專利名稱：射干總黃酮提取物及其制備方法和其在藥物制備中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種射干提取物，尤其涉及一種射干總黃酮提取物。
本發(fā)明還涉及該提取物的制備方法。
本發(fā)明還涉及該提取物在制備預(yù)防和/或治療骨質(zhì)疏松癥藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明還涉及該提取物在制備預(yù)防和/或治療心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明還涉及該提取物在制備抗炎藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明還涉及包含該提取物的藥物組合物。
背景技術(shù)：
骨質(zhì)疏松癥(有時(shí)也簡(jiǎn)稱為骨質(zhì)疏松)是全身骨骼成分減少的一種骨骼疾病，主要表現(xiàn)為骨組織內(nèi)單位體積中骨量減少，骨礦物質(zhì)和骨基質(zhì)隨年齡的增加(或婦女絕經(jīng)后)等比例的減少，骨組織的顯微結(jié)構(gòu)發(fā)生改變而致其骨組織的正常荷載功能發(fā)生變化。骨質(zhì)疏松在臨床上表現(xiàn)為腰背疼、病理性骨折、椎體變形、體態(tài)變形致“龜背”出現(xiàn)，伴有周身骨骼的疼痛等癥狀。
原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥占骨質(zhì)疏松癥的90％。它是老年人的一種常見病，一種全身性骨病。主要表現(xiàn)是骨組織的礦物質(zhì)和骨基質(zhì)均有減少、骨量低和骨的微細(xì)結(jié)構(gòu)有破壞，導(dǎo)致骨的脆性增加和容易發(fā)生骨折。女性較男性多見，常見于絕經(jīng)后婦女和老年人，在輕微外傷或無(wú)外傷的情況下都容易發(fā)生骨折，75歲以上的婦女骨折發(fā)生率高達(dá)80％以上。
骨質(zhì)疏松癥是骨骼代謝異常的疾病，它的產(chǎn)生原因至今尚未明確，但醫(yī)學(xué)界認(rèn)為與下列因素有關(guān)內(nèi)分泌因素，其中雌激素降低是骨質(zhì)疏松癥發(fā)生的主要原因，此外與營(yíng)養(yǎng)、遺傳、營(yíng)養(yǎng)狀況、生活方式等密切相關(guān)。
目前臨床上用于治療骨質(zhì)疏松癥的主要藥物有維生素D類藥物、甲狀旁腺素(PHT)、氟化物、同化激素、雙磷酸鹽類等。這些藥物長(zhǎng)期應(yīng)用均產(chǎn)生嚴(yán)重的毒副作用，同時(shí)一些患者因禁忌癥不能應(yīng)用這些藥物，因此研制安全、有效地治療骨質(zhì)疏松癥的天然藥物具有其重要的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
心腦血管疾病是指心臟和動(dòng)脈血管發(fā)生硬化而引起心臟和腦的缺血或出血的疾病。其主要包括心肌梗塞、心絞痛、高血壓、動(dòng)脈硬化、腦出血、腦血栓、高脂血癥及冠心病等，發(fā)病率和死亡率已居各種類疾病首位，被喻為人類第一殺手。由于癥狀不明顯，發(fā)病突然，直接損害重要器官，危及生命，又稱為“無(wú)聲殺手”。
心血管疾病主要為缺血性心血管疾病，其是指心臟和動(dòng)脈血管發(fā)生硬化而引起心臟的疾病，主要包括心肌梗塞、心絞痛、高血壓、動(dòng)脈硬化及冠心病、心率失常、心力衰竭等。
腦血管疾病多指腦動(dòng)脈硬化引起的腦組織缺血、壞死(腦梗死)及腦部病變的血管破裂造成腦出血，統(tǒng)稱腦卒中，腦卒中包括缺血性腦卒中和出血性腦卒中(即腦出血)。
腦血管疾病和心血管疾病之間在病理學(xué)方面存在一定的相關(guān)性系，但二者的疾病、癥狀、病因、治療方法存在很大差異。對(duì)心血管作用的藥物一般直接作用于心臟和血管，以改善心臟負(fù)荷、心肌供血、調(diào)整血流動(dòng)力學(xué)特征為藥理目標(biāo)，而治療腦血管病藥物一般選擇性作用周圍血管，尤其是選擇性作用于腦血管，以改善腦局部供血為藥理學(xué)目標(biāo)，或者以神經(jīng)原保護(hù)等作為藥理目標(biāo)，而非直接作用于血管。
植物雌激素，能有效治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥，改善原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥和其它代謝性骨疾病。它可通過(guò)抑制破骨母細(xì)胞的增殖、分化、成熟和破骨細(xì)胞的活性而發(fā)揮抗骨吸收作用；同時(shí)刺激成骨細(xì)胞的前體和成骨細(xì)胞對(duì)PTH反應(yīng)性的調(diào)節(jié)發(fā)揮作用，加強(qiáng)成骨細(xì)胞的活性；維持成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞活性間的動(dòng)態(tài)平衡，有效的防治骨質(zhì)疏松癥。
射干為鳶尾科(Iridaceae)射干屬植物射干(Belamcanda chinensis(L.)DC.)的干燥根莖，為常用正品中藥，主產(chǎn)于河南、湖北、浙江、安徽、江蘇等省。
鳶尾為鳶尾科(Iridaceae)鳶尾屬植物鳶尾(Iris tectorum Maxim.)的干燥根莖，為西南地區(qū)地方習(xí)用射干品種，主產(chǎn)于四川、云南、貴州等省。
在本草著作中，從《唐本草》至宋代《圖經(jīng)》，所述之射干均為今《中國(guó)藥典》所載之射干(Belamcanda chinensis(L.)DC.)，而其它各時(shí)期本草所收載的射干多為鳶尾(Iris tectorium Maxim.)的根莖。
現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，射干具有抗炎、解熱、抗氧化、興奮咽喉粘膜以及促進(jìn)唾液分泌等作用。
鳶尾總甙含鳶尾甙元、鳶尾甙、染料木素等。已有研究表明，鳶尾甙元、染料木素等與雌激素受體結(jié)合，影響成骨細(xì)胞的活性以及骨基質(zhì)的產(chǎn)生、分泌和骨礦化的過(guò)程(Kaiko Morito，Tohru Aomori，Toshiharu Hirose etc.，Interactionof phytoestrogens with estrogen receptors αand β，Biol.pharm.Bull.，251，48-52，2002)。
中國(guó)專利申請(qǐng)99804123.8公開了用鳶尾科和總狀花升麻(Cimicifugaracemosa(L.)Nutt.)的提取物和鳶尾黃素作為一種雌激素型對(duì)器官有選擇性而無(wú)趨子宮作用的藥物。該發(fā)明涉及用鳶尾科和總狀花升麻的提取物和鳶尾黃素作為一種雌激素型對(duì)器官有選擇性的藥物，用于選擇性治療和/或預(yù)防心血管疾病，特別是動(dòng)脈粥樣硬化、骨質(zhì)疏松和更年期疾病，例如預(yù)防或減輕熱潮紅，但該專利對(duì)鳶尾科提取物的制備方法未作詳細(xì)說(shuō)明及其所得提取物的組分也未作定量檢測(cè)，因此其所述提取物的化合物組成不清晰。
盡管已知射干所含部分異黃酮類化合物具有植物雌激素活性，但是，對(duì)于植物提取物而言，此類成分是共存的，并且存在其它已知和未知成分。目前，此種情況下的植物提取物的活性作用以及與各單體成分之間的關(guān)系尚不明了。
對(duì)于射干提取物的提取工藝，現(xiàn)有文獻(xiàn)涉及到乙醇提取條件的研究(吉文亮，秦民堅(jiān)等，中藥材，2000，23(8)486-487)，但研究?jī)H涉及采用乙醇進(jìn)行初步提取，即未見對(duì)該提取物進(jìn)行進(jìn)一步精制或處理。
中國(guó)專利申請(qǐng)99804123.8提到了用有機(jī)溶劑或超臨界CO2提取射干提取物。由于有機(jī)溶劑范圍極廣，不同溶劑提取所得產(chǎn)物的化學(xué)組成、得率以及生物活性均可能存在極大差異?，F(xiàn)有技術(shù)中，超臨界CO2的提取方法一般是提取低極性成分，而射干或鳶尾中所含異黃酮類成分以極性成分鳶尾甙為主。因此，采用此技術(shù)提取含鳶尾甙提取物的價(jià)值仍待考察。
現(xiàn)有文獻(xiàn)中均未見涉及射干和/或鳶尾溶劑提取物的進(jìn)一步精制的工藝研究。鑒于射干中所含非黃酮類成分如鳶尾醛(具有刺激咽喉黏膜作用)等三萜類化合物，而此類成分存在于多數(shù)有機(jī)溶劑提取物中，因此，對(duì)射干和/或鳶尾溶劑提取物進(jìn)行進(jìn)一步精制是必要的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種射干總黃酮提取物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供該射干總黃酮提取物的制備方法。
