專利名稱：一種鼠抗黃曲霉毒素b的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種采用小鼠骨髓瘤細(xì)胞直接接種已免疫產(chǎn)生了抗體的小鼠制備鼠抗黃曲霉毒素B1腹水多克隆抗體的方法。
背景技術(shù)：
真菌毒素是產(chǎn)毒真菌分泌產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，是能引起人畜各種損害的天然有毒化合物。在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的真菌毒素中黃曲霉毒素B1(aflatoxin B1，簡(jiǎn)稱AFB1)是毒性最強(qiáng)的真菌毒素，其毒性、致癌性和污染頻率均居生物毒素的首位。它污染食品及飼料后，直接或間接進(jìn)入人類食品鏈，威脅人類的健康和生命安全，危害程度與黃曲霉毒素的攝入量成正比。黃曲霉毒素廣泛存在與大米、玉米、花生、芝麻、大豆、菜籽等農(nóng)產(chǎn)品和魚(yú)肉等食品中，其污染食品及飼料的環(huán)節(jié)多，為此世界各國(guó)都規(guī)定了黃曲霉毒素B1食品及飼料中的最大允許含量并作為強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)，因此加強(qiáng)對(duì)食品及飼料中黃曲霉毒素B1的檢測(cè)、特別是速測(cè)，以便即使了解和掌握食品及飼料的衛(wèi)生信息，是增強(qiáng)食品安全性的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。
現(xiàn)有技術(shù)中常用的黃曲霉毒素B1檢測(cè)技術(shù)主要有薄層層析法、精密儀器分析法、免疫學(xué)分析法。其中免疫學(xué)分析法克服了前兩者的缺點(diǎn)，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、樣品前處理簡(jiǎn)單、成本低、對(duì)實(shí)驗(yàn)人員和環(huán)境的污染危害小、適于現(xiàn)場(chǎng)批量檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)。其中，放射免疫測(cè)定法和酶聯(lián)免疫測(cè)定法曾被喻為二十世紀(jì)九十年代分析技術(shù)的一次變革；近年免疫分析技術(shù)研究進(jìn)展迅速，免疫親和微球純化及檢測(cè)技術(shù)又以更短的檢測(cè)時(shí)間和更準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果顯示出更大的應(yīng)用價(jià)值和應(yīng)用前景。但要研究建立黃曲霉毒素B1的任何一種免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，都必須先制備足夠的抗黃曲霉毒素B1抗體作為試驗(yàn)材料。
國(guó)內(nèi)外現(xiàn)有制備抗黃曲霉毒素B1抗體技術(shù)主要有以下兩種(1)利用大白兔、雞等成功制備抗AFB1血清多克隆抗體技術(shù)。大白兔、雞血量較充足，可收獲較多的多抗血清，但需要消耗較多昂貴的抗黃曲霉毒素B1的合成抗原，一般每次免疫抗原用量在500-2500μg，需要免疫4-7次；(2)采用B-淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備小鼠抗AFB1的腹水單克隆抗體技術(shù)。這種采用小鼠制備抗AFB1單克隆抗體的方法消耗黃曲霉毒素B1的人工免疫抗原也較少，但由于B-淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)中的細(xì)胞融合及篩選等環(huán)節(jié)技術(shù)難度高、要求嚴(yán)格，一般實(shí)驗(yàn)室的普通研究人員難以掌握和制備成功。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)存在的不足而提供一種免疫抗原用量少，成功率高、制備方法簡(jiǎn)單，抗體收獲量較大的鼠抗黃曲霉毒素B1腹水多克隆抗體的制備方法。
