專(zhuān)利名稱(chēng)：嘧啶化合物的制作方法
背景技術(shù)：
白細(xì)胞間介素-12(IL-12)是由兩種亞單位(p35和p40)組成的雜二聚細(xì)胞因子(p70)，并且在免疫應(yīng)答方面起著重要的作用，它是通過(guò)在先天抵抗力與抗原特異繼承免疫性之間架橋而起作用的，參見(jiàn)Trinchieri的Immunol Today，14335(1993)。例如，它會(huì)促進(jìn)1型T-輔助細(xì)胞(Th1)的應(yīng)答，并因此促進(jìn)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫作用，參見(jiàn)Chan等人的J Exp Med，173869(1991)；Seder等人的Proc Natl Acad Sci USA9010188(1993)；Manetti等人的J Exp Med 1771199(1993)；和Hsieh等人的Science 260547(1993)。過(guò)量生成IL-12會(huì)導(dǎo)致過(guò)度的Th1應(yīng)答，并可能引起炎性病癥，比如胰島素依賴(lài)型糖尿病、多發(fā)性硬化、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬、克羅恩氏病、或者膿毒癥。參見(jiàn)，例如，Gately等人的Annu Rev Immunol.16495(1998)；和Abbas等人的Nature383787(1996)。因此，抑制IL-12的過(guò)量生成是治療剛才提到的那些疾病的方法。參見(jiàn)Trembleau等人的Immunol.Today 16383(1995)；和Adorini等人的Chem.Immunol.68175(1997)。例如，通過(guò)調(diào)整IL-12的生成可以抑制IL-12的過(guò)量生成以及因此引起的過(guò)度的Th1型應(yīng)答?？梢允褂孟抡{(diào)IL-12的化合物來(lái)治療炎性疾病。參見(jiàn)Ma等人的Eur Cytokine Netw 954(1998)。
發(fā)明概述一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于式(I)的嘧啶化合物
其中R1是 [以下稱(chēng)作NC(RaRb)]、芳基、或雜芳基；各個(gè)R2和R4獨(dú)立地是Rc、鹵素、硝基、氰基、異硫硝基(isothionitro)、SRc、或ORc；或者R2和R4一起是羰基；R3是Rc、烯基、炔基、ORc、OC(O)Rc、SO2Rc、S(O)Rc、S(O2)NRcRd、SRc、NRcRd、NRcCORd、NRcC(O)ORd、NRcC(O)NRcRd、NRcSO2Rd、CORc、C(O)ORc、或C(O)NRcRd；R5是H或烷基；n是0、1、2、3、4、5、或6；X是O、S、S(O)、S(O2)、或NRc；Y是共價(jià)鍵、CH2、C(O)、C＝N-Rc、C＝N-ORc、C＝N-SRc、O、S、S(O)、S(O2)、或NRc；Z是N或CH；U和V中的一個(gè)是N，另一個(gè)是CRc；W是O、S、S(O)、S(O2)、NRc或NC(O)Rc；其中，各個(gè)Ra和Rb獨(dú)立地是H、烷基、芳基、雜芳基；各個(gè)Rc和Rd獨(dú)立地是H、烷基、芳基、雜芳基、環(huán)基、雜環(huán)基、或烷羰基。要說(shuō)明的是，上述任何取代基中所示的左邊的原子離嘧啶環(huán)最近。還要說(shuō)明，當(dāng)n是2或更大的數(shù)時(shí)，剛剛所述的嘧啶化合物可以具有兩個(gè)或多個(gè)不同的C(R2R4)部分，或者當(dāng)嘧啶化合物中含有超過(guò)一個(gè)含Rc的取代基時(shí)，Rc部分可以相同或不同。相同的規(guī)則適用于其他類(lèi)似的情況。還要說(shuō)明的是，Rc可以是單價(jià)或二價(jià)取代基。
關(guān)于式(I)，本發(fā)明嘧啶化合物的一個(gè)子集的特征在于R1是NC(RaRb)。在這些化合物中，U可以是N，V可以是CH，Z可以是N，W可以是O。另外，X可以是O或NRc；Rc可以是H、甲基、乙基或乙?；?；Y可以是共價(jià)鍵、O、S、或CH2，n可以是0、1、2、3、或4。在某些實(shí)施方案中，R3是芳基、雜芳基(如吡啶基)、ORc、SRc、C(O)ORc、NRcRd、或C(O)RcRd。在其他實(shí)施方案中，R3是 或 其中，各個(gè)A和A’獨(dú)立地是O、S或NH；各個(gè)Re和Rf獨(dú)立地是H、烷基、芳基、或雜芳基；m是1或2。
在嘧啶化合物的該子集中，Ra或Rb優(yōu)選是 或 其中，B是NRi、O或S；B’是N或CRi；Rg是H、鹵素、CN、烷基、環(huán)基、烷氧基、烷羰基、烷氧羰基、芳氧羰基、雜芳氧羰基、羥烷基、烷氨基、或烷氨基羰基；Rh是H、鹵素、CN、烷基、芳基、雜芳基、ORc、OC(O)Rc、SO2Rc、S(O)Rc、S(O2)NRcRd、SRc、NRcRd、NRcCORd、NRcC(O)ORd、NRcC(O)NRcRd、NRcSO2Rd、CORc、C(O)ORc、或C(O)NRcRd；Ri是H、烷基、或烷羰基；p是0、1或2；q是0、1、2、3或4。
