專(zhuān)利名稱(chēng)：氨基甲酸酯－取代的吡唑并吡啶類(lèi)化合物的制作方法
技術(shù)內(nèi)容本發(fā)明涉及刺激可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶的化合物、其制備以及其作為藥物的應(yīng)用，特別是作為治療心血管病癥和/或性功能障礙的藥物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
哺乳動(dòng)物細(xì)胞中最重要的細(xì)胞傳遞系統(tǒng)之一是環(huán)鳥(niǎo)苷-磷酸(cGMP)。其與從內(nèi)皮釋放并傳遞激素和機(jī)械信號(hào)的一氧化氮(NO)一起形成了NO/cGMP系統(tǒng)。鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶催化了cGMP由鳥(niǎo)苷三磷酸(GTP)的生物合成。根據(jù)結(jié)構(gòu)特征和配體類(lèi)型將迄今為止所公開(kāi)的這一族物質(zhì)的代表性物質(zhì)分成兩組可以由促尿鈉排泄的肽刺激的微粒鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶和可以由NO刺激的可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶?？扇苄曾B(niǎo)苷酸環(huán)化酶由兩個(gè)亞基所組成并且十分可能每個(gè)雜二聚體包含一個(gè)血紅素，其是控制部位的一部分。后者對(duì)于激活機(jī)理是十分重要的。NO能與血紅素的鐵原子結(jié)合，從而可以顯著增加該酶的活性。相反，NO不能刺激沒(méi)有血紅素的制品。CO也能連接到血紅素的中心鐵原子上，但是由CO進(jìn)行的刺激顯然低于由NO進(jìn)行的刺激。
在cGMP的產(chǎn)生和由其而產(chǎn)生的磷酸二酯酶、離子通道以及蛋白激酶的調(diào)節(jié)中，鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶在各種生理學(xué)過(guò)程中扮演著重要的角色，特別是在平滑肌細(xì)胞的松弛和增殖、血小板聚集和粘合以及神經(jīng)元信號(hào)傳遞、和由上述過(guò)程受損而造成的病癥中起著重要作用。在病理生理學(xué)情況下，NO/cGMP系統(tǒng)可能被抑制，其可導(dǎo)致例如高血壓、血小板活化、細(xì)胞增生增加、內(nèi)皮機(jī)能障礙、動(dòng)脈粥樣硬化、心絞痛、心衰、血栓形成、中風(fēng)、性功能障礙和心肌梗死。
一種不受NO支配并且以影響有機(jī)體cGMP信號(hào)途徑為目標(biāo)的治療該類(lèi)病癥的可能方法是基于一種有希望的方法，這是因?yàn)檎J(rèn)為這種方法的效率高并且?guī)缀鯖](méi)有副作用。
迄今為止，其作用是以NO為基礎(chǔ)的化合物，如有機(jī)硝酸鹽一直不能用于可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶的治療刺激。NO是由生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)生的并且通過(guò)連在血紅素的中心鐵原子上而活化可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶。除副作用外，形成耐受性是這種治療方式的主要缺點(diǎn)之一。
近年來(lái)，已經(jīng)對(duì)一些可以直接刺激可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶，即不需要之前釋放的NO的物質(zhì)進(jìn)行了描述，如，例如，3-(5′-羥甲基-2′-呋喃基)-1-芐基吲唑(YC-1，Wu等人，Blood 84(1994)，4226；Mülsch等人，Brit.J.Pharmacol.120(1997)，681)、脂肪酸(Goldberg等人，J.Biol.Chem.252(1977)，1279)、二苯基碘鎓六氟磷酸鹽(Pettibone等人，Eur.J.Pharmacol.116(1985)，307)、異甘草素(Yu等人，Brit.J.Pharmacol.114(1995)，1587)和各種被取代的吡唑衍生物(WO 98/16223)。
此外，WO 98/16507、WO 98/23619、WO 00/06567、WO 00/06568、WO 00/06569、WO 00/21954、WO 02/42299、WO 02/42300、WO02/42301、WO 02/42302、WO 02/092596和WO 03/004503中描述了作為可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶刺激劑的吡唑并吡啶衍生物。其中還特別描述了在3位上具有嘧啶殘基的吡唑并吡啶。這種類(lèi)型的化合物在刺激可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶方面具有很高的體外活性。但是，已經(jīng)表明這些化合物在其體內(nèi)性質(zhì)方面，如，例如在其肝行為、藥動(dòng)學(xué)行為、其劑量-響應(yīng)關(guān)系或其代謝途徑方面具有一些缺點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的目的是提供可作為可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶刺激劑而沒(méi)有現(xiàn)有技術(shù)化合物上述缺點(diǎn)的另外的吡唑并吡啶衍生物。
該目的是由權(quán)利要求1的化本發(fā)明合物來(lái)實(shí)現(xiàn)的。這種新類(lèi)型的吡唑并吡啶衍生物的特點(diǎn)是在3位上具有一種嘧啶殘基，該嘧啶殘基具有特定的取代方式，即，在嘧啶環(huán)的5位上有氨基甲酸酯殘基，和在該嘧啶環(huán)的4位上具有氨基。
本發(fā)明特別是涉及式(I)的化合物以及其鹽、異構(gòu)體和水合物
其中R1是-NR3C(＝O)OR4，R2是氫或NH2，R3是氫或(C1-C4)-烷基，R4是(C1-C6)-烷基。
優(yōu)選的是其中R1是-NR3C(＝O)OR4，R2是氫或NH2，R3是(C1-C4)-烷基，R4是(C1-C4)-烷基的式(I)的化合物以及其鹽、異構(gòu)體和水合物。
特別優(yōu)選的是其中R1是-NR3C(＝O)OR4，R2是NH2，R3是甲基或乙基，R4是甲基、乙基或異丙基的式(I)的化合物以及其鹽、異構(gòu)體和水合物。
尤其優(yōu)選的是得自實(shí)施例8的化合物4，6-二氨基-2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-5-嘧啶基(甲基)氨基甲酸甲基酯
本發(fā)明式(I)的化合物還可以是其鹽的形式。在這里可提及的一般是與有機(jī)或無(wú)機(jī)堿或酸形成的鹽。