本發(fā)明的再一個(gè)目的在于提供該提取物在制備預(yù)防和/或治療骨質(zhì)疏松癥藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的又一個(gè)目的在于提供該提取物在制備預(yù)防和/或治療心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的又一個(gè)目的在于提供該提取物在制備抗炎藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的還一個(gè)目的在于提供包含該提取物的藥物組合物。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種射干總黃酮提取物。該提取物是從射干或鳶尾中提取而得，總黃酮的含量為55％～90％重量；其中含有鳶尾甙(tectoridin)；以及選自野鳶尾甙(iridin)、鳶尾甙元(tectorigenin)、野鳶尾黃素(irigenin)和次野鳶尾黃素(irisflorentin)的一種或多種；鳶尾甙的含量為10％～50％重量。
其中，所述鳶尾甙(中文又稱射干苷、鳶尾苷)即Tectoridin，4’，5-二羥基-6-甲氧基異黃酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖甙(4’，5-dihydroxy-7-(β-D-gluco-pyranosyloxy)-6-methoxy-isoflavone[CAS登錄號(hào)611-40-5])，其分子式C22H22O11，分子量462。
可采用紫外分光光度法，以鳶尾甙為對(duì)照品，在266nm測(cè)定射干總黃酮提取物中總黃酮的含量。
當(dāng)色譜條件為C18色譜柱，規(guī)格為4×250mm，柱溫30℃，流動(dòng)相為水和乙腈，梯度洗脫，洗脫程序?yàn)?min時(shí)，水∶乙腈為88∶12；20min時(shí)，水∶乙腈為72∶28，60min時(shí)，水∶乙腈為40∶60，流速為1ml/分鐘，用高效液相色譜法檢測(cè)，在標(biāo)準(zhǔn)品鳶尾甙的保留時(shí)間為12.3分鐘時(shí)，野鳶尾甙的保留時(shí)間為13.8±0.2分鐘，和/或鳶尾甙元的保留時(shí)間為22.3±0.2分鐘，和/或野鳶尾黃素的保留時(shí)間為24.1±0.2分鐘，和/或次野鳶尾黃素的保留時(shí)間為31.3±0.2分鐘。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方式
中，使用Hypersil BDS C18填料常規(guī)色譜柱進(jìn)行檢測(cè)。
進(jìn)一步的，所述總黃酮的含量為55％～80％重量；更進(jìn)一步的，所述總黃酮的含量為55％～70％重量。
進(jìn)一步的，所述鳶尾甙的含量為10％～40％重量；更進(jìn)一步的，所述鳶尾甙的含量為10％～30％重量。
優(yōu)選的，所述射干總黃酮提取物含有鳶尾甙；以及選自野鳶尾甙、鳶尾甙元、野鳶尾黃素和次野鳶尾黃素的至少兩種。
更優(yōu)選的，所述射干總黃酮提取物含有鳶尾甙；以及選自野鳶尾甙、鳶尾甙元、野鳶尾黃素和次野鳶尾黃素的至少三種。
再優(yōu)選的，所述射干總黃酮提取物同時(shí)含有鳶尾甙、野鳶尾甙、鳶尾甙元、野鳶尾黃素和次野鳶尾黃素。
最優(yōu)選的，鳶尾甙∶野鳶尾甙∶鳶尾甙元∶野鳶尾黃素∶次野鳶尾黃素的重量比為10～50∶2～28∶1～17∶2～24∶0.5～13。
本發(fā)明所述的射干總黃酮提取物可以通過(guò)下述方法制備得到1)藥材用含水乙醇提??；2)減壓濃縮步驟1)所得提取液；3)以水稀釋濃縮液，并作澄清處理，取上清液；4)取上清液，過(guò)大孔樹脂柱吸附，棄流出液；然后用水洗滌所述吸附柱，棄水洗液；之后，采用乙醇洗脫吸附柱并收集該乙醇洗脫液；5)濃縮、干燥乙醇洗脫液，得到射干總黃酮提取物。
進(jìn)一步的，本發(fā)明所述的射干總黃酮提取物可以通過(guò)下述方法制備得到1)藥材用50～80％的乙醇水溶液熱回流提取2～3次，合并提取液；2)減壓濃縮步驟1)所得提取液至原藥材的6～10倍體積；3)以3～5倍體積的水稀釋濃縮液，并作澄清處理，取上清液；4)取上清液，過(guò)大孔樹脂柱吸附，棄流出液；然后用1～5BV的水，以0.5～2.5BV/小時(shí)的流速洗滌所述吸附柱，棄水洗液；之后，采用50～90％的乙醇，以0.5～2.5BV/小時(shí)的流速洗脫吸附柱，收集該乙醇洗脫液；5)濃縮、干燥乙醇洗脫液，得到射干總黃酮提取物。
本發(fā)明所述的“射干總黃酮提取物”，是指采用任何方法從鳶尾科(Iridaceae)植物射干(Belamcanda chinensis(L.)DC.)或鳶尾(Iris tectorumMaxim.)，特別是從射干或鳶尾的根莖中提取獲得的，以總黃酮類化學(xué)成分作為主要組分的提取物。因此，該射干總黃酮提取物為所含各個(gè)活性成分協(xié)同起效的混合物，它不同于活性單體，它的藥效也不同于各個(gè)活性成分藥效的簡(jiǎn)單加和。本發(fā)明所述的提取物中，總黃酮的含量≥55％，本領(lǐng)域技術(shù)人員通常將這樣的提取物稱為有效部位。在本說(shuō)明書中為了敘述方便，有時(shí)將“射干總黃酮提取物”簡(jiǎn)稱為“射干總黃酮”。
本發(fā)明所用的射干和鳶尾同屬于鳶尾科，具有相似的成分和性質(zhì)，因此均可用于本發(fā)明，以制備上述射干總黃酮提取物。
本發(fā)明采用高效液相色譜法、高效液相色譜—電噴霧質(zhì)譜法和薄層色譜對(duì)所述射干總黃酮提取物進(jìn)行了含量控制、指紋圖譜特征和非黃酮類雜質(zhì)分析的研究。
1、含量控制采用紫外分光光度法和高效液相色譜法(HPLC)分別測(cè)定由實(shí)施例1和2制備得到的射干總黃酮提取物中總黃酮的含量和鳶尾甙的含量。以鳶尾甙為對(duì)照品，在266nm進(jìn)行檢測(cè)。分析測(cè)定結(jié)果表明其總黃酮的含量為55～90％(重量比)；鳶尾甙的含量為10～50％(重量比)。
2、指紋圖譜采用高效液相色譜—電噴霧質(zhì)譜法，對(duì)射干總黃酮的主要成分進(jìn)行了分析和鑒定，確定其黃酮主要為鳶尾甙、鳶尾甙元、野鳶尾甙、野鳶尾黃素和次野鳶尾黃素。
以高效液相分析方法檢測(cè)，以峰面積歸一法計(jì)算，其相對(duì)峰比例分別為，鳶尾甙∶野鳶尾甙∶鳶尾甙元∶野鳶尾黃素∶次野鳶尾黃素為∶1∶0.12～0.5∶0.10～0.3∶0.20～0.6∶0.1～0.3。
由此推算，鳶尾甙∶野鳶尾甙∶鳶尾甙元∶野鳶尾黃素∶次野鳶尾黃素的重量比為10～50∶2～28∶1～17∶2～24∶0.5～13。
3、雜質(zhì)分析采用薄層色譜法，對(duì)射干總黃酮提取物中所含雜質(zhì)進(jìn)行分析，結(jié)果表明其不含有射干或鳶尾藥材中包含的致敏物質(zhì)鳶尾醛。
根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了所述射干總黃酮提取物的制備工藝。本發(fā)明首次對(duì)射干總黃酮進(jìn)行大孔樹脂吸附制備工藝的研究，提供了一種射干總黃酮的大孔樹脂吸附純化方法，該純化方法是將射干液經(jīng)上樹脂柱、洗脫、收集洗脫液、濃縮、干燥，獲得純化的射干總黃酮，從而有效地富集了總黃酮，并去除了雜質(zhì)如鳶尾醛等。
該提取物的制備方法包括以下步驟1)藥材用含水乙醇提?。?)減壓濃縮步驟1)所得提取液；
3)以水稀釋濃縮液，并作澄清處理，取上清液；4)取上清液，過(guò)大孔樹脂柱吸附，棄流出液；然后用水洗滌所述吸附柱，棄水洗液；之后，采用乙醇洗脫吸附柱并收集該乙醇洗脫液；5)濃縮、干燥乙醇洗脫液，得到射干總黃酮提取物。
其中步驟1中，所述含水乙醇提取是指以含水乙醇作溶劑，采用本領(lǐng)域內(nèi)已知的常規(guī)技術(shù)提取，例如，熱回流提取、滲漉法提取、連續(xù)逆流提取等，其中，所述含水乙醇是指10倍體積(與藥材重量比)濃度為50～80％的乙醇水溶液。舉例來(lái)說(shuō)，對(duì)于熱回流提取，其溶劑用量為藥材重量的8～10倍(溶劑體積/藥材重量，V/W)；提取次數(shù)為2～3次；加熱溫度可以為60～85℃。
步驟2中，提取液濃縮后，其體積(L)優(yōu)選為原藥材(kg)的6～10倍體積。
步驟3中，濃縮液優(yōu)選以加3～5倍體積的水稀釋。
步驟4中，吸附柱吸附提取液后，優(yōu)選用1～5BV(柱床體積)的水洗滌，洗脫液流速優(yōu)選為0.5～2.5BV/hr；洗脫乙醇優(yōu)選采用50～90％乙醇水溶液，洗脫液流速優(yōu)選為0.5～2.5BV/hr。
所述大孔樹脂通常為苯乙烯型共聚體的含有酯基或氰基的中等極性吸附樹脂，其結(jié)構(gòu)為大孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，例如D-101大孔樹脂、SIPI-40大孔樹脂、SIPI-21大孔樹脂或SIPI-8大孔樹脂等。
在上樣前，應(yīng)當(dāng)對(duì)大孔樹脂進(jìn)行前處理，以防止有效成分從廢液中流失。在樹脂前處理時(shí)，通常先用5％HCl洗脫，后用純化水洗至中性，再用2％NaOH洗脫，后用純化水洗至中性，連續(xù)生產(chǎn)時(shí)，用95％乙醇洗柱，后用純化水洗至醇為零度，即可再次使用。
步驟5中，得到的射干總黃酮提取物進(jìn)行干燥處理，得到干燥形式的提取物，所用的干燥方法包括真空干燥、噴霧干燥和冷凍干燥等。
