專利名稱：含異噁唑啉環(huán)的胱天蛋白酶抑制物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及作為針對多種胱天蛋白酶的抑制物的異唑啉衍生物、制備它的方法、以及包含它且用于預防炎癥和凋亡的治療性組合物，其中所述胱天蛋白酶包括胱天蛋白酶-1[白介素-1β轉化酶，ICE]和胱天蛋白酶-3[凋亡酶/CPP-32]。
背景技術：
胱天蛋白酶是最近十年間發(fā)現(xiàn)的α2β2形式的一類新型半胱氨酸蛋白酶。至盡已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了大約14類胱天蛋白酶。其中之一，胱天蛋白酶-1(ICE)是一類細胞因子，參與將無活性的白介素原-1β轉變成有活性的白介素-1β。白介素-1由白介素-1α和白介素-1β組成，二者都是在單核細胞中以31kDa的前體的形式合成的。只有白介素原-1β被ICE激活。被胱天蛋白酶-1水解的位置是Asp27-Gly28和Asp116-Ala117。后一個位置的水解產(chǎn)生白介素-1β。已有報道，白介素-1β在引起發(fā)炎中擔當重要介體(1，3)。胱天蛋白酶-1在1989年首次發(fā)現(xiàn)，而且是由兩個獨立的研究小組發(fā)現(xiàn)的，已經(jīng)通過X射線晶體學方法測定了它的三維結構。
胱天蛋白酶-3(CPP-32)的作用或作用機制得到廣泛研究，而且在1996年已經(jīng)測定了它的三維結構(2)。由胱天蛋白酶原-3激活得到的胱天蛋白酶-3(凋亡酶)水解(P4)Asp-X-X-Asp(P1)基序，已知的底物包括多(ADP-核糖)聚合酶、U1 70,000 Mr小核內核糖核蛋白、460,000 Mr DNA依賴性蛋白激酶的催化亞基等。已有報道，胱天蛋白酶-7的X射線結構與胱天蛋白酶-3非常相似(4)。
胱天蛋白酶-8和9存在于胱天蛋白酶-3、6、7的上游，而且已知這些胱天蛋白酶參與凋亡級聯(lián)反應。已經(jīng)在1999年測定了胱天蛋白酶-8的X射線結構(5)，特別是，它的抑制物可有利地用于治療凋亡相關疾病。
胱天蛋白酶抑制物指抑制胱天蛋白酶活性從而控制由胱天蛋白酶活性引起的諸如炎癥、凋亡等癥狀的那些化合物。可以通過施用抑制物來治療或削弱的疾病或癥狀包括類風濕性關節(jié)炎、炎性腸病、移植物抗宿主疾病、敗血癥、骨關節(jié)炎、骨質疏松、急性和慢性髓細胞性白血病、腦膜炎、輸卵管炎、感染性休克、膽管炎、結腸炎、腦炎、心內膜炎、腎小球腎炎、肝炎、心肌炎、胰腺炎、I型糖尿病、多發(fā)性硬化癥、阿爾茨海默病、帕金森病、肝硬化(6)。
在至今已知的胱天蛋白酶抑制物中，最著名的不可逆抑制物是 IDN-1965MX-1013上面兩種抑制物通過相同的機制來展示它們的活性，即它們不可逆的滅活酶從而抑制細胞凋亡(不可逆的廣譜抑制物)。已有報道，在比較不可逆與可逆抑制物時，不可逆抑制物具有有效得多的抑制活性(7)。據(jù)報道，IDUN公司的IDN-1965和Maxim公司的MX-1013在肝損傷的細胞凋亡模型中都顯示活性(8，9)。這些化合物目前處于臨床前測試階段。其結構最近被報道的不可逆抑制物I DN-6556作為肝損傷的治療劑目前處于II期臨床測試階段(10，11)。
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發(fā)明公開本發(fā)明人最近設計并合成了一些化合物，它們可用作胱天蛋白酶的有效抑制劑且具有獨特的結構和針對類似酶的高度選擇性，并測定了它們對胱天蛋白酶的結合能力和抑制活性。結果是，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)符合如下通式(1)的化合物確實達到了這些要求，并且完成了本發(fā)明。
其中A、B、R、R1、R2、和X的定義與下文所述相同。
因此，本發(fā)明提供了具有針對胱天蛋白酶的有效抑制活性的符合通式(1)的新型異唑啉衍生物、其鹽或立體異構體。
本發(fā)明的另一個目的是提供制備符合通式(1)的化合物、其鹽或立體異構體的方法。
本發(fā)明的還有一個目的是提供用于抑制胱天蛋白酶的組合物、用途、或方法，具體而言就是包含符合通式(1)的化合物、其鹽或立體異構體作為活性成分以及制藥學可接受載體且用于預防炎癥和凋亡的治療性組合物、用途、或方法。
附圖簡述

圖1顯示了化合物(Iii)對由膽汁停滯引起的肝纖維化的抑制活性圖1中的“a)”描繪了假手術的情況，“b)”描繪了結扎膽管后只施用載體的BDL手術的情況，“c)”描繪了結扎膽管1周后每天兩次以3mg/kg的劑量口服施用化合物(Iii)達1周的情況，而“d)”描繪了結扎膽管1周后每天兩次以10mg/kg的劑量口服施用化合物(Iii)達1周的情況。
圖2顯示了化合物(Iii)對由膽汁停滯引起的肝細胞凋亡的抑制活性圖2中的“a)”描繪了假手術的情況，“b)”描繪了結扎膽管后只施用載體的BDL手術的情況，“c)”描繪了結扎膽管1周后每天兩次以3mg/kg的劑量口服施用化合物(Iii)達1周的情況，“d)”描繪了結扎膽管1周后每天兩次以10mg/kg的劑量口服施用化合物(Iii)達1周的情況，而圖“e)”顯示了每個處理組中進行凋亡的肝細胞數(shù)目。
實施本發(fā)明的最佳方式在詳細闡述本發(fā)明之前，先定義下列重要術語a)簡單烷基鏈(下文縮寫為SAC)指線性或支化異構體形式的具有1-8個碳原子的烴。
b)簡單環(huán)烷基鏈(下文縮寫為SCAC)指具有3-10個碳原子的環(huán)狀基團。
c)芳基(下文縮寫為Ar)包括芳香基和雜環(huán)芳香基二者。芳香基指5至15元單個或稠的不飽和環(huán)。一個或多個氫可以用選自下列的基團取代?；?、氨基、烷氧羰基、羧基、羧基氨基、氰基、鹵素、羥基、硝基、巰基、烷基、環(huán)烷基、烷氧基、芳氧基、亞硫?；?sulfoxy)、和胍基。雜環(huán)芳香基指含有1-5個選自下組的雜原子的芳香基氧、硫、和氮。同樣的，一個或多個氫可以用選自下列的基團取代?；被?、烷氧羰基、羧基、羧基氨基、氰基、鹵素、羥基、硝基、巰基、烷基、環(huán)烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、亞硫酰基(sulfoxy)、和胍基?；蛘?，例如，在吡啶基的情況中，可以向氮原子添加烷基而將吡啶基轉變成在氮原子處具有(+)電荷的吡啶基團。
芳基包括苯基、聯(lián)苯基、1-萘基、2-萘基、吡啶基、N-烷基-吡啶、嘧啶基、喹啉基、苯并噻吩基、吲哚基、吡嗪基、異吲哚基、異喹啉基、喹唑啉基(qunazolinyl)、喹喔啉基、酞嗪基、咪唑啉基、異唑基、吡唑基、唑基、噻唑基、中氮茚基、吲唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噻吩基、吡咯基、二唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、唑并吡啶基(oxazolopyridinyl)、咪唑并吡啶基、異噻唑基、肉啉基、咔唑基、異苯并二氫吡喃基、苯并二氫吡喃基、四氫異喹啉基、異吲哚啉基、異苯并四氫呋喃基、異苯并四氫噻吩基、異苯并噻吩基、苯并唑基、吡啶并吡啶基、苯并四氫呋喃基、苯并四氫噻吩基、嘌呤基、苯并間二氧雜環(huán)戊烯基(benzodioxolyl)、三嗪基、吩嗪基、吩噻嗪基、蝶啶基、苯并噻唑基、咪唑并吡啶基、咪唑并噻唑基、二氫苯并異嗪基、苯并異嗪基、苯并嗪基、二氫苯并異噻喃基、苯并吡喃基、苯并噻喃基、香豆素基、異香豆素基、色酮基、苯并二氫吡喃-4-酮基、吡啶基-N-氧化物、四氫喹啉基-N-氧化物、二氫喹啉基、二氫喹啉酮基(dihydroquinolinonyl)、二氫異喹啉酮基(dihydroisoquinolinonyl)、二氫香豆素基、二氫異香豆素基、異吲哚滿酮基、苯并二烷基、苯并唑啉酮基(benzoxazolinonyl)、N-烷基-吡啶、吡咯基-N-氧化物、嘧啶基-N-氧化物、吡嗪基-N-氧化物、喹啉基-N-氧化物、吲哚基-N-氧化物、吲哚啉基-N-氧化物、異喹啉基-N-氧化物、喹唑啉基-N-氧化物、喹喔啉基-N-氧化物、酞嗪基-N-氧化物、咪唑啉基-N-氧化物、異唑基-N-氧化物、唑基-N-氧化物、噻唑基-N-氧化物、中氮茚基-N-氧化物、吲唑基-N-氧化物、苯并噻唑基-N-氧化物、苯并咪唑基-N-氧化物、吡咯基-N-氧化物、二唑基-N-氧化物、噻二唑基-N-氧化物、三唑基-N-氧化物、四唑基-N-氧化物等。
d)用芳基取代的簡單烷基鏈(下文縮寫為SAC-Ar)指具有1-8個碳原子且用上文所述芳基取代的直鏈或支化的烷基。
e)天然氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、和色氨酸。
f)簡單酯的保護基團指線性或支化異構體形式的具有1-8個碳原子的烴。
另外，本說明書還包括下列縮寫
N-氯琥珀酰亞胺NCSN-甲基嗎啉NMMO-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲(tetramethyluronium)六氟磷酸鹽HATUN，N-二甲基甲酰胺DMF1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺EDC1-羥基苯并三唑水合物HOBt三氟乙酸TFA叔丁氧基羰基Boc芐氧基羰基Cbz甲基Me乙基Et當量Eq上文通式(1)中所包含的取代基明確定義如下I)R代表H、簡單烷基鏈(-SAC)、簡單環(huán)烷基鏈(-SCAC)、芳基(-Ar)、或用芳基取代的簡單烷基鏈(-SAC-Ar)，II)R1代表-SAC、-SCAC、-Ar、-SAC-Ar、或所有天然氨基酸的側鏈殘基；且當R1所附著的碳由于R1基團而變成立構中心時，符合通式(1)的化合物可以以特定非對映形或其混合物存在；或者，當R1是含羧基部分的氨基酸的側鏈殘基時，符合通式(1)的化合物可以具有酯形式(-CO2R3，其中R3是-SAC)或磺酰胺形式(-CONHSO2R4，其中R4是-SAC)的保護基團，或可以以制藥學可接受鹽的形式存在；或者，當R1是含堿部分的氨基酸的側鏈殘基時，符合通式(1)的化合物也可以以制藥學可接受鹽的形式存在，III)R2代表-SAC、-SCAC、-Ar、-SAC-Ar、或天然氨基酸的側鏈殘基；且當R2所附著的碳由于R2基團而變成立構中心時，符合通式(1)的化合物可以以特定非對映形或其混合物存在；當R2是含羧基部分的氨基酸的側鏈殘基時，符合通式(1)的化合物可以具有酯形式(-CO2R5，其中R5是-SAC)或磺酰胺形式(-CONHSO2R6，其中R6是-SAC)的保護基團，或可以以制藥學可接受鹽的形式存在；或者，當R2是含堿部分的氨基酸的側鏈殘基時，符合通式(1)的化合物也可以以制藥學可接受鹽的形式存在，或者R2進一步代表H；-(CH2)nOR7，其中R7是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar，且n＝1或2；或-(CH2)nOC(＝O)R8，其中R8是-SAC、-SCAC、-Ar 、或-SAC-Ar，且n＝1或2，IV)A代表-(CH2)n-(n＝0-4)、-O-(CH2)n-(n＝0-4)、或-NR9-(CH2)n-(n＝0-4)，其中R9是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar，V)B代表H、-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar，或者VI)R和R1可以與它們所附著的碳原子一起形成環(huán)，其中-R-R1-是-(CH2)n-、-(CH2)n-O-(CH2)m-、或-(CH2)n-NR10-(CH2)m-，其中n+m＜9且R10是-SAC、-SCAC、-Ar、-SAC-Ar、-C(＝O)-SAC、-C(＝O)-SCAC、-C(＝O)-Ar、或-C(＝O)-SAC-Ar，VII)X代表-C(＝O)CH2OR11，其中R11是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar；-C(＝O)CH2OC(＝O)R12，其中R12是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar；-CH＝CH-CO2R13，其中R13是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar；-CH＝CH-SO2R14，其中R14是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar；-C(＝O)CH＝CH2；或-COCH2-W，其中W是-N2、-F、-Cl、-Br、-I、-NR15R16(R15和R16各自是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar，或者可以一起形成3至6元飽和或不飽和環(huán)狀基團)、-SR17(R17是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar)，或是下列通式 其中Y是H、-OH、-OR18(R18＝-SAC或-SCAC)、-C(＝O)R19(R19＝-H、-SAC、或-SCAC)、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NC、-N3、-CO2H、-CF3、-CO2R20(R20＝-SAC或-SCAC)、-C(＝O)NHR21(R21＝-SAC或-SCAC)、或-C(＝O)NR22R23(R22和R23各自是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar)，R24是H、-SAC、-SAC-Ar、或-Ar。
在上文符合通式(1)的化合物的優(yōu)選化合物中R代表H；R1代表-CH2COOH、-CH2COOR3(R3＝SAC)、或-CH2CONHSO2R4(R4＝SAC)；R2代表H、-SAC、-Ar、或-(CH2)nOR7(R7＝-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar，且n＝1或2)；或者X代表-C(＝O)CH2OAr、-C(＝O)CH2OC(＝O)Ar、或-COCH2-W，其中W是-N2、-F、-Cl、-Br、-I、-NR15R16(R15和R16各自是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar，或者可以一起形成3至6元飽和或不飽和環(huán)狀基團)、或-SR17(R17是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar)。
在上文符合通式(1)的化合物的更加優(yōu)選的化合物中I)R代表H，II)R1代表-CH2COOH、-CH2COOR3(R3＝SAC)、或-CH2CONHSO2R4(R4＝SAC)，III)R2代表H、-SAC、-Ar、或-(CH2)nOR7(R7＝-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar，且n＝1或2)，IV)A代表-(CH2)n-(n＝0-4)或-O-(CH2)n-(n＝0-4)，V)B代表H、-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar，VI)X代表-COCH2N2、-COCH2F、-COCH2Cl、-COCH2Br、-COCH2I、-COCH2OAr、-COCH2OCOAr、或-COCH2SR17(R17是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar)。
特別優(yōu)選的化合物選自下組(1)(3S)-5-[(2，6-二氯苯甲酰)氧基]-3-({[5-甲基-3-苯基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iaa)；(2)(3S)-3-({[5-甲基-3-苯基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-苯氧基戊酸(Ibb)；(3)(3S)-3-({[5-乙基-3-苯基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(Icc)；
(4)(3S)-3-({[5-乙基-3-(1-萘基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(Idd)；(5)(3S)-3-({[5-乙基-3-(2-萘基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(Iee)；(6)(3S)-3-({[5-乙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(Iff)；(7)3-({[5-乙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Igg)；(8)3-({[5-乙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸乙酯(Ihh)；(9)5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iii)；(10)3-({[5-乙基-3-(4-喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Ijj)；(11)3-({[3-(苯并噻吩-2-基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Ikk)；(12)(3S)-3-({[3-(1，3-二甲基-1H-吲哚-2-基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(Ill)；(13)3-({[3-(1，3-二甲基-1H-吲哚-2-基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Imm)；(14)(3S)-3-({[5-乙基-3-(1-萘基甲基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(Inn)；(15)(3S)-5-[(2，6-二氯苯甲酰)氧基]-3-[({5-乙基-3-[2-(1-萘基)乙基]-4，5-二氫-5-異唑基}羰基)氨基]-4-氧戊酸(Ioo)；(16)(3S)-3-[({5-乙基-3-[(1-萘氧基)甲基]-4，5-二氫-5-異唑基}羰基)氨基]-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(Ipp)；