本發(fā)明優(yōu)選生理學(xué)可接受的鹽。本發(fā)明化合物的生理學(xué)可接受的鹽可以是本發(fā)明物質(zhì)與無(wú)機(jī)酸、羧酸或磺酸的鹽。特別優(yōu)選的是例如與鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、對(duì)-甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、醋酸、丙酸、乳酸、酒石酸、枸櫞酸、富馬酸、馬來(lái)酸或苯甲酸形成的鹽。
生理學(xué)上可接受的鹽同樣可以是具有游離羧基的本發(fā)明化合物的金屬或銨鹽。特別優(yōu)選的是例如鈉、鉀、鎂或鈣鹽、以及得自氨或有機(jī)胺如，例如乙胺、二乙胺或三乙胺、二或三乙醇胺、二環(huán)己基胺、二甲基氨基乙醇、精氨酸、賴(lài)氨酸或乙二胺的銨鹽。
本發(fā)明的化合物可以以互變異構(gòu)形式存在。這對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是公知的，并且本發(fā)明同樣也包含該類(lèi)形式。
本發(fā)明的化合物還可以是其可能的水合物的形式。
烷基通常是具有1至6，優(yōu)選1至4，特別優(yōu)選1至3個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，其優(yōu)選的實(shí)例有甲基、乙基、正-丙基、異丙基、叔-丁基、正-戊基和正-己基。
鹵素(用于本發(fā)明目的的鹵素)是氟、氯、溴和碘。
本發(fā)明還涉及一種制備本發(fā)明式(I)化合物的方法。其可以通過(guò)如下方式制備 將式(Ia)的化合物與式(II)的化合物進(jìn)行反應(yīng)得到式(I)的化合物， 其中R4的定義如上所述，R3-X1(II)，其中R3的定義如上所述，和X1是一種離去基團(tuán)，如，例如鹵素，優(yōu)選地是碘，或甲磺酸酯，其任選地是在有機(jī)溶劑中在冷卻的情況下進(jìn)行的，或[B]將式(III)的化合物與式(IV)的化合物進(jìn)行反應(yīng)，得到式(Ia)的化合物，
其中R4的定義如上所述，其任選是在有機(jī)溶劑中進(jìn)行反應(yīng)的，或[C]將式(V)的化合物與式(VI)的化合物進(jìn)行反應(yīng)，得到式(Ib)的化合物
其中R3和R4的定義如上所述，其任選是在有機(jī)溶劑中在加熱的情況下進(jìn)行反應(yīng)的， 其中R3和R4的定義如上所述。
式(II)和(IV)的化合物可以通過(guò)商業(yè)途徑獲得，或者在文獻(xiàn)中是已知的或者可以用普通技術(shù)人員公知的方式來(lái)進(jìn)行制備。
可以如下面的反應(yīng)路線所述的那樣來(lái)制備式(III)的化合物
化合物(III)可以通過(guò)一種根據(jù)[C]步驟的方法將化合物(V)與化合物(VII)反應(yīng)得到化合物(VIII)，隨后用水性阮內(nèi)鎳將化合物(VIII)氫化的兩步合成來(lái)獲得。所說(shuō)的氫化可以通過(guò)在有機(jī)溶劑例如二甲基甲酰胺中優(yōu)選在升高的壓力例如在50至70巴下優(yōu)選在65巴下將該反應(yīng)溶液攪拌幾小時(shí)，例如22小時(shí)來(lái)進(jìn)行，其優(yōu)選地是在升高的溫度，例如40至80℃，優(yōu)選地為60至65℃下進(jìn)行。
化合物(VII)可以根據(jù)與L.F.Cavalieri，J.F.Tanker，A.Bendich，J.Am.Chem.Soc.，1949，71，533所述方法相似的方法來(lái)進(jìn)行制備。
可以如下面反應(yīng)路線所述的那樣來(lái)制備化合物(V) 化合物(V)可以用一種多步合成法由文獻(xiàn)中已知的氰基丙酮酸乙酯的鈉鹽(Borsche和Manteuffel，Liebigs.Ann.Chem.1934，512，97)獲得。其在惰性溶劑如二噁烷中在保護(hù)性氣氛下在加熱情況下與2-氟芐基肼進(jìn)行的反應(yīng)得到了5-氨基-1-(2-氟芐基)-吡唑-3-羧酸乙酯，其可以通過(guò)在保護(hù)性氣氛下在酸性介質(zhì)中和加熱的情況下與二甲基氨基丙烯醛的反應(yīng)來(lái)被環(huán)化，得到相應(yīng)的吡啶衍生物。這種吡啶衍生物——1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-甲酸乙酯是用一種多級(jí)序列轉(zhuǎn)化來(lái)進(jìn)行的，所說(shuō)的多級(jí)序列包括用氨將酯轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的酰胺，用脫水劑如三氟醋酸酐脫水，得到相應(yīng)的腈衍生物，將該腈衍生物與乙醇鈉進(jìn)行反應(yīng)，最后將其與氯化銨進(jìn)行反應(yīng)，得到化合物(V)。
式(VI)的化合物可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法由相應(yīng)的氨基甲酸酯通過(guò)與甲酸乙酯進(jìn)行反應(yīng)來(lái)合成。該氨基甲酸酯可以用與Q.Li.Chu，T.W.Daniel，A.Claiborne，C.S.Cooper，C.M.Lee，J.Med.Chem.39(1996)3070-3088所述方法相似的方法來(lái)進(jìn)行制備。
給出式(I)化合物的式(Ia)和(II)化合物的反應(yīng)可以用等摩爾量的反應(yīng)物在有機(jī)溶劑中在冷卻的情況下將該反應(yīng)溶液攪拌幾小時(shí)，例如1小時(shí)來(lái)進(jìn)行，所說(shuō)的有機(jī)溶劑例如二甲基甲酰胺或四氫呋喃，該反應(yīng)優(yōu)選地是在存在1至2當(dāng)量，優(yōu)選1.1至1.5當(dāng)量堿如，例如氫化鈉或N，N-二-三甲基甲硅烷基氨化鈉的情況下進(jìn)行的，優(yōu)選地是在大氣壓下進(jìn)行的，所說(shuō)的冷卻例如在-10℃至室溫，優(yōu)選在0℃下進(jìn)行。
給出式(Ia)化合物的式(III)和(IV)化合物的反應(yīng)可以通過(guò)用等摩爾量的反應(yīng)物在有機(jī)溶劑例如有機(jī)堿中在0℃至室溫，優(yōu)選室溫的溫度下將該反應(yīng)溶液攪拌幾小時(shí)，例如12小時(shí)來(lái)進(jìn)行，所說(shuō)的有機(jī)堿優(yōu)選地是吡啶，其優(yōu)選地是在常壓下進(jìn)行的。
給出式(Ib)化合物的式(V)和(VI)化合物的反應(yīng)或給出式(VIII)化合物的式(V)和(VII)化合物的反應(yīng)可以通過(guò)用等摩爾量的反應(yīng)物或使用略微過(guò)量的式(VI)的化合物在有機(jī)溶劑如例如在烴如甲苯或二甲苯或N，N-二甲基甲酰胺中，在升高的溫度，例如80-160℃，優(yōu)選100-150℃，特別是在110℃的溫度下將該反應(yīng)溶液攪拌幾小時(shí)，例如9小時(shí)來(lái)進(jìn)行的，其優(yōu)選地是在存在2-3當(dāng)量，優(yōu)選2當(dāng)量堿，如例如三乙胺或甲醇鈉的情況下進(jìn)行的，其優(yōu)選地是在常壓下進(jìn)行的。