因此，進(jìn)一步的，本發(fā)明所述的射干總黃酮提取物可以通過(guò)下述方法制備得到1)藥材用50～80％的乙醇水溶液熱回流提取2～3次，合并提取液；2)減壓濃縮步驟1)所得提取液至原藥材的6～10倍體積；3)以3～5倍體積的水稀釋濃縮液，并作澄清處理，取上清液；
4)取上清液，過(guò)大孔樹脂柱吸附，棄流出液；然后用1～5BV的水，以0.5～2.5BV/小時(shí)的流速洗滌所述吸附柱，棄水洗液；之后，采用50～90％的乙醇，以0.5～2.5BV/小時(shí)的流速洗脫吸附柱，收集該乙醇洗脫液；5)濃縮、干燥乙醇洗脫液，得到射干總黃酮提取物。
上述BV(Bed Volum)為樹脂柱裝載的樹脂后的柱床體積。樹脂柱的處理能力與它的樹脂裝載量成正比。洗脫液的流量和速率以BV或BV/hr為計(jì)算單位。
在采用上述工藝制備提取物之前，通常需要先將該射干藥材進(jìn)行前處理，即將射干粉碎，洗凈，曬干，粉碎，過(guò)篩。
根據(jù)本發(fā)明的再一個(gè)方面，本發(fā)明提供了所述射干總黃酮提取物在制備預(yù)防和/或治療骨質(zhì)疏松癥藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明所述的骨質(zhì)疏松癥包括原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥、繼發(fā)性骨質(zhì)疏松癥及原因不明特發(fā)性骨質(zhì)疏松癥。
所述原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥包括老年性骨質(zhì)疏松癥、絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥等。
所述繼發(fā)性骨質(zhì)疏松癥包括甲亢性骨質(zhì)疏松癥、糖尿病性骨質(zhì)疏松癥等。
所述原因不明特發(fā)性骨質(zhì)疏松癥包括遺傳性骨質(zhì)疏松癥等。
進(jìn)一步的，所述骨質(zhì)疏松癥為原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥。
藥效試驗(yàn)結(jié)果表明，射干總黃酮提取物能明顯改善大鼠因雌激素缺乏引起的骨礦丟失，提高骨礦密度，改善骨骼力學(xué)性能，增加股骨和脛骨的濕重，提高脛骨的濕比重，對(duì)雌激素缺乏誘導(dǎo)的大鼠骨質(zhì)疏松癥有一定的保護(hù)作用；射干總黃酮提取物的抗骨質(zhì)疏松作用具有一定的量效關(guān)系，隨著劑量的增加而增加。
急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表明，射干總黃酮提取物經(jīng)灌胃給藥途徑，ICR小鼠的食量、體重未見異常，LD50＞6.0g/kg，表明毒性低，具有很好的用藥安全性，而未經(jīng)該工藝處理的乙醇提取物和超臨界提取物具有一定的毒性。
根據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)方面，本發(fā)明提供了所述射干總黃酮提取物在制備預(yù)防和/或治療腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。所述腦血管疾病主要包括高血壓、動(dòng)脈硬化、腦出血、腦血栓、高脂血癥及冠心病等。
進(jìn)一步的，所述心腦血管疾病為缺血性心腦血管疾病。所述缺血性心腦血管疾病主要包括心肌梗塞、心絞痛、高血壓、動(dòng)脈硬化、腦血栓、高脂血癥及冠心丙等。
藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大鼠反復(fù)腦缺血可引起腦組織Ca2+-ATPase、SOD活性降低，Ca2+、MDA含量升高，造成嚴(yán)重的腦水腫損傷。射干總黃酮提取物能顯著對(duì)抗上述作用，其作用與尼莫地平相似，提示它對(duì)腦缺血有保護(hù)效果，也提示對(duì)心血管疾病包括心肌缺血等有一定的作用。
根據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)方面，本發(fā)明提供了所述射干總黃酮提取物在制備抗炎藥物中的應(yīng)用。
由于本發(fā)明的射干總黃酮提取物有效的去除了具有刺激咽喉黏膜作用的非黃酮類雜質(zhì)鳶尾醛，因此該提取物尤其適合于預(yù)防和/或治療各種炎癥引起的呼吸道疾病，如咽喉炎、氣管炎等。
藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，結(jié)果表明，射干總黃酮提取物對(duì)小鼠耳廓二甲苯致炎和大鼠足跖角叉膠致炎均有明顯的抑制作用，與對(duì)照組相比具有顯著性差異，其作用與阿司匹林相似，顯示本發(fā)明的總黃酮提取物具有良好的抗炎作用。
根據(jù)本發(fā)明的還一個(gè)方面，本發(fā)明提供了包含所述提取物的藥物組合物。
本發(fā)明所述的藥物組合物，包含所述射干總黃酮提取物。本發(fā)明的射干總黃酮提取物為包含多種活性成分的混合物，因此，該提取物本身也應(yīng)當(dāng)被視為本發(fā)明所述的藥物組合物。
上述兩種藥物組合物均可以進(jìn)一步包含藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。例如，一種藥物組合物可以是將射干總黃酮提取物和藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑按照一定的配比混合而成；還可以是將射干總黃酮提取物、其它中藥提取物和藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑按照一定的配比混合而成。
上述藥物組合物可進(jìn)一步按照常規(guī)制劑方法配制成可供給藥的形式，包括經(jīng)口或胃腸外給藥形式。在可供給藥的形式中，應(yīng)包含治療有效量的射干總黃酮提取物。所謂“治療有效量“是指在該劑量下，本發(fā)明的提取物能夠改善或減輕疾病癥狀，或能夠抑制或阻斷疾病的發(fā)展。
可供給藥的組合物可以為片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、錠劑、栓劑、貼劑、凝膠劑、粉劑或液體制劑(如口服或無(wú)菌胃腸外溶液或懸浮液)。這些可供給藥的組合物還可以根據(jù)需要制備成緩控釋制劑或靶向制劑。
口服給藥的形式可以為片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑等，它們可以含有常規(guī)賦形劑如粘合劑像糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、黃蓍膠、羥丙基甲基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮；填充劑如乳糖、蔗糖、玉米淀粉、磷酸鈣、山梨醇或甘氨酸；壓片潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂；崩解劑如淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、交聚維酮、羥乙酸淀粉鈉或微晶纖維素或藥學(xué)上可接受的潤(rùn)濕劑如十二烷基硫酸鈉。
液體組合物(如口服液體組合物)可以制備為乳液、糖漿劑或酏劑形式，或者將它們制備為干燥產(chǎn)物形式，在使用前用水或其它適當(dāng)?shù)娜苊饺芙狻４祟愐后w制劑可以含有常規(guī)的添加劑，如懸浮劑像山梨醇、糖漿、甲基纖維素、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠、氫化可食用脂肪；乳化劑如卵磷脂、脫水山梨醇單油酸酯或阿拉伯膠；非水溶性溶媒(可以包括食用油)如杏仁油、分餾椰子油、油性酯如甘油、丙二醇或乙醇的酯；防腐劑如對(duì)羥基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨醇；并且如果需要可以含有常規(guī)的矯味劑或著色劑。
胃腸外組合物(如胃腸外給藥組合物)可以含有所述活性化合物和無(wú)菌溶媒，根據(jù)使用的濃度，所述活性化合物可以懸浮于或溶解于該溶媒中。制備胃腸外給藥的溶液時(shí)，可以將本發(fā)明的組合物溶于注射用水中，過(guò)濾除菌，然后灌裝于適當(dāng)?shù)墓苤破炕虬碴持胁⒚芊?。最好將輔助劑如局部麻醉劑、防腐劑和緩沖劑溶解于所述溶媒中。為增加穩(wěn)定性，可以將該組合物灌裝于管制瓶中后冷凍并真空去除水分。以基本相同的方法可以制備胃腸外懸浮液，但是所述活性化合物是懸浮于溶媒中而不是溶解于溶媒中，并且除菌不能通過(guò)過(guò)濾進(jìn)行?？梢詫⑺龌衔锿ㄟ^(guò)暴露于環(huán)氧乙烷中滅菌，然后將其懸浮于無(wú)菌溶媒中。最好該組合物中含有表面活性劑或潤(rùn)濕劑以有助于活性組分的均勻分布。
本發(fā)明具備以下優(yōu)點(diǎn)1、本發(fā)明提供的射干總黃酮提取物的制備工藝能有效地富集總黃酮，去除雜質(zhì)，其總黃酮含量高，且其質(zhì)量控制方法可通過(guò)紫外分光光度方法和高效液相分析方法進(jìn)行含量測(cè)定和高效液相指紋圖譜進(jìn)行分析，該分析方法簡(jiǎn)單易控。
