專(zhuān)利名稱：反式類(lèi)胡蘿卜素、其合成、制劑和用途的制作方法
本申請(qǐng)要求2005年2月24日提交的臨時(shí)申請(qǐng)60/655,422的利益，在此以參考的方式將其全部?jī)?nèi)容引入本申請(qǐng)。
本發(fā)明的完成得到了美國(guó)海軍研究處授予的合同號(hào)N00014-04-C-0146的政府資助。政府在本發(fā)明中享有某些權(quán)利。
本發(fā)明包括制備反式類(lèi)胡蘿卜素、雙極性反式類(lèi)胡蘿卜素(BTC)(包括雙極性反式類(lèi)胡蘿卜素鹽(BTCS)如反式藏花酸鈉(TSC))、化合物自身的改進(jìn)的化學(xué)合成方法，其配制和給藥的方法以及使用它們的方法。

背景技術(shù)：
類(lèi)胡蘿卜素是一類(lèi)由類(lèi)異戊二烯單元組成的碳?xì)浠衔?，所述?lèi)異戊二烯單元以相對(duì)于分子中心呈反轉(zhuǎn)排列的方式連接。分子的主鏈(骨架)由共軛的碳-碳雙鍵和單鍵組成，也可以含有側(cè)基。雖然一度認(rèn)為類(lèi)胡蘿卜素的骨架含有40個(gè)碳，但是早已證實(shí)類(lèi)胡蘿卜素也可以具有少于40個(gè)碳原子的碳骨架。圍繞碳-碳雙鍵的四個(gè)單鍵都處于同一平面。如果側(cè)基都在碳-碳雙鍵的同一側(cè)，這些基團(tuán)被定義為順式；如果側(cè)基分別在碳-碳鍵的相反側(cè)，則其被定義為反式。因?yàn)橛写罅侩p鍵，類(lèi)胡蘿卜素有極大的可能發(fā)生幾何(順/反)異構(gòu)，并且異構(gòu)化容易在溶液中出現(xiàn)。在類(lèi)胡蘿卜素的許多特性等方面已有一系列的很好的參考書(shū)(“Carotenoids”，G.Britton，S.Liaaen-Jensen和H.Pfander編輯，Birkhauser Verlag，巴塞爾，1995，在此以參考的方式引入其全部?jī)?nèi)容)。
許多類(lèi)胡蘿卜素是非極性的，并因此不溶于水。這些化合物極端疏水，使得難以制備其生物用途的制劑，因?yàn)?，為了溶解它們，就必須使用有機(jī)溶劑而不是水性溶劑。另一些類(lèi)胡蘿卜素是單極性的，具有表面活性劑的特征(一個(gè)疏水部分和一個(gè)親水極性基)。因此，這些化合物被吸引在水溶液的表面而不是溶解于本體液體中。存在少量的天然雙極性類(lèi)胡蘿卜素化合物，這些化合物包含中心疏水部分以及各自位于分子一端的兩個(gè)極性基團(tuán)。據(jù)報(bào)道(“Carotenoids”，Vol.1A，p.283)，類(lèi)胡蘿卜素硫酸酯具有“至多0.4mg/ml的顯著的水溶解度”。其他可能被認(rèn)為是雙極性的類(lèi)胡蘿卜素在水中也不太溶解。這包括二醛和二酮。也報(bào)道了藏花酸的雙吡啶鹽，但在室溫下其水溶解度小于1mg/ml。雙極性類(lèi)胡蘿卜素的其他例子是藏花酸和藏花素(都是在香料藏紅花中發(fā)現(xiàn)的)。然而，藏花酸只是少量溶于水。實(shí)際上，在所有的天然雙極性類(lèi)胡蘿卜素中，只有藏花素顯示出顯著的水溶解性。
美國(guó)專(zhuān)利4,176,179；4,070,460；4,046,880；4,038,144；4,009,270；3,975,519；3,965,261；3,853,933和3,788,468(在此以參考的方式引入每一個(gè)專(zhuān)利的所有內(nèi)容)涉及藏花酸的各種用途。
美國(guó)專(zhuān)利6,060,511涉及反式藏花酸鈉(TSC)和其用途。通過(guò)將天然存在的藏紅花與氫氧化鈉反應(yīng)，然后提取而制得TSC。專(zhuān)利6,060,511包括制備雙極性反式類(lèi)胡蘿卜素鹽(反式藏花酸鈉)的提取方法、經(jīng)純化的提取所得組合物和該組合物的各種用途如提高氧擴(kuò)散能力和治療出血性休克。
PCT申請(qǐng)US03/05521涉及制備雙極性反式類(lèi)胡蘿卜素鹽的化學(xué)合成方法和使用其的方法。
下圖表示PCT申請(qǐng)US03/05521中所描述的TSC的化學(xué)合成過(guò)程的最后幾步。


如PCT申請(qǐng)所述，TSC的全合成過(guò)程通過(guò)下面兩圖所示的多步合成步驟得到了關(guān)鍵中間體“化合物A”和“化合物B”。

非所需二醛向所需二醛的異構(gòu)化

對(duì)惡性腫瘤或癌癥的通常治療方式是放射療法。所用的放射線是電磁波或帶電或中性粒子的形式。電磁波以X射線或伽馬射線為代表。帶電的粒子采取電子、質(zhì)子或重離子的形式，而中子是中性粒子的例子。在治療過(guò)程中，可以通過(guò)外部光束、組織間插植或兩者的組合來(lái)施用放射線。對(duì)于放射，拉德(rad)和戈瑞(Gray)是常用的測(cè)量單位。1拉德任何形式的放射劑量導(dǎo)致每克靶組織100爾格(erg)的能量吸收，1戈瑞等于100拉德。因此1厘戈瑞(cGy)等于1拉德。對(duì)于頭和頸部的大部分小腫瘤而言，為時(shí)6～6.5周的6000～6500cGy的放射治療一般就夠了。而控制大一些的腫瘤可能需要為時(shí)6.5～7.5周的6500～7000cGy的劑量，對(duì)于大體積的病變，則需要更高的劑量。已知為時(shí)5周的5000cGy的劑量可以控制90-95％病人的亞臨床疾病。
活的腫瘤細(xì)胞是具有無(wú)限分裂的能力的細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞必須失去其再生能力，才可以認(rèn)為是被殺死了。放射療法的腫瘤控制是通過(guò)消滅腫瘤內(nèi)的所有活細(xì)胞來(lái)實(shí)現(xiàn)的，并且伴隨著每次治療，既定劑量的放射會(huì)導(dǎo)致一定比例(而非大量)的活細(xì)胞的死亡。因此，腫瘤體積越大，腫瘤控制所需的總放射劑量就越大。已被放射療法殺滅或殺死的腫瘤細(xì)胞不一定發(fā)生形態(tài)學(xué)的改變，而是通常在有絲分裂期(細(xì)胞分裂)顯示細(xì)胞死亡。重要的是，應(yīng)注意該死亡可能并不隨著放射后的第一次細(xì)胞分裂而發(fā)生。在細(xì)胞死亡變得特別顯著前，可能存在幾次顯然成功的細(xì)胞周期，但仍認(rèn)為該細(xì)胞不再存活，因?yàn)槠錈o(wú)限再生能力已喪失。
腫瘤細(xì)胞的放射敏感性受許多因素影響。不久前，據(jù)認(rèn)為腫瘤組織學(xué)和定位學(xué)在用放射療法進(jìn)行腫瘤的潛在控制方面起了重要作用。毫無(wú)疑問(wèn)，某些腫瘤比較難以用放射療法控制，但不再覺(jué)得組織學(xué)重要。腫瘤內(nèi)的活腫瘤細(xì)胞的數(shù)目和乏氧(缺氧)細(xì)胞的比例是決定放射敏感性的主要因素，它們都隨特定腫瘤的大小而變。
多年來(lái)顯而易見(jiàn)的是，氧在腫瘤對(duì)放射療法的敏感性中起著重要作用。已明確確定乏氧腫瘤細(xì)胞更有耐放射性。雖然未完全了解該現(xiàn)象的機(jī)理，但認(rèn)為氧的存在可將放射損傷固定在細(xì)胞內(nèi)，否則易變的細(xì)胞將會(huì)修復(fù)。放射敏感性的最大的改變出現(xiàn)在0-20mm Hg范圍內(nèi)，該值明顯低于靜脈氧壓。在實(shí)驗(yàn)的實(shí)體瘤中，證實(shí)有顯著的缺氧，且顯著的間接證據(jù)也表明了人腫瘤內(nèi)的缺氧狀況。缺氧狀況會(huì)發(fā)展，因?yàn)槟[瘤經(jīng)常過(guò)度生長(zhǎng)而不再適應(yīng)其現(xiàn)有的血液供應(yīng)。
化學(xué)療法是用于治療癌癥的另一個(gè)方法。所施用的藥物的實(shí)例有例如卡莫司汀(BCNU)、替莫唑胺(TMZ)、順鉑、甲氨蝶呤等，這些藥物會(huì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的最終死亡或不再生長(zhǎng)。已注意到，像放射療法一樣，化學(xué)療法對(duì)乏氧細(xì)胞不太成功，而乏氧細(xì)胞經(jīng)常出現(xiàn)在腫瘤中。
每四個(gè)美國(guó)人中就有一個(gè)患有高血壓(high blood pressure)或高血壓癥(hypertension)。這種潛在威脅生命的病癥可以在實(shí)際上沒(méi)有癥狀的情況下存在。血壓由兩個(gè)值表示收縮壓和舒張壓。高血壓通常定義為收縮壓高于140mm Hg或舒張壓高于90mm Hg；然而，這些定義已有變化，一些內(nèi)科醫(yī)師認(rèn)為，無(wú)論是自然狀態(tài)下還是在使用抗高血壓藥物的情況下，人一生的血壓都應(yīng)該維持在120/70。
一些人中，調(diào)節(jié)血壓的系統(tǒng)出了故障遍布全身的微動(dòng)脈保持收縮，使得大血管中的壓力上升。持續(xù)的高血壓——根據(jù)大多數(shù)專(zhuān)家的說(shuō)法，是高于140/90mm Hg——被稱之為高血壓癥。高血壓人群中約90％具有現(xiàn)在所稱的“本態(tài)性”高血壓——該術(shù)語(yǔ)是指其沒(méi)有可確認(rèn)的病因。在剩余的10％的情況中，血壓的升高是因?yàn)槟I病、糖尿病或其他潛在的紊亂。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及多種新型的反式類(lèi)胡蘿卜素化合物，以及包含反式胡蘿卜素化合物的許多組合物，包括含有反式類(lèi)胡蘿卜素和環(huán)糊精的組合物。
本發(fā)明也包括合成具有下述結(jié)構(gòu)式的類(lèi)胡蘿卜素化合物的方法 YZ-TCRO-ZY 其中 Y＝H或非氫陽(yáng)離子 Z＝與Y相連的極性基團(tuán)，和 TCRO＝對(duì)稱或不對(duì)稱的反式類(lèi)胡蘿卜素骨架， 所述方法包括下述步驟使含有共軛碳-碳雙鍵的二醛與維蒂希(Wittig)試劑偶合，并選擇性地將偶合步驟的產(chǎn)物皂化。
在其他實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及治療哺乳動(dòng)物的腫瘤的方法，該方法包括給哺乳動(dòng)物施用i)反式類(lèi)胡蘿卜素，和ii)放射或化學(xué)療法，并涉及治療哺乳動(dòng)物的高血壓癥、心室纖維性顫動(dòng)或心動(dòng)過(guò)速、或高脂癥的方法，該方法包括給需要治療的哺乳動(dòng)物施用有效劑量的反式類(lèi)胡蘿卜素。

具體實(shí)施例方式 本發(fā)明涉及制備反式類(lèi)胡蘿卜素、雙極性反式類(lèi)胡蘿卜素(BTC)、包括反式藏花酸鈉(TSC)在內(nèi)的雙極性反式類(lèi)胡蘿卜素鹽(BTCS)的改進(jìn)的化學(xué)合成方法、這些化合物本身、將這些化合物配制成制劑的方法和使用這些化合物的方法。在此所用的術(shù)語(yǔ)“雙極性”表示具有各自位于分子的一端的兩個(gè)極性基團(tuán)。
在此所述的本發(fā)明的新的合成方法是如上所述的合成方法(即，美國(guó)申請(qǐng)10/647,132)的改進(jìn)，在此以參考的方式引入其全部?jī)?nèi)容。在本發(fā)明中，用化合物D代替化合物B。所得的合成通過(guò)新的倒數(shù)第二個(gè)中間體(化合物E)推進(jìn)到最終產(chǎn)物(如，反式藏花酸鈉)(如下圖所示)。

在該新的、改進(jìn)的合成方法中，化合物A(2，7-二甲基八-2，4，6-三烯-1，8-二醛)與化合物D(2-(乙氧羰基)-2-丁烯-4-基-三苯基-溴化鏻即C5維蒂希酯的鹵化物)化合。二者反應(yīng)形成了藏花酸二乙酯或化合物E(2，6，11，15-四甲基-十六碳-2E，4E，6E，8E，10E，12E，14E-七烯-1，16-二羧酸二乙酯)。然后將化合物E皂化(通過(guò)利用氫氧化鈉/乙醇)以形成最終的所需產(chǎn)物反式藏花酸鈉。
本發(fā)明的化合物 本發(fā)明涉及反式類(lèi)胡蘿卜素(包括反式類(lèi)胡蘿卜素二酯、二醇、二酮和二酸、雙極性反式類(lèi)胡蘿卜素(BTC)和雙極性反式類(lèi)胡蘿卜素鹽(BTCS)化合物)以及具有下述結(jié)構(gòu)的這些化合物的合成 YZ-TCRO-ZY 其中 Y(在兩端可以相同或者不同)＝H或非氫陽(yáng)離子，優(yōu)選Na+或K+或 Li+。 Y優(yōu)選是單價(jià)金屬離子。Y也可以是有機(jī)陽(yáng)離子，如R4N+、R3S+， 其中R是H或CnH2n+1，其中n是1～10，優(yōu)選是1～6。例如，R可以是甲基、乙基、丙基或丁基。
Z(在兩端可以相同或者不同)＝與H或陽(yáng)離子相連的極性基團(tuán)。該基團(tuán)選擇性地包括類(lèi)胡蘿卜素(或類(lèi)胡蘿卜素的相關(guān)化合物)的末端碳，該基團(tuán)可以是羧基(COO-)或CO基(如酯、醛或酮基)，或羥基。該基團(tuán)也可以是硫酸基(OSO3-)或單磷酸基(OPO3-)、(OP(OH)O2-)、雙磷酸基、三磷酸基或其組合。該基團(tuán)也可以是酯基COOR，其中R是CnH2n+1。
TCRO＝反式類(lèi)胡蘿卜素或類(lèi)胡蘿卜相關(guān)骨架(優(yōu)選少于100個(gè)碳)，其是直鏈的骨架，有側(cè)基(定義如下)，并代表性地包括“共軛”或交替的碳-碳雙鍵和單鍵(在一個(gè)實(shí)施方式中，TCRO像在番茄紅素中那樣并未完全共軛)。側(cè)基(X)代表性地是甲基，但也可以是如下討論的其他基團(tuán)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，骨架單元以相對(duì)于分子中心呈反轉(zhuǎn)排列的方式連接。環(huán)繞碳-碳雙鍵的4個(gè)單鍵都處于同一平面。如果側(cè)基在碳-碳雙鍵的同一側(cè)，則被稱為順式(也稱之為“Z”)；如果側(cè)基分別在碳-碳雙鍵的相反側(cè)，則被稱為反式(也稱之為“E”)。全文中，異構(gòu)體指的是順?lè)串悩?gòu)體。
本發(fā)明的化合物是反式的。順式異構(gòu)體一般是不利物質(zhì)，其不能導(dǎo)致擴(kuò)散能力的提高。在一個(gè)實(shí)施方式中，當(dāng)骨架保持直鏈時(shí)，順式異構(gòu)體可被使用。側(cè)基的布置相對(duì)于分子的中心點(diǎn)可以對(duì)稱，也可以不對(duì)稱，使得分子的左側(cè)與分子的右側(cè)在側(cè)基類(lèi)型或其相對(duì)于中心碳的空間關(guān)系上顯得不相同。