Ra或Rb優(yōu)選是 或 其中，Rg是H、甲基、乙基、丙基、環(huán)丙基、甲氧基、乙氧基、鹵素或甲氧基羰基；Rh是F、Cl、CN、甲基、甲氧基、乙氧基、OC(O)CH3、OC(O)C2H5、C(O)OH、C(O)OC2H5、C(O)NH2、NHC(O)CH3、或S(O2)NH2；Ri是H、甲基、乙基或乙?；?；q是0、1或2。
本發(fā)明嘧啶化合物的另一子集，其特征在于R1是芳基或雜芳基。在這些化合物中，U可以是N，V可以是CH，Z可以是N，W可以是O。另外，X可以是O或NRc；Rc可以是H、甲基、乙基或乙?；?；Y可以是共價(jià)鍵、O、S、或CH2，n可以是0、1、2、3、或4。在某些實(shí)施方案中，R3是芳基、雜芳基(例如吡啶基，如吡啶-2-基或吡啶-3-基)、ORc、SRc、C(O)ORc、NRcRd、或C(O)RcRc。在其他實(shí)施方案中，R3是 或 其中，各個(gè)A和A’獨(dú)立地是O、S或NH；各個(gè)Re和Rf獨(dú)立地是H、烷基、芳基、或雜芳基；m是1或2。
在嘧啶化合物的該第二子集中，R1優(yōu)選是 其中，D是O、S或NRm；Rj是苯并、鹵素、CN、羥基、烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、芳氧基、或雜芳氧基；Rm是H、烷基、或烷羰基；r是0、1或2。優(yōu)選，R1是 Rj是甲基、乙基、丙基、或苯并；r是0、1或2。
式(I)化合物的第三子集，其特征在于R1是NC(RaRb)；各個(gè)R2和R4均是H；R3是H、烷基、芳基、雜芳基、環(huán)基、雜環(huán)基、烷氧基羰基、烷氨基羰基、或烷羰基；R5是H或烷基；n是0、1、2、3、4、5、或6；X是NRc；Y是共價(jià)鍵、CH2、C(O)、C＝N-Rc、C＝N-ORc、C＝N-SRc、O、S、S(O)、S(O2)、或NRc；Z是N或CH；U和V中的一個(gè)是N，另一個(gè)是CRc；W是O、S、S(O)、S(O2)、NRc或NC(O)Rc；其中，各個(gè)Ra和Rb獨(dú)立地是H、烷基、芳基、雜芳基；Rc是H、烷基、芳基、雜芳基、環(huán)基、雜環(huán)基、或烷羰基。
在嘧啶化合物的該第三子集中，優(yōu)選，Ra或Rb中的一個(gè)是H或烷基；另一個(gè)是任選被Rg和Rhp取代的芳基或雜芳基；Rg是鹵素、CN、烷基、烷氧基、烷羰基、烷氧羰基、芳氧羰基、雜芳氧羰基、羥烷基、烷氨基、或烷氨基羰基；Rh是鹵素、CN、羥基、烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、芳氧基、或雜芳氧基；q是0、1、2、3或4。優(yōu)選，Ra或Rb中的一個(gè)是H或烷基；另一個(gè)是 (例如， 如3-甲基苯基)其中，Rg是H、烷基、烷氧基、甲氧基羰基、或鹵素；Rh是鹵素、CN、羥基、烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、芳氧基、或雜芳氧基；q是0、1、2、3或4。
在某些實(shí)施方案中，X是NH；Y是O；n是2，或R3是雜芳基(例如吡啶基或1-氧吡啶基)或雜環(huán)基(如1H-吡啶-2-酮)。在其他實(shí)施方案中，U是N；V是CH；R3是雜芳基或雜環(huán)基。優(yōu)選，X是NH；Y是O；n是2，Ra或Rb中的一個(gè)是H或烷基；另一個(gè)是 其中，Rg可以是CN、羥烷基、烷氨基、烷氨基羰基、烷氧基羰基(如C(O)CH3)、或當(dāng)R3是雜芳基(如吡啶基)時(shí)是鹵素(F、Cl、Br或I)，或Rg可以是鹵素(如I)、烷基(如甲基)、或當(dāng)R3是雜環(huán)基(如1H-吡啶-2-酮)時(shí)是烷氧基羰基(如甲氧基羰基)。
上述烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、環(huán)基、和雜環(huán)基既包括取代的又包括未取代的部分。術(shù)語(yǔ)″取代的″是指各自替代氫原子的一個(gè)或多個(gè)取代基(其可以相同或不同)。取代基的實(shí)例包括但是不局限于鹵素(F、Cl、Br或I)、羥基、氨基、烷基氨基、芳氨基、二烷基氨基、二芳基氨基、氰基、硝基、巰基、羰基、脲基、氨基甲酰基、羧基、硫脲基、氰硫基、磺酰胺基、烷基、烯基、烷氧基、芳基、雜芳基、環(huán)基、雜環(huán)基，其中烷基、烯基、烷氧基、芳基、雜芳基、環(huán)基、和雜環(huán)基任選被烷基、芳基、雜芳基、鹵素、羥基、氨基、巰基、氰基、或者硝基取代。
這里使用的術(shù)語(yǔ)″烷基″是指包含1-6個(gè)碳原子的直鏈或者支鏈的烷基。烷基的實(shí)例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、叔丁基、和正戊基。類(lèi)似地，術(shù)語(yǔ)″烯基″或者″炔基″是指包含1-6個(gè)碳原子的直鏈或者支鏈的烯基或者炔基。
術(shù)語(yǔ)″芳基″是指具有至少一個(gè)芳香環(huán)的烴環(huán)系(單環(huán)或者雙環(huán))。芳基部分的實(shí)例包括但是不局限于苯基、萘基、和芘基。