(17)(3S)-3-{[(3-{[(4-氯-1-萘基)氧基]甲基}-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基)羰基]氨基}-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(Iqq)；(18)(3S，4E)-6-乙氧基-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-6-氧-4-己烯酸(Irr)；(19)(3S，4E)-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-(甲磺?；?-4-戊烯酸(Iss)；(20)5-氟-3-({[(5S)-3-(1-異喹啉基)-5-丙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Itt)；(21)3-({[(5S)-5-乙基-3-(1-萘基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iuu)；(22)3-({[(5S)-5-乙基-3-(2-喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Ivv)；(23)3-({[(5R)-5-乙基-3-(3-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iww)；(24)3-({[5-乙基-3-(8-喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Ixx)；(25)3-({[5-乙基-3-(3-喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iyy)；(26)5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(2-喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Izz)；(27)3-({[5-乙基-3-(2-異丙基苯基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa1)；(28)3-[({3-[3-(叔丁基)苯基]-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基}羰基)氨基]-5-氟-4-氧戊酸(Iaa2)；(29)3-[({3-[4-(叔丁基)苯基]-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基}羰基)氨基]-5-氟-4-氧戊酸(Iaa3)；(30)5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(2-異丙基苯基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iaa4)；
(31)3-[({(5R)-3-[3-(叔丁基)苯基]-5-異丙基-4，5-二氫-5-異唑基}羰基)氨基]-5-氟-4-氧戊酸(Iaa5)；(32)3-{[(3-[1，1′-聯(lián)苯]-3-基-5-異丙基-4，5-二氫-5-異唑基)羰基]氨基}-5-氟-4-氧戊酸(Iaa6)；(33)3-({[5-乙基-3-(2-吡啶基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa7)；(34)3-[({3-[4-(叔丁基)-2-吡啶基]-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基}羰基)氨基]-5-氟-4-氧戊酸(Iaa8)；(35)3-[({(5R)-3-[4-(叔丁基)-2-吡啶基]-5-異丙基-4，5-二氫-5-異唑基}羰基)氨基]-5-氟-4-氧戊酸(Iaa9)；(36)3-({[5-乙基-3-(4-異丁基-2-吡啶基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa10)；(37)3-({[3-(4-乙酰基-2-吡啶基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa11)；(38)3-({[3-(4-環(huán)丙基-2-吡啶基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa12)；(39)3-({[3-(4-環(huán)戊基-2-吡啶基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa13)；(40)3-({[(5R)-3-(4-環(huán)戊基-2-吡啶基)-5-異丙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa14)；(41)3-({[3-(4-環(huán)己基-2-吡啶基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa15)；(42)3-({[5-乙基-3-(5，6，7，8-四氫-1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa16)；(43)5-氟-3-({[5-異丙基-3-(4-苯基-2-吡啶基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iaa17)；(44)(3S)-5-[(二苯基磷酰基)氧基]-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iaa18)；
(45)(3S)-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-{[1-苯基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-5-基]氧基}戊酸(Iaa19)；(46)(3S)-5-[(4-芐基-5-氧-2，5-二氫-3-呋喃基)氧基-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iaa20)；(47)(3S)-5-(異丁酰氧基)-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iaa21)；(48)(3S)-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-己烯酸(Iaa22)；(49)(3S)-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2-吡啶氧基)戊酸(Iaa23)；(50)(3S)-3-({[5-乙基-3-(2-異丙基苯基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2-吡啶氧基)戊酸(Iaa24)；(51)2-{[(3S)-4-羧基-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-2-氧代丁基]氧基}-1-甲基吡啶三氟甲磺酸鹽(Iaa25)；(52)2-{[(3S)-4-羧基-3-({[5-乙基-3-(2-異丙基苯基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-2-氧代丁基]氧基}-1-甲基吡啶三氟甲磺酸鹽(Iaa26)；(53)3-({[3-(5-氯-1-甲基-1H-吲哚-2-基)-5-異丙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa27)；(54)3-({[3-(1，5-二甲基-1H-吲哚-2-基)-5-異丙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa28)；和(55)(3S)-5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iii-1)。
依照本發(fā)明的符合通式(1)的化合物具有兩個(2)不對稱碳原子，因而可以以其立體異構體的形式存在，包括非對映異構體。立體異構體中特別優(yōu)選的化合物具有如下通式(1a) 因此本發(fā)明的另一個目的是提供立體異構體形式的符合通式(1a)的化合物。
在符合通式(1a)的化合物中，例如，化合物(3S)-5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iii-1)可以通過包括下列步驟的過程來獲得將(3S)和(3R)混合物溶于甲基叔丁基醚，添加少量結晶的(3S)-5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸作為晶種材料以生成晶體，并將該晶體在乙酸乙酯/正己烷溶劑系統(tǒng)中再結晶。
在符合通式(1)和(1a)的化合物中，最優(yōu)選的化合物是5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iii)；和(3S)-5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iii-1)。
下文反應方案1-5描述了制備顯示針對胱天蛋白酶的抑制活性且符合通式(1)的新型異唑啉衍生物的方法。然而，下文反應方案所例示的只代表本發(fā)明中所使用的典型方法?？梢圆皇芟拗频馗淖儾僮黜樞?，因而所述方法不限于下文所解釋的。
反應方案1 其中
A、B、和R2的定義與上文所述相同，且P1代表簡單烷基鏈。
在上文反應方案1中，將醛衍生物(II)與羥胺-氫氯化物和碳酸鈉在醇-水溶劑混合物中反應以生成肟衍生物(III)(順式和反式肟的混合物)。在二甲基甲酰胺溶液中用NCS(N-氯琥珀酰亞胺)處理得到的肟衍生物(III)以生成氫草氨酰氯(hydroxamoyl chloride)衍生物(IV)。將由此得到的氫草氨酰氯衍生物(IV)與丙烯酸酯衍生物(V)反應以生成異唑啉衍生物(VI)，然后根據(jù)需要將其水解以生成去保護的異唑啉衍生物(VII)。如果合適，可以將肟衍生物(III)、丙烯酸酯衍生物(V)、和NaOCl在反應容器中(原位)一起反應以直接生成異唑啉衍生物(VI)(見制劑16和17)。
反應方案2 其中A、B、R、R1、R2、R11、R12、和W的定義與上文所述相同。
在上文反應方案2中，將羧酸衍生物(VII)偶聯(lián)天冬氨酸衍生物(VIII)(見下文反應方案3)以生成化合物(IX)，然后將其進行Dess-Martin過碘烷(periodinane)氧化反應和根據(jù)需要的去保護反應以生成符合通式(I)的期望化合物。
反應方案2的化合物(I)中的官能團Z可以如下文制劑5和7中所述通過幾個步驟在左側羧酸化合物(VII)與天冬氨酸(β-t-Bu)甲酯聯(lián)合后形成。否則，如下文反應方案3中所述，首先合成已具有期望的Z的化合物(VIII)，然后與化合物(VII)偶聯(lián)(Ref.WO 00/23421)。另外，當W是F時，可以依照Tetrahedron Letters，1994，35(52)，9693-9696中知道的方法制備外消旋化合物。
反應方案3 其中Z的定義與上文所述相同。
可以通過兩種(2)途徑制備上文反應方案1中用作反應物的丙烯酸酯衍生物(V)。即，可以如下文反應方案4中所述容易地由已知化合物(XIV)制備化合物(XV)(Synthesis，1982，第924頁)，或者可以由(二乙基)丙二酸二甲酯制備化合物(V)，(乙基)2-異丙基丙烯酸甲酯(J.Chemical Society Perkin Trans.1 1997，1559-1570)。
反應方案4 其中P1和R2的定義與上文所述相同。
下文反應方案5顯示了制備其中將α，β-不飽和酯或α，β-不飽和砜(sulfon)導入P1位點的化合物的合成方法。據(jù)此，將反應方案1中制備的羧酸衍生物(VII)與氨基醇衍生物(XVII)反應以生成化合物(XVI)，然后將其進行Dess-Martin氧化和Wittig反應以生成化合物(I)。
反應方案5 其中R、A、B、R1、和R2的定義與上文所述相同，且Q代表-CO2R13或SO2R14，其中R13和R14的定義與上文所述相同。
根據(jù)下文實驗結果的證明，依照本發(fā)明的符合通式(1)的化合物具有針對胱天蛋白酶的廣譜抑制活性，因而具有預防炎癥和凋亡的效果。因此，本發(fā)明提供了用于抑制胱天蛋白酶的組合物，具體而言就是包含符合通式(1)的化合物作為活性成分以及制藥學可接受載體且用于預防炎癥和凋亡的治療性組合物。具體而言，本發(fā)明的組合物對癡呆、腦中風、由AIDS引起的腦損傷、糖尿病、胃潰瘍、由肝炎引起的腦損傷、由肝炎誘導的肝病、急性肝炎、暴發(fā)性肝功能衰竭、肝硬化、敗血癥、器官移植排斥、風濕性關節(jié)炎、或由缺血性心臟病引起的心臟細胞凋亡具有治療效果，特別是急性肝炎、肝硬化、或風濕性關節(jié)炎。
可以根據(jù)施用目的將胱天蛋白酶抑制物特別是符合通式(1)的化合物配制成多種藥劑形式。為了制備依照本發(fā)明的藥物組合物，有效量的胱天蛋白酶抑制物特別是符合通式(1)的化合物或其鹽與制藥學可接受載體混合，所述載體可以根據(jù)待制備的配劑而采取多種形式。
胱天蛋白酶抑制物化合物可以根據(jù)其用途而配制成腸胃外注射劑，或是經(jīng)皮或口服的制劑。尤其有利的是將組合物配制成單位劑量形式，以便于施用和統(tǒng)一劑量。
對于口服制劑，可以使用任何常用制藥學載體。例如，可以將水、二元醇、油、醇等等用于諸如懸浮液、糖漿、酏劑和溶液的口服液體制劑；或者，可以將淀粉、糖、高嶺土、潤滑劑、粘合劑、崩解劑等等用于諸如粉劑、丸劑、膠囊和片劑的固體制劑。由于它們易于施用，片劑和膠囊是最有利的劑量單位形式。還希望將片劑和丸劑配制成腸溶衣制劑。
對于腸胃外制劑，常常使用無菌水作為載體，盡管也可以使用其它成分諸如溶解助劑?？梢砸勒找阎鞒淌褂煤线m的分散劑、潤濕劑、或懸浮劑制備注射劑，例如無菌的水性或油性注射用懸浮液?？捎糜谥苽渥⑸鋭┑娜軇┌ㄋ⒘指袷先芤汉偷葷BNaCl溶液，還可以將無菌的固定油(fixing oil)方便地用作溶劑或懸浮介質。任何非刺激性固定油包括單-、二-甘油酯都可用于此目的。脂肪酸諸如油酸也可用于注射劑。
對于經(jīng)皮施用，載體可以包括滲透增強劑和/或合適的潤濕劑，任選聯(lián)合沒有顯著皮膚刺激的合適添加劑。所述添加劑可能促進經(jīng)由皮膚的施用和/或可能有助于制備期望的組合物。這些經(jīng)皮的制劑可以通過多種方式施用，例如作為經(jīng)皮貼劑、spot-on、或軟膏劑。
在將胱天蛋白酶抑制物特別是符合通式(1)的化合物用于臨床用途時，對受試患者施用的量的范圍優(yōu)選是0.1-100mg/kg體重/日?？梢砸淮涡曰蚍謳状问┯萌咳談┝?。然而，個體患者的具體施用劑量可能隨具體的所用化合物、受試患者的體重、性別、衛(wèi)生狀況、或飲食、施用的時間或方法、排泄速率、試劑的混合比例、待治療疾病的嚴重程度等而變化。
下文的實施例將更加具體地解釋本發(fā)明。然而，應當理解，這些實施例意欲例示本發(fā)明，絕非限制本發(fā)明的范圍。
制劑1苯甲醛肟將苯甲醛(5.31g，50.0mmol)溶于乙醇(60ml)-水(30ml)，并于0℃向其中添加羥胺氫氯化物(5.21g，1.5Eq)和無水碳酸鈉(Na2CO3，3.97g，0.75Eq)。在大約一分鐘后形成大量固體時，添加水-乙醇(1∶1，60ml)，并將混合液攪動一小時。添加飽和氯化鈉水溶液(100ml)，并將混合液用乙酸乙酯(300ml)萃取兩次。將萃取液用1.0N碳酸氫鈉水溶液(NaHCO3，100ml×2)清洗，干燥(無水Na2SO4)，并在減壓下濃縮以生成白色粉狀的標題化合物(6.06g，收率99％)，是順式和反式的混合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.9(br，1H)，8.1(s，1H)，7.5(m，2H)，7.3(m，3H)制劑2苯甲醛氫草氨酰氯將在制劑1中制備的肟(3.00g，24.8mmol)溶于二甲基甲酰胺(100ml)，并添加N-氯琥珀酰亞胺(3.47g，1.05Eq)。將得到的溶液在大約40℃水浴中攪動一小時，并在減壓下通過蒸餾除去揮發(fā)性溶劑。將殘余物溶于乙酸乙酯-己烷(1∶1，150ml)，用水(100ml×3)清洗，干燥(無水Na2SO4)，并在減壓下濃縮以生成標題化合物(3.86g，收率99％)。將此化合物用于下一步反應，無需任何進一步的純化。
制劑35-甲基-3-苯基-4，5-二氫-5-異唑羧酸甲酯(VIa)將在制劑2中制備的氫草氨酰氯(3.86g，24.8mmol)和甲基丙烯酸甲酯(4.0ml，37.2mmol，1.5Eq)在氮氣氣氛下溶于無水乙醚(120ml)，將混合液置于-78℃，并添加三乙胺(6.9ml，2.0Eq)。將混合液攪動過夜，同時讓它緩慢升溫至室溫。添加水(100ml)，然后將混合液用乙酸乙酯(100ml×2)萃取，用水(100ml)清洗，干燥(無水Na2SO4)，并在減壓下濃縮。通過柱層析(15％乙酸乙酯-己烷)純化殘余物以生成標題化合物(5.34g，收率98％)，后來通過1H-NMR鑒定是非對映異構體的1∶1混合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ6.7(m，2H，)，6.5(m，3H)，3.0(d，J＝16.7Hz，1H)，2.9(s，3H)，2.3(d，J＝16.7Hz，1H)，0.8(s，3H)制劑45-甲基-3-苯基-4，5-二氫-5-異唑羧酸(VIIa)將在制劑3中制備的化合物(VIa，5.34g)溶于蒸餾的四氫呋喃(120ml)，并添加1N氫氧化鈉水溶液(36.5ml，1.5Eq)。大約四小時后，用1N鹽酸水溶液中和混合液，并在減壓下蒸餾以除去大部分四氫呋喃。將殘余物溶于過量的乙酸乙酯(＞700ml)，用水清洗，干燥(無水Na2SO4)，并在減壓下濃縮以生成白色粉狀的標題化合物(4.77g，收率95％)。將此化合物用于下一步反應，無需任何進一步的純化。
制劑5(3S)-3-{[(芐氧基)羰基]氨基}-5-(叔丁氧基)-2-羥基-5-氧代戊基2，6-二氯苯甲酸酯(XIIa)在氮氣氣氛下向N-芐氧基羰基-β-叔丁基天冬氨酸(5.03g，15.6mmol)和NMM(1.90ml，17.1mmol)中添加無水四氫呋喃(60ml)，將混合液置于-15℃，并向其中添加氯甲酸異丁酯(2.12ml，16.3mmol)。將混合液攪動大約20分鐘。向置于0℃的反應混合液中添加重氮甲烷-醚溶液(由2.0Eq 1-甲基-3-硝基-1-亞硝基-胍合成，60ml)以制備重氮酮衍生物(約30分鐘)。于0℃向其中添加30％HBr/AcOH(6.42ml，2.0Eq)。攪動得到的混合液(30-60分鐘)，用乙酸乙酯萃取，用飽和碳酸氫鈉水溶液清洗兩次，用氯化鈉水溶液清洗一次，干燥(無水Na2SO4)，并在減壓下濃縮以生成溴甲基酮衍生物(X，6.4g)。