側(cè)基X(可以相同或不同)是氫(H)原子；或直鏈或支化的烴基，該烴基具有的碳為10個(gè)以下，優(yōu)選是4個(gè)以下(選擇性地包含鹵素)；或鹵素。X也可以是酯基(COO-)或乙氧/甲氧基。X的例子是甲基(CH3)、乙基(C2H5)、環(huán)上有或沒(méi)有側(cè)基的苯基或單芳香環(huán)結(jié)構(gòu)、含鹵素的烷基(C1-C10)如CH2Cl，或鹵素如Cl或Br或甲氧基(OCH3)或乙氧基(OCH2CH3)。側(cè)基可以相同或不同，但所用側(cè)基必須使骨架保持直鏈。
雖然自然界中存在許多類(lèi)胡蘿卜素，但不存在類(lèi)胡蘿卜素鹽。共有的美國(guó)專(zhuān)利6,060,511涉及反式藏花酸鈉(TSC)，在此以參考的方式引入其全部?jī)?nèi)容。通過(guò)將天然存在的藏紅花與氫氧化鈉反應(yīng)，隨后進(jìn)行主要選擇反式異構(gòu)體的提取，而制得TSC。
類(lèi)胡蘿卜素或類(lèi)胡蘿卜素鹽的順式和反式異構(gòu)體的存在可以通過(guò)觀察溶于水溶液中的類(lèi)胡蘿卜素樣品的紫外-可見(jiàn)光譜來(lái)確定。在得到光譜的情況下，將出現(xiàn)在可見(jiàn)光的波長(zhǎng)范圍380-470nm內(nèi)的最高峰的吸收值(波長(zhǎng)值取決于所用溶劑和BTC或BTCS的鏈長(zhǎng)。側(cè)基的加入或鏈長(zhǎng)的不同都會(huì)改變?cè)撐辗澹绢I(lǐng)域技術(shù)人員將識(shí)別出可見(jiàn)光范圍內(nèi)對(duì)應(yīng)于這些分子的共軛主鏈結(jié)構(gòu)的吸收峰的存在)除以出現(xiàn)在UV波長(zhǎng)范圍220-300nm內(nèi)的峰的吸收值，所得的值可以用來(lái)確定反式異構(gòu)體的純度水平。當(dāng)反式類(lèi)胡蘿卜素二酯(TCD)或BTCS溶于水時(shí)，可見(jiàn)光波長(zhǎng)范圍的最高峰在380～470nm(取決于確切的化學(xué)結(jié)構(gòu)、骨架長(zhǎng)度和側(cè)基)，UV波長(zhǎng)范圍的峰在220～300nm。按照M.Craw和C.Lambert，Photochemistry and Photobiology，Vol.38(2)，241-243(1983)(在此以參考的方式引入其全部?jī)?nèi)容)，計(jì)算結(jié)果(在分析藏花酸時(shí))為3.1，純化后提高到6.6。
利用為UV和可見(jiàn)光波長(zhǎng)范圍設(shè)計(jì)的比色杯，對(duì)共有美國(guó)專(zhuān)利6,060,511的藏花酸的反式鈉鹽(通過(guò)將天然存在的藏紅花與氫氧化鈉反應(yīng)，隨后進(jìn)行主要選擇反式異構(gòu)體的提取，而制得TSC)進(jìn)行Craw和Lambert分析，所得值平均為約6.8。對(duì)本發(fā)明的合成TSC進(jìn)行該測(cè)試，比值大于7.0(如7.0-8.5)，優(yōu)選大于7.5(如7.5-8.5)，最優(yōu)選大于8。合成的材料是“更純的”或高度純化的反式異構(gòu)體。
不對(duì)稱化合物 不對(duì)稱化合物的一些例子包括但不限于下述化合物 1)來(lái)自實(shí)施例6——化合物P的合成
(2，4，9-三甲基-十二碳-2E，4E，6E，8E，10E-五烯-1，12-二羧酸二乙酯)
(2，4，9-三甲基-十二碳-2E，4E，6E，8E，10E-五烯-1，12-二羧酸二鈉) 2)來(lái)自實(shí)施例8——化合物U的合成
(2，6，11-三甲基-十四碳-2E，4E，6E，8E，10E，12E-六烯-1，14-二羧酸二乙酯)
(2，6，11-三甲基-十四碳-2E，4E，6E，8E，10E，12E-六烯-1，14-二羧酸二鈉) 3)來(lái)自實(shí)施例9——化合物W的合成
(2，4，9，13-四甲基-十四碳-2E，4E，6E，8E，10E，12E-六烯-1，14-二羧酸二乙酯)
(2，4，9，13-四甲基-十四碳-2E，4E，6E，8E，10E，12E-六烯-1，14-二羧酸二鈉) 本領(lǐng)域技術(shù)人員公知，不對(duì)稱性可以通過(guò)側(cè)基的空間位置以及TCRO鏈的長(zhǎng)度，或者通過(guò)改變分子一端或兩端的側(cè)基類(lèi)型來(lái)獲得。此外，如同對(duì)稱反式類(lèi)胡蘿卜素分子的情況，不對(duì)稱反式類(lèi)胡蘿卜素分子可以有不同的陽(yáng)離子、極性端基和鏈長(zhǎng)。
中間化合物 在制備類(lèi)胡蘿卜素化合物和其鹽時(shí)，得到最終產(chǎn)物前合成了某些中間化合物。
例如，在TSC的合成中，本發(fā)明方法中的化合物A和D偶合后的關(guān)鍵中間體如下所示。首先是藏花酸二乙酯。也可以用藏花酸二甲酯替代藏花酸二乙酯，也可以是化合物的二丁酯等形式。一些中間體(用于本文的實(shí)施例中提供的大量的BTCS分子)的結(jié)構(gòu)如下所示
藏花酸二乙酯 (2，6，11，15-四甲基-十六碳-2E，4E，6E，8E，10E，12E，14E-七烯-1，16-二羧酸二乙酯)
(4，9-二甲基-十二碳-2E，4E，6E，8E，10E-五烯-1，12-二羧酸二乙酯)
(2，4，9-三甲基-十二碳-2E，4E，6E，8E，10E-五烯-1，12-二羧酸二乙酯)
(2，4，9，11-四甲基-十二碳-2E，4E，6E，8E，10E-五烯-1，12-二羧酸二乙酯)
(2，6，11-三甲基-十四碳-2E，4E，6E，8E，10E，12E-六烯-1，14-二羧酸二乙酯)
(2，4，9，13-四甲基-十四碳-2E，4E，6E，8E，10E，12E-六烯-1，14-二羧酸二乙酯)
(4，8，13，17-四甲基-二十碳-2E，4E，6E，8E，10E，12E，14E，16E，18E-九烯-1，20- 二羧酸二乙酯)
(2，4，8，13，17，19-六甲基-二十碳-2E，4E，6E，8E，10E，12E，14E，16E，18E-九烯-1，20-二羧酸二乙酯) 本發(fā)明的化合物的合成 本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式涉及對(duì)共有的PCT申請(qǐng)US03/05521和美國(guó)申請(qǐng)10/647,132所述方法的最后幾步所作出的改進(jìn)。在新發(fā)明中，通過(guò)一步或兩步偶合反應(yīng)將用于合成長(zhǎng)鏈類(lèi)胡蘿卜素的C10二醛(前文表示為化合物A)或C20二醛與維蒂希鹽反應(yīng)(C2、C3、C5、C10、C15或其他)以形成一個(gè)中間體或兩個(gè)中間體(每個(gè)偶合步驟各形成一個(gè))。然后將最終中間體皂化以形成所需鏈長(zhǎng)的、對(duì)稱的鹽式BTCS。
具體地說(shuō)，在TSC(在本文的實(shí)施例1和2中詳細(xì)描述)的合成中，本發(fā)明涉及導(dǎo)致產(chǎn)生了倒數(shù)第二個(gè)中間體即化合物E的包括化合物A和化合物D(而不是化合物B)的偶合反應(yīng)。然后通過(guò)與氫氧化鈉的皂化反應(yīng)將化合物E轉(zhuǎn)化為T(mén)SC。在本發(fā)明中，形成的TSC產(chǎn)物與在先的共有申請(qǐng)中所述的產(chǎn)物相比具有更高的產(chǎn)率和純度(在組成上和異構(gòu)體方面)。產(chǎn)生更高產(chǎn)率和純度的對(duì)類(lèi)胡蘿卜素如反式藏花酸鈉(TSC)的合成的改進(jìn) 1)反應(yīng)體系所用的四氫呋喃溶劑 本發(fā)明中，化合物A和D的偶合反應(yīng)發(fā)生在四氫呋喃溶劑體系中。用四氫呋喃/甲苯作為偶合反應(yīng)的反應(yīng)媒介。該步的產(chǎn)率通常在55-60％之間。比較起來(lái)，PCT申請(qǐng)US03/05521中所述的合成用苯作為類(lèi)似的偶合反應(yīng)(化合物A和B之間)的媒介，該步的產(chǎn)率為33％。
用四氫呋喃溶液作為偶合反應(yīng)的溶劑是因?yàn)樗鼘?duì)維蒂希反應(yīng)是pH中性溶劑體系。pH中性體系是有利的，因?yàn)?)在pH中性環(huán)境中沒(méi)有鹽產(chǎn)生，2)抑制或消除了醇類(lèi)的產(chǎn)生，和3)抑制了最終化合物的沉淀。另外，四氫呋喃和極高純?cè)?化合物A和D)的應(yīng)用使得不需要為磷葉立德轉(zhuǎn)換而用NaOH進(jìn)行二次反應(yīng)步驟(如PCT申請(qǐng)中所述)。本發(fā)明的偶合步驟因此減少為一步反應(yīng)，提高了產(chǎn)物總產(chǎn)率。其他可用于此步驟的溶劑包括二氯甲烷/氫氧化鈉和乙醇鈉或甲醇鈉。
2)皂化步驟中的乙醇 在新合成方法的第二步中，二酯(化合物E)皂化為T(mén)SC是以乙醇為溶劑而進(jìn)行的。將乙醇/氫氧化鈉媒介用于反應(yīng)混合物使得此步的產(chǎn)率為92.0％(未校正)，校正產(chǎn)率為80％。這里報(bào)道的是純化后的產(chǎn)率。觀察到反應(yīng)物的完全轉(zhuǎn)換。
二乙酯(化合物E)難溶于水和PCT申請(qǐng)US03/05521的合成方法中所用的溶劑如THF。因此，本發(fā)明中采用了對(duì)二乙酯更有利的溶劑乙醇，顯著減少了反應(yīng)時(shí)間并最終導(dǎo)致更高的產(chǎn)率。本步驟的其他合適的替代物是異丙醇或甲醇。
對(duì)合成過(guò)程所做的改變的結(jié)果總結(jié)在下表中，該表顯示了本發(fā)明方法和PCT申請(qǐng)US03/05521及美國(guó)申請(qǐng)10/647,132方法之間的純度和產(chǎn)率的不同。重要的是，應(yīng)注意本方法在倒數(shù)第二步經(jīng)由藏花酸二乙酯(化合物E)，而PCT申請(qǐng)US03/05521在同樣的步驟經(jīng)由藏花酸二甲酯(化合物C)。
兩種方法合成的反式藏花酸鈉的特征對(duì)比 改進(jìn)的粒徑分布 乙醇洗滌 在使用了乙醇洗滌步驟的實(shí)驗(yàn)中，產(chǎn)物的最終含水量較低(即0.5wt％)，與之相比，使用水洗滌步驟時(shí)最終產(chǎn)物的含水量是1.8wt％。使用乙醇洗滌降低了同批次內(nèi)的粒徑的易變性，使得分布更均勻。用PCT申請(qǐng)US03/05521的方法所制備的TSC的分布是雙峰式的，而本發(fā)明顯示單一的正態(tài)分布。這一改進(jìn)特別重要，因?yàn)榱娇梢杂绊懭芙庑?，更均勻的分布可獲得更均一的溶解性。
因此，本發(fā)明包括合成具有下式的反式類(lèi)胡蘿卜素化合物的方法 YZ-TCRO-ZY 其中 Y(在兩端可以相同或者不同)＝H或非氫陽(yáng)離子，優(yōu)選Na+或K+或Li+。Y優(yōu)選是單價(jià)金屬離子。Y也可以是有機(jī)陽(yáng)離子，如R4N+、R3S+，其中R是H或CnH2n+1其中n是1～10，優(yōu)選是1～6。例如，R可以是甲基、乙基、丙基或丁基。
Z(在兩端可以相同或者不同)＝與H或陽(yáng)離子連接的極性基團(tuán)，選擇性地包括類(lèi)胡蘿卜素(或類(lèi)胡蘿卜素的相關(guān)化合物)的末端碳，該基團(tuán)可以是羧基(COO-)或CO基(如，酯、醛或酮基)，或羥基。該基團(tuán)也可以是硫酸基(OSO3-)或單磷酸基(OPO3-)、(OP(OH)O2-)、雙磷酸基、三磷酸基或其組合。該基團(tuán)也可以是酯基COOR，其中R是CnH2n+1。
TCRO＝反式類(lèi)胡蘿卜素或類(lèi)胡蘿卜相關(guān)骨架(優(yōu)選少于100個(gè)碳)，其是直鏈的骨架，有側(cè)基(定義如下)，并代表性地包括“共軛”或交替的碳-碳雙鍵和單鍵(在一個(gè)實(shí)施方式中，TCRO像在番茄紅素中那樣并未完全共軛)。側(cè)基代表性地是甲基，但也可以是如下討論的其他基團(tuán)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，骨架單元以相對(duì)于分子中心呈反轉(zhuǎn)排列的方式連接。環(huán)繞碳-碳雙鍵的4個(gè)單鍵都處于同一平面。如果側(cè)基在碳-碳雙鍵的同一側(cè)，則基團(tuán)被稱為順式(也稱之為“Z”)；如果側(cè)基分別在碳-碳雙鍵的相反側(cè)，則被稱為反式(也稱之為“E”)。本發(fā)明的化合物是反式的。順式異構(gòu)體一般是不利物質(zhì)，其不能導(dǎo)致擴(kuò)散能力的提高。在一個(gè)實(shí)施方式中，當(dāng)骨架保持直鏈時(shí)，順式異構(gòu)體可被使用。側(cè)基的布置相對(duì)于分子中心點(diǎn)可以對(duì)稱，也可以不對(duì)稱，以使分子的左側(cè)與分子的右側(cè)在側(cè)基類(lèi)型或其相對(duì)于中心碳的空間關(guān)系上顯得不相同。
該方法包括將含有共軛碳-碳雙鍵的對(duì)稱二醛與維蒂希試劑偶合，維蒂希試劑例如如[3-甲氧羰基-2-亞丁烯-1-基]三苯基正膦等三苯基正膦，或如C5維蒂希酯鹵化物(諸如D(2-(乙氧羰基)-2-丁烯-4-基-三苯基-溴化鏻))等三苯基溴化鏻，或如三苯基膦酰乙酸酯等C2、C3或C5膦酰酯。維蒂希試劑也可以是三苯基氯化鏻或上述溴化物與氯化物的混合物。需要一步還是兩步偶合反應(yīng)取決于所需TCRO鏈的長(zhǎng)度。鏈較長(zhǎng)時(shí)需要多于一步的偶合反應(yīng)，每一步所用的維蒂希試劑相同或不同，如本文的實(shí)施例所示。
有利的是，偶合反應(yīng)在pH中性溶劑體系中進(jìn)行，如四氫呋喃溶劑體系，該體系可選擇性地包括甲苯；或二氯甲烷/氫氧化鈉和乙醇鈉或甲醇鈉。
偶合步驟后是分離偶合反應(yīng)的目標(biāo)產(chǎn)物的步驟。
偶合步驟后，可以進(jìn)行第二偶合反應(yīng)步驟并如上所述將產(chǎn)物分離，或者將上述步驟分離出的產(chǎn)物皂化以形成BTCS化合物。如果包括第二偶合反應(yīng)，則將來(lái)自第二步的產(chǎn)物分離然后皂化。產(chǎn)物可以利用NaOH、LiOH、KOH的溶液并以甲醇、乙醇或異丙醇作為溶劑進(jìn)行皂化。
皂化步驟后，可以用乙醇或水洗滌所需產(chǎn)物。一些情況下，甲醇或異丙醇也是合適的洗滌溶劑。