本發(fā)明式(I)的化合物表現(xiàn)出沒(méi)有預(yù)料到的有價(jià)值的藥理學(xué)作用譜。
本發(fā)明式(I)的化合物帶來(lái)了血管舒張和抑制血小板聚集的作用，并且導(dǎo)致血壓降低和冠狀血流增加。這些作用是通過(guò)可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶的直接刺激和細(xì)胞內(nèi)cGMP增加而介導(dǎo)的。此外，本發(fā)明式(I)的化合物增強(qiáng)了增加cGMP水平的物質(zhì)如例如EDRF(得自?xún)?nèi)皮的松弛因子)、NO-供體、原卟啉IX、花生四烯酸或苯肼衍生物的作用。
因此，其可在用于治療心血管病癥的藥物中，如，例如用于治療高血壓和心衰、穩(wěn)定和不穩(wěn)定的心絞痛、外周和心血管病癥、心律失常、用于治療血栓栓塞病癥和局部缺血如心肌梗死、中風(fēng)、短暫的局部缺血發(fā)作、外周血流紊亂、用于防止溶栓治療后的再狹窄、用于經(jīng)皮經(jīng)腔血管成形術(shù)(PTAs)、經(jīng)皮經(jīng)腔冠狀動(dòng)脈血管成形術(shù)(PTCAs)、旁路術(shù)以及用于治療動(dòng)脈硬化、哮喘病癥和泌尿生殖器系統(tǒng)的疾病如，例如，前列腺肥大、勃起功能障礙、雌性性功能障礙、骨質(zhì)疏松癥、青光眼、肺動(dòng)脈高血壓、胃輕癱和失禁的藥物。
本發(fā)明式(I)的化合物還適于控制特征為NO/cGMP系統(tǒng)紊亂的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。其特別適于改善認(rèn)識(shí)性受損后的知覺(jué)、注意力、學(xué)習(xí)能力或記憶力，如特別是在諸如輕微認(rèn)識(shí)性受損、與年齡有關(guān)的學(xué)習(xí)和記憶力受損、與年齡有關(guān)的記憶力下降、血管性癡呆、顱腦創(chuàng)傷、中風(fēng)、中風(fēng)后發(fā)生的癡呆(中風(fēng)后癡呆)、創(chuàng)傷后腦綜合征、一般性注意力受損、伴有學(xué)習(xí)和記憶問(wèn)題的兒童注意力受損、阿耳茨海默氏病、Lewy體性癡呆、伴有額葉變性的癡呆(包括皮克氏綜合征、帕金森氏病、進(jìn)行性核麻痹)、伴有皮質(zhì)基底(corticobasal)變性的癡呆、肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)、亨廷頓氏病、多發(fā)性硬化、丘腦變性、Creutzfeld-Jacob癡呆、HIV性癡呆、伴有癡呆的精神分裂癥或科爾薩科夫氏精神病之類(lèi)的情況/疾病/綜合征中發(fā)生的這些情況。其還適于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)病癥如焦慮、緊張和抑郁狀態(tài)、與中樞神經(jīng)有關(guān)的性功能障礙和睡眠障礙，并且還可用于控制食物、興奮劑和成癮性物質(zhì)攝取的病理學(xué)紊亂。
本發(fā)明式(I)的化合物還適于控制腦血流，從而代表了可有效控制偏頭痛的活性物質(zhì)。
本發(fā)明式(I)的化合物還適于預(yù)防和控制腦梗塞如中風(fēng)、腦局部缺血和顱腦創(chuàng)傷的后遺癥。其同樣可用于控制疼痛情況。
此外，本發(fā)明式(I)的化合物還具有抗炎作用，因此可用作抗炎劑。
本發(fā)明還包括至少一種本發(fā)明式(I)的化合物與一種或多種有機(jī)硝酸鹽或NO供體的組合。
用于本發(fā)明目的的有機(jī)硝酸鹽和NO供體一般是通過(guò)釋放NO或NO物質(zhì)而表現(xiàn)出其治療作用的物質(zhì)。可提及的優(yōu)選實(shí)例有硝普鈉、硝化甘油、硝酸異山梨酯、單硝酸異山梨酯、嗎多明和SIN-1。
此外，本發(fā)明還包含與一種或多種可抑制環(huán)鳥(niǎo)苷-磷酸(cGMP)的分解的化合物的組合。其優(yōu)選是磷酸二酯酶1、2和5；Beavo和Reifsnyder(1990)TiPS 11，第150至155頁(yè)命名的物質(zhì)的抑制劑。在這方面特別優(yōu)選的是磷酸二酯酶5的抑制劑(PDE V抑制劑)，尤其是化合物昔多芬(ViagraTM，EP-A 0 463 756，WO 94/28902)、伐地那非(WO99/24433)或tadalafil(WO 95/19978)中的一種。這些抑制劑加強(qiáng)了本發(fā)明化合物的作用，并且增加了所需的藥理學(xué)作用。
生物學(xué)調(diào)查研究體外血管舒張劑作用通過(guò)擊打后頸使兔子昏迷并放血。取出主動(dòng)脈，游離掉粘連組織并將其分成1.5mm寬的環(huán)，將其在緊張狀態(tài)下一個(gè)一個(gè)放到5ml包含通有卡泊金氣體的Krebs-Henseleit溶液的37℃的器官浴中，所說(shuō)的溶液具有下面的組成(mM)NaCl119；KCl4,8；CaCl2x2H2O1；MgSO4x7H2O1，4；KH2PO41,2；NaHCO325；葡萄糖10。用Statham UC2電池來(lái)檢測(cè)收縮的力量，將其放大并通過(guò)A/D轉(zhuǎn)換器(DAS-1802 HC，Keithley儀器München)將其數(shù)字化并將其并列地報(bào)告在圖形記錄器上。通過(guò)向該浴中漸增地加入苯福林使?jié)舛仍黾觼?lái)產(chǎn)生收縮。在進(jìn)行了幾個(gè)控制周期后，在各種情況的增加劑量中再對(duì)所研究物質(zhì)的另一次運(yùn)行進(jìn)行研究，并且將收縮的高度與最后一次在前運(yùn)行所獲得的收縮高度進(jìn)行比較。注意力在于必需由此計(jì)算出50％控制值的高度(IC50)。標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用體積為5μl，在該浴溶液中的DMSO含量相當(dāng)于0.1％。
實(shí)施例1的化合物的IC50值為670nM，實(shí)施例8的化合物的相應(yīng)值為500nM。
兔子模型在送來(lái)后將重3-5kg的成年雄性秘魯兔單獨(dú)飼養(yǎng)使其適應(yīng)幾天。其自由進(jìn)水并且每天進(jìn)食兩小時(shí)。將動(dòng)物保持在一種10/14小時(shí)日/夜節(jié)律(從8.00點(diǎn)開(kāi)始為照亮)中，室溫為22-24℃。
各治療組使用三至六只動(dòng)物，并且在開(kāi)始試驗(yàn)前立即對(duì)其稱(chēng)重。對(duì)于i.v.給藥而言，將物質(zhì)溶解于Transcutol(GATTEFOSSE GmbH)中并用20％濃度的Gremopor溶液(Cremophor(BASF)，水)以3/7的比例對(duì)其進(jìn)行稀釋。將0.5ml/kg的體積注射到耳靜脈中。水溶性的物質(zhì)是在0.9％氯化鈉溶液中被注射的。
對(duì)于口服給藥而言，將試驗(yàn)物質(zhì)溶解于6∶10∶9.69的甘油∶水∶聚乙二醇混合物中并以1ml/kg的體積通過(guò)管飼法來(lái)進(jìn)行給藥。