2、該射干總黃酮提取物具有明顯的抗骨質(zhì)疏松的作用，高含量的總黃酮制劑能夠達(dá)到良好治療效果；該射干總黃酮還具有顯著的抗腦缺血和抗炎作用，其中射干總黃酮抗腦缺血的作用為本專利發(fā)明人首次發(fā)現(xiàn)。
與其中所含單一成分相比，射干總黃酮提取物在培養(yǎng)24hr、48hr及72hr均有促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖和分化的作用，作用均較單一黃酮明顯。
3、急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表明，射干總黃酮提取物的毒性低，具有很好的用藥安全性，而未經(jīng)該工藝處理的乙醇提取物和超臨界提取物具有一定的毒性。這充分提示了本工藝制備的射干總黃酮提取物的臨床用藥的安全性。
4、本發(fā)明提供的射干總黃酮提取物制備工藝中采用樹脂純化方法，該方法簡(jiǎn)便、快捷、重現(xiàn)性好；所選用的大孔吸附樹脂吸附量大，解吸率大，可反復(fù)使用；所選用的溶劑乙醇，價(jià)廉、無(wú)毒。
該工藝技術(shù)突出優(yōu)點(diǎn)是(1)提取效率高；(2)有效地富集了主要活性成分-黃酮類成分，且提取物體積小，提高了中藥的內(nèi)在質(zhì)量；(3)充分祛除了其非黃酮類成分如鳶尾醛(具有刺激咽喉黏膜作用)等三萜類化合物、甾體等；(4)減少了產(chǎn)品的吸潮性；(5)去除了大量的無(wú)機(jī)鹽、粘液質(zhì)等，從而增強(qiáng)了產(chǎn)品的穩(wěn)定性；(6)容易制備成外觀美觀的各種劑型；(7)大孔樹脂再生處理方便，降低了工藝成本。
正因?yàn)橐陨蟽?yōu)點(diǎn)，充分說(shuō)明了該工藝適合工業(yè)化生產(chǎn)，具有很大的實(shí)用性。
為了更好地理解本發(fā)明的本質(zhì)，下面結(jié)合附圖，通過(guò)對(duì)本發(fā)明較佳實(shí)施方式的描述，詳細(xì)說(shuō)明但不限制本發(fā)明。
附圖的簡(jiǎn)要說(shuō)明

圖1為本發(fā)明射干總黃酮提取物的紫外色譜圖；圖2為本發(fā)明射干總黃酮提取物的總離子流色譜圖；圖3為本發(fā)明射干總黃酮提取物的薄層色譜圖，圖中1、射干或鳶尾藥材的石油醚萃取液；2、鳶尾醛；3、射干總黃酮提取物的石油醚萃取液。
發(fā)明的
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明所用的射干(干燥根莖)購(gòu)買于湖北省團(tuán)風(fēng)縣，鳶尾(干燥根莖)購(gòu)于四川省廣元藥材公司，經(jīng)鑒定為鳶尾科植物鳶尾和射干的干燥根莖。本發(fā)明所用的試驗(yàn)材料如無(wú)特別說(shuō)明均為市售購(gòu)買產(chǎn)品。
射干總黃酮提取物的制備實(shí)施例1從射干中提取射干總黃酮提取物取射干藥材500kg，加入5噸70％乙醇，加熱回流提取3h，濾過(guò)，藥渣繼續(xù)加3噸乙醇回流提取2h，濾過(guò)，兩次提取液合并。減壓回收溶劑，溫度45～60℃，濃縮到原藥材的8倍體積，將濃縮液加3倍熱水稀釋，加入適量中藥澄清劑ZTC A+B，離心，去沉淀，取上清液，上樣于D101大孔樹脂柱(在上樣前分別用酸，堿，水，醇對(duì)樹脂柱進(jìn)行前處理)，上樣后先用3BV純水沖洗，水溶液棄除，改用3BV的70％乙醇洗脫，洗脫液流速為1.5BV/h，收集該乙醇洗脫液。繼續(xù)減壓回收溶劑，收集浸膏，噴霧干燥，即得。
實(shí)施例2從鳶尾中提取射干總黃酮提取物取鳶尾藥材300kg，加入3噸70％乙醇，加熱回流提取3h，濾過(guò)，藥渣繼續(xù)加1噸乙醇回流提取2h，濾過(guò)，兩次提取液合并。減壓回收溶劑，溫度45～60℃，濃縮到原藥材的8倍體積，將濃縮液加3倍熱水稀釋，加入適量中藥澄清劑ZTC A+B，離心，去沉淀，取上清液，上樣于D101大孔樹脂柱(在上樣前分別用酸，堿，水，醇對(duì)樹脂柱進(jìn)行前處理)，上樣后先用3BV純水沖洗，水溶液棄除，改用1～3BV的70％乙醇洗脫，洗脫液流速為1～1.5BV/hr，收集該乙醇洗脫液。繼續(xù)減壓回收溶劑，收集浸膏，噴霧干燥，即得。
射干總黃酮提取物的質(zhì)量分析實(shí)施例3射干總黃酮提取物的質(zhì)量分析下列質(zhì)量分析中所用樣品包括樣品1按實(shí)施例1的方法，從射干中提取射干總黃酮提取物，共5個(gè)批號(hào)；樣品2按實(shí)施例2的方法，從鳶尾中提取射干總黃酮提取物，共5個(gè)批號(hào)。
1、含量分析1.1總黃酮的含量測(cè)定采用紫外分光光度法測(cè)定射干總黃酮提取物的含量，其中紫外分光光度計(jì)為UV-2401PC型，運(yùn)用標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方法，以鳶尾甙為對(duì)照品，在266nm測(cè)定。
1.1.1標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制精密稱取對(duì)照品鳶尾甙(自制)[(制備方法參照文獻(xiàn)鐘鳴、謝志宏、施耀強(qiáng)，射干甙對(duì)照的制備，廣東藥學(xué)，2001，11(1)16]，HPLC歸一法，含量為99％)16.20mg，用適量70％乙醇溶解，定容于50ml容量瓶中，搖勻，作為儲(chǔ)備液，精密吸取5ml儲(chǔ)備液，70％乙醇定容于50ml容量瓶中，分別吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml中，定容于10ml容量瓶中，進(jìn)行紫外測(cè)定，記錄吸收度值，以對(duì)照品濃度(x)為橫坐標(biāo)，吸收度(y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸計(jì)算。
1.1.2測(cè)定方法分別精密稱取20mg樣品，加20ml 70％乙醇，超聲提取半小時(shí)，提取液過(guò)濾，藥渣按前法再操作1次，過(guò)濾，兩次濾液合并，定容至50mL的容量瓶中，吸取0.5mL續(xù)濾液，定容于25mL的容量瓶中待測(cè)定，記錄吸收度，按線性方程計(jì)算含量。由吸收度值計(jì)算總黃酮的含量。
1.1.3結(jié)果樣品1，五批結(jié)果表明，其總黃酮的含量為分別為55％，60％，70％，65％，61％，平均含量為62.20％；樣品2，五批結(jié)果表明，其總黃酮含量分別為76％，75％，90％，80％，70％，平均含量為78.2％；通過(guò)多批號(hào)檢測(cè)證明，運(yùn)用本發(fā)明工藝制備的射干總黃酮提取物中總黃酮的含量范圍在55％～90％重量。
1.2鳶尾甙的含量測(cè)定采用高效液相色譜法(HPLC)，以鳶尾甙為對(duì)照品，測(cè)定射干總黃酮提取物中鳶尾甙的含量。
1.2.1色譜條件高效液相色譜儀HP1100系列(美國(guó)惠譜公司)，Hypersil BDS C18填料常規(guī)色譜柱(5μm，4×250mm)，柱溫(30℃)，水(A)和乙腈(B)為流動(dòng)相，梯度洗脫，洗脫程序?yàn)?min時(shí)，A∶B為88∶12；20min時(shí)為72∶28，60min時(shí)為40∶60，流速1ml/min，紫外檢測(cè)器(UV)，檢測(cè)波長(zhǎng)266nm。
1.2.2標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制稱取對(duì)照品13.62mg，用適量70％乙醇溶解，定容于50ml的容量瓶中，搖勻，作儲(chǔ)備液。精密吸取5ml儲(chǔ)備液，70％乙醇定容于50ml的容量瓶中。分別吸取1，1.5，2，4，10mL，轉(zhuǎn)移到10mL容量瓶中，用70％乙醇定容至刻度。以對(duì)照品濃度(x)為橫坐標(biāo)，吸收度(y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸計(jì)算，得到回歸方程Y＝43359.81X-8.43066，R＝0.9999，鳶尾甙在0.002724～0.02724mg/ML范圍內(nèi)具良好的線性關(guān)系。
1.2.3測(cè)定方法取樣品適量，精密稱定20mg左右，轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，加70％乙醇40mL，常溫下超聲30min，取出冷卻到室溫，加70％乙醇至刻度，搖勻，吸取2mL至10mL容量瓶中，70％乙醇定容至刻度，搖勻，即可測(cè)定。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算鳶尾甙的含量。
1.2.4結(jié)果樣品1，五批測(cè)定結(jié)果表明，其鳶尾甙的含量分別為12％，18％，15％，16％，17％，平均含量為15.6％；樣品2，五批測(cè)定結(jié)果表明，其鳶尾甙的含量分別為30％，30％，35％，32％，25％，平均含量為30.4％。
通過(guò)多批號(hào)檢測(cè)證明，運(yùn)用該工藝制備的射干總黃酮中鳶尾甙(射干甙)的含量范圍在10％～50％重量。