本發(fā)明藥用級(jí)別化合物和組合物的制劑和施用 在將包括BTCS如反式藏花酸鈉(TSC)在內(nèi)的反式類(lèi)胡蘿卜素與其他成分(賦形劑)配制成制劑時(shí)，有利的是提高BTC的溶解性(增加活性劑(如TSC)在溶液中的濃度)、穩(wěn)定性、生物利用率和等壓平衡，降低水溶液的pH值，和/或提高水溶液的重量克分子滲透濃度。賦形劑應(yīng)起到防止單體BTC單元在溶液中的自聚或防止BTC的過(guò)早沉淀的添加劑的作用。賦形劑的加入應(yīng)有助于這些方面中的至少一個(gè)方面。雙極性反式類(lèi)胡蘿卜素(BTC)分子可以以多種方式配制成制劑。一種基本制劑是BTC在無(wú)菌水中的混合物，該制劑通過(guò)靜脈注射給藥。該制劑可以通過(guò)包含各種藥學(xué)賦形劑(包括環(huán)糊精)來(lái)進(jìn)行改進(jìn)。這種制劑也可以通過(guò)靜脈注射給藥。
上述各種液體制劑的任何一種都可以冷凍干燥(凍干)以形成具有更高溶解性和穩(wěn)定性特征的干粉。這樣的粉末劑型可重新構(gòu)造以便于給藥。一種方法是在液體如注射用鹽水或無(wú)菌水中重新構(gòu)造粉末，然后通過(guò)靜脈注射給藥。該方法可包括使用多室注射器，該注射器在一室包含粉末，在另一室包含液體。同樣地，該產(chǎn)品可以裝入針劑藥水瓶，瓶中包含能將粉末與液體分離的隔離物。給藥前，在靜脈注射前將隔離物破壞并將各組分混合。
除了靜脈注射，用于具體配制的反式類(lèi)胡蘿卜素分子的給藥途徑還包括肌內(nèi)注射、吸入遞藥、口服和經(jīng)皮給藥。
環(huán)糊精 為了施用一些藥物，需要添加另一種有助于提高活性藥物成分(API)的吸收/溶解性/濃度的化合物。這樣的化合物稱為賦形劑，環(huán)糊精是賦形物的例子。環(huán)糊精是得自淀粉的環(huán)狀糖鏈。它們之間的區(qū)別在于結(jié)構(gòu)中吡喃葡萄糖單元的數(shù)目。母體環(huán)糊精含有六、七和八個(gè)吡喃葡萄糖單元，分別稱為α-、β-和γ-環(huán)糊精。環(huán)糊精首次發(fā)現(xiàn)于1891年，作為藥用制劑的一部分，其已被使用多年。
環(huán)糊精是環(huán)狀(α-1，4)-連接的α-D-吡喃葡萄糖的寡糖，該寡糖含有相對(duì)疏水的中心空穴和親水性外表面。在制藥工業(yè)中，環(huán)糊精已主要用作絡(luò)合劑以增加難溶于水的藥物的水溶性和增加其生物利用度和穩(wěn)定性。此外，環(huán)糊精可用以降低或防止對(duì)腸胃或眼睛的刺激，降低或消除不良?xì)馕痘蛭兜溃乐顾?藥或藥-添加劑的相互作用，或甚至將油狀或液體的藥物轉(zhuǎn)化為微晶或無(wú)定形粉末。
雖然BTC化合物溶于水，但環(huán)糊精的使用能使溶解性進(jìn)一步提高，使得可以施用更少體積的藥物溶液來(lái)達(dá)到指定劑量。
許多環(huán)糊精可與本發(fā)明的化合物一起使用。參見(jiàn)例如，美國(guó)專(zhuān)利4,727,064，在此以參考的方式引入其全部?jī)?nèi)容。優(yōu)選的環(huán)糊精是γ-環(huán)糊精，2-羥丙基-γ-環(huán)糊精和2-羥丙基-β-環(huán)糊精，或其他能增加BTC溶解性的環(huán)糊精。
將γ-環(huán)糊精與TSC一起使用能將TSC在水中的溶解性提高3-7倍。雖然這并不如用環(huán)糊精提高活性劑溶解性的其他一些情況下所見(jiàn)的因數(shù)那么大，但其重要性在于，可以以較小體積的劑量對(duì)人(或動(dòng)物)進(jìn)行非腸道給藥。TSC和γ-環(huán)糊精的劑量已產(chǎn)生含有多達(dá)44毫克的TSC每毫升溶液的水溶液。該溶液無(wú)需等摩爾。γ-環(huán)糊精的摻入也使得TSC在肌內(nèi)注射時(shí)可以被吸收到血流中。吸收較快，且可快速達(dá)到TSC的有效血液水平(如大鼠中所示)。
環(huán)糊精制劑可與其他反式類(lèi)胡蘿卜素和類(lèi)胡蘿卜素鹽一起使用。本發(fā)明也包括非鹽的類(lèi)胡蘿卜素(例如，酸式如藏花酸、藏花素或上面所注明的中間化合物)和環(huán)糊精的新型組合物。換句話說(shuō)，非鹽的反式類(lèi)胡蘿卜素可以與環(huán)糊精一起配制成制劑。為了重量克分子滲透濃度，可加入甘露醇，或者將環(huán)糊精-BTC混合物加入到等滲鹽水中(參見(jiàn)下面)。
所用環(huán)糊精的量要能容納反式類(lèi)胡蘿卜素，但不能太多，否則無(wú)法釋放反式類(lèi)胡蘿卜素。
環(huán)糊精-甘露醇 反式類(lèi)胡蘿卜素如TSC可以與環(huán)糊精(如上所述)和非代謝糖如甘露糖(如，d-甘露糖，可調(diào)節(jié)滲透壓使之與血液的滲透壓相同)一起配制成制劑。含有多于20mg TSC/毫升溶液的溶液可用此方法制備。該溶液可以添加到等滲鹽水或其他等滲溶液中以使其稀釋并仍保持合適的滲透壓。參見(jiàn)實(shí)施例12。
甘露醇-乙酸 BTCS如TSC可以與甘露醇如d-甘露醇和用來(lái)調(diào)節(jié)pH的弱酸如乙酸或檸檬酸一起配制成制劑。溶液的pH應(yīng)該在8-8.5左右。該溶液應(yīng)近似為等滲溶液，并且因此可以被直接注射到血流中。參見(jiàn)實(shí)施例13。
水+鹽水 BTCS如TSC可以溶于水中(優(yōu)選是可注射水)。然后可以將此溶液用水、標(biāo)準(zhǔn)鹽水、林格氏(Ringer’s)乳酸鹽或磷酸鹽緩沖液稀釋?zhuān)覍⑺没旌衔镒⑷?infuse)或注射。
緩沖液 可以將緩沖液如甘氨酸或碳酸氫鹽以約50mM的水平添加到制劑中，以穩(wěn)定BCT如TSC。
TSC和γ-環(huán)糊精 TSC相對(duì)環(huán)糊精的比例以TSC∶環(huán)糊精的溶解度數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)。例如，20mg/ml TSC，8％γ-環(huán)糊精，50mM甘氨酸，2.33％的甘露醇，且pH8.2±0.5；或10mg/ml TSC和4％環(huán)糊精，或5mg/ml TSC和2％環(huán)糊精。這些成分的比值可以稍有改變，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的。
甘露醇可用于調(diào)節(jié)重量克分子滲透濃度，其濃度可根據(jù)其他成分的濃度而改變。甘氨酸保持恒量。TSC在較高pH下更穩(wěn)定。為了穩(wěn)定性和生理相容性，需要8.2±0.5左右的pH。甘氨酸的使用與凍干法相容。作為選擇，可用50mM的碳酸氫鹽緩沖液代替甘氨酸來(lái)配制TSC和環(huán)糊精。
γ-環(huán)糊精的內(nèi)毒素的去除 市售的藥用級(jí)別的環(huán)糊精具有不適于靜脈注射的內(nèi)毒素水平。必須降低內(nèi)毒素水平以在用于靜脈注射的BTC制劑中使用環(huán)糊精。
凍干法 可以用凍干法和其他結(jié)晶方法來(lái)干燥BTC藥物。
本發(fā)明的化合物也可以根據(jù)美國(guó)申請(qǐng)10/647,132所述的配方部分來(lái)配制。
肺部給藥 已證實(shí)，肺部給藥后，TSC被吸收到血流中。γ-環(huán)糊精的摻入增加了TSC進(jìn)入體循環(huán)的吸收——總體效果是提高了血漿清除率。并且，注射體積的增加導(dǎo)致更多的TSC吸收，且持續(xù)更長(zhǎng)的時(shí)間。因此，同樣劑量的更大體積的注射產(chǎn)生更高的生物利用度。已發(fā)現(xiàn)，通過(guò)肺部途徑施用TSC可以成功治療大鼠的出血性休克。
肺部吸收不需要環(huán)糊精。由pH′d去離子水中的TSC構(gòu)成的肺部研究表明，其能成功地吸收到血流中。
肌內(nèi)給藥 將TSC簡(jiǎn)單地溶解在去離子水中時(shí)，其不能通過(guò)肌內(nèi)途徑吸收；但是，環(huán)糊精的加入(像在所配制的藥物產(chǎn)品中那樣)導(dǎo)致其能吸收到血流中。γ-環(huán)糊精和TSC一起施用，使其能成功吸收到體循環(huán)中。已發(fā)現(xiàn)，通過(guò)肌內(nèi)注射方式施用TSC可以成功治療大鼠的出血性休克。當(dāng)通過(guò)肌內(nèi)注射施用TSC時(shí)，TSC與丙二醇、聚乙二醇聚合物(PEG)和其他試劑的制劑也有助于其吸收到血流中。這些試劑也可以與用于肌內(nèi)給藥的其他BCT一起使用。
經(jīng)皮給藥 已證實(shí)，在大鼠中，TSC與環(huán)糊精一起配制成制劑時(shí)，在經(jīng)皮給藥后，TSC能被吸收到血流中。當(dāng)經(jīng)皮施用TSC時(shí)，TSC與丙二醇、聚乙二醇聚合物(PEG)、DMSO和其他試劑的制劑也有助于其吸收到血流中。這些試劑也可以與其他皮膚施用的BCT一起使用。
口服給藥 已證實(shí)，口服給藥后，TSC能被吸收到血流中。已發(fā)現(xiàn)環(huán)糊精如γ-環(huán)糊精與BCT如TSC的混合增強(qiáng)了TSC進(jìn)入體循環(huán)的吸收。BCT與丙二醇、聚乙二醇聚合物(PEG)和其他試劑的制劑也增強(qiáng)其進(jìn)入血流的口服吸收。
本發(fā)明的化合物和組合物的用途 本發(fā)明的化合物和組合物可被用于治療包括人在內(nèi)的哺乳動(dòng)物的多種紊亂。本發(fā)明的上述化合物(包括中間化合物)可用于下面的用途，也可用于美國(guó)申請(qǐng)10/647,132中所述的用途。
反式類(lèi)胡蘿卜素和惡性腫瘤的放射 為了克服腫瘤細(xì)胞的缺氧(其產(chǎn)生耐放射性)，氧療法是有用的。實(shí)際上，已進(jìn)行定量，其被稱為氧增強(qiáng)比(OER)。該值表明在缺氧條件下達(dá)到既定水平的細(xì)胞存活的放射劑量大于細(xì)胞富氧時(shí)的所述放射劑量，且二者之比為常數(shù)因子。在多數(shù)哺乳動(dòng)物的細(xì)胞中，OER是2.5～3。換句話說(shuō)，需要用殺滅富氧細(xì)胞所需放射劑量的2.5～3倍來(lái)殺滅乏氧細(xì)胞。因此，提高對(duì)腫瘤的氧輸送使得可以用更低的放射劑量“殺滅”惡性細(xì)胞。這在多種腫瘤中都很重要。
已證實(shí)，使用雙極性反式類(lèi)胡蘿卜素化合物如反式藏花酸鈉可以增加到達(dá)缺氧組織的氧氣量；因此，它是非常有效的放射敏化劑。它可以降低所用的放射劑量，或者增加放射的有效性并使得腫瘤消退和痊愈。其對(duì)目前使用放射的任何種類(lèi)的癌癥都有用。約60％的癌癥患者在進(jìn)行放射治療，通常使用為時(shí)數(shù)周的約6000-6500cGy的放射劑量。BTC或BTCS如TSC可以與放射合并使用，以達(dá)到更高的治愈率。一個(gè)實(shí)施方式中，在每次放射劑量前，以0.02～2mg/kg施用TSC，優(yōu)選是0.05～1mg/kg。
對(duì)于其他類(lèi)型的劑量給藥，要使用更高的劑量(如高3倍，因?yàn)橐云渌緩绞┯脮r(shí)TSC不能完全吸收)。
一個(gè)實(shí)施方式中，除了施用BTC化合物如TSC外，還采用了其他方法如使用高壓氧、呼吸純氧氣體或施用其他化合物如米索硝唑，以提高放射的有效性。這些附加的方法也可以與下面論述的其他用法(如，化學(xué)療法)一起使用。
隨放射治療一起使用的本發(fā)明的化合物可用于治療多種類(lèi)型的腫瘤，包括鱗狀細(xì)胞癌、黑素瘤、淋巴瘤、肉瘤、類(lèi)肉瘤、骨肉瘤、與皮膚癌有關(guān)的腫瘤、乳癌、頭部和頸部癌、婦科癌、泌尿和男性生殖器癌、膀胱癌、前列腺癌、骨癌、內(nèi)分泌腺癌、消化道癌(如結(jié)腸癌)、主消化腺/器官(如胃、肝、胰腺)癌、CNS(中樞神經(jīng)系統(tǒng))癌(包括腦癌如神經(jīng)膠質(zhì)瘤)和肺癌。
反式藏花酸鈉(TSC)已成功用作移植到小鼠上的人癌癥的放射敏化劑。已進(jìn)行的研究表明0.07mg/kg～0.18mg/kg范圍劑量的TSC可以增強(qiáng)對(duì)這些腫瘤類(lèi)型的放射效果。反式類(lèi)胡蘿卜素和化學(xué)療法 已證實(shí)，反式類(lèi)胡蘿卜素化合物如反式藏花酸鈉能提高到達(dá)缺氧組織的氧氣的量；這使其可與癌癥的化學(xué)療法結(jié)合使用。這使得化學(xué)療法有效性提高。其對(duì)現(xiàn)在使用化學(xué)療法的各種類(lèi)型的癌癥都有用。大多數(shù)癌癥患者在進(jìn)行使用多種多樣的試劑的化學(xué)治療。BTC或BTCS如TSC可以與化學(xué)療法結(jié)合使用以使腫瘤消退和達(dá)到更高的治愈率。在一個(gè)實(shí)施方式中，在每次靜脈施用化學(xué)療法的藥劑之前、之中或之后，以0.02～2mg/kg施用TSC，優(yōu)選是0.05～1mg/kg。如果通過(guò)其他途徑進(jìn)行劑量給藥，因?yàn)樯锢枚鹊慕档?，該劑量需要增?～3倍。
本發(fā)明的化合物與化學(xué)療法一起可用于治療多種類(lèi)型的腫瘤，包括鱗狀細(xì)胞癌、黑素瘤、淋巴瘤、肉瘤、類(lèi)肉瘤、骨肉瘤、與皮膚癌有關(guān)的腫瘤、乳癌、頭部和頸部癌、婦科癌、泌尿和男性生殖器癌、膀胱癌、前列腺癌、骨癌、內(nèi)分泌腺癌、消化道癌(如結(jié)腸癌)、主消化腺/器官(如胃、肝、胰腺)癌、CNS癌(包括腦癌如神經(jīng)膠質(zhì)瘤)和肺癌。心室纖維性顫動(dòng) 心臟在電信號(hào)通過(guò)時(shí)跳動(dòng)。心室纖維性顫動(dòng)(“V fib”)是心臟的電活動(dòng)變得紊亂的一種病癥。當(dāng)這種病癥發(fā)生時(shí)，心臟的下(泵)心室以快速、非同步的方式收縮(心室“顫動(dòng)”而不是跳動(dòng))。心臟幾乎不泵出血液。
心室纖維性顫動(dòng)是一種很?chē)?yán)重的病癥。除非立即提供醫(yī)療幫助，否則幾分鐘內(nèi)就會(huì)隨之出現(xiàn)虛脫和突然心臟死亡。如果及時(shí)治療，心室纖維性顫動(dòng)和心動(dòng)過(guò)速(極快速的心跳)可以轉(zhuǎn)化為正常節(jié)律。對(duì)這種病癥的現(xiàn)有療法需要用稱之為除顫器的裝置來(lái)電擊心臟。校正威脅生命的節(jié)律的另一個(gè)有效方法是利用稱之為植入式心律轉(zhuǎn)變器-除顫器的電子裝置。如果心臟自身的電信號(hào)變得紊亂，這種裝置可以電擊心臟使心跳正?；?。
心室纖維性顫動(dòng)和心動(dòng)過(guò)速都可利用本發(fā)明的化合物如反式藏花酸鈉(TSC)來(lái)“校正”。在心肌梗塞的臨床前研究過(guò)程中進(jìn)行靜脈注射TSC時(shí)，預(yù)防了心室纖維性顫動(dòng)。此外，已證實(shí)，TSC能減輕患有出血性休克的大鼠的心動(dòng)過(guò)速。