本發(fā)明為解決上述提出的問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為(1)取純種小鼠，按常規(guī)方法預(yù)養(yǎng)和篩選，篩選方法預(yù)養(yǎng)期間，用間接酶聯(lián)免疫固相吸附試驗(yàn)(間接ELISA)或雙向免疫瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)小鼠血清與人工免疫抗原的交叉反應(yīng)情況，將存在交叉反應(yīng)的小鼠淘汰，所述的人工免疫抗原為黃曲霉毒素B1與牛血清白蛋白的連接物(簡(jiǎn)寫(xiě)為AFB1-BSA)；(2)取篩選合格的小鼠進(jìn)行免疫注射，每次免疫注射間隔周期為15-30天，在每次或第二次以后的每次免疫注射后第8-14天，取小鼠血清檢測(cè)抗黃曲霉毒素B1血清多克隆抗體的效價(jià)，直至檢測(cè)到抗體的間接ELISA效價(jià)達(dá)到1∶4000以上或抗體的雙向免疫瓊脂擴(kuò)散效價(jià)達(dá)到1∶8以上，在此以后的一次免疫注射即為最后一次免疫注射，免疫注射方法第一次免疫注射，用無(wú)菌生理鹽水溶解人工免疫抗原AFB1-BSA配制成人工免疫抗原溶液，每毫升人工免疫抗原溶液中按重量計(jì)含AFB1-BSA為0.8-2毫克，向人工免疫抗原溶液加入等體積弗氏完全佐劑進(jìn)行乳化，制備成人工免疫抗原乳化液A，用人工免疫抗原乳化液A進(jìn)行皮下免疫注射，每只小鼠注射量為0.1-0.3ml；第二次及以后免疫注射時(shí)，用無(wú)菌生理鹽水溶解人工免疫抗原AFB1-BSA配制成人工免疫抗原溶液，每毫升人工免疫抗原溶液中按重量計(jì)含AFB1-BSA為0.8-2毫克，向人工免疫抗原溶液加入等體積弗氏不完全佐劑進(jìn)行乳化，制備成人工免疫抗原乳化液B，用人工免疫抗原乳化液B進(jìn)行腹腔免疫注射，每只小鼠注射量為0.1-0.3ml，最后一次腹腔免疫注射(已檢測(cè)到抗體的間接ELISA效價(jià)達(dá)到1∶4000以上或抗體的雙向免疫瓊脂擴(kuò)散效價(jià)達(dá)到1∶8以上之后的一次)量為以前注射量(0.1-0.3ml)的1.2-2倍；(3)鼠抗黃曲霉毒素B1腹水多克隆抗體的制備，在進(jìn)行最后一次腹腔免疫注射之前的第3-15天內(nèi)給小鼠腹腔注射液體石蠟0.4-0.6ml，在進(jìn)行最后一次腹腔免疫注射之前第8天到之后第4天內(nèi)(注射液體石蠟后)再給小鼠腹腔直接注射(1-10)×106個(gè)活的鼠骨髓瘤細(xì)胞，5-10天后每天觀察小鼠腹水產(chǎn)生情況，及時(shí)采集小鼠產(chǎn)生的腹水，可反復(fù)采集腹水，腹水中含抗黃曲霉毒素B1多克隆抗體；
(4)將所采集的小鼠腹水離心分離，取上清分裝，上清液中含有抗黃曲霉毒素B1腹水多克隆抗體，冷凍干燥后或直接低溫保存，即完成抗黃曲霉毒素B1多克隆抗體的制備。
按上述方案，所述免疫注射的次數(shù)為3-7次；所述的皮下免疫注射為頸背部皮下免疫注射；所述的活的鼠骨髓瘤細(xì)胞為處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的鼠骨髓瘤細(xì)胞；所述的反復(fù)采集腹水的間隔時(shí)間為1-4天，反復(fù)采集的次數(shù)為3-7次；所述的離心分離轉(zhuǎn)速為5000r/min以上，離心后取上清分裝，分別標(biāo)記抗體效價(jià)和采集日期，冷凍干燥后或直接保存于低溫冰箱。