2、指紋圖譜分析2.1樣品溶液配制分別取由實(shí)施例1和2得到的射干總黃酮樣品20mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加70％乙醇40ml，超聲提取半小時(shí)，提取液過(guò)濾到50ml容量瓶中，冷卻到室溫，加適量70％乙醇并稀釋至刻度，搖勻，吸取2ml，定容到10ml的容量瓶中，作為供試品溶液。
2.2測(cè)定方法高效液相色譜-電噴霧質(zhì)譜法(HPLC-EIMS)識(shí)別提取物化學(xué)組分，高效液相色譜法(HPLC)檢測(cè)各組分含量。
2.2.1高效液相色譜—電噴霧質(zhì)譜法的檢測(cè)條件高效液相色譜系統(tǒng)條件同1.2.1；質(zhì)譜儀器ICQ advantage型質(zhì)譜儀(美國(guó)Finnigan公司)，Thermo Fingan surveryer(包括MS pump、Auto sampler-poADetector)；ESI離子源的鞘氣(N2)，流速70ml/min，輔助氣((N2)，流速20ml/min；源電壓4.5KV；正離子檢測(cè)；碰撞氣體為氦氣；噴霧毛細(xì)管溫度280℃，毛細(xì)管電壓43V；采用全離子掃描方式，掃描范圍m/z＝200～1000。
2.2.2組分含量分析條件高效液相色譜儀HP1100系列(美國(guó)惠譜公司)，Hypersil BDS C18填料常規(guī)色譜柱(5μm，4×250mm)，柱溫(30℃)，水(A)和乙腈(B)為流動(dòng)相，梯度洗脫，洗脫程序?yàn)?min時(shí)，A∶B為88∶12；20min時(shí)為72∶28，60min時(shí)為40∶60，流速1ml/min，紫外檢測(cè)器(UV)，檢測(cè)波長(zhǎng)266nm，以鳶尾甙為對(duì)照品，進(jìn)行檢測(cè)。
2.3結(jié)果2.3.1提取物化學(xué)組分識(shí)別采用高效液相色譜—電噴霧質(zhì)譜法，對(duì)射干總黃酮的主要成分進(jìn)行分析和鑒定，確定其黃酮主要為鳶尾甙、鳶尾甙元、野鳶尾甙、野鳶尾黃素和次野鳶尾黃素。
在RT為12.30時(shí)，為鳶尾甙，其分子量為C22H22O11(462)，UV為266，333，ESI中m/z463為[M+1]+，301[M+1]+-glu(162)，286[M+1]+-glu(162)-CH3，270[M+1]+-glu(162)-CH3O。
在RT為13.78時(shí)，為野鳶尾甙，其分子量為C24H26O13(522)，UV為266，333，ESI中m/z523為[M+1]+，361[M+1]+-glu(162)，331[M-glu(162)-CH3O，301[M-glu(162)-2CH3O，226[M+1]+glu(162)-145(4CH3O，2OH，O)。
在RT為22.30時(shí)，為鳶尾甙元，其分子量為C16H12O13(300)，UV為266，333，ESI中m/z301為[M+1]+。
在RT為24.09時(shí)，為野鳶尾黃素，其分子量為C18H16O8(360)，UV為267，322，ESI中m/z361為[M+1]+，361[M+1]+-CH3(15)，343[M+1]+-H2O。
在RT為31.31時(shí)，為次野鳶尾黃素，其分子量為C20H18O8(386)，UV為265，322，ESI中m/z387為[M+1]+，357[M+1]+-CH3O(15)，301.8。
2.3.2提取物中各化學(xué)組分含量HPLC檢測(cè)結(jié)果見圖1。根據(jù)HPLC-EIMS結(jié)果可知，保留時(shí)間(RT)為12.30min的色譜峰為鳶尾甙峰；RT為13.78min的色譜峰為野鳶尾甙；RT為22.30min的色譜峰為鳶尾甙元峰；RT為24.09min的色譜峰為野鳶尾黃素峰；RT為31.31min的色譜峰為次野鳶尾黃素峰。
以峰面積歸一法計(jì)算鳶尾甙∶野鳶尾甙∶鳶尾甙元∶野鳶尾黃素∶次野鳶尾黃素的相對(duì)峰比例。
樣品1的五批結(jié)果相對(duì)峰面積比例分別為
1∶0.16∶0.11∶0.25∶0.11；1∶0.15∶0.13∶0.22∶0.2；1∶0.16∶0.15∶0.25∶0.11；1∶0.15∶0.13∶0.23∶0.10；1∶0.13∶0.12∶0.21∶0.12。
樣品2的五批結(jié)果相對(duì)峰面積比例分別為1∶0.26∶0.25∶0.4∶0.2；1∶0.47∶0.28∶0.55∶0.28；1∶0.45∶0.26∶0.45∶0.26；1∶0.40∶0.25∶0.40∶0.22；1∶0.38∶0.22∶0.37∶0.20。
所以，射干總黃酮五個(gè)峰(鳶尾甙、野鳶尾甙、鳶尾甙元、野鳶尾黃素、次野鳶尾黃素)相對(duì)比例歸納為1∶0.12～0.5∶0.10～0.3∶0.20～0.6∶0.1～0.3。由此推算鳶尾甙、野鳶尾甙、鳶尾甙元、野鳶尾黃素、次野鳶尾黃素的百分含量依次為10.00～50.00％、2.80～28.00％、1.60～16.20％、2.33～23.30％、0.83～12.53％；鳶尾甙∶野鳶尾甙∶鳶尾甙元∶野鳶尾黃素∶次野鳶尾黃素的重量比約為10～50∶2～28∶1～17∶2～24∶0.5～13。
3、雜質(zhì)分析采用薄層色譜法對(duì)從射干中提取的射干總黃酮提取物進(jìn)行分析，展開劑石油醚∶丙酮(8∶2)，硅膠GF254層析板，以鳶尾醛和射干藥材為參比。結(jié)果見圖3，由結(jié)果可知，本發(fā)明的射干總黃酮中不含雜質(zhì)鳶尾醛。
本發(fā)明對(duì)從鳶尾中提取的射干總黃酮提取物也進(jìn)行如上的雜質(zhì)分析，分析條件與結(jié)果均與上述相同，此處不作重復(fù)說(shuō)明。
抗骨質(zhì)疏松的藥效學(xué)試驗(yàn)實(shí)施例4從射干中提取的射干總黃酮提取物的抗骨質(zhì)疏松實(shí)驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)材料1.1試驗(yàn)樣品樣品1(簡(jiǎn)稱1號(hào))按實(shí)施例1制備而得，總黃酮含量≥55％。
樣品2(簡(jiǎn)稱2號(hào))以乙醇提取所得到的乙醇提取物，總黃酮含量為10％左右。
樣品3(簡(jiǎn)稱3號(hào))以水煎制備所得的水提取物，總黃酮含量約為8％。
1.2試驗(yàn)動(dòng)物大鼠購(gòu)買于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
2、試驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥方法101只健康大鼠，其中72只在40mg/kg戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，按照常規(guī)方法切除雙側(cè)卵巢；其余的11只大鼠做相同的手術(shù)操作，但只摘除卵巢旁小塊脂肪組織，不切除卵巢，作為假手術(shù)組(Sham)，常規(guī)抗菌；另取18只健康大鼠，不作任何手術(shù)處理，作為模型組(OVX)。
將切除卵巢的大鼠隨機(jī)分為7組，每組12只，在手術(shù)后1周開始灌胃給藥，Sham和OVX組每天給予0.5％CMC溶液；樣品1大劑量和小劑量組每天分別給予100和20mg/kg(以總黃酮計(jì))，灌胃給藥，給藥體積均為1.0ml/100g體重，連續(xù)4個(gè)月。樣品2、3大劑量和小劑量組的每日給藥量(提取物量)和給藥方法與樣品1相同(樣品1、2、3組組內(nèi)每日攝取總黃酮量相同)。飼養(yǎng)室溫度20～26℃，濕度50～70％，喂以普通顆粒飼料，自由飲水。每1～2周稱1次體重并按新體重調(diào)整給藥體積。
3、骨密度的檢測(cè)方法骨密度和骨礦含量的測(cè)定于給藥2和4個(gè)月時(shí)，大鼠35mg/kg戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，俯臥于骨密度儀測(cè)試板上，掃描后半身，并分析一側(cè)股骨和脛骨的骨礦密度(BMD)和骨礦含量(BMC)。
4、檢測(cè)結(jié)果4.1對(duì)去卵巢大鼠骨礦密度(BMD)的影響結(jié)果見表1。結(jié)果表明，大鼠去卵巢后股骨和脛骨的BMD略有下降；給藥2個(gè)月時(shí)，1、2、3號(hào)樣品對(duì)股骨的BMD均無(wú)明顯影響，但明顯增加脛骨的BMD水平；給藥4個(gè)月時(shí)，1、2、3號(hào)樣品對(duì)股骨和脛骨的BMD均無(wú)明顯影響。
表1 對(duì)股骨和脛骨骨礦密度(BMD)的影響(mg/cm2)(X±SD)


與Sham組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與OVX組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。D為大劑量組，S為小劑量組。
4.2對(duì)去卵巢大鼠股骨和脛骨BMC(骨礦含量，Bone Mineral Content)的影響結(jié)果見表2。結(jié)果表明因?yàn)榇笫笕ヂ殉埠篌w重明顯增加，承重骨(股骨和脛骨)體積也相對(duì)增大(骨骼投影面積增加，數(shù)據(jù)為列出)，因此使模型組股骨和脛骨的BMC和假手術(shù)比較無(wú)明顯差異。