將由此得到的溴甲基酮衍生物(X，4.36g)和2，6-二氯苯甲酸(2.28g，1.1Eq)溶于二甲基甲酰胺(18ml)，添加KF(1.58g，2.5Eq)，并將混合液攪動兩小時以生成2，6-二氯苯甲酰氧基甲基酮衍生物(XIa)。將此化合物溶于甲醇(20ml)，并添加NaBH4(412mg)-甲醇溶液(40ml)進行反應(-10℃～室溫，兩小時)。添加乙酸終止反應，并將反應溶液在減壓下蒸餾以除去甲醇。將殘余物用乙酸乙酯(50ml×2)萃取，用水和氯化鈉水溶液清洗，干燥(無水Na2SO4)，在減壓下濃縮，并通過柱層析(乙酸乙酯-己烷，1∶5)分離-純化以生成非對映形的標題化合物(4.80g，收率86％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.3-7.2(m，8H)，5.9(m，1H)，5.2(m，4H)，4.7(m，1H)，2.9(m，1H)，2.7(m，1H)，1.4(s，9H)制劑6(3S)-3-氨基-5-(叔丁氧基)-2-羥基-5-氧代戊基2，6-二氯苯甲酸酯(VIIIa)在氫氣環(huán)境下(Pd/C)將在制劑5中制備的化合物的芐氧基羰基基團去除40分鐘以生成標題化合物(收率100％)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.2(br，2H)，7.6-7.5(m，3H)，6.1(m，1H)，4.4-3.9(m，3H)，3.0-2.6(m，2H)，1.4(s，9H)實施例1(3S)-5-(叔丁氧基)-3-{[(5-甲基-3-苯基-4，5-二氫-5-異唑基)羰基]氨基}-2，5-二氧代戊基2，6-二氯苯甲酸酯(Ia)將在制劑4中制備的羧酸衍生物(VIIa，300mg，1.46mmol)、在制劑6中制備的氨基醇衍生物(VIIIa，667mg，1.1Eq)、和HATU(722mg，1.3Eq)的混合物冷卻至0℃，在溶劑DMF(5ml)中添加三乙胺(0.82ml，4.0Eq)，并將得到的混合液反應5小時。在減壓下蒸餾除去溶劑，并將殘余物用乙酸乙酯(200ml×2)萃取，用水、碳酸氫鈉水溶液、和氯化鈉水溶液清洗，干燥(無水Na2SO4)，在減壓下濃縮，并通過柱層析純化以生成化合物(IXa)(810mg，收率98％)。向此化合物和Dess-Martin試劑(1.70g，3.0Eq)中添加無水二氯甲烷(25ml)，并將混合液于室溫攪動一小時。添加異丙醇(3ml)終止反應。在減壓下用Celite(硅藻土)過濾除去固體，并將濾出液用乙酸乙酯(20ml×2)萃取，用水、飽和碳酸氫鈉水溶液、和氯化鈉水溶液清洗，干燥(無水Na2SO4)，在減壓下濃縮，并通過柱層析(36％乙酸乙酯-己烷)初步純化以生成非對映的標題化合物(780mg)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.8(m，NH，1H)，7.6(m，2H)，7.3(m，3H)，7.2(m，3H)，5.1-5.0(m，2H)，4.8(m，1H)，3.8(m，1H)，3.2(m，1H)，2.9-2.8(m，2H)，1.7(s，3H)，1.4(s，9H)實施例2(3S)-5-[(2，6-二氯苯甲酰)氧基]-3-{[(5-甲基-3-苯基-4，5-二氫-5-異唑基)羰基]氨基}-4-氧戊酸(Iaa)將實施例1中制備的化合物(44mg)溶于二氯甲烷(2ml)，并于0℃添加三氟乙酸(1ml)。將混合液攪動兩小時，同時將它緩慢升溫至室溫，然后在減壓下濃縮以生成化學計量數(shù)量的標題化合物(Iaa)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.1(m，1H)，7.5((m，2H)，7.3(m，3H)，7.2(m，3H)，5.1-4.9(m，2H)，4.9-4.8(m，1H)，3.8(m，1H)，3.2(m，1H)，1.7(m，3H)制劑7(3S)-3-氨基-4-羥基-5-苯氧基戊酸叔丁酯(VIIIb)在氮氣氣氛下向N-芐氧基羰基-β-叔丁基-天冬氨酸(10.0g，31.0mmol)和NMM(3.75ml，1.1Eq)中添加無水四氫呋喃(120ml)，并將混合液置于-15℃。向其中添加氯甲酸異丁酯(4.22ml，1.05Eq)，并將混合液攪動大約20分鐘。將反應物置于0℃，然后與重氮甲烷-醚溶液(由2.0Eq 1-甲基-3-硝基-1-亞硝基胍合成，60ml)混合以制備重氮酮衍生物(約30分鐘)。向其中添加30％HBr/AcOH(12.83ml，2.0Eq)以制備溴甲基酮衍生物(30-60分鐘)。將產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取，用飽和碳酸氫鈉水溶液和氯化鈉水溶液清洗兩次，干燥(無水Na2SO4)，并在減壓下濃縮以生成化學計量數(shù)量的溴甲基酮衍生物(12.9g)。
將由此得到的溴甲基酮衍生物(X，12.9g，31.0mmol)和苯酚(3.23g，1.2Eq)溶于二甲基甲酰胺(30ml)，添加KF(4.53g，2.5Eq)，并將混合液攪動兩小時以生成苯氧基甲基酮衍生物(XIb)。將此化合物溶于甲醇(40ml)-THF(100ml)，并添加NaBH4(2.35g)-甲醇溶液(40ml)進行反應(-10℃～室溫，兩小時)。添加乙酸終止反應，并將反應混合液在減壓下蒸餾以除去甲醇。將殘余物用乙酸乙酯(50ml×2)萃取，用水和氯化鈉水溶液清洗，干燥(無水Na2SO4)，在減壓下濃縮，并通過柱層析(乙酸乙酯-己烷，1∶7)分離-純化以生成非對映形的化合物(XIIb，6.50g，收率50％)，其氨基基團受到芐氧基羰基的保護。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.3-7.2(m，8H)，5.9(m，1H)，5.2(m，4H)，4.7(m，1H)，2.9(m，1H)，2.7(m，1H)，1.4(s，9H)在氫氣環(huán)境下(Pd/C)將上文得到的化合物的芐氧基羰基基團去除以生成標題化合物(4.16g，收率95％)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.1(br，2H)，7.3(m，5H)，5.6(m，1H)，4.1-4.0(m，3H)，2.6(m，2H)，1.4(s，9H)實施例3(3S)-3-{[(5-甲基-3-苯基-4，5-二氫-5-異唑基)羰基]氨基}-4-氧-5-苯氧基戊酸叔丁酯(Ib)將在制劑4中制備的羧酸衍生物(VIIa，273mg，1.33mmol)、在制劑7中制備的氨基醇衍生物(VIIIb，412mg，1.1Eq)、和HATU(657mg，1.3Eq)的混合物冷卻至0℃，在溶劑DMF(5ml)中添加三乙胺(0.74ml，4.0Eq)，并將得到的混合液反應5小時。在減壓下蒸餾除去溶劑，并將殘余物用乙酸乙酯(200ml×2)萃取，用水、碳酸氫鈉水溶液、和氯化鈉水溶液清洗，干燥(無水Na2SO4)，在減壓下濃縮，并通過柱層析(30-40％EA/Hex)純化以生成化合物(IXb)(545mg，收率88％)。向此化合物和Dess-Martin試劑(1.43g，3.0Eq)中添加無水二氯甲烷(25ml)，并將混合液于室溫攪動一小時。添加異丙醇(2ml)終止反應。在減壓下用Celite(硅藻土)過濾除去固體，并將濾出液用乙酸乙酯(20ml×2)萃取，用水、飽和碳酸氫鈉水溶液、和氯化鈉水溶液清洗，干燥(無水Na2SO4)，在減壓下濃縮，并通過柱層析(洗脫液25％乙酸乙酯-己烷)初步純化以生成非對映的標題化合物(540mg，收率99％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.8(NH，1H)，7.5(m，2H)，7.3(m，3H)，7.3(m，1H)，7.1(m，1H)，6.8(m，2H)，6.7(m，1H)，4.9(s，1H)，4.7-4.6(m，2H)，3.7(d，J＝17Hz，1H)，3.2(d，J＝17Hz，1H)，2.9(m，1H)，2.8(m，1H)，1.7(s，3H)，1.4(s，9H)實施例4(3S)-3-{[(5-甲基-3-苯基-4，5-二氫-5-異唑基)羰基]氨基}-4-氧-5-苯氧基戊酸(Ibb)將實施例3中制備的化合物(530mg，1.136mmol)溶于二氯甲烷(6ml)，并于0℃添加三氟乙酸(3ml)。將混合液攪動兩小時，同時將它緩慢升溫至室溫，并在減壓下濃縮以生成化學計量收率的標題化合物(Ibb)(465mg)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.5(m，2H)，7.3(m，3H)，7.1(NH，1H)，6.7(m，5H)，5.0-4.6(m，2H)，4.2(m，1H)，3.8(m，1H)，3.2(m，1H)，3.0-2.7(m，2H)，1.6(s，3H)制劑82-乙基丙烯酸乙酯(XVb)在氮氣氣氛下向CuCN(26.9g，預先在真空下干燥)中添加大約500ml無水四氫呋喃。將混合液置于-78℃，并在機械攪動下向其中緩慢添加100ml甲基鎂化溴(3.0M乙醚溶液)。將濃稠的混合液于-78℃攪動大約30分鐘。向其中緩慢添加溶于大約30ml無水四氫呋喃的2-溴甲基丙烯酸乙酯(28.9g，150mmol，合成方法Villieras，J.和Rambaud，M.Synthesis，1982，914)。用兩小時將反應混合液的溫度緩慢升溫至室溫。緩慢添加飽和氯化銨溶液(約50ml)完成反應。用Celite(硅藻土)過濾反應混合液以除去沉淀，然后用乙醚清洗。用水和飽和碳酸氫鈉溶液(300ml×2)清洗有機層，干燥(無水Na2SO4)，并在減壓下濃縮以生成26.7g(化學計量收率)透明液體。通過1H-NMR(500MHz，CDCl3)鑒定此液體，并確認是具有大約75％w/w純度的標題化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ6.12(1H，s)，5.50(1H，s)，4.20(2H，q，J＝7.3Hz)，2.31(2H，qt)，1.28(3H，t，J＝7.3Hz)，1.07(3H，t，J＝7.8Hz)
制劑95-乙基-3-苯基-4，5-二氫-5-異唑羧酸乙酯(VIb)依照制劑3的相同流程使制劑8的化合物(XVa)進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.6(m，2H)，7.4-7.3(m，3H)，4.3-4.2(m，2H)，4.0(d，J＝17.2Hz，1H)，3.4(d，J＝17.2Hz，1H)，2.1-2.0(m，2H)，1.3(t，3H)，1.0(t，3H)制劑10(3S)-3-氨基-4-羥基-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸叔丁酯(VIIIc)依照制劑5和6的相同流程使2，3，5，6-四氟苯酚進行反應以生成總收率72％的標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.2(br，2H)，7.6-7.5(m，1H)，5.9(m，1H)，4.3-4.1(m，3H)，3.6(m，1H)，2.7(m，1H)，1.4(s，9H)實施例5(3S)-3-{[(5-乙基-3-苯基-4，5-二氫-5-異唑基)羰基]氨基}-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸叔丁酯(Ic)依照制劑4和實施例1的相同流程使制劑9和10的化合物進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.6(dd，J＝3.6，1.6Hz，1H)，7.6(m，2H)，7.4-7.3(m，3H)，6.7(m，1H)，5.1-4.9(m，2H)，4.9-4.8(m，1H)，3.7(dd，J＝17.6，17.2Hz，1H)，3.3(1H，d，J＝17.2Hz)，3.0-2.8(m，1H)，2.8-2.7(m，1H)，2.1(m，1H)，1.9(m，1H)，1.4-1.3(two s，9H，)，1.0(m，3H)實施例6(3S)-3-{[(5-乙基-3-苯基-4，5-二氫-5-異唑基)羰基]氨基}-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(Icc)依照實施例2的相同流程使實施例5的化合物進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.6(br，1H)，7.6-7.5(m，2H)，7.4-7.3(m，3H)，6.8-6.7(m，1H)，4.9-4.8(m，1H)，4.5(br，2H)，3.7(d，J＝16Hz，1H)，3.3(d，J＝16Hz，1H)，3.3-3.0(m，1H)，2.8-2.7(m，1H)，2.1(m，1H)，2.0-1.9(m，1H)，1.0(m，3H)MS [M+H]+497制劑115-乙基-3-(1-萘基)-4，5-二氫-5-異唑羧酸乙酯(VIc)依照制劑1、2、和3的相同流程使1-萘甲醛和2-乙基丙烯酸乙酯進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.9(d，J＝8.8Hz，1H)，7.9-7.8(m，2H)，7.6-7.4(m，4H)，4.3-4.2(m，2H)，4.0(d，J＝17.2Hz，1H)，3.4(d，J＝17.2Hz，1H)，2.1-2.0(m，2H)，1.3(t，3H)，1.0(t，3H)實施例7(3S)-3-({[5-乙基-3-(1-萘基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸叔丁酯(Id)依照制劑4和實施例1的相同流程使制劑11和10的化合物進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.9(m，1H)，7.9-7.8(m，3H)，7.6-7.4(m，4H)，6.5-6.9(m，1H)，5.1-4.9(m，2H)，4.9(m，1H)，3.9(dd，1H)，3.5(d，J＝17.2Hz，1H)，3.0-2.9(m，1H)，2.8(m，1H)，2.2(m，1H)，2.0(m，1H)，1.4-1.3(two s，9H)，1.1(m，3H)實施例8(3S)-3-({[5-乙基-3-(1-萘基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(Idd)依照實施例2的相同流程使實施例7的化合物進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.8(m，1H)，7.9-7.7(m，3H)，7.6-7.4(m，4H)，6.7(m，1H)，4.9(m，1H)，4.5(br，2H)，3.9(d，J＝17.2Hz，1H)，3.5(d，J＝17.2Hz，1H)，3.1-2.9(m，1H)，2.8-2.7(m，1H)，2.2(m，1H)，2.0(m，1H)，1.0(m，3H)MS[M+MeOH+Na]+601制劑125-乙基-3-(2-萘基)-4，5-二氫-5-異唑羧酸乙酯(VId)依照制劑1、2、和3的相同流程使2-萘甲醛和2-乙基丙烯酸乙酯進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.7(d，J＝8.8Hz，1H)，7.8-7.7(m，2H)，7.5-7.3(m，4H)，4.3-4.2(m，2H)，4.0(d，J＝17.2Hz，1H)，3.4(d，J＝17.2Hz，1H)，2.1-2.0(m，2H)，1.3(t，3H)，1.0(t，3H)實施例9(3S)-3-({[5-乙基-3-(2-萘基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸叔丁酯(Ie)依照制劑4和實施例1的相同流程使制劑12和10的化合物進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.8-7.7(m，6H)，7.5(m，2H)，6.7 & 6.5(m，1H)，5.1-4.9(m，2H)，4.9-4.8(m，2H)，3.8(dd，J＝16Hz，1H)，3.4(d，J＝16Hz，1H)，3.0(m，1H)，2.8(m，1H)，2.8-2.7(m，1H)，2.2-2.1(m，1H)，2.0(m，1H)，1.4-1.3(two s，9H)，1.1-1.0(m，3H)實施例10(3S)-3-({[5-乙基-3-(2-萘基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(Iee)依照實施例2的相同流程使實施例9的化合物去保護，并通過制備性TLC拆分異構體以生成如下兩種化合物。
弱極性非對映異構體1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.4(br，1H)，8.7(br，1H)，8.1(s，1H)，7.9-8.0(m，3H)，7.8-7.9(m，1H)，7.5-7.6(m，3H)，5.2(br，2H)，4.7(br，1H)，3.8(d，J＝17.2Hz，1H)，3.5(d，J ＝17.6Hz，1H)，2.7(m，1H)，2.5(m，1H)，2.0(m，1H)，1.9(m，1H)，0.9-0.8(m，3H)MS [M+H]+547高極性非對映異構體1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.6(br，1H)，8.2(s，1H)，8.0-7.9(m，3H)，7.9(m，1H)，7.6(m，2H)，7.4(m，1H)，5.0(br，2H)，4.8(m，1H)，3.9(d，J＝17.6Hz，1H，)，3.6(d，J＝17.6Hz，1H，)，2.9-2.7(m，2H)，2.1-2.0(m，1H)，2.0-1.9(m，1H)，0.9(m，3H)制劑135-乙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑羧酸乙酯(VIe)依照制劑1、2、和3的相同流程使1-異喹啉甲醛和2-乙基丙烯酸乙酯進行反應。通過Chiral OD HPLC(Daicel Chemical Industries，2.00cm×25cm，OD00CJ-1C005，3％ i-PrOH溶于己烷，220nm)分離活性手性異構體形式的標題化合物，然后用于下一步反應。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.25(m，1H)，8.55(d，1H)，7.85(d，1H)，7.74-7.65(m，3H)，4.29(m，2H)，4.13(d，1H)，3.71(d，1H)，2.11(m，2H)，1.33(t，3H)，1.06(t，3H)實施例11(3S)-3-({[5-乙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸叔丁酯(If)依照制劑4和實施例1的相同流程使制劑13和10的化合物進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.14(m，1H)，8.53(m，1H)，7.91-7.85(m，2H)，7.74-7.64(m，3H)，6.73-6.62(m，1H)，5.30-4.91(m，3H)，4.09(two d，1H)，3.72(two d，1H)，3.04-2.76(m，2H)，2.24(m，1H)，2.04(m，1H)，1.45 & 1.35(two s，9H)，1.08(twot，3H)實施例12(3S)-3-({[5-乙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(Iff)
依照實施例2的相同流程使實施例11的化合物進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.02(m，1H)，8.76(m，1H)，8.59(m，1H)，8.08-7.73(m，4H)，7.61-7.32(m，1H)，5.19-5.10(m，2H)，4.93-4.65(m，1H)，3.91(two d，1H)，3.68(two d，1H)，2.91-2.52(m，2H)，2.10-1.94(m，2H)，0.94(two t，3H)Ms M+H 548實施例133-({[5-乙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸叔丁酯(Ig)依照制劑4和實施例1的相同流程使制劑13的化合物和3-氨基-5-氟-4-羥基戊酸叔丁酯進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.15(m，1H)，8.55(d，1H)，7.87-7.66(m，5H)，5.22-4.89(m，3H)，4.12(two d，1H)，3.72(twod，1H)，3.05-2.75(m，2H)，2.22(m，1H)，2.04(m，1H)，1.45 & 1.34(two s，9H)，1.07(two t，3H)實施例143-({[5-乙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Igg)依照實施例2的相同流程使實施例13的化合物進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.03(m，1H)，8.67-8.59(m，2H)，8.08(d，1H)，7.97-7.78(m，3H)，5.26-5.07(m，2H)，4.75(m，1H)，3.94(two d，1H)，3.67(two d，1H)，2.88-2.58(m，2H)，2.07-1.94(m，2H)，0.96(two t，3H)Ms M+H 402實施例153-({[5-乙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸乙酯(Ihh)