如果靜脈給藥，TSC的優(yōu)選劑量是0.02～2mg/kg，更優(yōu)選的是0.05～1mg/kg。如果以其他途徑給藥，因?yàn)樯锢枚冉档?，該劑量需要增?～3倍。
高血壓癥 人的氧消耗隨著衰老而下降。此外，高血壓的發(fā)生率隨著年齡而上升。雖然不希望局限于具體理論，但據(jù)信這兩種因素是相關(guān)的，即，在組織的氧消耗下降后，血壓會(huì)升高以給組織提供更多的氧。因此，如果以其他方式提供更多的氧，則血壓會(huì)下降。如果靜脈給藥，TSC的優(yōu)選劑量是0.02～2mg/kg，更優(yōu)選的是0.05～1mg/kg。如果以其他途徑給藥，因?yàn)樯锢枚冉档?，該劑量需要增?～3倍。
如TSC等本發(fā)明的化合物可降低收縮壓，也可降低舒張壓。本發(fā)明的化合物也能使心率下降，從而使得脈率(高血壓癥患者的脈率經(jīng)常升高)下降。
治療高血壓的TSC的優(yōu)選劑量是0.02～2mg/kg，更優(yōu)選的是0.05～1mg/kg。
高脂癥 如TSC等本發(fā)明的化合物能降低包括甘油三酯和膽固醇水平在內(nèi)的血漿脂質(zhì)水平。如果靜脈給藥，TSC的優(yōu)選劑量是0.02～2mg/kg，更優(yōu)選的是0.05～1mg/kg。如果以其他途徑給藥，因?yàn)樯锢枚冉档停瑒┝啃枰黾?～3倍。
用于早產(chǎn)嬰兒 如TSC等本發(fā)明的化合物可用于早產(chǎn)嬰兒，以避免心智技能遲鈍。如果靜脈給藥，TSC的優(yōu)選劑量是0.02～2mg/kg，更優(yōu)選的是0.05～1mg/kg。如果以其他途徑給藥，因?yàn)樯锢枚冉档停搫┝啃枰黾?～3倍。
分娩期間使用 如TSC等本發(fā)明的化合物可在分娩期間用于胎兒或母親以避免分娩過(guò)程中胎兒的缺氧。分娩過(guò)程中胎兒的缺氧會(huì)導(dǎo)致腦損傷或孤獨(dú)癥。如果靜脈給藥，TSC的優(yōu)選劑量是0.02～2mg/kg，更優(yōu)選的是0.05～1mg/kg。如果以其他途徑給藥，因?yàn)樯锢枚冉档?，該劑量需要增?～3倍。煙霧吸入后使用 如TSC等本發(fā)明的化合物可在吸入大量煙霧后施用。如果靜脈給藥，TSC的優(yōu)選劑量是0.02～2mg/kg，更優(yōu)選的是0.05～1mg/kg。如果以其他途徑給藥，因?yàn)樯锢枚冉档?，該劑量需要增?～3倍。
纖維肌痛 如TSC等本發(fā)明的化合物可通過(guò)提高細(xì)胞內(nèi)的氧水平而用于治療纖維肌痛。如果靜脈給藥，TSC的優(yōu)選劑量是0.02-2mg/kg，更優(yōu)選的是0.05-1mg/kg。如果以其他途徑給藥，因?yàn)樯锢枚冉档?，該劑量需要增?～3倍。
下述實(shí)施例是說(shuō)明性的，而不是對(duì)本發(fā)明的化合物、組合物和方法的限定。對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)顯而易見(jiàn)的通常遇到的各種條件和參數(shù)的其他適當(dāng)?shù)男薷暮驼{(diào)整，都包括在本發(fā)明的要旨和范圍內(nèi)。
實(shí)施例 實(shí)施例所用的縮略語(yǔ)表 a/a[％] 相對(duì)純度％ AP 水層 Approx. 約 COA 分析證書(shū) corr. 經(jīng)校正的 d 天 DCM 二氯甲烷 DSC 差示掃描量熱法 E-No. 每個(gè)單獨(dú)化合物的參考號(hào) Eq 當(dāng)量 EtOAc 乙酸乙酯 FW 化學(xué)式量 GMP 藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(Good manufacturing principles) h 小時(shí) H-NMR 氫核磁共振 HPLC高壓液相色譜 HV Herstellungsvorschrift (合成過(guò)程) IPC 過(guò)程控制 IT 內(nèi)溫 JT 夾套溫度 LC-MS 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用 MeOH甲醇 min 分鐘 ML 母液 MOR 批生產(chǎn)記錄 nc 未校正 OP 有機(jī)層 RT 室溫(約22℃) sat.飽和的 soln. 溶液 sm 原料 Temp. 溫度 TFA 三氟乙酸 Th. 理論的 TPPO三苯基氧化膦 TLC 薄層色譜 TSC 反式藏花酸鈉(C-013229) UV 紫外光譜 y. 產(chǎn)率 實(shí)施例1 165g TSC的小規(guī)模合成 化學(xué)反應(yīng)概述
化合物E(2，6，11，15-四甲基-十六碳-2E，4E，6E，8E，10E，12E，14E-七烯-1，16-二羧酸二乙酯)的合成
規(guī)模 130g化合物A0.792 mol(nc) 理論量304.4g化合物E 實(shí)際量139.6g化合物D 0.736 mol(nc) +143.2g化合物E 產(chǎn)率(nc) 92.9％ 純度93.68％+96.99％a/a HPLC 過(guò)程 1.將燒瓶抽真空并用氮?dú)鈨艋?br> 2.JT＝20℃時(shí)將化合物A(1)和化合物D(2)加入該燒瓶中。
3.JT＝20℃時(shí)將四氫呋喃(3)和甲苯(4)加入該燒瓶中。將該燒瓶抽真空并用氮?dú)鈨艋瘍纱?。將反?yīng)混合物升溫至JT＝100℃。得到均相溶液。
4.在JT＝100℃下將溶液攪拌6.5小時(shí)(IT約為93℃)。
5.取出IPC用樣品 6.將混合物緩慢冷至IT＝20℃(15小時(shí))。
7.形成了紅色懸浮液。將懸浮液在2小時(shí)內(nèi)冷至IT＝1℃。
8.在數(shù)分鐘內(nèi)用過(guò)濾干燥裝置過(guò)濾懸浮液。
9.用2℃的冷乙醇(5)沖洗燒瓶。將沖洗液轉(zhuǎn)移到過(guò)濾干燥裝置中。
1根據(jù)供應(yīng)商的CoA，所用材料是含48％溴化物和52％氯化物的鹽混合物。因此，實(shí)際的質(zhì)量與表中所列的理論值不同。
10.在22℃下用甲基環(huán)己烷(6)洗滌濾餅。
11.在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在55℃干燥濾餅5小時(shí)。
12.得到139.6g的紅色固體化合物E。通過(guò)1H-NMR證實(shí)了其結(jié)構(gòu)。
HPLC測(cè)得純度是93.68％a/a。此外，也觀察到2.90+3.00％的順式異構(gòu)體。產(chǎn)率(nc)是45.9％。
13.將母液(約3L)濃縮至其體積的40％(仍為紅色溶液)，并在JT＝100℃下攪拌15h。(IT約為100℃)。
14.形成了紅色懸浮液。取出IPC用樣品。
15.將混合物用四氫呋喃(7)和甲苯(8)稀釋(仍是懸浮液)，并在3.5h內(nèi)冷至IT＝2.9℃。
16.在10分鐘內(nèi)用過(guò)濾干燥裝置過(guò)濾懸浮液。
17.用2℃的冷乙醇(9)沖洗燒瓶。將沖洗液轉(zhuǎn)移到過(guò)濾干燥裝置中。
18.在18℃用甲基環(huán)己烷(10)洗滌濾餅。
19.在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在50℃干燥濾餅15小時(shí)。
20.得到384.5g的紅色固體粗產(chǎn)物。1H-NMR顯示除了所需產(chǎn)物外，有TPPO存在。
21.用甲醇(11)處理粗產(chǎn)物，并在JT＝60℃下攪拌30分鐘。
22.將懸浮液在60分鐘內(nèi)冷至JT＝0℃。
23.在數(shù)分鐘內(nèi)用過(guò)濾干燥裝置過(guò)濾懸浮液。
24.用甲醇(11)沖洗燒瓶。將沖洗液轉(zhuǎn)移到過(guò)濾干燥裝置中。
25.在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在55℃干燥濾餅2小時(shí)。
26.得到143.2 g的紅色固體粗產(chǎn)物。1H-NMR證實(shí)了其結(jié)構(gòu)。HPLC測(cè)得純度是96.99％a/a。此外，還觀察到1.02+1.26％的順式異構(gòu)體。產(chǎn)率(nc)是47.0％。1H-NMR顯示有約11.5％的TPPO。
注釋 1)2.5小時(shí)后取第一次的IPC。結(jié)果顯示醛已完全消耗，并存在額外的順式異構(gòu)體。異構(gòu)體的比例隨著反應(yīng)時(shí)間提高。
樣品準(zhǔn)備 從化合物E合成TSC
藏花酸二乙酯反式藏花酸鈉 (2，6，11，15-四甲基-十六碳-2E，4E，6E，8E，10E，12E，14E-七烯-1，16-二羧酸二乙酯)規(guī)模 185 g化合物A 0.481mol(nc)理論量179.2 g TSC實(shí)際量164.9 g TSC0.443 mol(nc)產(chǎn)率(nc) 92.0％純度97.56％a/a HPLC 過(guò)程 2原料的準(zhǔn)確數(shù)量稍低于表中所列的值，因?yàn)楦鶕?jù)1H-NMR，第二部分(46g)含有約11.5％的TPPO。
1.將燒瓶抽真空并用氮?dú)鈨艋?br> 2.JT＝20℃時(shí)將化合物E(1)加入燒瓶中。
3.JT＝20℃時(shí)將乙醇(2)和30％NaOH(3)加入燒瓶中。將燒瓶抽真空并用氮?dú)鈨艋瘍纱?。將反?yīng)混合物升溫至JT＝90℃。得到粘稠的橙色懸浮液。
4.在JT＝90℃下將溶液攪拌47小時(shí)(IT約為77℃)。
5.16小時(shí)內(nèi)將混合物緩慢冷至IT＝21℃。取出IPC用樣品 6.用水(4)稀釋混合物。
7.在50分鐘內(nèi)用過(guò)濾干燥裝置過(guò)濾懸浮液。
8.用3℃的冷水(5)沖洗燒瓶并洗滌濾餅。
9.再用5℃和2℃的冷水(6+7)洗滌濾餅。
10.在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在55℃干燥濾餅20小時(shí)。
11.得到164.9g的橙色固體TSC。1H-NMR證實(shí)了其結(jié)構(gòu)。HPLC測(cè)得純度是97.56％a/a。產(chǎn)率(nc)是92.0％。經(jīng)檢測(cè)，含水量為1.89％w/w，421nm相比254mn的UV比值為8.42。
C20H22O4Na2-0.5H2O-0.2NaOH的元素分析的計(jì)算值為C，61.41；H，6.03；Na，12.93；O，19.63；測(cè)試值為C，61.5；H，6.2；Na13.0；O，19.8。
樣品準(zhǔn)備 實(shí)施例2 cGMP條件下大規(guī)模(2kg)TSC的制備 反應(yīng)式概述
原材料 對(duì)原料(化合物A和D)的品質(zhì)進(jìn)行檢驗(yàn)，測(cè)試結(jié)果如下 所有的材料都滿足指定規(guī)格(化合物D≥97.0％；化合物A≥94.0％)。此外，所有的材料都是合成制備的，未使用任何動(dòng)物成分或者得自動(dòng)物產(chǎn)品的任何成分。
C-10二醛(化合物A)是黃色晶體狀粉末。正膦(化合物D)是介于白色和黃色之間的粉末。結(jié)構(gòu)經(jīng)1H-NMR確證。
化合物E的合成
規(guī)模2.99kg化合物A 18.21mol(nc) 理論量 7.00kg化合物E 實(shí)際量 3.79kg化合物E 11.69mol(nc) +705g化合物E 產(chǎn)率(nc)64.2％純度93.70％+90.01％a/a HPLC 3根據(jù)供應(yīng)商的CoA，所用材料是含48％溴化物和52％氯化物的鹽混合物。因此，實(shí)際的質(zhì)量與表中所列的理論值不同。
過(guò)程 1.將100L的反應(yīng)器抽真空并用氮?dú)鈨艋?br> 2.JT＝20℃時(shí)將化合物A(1)和化合物D(2)加入100L的反應(yīng)器中。
3.JT＝20℃時(shí)將四氫呋喃(3)和甲苯(4)加入反應(yīng)器中。將100L的反應(yīng)器抽真空并用氮?dú)鈨艋瘍纱巍⒎磻?yīng)混合物升溫至JT＝100℃。得到均相溶液。
4.在JT＝100℃下將溶液攪拌4小時(shí)(IT約為98℃)。
5.在JT＝110℃下，輕度抽真空將溶液濃縮。除去9.0L的溶劑?；旌衔镌贘T＝110℃下攪拌13小時(shí)(IT約為105℃)。
6.將混合物用四氫呋喃(5)稀釋并冷卻到IT＝20℃(2.75小時(shí))。形成紅色懸浮液。
7.取出IPC用樣品 8.將混合物緩慢冷至IT＝0℃(80分鐘)。
9.在100分鐘內(nèi)用過(guò)濾干燥裝置過(guò)濾懸浮液。
10.用冷乙醇(6)沖洗100L反應(yīng)器。將沖洗液轉(zhuǎn)移到過(guò)濾干燥裝置中。
11.用甲基環(huán)己烷(7)洗滌濾餅。
12.在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在55℃干燥濾餅4.5小時(shí)。
13.得到5.246kg的紅色固體粗產(chǎn)物。1H-NMR譜顯示，除了所需產(chǎn)物外，還有實(shí)質(zhì)量的TPPO(約25％～30％)存在。
14.將粗產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到過(guò)濾干燥器中并用甲醇(8)洗滌。
15.在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在55℃干燥濾餅19小時(shí)。
16.得到3.787kg的紅色固體化合物E(粗品3#1)。1H-NMR證實(shí)了其結(jié)構(gòu)。HPLC測(cè)得純度是93.70％a/a。此外，還觀察到3.17+2.54％的順式異構(gòu)體。產(chǎn)率(nc)是54.1％。
17.在JT＝110℃下，在輕度真空下將母液(約81L)濃縮，除去30L的溶劑。將混合物在JT＝110℃下攪拌12.5小時(shí)。(IT約為105℃)。
18.將混合物用四氫呋喃(9)和甲苯(10)稀釋并冷卻到IT＝20℃(2.75小時(shí))。形成紅色懸浮液。
19.取出IPC用樣品，冷至0℃并過(guò)濾。
20.將混合物用四氫呋喃(11)和甲苯(12)稀釋?zhuān)郎刂罦T＝60℃并再次冷卻至IT＝20℃。
21.取出過(guò)濾樣品，并用甲醇洗滌。
22.在60分鐘內(nèi)將懸浮液冷卻到1℃，并在60分鐘內(nèi)用過(guò)濾干燥器過(guò)濾。
23.用甲基環(huán)己烷(13)洗滌濾餅。