給藥2個(gè)月時(shí)，1號(hào)大劑量組股骨BMC水平略高，對(duì)脛骨BMC無(wú)影響；其他2個(gè)樣品組股骨和脛骨的BMC均無(wú)明顯提高。
給藥4個(gè)月時(shí)，1號(hào)大劑量組股骨的BMC略有增加，但幅度很小，脛骨BMC和模型組基本相似；1號(hào)小劑量組和2號(hào)和3號(hào)大、小劑量組股骨BMC均無(wú)明顯增加。
表2 對(duì)股骨和脛骨BMC的影響(mg)(X±SD)

與Sham組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與OVX組比較，*P＜0.05，
**P＜0.01。D為大劑量組，S為小劑量組。
5、試驗(yàn)小結(jié)樣品1為含量大于50％的射干總黃酮提取物，能明顯改善大鼠因雌激素缺乏引起的骨礦丟失，提高骨礦密度，改善骨骼力學(xué)性能，增加股骨和脛骨的濕重，提高脛骨的濕比重，表明樣品1對(duì)雌激素缺乏誘導(dǎo)的大鼠骨質(zhì)疏松癥有一定的保護(hù)作用，高含量的總黃酮制劑能夠達(dá)到良好的治療效果。樣品2和3也有此作用，但強(qiáng)度較樣品1差。結(jié)果說(shuō)明了射干總黃酮抗骨質(zhì)疏松作用的量效關(guān)系，也說(shuō)明了本發(fā)明的制備工藝最大限度的富積了總黃酮，體現(xiàn)了該工藝的合理性和科學(xué)性。
實(shí)施例5從鳶尾中提取的射干總黃酮提取物的抗骨質(zhì)疏松實(shí)驗(yàn)1、試驗(yàn)樣品1.1待試藥物射干總黃酮提取物，按實(shí)施例2制備，總黃酮含量大于50％。
1.2陽(yáng)性對(duì)照藥強(qiáng)骨膠囊(中藥)，北京岐黃制藥有限公司2、儀器及試劑電子天平；DXP-L型DEXA骨密度儀(美國(guó)Lunar公司)；島津AG-20KNA型萬(wàn)能材料試驗(yàn)機(jī)(力學(xué)指標(biāo))；酶標(biāo)儀(ELX800，Bio-Tek Instruments，INC.)；全自動(dòng)γ免疫計(jì)數(shù)儀；硬組織切片機(jī)(Leica 2155)、碳化鎢刀、半自動(dòng)數(shù)字圖像分析系統(tǒng)。
3、實(shí)驗(yàn)方案3.1去勢(shì)大鼠骨質(zhì)疏松癥預(yù)防給藥實(shí)驗(yàn)雌性SD大鼠，3％戊巴比妥鈉45mg/kg腹腔注射麻醉后，按照文獻(xiàn)的方法行雙側(cè)卵巢切除術(shù)(OVX)，手術(shù)切除后經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為大鼠卵巢組織，且包膜完整。假手術(shù)組切開皮膚、肌肉和腹膜后，僅切除小塊脂肪組織，但不摘除卵巢。于卵巢切除5天后，給藥，共2月，每周測(cè)體重籍以調(diào)節(jié)藥量。各組大鼠實(shí)驗(yàn)期間予以普通飼料，自由攝食，飲水，室溫控制在25℃±2℃，2個(gè)月后結(jié)束實(shí)驗(yàn)，用烏拉坦麻醉大鼠后取血液及骨標(biāo)本供測(cè)試。
3.2去勢(shì)大鼠骨質(zhì)疏松癥治療給藥實(shí)驗(yàn)雌性SD大鼠，2％戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔注射麻醉后，按照文獻(xiàn)的方法行雙側(cè)卵巢切除術(shù)(OVX)，手術(shù)切除后經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為大鼠卵巢組織，且包膜完整。假手術(shù)組切開皮膚、肌肉和腹膜后，僅切除小塊脂肪組織，但不摘除卵巢。術(shù)后普通飼料飼養(yǎng)3個(gè)月。于卵巢切除3個(gè)月后，給大鼠灌藥，共2月，每周測(cè)體重藉以調(diào)節(jié)藥量。5個(gè)月后結(jié)束實(shí)驗(yàn)，用烏拉坦麻醉大鼠后取血液及骨標(biāo)本供測(cè)試。
3.3測(cè)定指標(biāo)骨密度測(cè)定測(cè)定右側(cè)股骨密度，采用美國(guó)Norland公司生產(chǎn)的雙能X線骨密度測(cè)量?jī)x，型號(hào)XR-26。
4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見表3、4。結(jié)果表明從鳶尾中提取的射干總黃酮提取物具有顯著的抗骨質(zhì)疏松作用，且有一定的量效關(guān)系。
表3 預(yù)防給藥抗去勢(shì)致骨質(zhì)疏松大鼠各組骨密度的變化(X±SD)

各組與模型組相比，*P＜0.05，**P＜0.01表4 治療給藥抗去勢(shì)致骨質(zhì)疏松大鼠各組骨密度的變化(X±SD)

與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.0實(shí)施例6射干總黃酮提取物及其黃酮類單體對(duì)大鼠成骨細(xì)胞增殖和分化的影響1、實(shí)驗(yàn)材料
1.1試驗(yàn)動(dòng)物出生24h內(nèi)SD大鼠，性別體重不限，購(gòu)于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
1.2試驗(yàn)樣品DMEM培養(yǎng)基(GIBCO)、胰蛋白酶(GIBCO)、膠原酶II(Sigma)、噻唑藍(lán)(MTT，sigma)、骨鈣素放免試劑盒(由天津協(xié)和醫(yī)藥科技有限公司提供，批號(hào)020130)。
有效部位1(簡(jiǎn)稱1號(hào))從射干中提取的射干總黃酮(按實(shí)施例1工藝方法制備，含量大于50％)。
有效部位2(簡(jiǎn)稱2號(hào))從鳶尾中提取的射干總黃酮(按實(shí)施例2工藝方法制備，含量大于50％)。
鳶尾甙，鳶尾甙元，野鳶尾甙，野鳶尾黃素，次野鳶尾黃素，染料木素，均為自制(制備方法參照文獻(xiàn)鐘鳴、謝志宏、施耀強(qiáng)。射干甙對(duì)照的制備，廣東藥學(xué)，2001，11(1)16；劉合剛，胡新斌，葛建萍。栽培射干化學(xué)成分的分離及鑒定中藥材，1997，20(6)299黃射干的異黃酮類成分云南植物研究，1999，21(1)125～130；吉文亮，秦民堅(jiān)，王崢濤。射干的化學(xué)成分研究中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，32(3)197～199)，含量均大于95％。單體化合物劑量按有效部位中所含相應(yīng)化合物的量設(shè)計(jì)。
2、試驗(yàn)方案2.1新生大鼠顱骨成骨細(xì)胞的分離培養(yǎng)無(wú)菌條件下，取出生24h內(nèi)的大鼠顱蓋骨，用平衡鹽溶液沖洗數(shù)次，放入0.25％的胰蛋白酶溶液中，剔除骨表面被膜及軟組織，將骨片剪成1～3mm3大小的骨粒，棄去胰蛋白酶溶液。在0.1％膠原酶II中室溫消化45min，棄去消化液。將骨粒分散于100ml培養(yǎng)瓶中，加入含20％新生小牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，7天后，將骨粒棄去，細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)。細(xì)胞傳至第5代，將細(xì)胞用胰蛋白酶消化，細(xì)胞計(jì)數(shù)后，用含10％小牛血清的DMEM培養(yǎng)基稀釋成4×104/ml的細(xì)胞懸液。以每孔0.2ml加入96孔培養(yǎng)板，每孔0.5ml加入24孔培養(yǎng)板，37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，鏡下觀察待細(xì)胞70％融合時(shí)，將含血清培養(yǎng)基吸棄，平衡鹽溶液沖洗兩次，加入含不同濃度射干總黃酮提取物及上述六種單體的無(wú)血清培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)，不同時(shí)間檢測(cè)細(xì)胞的增殖與分化。
2.2細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)24h、48h和72h后，分別將一塊96孔板從CO2培養(yǎng)箱中取出，每孔加入5mg/ml的MTT 20μl，繼續(xù)孵育4h，取出，吸棄培養(yǎng)基后，加入150μl二甲基亞礬，10min后在酶標(biāo)儀上測(cè)492nm的吸光度。
2.3細(xì)胞分化試驗(yàn)培養(yǎng)24h、48h和72h后，分別將兩塊24孔板取出。吸取培養(yǎng)基用于骨鈣素測(cè)定。細(xì)胞用PBS沖洗3次后，每孔加入0.25ml 1％的Tritonx100(德國(guó)Merck公司)。10min后，收集每孔溶液，用于蛋白質(zhì)的測(cè)定。骨鈣素(BGP)測(cè)定采用放射免疫法(RIA)，蛋白質(zhì)測(cè)定采用改良的lowry法。
2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±SD)表示，組間差異用SAS8.0統(tǒng)計(jì)軟件作方差分析。