按上述方案，所述的弗氏完全佐劑由弗氏不完全佐劑加入活卡介苗或死的結(jié)核分枝桿菌混合而成，最終濃度為2-20mg/ml；121℃滅菌15min后低溫保存?zhèn)溆谩?br> 所述的弗氏不完全佐劑由油劑石蠟油與乳化劑污水羊毛脂混合而成，混合比例最常用的是2∶1；121℃滅菌15min后低溫保存?zhèn)溆谩?br> 弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑也可從市場(chǎng)上直接購(gòu)得。
本發(fā)明采用人工免疫抗原黃曲霉毒素B1與牛血清白蛋白的連接物免疫小鼠產(chǎn)生了抗黃曲霉毒素B1血清抗體，給小鼠腹腔接種鼠骨髓瘤細(xì)胞，使小鼠產(chǎn)生腹水。小鼠抗黃曲霉毒素B1多克隆抗體隨腹水的分泌進(jìn)入腹腔中，通過(guò)采集腹水制備出抗黃曲霉毒素B1多克隆抗體。
本發(fā)明的有益效果在于(1)節(jié)約免疫抗原。對(duì)難以獲得的、昂貴的黃曲霉毒素B1人工免疫抗原尤其合適。每只小鼠每次人工免疫抗原的用量不超過(guò)250μg，而免疫其它動(dòng)物(如兔、雞等)制備多克隆抗體每次需500-2500μg。
(2)成功率高。用于1只兔免疫3次以內(nèi)的黃曲霉毒素B1人工免疫抗原極難使1只兔產(chǎn)生質(zhì)量合格的抗體，但同樣量的黃曲霉毒素B1免疫抗原足夠10只以上BALB/C小鼠免疫5次，按80％免疫成功率計(jì)算，獲得質(zhì)量合格抗體的成功幾率大大提高。
(3)制備方法簡(jiǎn)單，抗體收獲量較大。經(jīng)過(guò)3-7次免疫注射，當(dāng)檢測(cè)到小鼠抗黃曲霉毒素B1血清抗體達(dá)到較高效價(jià)時(shí)，通過(guò)直接給小鼠腹腔注射液體石蠟和接種小鼠骨髓瘤細(xì)胞以及最后一次加大劑量的免疫注射，制備小鼠抗黃曲霉毒素B1腹水多克隆抗體，使得每只小鼠總計(jì)可采到效價(jià)與血清多克隆抗體效價(jià)相當(dāng)?shù)母顾嗫寺】贵w2ml-8ml；而按常規(guī)制備血清多克隆抗體的方法，實(shí)際每只小鼠只能獲得0.4-1.2ml的血清抗體。本方法與采用B-淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體相比，省去了復(fù)雜繁瑣的細(xì)胞融合及篩選的過(guò)程，制備過(guò)程和方法相對(duì)簡(jiǎn)單，更易實(shí)現(xiàn)。
(4)抗黃曲霉毒素B1腹水多克隆抗體經(jīng)過(guò)純化后，通過(guò)化學(xué)方法與氨基修飾的硅膠微球共價(jià)偶聯(lián)制備出黃曲霉毒素B1免疫親和微球；將黃曲霉毒素B1免疫親和微球作為填料制備成黃曲霉毒素B1免疫親和微柱，用于糧油及飼料中黃曲霉毒素B1的快速檢測(cè)方法中。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合附圖
進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例。
實(shí)施例1(1)取6-7周齡雌性Balb/c純種小白鼠12只，預(yù)養(yǎng)7-8天，負(fù)壓采小白鼠尾血，以6000r/min離心30min分離血清，分裝，低溫保存?zhèn)溆谩Ｈ∩倭垦宀捎瞄g接酶聯(lián)免疫固相吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清與人工免疫抗原的交叉反應(yīng)，將存在交叉反應(yīng)的1只小鼠淘汰。人工免疫抗原為黃曲霉毒素B1與牛血清白蛋白的連接物(簡(jiǎn)寫(xiě)為AFB1-BSA)。
(2)取通過(guò)篩選的Balb/c純種小白鼠，進(jìn)行免疫注射，每次免疫間隔周期為26-30天。