依照Tetrahedron Letters，1994，35(52)，9693-9696中的已知方法使實施例14的化合物進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.15(m，1H)，8.55(d，1H)，7.89-7.67(m，5H)，5.23-4.94(m，3H)，4.18(m，2H)，4.11(two d，1H)，3.72(two d，1H)，3.08-2.82(m，2H)，2.22(m，1H)，2.05(m，1H)，1.29-1.04(m，6H)制劑145-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑羧酸甲酯和拆分(VIf)依照制劑1、2、和3的相同流程使1-異喹啉甲醛和2-異丙基丙烯酸甲酯進行反應以生成標題化合物。通過制備性HPLC使用手性OD柱(Daicel Chemical Industries，2.00cm×25cm，OD00CJ-1C005，5％i-PrOH溶于己烷，14ml/分鐘，220nm)由如此得到的化合物中分離(5R)活性手性異構體(9.7分鐘-11.7分鐘)(另一(5S)異構體在15.3-20.1分鐘的保留時間內洗脫)，然后用于下一步反應(水解后的拆分見制劑23)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ9.24(m，1H)，8.55(d，1H)，7.85(d，1H)，7.72(t，3H)，7.67(m，2H)，4.11(d，1H)，3.83(s，3H)，3.74(d，1H)，2.50(septet，1H)，1.07(d，3H)，1.02(d，3H)實施例165-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸叔丁酯(Ih)依照制劑4和實施例1的相同流程使制劑14的化合物和3-氨基-5-氟-4-羥基戊酸叔丁酯進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ9.14(m，1H)，8.55(d，1H)，7.87-7.65(m，5H)，5.23-4.93(m，2H)，4.90(m，1H)，4.05-4.00(twod，1H)，3.84-3.79(two，1H)，3.06-2.74(m，2H)，2.40(m，1H)，1.45 & 1.34(two s，9H)，1.12-1.07(m，6H)
實施例175-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iii)依照實施例2的相同流程使實施例16的化合物進行反應以生成標題化合物(依照相同流程得到(5S)異構體的化合物，Iii-u)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.00(m，1H)，8.63-8.48(m，2H)，8.08(d，1H)，7.97(m，1H)7.87-7.76(m，2H)，5.31-4.82(br，2H)，4.74(m，1H)，3.91(two d，1H)，3.73(two d，1H)，2.88-2.61(m，2H)，2.33(m，1H)，0.98(m，6H)Ms M+H 416制劑155-乙基-3-(4-喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑羧酸乙酯(VIg)依照制劑1、2、和3的相同流程使4-喹啉甲醛和2-乙基丙烯酸乙酯進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.95(d，1H)，8.89(m，1H)，8.11(d，1H)，7.83(m，1H)，7.71(m，1H)，7.65(d，1H)，4.27(m，2H)，4.01(d，1H)，3.67(d，1H)，2.10(m，2H)，1.31(t，3H)，1.02(t，3H)實施例183-({[5-乙基-3-(4-喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸叔丁酯(Ii)依照制劑4和實施例1的相同流程使制劑15的化合物和3-氨基-5-氟-4-羥基戊酸叔丁酯進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.97(d，1H)，8.89(m，1H)，8.17(d，1H)，7.87-7.64(m，3H)，7.36(d，1H)，5.21-4.93(m，3H)，3.93(twod，1H)，3.48(two d，1H)，3.05-2.78(m，2H)，2.24(m，1H)，2.03(m，1H)，1.46 & 1.33(two s，9H)，1.06(two t，3H)實施例193-({[5-乙基-3-(4-喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Ijj)依照實施例2的相同流程使實施例18的化合物進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.16-9.10(m，2H)，8.25-7.86(m，5H)，5.20(br，2H)，4.75(m，1H)，4.00-3.89(two d，1H)，3.73(twod，1H)，2.87-2.71(m，2H)，2.26-2.05(m，2H)，1.07(two t，3H)Ms M+H 402制劑163-(苯并噻吩-2-基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑羧酸乙酯(VIh)將依照制劑1的相同流程制備的苯并噻吩-2-醛肟衍生物(400mg，2.26mmol)溶于THF(25ml)，并將混合液置于0℃。將2-乙基丙烯酸乙酯(434mg，1.5Eq)和三乙胺(7滴)溶于THF(5ml)，將由此得到的溶液緩慢添加到上面的混合液中，并另外添加次氯酸鈉溶液(6.0ml)。將反應溶液升溫至室溫并攪動4小時。添加水(20ml)，并用乙酸乙酯(40ml×2)萃取混合液，用氯化鈉水溶液(20ml)清洗，在硫酸鎂上干燥，過濾，并在減壓下濃縮。通過柱層析(20％乙酸乙酯-己烷)純化殘余物以生成標題化合物(121mg，收率18％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.82-7.75(m，2H)，7.40-7.32(m，3H)，4.28(m，2H)，3.90(d，1H)，3.31(d，1H)，2.07(m，2H)，1.33(t，3H)，1.01(t，3H)實施例203-({[3-(苯并噻吩-2-基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸叔丁酯(Ij)依照制劑4和實施例1的相同流程使制劑16的化合物和3-氨基-5-氟-4-羥基戊酸叔丁酯進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.83-7.68(m，3H)，7.42-7.35(m，3H)，5.21-4.88(m，3H)，3.80(two d，1H)，3.38(two d，1H)，3.03-2.78(m，2H)，2.17(m，1H)，2.01(m，1H)，1.46 & 1.38(two s，9H)，1.03(two t，3H)
實施例213-({[3-(苯并噻吩-2-基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(3-({[3-(苯并噻吩-2-基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸)(Ikk)依照實施例2的相同流程使實施例20的化合物進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.63(m，1H)，8.11-7.79(m，3H)，7.47-7.36(m，2H)，5.24-5.06(m，2H)，4.73(m，1H)，3.79(two d，1H)，3.53(two d，1H)，2.83-2.58(m，2H)，2.03-1.86(m，2H)，0.91(two t，3H)Ms M+H 407制劑173-(1，3-二甲基-1H-吲哚-2-基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑羧酸乙酯(VIi)將1，3-二甲基-1H-吲哚-2-醛肟衍生物(356mg，2.07mmol)溶于二氯甲烷(20ml)，并將混合液置于0℃。將2-乙基丙烯酸乙酯(345mg，1.3Eq)和三乙胺(6滴)溶于二氯甲烷(5ml)，將由此得到的溶液緩慢添加到上面的混合液中，并另外添加次氯酸鈉溶液(5.5ml)。將反應溶液升溫至室溫并攪動4小時。添加水(20ml)，并用二氯甲烷(40ml×2)萃取混合液，用氯化鈉水溶液(20ml)清洗，在硫酸鎂上干燥，過濾，并在減壓下濃縮。通過柱層析(15％乙酸乙酯-己烷)純化殘余物以生成標題化合物(230mg，收率35％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.60(d，1H)，7.31(m，2H)，7.12(m，1H)，4.29(m，2H)，3.98(d，1H)，3.94(s，3H)，3.40(d，1H)，2.47(s，3H)，2.08(m，2H)，1.34(t，3H)，1.04(t，3H)Ms M+H 315實施例22(3S)-3-({[3-(1，3-二甲基-1H-吲哚-2-基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸叔丁酯(Ik)
依照制劑4和實施例1的相同流程使制劑17和10的化合物進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.85-7.79(m，1H)，7.57(m，1H)，7.37-7.26(m，2H)，7.13(m，1H)，6.75-6.49(m，1H)，5.12-4.90(m，3H)，3.95(two d，1H)，3.89(two s，3H)，3.45(twod，1H)，3.03-2.79(m，2H)，2.44(two s，3H)，2.22(m，1H)，2.01(m，1H)，1.58 & 1.37(two s，9H)，1.05(two t，3H)實施例23(3S)-3-({[3-(1，3-二甲基-1H-吲哚-2-基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(Ill)依照實施例2的相同流程使實施例22的化合物進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.67(br，1H)，7.61-7.43(m，3H)，7.27(m，1H)，7.08(m，1H)，5.20(br，2H)，4.83(m，1H)，3.84(twos，3H)，3.76(two d，1H)，3.59(two d，1H)，2.91-2.60(m，2H)，2.50(two s，3H)，2.07-1.91(m，2H)，0.95(two t，3H)實施例243-({[3-(1，3-二甲基-1H-吲哚-2-基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸叔丁酯(Il)依照制劑4和實施例1的相同流程使制劑17的化合物和3-氨基-5-氟-4-羥基戊酸叔丁酯進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.79(m，1H)，7.60(m，1H)，7.32(m，2H)，7.13(m，1H)，5.20-4.90(m，3H)，3.97-3.89(m，4H)，3.46(twod，1H)，3.03-2.77(m，2H)，2.21(m，1H)，2.01(m，1H)，1.46 & 1.38(two s，9H)，1.05(two t，3H)實施例253-({[3-(1，3-二甲基-1H-吲哚-2-基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Imm)
依照實施例2的相同流程使實施例24的化合物進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.68(br，1H)，7.60(m，1H)，7.45(m，1H)，7.26(m，1H)，7.07(m，1H)，5.20(br，2H)，4.81(m，1H)，3.84(two s，3H)，3.76(two d，1H)，3.59(two d，1H)，2.94-2.59(m，2H)，2.38(two s，3H)，2.07-1.91(m，2H)，0.95(twot，3H)Ms M+H 418制劑185-乙基-3-(1-萘基甲基)-4，5-二氫-5-異唑羧酸乙酯(VIj)依照制劑1、2、和3的相同流程使1-萘基乙醛和2-乙基丙烯酸乙酯進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.1-8.0(d，J＝8Hz，1H)，7.8(d，J＝7.6Hz，1H，)，7.8-7.7(d，J＝8Hz，1H)，7.5-7.4(m，2H)，7.4-7.3(m，2H)，4.1-4.0(m，4H)，3.1(d，J＝17.6Hz，1H)，2.6(d，J＝17.6Hz，1H)，1.8-1.7(m，2H)，1.2(t，3H)，0.7(t，3H)實施例26(3S)-3-({[5-乙基-3-(1-萘基甲基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸叔丁酯(Im)依照制劑4和實施例1的相同流程使制劑18和10的化合物進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.0(m，1H)，7.8(m，1H)，7.8(m，1H)，7.7(m，1H)，7.5(m，2H)，7.4-7.3(m，2H)，6.7(m，1H)，5.0-4.9(m，2H)，4.9-4.8(m，1H)，4.2-4.0(m，2H)，3.1(dd，J＝24.8Hz，1H)，2.9-2.6(m，3H)，1.9(m，1H)，1.7(m，1H)，1.4(two s，9H)，0.8(m，3H)實施例27(3S)-3-({[5-乙基-3-(1-萘基甲基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(Inn)
依照實施例2的相同流程使實施例26的化合物進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.3(br，1H)，8.4(br，1H)，8.0(m，1H)，7.9(m，1H)，7.8(m，1H)，7.5-7.4(m，5H)，5.0(br，2H)，4.7(m，1H)，4.0(s，2H)，3.3(m，1H)，3.1(m，1H)，2.8(m，2H)，2.5(m，1H)，1.8(m，1H)，1.7(m，1H)，0.8(m，3H)MS [M+H]+561實施例28(3S)-5-(叔丁氧基)-3-[({5-乙基-3-[2-(1-萘基)乙基]-4，5-二氫-5-異唑基}羰基)氨基]-2，5-二氧代戊基2，6-二氯苯甲酸酯(In)依照制劑1、2、3、和4及實施例1的相同流程使1-萘丙醛和制劑6的化合物進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.00(d，1H)，7.85(m，1H)，7.76(m，2H)，7.57-7.28(m，7H)，7.34-7.27(m，3H)，5.20-5.05(m，2H)，4.94 & 4.88(two m，1H)，3.39-3.27(m，3H)，2.97-2.72(m，5H)，2.07(m，1H)，1.86(m，1H)，1.46 & 1.45(two s，9H)，1.00 & 0.96(twot，3H)實施例29(3S)-5-[(2，6-二氯苯甲酰)氧基]-3-[({5-乙基-3-[2-(1-萘基)乙基]-4，5-二氫-5-異唑基}羰基)氨基]-4-氧戊酸(Ioo)依照實施例2的相同流程使實施例28的化合物進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.45(bd，1H)，8.06(d，1H)，7.90(d，1H)，7.77(d，1H)，7.60-7.37(m，7H)，5.21-5.03(m，2H)，4.73(m，1H)，3.06(m，2H)，2.65(bd，4H)，1.91 & 1.74(two m，2H)，0.84(m，3H)制劑195-乙基-3-[(1-萘氧基)甲基]-4，5-二氫-5-異唑羧酸乙酯(VI1)使2-硝基乙醇吡喃基衍生物(見Synthesis，1993，12，1206-1208)和2-乙基丙烯酸乙酯進行反應并使得到的產(chǎn)物去保護以生成5-乙基-(3-羥甲基)-4，5-二氫-5-異唑羧酸乙酯(23％)。將此化合物進行溴化(CBr4，PPh3，94％)，然后與1-萘酚進行反應(NaH，DMF，82％)以生成標題化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.20(m，1H)，7.81(d，1H)，7.55-7.42(m，3H)，7.36(m，1H)，6.88(d，1H)，5.01(dd，2H)，4.22(m，2H)，3.61(d，1H)，3.07(d，1H)，1.97(m，2H)，1.27(t，3H)，0.93(t，3H)實施例30(3S)-3-[({5-乙基-3-[(1-萘氧基)甲基]-4，5-二氫-5-異唑基}羰基)氨基]-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(Ipp)依照制劑4及實施例1和2的相同流程使制劑19和10的化合物進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.51(br，1H)，8.13(m，1H)，7.87(m，1H)，7.54-7.38(m，5H)，7.02(m，1H)，5.18-4.97(m，4H)，4.71(m，1H)，3.58(two d，1H)，3.21(two d，1H)，2.68(m，2H)，1.97(m，1H)，1.81(m，1H)，0.86(two t，3H)Ms M+H 577實施例31(3S)-3-{[(3-{[(4-氯-1-萘基)氧基]甲基}-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基)羰基]氨基}-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(Iqq)依照制劑19的相同流程使在制劑19的過程中作為中間體得到的溴衍生物和4-氯-1-萘酚進行反應以生成5-乙基-3-[(4-氯-1-萘氧基)甲基]-4，5-二氫-5-異唑羧酸乙酯，然后依照制劑4及實施例1和2的相同流程使之進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.65(m，1H)，8.24-8.09(m，2H)，7.78-7.35(m，4H)，7.06(m，1H)，5.17-5.07(m，4H)，4.82-4.69(m，1H)，3.45(two d，1H)，3.23(two d，1H)，2.83-2.52(m，2H)，1.96-1.79(m，2H)，0.86(two t，3H)Ms M+H 611制劑20(3S)-3-氨基-4-羥基丁酸叔丁酯在氮氣氣氛下向N-芐氧基羰基-β-叔丁基天冬氨酸(3.0g，9.28mmol)和NMM(1.12ml，1.1Eq)中添加無水四氫呋喃(20ml)。將反應溶液置于0℃。添加氯甲酸異丁酯(1.26ml，1.05Eq)，并將混合液攪動大約40分鐘。在氮氣下將由此得到的漿體過濾，并于-78℃將得到的溶液添加到NaBH4(702mg，2.0Eq)溶液[甲醇(10ml)-無水四氫呋喃(20ml)]中。將得到的混合液緩慢升溫至室溫(兩小時)。添加乙酸(2.3ml)終止反應，并在減壓下將反應溶液蒸餾以除去甲醇。用乙酸乙酯(50ml×2)萃取殘余物，用水和氯化鈉水溶液清洗，干燥(無水Na2SO4)，在減壓下濃縮，并通過柱層析(乙酸乙酯-己烷，1∶5)分離-純化以生成醇化合物(2.52g，收率88％)。