3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1射干總黃酮提取物對(duì)大鼠成骨細(xì)胞增殖的影響取相同濃度的射干總黃酮及其單體實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表5。結(jié)果表明，大鼠成骨細(xì)胞在不同成分中培養(yǎng)24h、48h、72h后，射干總黃酮及其各種黃酮類成分均有不同程度的促進(jìn)增殖作用。其中，有效部位1和2在不同培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)顯著的促分化作用，較其他化合物作用顯著。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明射干總黃酮具有顯著的促大鼠成骨細(xì)胞增殖的作用。
表5 射干總黃酮及黃酮單體對(duì)大鼠成骨細(xì)胞增殖的影響(X±SD，n＝10)

與空白相對(duì)照，*P＜0.05.**P＜0.013.2射干總黃酮提取物對(duì)大鼠成骨細(xì)胞分化的影響骨鈣素是成骨細(xì)胞合成、分泌的主要非膠原蛋白，被認(rèn)為是成骨細(xì)胞分化的晚期即礦化的標(biāo)志。取相同濃度的射干總黃酮及其單體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表6。結(jié)果表明，通過(guò)比較，有效部位1和2在培養(yǎng)24h時(shí)出現(xiàn)明顯的促分化作用，培養(yǎng)48h和72h后繼續(xù)出現(xiàn)促分化作用。各單一黃酮在培養(yǎng)24h后未出現(xiàn)明顯的促分化作用，培養(yǎng)48h和72h后出現(xiàn)促分化作用，其促分化作用均弱于射干總黃酮。
表6 射干總黃酮及單一黃酮對(duì)大鼠成骨細(xì)胞外骨鈣含量的影響(X±SD，n＝10)

與空白相對(duì)照，*P＜0.05.**P＜0.014、結(jié)論骨質(zhì)疏松的組織學(xué)機(jī)制主要是由于骨重建負(fù)平衡所致，成骨細(xì)胞增殖受抑制及分化程度降低，是造成骨質(zhì)硫松癥的重要原因之一。只有成骨細(xì)胞不斷增殖及分化才能產(chǎn)生豐富的骨膠原蛋白和非膠原性蛋白質(zhì)，從而進(jìn)一步形成更多的骨組織。由于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)存在許多復(fù)雜因素的干擾，不便于直接觀察其藥理作用，為此我們采用體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞的方法，來(lái)觀察射干總黃酮提取物及其單體對(duì)成骨細(xì)胞增殖和分化的直接影響。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，射干總黃酮提取物在培養(yǎng)24h、48h及72h均有促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖和分化的作用，作用均較單一黃酮明顯，這更說(shuō)明我們選擇總黃酮作為有效部位進(jìn)行研究開發(fā)的合理性。
抗腦缺血的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)施例7射干總黃酮提取物的抗腦缺血實(shí)驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)材料1.1試驗(yàn)樣品有效部位1(簡(jiǎn)稱1號(hào))從射干中提取的射干總黃酮(按實(shí)施例1工藝方法制備，含量大于50％)有效部位2(簡(jiǎn)稱2號(hào))從鳶尾中提取的射干總黃酮(按實(shí)施例2工藝方法制備，含量大于50％)。
尼莫地平西安博愛制藥有限公司的產(chǎn)品。
超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及Ca2+-ATPase試劑盒，為南京建成生物制品研究所提供。
1.2試驗(yàn)動(dòng)物大鼠購(gòu)于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心2、實(shí)驗(yàn)方案2.1實(shí)驗(yàn)分組將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、反復(fù)腦缺血組、反復(fù)腦缺血給藥組(有效部位1、有效部位2、尼莫地平)，每組10只。
2.2腦缺血模型的建立以雙側(cè)總動(dòng)脈結(jié)扎大鼠腦缺血模型方法，解剖大鼠兩側(cè)椎動(dòng)脈，用動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈5min，去夾間隔1h，如此反復(fù)3次，最后一次缺血再灌1h后取腦組織，測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)。保溫在37℃左右。
2.3大鼠腦組織含水量及Ca2+含量測(cè)定大鼠腦組織取出后，取一半立即用冰冷Tris緩沖液(Tris110，葡萄糖220mmol/L，去離子水配制)沖洗干凈，并吸干表面水分，稱濕重，然后干燥至恒重，腦組織含水量＝(濕重-干重)/濕重×100％，稱取定量干燥腦組織，經(jīng)超純硝酸及高氯酸消化，用島津AA-670型原子吸收分光光度計(jì)測(cè)定Ca2+含量。
2.4 Ca2+-ATPase、SOD及MDA的測(cè)定將另一半大鼠腦組織用冰冷的生理鹽水低溫勻漿。3000r/min，0℃離心15min，測(cè)定蛋白質(zhì)及Ca2+-ATPase(鉬酸銨法)，SOD(羥胺法)及MDA(TBA法)。
3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1對(duì)反復(fù)腦缺血腦組織含水量及Ca2+含量的影響結(jié)果見表7，t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)表明，反復(fù)腦缺血組腦組織含水量及Ca2+含量均非常顯著地高于假手術(shù)組，PIF劑量依賴性地對(duì)抗這種升高作用。
表7 對(duì)反復(fù)腦缺血腦組織含水量及Ca2+含量(X±SD)

*P＜0.05，**P＜0.013.2對(duì)反復(fù)腦缺血大鼠腦組織Ca2+-ATPase、SOD活性及MDA含量的影響結(jié)果見表8，與假手術(shù)組比，反復(fù)腦缺血組腦組織中Ca2+-ATPase及SOD活性非常顯著地降低，而MDA含量非常顯著地升高。PIF500mg/kg還能顯著抑制MDA含量升高，非常顯著地抑制Ca2+-ATPase活性降低，但對(duì)SOD活性影響不明顯。
表8 對(duì)反復(fù)腦缺血大鼠腦組織Ca2+-ATPase、SOD活性及MDA含量的影響(X±SD)

*P＜0.05，**P＜0.014、結(jié)論大鼠反復(fù)腦缺血可引起腦組織Ca2+-ATPase、SOD活性降低，Ca2+、MDA含量升高，造成嚴(yán)重的腦水腫損傷。射干總黃酮能顯著對(duì)抗上述作用，其效果與尼莫地平相似，這提示它對(duì)腦缺血有保護(hù)效果，也提示對(duì)心血管疾病包括心肌缺血等有一定的作用。
抗炎的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)施例8射干總黃酮提取物的抗炎作用實(shí)驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)材料1.1試驗(yàn)樣品有效部位1(簡(jiǎn)稱1號(hào))從射干中提取的射干總黃酮(按實(shí)施例1工藝方法制備，含量大于50％)有效部位2(簡(jiǎn)稱2號(hào))從鳶尾中提取的射干總黃酮(按實(shí)施例2工藝方法制備，含量大于50％)。
阿司匹林系sigma化學(xué)公司產(chǎn)品。
角叉菜膠系sigma化學(xué)公司產(chǎn)品。
1.2試驗(yàn)動(dòng)物1.2.1昆明種小鼠，18～22g，購(gòu)于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
1.2.2 SD大鼠，體重180～220g，購(gòu)于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
2、實(shí)驗(yàn)方案和結(jié)果2.1小鼠耳廓二甲苯致敏試驗(yàn)小鼠隨機(jī)分成4組，每組10只，分成有效部位1(150mg/kg)、有效部位2(150mg/kg)、阿司匹林對(duì)照組(0.3g/kg)及空白對(duì)照組。每日一次，連續(xù)5天，末次給藥40min，各鼠左耳兩面涂以二甲苯60UL致炎。右耳作對(duì)照，1h后脫頸椎處死，沿耳廓基部剪下兩耳，用直徑8mm打孔器取下相同部位耳片，稱重。以對(duì)照耳片重量為100％，計(jì)算致炎耳炎癥增重百分率。
結(jié)果見表9。結(jié)果表明，2小時(shí)即對(duì)小鼠耳廓二甲苯致炎的小鼠耳腫脹有明顯的抑制作用，與對(duì)照組相比有顯著性差異。