在休息的情況下，在趾骨區(qū)域兔子的陰莖不可見(jiàn)并且完全被陰莖的皮膚所覆蓋。通過(guò)用游標(biāo)卡尺測(cè)量伸出的陰莖來(lái)對(duì)勃起進(jìn)行評(píng)估。該測(cè)量是在給予該物質(zhì)后5、10、15、30、45、60和120分鐘后進(jìn)行的并且在口服給藥后，還在第3、4、5和6小時(shí)進(jìn)行測(cè)量。每次將用于此目的的動(dòng)物從籠子中取出，通過(guò)抓住頸部的皮毛和后爪將其固定，將其背部朝下翻轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)并進(jìn)行測(cè)量。進(jìn)行相應(yīng)的溶劑對(duì)照。(比較參考資料E.Bischoff，K.Schneider，Int.J.of Impotence Res.2001，13，230-235；E.Bischoff，U.Niewoehner，H.Haning，M.Es Sayed，T.Schenke，K.H.Schlemmer，The Journal of Urology，2001，165，1316-1318；E.Bischoff，Int.J.Impotence Res.2001，13，146-148)。
實(shí)施例8的化合物口服給藥的最小有效劑量是0.03mg/kg(同時(shí)i.v.給予0.2mg/kg硝普鈉SNP)。
靜脈內(nèi)給藥和口服給藥后藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的測(cè)定將被研究的物質(zhì)以溶液的形式靜脈內(nèi)給藥于動(dòng)物(例如，小鼠、大鼠、狗)，并且口服給藥可以以溶液或混懸液的形式通過(guò)管飼法來(lái)進(jìn)行。在進(jìn)行物質(zhì)的給藥后，在固定的時(shí)間點(diǎn)取血并將其肝素化，然后通過(guò)離心由其得到血漿。用LC/MS/MS對(duì)血漿中的物質(zhì)進(jìn)行定量分析。通過(guò)進(jìn)行了驗(yàn)證的藥動(dòng)學(xué)計(jì)算機(jī)程序，用以這種方式獲得的血漿濃度/時(shí)間曲線來(lái)計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。
在以0.3和1.0mg/kg口服給藥于大鼠后(以位于Solutol∶EtOH∶水＝1∶1∶8中的溶液形式進(jìn)行給藥)，實(shí)施例8的化合物表現(xiàn)出下面的血漿濃度(AUC)AUC標(biāo)準(zhǔn)(0.3mg/kg)＝0.326[kg*h/L]AUC標(biāo)準(zhǔn)(1.0mg/kg)＝0.548[kg*h/L]細(xì)胞色素P450酶的抑制在96孔板中自動(dòng)研究了對(duì)P-450同工酶(其對(duì)于代謝而言很重要)的抑制可能。用兩種不同的分析來(lái)進(jìn)行這種研究。
在以熒光代謝物形成為基礎(chǔ)的分析中，使用重組的酶(例如CYP1A2，2C8，2C9，2C19，2D6或3A4)和包含熒光素或香豆素部分結(jié)構(gòu)的一般物質(zhì)。在各種情況中，使用一種底物濃度和8個(gè)濃度的種潛在抑制劑。在用特定的重組CYP酶培養(yǎng)后，用熒光讀書(shū)器來(lái)測(cè)量熒光代謝物的強(qiáng)度并將其與對(duì)照(沒(méi)有抑制劑)進(jìn)行比較，并計(jì)算IC50值[Anal.Biochem.248，188(1997)]。。
在第二個(gè)分析中，用人的肝微粒體作為酶源，并且所用的CYP同2型-選擇性底物有非那西汀(CYP1A2)、雙氯芬酸(CYP2C9)、右美沙芬(CYP2D6)和咪噠唑侖(CYP3A4)。用LC-MS/MS來(lái)對(duì)所形成的每種代謝產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)量。假設(shè)抑制是競(jìng)爭(zhēng)性的，由與對(duì)照相比代謝產(chǎn)物形成的降低來(lái)計(jì)算Ki值(1種底物濃度和3種抑制劑濃度)。
細(xì)胞色素P450酶在人肝細(xì)胞培養(yǎng)物中的誘導(dǎo)為了對(duì)本發(fā)明物質(zhì)可能具有的誘導(dǎo)細(xì)胞色素P450酶的副作用進(jìn)行研究，以2.5×105個(gè)細(xì)胞的密度將人原發(fā)性肝細(xì)胞在24孔微量滴定板的兩層膠原之間在37℃下用5％CO2培養(yǎng)8天。每天都改變培養(yǎng)介質(zhì)。
在培養(yǎng)48小時(shí)后，將肝細(xì)胞用不同濃度的試驗(yàn)物質(zhì)進(jìn)行處理，將其與誘導(dǎo)劑利福平(RIF；50μM)、奧美拉唑(OME；100μM)和苯巴比妥(PB；2mM)進(jìn)行比較，一式兩份地進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)行5天。試驗(yàn)物質(zhì)的最終濃度為0.01-10μg/ml。
通過(guò)在第8天向細(xì)胞培養(yǎng)物中加入底物7-乙氧基試鹵靈(CYP1A2)、[14C]-S-美芬妥因(CYP2B6和2C19)和[14C]-睪酮(CYP3A4)來(lái)測(cè)定試驗(yàn)底物對(duì)細(xì)胞色素(CYP)P450酶1A2、2B6、2C19和3A4的誘導(dǎo)作用進(jìn)行測(cè)定。由以這種方式測(cè)量的、與未進(jìn)行處理的細(xì)胞相比而言的進(jìn)行了處理的細(xì)胞的CYP1A2、2B6、2C19和3A4酶的活性來(lái)發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)底物的誘導(dǎo)潛能。下面的表1表示了與誘導(dǎo)劑RIF、PB和OME相比實(shí)施例8的化合物的結(jié)果
表1在培養(yǎng)8天后對(duì)人肝細(xì)胞培養(yǎng)物中肝酶活性的誘導(dǎo)作用(標(biāo)準(zhǔn)化)

n.b.＝未測(cè)定本發(fā)明還涉及一種包含至少一種本發(fā)明化合物的藥物，其優(yōu)選地還一起包含一種或多種藥理學(xué)上可接受的賦形劑或載體，并且還涉及其用于上述目的的應(yīng)用。
該活性成分可以具有全身和/或局部作用。為此，其可以以適宜的途徑進(jìn)行給藥，所說(shuō)的適宜途徑如，例如口服、胃腸外、肺、鼻、舌下、舌、頰、直腸、經(jīng)皮、結(jié)膜、局部給藥或以植入物的形式給藥。
該活性成分還可以以適于這些給藥途徑的給藥形式進(jìn)行給藥。
適于口服給藥的有可以迅速和/或以改變的方式傳遞活性成分的公知的給藥形式，如，例如片劑(未包衣片和包衣片，例如具有腸包衣或膜包衣的片劑)、膠囊、糖衣片、顆粒、小藥丸、粉劑、乳劑、混懸液、乳劑和氣霧劑。
采用胃腸外給藥可能可避免吸收步驟(靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、心內(nèi)、脊柱內(nèi)或腰髓內(nèi)給藥)或者包含吸收(肌內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、經(jīng)皮、或腹膜內(nèi)給藥)。適于胃腸外給藥的給藥形式特別是用于注射和輸入的溶液、混懸液、乳劑、冷凍干燥物和無(wú)菌粉末形式的制劑。