術(shù)語(yǔ)″雜芳基″是指具有至少一個(gè)芳香環(huán)的烴環(huán)系(單環(huán)或者雙環(huán))，其中所述芳香環(huán)包含有至少一個(gè)雜原子，如O、N或S作為環(huán)系的一部分，其余部分是碳。雜芳基部分的實(shí)例包括但是不局限于呋喃基、吡咯基、噻吩基、噁唑基、咪唑基、噻唑基、吡啶基、嘧啶基、喹唑啉基、和吲哚基。
術(shù)語(yǔ)″環(huán)基″和″雜環(huán)基″是指含有4-14個(gè)環(huán)原子的部分或者完全飽和的單環(huán)或者雙環(huán)環(huán)系。雜環(huán)環(huán)包含一個(gè)或多個(gè)雜原子(如O、N或S)作為環(huán)系的一部分，其余部分是碳。環(huán)基和雜環(huán)基環(huán)的實(shí)例是環(huán)己烷、哌啶、哌嗪、嗎啉、硫代嗎啉、1，4-氧氮雜(1，4-oxazepane)，和1H-吡啶-2-酮。
術(shù)語(yǔ)″硫烷基″是指硫基。
以下列出本發(fā)明示范性的化合物N-{2-[3-(3，4-二甲氧基苯基)-丙基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基}-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼(化合物1)N-(2-正丁氧基-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基)-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼(化合物2)N-(2-(4-羥丁基)-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基)-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼(化合物3)N-[2-(2-[1，3]二氧六環(huán)-2-基-乙基)-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基]-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼(化合物4)N-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-N’-[2-(3-甲氧基丙基)-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基]-肼(化合物5)3-{4-[N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基硫烷基}-丙烷-1-醇(化合物6)3-{2-[N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基硫烷基}-丙烷-1-醇(化合物7)N-[2-(2，2-二甲基-[1，3]二氧戊烷-4-基甲氧基)-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基]-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼(化合物8)N-{2-[2-(3，4-二甲氧基苯基)乙氧基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基}-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼(化合物9)N-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼(化合物10)N-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(3-吡啶-2-基-丙基)-嘧啶-4-基]-肼(化合物11)N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼(化合物12)N-(3-乙基苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼(化合物13)N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(3-吡啶-2-基-丙基)-嘧啶-4-基]-肼(化合物14)N-(6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-N’-(1-間甲苯基-亞乙基)-肼(化合物15)N-[1-(1H-吲哚-3-基)-亞乙基]-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼(化合物16)3-甲基-苯甲醛O-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肟(化合物17)1H-吲哚-3-甲醛O-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肟(化合物18