在氫氣環(huán)境下(Pd/C)將上面得到的化合物的芐氧基羰基基團去除一小時以生成標題化合物(收率100％)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ4.60(bs，1H)，3.21(m，2H)，2.96(m，1H)，2.41(dd，1H)，2.03(dd，1H)，1.40(s，9H)制劑21(3S)-4-羥基-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)丁酸叔丁酯(XVI)依照制劑4的相同流程使制劑14的化合物進行反應以生成活性羧酸衍生物(VIIf)。將所述活性羧酸衍生物(VIIf，224mg，0.79mmol)、在制劑20中制備的氨基醇衍生物(166mg，1.2Eq)、和HATU(390mg，1.3Eq)的混合物冷卻至0℃，在溶劑DMF(5ml)中添加三乙胺(0.33ml，3.0Eq)，并將得到的混合液反應兩小時。在減壓下蒸餾除去溶劑，并用乙酸乙酯(50ml×2)萃取殘余物，用水、碳酸氫鈉水溶液、和氯化鈉水溶液清洗，干燥(無水Na2SO4)，在減壓下濃縮，并通過柱層析(60-70％EA/Hex)純化以生成標題化合物(330mg，收率95％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.16(d，1H)，8.55(d，1H)，7.85(d，1H)，7.73-7.70(m，3H)，7.56(NH，d，1H)，4.26(m，1H)，4.12(d，1H)，4.04(d，1H)，3.79(d，1H)，3.75(t，2H)，2.94(bs，1H)，2.57(m，2H)，2.41(m，1H)，1.10 & 1.07(two d，6H)實施例326-(叔丁基)1-乙基(2E，4S)-4-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-2-己烯二酸酯(Iq)向制劑21的化合物(107mg，0.24mmol)和Dess-Martin試劑(153mg，1.5Eq)中添加無水二氯甲烷(4ml)，于室溫將混合液攪動一小時，并在減壓下濃縮。向殘余物中添加無水THF(3ml)和(乙氧羰基亞甲基)三苯基正膦((carboethoxymethylene)triphenylphosphorane)(108mg，1.3Eq)，并將混合液回流兩小時。用乙酸乙酯(20ml×2)萃取反應混合液，用水、飽和碳酸氫鈉水溶液、和氯化鈉水溶液清洗，干燥(無水Na2SO4)，在減壓下濃縮，并通過制備性層析(40％乙酸乙酯-己烷)初步純化以生成非對映異構體比率為3∶1的標題化合物(98mg，80％)。
主要異構體的1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ9.15(d，1H)，8.54(d，1H)，7.86(d，1H)，7.74-7.62(m，4H)，6.93(dd，1H)，6.00(dd，1H)，4.98(m，1H)，4.19(qt，2H)，4.02(d，1H)，3.81(d，1H)，2.58(m，2H)，2.43(m，1H)，1.36(s，9H)，1.27(t，3H)，1.07 & 1.06(two d，6H)實施例33(3S，4E)-6-乙氧基-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-6-氧-4-己烯酸(Irr)依照實施例2的相同流程使實施例32的化合物進行反應以生成標題化合物。
主要異構體的1H-NMR(500MHz，MeOD-d3)δ9.04(d，1H)，8.61(d，1H)，8.52(d，1H)，7.95(d，1H)，7.81-7.68(m，3H)，6.94(dd，1H)，6.00(dd，1H)，5.01(m，1H)，4.17(q t，2H)，3.90(d，1H)，3.82(d，1H)，2.71(d，2H)，2.39(septet，1H)，1.26(t，3H)，1.07 & 1.06(twod，6H)MSM+H 454實施例34(3S，4E)-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-(甲磺?；?-4-戊烯酸叔丁酯(Ir)將無水二氯甲烷(4ml)添加到實施例21的化合物(109mg，0.25mmol)和Dess-Martin試劑(157mg，1.5Eq)中，于室溫將混合液攪動一小時，并在減壓下濃縮。添加異丙醇(0.5ml)終止反應。在減壓下使用Celite(硅藻土)過濾以除去固體。用乙酸乙酯(20ml×2)萃取濾出液，用水、飽和碳酸氫鈉水溶液、和氯化鈉水溶液清洗，干燥(無水Na2SO4)，并在減壓下濃縮以生成醛化合物(540mg，收率99％)。
將甲磺酰甲膦酸二乙酯(113mg，2.0Eq，Synthesis，1969，170)溶于THF(3ml)，添加NaH(60％溶于礦物油，20mg，2.0Eq)和上面得到的醛化合物，并將混合液回流兩小時。用乙酸乙酯(20ml×2)萃取后，用水、飽和碳酸氫鈉水溶液、和氯化鈉水溶液清洗萃取液，干燥(無水Na2SO4)，在減壓下濃縮，并通過制備性層析(60％乙酸乙酯/己烷)純化以生成非對映異構體比率為4∶1的標題化合物(52mg，41％)。
主要非對映異構體的1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ9.14(d，1H)，8.55(d，1H)，7.86(d，1H)，7.76-7.65(m，4H)，6.92(dd，1H)，6.57(dd，1H)，5.03(m，1H)，4.02(d，1H)，3.81(d，1H)，2.94(s，3H)，2.61(m，2H)，2.41(septet，1H)，1.36(s，9H)，1.10 & 1.08(兩組d，6H)實施例35(3S，4E)-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-(甲磺?；?-4-戊烯酸(Iss)依照實施例2的相同流程使實施例34的化合物進行反應以生成標題化合物。
主要異構體的1H-NMR(500MHz，MeOD-d3)δ9.04(d，1H)，8.52(d，1H)，7.95(d，1H)，7.82-7.69(m，3H)，6.90(dd，1H)，6.71(dd，1H)，5.06(m，1H)，3.86(m，2H)，2.98(s，3H)，2.76(d，2H)，2.39(m，1H)，1.08 & 1.06(兩組d，6H)MSM+H 460實施例36-42的制備方法根據(jù)需要，通過制備性HPLC使用手性OD柱，將通過依照制劑1、2、和3(或者制劑1和16)的相同流程使(異)喹啉甲醛(或者1-或2-萘甲醛)和2-乙基丙烯酸乙酯(或是2-丙基丙烯酸乙酯)進行反應而得到的化合物純化以分離活性手性異構體。依照制劑4的相同流程水解分離的活性手性異構體或無活性手性異構體，并依照實施例1和2的相同流程使得到的化合物與3-氨基-5-氟-4-羥基戊酸叔丁酯進行反應以生成下文實施例36-42的標題化合物。
實施例365-氟-3-({[(5S)-3-(1-異喹啉基)-5-丙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸)(Itt)1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.02(t，1H)，8.61(m，2H)，8.08(d，1H)，7.96(m，1H)，7.85(t，1H)，7.78(m，1H)，5.05(bs，2H)，4.73(m，1H)，3.97-3.92(dd，1H)，3.70-3.65(two d，1H)，2.90-2.70(two m，2H)，2.03(m，1H)，1.91(m，1H)，1.48(m，1H)，1.32(m，1H)，0.93(m，3H)Ms M+H 416實施例37(3-({[(5S)-5-乙基-3-(1-萘基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸)(Iuu)1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.84(s，1H)，8.59(bs，1H)，8.02(m，2H)，7.75(s，1H)，7.60(m，3H)，5.01(b s，2H)，4.73(m，1H)，3.87-3.82(dd，1H)，3.70-3.65(two d，1H)，2.82-2.73(two m，2H)，2.05(m，1H)，1.95(m，1H)，0.96(m，3H)Ms M+H 401實施例38(3-({[(5S)-5-乙基-3-(2-喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸)(Ivv)1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.61(dd，1H)，8.41(m，1H)，8.02(m，3H)，7.79(t，1H)，7.65(t，1H)，5.22-5.06(m，1H)，4.72(m，1H)，4.49-4.28(m，1H)，3.84(m，1H)，3.54(m，1H)，2.99-2.54(twom，2H)，2.01(m，1H)，1.91(m，1H)，0.91(m，3H)Ms M+H 402實施例39(3-({[(5R)-5-乙基-3-(3-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸)(Iww)1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.25 & 9.16(two s，1H)，8.08-7.64(m，5H)，4.90-4.84(m，1H)，4.79-4.54(m，2H)，4.01-3.93(two d，1H)，3.54(d，1H)，3.03-2.87(m，2H)，2.27-2.19&2.10-2.01(two m，2H)，1.10-1.06(m，3H)Ms M+H 402實施例403-({[5-乙基-3-(8-喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸)(Ixx)1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.98 & 8.93(two m，1H)，8.56-8.21(m，1H)，8.03-7.94(m，2H)，7.73(bs，1H)，7.60(m，1H)，7.53-7.48(twom，1H)，4.94-4.64(m，3H)，4.27-4.22(two d，1H)，3.77(d，1H)，3.07 & 2.92(two m，2H)，2.31-2.22(m，1H)，2.12-2.05(m，1H)，1.10(t，3H)Ms M+H 402
實施例413-({[5-乙基-3-(3-喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸)(Iyy)1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.32 & 9.25(two d，1H)，8.16-8.03(m，2H)，7.83-7.73(m，3H)，7.62-7.55(m，1H)，4.95-4.76(m，3H)，3.86(two d，1H)，3.45-3.39(two d，1H)，3.17-3.01(two m，1H)，2.90-2.82(m，1H)，2.27-2.20(m，1H)，2.09-2.00(m，1H)，1.10-1.05(m，3H)Ms M+H 402實施例425-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(2-喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸)(Izz)1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.24(m，1H)，8.14(m，1H)，8.04(d，1H)，7.88(d，1H)，7.79(m，1H)，7.65(m，1H)，7.51(bs，1H)，5.13-4.35(m，3H)，4.05-4.00(two d，1H)，3.73(d，1H)，3.05-2.82(m，2H)，2.42(m，1H)，1.10(m，6H)Ms M+H 416實施例43-48的制備方法根據(jù)需要，通過制備性HPLC使用手性OD柱，將通過依照制劑1、2、和3(或者制劑1和16)的相同流程使芳香醛(Bioorg.Med.Chem.Lett.，1996，6，2173頁；J.Org.Chem.，1978，43，1372)和2-乙基丙烯酸乙酯(或者2-異丙基丙烯酸乙酯)進行反應而得到的化合物純化以分離活性手性異構體。依照制劑4的相同流程水解分離的活性手性異構體或無活性手性異構體，并依照實施例1和2的相同流程使得到的化合物與3-氨基-5-氟-4-羥基戊酸叔丁酯進行反應以生成下文實施例43-48的標題化合物。
實施例433-({[5-乙基-3-(2-異丙基苯基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa1)
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.53(bs，1H)，7.40(m，2H)，7.32(m，1H)，7.25(m，1H)，5.02(bs，2H)，4.72(m，1H)，3.60-3.54(two d，1H)，3.46-3.43(two d，1H)，3.40(m，1H)，2.78-2.60(two m，2H)，1.95(m，1H)，1.85(m，1H)，1.14(s，6H)，0.88(m，3H)Ms M+H 393實施例443-[({3-[3-(叔丁基)苯基]-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基}羰基)氨基]-5-氟-4-氧戊酸(Iaa2)1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.56(dd，1H)，7.67(s，1H)，7.48(m，1H)，7.38(d，2H)，5.24-5.12(q，1H)，4.76-4.69(m，1H)，4.59-4.26(m，1H)，3.68(m，1H)，3.49-3.43(two d，1H)，2.96-2.56(two m，2H)，1.98(m，1H)，1.85(m，1H)，1.29(s，9H)，0.89(d，3H)Ms M+H 407實施例453-[({3-[4-(叔丁基)苯基]-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基}羰基)氨基]-5-氟-4-氧戊酸(Iaa3)1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.52(bs，1H)，7.58(m，2H)，7.43(dd，2H)，5.10(bs，2H)，4.71-4.65(m，1H)，3.65-3.59(two d，1H)，3.40-3.35(two d，1H)，2.86-2.60(two m，2H)，1.94(m，1H)，1.82(m，1H)，1.24(s，9H)，0.86(m，3H)Ms M+H 407實施例465-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(2-異丙基苯基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iaa4)1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.60-7.53(m，1H)，7.41(m，2H)，7.27-7.23(m，2H)，5.20-4.91(m，1H)，4.71(m，1H)，4.54-4.42(m，1H)，3.69-3.64(two d，1H)，3.45-3.38(m，2H)，3.12-2.77(m，2H)，2.32(m，1H)，1.22(d，6H)，1.05(d，6H)Ms M+H 407實施例473-[({(5R)-3-[3-(叔丁基)苯基]-5-異丙基-4，5-二氫-5-異唑基}羰基)氨基]-5-氟-4-氧戊酸(Iaa5)1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.69(s，1H)，7.48(d，1H)，7.41(d，1H)，7.35(t，1H)，4.74-4.50(m，3H)，3.69(d，1H)，3.40(d，1H)，3.06-2.77(m，2H)，2.32(m，1H)，1.33(s，9H)，1.04(m，6H)Ms M+H 421實施例483-{[(3-[1，1′-聯(lián)苯]-3-基-5-異丙基-4，5-二氫-5-異唑基)羰基]氨基}-5-氟-4-氧戊酸(Iaa6)將3-聯(lián)苯甲醛(見Synthesis，2003，337)用作起始材料以生成標題化合物。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.42(bs，1H)，7.87(d，1H)，7.73-7.69(m，4H)，7.52(m，1H)，7.45(m，2H)，7.38(m，1H)，5.03(bs，2H)，4.63(m，1H)，3.73-3.57(m，2H)，2.67-2.63(two m，2H)，2.22(m，1H)，0.89(m，6H)Ms M+H 441實施例49-59的制備方法通過US 6043248，JOC 1982，47，第4315頁中已知的方法得到4-取代的吡啶2-甲醛，并依照制劑1、2、和3(或者制劑1和16)的相同流程使它們進行反應。根據(jù)需要，通過制備性HPLC使用手性OD柱，將得到的化合物純化以分離活性手性異構體。依照制劑4的相同流程水解分離的活性手性異構體或無活性手性異構體，并依照實施例1和2的相同流程使得到的化合物與3-氨基-5-氟-4-羥基戊酸叔丁酯進行反應以生成下文實施例49-59的標題化合物。