適于其它給藥途徑的有例如吸入(特別是粉末吸入、噴霧)的藥物、鼻滴劑/溶液、噴霧劑；用于舌、舌下或頰給藥的片劑或膠囊、栓劑、用于耳朵和眼睛的制劑、陰道膠囊、水性混懸液(洗劑、振搖混合物)、親脂性混懸液、軟膏、乳膏、乳液、糊劑、撒粉或植入物，如，例如斯滕特固定模。
可以用本身已知的方法將該活性成分轉(zhuǎn)化成所述的給藥形式。其可以用惰性無(wú)毒的適宜藥用賦形劑來(lái)實(shí)現(xiàn)。其特別是包括載體(例如微晶纖維素)、溶劑(例如液體聚乙二醇)、乳化劑(例如十二烷基硫酸鈉)、分散劑(例如聚乙烯吡咯烷酮)、合成和天然生物聚合物(例如白蛋白)、穩(wěn)定劑(例如抗氧劑如抗壞血酸)、著色劑(例如無(wú)機(jī)顏料如氧化鐵)或矯味劑和/或掩味劑。在適宜的情況中，所說(shuō)的活性成分可以以微囊包封的形式存在于一種或多種上述載體中。
式(I)化合物的治療有效量應(yīng)當(dāng)是以整個(gè)混合物約0.1至99.5，優(yōu)選約0.5至95％重量的濃度存在于上述藥物制劑中。
除本發(fā)明式(I)的化合物外，上述藥物制劑還可以包含其它藥物活性成分。
已經(jīng)一般性證明本發(fā)明的活性成分以每24小時(shí)約0.001至約50，優(yōu)選0.001至10mg/kg體重的總量進(jìn)行給藥在人和獸醫(yī)中都是有利的，為了獲得所需的結(jié)果，任選可以采用多個(gè)單劑量的形式來(lái)進(jìn)行給藥。一個(gè)單劑量?jī)?yōu)選地可以包含用量為約0.001至約30，特別是0.001至3mg/kg體重本發(fā)明的活性成分。
下面用非限制性的優(yōu)選實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了更詳細(xì)的解釋。除非特別說(shuō)明，否則所有的數(shù)量數(shù)據(jù)涉及的都是重量百分比。在各種情況中，液/液溶液的溶劑比、稀釋比、和濃度數(shù)據(jù)涉及的都是指體積而言。
縮寫(xiě)CAN乙腈BABA 醋酸正-丁酯/正-丁醇/冰醋酸/磷酸緩沖劑pH6(50∶9∶25.15；有機(jī)相)conc. 濃縮的DCI直接化學(xué)電離(在MS中)DCM二氯甲烷
DIEA N，N-二異丙基乙胺DMSO 二甲基亞砜DMF N，N-二甲基甲酰胺d.Th.理論值EA 乙酸乙酯(醋酸乙酯)EI 電子撞擊電離(在MS中)ESI 電噴霧電離(在MS中)Fp. 熔點(diǎn)ges. 飽和的h小時(shí)HPLC 高壓高效液相色譜konz.濃縮的LC-MS串聯(lián)的液相色譜/質(zhì)譜LDA 二異丙基氨化鋰MCPBA間-氯過(guò)氧苯甲酸MS 質(zhì)譜NMR 核磁共振波譜proz.百分比的Rf 保留指數(shù)(在TLC中)RP-HPLC 反相HPLCRT 室溫Rt保留時(shí)間(在HPLC中)THF 四氫呋喃TLC 薄層色譜薄層色譜的流動(dòng)相T1 E1 甲苯/乙酸乙酯(1∶1)T1 EtOH1 甲苯-乙醇(1∶1)C1 E1 環(huán)己烷/乙酸乙酯(1∶1)C1 E2 環(huán)己烷/乙酸乙酯(1∶2)LCMS和HPLC法方法1(LCMS)儀器Micromass Platform LCZ，HP 1100；柱Symmetry C18，50mm×2.1mm，3.5μm；洗脫劑A乙腈+0.1％甲酸，洗脫劑B水+0.1％甲酸；梯度0.0分鐘10％A→4.0分鐘90％A→6.0分鐘90％A；烘箱40℃；流速0.5ml/分鐘；UV檢測(cè)208-400nm.
方法2(LCMS)儀器Micromass Quattro LCZ，HP 1100；柱Symmetry C18，50mm×2.1mm，3.5μm；洗脫劑A乙腈+0.1％甲酸，洗脫劑B水+0.1％甲酸；梯度0.0分鐘10％A→4.0分鐘90％→6.0分鐘90％A；烘箱40℃；流速0.5ml/分鐘；UV檢測(cè)208-400nm。
方法3(LCMS)儀器Waters Alliance 2790 LC；柱Symmetry C18，50mm×2.1，3.5μm；洗脫劑A水+0.1％甲酸，洗脫劑B乙腈+0.1％甲酸；梯度0.0分鐘5％B→5.0分鐘10％B→6.0分鐘10％B；溫度50℃；流速l.Oml/分鐘；UV檢測(cè)210nm。
方法4(HPLC)儀器帶有DAD檢測(cè)的HP 1100；柱Kromasil RP-18，60mm×2mm，3.5μm；洗脫劑A＝5ml HClO4/1H2O，B＝ACN；梯度0分鐘2％B，0.5分鐘2％B，4.5分鐘90％B，6.5分鐘90％B；流速0.75ml/分鐘；溫度30℃；檢測(cè)UV 210nm。
制備RP-HPLC柱YMC-凝膠；洗脫劑乙腈/水(梯度)；流速50ml/分鐘；溫度25℃；檢測(cè)UV 210nm。
起始化合物實(shí)施例1A5-氨基-1-(2-氟芐基)-吡唑-3-甲酸乙酯
在氬氣下，在有效攪拌的情況下，將111.75g(75ml，0.98mol)三氟醋酸在室溫下加入到100g(0.613mol)位于2.5l二噁烷中的氰基丙酮酸乙酯的鈉鹽(用與Borsche和Manteuffel，Liebigs Ann.1934，512，97的方法相似的方法制備的)中，將該混合物攪拌10分鐘，在此期間該前體中的大部分溶解然后，向其中加入85.93g(0.613mol)2-氟芐基肼，并將該混合物加熱回流一整夜。在冷卻后，抽濾過(guò)濾出已經(jīng)分離出來(lái)的三氟醋酸鈉結(jié)晶，并用二噁烷對(duì)其進(jìn)行洗滌，然后將該溶液再按照其實(shí)際上應(yīng)該做的那樣進(jìn)行反應(yīng)。
實(shí)施例2A1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-甲酸乙酯 將得自實(shí)施例1A的溶液與61.25ml(60.77g，0.613mol)二甲基氨基丙烯醛和56.28ml(83.88g，0.736mol)三氟醋酸混合，并將其在氬氣下煮沸三天。然后在真空下蒸發(fā)掉溶劑，將殘余物加入到2l水中并用乙酸乙酯萃取三次，每次使用1升乙酸乙酯。將所合并得有機(jī)層用硫酸鎂干燥，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮。用2.5kg硅膠進(jìn)行色譜純化，用甲苯/甲苯-乙酸乙酯＝4∶1的梯度進(jìn)行洗脫。收率91.6g(兩步理論值的49.9％)。
熔點(diǎn)85℃Rf(SiO2，T1 E1)0.83實(shí)施例3A1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-甲酰胺
將10.18g(34mmol)得自實(shí)施例2A的酯引入到150ml已經(jīng)用氨在0-10℃下飽和了的甲醇中。將該混合物在室溫下攪拌兩天，然后將其在真空下濃縮。