)N-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-N’-{6-嗎啉-4-基-2-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-肼(化合物19)N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-{6-嗎啉-4-基-2-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-肼(化合物20)丁基-{4-[N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-胺(化合物21)N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(吡啶-3-基氧)-嘧啶-4-基]-肼(化合物22)N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-(5-甲基-6-嗎啉-4-基-2-苯基嘧啶-4-基)肼(化合物23)N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-(2-苯基-6-硫代嗎啉-4-基-嘧啶-4-基)-肼(化合物24)(2，3-二甲基-1H-吲哚-5-基)-{6-嗎啉-4-基-2-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-胺(化合物25)(2，3-二甲基-1H-吲哚-5-基)-{4-嗎啉-4-基-6-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-2-基}-胺(化合物26)3-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-丙酸乙酯(化合物27)N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-{6-嗎啉-4-基-2-[2-(1-氧-吡啶-2-基)-乙氧基]-嘧啶-4基}-肼(化合物28)1-2-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基氧}-乙基)-1H-吡啶-2-酮(化合物29)N-(3-碘-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼(化合物30)N-(3-氟-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼(化合物31)N-(3-氯-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼(化合物32)N-(3-溴-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼(化合物33)3-{[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-亞肼基甲基}-苯甲酸甲酯(化合物34)1-(2-{4-[N’-(3-碘-苯亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基氧}-乙基)-1H-吡啶-2-酮(化合物35)3-{[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-亞肼基甲基}-苯甲酸N-甲基酰胺(化合物36)(3-{[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-亞肼基甲基}-苯基)-甲醇(化合物37)N，N-二乙基-4-{4-[N”-(3-甲基-苯亞甲基)肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-丁酰胺(化合物38)4-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-1-(4-甲基-哌嗪-1-基)丁烷-1-酮(化合物39)4-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-N-吡啶-4-基甲基丁酰胺(化合物40)4-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-N-吡啶-4-基丁酰胺(化合物41)它們的結(jié)構(gòu)如下所述化合物1
化合物2 化合物3 化合物4
化合物5 化合物6 化合物7 化合物8 化合物9
化合物10 化合物11 化合物12 化合物13 化合物14
化合物15 化合物16 化合物17 化合物18 化合物19
化合物20 化合物21 化合物22 化合物23 化合物24
化合物25 化合物26 化合物27 化合物28 化合物29
化合物30 化合物31 化合物32 化合物33 化合物34
化合物35 化合物36 化合物37 化合物38 化合物39
化合物40 化合物41 另一方面，本發(fā)明的特征在于包含有藥學(xué)上可接受的載體和有效量的至少一種本發(fā)明的嘧啶化合物的藥物組合物。
