的乙酸溶液(pH6)進(jìn)行洗脫,收集ATP洗脫峰,洗脫流速0.1cm/min。ATP收率81%,純度88.0%。
權(quán)利要求
1.一種三磷酸腺苷的晶膠吸附層析分離方法,所述方法如下(1)將含有三磷酸腺苷的混合液調(diào)pH為酸性,以0.1~30cm/min流速上超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)床柱,進(jìn)行吸附;所述晶膠介質(zhì)為陰離子交換晶膠介質(zhì),所述陰離子交換晶膠介質(zhì)的孔徑為5~400μm、孔隙率為50~98%、功能基團(tuán)為胺基或其衍生基團(tuán);(2)以去離子水或pH值1~6的稀酸溶液為沖洗液沖洗床柱,除去晶膠介質(zhì)內(nèi)殘留的混合液;(3)用洗脫液進(jìn)行洗脫,收集含三磷酸腺苷的洗脫峰,得到所述的三磷酸腺苷,所述的洗脫液為含有0.001~3M堿金屬鹽的稀酸溶液。
2.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于所述陰離子交換晶膠介質(zhì)為叔胺或季胺型陰離子交換晶膠介質(zhì)。
3.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于所述胺基或其衍生基團(tuán)為下列之一①-N+(CH3)3、②-N(CH3)2、③-N(C2H5)2。
4.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于所述步驟(3)中的洗脫為梯度洗脫,洗脫液流速0.1~20cm/min,步驟如下先用含堿金屬鹽0.001~0.06M、pH1~6的稀酸溶液I進(jìn)行洗脫,再用含堿金屬鹽0.1~3M、pH1~6的稀酸溶液II進(jìn)行洗脫,收集含三磷酸腺苷的洗脫峰,得到所述的三磷酸腺苷。
5.如權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于所述稀酸溶液、稀酸溶液I、稀酸溶液II各自獨(dú)立為下列之一①鹽酸溶液、②硫酸溶液、③乙酸溶液、④檸檬酸溶液。
6.如權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于所述堿金屬鹽為NaCl或KCl。
7.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于所述步驟(1)中含有三磷酸腺苷的混合液為啤酒酵母發(fā)酵液。
8.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于所述方法如下(1)將含有三磷酸腺苷的啤酒酵母發(fā)酵液調(diào)pH為2~3,以2~10cm/min流速上超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)床柱,進(jìn)行吸附;所述晶膠介質(zhì)為陰離子交換晶膠介質(zhì),所述陰離子交換晶膠介質(zhì)的孔徑為5~400μm、孔隙率為50~98%、功能基團(tuán)為下列之一①-N+(CH3)3、②-N(CH3)2、③-N(C2H5)2;(2)用沖洗液以2~10cm/min流速?zèng)_洗床柱,除去晶膠介質(zhì)內(nèi)殘留的混合液;所述沖洗液為下列之一①去離子水、②pH2~4的鹽酸溶液、③pH2~4的硫酸溶液、④pH2~4的乙酸溶液、⑤pH2~4的檸檬酸溶液;(3)用洗脫液以2~10cm/min流速進(jìn)行梯度洗脫先用含NaCl或KCl0.001~0.06M、pH1~6的稀酸溶液I進(jìn)行洗脫,再用含NaCl或KCl0.1~3M、pH1~6的稀酸溶液II進(jìn)行洗脫,收集含三磷酸腺苷的洗脫峰,得到所述的三磷酸腺苷;所述稀酸溶液I、稀酸溶液II各自獨(dú)立為下列之一①鹽酸溶液、②硫酸溶液、③乙酸溶液、④檸檬酸溶液。
全文摘要
用超大孔連續(xù)床晶膠吸附層析技術(shù)(Supermacroporous CryogelChromatography,簡(jiǎn)稱(chēng)晶膠層析)迅速高效地分離ATP的方法。所述方法是首先將微生物發(fā)酵液的pH值調(diào)為酸性,用陰離子交換型超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)床柱進(jìn)行吸附,然后用沖洗液沖洗床柱,除去晶膠介質(zhì)內(nèi)殘留的發(fā)酵液和雜質(zhì),用洗脫液分步洗脫,得到高純度的ATP。本發(fā)明提供的方法將現(xiàn)有ATP分離工藝過(guò)程中的菌體過(guò)濾、沉淀、活性炭吸附、陰離子交換層析等多個(gè)步驟簡(jiǎn)化為通過(guò)晶膠吸附層析一步實(shí)現(xiàn),工藝簡(jiǎn)單,料液在柱內(nèi)停留時(shí)間短,分離迅速,處理流速高,分離過(guò)程成本低,得到的ATP純度高,規(guī)?;a(chǎn)分離十分方便。
文檔編號(hào)C07H1/06GK101085797SQ20071006981
公開(kāi)日2007年12月12日 申請(qǐng)日期2007年6月29日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月29日
發(fā)明者贠軍賢, 沈紹傳, 姚克儉 申請(qǐng)人:浙江工業(yè)大學(xué)
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