Rf(SiO2，T1 E1)0.33實(shí)施例4A3-氰基-1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶 將36.1g(133mmol)得自實(shí)施例3A的1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-甲酰胺溶解于330ml THF中并向其中加入27g(341mmol)吡啶。然后，在10分鐘內(nèi)，向其中加入47.76ml(71.66g，341mmol)三氟醋酸酐，在此期間溫度升至40℃。將該混合物在室溫下攪拌一整夜。然后向其中加1升水并用乙酸乙酯萃取三次，每次使用0.5l乙酸乙酯。將有機(jī)相用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，然后用1N鹽酸洗滌，用硫酸鎂干燥，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中進(jìn)行濃縮。
收率33.7g(理論值的100％)熔點(diǎn)81℃Rf(SiO2，T1 E1)0.74
實(shí)施例5A(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-甲酰亞胺酸(carboximidate)甲酯 將30.37g(562mmol)甲醇鈉溶解于1.5l甲醇中并向其中加入36.45g(144.5mmol)3-氰基-1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶(得自實(shí)施例4A)。將該混合物在室溫下攪拌2小時(shí)，將所得的溶液直接用于下一步。
實(shí)施例6A1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-甲脒(carboxamidine) 將得自實(shí)施例5A的(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-甲酰亞胺酸甲酯在甲醇中的溶液與33.76g(32.19ml，562mmol)冰醋酸和9.28g(173mmol)氯化銨進(jìn)行混合，并將其在回流下攪拌一整夜。在真空下蒸發(fā)掉溶劑，將殘余物用丙酮仔細(xì)進(jìn)行研磨，用抽濾將沉淀出來(lái)的固體濾出。向其中加入2l水，然后在攪拌的同時(shí)向其中加入31.8g碳酸鈉，一共用1l乙酸乙酯將該混合物萃取三次，將有機(jī)相用硫酸鎂干燥并在真空下蒸發(fā)。
收率27.5g(兩步理論值的76.4％)熔點(diǎn).86℃Rf(SiO2，T1 EtOH1)0.08實(shí)施例7A2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-5-[(E)苯基二氮烯基(diazenyl)]-4，6-嘧啶二胺 將3.87g甲醇鈉，然后將12.2g(71.7mmol)苯偶氮基丙二腈(L.F.Cavalieri，J.F.Tanker，A.Bendich，J.Am.Chem.Soc.，1949，71，533)加入到進(jìn)行著攪拌的21.92g(71.7mmol)得自實(shí)施例6A的1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-甲脒在N，N-二甲基甲酰胺中的溶液中。將該混合物在110℃下攪拌一整夜，然后使之冷卻。通過(guò)抽濾將沉淀出來(lái)的固體濾出，用乙醇對(duì)其進(jìn)行洗滌，干燥后得到23g(理論值的73％)目標(biāo)化合物。
實(shí)施例8A2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-4，5，6-嘧啶三胺三鹽酸鹽
將5g(11.38mmol)得自實(shí)施例7A的2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-5-[(E)-苯基二氮烯基]-4，6-嘧啶二胺用800mg 50％阮內(nèi)鎳水溶液在60ml DMF中在65巴的氫氣壓下在62℃氫化22小時(shí)。通過(guò)用硅藻土通過(guò)抽濾進(jìn)行過(guò)濾濾出催化劑，將溶液在真空下蒸發(fā)，然后用5N鹽酸進(jìn)行攪拌。用抽濾將分離出來(lái)的淡黃褐色沉淀濾出并干燥。得到3.1g(理論值的59.3％)目標(biāo)化合物。通過(guò)與稀碳酸氫鈉溶液一起進(jìn)行振搖并用乙酸乙酯進(jìn)行萃取得到游離堿。用抽濾將在兩相中都不溶的固體濾出。乙酸乙酯相還包少量的游離堿。
實(shí)施例9A甲基氰基甲基(甲基)氨基甲酸酯 其制備與Q.Li.Chu，T.W.Daniel，A.Claiborne，C.S.Cooper，C.M.Lee，J.Med.Chem.1996，39，3070-3088相似。
實(shí)施例10A(E)-2-氰基-2-[(甲氧基羰基)(甲基)氨基]乙烯醇鈉
在氬氣下將0.46g(0.01mmol)甲醇鈉加入到四氫呋喃中(溶液A)。然后將1.00g(0.01mmol)得自實(shí)施例9A的甲基氰基-甲基(甲基)氨基甲酸酯加入到1.73g(0.02mmol)甲酸乙酯中。將溶液A緩慢滴加到這種混合物中。將該混合物在RT下攪拌一整夜。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在真空下對(duì)溶劑進(jìn)行濃縮，向殘余物中加入乙醚。用抽濾將分離出來(lái)的結(jié)晶濾出并將其在高真空度下進(jìn)行干燥。
收率1.05g(理論值的76％)HPLC(方法4)Rt＝1.35分鐘。
1H-NMR(200MHz，DMSO-d6)δ＝2.90(d，1H)，3.35(s，3H)，3.47(s，3H).
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例實(shí)施例14-氨基-2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-5-嘧啶基-(甲基)氨基甲酸乙酯 在氬氣下，將0.80g(2.61mmol)得自實(shí)施例6A的1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-甲脒、0.51g(2.86mmol)得自實(shí)施例10A的(E)-2-氰基-2-[(甲氧基羰基)(甲基)氨基]乙烯醇鈉和0.53g 0.73ml(5.23mmol)三乙胺加入到50ml甲苯中。將該混合物加熱回流9小時(shí)。然后將其再冷卻至RT，并將其用二氯甲烷和水混合和萃取。將有機(jī)相用硫酸鎂干燥，過(guò)濾，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在真空下進(jìn)行濃縮。將殘余物與5ml乙醚混合并隨即結(jié)晶。將結(jié)晶抽濾濾出，干燥，用制備性RP-HPLC純化。
收率20.2mg(理論值的2％)LC/MS(方法2)Rt＝3.01分鐘MS(EI)m/z＝408(M+H)+1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ＝3.09(s，3H)，3.29(s，3H)，5.83(s，2H)，7.09-7.42(m，5H)，8.20(s，1H)，8.64(dd，1H).8.94(dd，1H)，9.27(寬單峰，2H).