24.用甲基環(huán)己烷(14+15)洗滌濾餅。
25.在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在55℃干燥濾餅4.5小時(shí)。
26.得到705g的紅色固體粗產(chǎn)物(粗品2#1)。1H-NMR證實(shí)了其結(jié)構(gòu)。HPLC測(cè)得純度是90.01％a/a。此外，在HPLC上也注意到有3.83+5.34％的順式異構(gòu)體。產(chǎn)率(nc)是10.1％?？傂Ｕa(chǎn)率是63.0％。
注釋 1)根據(jù)HPLC，異構(gòu)體的比例是約60∶40反式/順式。
樣品準(zhǔn)備 從化合物E合成TSC
藏花酸二乙酯 反式藏花酸鈉 (2，6，11，15-四甲基-十六碳-2E，4E，6E，8E，10E，12E，14E-七烯-1，16-二羧酸二乙酯) 規(guī)模3.70kg化合物A 9.62mol(nc) 理論量 3.58kgTSC 實(shí)際量 2.19kgTSC 5.88mol(nc) 產(chǎn)率(nc)61.2％ 純度 98.76％a/a HPLC 過(guò)程 1.將100L的反應(yīng)器抽真空并用氮?dú)鈨艋?br> 2.JT＝20℃時(shí)將化合物E(1)加入100L反應(yīng)器中。
3.JT＝20℃時(shí)將乙醇(2)和30％NaOH(3)加入100L反應(yīng)器中。將100L反應(yīng)器抽真空并用氮?dú)鈨艋瘍纱?。將反?yīng)混合物升溫至JT＝90℃。得到粘稠的橙色懸浮液。
4.在JT＝90℃下將溶液攪拌63小時(shí)(IT為81℃)。
5.2小時(shí)內(nèi)將混合物冷至IT＝21℃。取出IPC用樣品 6.用水(4)稀釋混合物。
7.在15小時(shí)內(nèi)用過(guò)濾干燥裝置過(guò)濾懸浮液。
8.用乙醇(5)沖洗100L反應(yīng)器。
9.用0℃～5℃間的冷水(6、7和8)洗滌濾餅三次。
10.用乙醇(9)洗滌濾餅。
11.在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在50℃干燥濾餅5小時(shí)。
12.得到2.186kg的橙色固體TSC。1H-NMR證實(shí)了其結(jié)構(gòu)。HPLC測(cè)得純度是97.96％a/a。產(chǎn)率(nc)是61.2％；見(jiàn)注釋1。經(jīng)測(cè)定，含水量為1.58％w/w，421 nm相比254 nm的UV比值為8.9。C20H22O4Na2-0.34H2O的元素分析的計(jì)算值為C，63.47；H，6.04；Na，12.15；O，18.35。測(cè)試值為C，63.81；H，5.64；Na12.21；O，18.34。
13.室溫下，將2.184kg粗品#1在攪拌機(jī)中振搖4天。用杵將剩下的塊狀物輕松搗碎，得到2.183kg的橙色固體粗品2#1(對(duì)應(yīng)為AA-013329-Batch-01-2004)。由HPLC得到純度為98.76％a/a。DSC測(cè)定顯示沒(méi)有區(qū)別。
注釋 1)產(chǎn)物溶于水。因此，此具體情況下過(guò)濾時(shí)間較長(zhǎng)以及另外加水洗滌都會(huì)導(dǎo)致觀測(cè)到的產(chǎn)率變低。進(jìn)行第三次水洗的目的是為了滿足產(chǎn)品中的所需鈉含量。
樣品準(zhǔn)備 分析 HPLC方法 方法 HPLC-TMC-M1.2 替代方法 HPLC-TMC-M1.1 方法適用范圍 C-009594，化合物A，TSC，化合物D，化合物E 化學(xué)品 乙腈，HPLC級(jí)(J.T.Baker或等同物) 水，HPLC級(jí)(Milli-Q系統(tǒng)純化或等同物) 三氟乙酸(Merck或等同物) THF，HPLC級(jí)，無(wú)穩(wěn)定劑(Scharlau或等同物) MeOH，HPLC級(jí)(Scharlau或等同物) 設(shè)備 HP-1100-系統(tǒng)或等同物 柱YMC Pack Pro C18，100×4.6mm，3μm 流動(dòng)相制備 溶液A 在H2O/乙腈(90∶10％v/v)中，0.1％的TFA 溶液B CAN 樣品制備 混合溶劑 THF，MeOH，H2O，乙腈 C-009594，將6-7mg(精確稱量)的粗品溶于MeOH中。
C-013327 C-014679將6-7mg(精確稱量)的粗品溶于30mL乙腈中，并用水填充到 100mL線。
C-014681將6-7mg(精確稱量)的粗品溶于100mL THF中。
C-013329將6-7mg(精確稱量)的粗品溶于10mL H2O中，并用THF填充 到100mL。
HPLC參數(shù) 積分參數(shù) 無(wú) 下述HPLC描記線所用的識(shí)別表 *柱LC-0402對(duì)G-1172的特征保留時(shí)間 UV方法 -該合成的改進(jìn)方法 方法 UV-TSC-M.2.1 替代方法 - 方法適用范圍 TSC 化學(xué)品 水，HPLC級(jí)(Milli-Q系統(tǒng)純化或等同物) 設(shè)備 Perkin Elmer Lambda 25-System或等同物 比色杯 1cm石英玻璃 UV參數(shù) 波長(zhǎng)421nm；350nm 254nm 樣品準(zhǔn)備 將10mg樣品(精確稱量)溶于50ml水中。在45～50℃下將樣品 超聲處理30分鐘。用另外的49ml水稀釋1ml該溶液(使溶液總 體積為50ml)。
文件和方法 為了在線性范圍內(nèi)進(jìn)行測(cè)定而改進(jìn)的自定義方法的樣品準(zhǔn)備。
歷史 實(shí)施例3 反式藏花酸鉀(2，6，11，15-四甲基-十六碳-2E，4E，6E，8E，10E，12E，14E-七烯-1，16-二羧酸二鉀)的合成 在下面，反式藏花酸鉀也稱為T(mén)PC或化合物F?；瘜W(xué)合成如下所示
皂化反應(yīng)(合成中的最后一步)按照與上述實(shí)施例1和2中所用的方法相類(lèi)似的方式進(jìn)行。二乙酯(化合物E)按照上述實(shí)施例1和2所述制備。
對(duì)于該實(shí)施例，在90℃將化合物E用在乙醇(EtOH，1.5ml/mmol)中的30％的氫氧化鉀(KOH，1.5ml/mmol)處理4天。將混合物用乙醇稀釋?zhuān)驗(yàn)樵谠撨^(guò)程中會(huì)有部分溶劑損失。室溫下(22℃)過(guò)濾以分離橙色產(chǎn)物，然后用50％的乙醇水溶液洗滌(3次)。JT＝60℃時(shí)將產(chǎn)物在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上干燥5小時(shí)。這樣得到86％的反應(yīng)產(chǎn)率(12 g實(shí)驗(yàn))。1H-NMR譜和LC-MS譜證實(shí)了目標(biāo)產(chǎn)物是反式藏花酸鉀。用上述實(shí)施例2中所述的HPLC方法，檢測(cè)波長(zhǎng)為421nm時(shí)，測(cè)得HPLC純度為98.3％。
實(shí)施例4 反式藏花酸鋰(2，6，11，15-四甲基-十六碳-2E，4E，6E，8E，10E，12E，14E-七烯-1，16-二羧酸二鋰)的合成 在下面，反式藏花酸鋰也稱為T(mén)LC或化合物G?；瘜W(xué)合成如下
皂化反應(yīng)按照與實(shí)施例1～3中所述相似的方法進(jìn)行。但在這種情況下，將氫氧化鋰用作皂化劑。在該實(shí)施例中，化合物E仍按照上述實(shí)施例1和2所述合成。90℃下，將化合物E用在乙醇(EtOH，1.5ml/mmol)中的10％的氫氧化鋰(LiOH，2.8ml/mmol)處理4天。室溫下(22℃)過(guò)濾深橙色懸浮液，并用50％的乙醇水溶液(3次)和純乙醇洗滌。夾套溫度(JT)＝60℃時(shí)將深橙色固體在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上干燥5小時(shí)。得到了9.5g的深橙色固體。
該化合物的HPLC分析顯示，除了所需產(chǎn)物外仍有38％a/a的原料。有實(shí)質(zhì)量原料殘留可能是由該皂化反應(yīng)中所用的堿液(LiOH)濃度較低引起的。在這種情況下，由于LiOH在水中的溶解性有限，使用了僅10％的LiOH水溶液。在其他實(shí)施例中(這里所述的1～3)，用的是30％的堿水溶液。
為了提高反應(yīng)產(chǎn)率，將前一步驟分離的產(chǎn)物在95℃用在50％乙醇水溶液(2.9ml/mmol)中的固體LiOH(13當(dāng)量)再處理2天。將第二次氫氧化鋰處理所得的橙色產(chǎn)物在室溫下過(guò)濾分離，并用50％的乙醇水溶液(3次)和純乙醇洗滌。所得的固體在夾套溫度＝60℃時(shí)在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上干燥3小時(shí)。這樣得到了14g產(chǎn)物。因?yàn)樵摦a(chǎn)率高于理論產(chǎn)率，所以又將其制成水(1.6ml/mmol)的漿液以除去過(guò)量的LiOH。將橙色產(chǎn)物在室溫下過(guò)濾分離，并用50％的乙醇水溶液(3次)和純乙醇洗滌。在夾套溫度＝60℃時(shí)將產(chǎn)物在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上干燥2小時(shí)。這樣得到了8.5g的產(chǎn)量，對(duì)應(yīng)總反應(yīng)產(chǎn)率67％(12g實(shí)驗(yàn))。
1H-NMR譜和LC-MS譜都證實(shí)，得到了所需產(chǎn)物反式藏花酸鋰。用上述實(shí)施例1中所述的分析方法，檢測(cè)波長(zhǎng)為421nm時(shí)，測(cè)得HPLC純度為99.7％ 實(shí)施例5 TSC的C-14衍生物(4，9-二甲基-十二碳-2E，4E，6E，8E，10E-五烯-1，12-二羧酸二鈉)的合成 與TSC相比具有較短鏈長(zhǎng)的對(duì)稱化合物的合成需要使用不同的維蒂希試劑，而不是實(shí)施例1～4中所示的化合物B。鏈長(zhǎng)較短的BPTC化合物用化合物A即前面所用的C-10二醛來(lái)合成。然后通過(guò)Horner-Emmons反應(yīng)或維蒂希偶合反應(yīng)利用市售的C2或C3膦酸酯或溴化鏻(化合物H)將將化合物A轉(zhuǎn)化，分別形成相應(yīng)的C14-或C16-酯。用NaOH/EtOH水解以完成反應(yīng)，形成TSC的所需的C14或C16-衍生物。
TSC的C-14衍生物(化合物J)的合成是通過(guò)化合物A和化合物H(乙氧羰基-甲基-三苯基-溴化鏻)反應(yīng)完成的。如下所示，化合物A和H反應(yīng)以形成皂化步驟前的最終中間體即化合物I，然后進(jìn)行皂化步驟而生成化合物J。

形成化合物I的偶合反應(yīng) 形成化合物I的最佳方法包括使用C2溴化鏻(化合物H)。該偶合反應(yīng)在如以上實(shí)施例1～4中所用的四氫呋喃/甲苯(2∶1，0.7ml+1.4ml/mmol)中進(jìn)行。在夾套溫度＝100℃下與3當(dāng)量的維蒂希試劑反應(yīng)，得到了良好的產(chǎn)物形成。在0℃過(guò)濾分離出黃色產(chǎn)物，然后用甲基環(huán)己烷洗滌(兩次)。該步的產(chǎn)率是56-61％(10g規(guī)模)。
檢測(cè)波長(zhǎng)為369nm時(shí)(11.5分鐘)，使用HPLC測(cè)得純度為83.4％a/a反式異構(gòu)體。除了化合物I，HPLC描記線中還發(fā)現(xiàn)有三種化合物存在，推測(cè)其為化合物I的順式異構(gòu)體(1.0％a/a，10.5分鐘；13.4％a/a，11.2分鐘；2.0％a/a，11.9分鐘)。
形成最終產(chǎn)物(化合物J)的皂化反應(yīng) 將化合物I轉(zhuǎn)變?yōu)榛衔颙的皂化反應(yīng)以類(lèi)似于實(shí)施例1～4所述的方式進(jìn)行。在90℃，將二乙酯(化合物I)用在乙醇(4ml/mmol)中的30％的NaOH(2ml/mmol)處理3天。室溫下通過(guò)過(guò)濾分離出黃色產(chǎn)物，然后用50％的乙醇水(5次)和純乙醇(3次)洗滌。皂化反應(yīng)的粗產(chǎn)率約為100％。為了提高純度，在90℃將混合物用在乙醇(1ml/mmol)中的30％NaOH(0.5ml/mmol)漿化4小時(shí)。在0℃過(guò)濾懸浮液，并用EtOH洗滌(3次)，得到黃色產(chǎn)物，對(duì)應(yīng)79％的未校正產(chǎn)率(10g規(guī)模)。1H-NMR證實(shí)合成的是所需產(chǎn)物(化合物J)，檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)為383nm時(shí)，HPLC純度為97.8％。
實(shí)施例6 TSC的C-15衍生物(2，4，9-三甲基-十二碳-2E，4E，6E，8E，10E-五烯-1，12-二羧酸二鈉)的合成 用化合物K(1-(乙氧羰基)-乙基三苯基溴化鏻，一種C3鏻鹽/C3維蒂希酯溴化物)與化合物A反應(yīng)以制備該反應(yīng)次序中的第一個(gè)中間體即化合物M。作為選擇，該第一步中，如果化合物A與化合物L(fēng)(三乙基-2-膦酰丙酸酯，其為C3膦酯)反應(yīng)可以得到同樣的結(jié)果。
在第二步偶合反應(yīng)中，用化合物H(乙氧羰基-甲基三苯基溴化鏻，其為C2鏻鹽/C2維蒂希酯溴化物)與化合物M反應(yīng)以形成倒數(shù)第二個(gè)中間體即化合物O。作為選擇，化合物O可以通過(guò)化合物M和化合物N(三乙基-膦酰乙酸酯，其為C2膦酰酯)之間的反應(yīng)來(lái)形成。
在最后的反應(yīng)步驟中，化合物O進(jìn)行皂化反應(yīng)以形成TSC的C-15不對(duì)稱衍生物(化合物P)。反應(yīng)式列于下圖
C15衍生物需要依次使用兩種不同的單偶合反應(yīng)；第一個(gè)是同C3膦酰酯或溴化鏻反應(yīng)，第二個(gè)是同C2溴化鏻反應(yīng)。因?yàn)橐恍〤16二乙酯的形成，用硅膠色譜對(duì)第一次單偶合反應(yīng)的粗產(chǎn)物進(jìn)行純化。