第一次免疫注射時(shí)，用無(wú)菌生理鹽水溶解人工免疫抗原AFB1-BSA，配制成人工免疫抗原溶液，每毫升人工免疫抗原溶液中按重量計(jì)含AFB1-BSA為1.0-1.2毫克，將等體積弗氏完全佐劑加入人工免疫抗原溶液中進(jìn)行乳化，制備成人工免疫抗原乳化液A。給每只小白鼠頸背部皮下免疫注射0.1-0.2毫升人工免疫抗原乳化液A。
第二次及以后免疫注射，用無(wú)菌生理鹽水溶解人工免疫抗原AFB1-BSA，配制人工免疫抗原溶液，每毫升人工免疫抗原溶液中按重量計(jì)含AFB1-BSA為1.0-1.3毫克；向人工免疫抗原溶液中加入等體積弗氏不完全佐劑進(jìn)行乳化，制備成人工免疫抗原乳化液B。給每只小白鼠腹腔免疫注射0.1-0.2毫升人工免疫抗原乳化液B。自第二次免疫后，每次免疫注射后第9-12天采血，分離血清，采用間接酶聯(lián)免疫固相吸附試驗(yàn)檢測(cè)抗黃曲霉毒素B1抗體，全體試驗(yàn)小鼠抗體呈陽(yáng)性。
(3)第四次免疫注射后第8天采小白鼠尾血，分離血清，采用間接酶聯(lián)免疫固相吸附試驗(yàn)檢測(cè)抗黃曲霉毒素B1抗體，抗體效價(jià)達(dá)到了1∶4200，在第四次免疫注射之后第26-28天，進(jìn)行最后一次免疫注射，給每只小白鼠腹腔免疫注射0.2-0.3毫升人工免疫抗原乳化溶液B。在進(jìn)行最后一次免疫注射之前第13-15天內(nèi)，給小鼠腹腔注射液體石蠟0.5-0.6毫升；在進(jìn)行最后一次免疫注射之前第5-8天內(nèi)再給小鼠腹腔注射約(1-3)×106個(gè)處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的P3-X63-Ag8.653小鼠骨髓瘤細(xì)胞。從給小鼠腹腔注射小鼠骨髓瘤細(xì)胞當(dāng)天起的第9-10天，觀察到小鼠腹部膨大，產(chǎn)生了腹水。及時(shí)采集腹水，每2-4天采集一次，反復(fù)采腹水3-6次。
(4)每次采集的腹水在4℃下以8000r/min轉(zhuǎn)速離心分離10min，取腹水上清分裝，留少量腹水采用間接ELISA檢測(cè)腹水中抗黃曲霉毒素B1多克隆抗體效價(jià)，其余置-70℃低溫冰箱保存?zhèn)溆?。?jì)算出從每只小鼠采集分離到間接ELISA效價(jià)達(dá)到了1∶4200的腹水多克隆抗體的總體積從3.5-7.5毫升不等，分別標(biāo)記抗體效價(jià)和采集日期。
實(shí)施例2(1)取5-6周齡Balb/c-nude裸小鼠15只，預(yù)養(yǎng)9-10天，負(fù)壓采小鼠尾血，以6000r/min離心30min分離血清，分裝，低溫保存?zhèn)溆?。取少量血清采用雙向免疫瓊脂擴(kuò)散法檢測(cè)血清與人工免疫抗原的交叉反應(yīng)，結(jié)果是15只小鼠與人工免疫抗原都不存在交叉反應(yīng)。
(2)取通過(guò)篩選的Balb/c-nude裸小鼠，進(jìn)行免疫注射，每次免疫注射間隔周期為20-24天。
第一次免疫注射時(shí)，用無(wú)菌生理鹽水溶解人工免疫抗原AFB1-BSA配制成人工免疫抗原溶液，使每毫升人工免疫抗原溶液中按重量計(jì)含AFB1-BSA1.6-1.9毫克，將等體積弗氏完全佐劑加入人工免疫抗原溶液進(jìn)行乳化，制備成人工免疫抗原乳化液A。然后，以每只小鼠0.10-0.12ml人工免疫抗原乳化液A的劑量，給Balb/c-nude裸小鼠進(jìn)行頸背部皮下免疫注射。
第二次及以后免疫注射時(shí)，用無(wú)菌生理鹽水溶解人工免疫抗原AFB1-BSA配制成人工免疫抗原溶液，使每毫升人工免疫抗原溶液中按重量計(jì)含AFB1-BSA1.6-1.9毫克；向人工免疫抗原溶液中加入等體積弗氏不完全佐劑進(jìn)行乳化，制備成人工免疫抗原乳化液B。以每只0.10-0.12毫升人工免疫抗原乳化液B的劑量，對(duì)Balb/c-nude裸小鼠進(jìn)行腹腔免疫注射。自第二次免疫注射后，每次免疫注射后第8-10天采血，分離血清后，采用雙向免疫瓊脂擴(kuò)散法檢測(cè)抗黃曲霉毒素B1多克隆抗體，淘汰1只抗體呈陰性的小鼠。