實施例493-({[5-乙基-3-(2-吡啶基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa7)1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.41(bs，1H)，8.61(s，1H)，8.59-8.53(dd，1H)，7.87(m，1H)，7.44(m，1H)，5.19-5.04(two d，1H)，4.70(m，1H)，4.45-4.27(m，1H)，3.67(m，1H)，3.42(m，1H)，2.95-2.53(two m，2H)，1.96(m，1H)，1.86(m，1H)，0.85(m，3H)Ms M+H 352實施例503-[({3-[4-(叔丁基)-2-吡啶基]-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基}羰基)氨基]-5-氟-4-氧戊酸(Iaa8)1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.58(d，1H)，7.90(s，1H)，7.65(bs，1H)，7.45-7.39(m，1H)，4.98-4.68(m，3H)，3.92 & 3.88(two d，1H)，3.52 & 3.47(two d，1H)，3.05-2.86(m，2H)，2.23-2.18(m，1H)，2.08-2.00(m，1H)，1.38(s，9H)，1.05(t，3H)Ms M+H 408實施例513-[({(5R)-3-[4-(叔丁基)-2-吡啶基]-5-異丙基-4，5-二氫-5-異唑基}羰基)氨基]-5-氟-4-氧戊酸(Iaa9)1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.58(d，1H)，7.88(d，1H)，7.61(bs，1H)，7.43(m，1H)，4.84(m，1H)，4.60(bs，2H)，3.89-3.82(two d，1H)，3.60-3.55(two d，1H)，3.04-2.86(m，2H)，2.38(m，1H)，1.38(s，9H)，1.07(m，6H)Ms M+H 422實施例523-({[5-乙基-3-(4-異丁基-2-吡啶基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa10)1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.58-8.52(dd，1H)，8.49(s，1H)，7.68(s，1H)，7.27(s，1H)，5.19-5.04(m，1H)，4.69(m，1H)，4.46-4.29(m，1H)，3.68(m，1H)，3.41-3.37(dd，1H)，2.93-2.46(m，4H)，1.95-1.85(two m，3H)，0.86-0.82(m，9H)Ms M+H 408實施例533-({[3-(4-乙?；?2-吡啶基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa11)1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.79(d，1H)，8.35(s，1H)，7.76(d，1H)，7.46(bs，1H)，4.84-4.40(m，3H)，3.90-3.85(two d，1H)，3.51-3.46(two d，1H)，3.04-2.84(m，2H)，2.65(s，3H)，HHHkdkdk2.16(m，1H)，2.02(m，1H)，1.03(m，3H)Ms M+H 394實施例543-({[3-(4-環(huán)丙基-2-吡啶基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa12)1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.39(bs，1H)，8.41(t，1H)，7.56(d，1H)，7.12(m，1H)，5.19-5.04(m，1H)，4.72-4.66(m，1H)，4.46-4.27(m，1H)，3.69-3.63(m，1H)，3.39-3.35(two d，1H)，2.80-2.74(m，1H)，2.63-2.52(m，1H)，2.00-1.80(m，3H)，1.06(m，2H)，0.86-0.80(m，5H)Ms M+H 392實施例553-({[3-(4-環(huán)戊基-2-吡啶基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa13)1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.50(d，1H)，7.67(m，2H)，7.26(m，1H)，4.88-4.82(m，1H)，4.65(bs，2H)，3.88-3.81(two d，1H)，3.45-3.41(two d，1H)，3.05(m，1H)，2.96-2.80(m，2H)，2.20-2.12(m，3H)，2.02-1.96(m，1H)，1.83(m，2H)，1.72(m，2H)，1.60(m，2H)，1.01(t，3H)Ms M+H 420
實施例563-({[(5R)-3-(4-環(huán)戊基-2-吡啶基)-5-異丙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa14)1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.58(m，1H)，7.74(d，1H)，7.63(bs，1H)，7.38-7.32(dd，1H)，4.88-4.81(m，1H)，4.53(b s，2H)，3.87-3.79(two d，1H)，3.56-3.53(two d，1H)，3.12-3.04(m，1H)，3.02-2.85(m，2H)，2.38(m，1H)，2.16(m，2H)，1.88(m，2H)，1.78(m，2H)，1.65(m，2H)，1.07(m，6H)Ms M+H 434實施例573-({[3-(4-環(huán)己基-2-吡啶基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa15)1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.61(m，1H)，7.75(d，1H)，7.64(bs，1H)，7.39-7.33(dd，1H)，4.86-4.53(two m，3H)，3.87(t，1H)，3.50-3.45(dd，1H)，3.05-2.85(two m，2H)，2.63(m，1H)，2.22(m，1H)，2.03(m，1H)，1.93-1.80(two m，5H)，1.44(m，5H)，1.05(t，3H)Ms M+H 434實施例583-({[5-乙基-3-(5，6，7，8-四氫-1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa16)1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.60-8.53(dd，1H)，8.30(d，1H)，7.15(d，1H)，5.20-5.05(m，1H)，4.74-4.66(m，1H)，4.45-4.25(m，1H)，3.75-3.68(m，1H)，3.47-3.41(m，1H)，2.94-2.88(m，2H)，2.80-2.72(m，3H)，2.62-2.53(m，1H)，1.99-1.93(m，1H)，1.88-1.80(m，1H)，1.71-1.69(m，4H)，0.88-0.84(m，3H)Ms M+H 406實施例595-氟-3-({[5-異丙基-3-(4-苯基-2-吡啶基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iaa17)
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.68(d，1H)，8.14(s，1H)，7.68(m，1H)，7.58(m，1H)，7.54-7.43(m，5H)，4.86-4.60(m，3H)，3.92-3.87(two d，1H)，3.62(d，1H)，3.09-2.86(m，2H)，2.39(m，1H)，1.11-1.06(m，6H)Ms M+H 442實施例60-63的制備方法依照制劑5的相同流程使(2S)-4-(叔丁氧基)-2-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧丁酸[通過偶聯(lián)化合物(VIIf)與Asp(O-t-Bu)-OMe的反應和水解得到的]進行反應以生成溴甲基酮衍生物((3S)-5-溴-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸叔丁酯)。使此溴甲基酮衍生物與二苯次膦酸在KF/DMF(見制劑5)中進行反應以生成二苯基磷酰氧基甲基酮衍生物，然后依照實施例2的相同流程進行反應以生成標題化合物(實施例60的化合物)。
依照上文所述相同流程由1-苯基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-5-醇、3-芐基-4-羥基-2(5H)-呋喃酮、或異丁酸得到下文實施例61-63的化合物。
實施例60(3S)-5-[(二苯基磷酰基)氧基]-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iaa18)1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.92(m，1H)，8.58(m，1H)，8.05(m，1H)，7.94(m，1H)，7.81(m，1H)，7.75-7.72(m，3H)，7.57(m，3H)，7.49(m，4H)，7.35(m，2H)，4.90-4.65(two m，3H)，3.79-3.75(twod，1H)，3.69-3.67(two d，1H)，2.65(two m，2H)，2.22(m，1H)，0.84(m，6H)Ms M+H 614
實施例61(3S)-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-{[1-苯基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-5-基]氧基}戊酸(Iaa19)1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.95(m，1H)，8.83(d，1H)，8.57(m，1H)，8.03(d，1H)，7.92(d，1H)，7.80(m，1H)，7.74(m，1H)，7.65(d，1H)，7.57(m，1H)，7.51-7.34(m，3H)，6.27(s，1H)，5.29-5.15(m，2H)，4.76(m，1H)，3.92-3.88(m，1H)，3.75-3.69(m，1H)，2.84-2.60(m，2H)，2.33(m，1H)，0.96(m，6H)Ms M+H 624實施例62(3S)-5-[(4-芐基-5-氧-2，5-二氫-3-呋喃基)氧基]-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iaa20)1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.97(t，1H)，8.58(d，1H)，8.04(d，1H)，7.92(d，1H)，7.81(m，1H)，7.73(m，1H)，7.23-7.07(m，6H)，7.51(m，1H)，4.79-4.65(m，3H)，3.92-3.87(two d，1H)，3.74-3.68(two d，1H)，2.82-2.58(m，2H)，2.31(m，1H)，0.95(m，6H)Ms M+H 586實施例63(3S)-5-(異丁酰氧基)-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iaa21)1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.39(bs，1H)，8.96(t，1H)，8.73(m，1H)，8.58(dd，1H)，8.04(d，1H)，7.92(d，1H)，7.81(t，1H)，7.73(m，1H)，4.78(m，2H)，4.68(m，1H)，3.87(t，1H)，3.73-3.68(two d，1H)，2.79-2.60(two m，2H)，2.56(m，1H)，2.31(m，1H)，1.05(d，3H)，0.95(m，9H)Ms M+H 484
實施例64(3S)-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-己烯酸(Iaa22)使(2S)-4-(叔丁氧基)-2-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧丁酸的Weinreb酰胺衍生物(與N，O-二甲基羥胺的縮合衍生物)和乙烯基鎂化溴進行反應，并依照實施例2的相同流程使得到的化合物進行反應以生成標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.27(bs，1H)，8.95(t，1H)，8.74-8.67(two d，1H)，8.58(m，1H)，8.04(d，1H)，7.92(d，1H)，7.83-7.72(m，2H)，6.47(m，1H)，6.22-6.11(two dd，1H)，5.71-5.62(two dd，1H)，4.77(m，1H)，3.90-3.79(m，1H)，3.72-3.64(m，1H)，2.82(m，1H)，2.62-2.49(m，1H)，2.30(m，1H)，0.94(m，6H)Ms M+H 410制劑22(3S)-3-氨基-4-羥基-5-(2-吡啶氧基)戊酸叔丁酯(VIIIf)將溴甲基酮衍生物(X，3.2g，7.93mmol)即制劑5的中間體溶于苯(30ml)，添加Ag2CO3(2.62g，1.2Eq)和2-羥基吡啶(0.93g，1.2Eq)，并將混合液于80℃在回流下攪動3天。將反應混合液用Celite(硅藻土)過濾，在減壓下濃縮，并通過柱層析純化以生成2-吡啶氧基甲基酮衍生物(XIf)(466mg，收率14％)。
將由此得到的2-吡啶氧基甲基酮衍生物(XIf)(227mg，0.548mmol)溶于四氫呋喃/甲醇(3∶2 v/v)的溶劑混合液(10ml)，于0℃添加NaBH4(43mg，2.0Eq)，并將混合液于室溫攪動30分鐘。添加飽和氯化銨溶液終止反應，并在減壓下濃縮反應溶液。用乙酸乙酯萃取殘余物，用水和氯化鈉水溶液清洗，干燥(無水Na2SO4)，并在減壓下濃縮以生成化合物(XIIf)(230mg)，其中酮基團還原成羥基。
在氫氣環(huán)境下(Pd/C)將上文制備的化合物的芐氧基羰基基團去除40分鐘以生成標題化合物(155mg，99％)。
實施例65-66的制備方法依照實施例1和2的相同流程使化合物VIIf(或VIIu)和VIIIf進行反應以生成實施例65-66的標題化合物。在這里，VIIu代表5-乙基-3-(2-異丙基苯基)-4，5-二氫-5-異唑羧酸。
實施例65(3S)-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2-吡啶氧基)戊酸(Iaa23)1H-NMR(500MHz，MeOH-d4)δ9.04(d，1H)，8.50(d，1H)，7.95(d，1H)，7.81(d，1H)，7.77(t，1H)，7.69(t，1H)，7.59(m，1H)，6.85-6.80(m，2H)，6.67(bs，1H)，5.07(bs，1H)，4.95(t，1H)，4.84(m，1H)，3.94-3.79(Abq，2H)，2.92-2.80(m，2H)，2.39(m，1H)，1.09(m，6H)Ms M+H 491實施例66(3S)-3-({[5-乙基-3-(2-異丙基苯基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2-吡啶氧基)戊酸(Iaa24)1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.71(bs，1H)，8.02-7.94(two bs，1H)，7.71-7.64(m，1H)，7.42-7.18(m，4H)，6.96-6.90(two t，1H)，6.85-6.80(two d，1H)，4.99(bs，2H)，4.86-4.78(m，1H)，3.58(twod，1H)，3.48(two d，1H)，3.36(m，1H)，2.81-2.61(m，2H)，2.05-1.80(two m，2H)，1.14-1.03(m，6H)，0.93-0.88(m，3H)Ms M+H 468.21實施例672-{[(3S)-4-羧基-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-2-氧代丁基]氧基}-1-甲基吡啶三氟甲磺酸鹽(Iaa25)將實施例65中Dess-Martin氧化反應后得到的中間體((3S)-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2-吡啶氧基)戊酸叔丁酯(49mg，90μmol)溶于二氯甲烷(2ml)，添加三氟甲磺酸甲酯(1.1Eq，10.1μl)，并將混合液于室溫攪動一天。在減壓下濃縮后，將殘余物進行實施例2的相同流程以生成標題化合物(60mg)。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.00-8.91(m，2H)，8.76-8.57(m，2H)，8.42(m，1H)，8.04(m，1H)，7.93(m，1H)，7.80(m，1H)，7.75(m，1H)，7.54(m，1H)，5.77-5.48(m，2H)，4.85-4.81(m，1H)，4.00(s，3H)，3.94-3.69(m，2H)，2.87-2.60(m，2H)，2.33(m，1H)，0.98 & 0.94(two d，6H)Ms M+ 505.20實施例682-{[(3S)-4-羧基-3-({[5-乙基-3-(2-異丙基苯基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-2-氧代丁基]氧基}-1-甲基吡啶三氟甲磺酸鹽(Iaa26)將實施例66中Dess-Martin氧化反應后得到的中間產(chǎn)物(3S)-3-({[5-乙基-3-(2-異丙基苯基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2-吡啶氧基)戊酸叔丁酯(55mg，0.105mmol)溶于二氯甲烷(2ml)，添加三氟甲磺酸甲酯(1.1Eq，13μl)，并將混合液于室溫攪動一天。在減壓下濃縮后，將殘余物進行實施例2的相同流程以生成標題化合物(59mg，94％)。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.80-8.73(two d，1H)，8.65(m，1H)，8.45-8.38(m，1H)，7.56-7.51(m，2H)，7.43-7.31(m，3H)，7.24-7.12(m，H)，5.72-5.48(m，2H)，4.91(m，1H)，4.01&3.99(twos，3H)，3.64(two d，1H)，3.48(two d，1H)，3.42(m，1H)，2.90-2.62(m，2H)，2.05-1.80(two m，2H)，1.15-1.03(m，6H)，0.93-0.88(m，3H)Ms M+482.17實施例69-70的制備方法依照制劑1、17、4和實施例1、2的相同流程使5-氯-1-甲基-1H-吲哚-2-醛或1，5-二甲基-1H-吲哚-2-醛的肟衍生物與3-氨基-5-氟-4-羥基戊酸叔丁酯進行反應以生成實施例69-70的標題化合物。