形成化合物M的第一次偶合反應(yīng) 將化合物A用1當(dāng)量的C3溴化鏻(化合物K)在100℃處理1天。該偶合反應(yīng)在四氫呋喃/甲苯(2∶1，0.7ml+1.4ml/mmol)中進(jìn)行，顯示出好的產(chǎn)物形成。冷至室溫而后冷至0℃時(shí)，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)沉淀。然后用硅膠(0.33g/mmol)過(guò)濾橙色混合物。用甲苯(1.7ml/mmol)洗滌濾餅。合并濾液并在JT＝45℃下蒸發(fā)至干，得到外觀為橙色油狀物的粗產(chǎn)物。
接下來(lái)，將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干。殘?jiān)贛eOH中漿化以得到固體形式的粗產(chǎn)物，然后用MeOH洗滌(3次)。由于除了所需的C13單偶合產(chǎn)物化合物M外，還有C16二乙酯存在，使得所得粗產(chǎn)物的品質(zhì)不佳。因此，用10∶1甲基環(huán)己烷/EtOAc進(jìn)行了硅膠純化步驟。將粗產(chǎn)物溶于二氯甲烷中(0.3ml/克粗產(chǎn)物)。首先將C-16二乙酯(約7％)洗脫。一旦進(jìn)行該步驟，產(chǎn)率為45％(20 g實(shí)驗(yàn))。規(guī)模較小時(shí)，產(chǎn)率高達(dá)70％。據(jù)測(cè)，品質(zhì)最佳的產(chǎn)物在檢測(cè)波長(zhǎng)為383nm時(shí)(9.22分鐘)含有98.1％a/a的反式異構(gòu)體。有其他化合物存在(1.7％a/a，9.47分鐘)，推測(cè)其為化合物M的順式異構(gòu)體。
形成化合物O的二次偶合反應(yīng) 用1.5當(dāng)量的C2溴化鏻(化合物H)在100℃處理化合物M。該偶合反應(yīng)在四氫呋喃/甲苯(2∶1，0.5ml+1.0ml/mmol)中進(jìn)行，顯示出好的產(chǎn)物形成。在0℃通過(guò)過(guò)濾分離出黃色產(chǎn)物，并用甲基環(huán)己烷洗滌兩次。該步產(chǎn)率為36％。
為了提高產(chǎn)率，將母液濃縮到原始體積的約一半，并冷至0℃，以27％的產(chǎn)率得到第二批產(chǎn)物。兩次產(chǎn)物加和，總產(chǎn)率為63％(13g規(guī)模)。
據(jù)測(cè)，質(zhì)量最佳的產(chǎn)物(化合物O)在檢測(cè)波長(zhǎng)為383nm時(shí)(12.4分鐘)含有87.0％a/a的反式異構(gòu)體。此外，HPLC譜上記錄的第二個(gè)化合物(11.3％a/a，11.8分鐘)可能是化合物O的順式異構(gòu)體。
形成最終產(chǎn)物(化合物P)的皂化反應(yīng) 在90℃，將二乙酯(化合物O)用在乙醇(4ml/mmol)中的30％的NaOH(2ml/mmol)處理3天。室溫下通過(guò)過(guò)濾分離出黃綠色產(chǎn)物，然后用50％的乙醇水溶液(5次)和乙醇(3次)洗滌。皂化反應(yīng)的產(chǎn)率為83％(6g規(guī)模)。
1H-NMR證實(shí)了所需產(chǎn)物化合物P。檢測(cè)波長(zhǎng)為383nm時(shí)，化合物P的HPLC純度為97.0％。此外，記錄有對(duì)應(yīng)為1.4％a/a+1.2％a/a的其他可能的順式異構(gòu)體。LCMS數(shù)據(jù)證實(shí)了指定結(jié)構(gòu)。
實(shí)施例7 TSC的C-16衍生物(2，4，9，11-四甲基-十二碳-2E，4E，6E，8E，10E-五烯-1，12-二羧酸二鈉)的合成 用化合物L(fēng)(三乙基-2-膦酰丙酸酯，其為C3膦酰酯)與化合物A反應(yīng)以形成該合成中的關(guān)鍵中間體即化合物Q。作為選擇，可以通過(guò)化合物A與化合物K(1-(乙氧羰基)-乙基三苯基溴化鏻，其為C3鏻鹽/C2維蒂希酯溴化物)之間的反應(yīng)來(lái)制備化合物Q。雖然起始反應(yīng)物(化合物A、K和L)與實(shí)施例6所見(jiàn)相同，但此時(shí)所用的反應(yīng)條件得到了不同的、對(duì)稱的中間體即化合物Q。
在反應(yīng)的最終步驟，化合物Q在皂化反應(yīng)中與氫氧化鈉和乙醇反應(yīng)，生成了最終產(chǎn)物化合物R?；衔颮(2，4，9，11-四甲基-十二碳-2E，4E，6E，8E，10E-五烯-1，12-二羧酸二鈉)是TSC的C-16對(duì)稱衍生物。反應(yīng)式列于下圖
形成化合物Q的偶合反應(yīng)(用化合物L(fēng)作為反應(yīng)物) C16衍生物(化合物R)的合成按類(lèi)似于實(shí)施例6中所示的方式(化合物A和化合物L(fēng)之間的偶合反應(yīng))開(kāi)始。在100℃，用化合物L(fēng)在甲苯/四氫呋喃(2∶1)中處理化合物A。不加入堿時(shí)沒(méi)有觀測(cè)到化學(xué)反應(yīng)，此時(shí)，將混合物冷至0℃并加入NaOMe(3當(dāng)量)。
將從C3磷酰酯(2×1.5當(dāng)量)和NaOMe在DCM中兩次制得的第二批試劑加入到反應(yīng)混合物中。將反應(yīng)混合物在JT＝65℃下攪拌，測(cè)得更高百分比的目標(biāo)產(chǎn)物。HPLC譜表明只保留有小百分比的未反應(yīng)的化合物A(2.3％a/a)。用水淬滅反應(yīng)混合物，在含有水、飽和NaHCO3溶液和50％飽和NaCl溶液的溶液中洗滌有機(jī)相。蒸發(fā)后得到36.4g的化合物Q。
用硅膠(甲基環(huán)己烷/EtOAc＝10∶1)對(duì)化合物Q進(jìn)行了純化。得到0.26g淺黃色產(chǎn)物(化合物Q)和4.0g黃色固體(化合物M)。用MeOH作為溶劑以32％的產(chǎn)率分離出酯交換產(chǎn)物化合物Q(二甲酯而不是二乙酯)。醇溶劑也適于該偶合反應(yīng)?？傮w來(lái)說(shuō)，該步產(chǎn)物的質(zhì)量?jī)?yōu)異，純度為85.7％。HPLC實(shí)驗(yàn)顯示主要雜質(zhì)是化合物Q的順式異構(gòu)體。
形成化合物Q的偶合反應(yīng)(用化合物K作為反應(yīng)物) 在合成化合物Q的第二次實(shí)驗(yàn)時(shí)，在偶合反應(yīng)中以化合物K替代化合物L(fēng)。該替代顯示了更好的總反應(yīng)轉(zhuǎn)化率?；衔顰和化合物K之間的偶合反應(yīng)是在四氫呋喃/甲苯(2∶1，0.9ml+1.8ml/mmol)的混合物中進(jìn)行的，在JT＝100℃下(22小時(shí))與3當(dāng)量維蒂希試劑反應(yīng)顯示出好的產(chǎn)物形成。在0℃通過(guò)過(guò)濾并用甲基環(huán)己烷洗滌兩次分離出黃色產(chǎn)物。產(chǎn)率為61～62％(10 g規(guī)模)。1H-NMR顯示，化合物Q的純度為85.2％a/a反式異構(gòu)體(波長(zhǎng)369nm，13.3分鐘)，主要雜質(zhì)為順式異構(gòu)體。
形成最終產(chǎn)物的皂化反應(yīng)(化合物R) 按照與實(shí)施例5所述類(lèi)似的方式進(jìn)行皂化反應(yīng)以制備化合物R。在90℃，將二乙酯(化合物Q)用在乙醇(4ml/mmol)中的30％的NaOH(2ml/mmol)處理3天。室溫下過(guò)濾并用50％的乙醇水溶液(3次)和EtOH(3次)洗滌后，皂化反應(yīng)的產(chǎn)率為85％(12.5g規(guī)模)。1H-NMR證實(shí)所需產(chǎn)物是化合物R。檢測(cè)波長(zhǎng)為383nm時(shí)，HPLC純度為95.7％。此外，測(cè)得3.8％的順式異構(gòu)體。LCMS數(shù)據(jù)證實(shí)了指定結(jié)構(gòu)。
實(shí)施例8 TSC的C17衍生物(2，6，11-三甲基-十四碳-2E，4E，6E，8E，10E，12E-六烯-1，14-二羧酸二鈉)的合成 TSC的長(zhǎng)鏈不對(duì)稱衍生物的制備如實(shí)施例1～2一樣采用化合物A和D作為原料來(lái)進(jìn)行。但是，在這種情況下，改變反應(yīng)條件，以使其有利于第一偶合用中間體即化合物S的形成。然后化合物S在第二偶合反應(yīng)中與化合物H反應(yīng)以生成化合物T。在該反應(yīng)次序的最后步驟中，化合物T與氫氧化鈉和乙醇發(fā)生皂化反應(yīng)以形成最終所需產(chǎn)物化合物U?；衔颱是TSC的C17衍生物，其二烯骨架周?chē)膫?cè)甲基的布置方式是不對(duì)稱的。合成次序的詳情列于下圖
形成化合物S的第一偶合反應(yīng) 將化合物A用1當(dāng)量的化合物D在100℃處理1天。偶合反應(yīng)在如實(shí)施例1中所用的四氫呋喃/甲苯(2∶1，0.44ml+0.88ml/mmol)中進(jìn)行，顯示出好的產(chǎn)物形成。在隨后的0℃冷卻步驟過(guò)程中，由最初的深紅色溶液成為懸浮液。最后，在0℃通過(guò)過(guò)濾并用甲基環(huán)己烷洗滌(3次)分離出橙紅色固體。經(jīng)確證，該橙紅色固體是前面實(shí)施例1～4中所述的化合物E。此時(shí)，化合物E的產(chǎn)率約為4％。
將來(lái)自前述步驟的母液在JT＝45℃下蒸發(fā)至干，得到紅色油狀的粗品化合物S。所得粗品的質(zhì)量不佳，因?yàn)槌怂璁a(chǎn)物化合物S外，還有一些化合物E存在。為了分離化合物S，用8∶1甲基環(huán)己烷/EtOAc進(jìn)行了硅膠純化步驟。為此，首先將粗產(chǎn)物溶于二氯甲烷中(0.3ml/克粗產(chǎn)物)。從該混合物中首先洗脫的產(chǎn)物是C20二乙酯(化合物E)。殘留級(jí)分含有化合物的混和體，其中包括所需化合物S。此步驟后，橙色固體的產(chǎn)率為46％(30g實(shí)驗(yàn))。檢測(cè)波長(zhǎng)為369nm時(shí)(10.4分鐘)時(shí)，HPLC測(cè)得純度為71.2％a/a的反式異構(gòu)體。此外，檢測(cè)出另兩個(gè)化合物(0％a/a+4.9％a/a)，可能是化合物S的順式異構(gòu)體。
形成化合物T的二次偶合反應(yīng) 化合物S與1.5當(dāng)量的化合物H在100℃反應(yīng)。該偶合反應(yīng)在四氫呋喃/甲苯2∶1(0.6ml+1.2ml/mmol)中進(jìn)行，顯示出好的產(chǎn)物形成。在0℃通過(guò)過(guò)濾并用甲基環(huán)己烷洗滌兩次分離出紅色產(chǎn)物化合物T。產(chǎn)率是58％(10g規(guī)模)。檢測(cè)波長(zhǎng)為369nm時(shí)(10.4分鐘)時(shí)，測(cè)得純度為97.2％a/a的反式異構(gòu)體。此外，檢測(cè)出另兩個(gè)化合物，推測(cè)其為化合物T的順式異構(gòu)體。
形成化合物U的皂化反應(yīng) 皂化反應(yīng)按照與實(shí)施例1～4相似的方式進(jìn)行。在90℃，將化合物T用在乙醇(2ml/mmol)中的30％的NaOH(2ml/mmol)處理4天。2天后，用水(1ml/mmol)稀釋混合物。室溫下通過(guò)過(guò)濾然后用50％的乙醇水(2次)和乙醇(3次)洗滌分離出黃色產(chǎn)物化合物U。皂化反應(yīng)的產(chǎn)率為93％(7g規(guī)模)。1H-NMR證實(shí)所需產(chǎn)物是化合物U。檢測(cè)波長(zhǎng)為399nm時(shí)，HPLC純度為98.4％，有一個(gè)0.7％的主要雜質(zhì)。
實(shí)施例9 TSC的C18衍生物(2，4，9，13-四甲基-十四碳-2E，4E，6E，8E，10E，12E-六烯-1，14-二羧酸二鈉)的合成 TSC的C18衍生物即化合物W采用兩步連續(xù)的單偶合反應(yīng)來(lái)制備，如同本申請(qǐng)中的實(shí)施例6和8所示。第一偶合反應(yīng)按實(shí)施例8進(jìn)行，形成化合物S。在第二偶合反應(yīng)中，化合物S與化合物K反應(yīng)以形成倒數(shù)第二個(gè)中間體即化合物V。通過(guò)化合物V的皂化反應(yīng)得到最終的所需產(chǎn)物化合物W。
下式詳細(xì)列出了合成次序
形成化合物S的第一偶合反應(yīng) 如上所列的形成化合物S的第一偶合反應(yīng)已在前面的本申請(qǐng)的實(shí)施例8中進(jìn)行了描述。本實(shí)施例中所用的方法與之相同。
形成化合物V的第二偶合反應(yīng) 第二偶合反應(yīng)通過(guò)將化合物S(也稱為C15單酯)與1.5當(dāng)量的化合物K(C3溴化鏻)在100℃反應(yīng)而進(jìn)行。該偶合反應(yīng)在四氫呋喃/甲苯2∶1(0.6ml+1.2ml/mmol)中進(jìn)行，顯示出好的產(chǎn)物形成。通過(guò)在0℃過(guò)濾和甲基環(huán)己烷中的兩次洗滌步驟，分離出橙色產(chǎn)物。該步產(chǎn)率是56％(9g規(guī)模)。檢測(cè)波長(zhǎng)為369nm(14.2分鐘)時(shí)，使用HPLC測(cè)定化合物V的純度，結(jié)果為96.7％a/a的反式異構(gòu)體。此外，據(jù)推測(cè)，檢測(cè)出的主要雜質(zhì)(1.7％a/a，13.6分鐘)是化合物V的順式異構(gòu)體。
形成化合物W的皂化反應(yīng) 皂化反應(yīng)按照與前面的實(shí)施例相似的方式進(jìn)行。在90℃，將化合物V用在乙醇中(3.4ml/mmol)的30％的NaOH(2.2ml/mmol)處理4天。2天后，用水(1.1ml/mmol)稀釋混合物。通過(guò)室溫下過(guò)濾和用50％的乙醇水溶液(2次)和乙醇(3次)洗滌，分離出黃色產(chǎn)物。皂化反應(yīng)的產(chǎn)率為98％(6g規(guī)模)。1H-NMR證實(shí)所得產(chǎn)物正是所需產(chǎn)物(化合物W)。檢測(cè)波長(zhǎng)為405nm時(shí)，HPLC分析顯示化合物W的純度為99.2％。此外，發(fā)現(xiàn)有0.3％a/a的雜質(zhì)，相信其為化合物W的順式異構(gòu)體。
實(shí)施例10 TSC的C-24衍生物(4，8，13，17-四甲基-二十碳-2E，4E，6E，8E，10E，12E，14E，16E，18E-九烯-1，20二羧酸二鈉)的合成 TSC的長(zhǎng)鏈衍生物需要使用包括還原和氧化步驟的多步合成法。本實(shí)施例列舉了TSC的C24衍生物(4，8，13，17-四甲基-二十碳-2E，4E，6E，8E，10E，12E，14E，16E，18E-九烯-1，20-二羧酸二鈉)的合成。合成從化合物E開(kāi)始，其是本申請(qǐng)已經(jīng)描述的幾個(gè)實(shí)施例的起點(diǎn)。將化合物E(二乙酯)通過(guò)還原步驟轉(zhuǎn)化為化合物X(二醇)。反應(yīng)次序中的第三步是用MnO2氧化化合物X以形成化合物Y。下一步由形成化合物Z的與化合物H的偶合反應(yīng)以及形成所需產(chǎn)物化合物AA(TSC的C24衍生物)的最終的皂化步驟所組成。反應(yīng)次序如下