表9 射干總黃酮對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響(n＝10)(X±SD)

與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.012.2大鼠足跖角叉膠致炎試驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為4組，每組10只，分設(shè)有效部位1(150mg/kg)、有效部位2(150mg/kg)，阿司匹林對(duì)照組(0.3g/kg)及空白對(duì)照組。每日一次，連續(xù)5d，末次給藥30min，向大鼠左后足墊部皮下注射0.8％角叉菜膠0.1ml后，用游標(biāo)卡尺(精密度0.02mm)測(cè)定致炎前和致炎后的1.0、2.0、3.0h大鼠足跖厚度的差值為腫脹度，比較各組腫脹度的差異。
結(jié)果見表10。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，射干總黃酮提取物均對(duì)大鼠足跖角叉菜膠致炎有明顯的減輕作用，上述兩個(gè)致炎試驗(yàn)說(shuō)明該提取物具有良好的抗炎作用，其效果與阿司匹林相似。
表10 對(duì)角叉菜膠所致大鼠足跖炎癥的影響(n＝10)(X±SD)

與對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01急性毒性試驗(yàn)實(shí)施例9本實(shí)驗(yàn)觀察ICR小鼠單次灌服射干總黃酮后，由于吸收所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)和死亡情況。結(jié)果表明本發(fā)明提供的射干總黃酮6000mg/kg灌胃給藥后，ICR小鼠的食量、體重未見異常。在給藥后14天內(nèi)，小鼠未發(fā)生死亡。因此，射干總黃酮灌胃給藥的LD50＞6000mg/kg。
1、試驗(yàn)材料1.1動(dòng)物ICR小鼠，清潔級(jí)，20±3g，雌雄兼用，購(gòu)于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，合格證號(hào)為滬動(dòng)合格字第152號(hào)。
1.2受試藥物樣品1從射干中提取的射干總黃酮。(按實(shí)施例1工藝方法制備，含量大于50％)樣品2從鳶尾中提取的射干總黃酮(按實(shí)施例2工藝方法制備，含量大于50％)。
樣品3以乙醇提取所得到的乙醇提取物，總黃酮含量為10％左右。
樣品4以超臨界提取所得到的提取物，總黃酮含量為8％左右。
2、試驗(yàn)方法ICR小鼠20只，給藥前禁食12h(僅供水)。每只小鼠以受試藥物(樣品1，樣品2)的最大可灌胃濃度(0.15g/ml)和小鼠的最大可灌胃容量(0.4ml/10g)給予6g/kg，受試藥物(樣品3，樣品4)的最大可灌胃濃度(0.16g/ml)和小鼠的最大可灌胃容量(0.4ml/10g)給予5g/kg。觀察記錄給藥后14天內(nèi)動(dòng)物全身狀況、體重、呼吸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動(dòng)等變化。若動(dòng)物死亡，即立即進(jìn)行尸檢，記錄病變情況。若有肉眼可見變化，則進(jìn)行病理檢查。
3、結(jié)果結(jié)果見表11。由結(jié)果可知，給藥組和對(duì)照組ICR小鼠的體重均有所升高，兩者之間比較無(wú)顯著性差異。
表11 急性毒性試驗(yàn)時(shí)的體重變化(X±SD)

4、結(jié)論樣品1和2灌胃給藥的LD50＞6000mg/kg，這個(gè)結(jié)果提示該藥物在用于臨床時(shí)毒性不大；樣品3和4灌胃給藥的LD50為5000mg/kg。這說(shuō)明經(jīng)過(guò)本發(fā)明制備工藝處理后的樣品明顯無(wú)毒。
以上對(duì)本發(fā)明的詳細(xì)描述并不限制本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本發(fā)明作出各種改變和變形，只要不脫離本發(fā)明的精神，均應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求所定義的范圍。
權(quán)利要求
1.一種射干總黃酮提取物，其特征在于，該提取物是從射干或鳶尾中提取而得，總黃酮的含量為55％～90％重量；其中含有鳶尾甙；以及一種或一種以上的選自野鳶尾甙、鳶尾甙元、野鳶尾黃素和次野鳶尾黃素的化合物成分；其中，鳶尾甙的含量為10％～50％重量；所述總黃酮含量，是以鳶尾甙為對(duì)照品，采用紫外分光光度法測(cè)定。
2.權(quán)利要求1所述的提取物，其特征在于，所述提取物同時(shí)含有鳶尾甙、野鳶尾甙、鳶尾甙元、野鳶尾黃素和次野鳶尾黃素。
3.權(quán)利要求2所述的提取物，其特征在于，鳶尾甙∶野鳶尾甙∶鳶尾甙元∶野鳶尾黃素∶次野鳶尾黃素的重量比為10～50∶2～28∶1～17∶2～24∶0.5～13。
4.權(quán)利要求1、2或3所述的提取物，其特征在于，其制備方法為1)藥材用50～80％的乙醇水溶液熱回流提取2～3次，合并提取液；2)減壓濃縮步驟1)所得提取液至原藥材的6～10倍體積；3)以3～5倍體積的水稀釋濃縮液，并作澄清處理，取上清液；4)取上清液，過(guò)大孔樹脂柱吸附，棄流出液；然后用1～5BV的水，以0.5～2.5BV/小時(shí)的流速洗滌所述吸附柱，棄水洗液；之后，采用50～90％的乙醇，以0.5～2.5BV/小時(shí)的流速洗脫吸附柱，收集該乙醇洗脫液；5)濃縮、干燥乙醇洗脫液，得到射干總黃酮提取物。
5.一種權(quán)利要求1～3之一所述提取物的制備方法，所述方法包括以下步驟1)藥材用含水乙醇提??；2)減壓濃縮步驟1)所得提取液；3)以水稀釋濃縮液，并作澄清處理，取上清液；4)取上清液，過(guò)大孔樹脂柱吸附，棄流出液；然后用水洗滌所述吸附柱，棄水洗液；之后，采用乙醇洗脫吸附柱并收集該乙醇洗脫液；5)濃縮、干燥乙醇洗脫液，得到射干總黃酮提取物。
6.權(quán)利要求5所述的提取方法，所述方法包括下述步驟1)藥材用50～80％的乙醇水溶液熱回流提取2～3次，合并提取液；2)減壓濃縮步驟1)所得提取液至原藥材的6～10倍體積；3)以3～5倍體積的水稀釋濃縮液，并作澄清處理，取上清液；4)取上清液，過(guò)大孔樹脂柱吸附，棄流出液；然后用1～5BV的水，以0.5～2.5BV/小時(shí)的流速洗滌所述吸附柱，棄水洗液；之后，采用50～90％的乙醇，以0.5～2.5BV/小時(shí)的流速洗脫吸附柱，收集該乙醇洗脫液；5)濃縮、干燥乙醇洗脫液，得到射干總黃酮提取物。
7.一種藥物組合物，其特征在于，含有權(quán)利要求1～4之一所述的射干總黃酮提取物。
8.權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特征在于，進(jìn)一步包含藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。
9.權(quán)利要求1所述射干總黃酮提取物在制備預(yù)防和/或治療骨質(zhì)疏松癥藥物中的應(yīng)用。
10.權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述骨質(zhì)疏松癥為原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥。
11.權(quán)利要求1所述射干總黃酮提取物在制備預(yù)防和/或治療腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。
12.權(quán)利要求1所述射干總黃酮提取物在制備抗炎藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種射干總黃酮提取物及其制備方法。該提取物是從射干或鳶尾中提取而得，總黃酮的含量為55％～90％；其中含有鳶尾甙；以及選自鳶尾甙元、野鳶尾甙、野鳶尾黃素和次野鳶尾黃素的一種或多種；鳶尾甙的含量為10％～50％。其大孔樹脂制備工藝具有簡(jiǎn)單、方便，重現(xiàn)性好，有效地富集了黃酮類成分，祛除了其非黃酮類成分如鳶尾醛等三萜類化合物、甾體等，成品質(zhì)量易控制，含量高，提取效率高，可工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明還提供了包含所述射干總黃酮提取物的藥物組合物。該射干總黃酮提取物具有良好的抗骨質(zhì)疏松作用、抗炎作用和抗心腦缺血作用，可廣泛用于治療和/或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥、各種炎癥以及心腦血管疾病。
文檔編號(hào)C07H17/00GK1687099SQ20051005672
公開日2005年10月26日 申請(qǐng)日期2005年3月24日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月24日
發(fā)明者嚴(yán)啟新, 趙金華, 張麗娟, 李靖, 馮漢林, 于琳, 林永成 申請(qǐng)人:深圳海王藥業(yè)有限公司