實施例693-({[3-(5-氯-1-甲基-1H-吲哚-2-基)-5-異丙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa27)1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.59(s，1H)，7.46-7.39(two d，1H)，7.30-7.23(m，3H)，5.01(m，1H)，4.75-4.46(m，2H)，4.02(d，1H)，3.95(s，3H)，3.71(d，1H)，2.95(m，1H)，2.77(m，1H)，2.35(m，1H)，1.04(m，6H)Ms M+H 452實施例703-({[3-(1，5-二甲基-1H-吲哚-2-基)-5-異丙基-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa28)1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.48(bs，1H)，7.39(d，1H)，7.23-7.14(m，3H)，4.76(m，1H)，4.70-4.50(m，2H)，4.07-4.02(twod，1H)，3.99，3.94 & 3.93(three s，3H)，3.75-3.48(m，1H)，2.94-2.82(two m，1H)，2.46-2.43(two s，3H)，2.34(m，1H)，1.05(m，6H)Ms M+H 432制劑23(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑羧酸的拆分通過加熱至60℃將5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑羧酸溶于丙酮(190ml)，并添加(S)-α-甲基-芐胺(14.5ml，112mmol)。將反應混合液冷卻至室溫并攪動4小時。將得到的沉淀過濾并用丙酮(40ml)清洗三次。
通過加熱至90℃將由此得到的(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑羧酸的(S)-α-甲基-芐胺鹽溶于丙酮和水(4∶1)的混合液(150ml)，冷卻至室溫，并攪動3小時。將得到的沉淀過濾并用丙酮(40ml)清洗三次以生成純的(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑羧酸的(S)-α-甲基-芐胺鹽(12.8g，24.3％，99.8％ee)。
使用ChiralCel OD柱(4.6×250mm，5mm)評估(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑羧酸的光學純度。使用正己烷/異丙醇/三氟乙酸(92/8/0.1)的混合液作為流動相，流速1ml/分鐘，柱溫40℃，檢測波長225nm。分別在7.8分鐘(R異構體)和21.1分鐘(S異構體)的保留時間觀察到兩種光學異構體。
實施例71化合物(Iii-1)的拆分1)種子化合物的分離使用制備性液相層析二氧化硅柱(直徑40mm，DYNAMAX-100)分離實施例16的兩種非對映異構體。將正己烷/乙醇/三氟乙酸(4000/32/2)的混合液用作流動相，流速50ml/分鐘，并于檢測波長227nm下，在62-66分鐘的保留時間中以比率99∶1收集期望的非對映異構體(兩種非對映異構體以連續(xù)變化的比率廣泛洗脫直至86分鐘)。將由此得到的99∶1比率的非對映異構體去保護并作為種子用于拆分。
使用Atlantis C18柱(4.6×250mm，5mm)評估光學純度。依照如下梯度使用乙腈/水/三氟乙酸的混合液作為流動相，流速1ml/分鐘t＝0分鐘， 0:100:0.13分鐘， 20:80:0.150分鐘，100:0:0.1在檢測波長227nm下，分別在36.6分鐘(3R，5R異構體)和37.1分鐘(3S，5R異構體)的保留時間觀察到兩種光學異構體。
(3S，5R異構體)(3S)-5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸叔丁酯1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ9.13(d，1H)，8.55(d，1H)，7.85(d，1H)，7.78-7.65(m，4H)，5.22-5.02(two m，2H)，4.90(m，1H)，4.02(d，1H)，3.80(d，1H)，2.92-2.88(dd，1H)，2.79-2.75(dd，1H)，2.41(m，1H)，1.34(s，9H)，1.09(m，6H)Ms M+H 472(3R，5R異構體)(3R)-5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸叔丁酯1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.14(d，1H)，8.56(d，1H)，7.87(d，1H)，7.77-7.64(m，4H)，5.25-5.00(two q，2H)，4.90(m，1H)，4.03(d，1H)，3.82(d，1H)，2.93(dd，1H)，2.77(dd，1H)，2.42(m，1H)，1.35(s，9H)，1.11(m，6H)Ms M+H 472(3S)-5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iii-1)1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.07(d，1H)，8.57(d，1H)，7.89(d，1H)，7.78-7.69(m，3H)，7.69(d，1H)，4.88-4.79(m，2H)，4.67(bs，1H)，4.07(d，1H)，3.81(d，1H)，3.08-2.93(m，1H)，2.91-2.82(m，1H)，2.43(m，1H)，1.12(m，6H)Ms M+H 416(3R)-5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iii-2)1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ9.07(d，1H)，8.55(d，1H)，7.87(d，1H)，7.75-7.68(m，3H)，7.52(bs，1H)，5.20-4.35(m，3H)，4.02(d，1H)，3.80(d，1H)，3.13-2.90(m，2H)，2.39(m，1H)，1.08(m，6H)Ms M+H 4162)再結晶(3S)-5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iii-1)將粗制5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸叔丁酯(366g)溶于二氯甲烷(1.9kg)并冷卻至0℃。添加三乙基硅烷(235g)和三氟乙酸(1.88kg)并于0℃攪動一小時。在減壓下蒸餾反應混合液，再溶于乙酸乙酯(2.4kg)，并添加2N氫氧化鈉水溶液(3.1L)將pH調至5.2。分離有機層，并將水層用乙酸乙酯(2.4kg)萃取一次。將合并的有機層在減壓下蒸餾以除去溶劑，將得到的殘余物溶于甲基叔丁基醚(530g)，并添加少量結晶的(3S)-5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸。于室溫攪動16小時后，將得到的沉淀過濾并用甲基叔丁基醚和正己烷的9∶1混合液(210ml)清洗。
通過加熱至50℃將由此得到的(3S)-5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸溶于乙酸乙酯(240ml)，緩慢添加正己烷(240ml)，并逐漸冷卻至室溫。于室溫攪動24小時后，將得到的沉淀過濾，并用乙酸乙酯和正己烷的1∶1混合液(30ml)清洗以生成標題化合物(Iii-1，46.0g，3S/3R＝94/6.0)。使用Luna柱(4.6×250mm，5mm，C18)評估光學純度。使用乙腈/20mM NH4OAc的混合液(pH6)(30/70)作為流動相，流速1ml/分鐘。在檢測波長227nm下，分別在8.0分鐘(3R異構體)和9.0分鐘(3S異構體)的保留時間觀察到兩種光學異構體。
實驗1胱天蛋白酶抑制作用的測定通過修改Thornberry，N.A.等，Nature，1992，356，768；Thornberry，N.A.，Methods in Enzymology，1994，244，615；Walker，N.P.C.等，Cell，1994，78，343中的已知方法，將已知是α2β2形式的半胱氨酸蛋白酶的胱天蛋白酶-1和胱天蛋白酶-8表達、純化、并激活，還通過類似方法純化胱天蛋白酶-9，并測試針對它們的抑制活性。簡而言之，在大腸桿菌(E.coli)中表達p10和p20亞基(Thornberry，N.A.等，Nature，1992，356，768)，并通過鎳柱和陰離子交換層析純化以生成胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-8、和胱天蛋白酶-9。使用由此得到的胱天蛋白酶-1的熒光底物AcYVAD-AFC、胱天蛋白酶-8的熒光底物AcDEVD-AFC、和胱天蛋白酶-9的熒光底物AcLEHD-AFC來測定合成的抑制物的比活。在含50mM HEPES(pH7.50)、10％(w/v)蔗糖、0.1％(w/v)CHAPS、100mM NaCl、1mM EDTA、和10mMDTT的緩沖液中，在存在50μM AcYVAD-AFC及相應的10nM胱天蛋白酶-1、50μM AcDEVD-AFC及相應的2.1nM胱天蛋白酶-8、和150μMAcLEHD-AFC及相應的200nM胱天蛋白酶-9時，于25℃以多種抑制物濃度進行酶促反應。通過使用熒光分光光度計隨時間流逝測量反應速率并獲得初始速率常數(shù)來測定抑制物的抑制常數(shù)Ki和Kobs。由Lineweaver Burk Plot計算Ki，并由如下方程式1計算Kobs。
方程式1Kobs＝-1n(1-At/Aoo)/t其中At指在時間t之時的切割速率(％)，和Aoo指最大切割速率(％)。
使用Molecular Device Co.的Spectra MAX GeminiXS熒光分光光度計，激發(fā)波長405nm，發(fā)射波長505nm。
通過使用Fas抗體(Upstate Biotech 05-201)使Jurkat細胞(ATCC TIB-152)進行凋亡，并通過在用抑制物處理細胞后，依照Francoeur A.M.和Assalian A.，Biochemica，1996，3，19-25中已知的WST-1法檢測顏色變化以觀察存活Jurkat細胞的數(shù)量，從而測定抑制物的體內抑制活性。使用Molecular Device Co.的Spectra MAX340分光光度計，吸收波長440nm。
表1


*化合物Iii-u是化合物Iii的(5S)形式。
實驗2在小鼠中對LPS誘導的急性肝炎的治療效果第一步制備血樣將雌性Balb/c小鼠(6周齡，Charles River Laboratory，大阪，日本)置于如下條件22℃，55％相對濕度，和12小時的光照-黑暗循環(huán)。隨意供應食物和水。分別將LPS(脂多糖)和D-半乳糖胺溶于不含熱原的鹽水，濃度分別為0.4mg/ml和280mg/ml，并給小鼠注射它們的1∶1混合液，數(shù)量為5ml/kg。注射LPS和D-半乳糖胺后立即給小鼠腹膜內注射溶解了待測化合物的載體(將PEG400∶乙醇∶Tween80＝15∶7.5∶2.5的混合液用鹽水稀釋五倍)或載體本身。注射藥物后8小時，由它們的心臟采集血樣。
第二步測定血漿氨基轉移酶的活性使用ALT測定試劑盒(Asan Pharm.Co.，漢城，韓國)依照制造商的說明書對第一步中得到的血樣測定血漿ALT活性。結果是，看來注射LPS和D-半乳糖胺陡然提高血漿中的ALT活性，而待測化合物以劑量依賴方式抑制升高的酶活性。根據(jù)這些結果，使用GraphPad公司的Prism軟件計算待測化合物的ED50值，為0.01-10mg/kg。
實驗3在SD大鼠中對肝纖維化的抑制作用第一步誘導肝纖維化和施藥將雄性Spargue-Dawley大鼠(6周齡，Korea Biolink)置于如下條件22℃，55％相對濕度，和12小時的光照-黑暗周期。隨意供應食物和水。為了結扎膽管，通過吸入1％氟烷麻醉大鼠，切開大鼠的腹部，結扎遠端和近端膽管，切割兩個結扎部位中間的部分，注射2ml鹽水，并縫合。
口服施用待測化合物(Iii)，劑量為3mg/kg或10mg/kg，每天兩次。即，將該化合物溶于共溶劑(PEG400∶乙醇∶Tween 80＝15∶7.5∶2.5)，用磷酸鹽緩沖液(pH7.4)稀釋五倍，并施用。給對照組施用不含待測化合物的溶液。自結扎膽管1周后開始施藥1周。
第二步制備組織切片和Sirius紅染色施藥后，處死大鼠。用10％中性福爾馬林固定肝，制備5μm厚的石蠟切片，并用0.1％Sirius紅(Direct red 80，Sigma)染色。用光學顯微鏡檢查組織切片以觀察染成紅色的膠原纖維，結果如圖1所示。
實驗4在SD大鼠中的膽汁停滯過程之中對凋亡的抑制作用依照實驗3第一步的流程給膽管被結扎的SD大鼠施用待測化合物(Iii)。手術后2周，處死大鼠。用10％中性福爾馬林固定肝，并制備5μm厚的石蠟切片。使用ApopTag過氧化物酶原位凋亡檢測試劑盒(Chemicon)依照制造商的說明書進行TUNEL染色。在放大倍數(shù)為200，拍照觀察到超過10處TUNEL染色的肝組織且沒有任何交疊，結果如圖2所示。對每個測試組中對遭受凋亡的細胞數(shù)進行計數(shù)，結果如下文表2所示。在下表中，假手術指膽管暴露但未結扎的情況，而BDL手術指結扎膽管后只施用載體的情況。
表2膽汁停滯過程中化合物(Iii)對肝細胞凋亡的抑制作用(單位TUNEL陽性細胞/視野)

結論在通過膽汁停滯誘導肝纖維化而建立的模型中，經(jīng)TUNEL染色顯示了化合物(Iii)對凋亡的有效抑制(75％抑制)。另外，在對照組中Sirius紅染色顯示了嚴重的纖維化，但是在化合物(Iii)處理組中幾乎不顯示纖維化。該結果證明了化合物(Iii)對大鼠中的肝纖維化的抑制作用，因而預期化合物(Iii)能夠在臨床應用中通過抑制肝細胞凋亡而展示抑制肝硬化的藥理學活性。其應用不僅可以擴展至由膽汁停滯引起的肝硬化，還可擴展至多種肝病，其中包括由凋亡引起的肝纖維化。
實驗5在大鼠中的消炎作用將雄性SD大鼠(6周齡，Orient)置于如下條件22℃，55％相對濕度，和12小時的光照-黑暗周期。隨意供應食物和水。在誘導水腫前，用體積測量器測量每只大鼠的足部體積。在誘導水腫前，給大鼠口服施用溶解了待測化合物的載體(PEG400∶乙醇∶Tween80＝15∶7.5∶2.5的混合液用磷酸鹽緩沖液稀釋十倍)或載體本身。將角叉菜聚糖(gamma)以濃度1％溶于鹽水，并皮下注射到大鼠的右后足中，劑量100μl。3小時后，再次用體積測量器測量右足體積。以水腫抑制(％)顯示待測化合物的效果(見表3)。水腫抑制(％)是依照下文方程式2計算的。
方程式2水腫抑制(％)＝100×(載體施用組的平均足部體積增量-待測化合物施用組的足部體積增量)/載體施用組的平均足部體積增量表3化合物(Iii)的水腫抑制作用

實驗6在大鼠中對風濕性關節(jié)炎的治療效果將雌性Lewis大鼠(7周齡，Charles River，日本)置于如下條件22℃，55％相對濕度，和12小時的光照-黑暗周期。隨意供應食物和水。于4℃將II型膠原(牛)以濃度2mg/ml溶于0.05M乙酸，并于4℃添加相同數(shù)量的完全弗氏佐劑以乳化溶液。將0.1ml如此乳化的溶液皮下注射到Lewis大鼠的鼠尾中。7天后，以相同方式再次注射乳化的溶液。自第二次注射乳化的溶液的日子開始，每天給大鼠口服施用溶解了待測化合物的載體(將PEG400∶乙醇∶Tween80＝15∶7.5∶2.5的混合液用磷酸鹽緩沖液稀釋十倍)或載體自身。自第一次注射含膠原的乳化溶液算起的第14天，再次用體積測量器測量右后足體積(見表4)。依照下文方程式3測定水腫抑制(％)。
方程式3水腫抑制(％)＝100×(第14天載體施用組的平均足部體積增量-第14天待測化合物施用組的足部體積增量)/第14天載體施用組的平均足部體積增量另外，通過Student t-檢驗由第14天的足部體積增量計算p值以確認顯著性。
表4足部水腫抑制作用

*p值＝0.032在大鼠足部水腫測試中，化合物(Iii)在劑量為3、30、和100mg/kg時分別顯示大約2、21、和23％的劑量依賴性水腫抑制作用。在風濕性關節(jié)炎模型中，在陰性對照組顯示最大水腫的第14天，化合物(Iii)施用組的足部水腫顯著減輕(大約減輕70％)。因此，認為化合物(Iii)在炎性疾病模型中對炎癥發(fā)展具有抑制作用，因而能夠治療自身免疫炎性疾病。
實驗7與已知化合物的效果比較測試依照本發(fā)明的化合物(Iii)和PCT/KR00/01047(WO 01/21600)中已知的LB84068MP(化合物68)，并將結果顯示于下文表5。
表5

正如上文表5所示，與LB84068MP相比，依照本發(fā)明的化合物(Iii)顯示的對胱天蛋白酶-8和Jurkat細胞的抑制活性提高10倍或更多，對LPS誘導的急性肝炎模型(小鼠)的抑制活性提高大約100倍。同樣，對于物理-化學特性而言，該化合物也顯示改進的溶解度，因而能夠容易的用作注射劑。即，與對比化合物LB84068MP相比，本發(fā)明的化合物在活性和物理-化學特性兩個方面都顯示高度改進的效果。
權利要求