(3)第五次免疫注射后第10天負(fù)壓采尾血，6000r/min轉(zhuǎn)速離心30min分離血清，采用雙向免疫瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)小鼠抗黃曲霉毒素B1血清抗體的效價(jià)達(dá)到1∶16；在第五次免疫注射時(shí)間之后第20-24天，進(jìn)行最后一次腹腔免疫注射，人工免疫抗原乳化液B用量增加到0.20-0.24毫升。在進(jìn)行最后一次免疫注射之前4-7天，給小鼠腹腔注射液體石蠟0.4-0.5毫升；在進(jìn)行最后一次免疫注射之后2-4天再給小鼠腹腔注射(5-7)×106個(gè)活的SP2/0-Ag14小鼠骨髓瘤細(xì)胞。6-8天后每天觀察小鼠產(chǎn)生了腹水，及時(shí)采集腹水。每1-3天采集一次，重復(fù)采集腹水3-5次。
(4)每次采的腹水在4℃下，以7000r/min轉(zhuǎn)速離心分離20min，取腹水上清，分裝，取少量檢測(cè)腹水中抗黃曲霉毒素B1多克隆抗體雙向免疫瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)的效價(jià)，其余冷凍干燥后置-40℃低溫冰箱保存。計(jì)算出從每只小鼠采集分離到雙向免疫瓊脂擴(kuò)散效價(jià)達(dá)到1∶16的腹水多克隆抗體的體積從2.5-6.5毫升不等，分別記錄和標(biāo)記抗體效價(jià)和采集日期。
權(quán)利要求
1.一種鼠抗黃曲霉毒素B1腹水多克隆抗體的制備方法，其特征在于(1)取純種小鼠，按常規(guī)方法預(yù)養(yǎng)和篩選，篩選方法預(yù)養(yǎng)期間，用間接酶聯(lián)免疫固相吸附試驗(yàn)或雙向免疫瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)小鼠血清與人工免疫抗原的交叉反應(yīng)情況，將存在交叉反應(yīng)的小鼠淘汰，所述的人工免疫抗原為黃曲霉毒素B1與牛血清白蛋白的連接物；(2)取篩選合格的小鼠進(jìn)行免疫注射，每次免疫注射間隔周期為15-30天，在每次或第二次以后的每次免疫注射后第8-14天，取小鼠血清檢測(cè)抗黃曲霉毒素B1血清多克隆抗體的效價(jià)，直至檢測(cè)到抗體的間接ELISA效價(jià)達(dá)到1∶4000以上或抗體的雙向免疫瓊脂擴(kuò)散效價(jià)達(dá)到1∶8以上，在此以后的一次免疫注射即為最后一次免疫注射，免疫注射方法第一次免疫注射，用無(wú)菌生理鹽水溶解人工免疫抗原AFB1-BSA配制成人工免疫抗原溶液，每毫升人工免疫抗原溶液中按重量計(jì)含AFB1-BSA為0.8-2毫克，向人工免疫抗原溶液加入等體積弗氏完全佐劑進(jìn)行乳化，制備成人工免疫抗原乳化液A，用人工免疫抗原乳化液A進(jìn)行皮下免疫注射，每只小鼠注射量為0.1-0.3ml；第二次及以后免疫注射時(shí)，用無(wú)菌生理鹽水溶解人工免疫抗原AFB1-BSA配制成人工免疫抗原溶液，每毫升人工免疫抗原溶液中按重量計(jì)含AFB1-BSA為0.8-2毫克，向人工免疫抗原溶液加入等體積弗氏不完全佐劑進(jìn)行乳化，制備成人工免疫抗原乳化液B，用人工免疫抗原乳化液B進(jìn)行腹腔免疫注射，每只小鼠注射量為0.1-0.3ml，最后一次腹腔免疫注射量為以前注射量的1.2-2倍；(3)鼠抗黃曲霉毒素B1腹水多克隆抗體的制備，在進(jìn)行最后一次腹腔免疫注射之前的第3-1 5天內(nèi)給小鼠腹腔注射液體石蠟0.4-0.6ml，在進(jìn)行最后一次腹腔免疫注射之前第8天到之后第4天內(nèi)(注射液體石蠟后)再給小鼠腹腔直接注射(1-10)×106個(gè)活的鼠骨髓瘤細(xì)胞，5-10天后每天觀察小鼠腹水產(chǎn)生情況，及時(shí)采集小鼠產(chǎn)生的腹水，可反復(fù)采集腹水，腹水中含抗黃曲霉毒素B1多克隆抗體；(4)將所采集的小鼠腹水離心分離，取上清分裝，上清液中含有抗黃曲霉毒素B1腹水多克隆抗體，冷凍干燥后或直接低溫保存，即完成抗黃曲霉毒素B1多克隆抗體的制備。