形成化合物E的反應(yīng) 化合物A和D之間形成化合物E的偶合反應(yīng)在實(shí)施例1～4中已進(jìn)行過(guò)描述。
形成化合物X的還原反應(yīng) 將40g的二乙酯(化合物E)懸浮于甲苯中，并用DiBAl(6當(dāng)量)在JT＝-70℃下處理?；旌衔镌贘T＝-70℃攪拌4.5小時(shí)。IPC顯示轉(zhuǎn)化完全。用2M HCl在-77℃淬滅混合物。
將混合物分成三部分。每一部分都用水和THF稀釋。有機(jī)層用鹽水洗滌3次。將合并的有機(jī)相在JT＝45℃下蒸發(fā)以得到30.63g的橙色固體，對(duì)應(yīng)產(chǎn)率為98％。再次萃取水層，又得到1.48g橙色固體。
通過(guò)上述過(guò)程，得到橙色產(chǎn)物，HPLC測(cè)定其純度為89.0％a/a。此外，檢測(cè)到一個(gè)4.8％a/a異構(gòu)體濃度的雜質(zhì)，認(rèn)為其為醛類(lèi)副反應(yīng)產(chǎn)物。
此外，進(jìn)行單獨(dú)研究以確定該還原反應(yīng)用LAH(氫化鋰鋁)或NaBH4能否進(jìn)行。在0℃在THF中進(jìn)行LAH還原(2當(dāng)量)，與此同時(shí)在4小時(shí)內(nèi)緩慢升至室溫，1g實(shí)驗(yàn)中約有80％的產(chǎn)率，但純度不如DiBAl-H方法高。但該試劑可作為對(duì)本步驟作進(jìn)一步評(píng)價(jià)時(shí)的一個(gè)選擇。相比之下，發(fā)現(xiàn)NaBH4(2當(dāng)量)在THF中的還原不適用于本步驟。此外，加入MeOH作為共溶劑未能改善該反應(yīng)。
形成化合物Y的氧化反應(yīng) 進(jìn)行了兩個(gè)實(shí)驗(yàn)來(lái)優(yōu)化形成化合物Y的氧化反應(yīng)。在第一個(gè)實(shí)驗(yàn)中，用丙酮中低濃度的化合物X(1.7％)和過(guò)量的MnO2(30當(dāng)量)來(lái)進(jìn)行該氧化反應(yīng)。反應(yīng)在0℃開(kāi)始，同時(shí)在1天的時(shí)間內(nèi)升至室溫。用硅藻土或硅膠過(guò)濾并蒸發(fā)以除去試劑，從而得到紫色固體產(chǎn)物，產(chǎn)率42～57％。檢測(cè)波長(zhǎng)為421nm時(shí)，HPLC測(cè)得產(chǎn)物的純度為87.7％a/a。如HPLC所測(cè)，該方法得到高純度產(chǎn)物。
作為進(jìn)行該氧化反應(yīng)的第二種方法，進(jìn)行了小規(guī)模的實(shí)驗(yàn)，重點(diǎn)在于結(jié)晶過(guò)程。用比率為2∶3(0.013g/ml)的丙酮/水混合物作為溶劑，得到該步驟的最佳結(jié)果。其他溶劑如二噁烷/甲基環(huán)己烷(1∶2)、THF和EtOAc沒(méi)有得到更好的結(jié)晶結(jié)果。確實(shí)改善結(jié)晶的一個(gè)參數(shù)是改變夾套溫度。將夾套溫度提高到75℃能顯著提高向產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化，并將整體反應(yīng)所需的MnO2的量從30當(dāng)量降低到10當(dāng)量。在下面的段落中對(duì)此改進(jìn)方法中所采用的步驟進(jìn)行更詳細(xì)的描述。
將5g化合物X懸浮在丙酮中，并用5當(dāng)量的MnO2在JT＝75℃下處理。混合物在75℃攪拌2天。IPC表明除了原料外還有二醛和單醛類(lèi)物質(zhì)的存在。因此，再加入5當(dāng)量的MnO2以使反應(yīng)進(jìn)一步完成。反應(yīng)時(shí)間達(dá)8小時(shí)后，大部分原料和中間體耗盡。將混合物冷卻，并依次用硅膠和硅藻土過(guò)濾。雙重過(guò)濾步驟對(duì)于除去MnO2是必要的。進(jìn)行過(guò)膜的第三次過(guò)濾步驟。總體上，用THF洗滌濾餅得到了0.7g的紅色產(chǎn)物，還得到含有痕量錳的1.95g+2.51g深褐色產(chǎn)物。反應(yīng)的總產(chǎn)量為5.16g(99.6％)。IPC的HPLC463nm時(shí)，61.0％+5.4％+19.3％(包括異構(gòu)體)。
在氧化反應(yīng)的第二種方法中，雖然產(chǎn)物產(chǎn)率高于第一種合成順序，但HPLC純度不高，在化合物Y產(chǎn)物中有殘留量的氧化錳。
應(yīng)注意，任何一種方法中，中間體(單醛)都必須消耗完全以得到好的產(chǎn)率和純度?？梢酝ㄟ^(guò)在過(guò)濾步驟前將溶劑換成熱的THF或EtOAc來(lái)除去錳殘留物。
形成化合物Z的偶合反應(yīng) C24二乙酯(化合物Z)的合成用化合物H按照與實(shí)施例5、6和8類(lèi)似的方式進(jìn)行。在100℃，將C20二醛(化合物Y)用化合物H在甲苯/四氫呋喃(2∶1，1ml和0.5ml/mmol)中處理1天。冷至室溫后，沒(méi)有觀察到沉淀。仍是透明的深紅色溶液。
然后將混合物在JT＝40～50℃蒸發(fā)至干。用MeOH(1.25mmol/mmol)處理殘?jiān)⒗鋮s到0℃。將懸浮液過(guò)濾，濾餅用甲醇洗滌兩次。JT＝50℃下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上干燥后，該步驟得到紅褐色產(chǎn)物。
該反應(yīng)的產(chǎn)率是19～22％。從母液中繼續(xù)回收產(chǎn)物能提高該產(chǎn)率。檢測(cè)波長(zhǎng)為421nm時(shí)(16.8分鐘)，測(cè)得的最佳純度是92.4％a/a(化合物Z的)反式異構(gòu)體。據(jù)信，HPLC譜中觀測(cè)到的另外的化合物是化合物Z的順式異構(gòu)體。
形成化合物AA的皂化反應(yīng) 皂化反應(yīng)按照與本申請(qǐng)前面所述相似的方式進(jìn)行。在90℃，將二乙酯(化合物Z)用在乙醇(3ml/mmol)中的30％的NaOH(3ml/mmol)處理3天。用水(6ml/mmol)和乙醇(3ml/mmol)稀釋?zhuān)谑覝叵逻^(guò)濾，用50％的乙醇水溶液(12ml/mmol)和乙醇(12ml/mmol)洗滌后，該皂化反應(yīng)的產(chǎn)率為83％(0.8g規(guī)模)。463nm時(shí)，化合物AA的HPLC純度為95.3％，此外有0.5％的順式異構(gòu)體。
實(shí)施例11 TSC的C26衍生物(2，4，8，13，17，19-六甲基-二十碳-2E，4E，6E，8E，10E，12E，14E，16E，18E-九烯-1，20-二羧酸二鈉)的合成
形成化合物Y的反應(yīng)次序 形成化合物Y所需的反應(yīng)次序已在前面的實(shí)施例10中描述過(guò)。此實(shí)施例中采用相同的次序。
形成化合物BB的偶合反應(yīng) C26二乙酯的合成從實(shí)施例9所述的化合物Y的產(chǎn)生開(kāi)始。在100℃，將化合物Y用化合物K在甲苯/四氫呋喃(2∶1，2ml和1ml/mmol)中處理1天。冷至室溫時(shí)，沒(méi)有觀察到沉淀。仍是透明的深紅色溶液。將混合物冷至0℃。過(guò)濾所得的懸浮液。隨后用MeOH洗滌濾餅三次，JT＝45℃時(shí)在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上干燥后得到深紫色固體。
該步產(chǎn)率在17～26％之間。主要原因之一是一些產(chǎn)物殘留在母液中。測(cè)定波長(zhǎng)為463nm時(shí)，由HPLC測(cè)得的最佳純度的產(chǎn)物含有83.9％a/a反式異構(gòu)體。推測(cè)所檢測(cè)到的其他化合物是化合物BB的順式異構(gòu)體。該實(shí)驗(yàn)以1.5g的規(guī)模進(jìn)行。
形成化合物CC的皂化反應(yīng) 皂化反應(yīng)按照與實(shí)施例9所述相似的方式進(jìn)行。在90℃，將二乙酯(化合物BB)用在乙醇(3ml/mmol)中的30％的NaOH(3ml/mmol)處理3天。用水(6ml/mmol)和乙醇(3ml/mmol)稀釋?zhuān)谑覝叵逻^(guò)濾，并用50％的乙醇水溶液(12ml/mmol)和乙醇(12ml/mmol)洗滌后，該皂化反應(yīng)的產(chǎn)率為84％(0.8g規(guī)模)。1H-NMR證實(shí)，得到了所需產(chǎn)物(化合物CC)。檢測(cè)波長(zhǎng)為460nm時(shí)，HPLC純度為91.5％，此外檢測(cè)到0.2％的順式異構(gòu)體。
實(shí)施例12 TSC與環(huán)糊精-甘露醇的制劑 1.配制含有等摩爾濃度的環(huán)糊精和TSC的溶液。含有超過(guò)20mg TSC/毫升溶液的溶液可以用此方法配制。首先，將環(huán)糊精加到可注射水中，然后將TSC加入到該溶液中。
2.加入d-甘露醇，以使甘露醇在溶液中的最終濃度為約20～50mg/ml。
3.可以將此溶液加入到等滲鹽水中，以將其稀釋并仍維持合適的重量克分子滲透濃度。可以將該溶液加到鹽水中，也可以將鹽水加到該溶液中。
實(shí)施例13 TSC與甘露醇/乙酸的制劑 1.配制蒸餾水中的0.01M乙酸溶液。
2.將該溶液與可注射水以合適的比例混合，以使最終乙酸濃度為0.0005M。注不要用太強(qiáng)的乙酸。例如，可以用0.0006M，但0.001M就不溶解TSC。
3.向TSC中緩慢加入0.0005 M的乙酸溶液。最大溶解度為約6～6.5mgTSC/毫升溶液。
4.向上述溶液中以50mg/ml的濃度加入d-甘露醇，以得到合適的重量克分子滲透濃度。該溶液的pH為約8-8.5。其應(yīng)該近似于等滲溶液，并因此能被直接注射到血流中。
實(shí)施例14 肺部給藥 已證實(shí)，在大鼠中，將TSC肺部給藥后，TSC能被吸收到血流中。此方法中，將大鼠插管，注入小體積的(通常為0.1ml)TSC溶液，然后充入兩次3ml的空氣。發(fā)現(xiàn)所給劑量的40～70％迅速出現(xiàn)在血流中(達(dá)到最大血漿濃度的時(shí)間少于5分鐘)。
已經(jīng)利用肺部給藥進(jìn)行了附加的研究，其中研究了注入氣管的液體體積的影響以及以配制的藥品形式使用TSC的效果。配制的藥品含有8％的γ-環(huán)糊精、2.3％的甘露醇、50mM的甘氨酸和20mg/ml的TSC，所述TSC是在無(wú)菌水中重新構(gòu)造的TSC。在這些研究中，將無(wú)菌鹽水(0.9％)作為稀釋劑加入以達(dá)到所需劑量。所有的大鼠按相同劑量(937μg/kg)給藥。
發(fā)現(xiàn)γ-環(huán)糊精的摻入似乎能提高TSC進(jìn)入體循環(huán)的吸收——具有提高血漿清除率的總體效果。并且，注射體積的提高導(dǎo)致更多的TSC吸收并持續(xù)更長(zhǎng)的時(shí)間。因此，同樣劑量的較大體積的注射能提高生物利用度。也應(yīng)注意到，已發(fā)現(xiàn)大鼠的出血性休克能通過(guò)以肺部途徑施用TSC來(lái)成功治療。
實(shí)施例15 肌內(nèi)給藥 當(dāng)簡(jiǎn)單地溶解到去離子水中時(shí)，TSC不能通過(guò)肌內(nèi)途徑吸收；但是，環(huán)糊精的加入(像在配制的藥品中那樣)使其能被吸收到血流中。將TSC與2-羥丙基-β-環(huán)糊精或γ-環(huán)糊精一起配制成制劑，并溶于水中，將其小體積(0.05ml)注入大鼠的每個(gè)大腿肌中。3347μg/千克體重(14mg 2-羥丙基-β-環(huán)糊精每千克體重)的肌內(nèi)給藥使得血漿TSC濃度峰值為4.8μg/ml，生物利用度為0.27。施用γ-環(huán)糊精和TSC時(shí)，也導(dǎo)致成功吸收到體循環(huán)中。通過(guò)以肌內(nèi)注射施用TSC，成功地對(duì)大鼠的出血性休克進(jìn)行了治療。
實(shí)施例16 經(jīng)皮給藥 已證實(shí)，在大鼠中，經(jīng)皮給藥后，TSC能被吸收到血流中。為進(jìn)行這些研究，將腹部和/或大腿外側(cè)周?chē)倪x定區(qū)域剪毛和/或刮毛以暴露出皮膚的角質(zhì)層。將配制的藥品(8％γ-環(huán)糊精、2.3％甘露醇、50mM甘氨酸和20mg/ml TSC)施用于暴露的皮膚角質(zhì)層，給藥后15～30分鐘時(shí)，血流中存在所給劑量的0.25～0.5％。
實(shí)施例17 口服給藥 用PE-50管將配制的TSC制劑遞送至大鼠的胃中，然后測(cè)試血漿濃度。大鼠在每次實(shí)驗(yàn)前禁食24小時(shí)。隨意飲水，使用帶有金屬網(wǎng)底層的籠子來(lái)防止食糞。一次研究中，對(duì)大鼠施用TSC后允許隨意進(jìn)食；另一次研究中，對(duì)大鼠施用TSC后不許進(jìn)食。兩組所給的TSC的劑量都是55mg/kg，發(fā)現(xiàn)給藥后15-30分鐘時(shí)，血流中存在所述劑量的1～2％。
實(shí)施例18 γ-環(huán)糊精的內(nèi)毒素的去除 從廠商處得到的市售藥用級(jí)別的環(huán)糊精具有不適于靜脈注射的內(nèi)毒素水平。為了在用于靜脈注射的TSC制劑中使用環(huán)糊精，必須降低內(nèi)毒素水平。開(kāi)發(fā)了將環(huán)糊精溶液通過(guò)內(nèi)毒素濾除器(Millipore，0.22微米，Durapore過(guò)濾器)多次過(guò)濾的方法，該方法能使內(nèi)毒素水平下降約10～30倍。環(huán)糊精的回收率達(dá)到90～100％。對(duì)8％γ-環(huán)糊精溶液使用該方法所得的結(jié)果的實(shí)例列于下表 實(shí)施例19 凍干法 制備含水量低于3％的塊狀物的凍干過(guò)程如下 稀釋劑 重量克分子滲透濃度經(jīng)甘露醇調(diào)節(jié)的甘氨酸緩沖液稀釋劑(如，含2～4％甘露醇的50mM甘氨酸緩沖液)可用作稀釋劑。