實(shí)施例24，6-二氨基-2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-5-嘧啶基氨基甲酸乙酯 將107.35mg(0.31mmol)得自實(shí)施例8A的2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-4，5，6-嘧啶三胺三鹽酸鹽加入到5ml吡啶中并將該混合物冷卻至0℃。向其中加入33.25mg(0.31mmol)氯甲酸乙酯，然后將該反應(yīng)在RT下攪拌一整夜。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在真空下蒸發(fā)掉吡啶，將殘余物用制備RP-HPLC進(jìn)行純化。
收率56.2mg(理論值的43％)LC/MS(方法1)Rt＝2.66分鐘MS(EI)m/z＝423(M+H)+1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ＝1.17-1.33(m，3H)，3.97-4.14(m，2H)，5.80(s，2H)，6.14(寬單峰，4H)，7.07-7.17(m，2H)，7.22(t，1H).7.29-7.40(m，2H)，7.97(寬單峰，1H)，8.60(d，1H)，9.07(d，1H).
實(shí)施例34，6-二氨基-2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-5-嘧啶基氨基甲酸異丙酯 與實(shí)施例2相似地用150mg(0.43mmol)得自實(shí)施例8A的2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-4，5，6-嘧啶三胺三鹽酸鹽、7.5ml吡啶和52.47mg(0.43mmol)氯甲酸異丙酯來(lái)進(jìn)行制備。將殘余物用二氯甲烷/甲醇混合物吸收，過(guò)濾并干燥。
收率165mg(理論值的88％)LC/MS(方法1)Rt＝2.84分鐘
MS(EI)m/z＝437(M+H)+1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ＝1.26(d，6H)，4.82(五重峰，1H)，5.92(s，2H)，7.07-7.20(m，2H)，7.25(t，1H).7.31-7.43(m，2H)，7.47-7.57(m，1H)，8.16(寬單峰，1H)，8.74(dd，1H)，8.98(dd，1H).
實(shí)施例44，6-二氨基-2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-5-嘧啶基氨基甲酸新戊酯 與實(shí)施例2相似地用100mg(0.29mmol)得自實(shí)施例8A的2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-4，5，6-嘧啶三胺三鹽酸鹽、5ml吡啶和43mg(0.29mmol)氯碘代碳酸新戊酯(Neopentyl chloridocarbonate)來(lái)進(jìn)行制備。
收率54mg(理論值的41％)LC/MS(方法1)Rt＝3.10分鐘
MS(EI)m/z＝465(M+H)+1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝0.95(寬單峰，9H)，3.74(s，2H)，5.79(s，2H)，6.10(寬單峰，4H)，7.08-7.17(m，2H).7.22(t，1H)，7.29-7.39(m，2H)，8.00(寬單峰，1H)，8.60(dd，1H)，9.06(dd，1H).
實(shí)施例54，6-二氨基-2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-5-嘧啶基氨基甲酸甲酯 將30.5g(87.0mmol)得自實(shí)施例8A的2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-4，5，6-嘧啶三胺三鹽酸鹽溶解于30ml吡啶中。將所得的溶液冷卻至0℃。向其中加入8.22g(87.0mmol)氯甲酸甲酯，然后將該混合物在0℃下再攪拌2小時(shí)。隨后將其溫?zé)嶂潦覝夭⑵湓贁嚢?2小時(shí)。在將其在真空下濃縮后，將殘余物用水進(jìn)行洗滌并干燥。通過(guò)將其在300ml沸騰的乙醚中進(jìn)行攪拌來(lái)完成進(jìn)一步純化。用抽濾將沉淀出來(lái)的產(chǎn)物濾出將其在真空下干燥。
收率32.6g(理論值的92％)LC/MS(方法1)Rt＝2.61分鐘
MS(EI)m/z＝409(M+H)+1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.61(s，3H)，5.80(s，2H)，6.19(寬單峰，4H)，7.08-7.16(m，2H).7.22(t，1H)，7.28-7.39(m，2H)，7.99(寬單峰，1H)，8.60(dd，1H)，9.05(dd，1H).
實(shí)施例64，6-二氨基-2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-5-嘧啶基(甲基)氨基甲酸乙酯 將54mg(0.13mmol)得自實(shí)施例3的4，6-二氨基-2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-5-嘧啶基氨基甲酸乙酯溶解于5ml DMF中，將該混合物冷卻至0℃，向其中加入7.67mg(0.19mmol)氫化鈉。然后，向其中滴加18.14mg(0.13mmol)碘代甲烷，然后將該混合物攪拌一小時(shí)。將該混合物與水混合并用二氯甲烷進(jìn)行萃取。將所合并的有機(jī)相用硫酸鎂干燥，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮。將殘余物首先用柱色譜(流動(dòng)相二氯甲烷/甲醇＝10∶1)進(jìn)行純化，然后用制備RP-HPLC進(jìn)行純化。
收率32mg(理論值的58％)LC/MS(方法2)Rt＝2.91分鐘
MS(EI)m/z＝437(M+H)+1H-NMR(200MHz，DMSO-d6)δ＝1.08(t，3H)，2.99(s，3H)，2.93-4.11(m，2H)，5.79(s，2H)，6.35(寬單峰，4H)，7.06-7.14(m，2H)，7.16-7.28(m，1H)，7.28-7.32(m，2H).8.59(dd，1H)，9.06(dd，1H).
實(shí)施例74，6-二氨基-2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-5-嘧啶基(甲基)氨基甲酸異丙酯 與實(shí)施例6相似地用75mg(0.17mmol)得自實(shí)施例3的4，6-二氨基-2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-5-嘧啶基氨基甲酸異丙酯、10.31mg(0.26mm0l)氫化鈉和24.4mg(0.17mmol)碘代甲烷進(jìn)行制備。將殘余物用制備RP-HPLC進(jìn)行純化。
收率32mg(理論值的41％)LC/MS(方法1)Rt＝2.97分鐘MS(EI)m/z＝451(M+H)+1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ＝1.09(d，6H)，2.98(s，3H)，4.80(五重峰，1H)，5.79(s，2H)，6.31(寬單峰，4H)，7.05-7.16(m，2H)，7.22(t，1H)，7.28-7.40(m，2H)，8.59(dd，1H)，9.07(dd，1H).