2.按權(quán)利要求1所述的鼠抗黃曲霉毒素B1腹水多克隆抗體的制備方法，其特征在于所述免疫注射的次數(shù)為3-7次。
3.按權(quán)利要求1或2所述的鼠抗黃曲霉毒素B1腹水多克隆抗體的制備方法，其特征在于所述的皮下免疫注射為頸背部皮下免疫注射。
4.按權(quán)利要求1或2所述的鼠抗黃曲霉毒素B1腹水多克隆抗體的制備方法，其特征在于所述的活的鼠骨髓瘤細(xì)胞為處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的鼠骨髓瘤細(xì)胞。
5.按權(quán)利要求1或2所述的鼠抗黃曲霉毒素B1腹水多克隆抗體的制備方法，其特征在于所述的反復(fù)采集腹水的間隔時(shí)間為2-4天，反復(fù)采集的次數(shù)為3-7次。
6.按權(quán)利要求1或2所述的鼠抗黃曲霉毒素B1腹水多克隆抗體的制備方法，其特征在于所述的離心分離轉(zhuǎn)速為5000r/min以上。
7.按權(quán)利要求1或2所述的鼠抗黃曲霉毒素B1腹水多克隆抗體的制備方法，其特征在于第一次免疫注射時(shí)，每毫升人工免疫抗原溶液中按重量計(jì)含AFB1-BSA為1.0-1.2毫克，給每只小白鼠頸背部皮下免疫注射0.1-0.2毫升人工免疫抗原乳化液A，第二次及以后免疫注射，每毫升人工免疫抗原溶液中按重量計(jì)含AFB1-BSA為1.0-1.3毫克，給每只小白鼠腹腔免疫注射0.1-0.2毫升人工免疫抗原乳化液B，最后一次免疫注射，給每只小白鼠腹腔免疫注射0.2-0.3毫升人工免疫抗原乳化溶液B，在進(jìn)行最后一次免疫注射之前第13-15天內(nèi)，給小鼠腹腔注射液體石蠟0.5-0.6毫升；在進(jìn)行最后一次免疫注射之前第5-8天內(nèi)再給小鼠腹腔注射約(1-3)×106個(gè)處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的P3-X63-Ag8.653小鼠骨髓瘤細(xì)胞。
8.按權(quán)利要求1或2所述的鼠抗黃曲霉毒素B1腹水多克隆抗體的制備方法，其特征在于第一次免疫注射時(shí)，使每毫升人工免疫抗原溶液中按重量計(jì)含AFB1-BSA 1.6-1.9毫克，以每只小鼠0.10-0.12ml人工免疫抗原乳化液A的劑量，給小鼠進(jìn)行頸背部皮下免疫注射，第二次及以后免疫注射時(shí)，使每毫升人工免疫抗原溶液中按重量計(jì)含AFB1-BSA 1.6-1.9毫克，以每只0.10-0.12毫升人工免疫抗原乳化液B的劑量，對(duì)小鼠進(jìn)行腹腔免疫注射，最后一次腹腔免疫注射，人工免疫抗原乳化液B用量增加到0.20-0.24毫升，在進(jìn)行最后一次免疫注射之前4-7天，給小鼠腹腔注射液體石蠟0.4-0.5毫升；在進(jìn)行最后一次免疫注射之后2-4天再給小鼠腹腔注射(5-7)×106個(gè)活的SP2/0-Ag14小鼠骨髓瘤細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種制備鼠抗黃曲霉毒素B
文檔編號(hào)C07K16/14GK1696157SQ20051001861
公開(kāi)日2005年11月16日 申請(qǐng)日期2005年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月26日
發(fā)明者李培武, 楊金娥, 張文, 丁小霞, 謝立華, 楊湄, 李光明 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所