1.符合如下通式(1)的化合物、或其鹽或立體異構體 其中I)R代表H、簡單烷基鏈(-SAC)、簡單環(huán)烷基鏈(-SCAC)、芳基(-Ar)、或用芳基取代的簡單烷基鏈(-SAC-Ar)，II)R1代表-SAC、-SCAC、-Ar、-SAC-Ar、或所有天然氨基酸的側鏈殘基；且當R1所附著的碳由于R1基團而變成立構中心時，符合通式(1)的化合物可以以特定非對映形或其混合物存在；或者，當R1是含羧基部分的氨基酸的側鏈殘基時，符合通式(1)的化合物可以具有酯形式(-CO2R3，其中R3是-SAC)或磺酰胺形式(-CONHSO2R4，其中R4是-SAC)的保護基團，或可以以制藥學可接受鹽的形式存在；或者當R1是含堿部分的氨基酸的側鏈殘基時，符合通式(1)的化合物也可以以制藥學可接受鹽的形式存在，III)R2代表-SAC、-SCAC、-Ar、-SAC-Ar、或天然氨基酸的側鏈殘基；且當R2所附著的碳由于R2基團而變成立構中心時，符合通式(1)的化合物可以以特定非對映形或其混合物存在；當R2是含羧基部分的氨基酸的側鏈殘基時，符合通式(1)的化合物可以具有酯形式(-CO2R5，其中R5是-SAC)或磺酰胺形式(-CONHSO2R6，其中R6是-SAC)的保護基團，或可以以制藥學可接受鹽的形式存在；或者，當R2是含堿部分的氨基酸的側鏈殘基時，符合通式(1)的化合物也可以以制藥學可接受鹽的形式存在，或者R2進一步代表H；-(CH2)nOR7，其中R7是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar，且n＝1或2；或-(CH2)nOC(＝O)R8，其中R8是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar，且n＝1或2，IV)A代表-(CH2)n-(n＝0-4)、-O-(CH2)n-(n＝0-4)、或-NR9-(CH2)n-(n＝0-4)，其中R9是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar，V)B代表H、-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar，或者VI)R和R1可以與它們所附著的碳原子一起形成環(huán)，其中-R-R1-是-(CH2)n-、-(CH2)n-O-(CH2)m-、或-(CH2)n-NR10-(CH2)m-，其中n+m＜9且R10是-SAC、-SCAC、-Ar、-SAC-Ar、-C(＝O)-SAC、-C(＝O)-SCAC、-C(＝O)-Ar、或-C(＝O)-SAC-Ar，VII)X代表-C(＝O)CH2OR11，其中R11是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar；-C(＝O)CH2OC(＝O)R12，其中R12是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar；-CH＝CH-CO2R13，其中R13是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar；-CH＝CH-SO2R14，其中R14是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar；-C(＝O)CH＝CH2；或-COCH2-W，其中W是-N2、-F、-Cl、-Br、-I、-NR15R16(R15和R16各自是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar，或者可以一起形成3至6元飽和或不飽和環(huán)狀基團)、-SR17(R17是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar)，或是下列通式 其中Y是H、-OH、-OR18(R18＝-SAC或-SCAC)、-C(＝O)R19(R19＝-H、-SAC、或-SCAC)、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NC、-N3、-CO2H、-CF3、-CO2R20(R20＝-SAC或-SCAC)、-C(＝O)NHR21(R21＝-SAC或-SCAC)、或-C(＝O)NR22R23(R22和R23各自是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar)，R24是H、-SAC、-SAC-Ar、或-Ar。
2.依照權利要求1的化合物，其中R代表H。
3.依照權利要求1的化合物，其中R1代表-CH2COOH、-CH2COOR3(R3＝SAC)、或-CH2CONHSO2R4(R4＝SAC)。
4.依照權利要求1的化合物，其中R2代表H、-SAC、-Ar、或-(CH2)nOR7(R7＝-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar，且n＝1或2)。
5.依照權利要求1的化合物，其中X代表-C(＝O)CH2OAr、-C(＝O)CH2OC(＝O)Ar、或-COCH2-W，其中W是-N2、-F、-Cl、-Br、-I、-NR15R16(R15和R16各自是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar，或者可以一起形成3至6元飽和或不飽和環(huán)狀基團)、或-SR17(R17是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar)。
6.依照權利要求1的化合物，其中I)R代表H，II)R1代表-CH2COOH、-CH2COOR3(R3＝SAC)、或-CH2CONHSO2R4(R4＝SAC)，III)R2代表H、-SAC、-Ar、或-(CH2)nOR7(R7＝-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar，且n＝1或2)，IV)A代表-(CH2)n-(n＝0-4)或-O-(CH2)n-(n＝0-4)，V)B代表H、-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar，VI)X代表-COCH2N2、-COCH2F、-COCH2Cl、-COCH2Br、-COCH2I、-COCH2OAr、-COCH2OCOAr、或-COCH2SR17(R17是-SAC、-SCAC、-Ar、或-SAC-Ar)。
7.依照權利要求1的化合物，其選自下組(1)(3S)-5-[(2，6-二氯苯甲酰)氧基]-3-({[5-甲基-3-苯基-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iaa)；(2)(3S)-3-({[5-甲基-3-苯基-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-苯氧基戊酸(Ibb)；(3)(3S)-3-({[5-乙基-3-苯基-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(Icc)；(4)(3S)-3-({[5-乙基-3-(1-萘基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(Idd)；(5)(3S)-3-({[5-乙基-3-(2-萘基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(Iee)；(6)(3S)-3-({[5-乙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(Iff)；(7)3-({[5-乙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Igg)；(8)3-({[5-乙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸乙酯(Ihh)；(9)5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iii)；(10)3-({[5-乙基-3-(4-喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Ijj)；(11)3-({[3-(苯并噻吩-2-基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Ikk)；(12)(3S)-3-([{3-(1，3-二甲基-1H-吲哚-2-基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(Ill)；(13)3-({[3-(1，3-二甲基-1H-吲哚-2-基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Imm)；(14)(35)-3-({[5-乙基-3-(1-萘基甲基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(Inn)；(15)(3S)-5-[(2，6-二氯苯甲酰)氧基]-3-[({5-乙基-3-[2-(1-萘基)乙基]-4，5-二氫-5-異噁唑基}羰基)氨基]-4-氧戊酸(Ioo)；(16)(3S)-3-[({5-乙基-3-[(1-萘氧基)甲基]-4，5-二氫-5-異噁唑基}羰基)氨基]-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(Ipp)；(17)(3S)-3-{[(3-{[(4-氯-1-萘基)氧基]甲基}-5-乙基-4，5-二氫-5-異噁唑基)羰基]氨基}-4-氧-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(Iqq)；(18)(3S，4E)-6-乙氧基-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-6-氧-4-己烯酸(Irr)；(19)(3S，4E)-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-5-(甲磺酰基)-4-戊烯酸(Iss)；(20)5-氟-3-({[(5S)-3-(1-異喹啉基)-5-丙基-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Itt)；(21)3-({[(5S)-5-乙基-3-(1-萘基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iuu)；(22)3-({[(5S)-5-乙基-3-(2-喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Ivv)；(23)3-({[(5R)-5-乙基-3-(3-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iww)；(24)3-({[5-乙基-3-(8-喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Ixx)；(25)3-({[5-乙基-3-(3-喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iyy)；(26)5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(2-喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Izz)；(27)3-({[5-乙基-3-(2-異丙基苯基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa1)；(28)3-[({3-[3-(叔丁基)苯基]-5-乙基-4，5-二氫-5-異噁唑基}羰基)氨基]-5-氟-4-氧戊酸(Iaa2)；(29)3-[({3-[4-(叔丁基)苯基]-5-乙基-4，5-二氫-5-異噁唑基}羰基)氨基]-5-氟-4-氧戊酸(Iaa3)；(30)5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(2-異丙基苯基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iaa4)；(31)3-[({(5R)-3-[3-(叔丁基)苯基]-5-異丙基-4，5-二氫-5-異噁唑基}羰基)氨基]-5-氟-4-氧戊酸(Iaa5)；(32)3-{[(3-[1，1′-聯(lián)苯]-3-基-5-異丙基-4，5-二氫-5-異噁唑基)羰基]氨基}-5-氟-4-氧戊酸(Iaa6)；(33)3-({[5-乙基-3-(2-吡啶基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa7)；(34)3-[({3-[4-(叔丁基)-2-吡啶基]-5-乙基-4，5-二氫-5-異噁唑基}羰基)氨基]-5-氟-4-氧戊酸(Iaa8)；(35)3-[({(5R)-3-[4-(叔丁基)-2-吡啶基]-5-異丙基-4，5-二氫-5-異噁唑基}羰基)氨基]-5-氟-4-氧戊酸(Iaa9)；(36)3-({[5-乙基-3-(4-異丁基-2-吡啶基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa10)；(37)3-({[3-(4-乙?；?2-吡啶基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa11)；(38)3-({[3-(4-環(huán)丙基-2-吡啶基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa12)；(39)3-({[3-(4-環(huán)戊基-2-吡啶基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa13)；(40)3-({[(5R)-3-(4-環(huán)戊基-2-吡啶基)-5-異丙基-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa14)；(41)3-({[3-(4-環(huán)己基-2-吡啶基)-5-乙基-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa15)；(42)3-({[5-乙基-3-(5，6，7，8-四氫-1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa16)；(43)5-氟-3-({[5-異丙基-3-(4-苯基-2-吡啶基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iaa17)；(44)(3S)-5-[(二苯基磷?；?氧基]-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iaa18)；(45)(3S)-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-{[1-苯基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-5-基]氧基}戊酸(Iaa19)；(46)(3S)-5-[(4-芐基-5-氧-2，5-二氫-3-呋喃基)氧基-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iaa20)；(47)(3S)-5-(異丁酰氧基)-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iaa21)；(48)(3S)-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-己烯酸(Iaa22)；(49)(3S)-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2-吡啶氧基)戊酸(Iaa23)；(50)(3S)-3-({[5-乙基-3-(2-異丙基苯基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧-5-(2-吡啶氧基)戊酸(Iaa24)；(51)2-{[(3S)-4-羧基-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-2-氧代丁基]氧基}-1-甲基吡啶鎓三氟甲磺酸鹽(Iaa25)；(52)2-{[(3S)-4-羧基-3-({[5-乙基-3-(2-異丙基苯基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-2-氧代丁基]氧基}-1-甲基吡啶鎓三氟甲磺酸鹽(Iaa26)；(53)3-({[3-(5-氯-1-甲基-1H-吲哚-2-基)-5-異丙基-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa27)；(54)3-({[3-(1，5-二甲基-1H-吲哚-2-基)-5-異丙基-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-5-氟-4-氧戊酸(Iaa28)；和(55)(3S)-5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iii-1)。
8.依照權利要求1的化合物，其是5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iii)。
9.符合通式(1a)的化合物 其中A、B、R、R1、R2、和X的定義與權利要求1中所述相同。
10.依照權利要求9的化合物，其是(3S)-5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸(Iii-1)。
11.制備權利要求10中定義的化合物(Iii-1)的方法，包括下列步驟將(3S)-5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸與(3R)-5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸的混合物溶于甲基叔丁基醚，添加少量結晶的(3S)-5-氟-3-({[(5R)-5-異丙基-3-(1-異喹啉基)-4，5-二氫-5-異噁唑基]羰基}氨基)-4-氧戊酸作為晶種材料以生成晶體，并將該晶體在乙酸乙酯/正己烷溶劑系統(tǒng)中再結晶。
12.包含權利要求1中定義的符合通式(1)的胱天蛋白酶抑制物化合物、其鹽或立體異構體作為活性成分以及制藥學可接受載體且用于預防炎癥和凋亡的治療性組合物。
13.依照權利要求12的組合物，用于治療癡呆、腦中風、由AIDS引起的腦損傷、糖尿病、胃潰瘍、由肝炎引起的腦損傷、由肝炎誘導的肝病、急性肝炎、暴發(fā)性肝功能衰竭、肝硬化、敗血癥、器官移植排斥、風濕性關節(jié)炎、或由缺血性心臟病引起的心臟細胞凋亡。
14.依照權利要求12的組合物，用于治療急性肝炎或肝硬化。
15.依照權利要求12的組合物，用于治療風濕性關節(jié)炎。
16.依照權利要求12的組合物，其配制成口服制劑、注射液、或貼劑。
17.依照權利要求12的組合物，包含權利要求8中定義的化合物(Iii)作為活性成分。
18.依照權利要求12的化合物，包含權利要求10中定義的化合物(Iii-1)作為活性成分。
19.制備權利要求12中定義的用于預防炎癥和凋亡的治療性組合物的方法，包括將權利要求1中定義的符合通式(1)的胱天蛋白酶抑制物化合物、其鹽或立體異構體與制藥學可接受載體混合。
20.用于預防炎癥和凋亡的方法，包括對患有炎癥和凋亡的患者施用有效量的權利要求1中定義的符合通式(1)的胱天蛋白酶抑制物化合物、其鹽或立體異構體。
21.權利要求1中定義的符合通式(1)的胱天蛋白酶抑制物化合物、其鹽或立體異構體用于預防炎癥和凋亡的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及作為針對多種胱天蛋白酶的抑制物的異噁唑啉衍生物、制備它的方法、以及包含它且用于預防炎癥和凋亡的治療性組合物。
文檔編號C07D413/12GK1842521SQ200480024702
公開日2006年10月4日 申請日期2004年8月26日 優(yōu)先權日2003年8月27日
發(fā)明者張惠卿, 吳英秀, 樸哲院, 張容溱, 樸泰教, 金圣燮, 金玟盯, 樸美貞, 樸正圭, 樸喜東, 閔庚湜, 李兌洙, 李相均, 金秀憲, 鄭熹鸝, 李宣和, 金禾東, 金愛梨, 樸基淑, 申鉉翼, 崔亨旭, 李圭雄, 李栽訓, 許太豪, 金鎬俊, 權泰植 申請人:株式會社Lg生命科學