實(shí)施例84，6-二氨基-2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-5-嘧啶(甲基)氨基甲酸甲酯 與實(shí)施例6相似地用310mg(0.76mmol)得自實(shí)施例5的4，6-二氨基-2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-5-嘧啶基氨基甲酸甲酯、27.32mg(1.14mmol)氫化鈉和215.5mg(1.52mmol)碘代甲烷進(jìn)行制備。通過(guò)加入水和2摩爾氫氧化鉀溶液并用二氯甲烷進(jìn)行萃取來(lái)對(duì)該混合物進(jìn)行處理。將所合并的有機(jī)相擁硫酸鎂干燥并將其用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進(jìn)行濃縮。將殘余物用制備RP-HPLC純化。
收率93mg(理論值的29％)可以用下面的合成方法來(lái)制備較大數(shù)量的實(shí)施例8的化合物將20.0g(49.0mmol)得自實(shí)施例5的4，6-二氨基-2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-5-嘧啶基氨基甲酸甲酯溶解于257ml四氫呋喃中并將其冷卻至0℃。在15分鐘內(nèi)向其中滴加53.9ml(49.0mmol1M四氫呋喃溶液)二(三甲基甲硅烷基)氨化鋰。在將其在0℃下攪拌20分鐘后，向其中加入6.95g(53.9mmol)碘代甲烷。在一小時(shí)后，使該混合物溫?zé)嶂潦覝?，通過(guò)加入包含氯化銨水溶液來(lái)終止反應(yīng)。進(jìn)行相分離。用乙酸乙酯和二氯甲烷將水相萃取幾次。將所合并的有機(jī)相在真空下進(jìn)行濃縮。將通過(guò)這種方式得到的殘余物混懸于二氯甲烷和四氫呋喃(1∶1)的混合物中。用抽濾將不溶性結(jié)晶物濾出并將其用甲醇吸收。將該混合物回流一小時(shí)。在冷卻后，將分離出來(lái)的沉淀濾出。將通過(guò)這種方式得到的紅色固體混懸于100ml二噁烷和二氯甲烷(1∶1)的混合物中，在沸騰的同時(shí)，向其中加入20ml甲醇直至形成一種澄清的溶液。加入活性炭，將該混合物簡(jiǎn)短沸騰一下，然后用硅藻土熱過(guò)濾。將由此而得到的溶液蒸發(fā)至干燥。用甲醇吸收后，將所得的混懸液在室溫下攪拌一小時(shí)。用抽濾將形成的白色結(jié)晶濾出。
收率14.9g(理論值的72％)LC/MS(方法3)Rt＝1.85分鐘MS(EI)m/z＝423(M+H)+1H-NMR(200MHz，DMSO-d6)δ＝3.01(s，3H)，3.57(s，3H)，5.92(s，2H)，7.05.7.17(m，2H)，7.18-7.46(m，3H)，7.47-7.61(m，2H)，7.59-7.97(m，2H)，8.71-8.81(m，1H)，8.97(dd，1H).
實(shí)施例94，6-二氨基-2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-5-嘧啶基(乙基)氨基甲酸異丙酯 與實(shí)施例6相似地用60mg(0.14mmol)得實(shí)施例3的4，6-二氨基-2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-5-嘧啶基氨基甲酸異丙酯、4.95mg(0.21mmol)氫化鈉和21.4mg(0.17mmol)碘代乙烷進(jìn)行制備。為了完成反應(yīng)，再向其中加入相同數(shù)量的氫化鈉和碘代乙烷。將殘余物用制備RP-HPLC進(jìn)行純化。
收率43mg(理論值的67％)LC/MS(方法1)Rt＝2.97分鐘MS(EI)m/z＝465(M+H)+1H-NMR(200MHz，DMSO-d6)δ＝0.96-1.06(m，3H)，1.09(d，6H)，2.79-2.93(m，2H)，4.82(五重峰，1H)，5.80(s，2H)，6.25(寬單峰，4H)，7.01-7.14(m，2H)，7.15-7.50(m，3H)，8.60(dd，1H)，9.09(dd，1H).
權(quán)利要求
1.式(I)的化合物及其鹽、異構(gòu)體和水合物 其中R1是-NR3C(＝O)OR4，R2是氫或NH2，R3是氫或(C1-C4)-烷基，R4是(C1-C6)-烷基。
2.如權(quán)利要求1所述的化合物及其鹽、異構(gòu)體和水合物，其中R1是-NR3C(＝O)OR4，R2是氫或NH2，R3是(C1-C4)-烷基，R4是(C1-C4)-烷基。
3.如權(quán)利要求1所述的化合物及其鹽、異構(gòu)體和水合物，其中R1是-NR3C(＝O)OR4，R2是NH2，R3是甲基或乙基，R4是甲基、乙基或異丙基。
4.如權(quán)利要求1所述的化合物及其鹽、異構(gòu)體和水合物，其中所述化合物具有下面結(jié)構(gòu)4，6-二氨基-2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-5-嘧啶基(甲基)氨基甲酸甲酯；
5.一種制備權(quán)利要求1所定義的式(I)的化合物的方法，其特征在于[A]將式(Ia)的化合物與式(II)的化合物進(jìn)行反應(yīng) 其中R4的定義如權(quán)利要求1所述，R3-X1(II)，其中R3的定義如權(quán)利要求1所述，和X1是一種離去基團(tuán)，或[B]將式(III)的化合物與式(IV)的化合物進(jìn)行反應(yīng) 其中R4的定義如權(quán)利要求1所述，或[C]將式(V)的化合物與式(VI)的化合物進(jìn)行反應(yīng)， 其中R3和R4的定義如權(quán)利要求1所述，得到式(Ib)的化合物， 其中R3和R4的定義如權(quán)利要求1所述。
6.用于治療疾病的如權(quán)利要求1所定義的式(I)的化合物。
7.一種藥物，其包含至少一種如權(quán)利要求1所定義的式(I)的化合物和至少一種其他的賦形劑。
8.一種藥物，其包含至少一種如權(quán)利要求1所定義的式(I)的化合物和與其結(jié)合的至少一種有機(jī)硝酸鹽或NO供體。
9.一種藥物，其包含至少一種如權(quán)利要求1所定義的式(I)的化合物和與其結(jié)合的至少一種可以抑制環(huán)鳥(niǎo)苷-磷酸(cGMP)的分解的化合物。
10.如權(quán)利要求1所定義的式(I)的化合物用于制備治療心血管疾病的藥物方面的應(yīng)用。
11.如權(quán)利要求1所定義的式(I)的化合物用于制備治療高血壓的藥物的應(yīng)用。
12.如權(quán)利要求1所定義的式(I)的化合物用于制備治療血栓栓塞性病癥和局部缺血的藥物的應(yīng)用。
13.如權(quán)利要求1所定義的式(I)的化合物用于制備治療性功能障礙，尤其是勃起功能障礙和雌性性功能障礙的藥物的應(yīng)用。
14.如權(quán)利要求10至13中任意一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中使用如權(quán)利要求1所定義的式(I)的化合物和與其結(jié)合的至少一種有機(jī)硝酸鹽或NO供體或和與其結(jié)合的至少一種可以抑制環(huán)鳥(niǎo)苷-磷酸(cGMP)的分解的化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及可以刺激可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶的式(I)的化合物，其中R
文檔編號(hào)C07D471/04GK1665811SQ03816160
公開(kāi)日2005年9月7日 申請(qǐng)日期2003年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2002年5月8日
發(fā)明者C·阿隆索·阿利亞, E·比肖夫, K·明特爾, J·-P·施塔斯, E·施塔爾, S·維甘德, A·福伊雷爾 申請(qǐng)人:拜耳醫(yī)藥保健股份公司