實(shí)施例20 放射敏化性 在無(wú)胸腺的雄性小鼠(購(gòu)買(mǎi)時(shí)6-7周，使用前需要生長(zhǎng)2-3周)的后腿上生長(zhǎng)經(jīng)測(cè)定為0.25～0.35cm3之間的HCT116人結(jié)腸癌腫瘤。因?yàn)樵诜派渲委熯^(guò)程中患者一般不進(jìn)行麻醉(麻醉會(huì)減少流向腫瘤的血液，使其更加缺氧)，該研究用非麻醉動(dòng)物進(jìn)行。
使用6個(gè)研究組，每組5只小鼠(共30只小鼠)，稱為研究組1～6。對(duì)該研究中的所有小鼠連續(xù)5天靜脈注射TSC劑量或者鹽水對(duì)照物。如下所示，研究組1、2和3接受TSC劑量A、B和C，研究B中，三個(gè)劑量分別對(duì)應(yīng)為0.07、0.14和0.28mg/kg，研究A中三個(gè)劑量分別對(duì)應(yīng)為1.35、0.54和0.18mg/kg。
組4注射鹽水對(duì)照物。連續(xù)5天的每一次注射后45分鐘時(shí)，研究組1～4的腫瘤接受2 Gy放射。研究組5僅接受TSC，研究組6僅接受鹽水，研究組5和6都不接受放射。前四周內(nèi)或直到腫瘤達(dá)到開(kāi)始治療時(shí)體積的四倍時(shí)，每周對(duì)所有研究組中的腫瘤體積進(jìn)行測(cè)量。這些測(cè)定的結(jié)果列于下面 研究A結(jié)果 腫瘤生長(zhǎng)
注當(dāng)對(duì)照組的40％死亡時(shí)，數(shù)據(jù)終止。
*＝與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 研究B結(jié)果 放射研究
研究A的最佳劑量是0.18mg/kg，對(duì)于研究B，0.07和0.14mg/kg劑量作用相同。也研究了單獨(dú)使用TSC的情況。結(jié)果列于下面，連同單獨(dú)放射的效果一起(也列在上圖中)。可以看出，單獨(dú)使用TSC絲毫不能影響腫瘤的生長(zhǎng)。
分別施用TSC和進(jìn)行放射
對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)顯而易見(jiàn)的是，可以在不背離所公開(kāi)的發(fā)明的情況下對(duì)本發(fā)明的化合物和組合物以及相關(guān)的方法進(jìn)行許多修改和添加。
權(quán)利要求
1.一種化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)
藏花酸二乙酯
所述化合物為2，6，11，15-四甲基-十六碳-2E，4E，6E，8E，10E，12E，14E-七烯-1，16-二羧酸二乙酯。
2.一種化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)
所述化合物為2，4，9-三甲基-十二碳-2E，4E，6E，8E，10E-五烯-1，12-二羧酸二乙酯。
3.一種化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)
所述化合物為2，4，9-三甲基十二碳-2E，4E，6E，8E，10E-五烯-1，12-二羧酸二鈉。
4.一種化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)
所述化合物為4，9-二甲基-十二碳-2E，4E，6E，8E，10E-五烯-1，12-二羧酸二乙酯。
5.一種化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)
所述化合物為2，6，11-三甲基-十四碳-2E，4E，6E，8E，10E，12E-六烯-1，14-二羧酸二乙酯。
6.一種化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)
所述化合物為2，4，9，13-四甲基-十四碳-2E，4E，6E，8E，10E，12E-六烯-1，14-二羧酸二乙酯。
7.一種化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)
所述化合物為2，4，9，13-四甲基十四碳-2E，4E，6E，8E，10E，12E-六烯-1，14-二羧酸二鈉。
8.一種組合物，所述組合物包含反式類(lèi)胡蘿卜素和環(huán)糊精。
9.如權(quán)利要求8所述的組合物，其中，所述反式類(lèi)胡蘿卜素是藏花酸。
10.如權(quán)利要求8所述的組合物，其中，所述反式類(lèi)胡蘿卜素是反式類(lèi)胡蘿卜素鹽。
11.如權(quán)利要求10所述的組合物，其中，所述反式類(lèi)胡蘿卜素鹽是反式藏花酸鈉。
12.如權(quán)利要求8所述的組合物，其中，所述反式類(lèi)胡蘿卜素是反式類(lèi)胡蘿卜素二酯、反式類(lèi)胡蘿卜素醇或反式類(lèi)胡蘿卜素酸。
13.如權(quán)利要求8所述的組合物，其中，所述反式類(lèi)胡蘿卜素是藏花素。
14.如權(quán)利要求8所述的組合物，其中，所述環(huán)糊精是α-環(huán)糊精。
15.如權(quán)利要求8所述的組合物，其中，所述環(huán)糊精是β-環(huán)糊精。
16.如權(quán)利要求8所述的組合物，其中，所述環(huán)糊精是2-羥丙基-β-環(huán)糊精。
17.如權(quán)利要求8所述的組合物，其中，所述環(huán)糊精是γ-環(huán)糊精。
18.如權(quán)利要求8所述的組合物，其中，所述環(huán)糊精是2-羥丙基-γ-環(huán)糊精。
19.如權(quán)利要求8所述的組合物，所述組合物還包含甘露醇。
20.如權(quán)利要求8所述的組合物，所述組合物還包含鹽水。
21.如權(quán)利要求8所述的組合物，所述組合物還包含可調(diào)節(jié)pH的化合物。
22.如權(quán)利要求21所述的組合物，其中，所述的可調(diào)節(jié)pH的化合物選自由乙酸、檸檬酸、碳酸氫鹽或甘氨酸所組成的組。
23.如權(quán)利要求8所述的組合物，所述組合物是凍干的。
24.雙極性反式類(lèi)胡蘿卜素的凍干組合物。
25.如權(quán)利要求24所述的組合物，其中，所述雙極性反式類(lèi)胡蘿卜素是反式藏花酸鈉。
26.一種合成具有下式的雙極性反式類(lèi)胡蘿卜素鹽化合物的方法
YZ-TCRO-ZY
其中
Y＝陽(yáng)離子
Z＝與所述陽(yáng)離子相連的極性基團(tuán)，和
TCRO＝反式類(lèi)胡蘿卜素骨架，
所述方法包含以下步驟
偶合步驟，該偶合步驟使含有共軛碳-碳雙鍵的對(duì)稱二醛與維蒂希試劑發(fā)生偶合反應(yīng)；和
皂化步驟，該皂化步驟將所述偶合步驟的產(chǎn)物皂化。
27.如權(quán)利要求26所述的方法，其中，使所述的偶合步驟的產(chǎn)物與另一種維蒂希試劑反應(yīng)。
28.如權(quán)利要求26所述的方法，其中，所述的含有共軛碳-碳雙鍵的對(duì)稱二醛是C10二醛或C20二醛。
29.如權(quán)利要求26所述的方法，其中，所述偶合反應(yīng)在pH中性溶劑體系中進(jìn)行。
30.如權(quán)利要求29所述的方法，其中，所述的pH中性溶劑體系是四氫呋喃溶劑體系。
31.如權(quán)利要求29所述的方法，其中，所述的pH中性溶劑體系包括甲苯，或二氯甲烷/氫氧化鈉和乙醇鈉或甲醇鈉。
32.如權(quán)利要求26所述的方法，其中，所述維蒂希試劑是一種三苯基正膦。
33.如權(quán)利要求32所述的方法，其中，所述維蒂希試劑是[3-甲氧羰基-2-亞丁烯-1-基]三苯基正膦。
34.如權(quán)利要求26所述的方法，其中，所述維蒂希試劑是一種三苯基溴化鏻或三苯基氯化鏻或兩者的混合物。
35.如權(quán)利要求34所述的方法，其中，所述維蒂希試劑是D(2-(乙氧羰基)-2-丁烯-4-基-三苯基-溴化鏻)。
36.如權(quán)利要求26所述的方法，其中，所述維蒂希試劑是C2、C3、C5、C10或C15維蒂希酯鹵化物。
37.如權(quán)利要求26所述的方法，其中，所述維蒂希試劑是C2、C3或C5膦酰酯。
38.如權(quán)利要求37所述的方法，其中，所述膦酰酯是三苯基膦酰乙酸酯。
39.如權(quán)利要求26所述的方法，其中，所述偶合步驟是使用四氫呋喃作為溶劑體系進(jìn)行的。
40.如權(quán)利要求26所述的方法，其中，在所述偶合步驟之后是分離所述偶合反應(yīng)的目標(biāo)產(chǎn)物的步驟。
41.如權(quán)利要求26所述的方法，其中，所述產(chǎn)物是使用NaOH、LiOH、KOH的溶液并以甲醇、乙醇或異丙醇作為溶劑進(jìn)行皂化。
42.如權(quán)利要求26所述的方法，其中，所述的偶合步驟的產(chǎn)物使用NaOH和乙醇進(jìn)行皂化。
43.如權(quán)利要求26所述的方法，其中，所述的偶合步驟的產(chǎn)物使用NaOH和甲醇的溶液進(jìn)行皂化。
44.如權(quán)利要求26所述的方法，其中，對(duì)所述偶合步驟的產(chǎn)物進(jìn)行皂化的皂化步驟包括以下步驟
a)將所述偶合產(chǎn)物溶于乙醇中，和
b)將步驟a)的溶液與堿混合。
45.如權(quán)利要求44所述的方法，其中，所述堿選自由NaOH、KOH和LiOH所組成的組。
46.如權(quán)利要求44所述的方法，其中，所述偶合產(chǎn)物使用乙醇和NaOH進(jìn)行皂化。
47.如權(quán)利要求26所述的方法，其中，在所述皂化步驟之后，用乙醇洗滌目標(biāo)產(chǎn)物。
48.如權(quán)利要求26所述的方法，其中，在所述皂化步驟之后，用水洗滌目標(biāo)產(chǎn)物。
49.如權(quán)利要求26所述的方法，其中，目標(biāo)產(chǎn)物是反式藏花酸鈉。
50.一種合成具有下式的雙極性反式類(lèi)胡蘿卜素化合物的方法
YZ-TCRO-ZY
其中
Y＝H
Z＝與所述H相連的極性基團(tuán)，和
TCRO＝反式類(lèi)胡蘿卜素骨架，
所述方法包含以下步驟
偶合步驟，該偶合步驟使含有共軛碳-碳雙鍵的對(duì)稱二醛與維蒂希試劑發(fā)生偶合反應(yīng)。
51.如權(quán)利要求50所述的方法，其中，所述偶合反應(yīng)在pH中性溶劑體系中進(jìn)行。
52.如權(quán)利要求51所述的方法，其中，所述的pH中性溶劑體系是四氫呋喃溶劑體系。
53.如權(quán)利要求51所述的方法，其中，所述的pH中性溶劑體系包括甲苯，或二氯甲烷/氫氧化鈉和乙醇鈉或甲醇鈉。
54.如權(quán)利要求50所述的方法，其中，所述維蒂希試劑是一種三苯基正膦。
55.如權(quán)利要求54所述的方法，其中，所述維蒂希試劑是[3-甲氧羰基-2-亞丁烯-1-基]三苯基正膦。
56.如權(quán)利要求50所述的方法，其中，所述維蒂希試劑是一種三苯基溴化鏻或三苯基氯化鏻或兩者的混合物。
57.如權(quán)利要求50所述的方法，其中，所述維蒂希試劑是C5維蒂希酯鹵化物。
58.如權(quán)利要求50所述的方法，其中，所述維蒂希試劑是D(2-(乙氧羰基)-2-丁烯-4-基-三苯基-溴化鏻)。
59.如權(quán)利要求50所述的方法，其中，所述偶合步驟是使用四氫呋喃作為溶劑體系進(jìn)行的。
60.如權(quán)利要求50所述的方法，其中，在所述偶合步驟之后是分離所述偶合反應(yīng)的目標(biāo)產(chǎn)物的步驟。
61.如權(quán)利要求60所述的方法，其中，用乙醇洗滌所述的目標(biāo)產(chǎn)物。
62.如權(quán)利要求60所述的方法，其中，用水洗滌所述的目標(biāo)產(chǎn)物。
63.如權(quán)利要求50所述的方法，其中，目標(biāo)產(chǎn)物是藏花酸。
64.一種治療哺乳動(dòng)物的腫瘤的方法，所述方法包括向所述哺乳動(dòng)物施用
i)反式類(lèi)胡蘿卜素，和
ii)對(duì)所述腫瘤的放射或化學(xué)療法，
其中，在所述放射或化學(xué)療法之前、過(guò)程中或之后施用所述反式
類(lèi)胡蘿卜素。
65.如權(quán)利要求64所述的方法，其中，所述放射以約6000-6500 cGy的劑量施用數(shù)周。
66.如權(quán)利要求64所述的方法，其中，所述腫瘤選自由膠質(zhì)細(xì)胞瘤、鱗狀細(xì)胞癌、黑素瘤、淋巴瘤、肉瘤、類(lèi)肉瘤、骨肉瘤、與皮膚癌有關(guān)的腫瘤、乳癌、頭部和頸部癌、婦科癌、泌尿和男性生殖器癌、膀胱癌、前列腺癌、骨癌、內(nèi)分泌腺癌、消化道癌(如結(jié)腸癌)、主消化腺/器官(如胃、肝、胰腺)癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌(包括腦癌，如神經(jīng)膠質(zhì)瘤)和肺癌所組成的組。
67.如權(quán)利要求64所述的方法，其中，所述腫瘤是腦瘤。
68.如權(quán)利要求64所述的方法，其中，所述反式類(lèi)胡蘿卜素是反式藏花酸鈉。
69.如權(quán)利要求64所述的方法，其中，在每次放射或化學(xué)療法劑量給藥之前，施用0.02～2mg/kg的反式藏花酸鈉，優(yōu)選施用0.05～1mg/kg的反式藏花酸鈉。
70.如權(quán)利要求64所述的方法，其中，所述哺乳動(dòng)物是人。
71.一種治療哺乳動(dòng)物的高血壓癥的方法，所述方法包括向需要治療的哺乳動(dòng)物施用足以降低高血壓的量的反式類(lèi)胡蘿卜素。
72.一種治療哺乳動(dòng)物的心室纖維性顫動(dòng)或心動(dòng)過(guò)速的方法，所述方法包括向需要治療的哺乳動(dòng)物施用足以停止所述心室纖維性顫動(dòng)或心動(dòng)過(guò)速的量的反式類(lèi)胡蘿卜素。
73.一種化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)
74.一種化合物，所述化合物選自由反式藏花酸鉀和反式藏花酸鋰所組成的組。
75.一種化合物，所述化合物選自由化合物AA和CC所組成的組。
全文摘要
本發(fā)明涉及反式類(lèi)胡蘿卜素、其合成、制劑和用途。本發(fā)明涉及反式類(lèi)胡蘿卜素化合物和其鹽以及其組合物、制備其的方法和其用途。這些化合物可用于提高包括人類(lèi)在內(nèi)的哺乳動(dòng)物的紅細(xì)胞和體組織間的氧的擴(kuò)散能力。
文檔編號(hào)C07C59/185GK101180257SQ200680013663
公開(kāi)日2008年5月14日 申請(qǐng)日期2006年2月24日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月24日
發(fā)明者約翰·L·蓋納, 馬克·蘭茨 申請(qǐng)人:擴(kuò)散藥品有限公司