再一方面，本發(fā)明的特征在于治療與過(guò)量生成IL-12有關(guān)的病癥(例如，類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、膿毒癥、克羅恩氏病、多發(fā)性硬化、牛皮癬、或者胰島素依賴(lài)型糖尿病)的方法。該方法包括給予需要這種治療的患者(例如，人或者動(dòng)物)有效量的一種或多種本發(fā)明的嘧啶化合物。該方法也可以包括識(shí)別需要治療上述疾病或者病癥的患者的步驟。這種識(shí)別可以在患者或者健康專(zhuān)業(yè)人員的判斷之中，并且可以是主觀的(例如意見(jiàn))或者客觀的(例如，可通過(guò)試驗(yàn)或者診斷方法測(cè)定出來(lái))。
本發(fā)明的嘧啶化合物包括化合物本身，以及如果可適用的話包括其鹽和其潛藥。這種鹽，例如，可以在化合物上的帶正電荷的取代基(例如，氨基)和陰離子之間形成。適當(dāng)?shù)年庪x子包括但是不局限于氯化物、溴化物、碘化物、硫酸根、硝酸根、磷酸根、檸檬酸根、甲磺酸根、三氟醋酸根和醋酸根。同樣，化合物上的帶負(fù)電荷的取代基(例如，羧酸根)也可以與陽(yáng)離子形成鹽。適當(dāng)?shù)年?yáng)離子包括但是不局限于鈉離子、鉀離子、鎂離子、鈣離子、和銨基陽(yáng)離子，如四甲基銨離子。潛藥的實(shí)例包括酯及其他藥學(xué)上可接受的衍生物，其在給予患者時(shí)，能夠提供上述嘧啶化合物(參見(jiàn)Goodman和Gilman的《治療學(xué)的藥理學(xué)基礎(chǔ)》(The Pharmacological basis of Therapeutics)，第8版，McGraw-Hill，Int.編輯，1992，″藥物的生物轉(zhuǎn)化″(Biotransformation of Drugs))。
另外，本發(fā)明的一些嘧啶化合物具有一個(gè)或多個(gè)雙鍵，或者一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱(chēng)中心。這種化合物可以以外消旋物、外消旋混合物、單一對(duì)映體、單一的非對(duì)映體、非對(duì)映體混合物、和順式或者反式或者E-或者Z-二重異構(gòu)體的形式存在。
此外，上述嘧啶化合物也包括其N(xiāo)-氧化物。術(shù)語(yǔ)″N-氧化物″是指一個(gè)或多個(gè)氮原子，當(dāng)存在于嘧啶化合物中時(shí)，呈N-氧化物的形式，即N→O。
本發(fā)明預(yù)計(jì)的取代基和變量的組合只是為了形成穩(wěn)定的嘧啶化合物。這里使用的術(shù)語(yǔ)″穩(wěn)定″是指化合物具有的穩(wěn)定性足以使得其能夠制備，并且化合物的完整性能保持充分的一段時(shí)間以便用于本發(fā)明詳細(xì)描述的目的(例如，治療與過(guò)量生成IL-12有關(guān)的病癥，比如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、膿毒癥、克羅恩氏病、多發(fā)性硬化、牛皮癬、或者胰島素依賴(lài)型糖尿病)。
用于治療與過(guò)量生成IL-12有關(guān)的病癥的包含一種或多種上述嘧啶化合物的組合物，以及這種組合物在制備剛才描述用途的藥物方面的應(yīng)用也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本發(fā)明的其他特征、目的和優(yōu)點(diǎn)將從說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中顯而易見(jiàn)。
本發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明上述化合物可以通過(guò)本領(lǐng)域熟知的方法，以及這里公開(kāi)的合成路線制備。例如，嘧啶化合物可以通過(guò)使用2，4，6-三氯-嘧啶作為原料而制備。
三個(gè)氯基團(tuán)可以被各種取代基代替。更具體地說(shuō)，第一個(gè)氯基(例如，在6位上的氯基)可以與例如嗎啉反應(yīng)形成嗎啉基嘧啶。2-芳基和2-烷基嘧啶二氯化合物也可以通過(guò)使脒與丙二酸酯反應(yīng)，隨后用氯化氧磷處理得到。第二個(gè)氯基團(tuán)可以通過(guò)與親核試劑比如醇，在堿例如氫化鈉的存在下反應(yīng)而被取代。在其他的實(shí)例中，其中Y是CH2的式(I)化合物(如，化合物1)，可以通過(guò)使嘧啶氯化物與格利雅試劑、有機(jī)錫試劑、有機(jī)銅試劑、有機(jī)硼酸、或者有機(jī)鋅試劑在作為催化劑的有機(jī)鈀化合物的存在下反應(yīng)得到。可以制備其異構(gòu)體形式。希望的異構(gòu)產(chǎn)物可以通過(guò)，例如高效液相色譜法而與其他異構(gòu)體分離開(kāi)來(lái)。第三個(gè)氯基與例如肼進(jìn)行置換反應(yīng)，偶合的肼部分的伯胺再與醛，例如吲哚-3-醛反應(yīng)形成腙鍵。這樣，得到了本發(fā)明的嘧啶化合物。如果喜歡的話，也可以通過(guò)類(lèi)似的反應(yīng)制備其他類(lèi)型的鍵。嘧啶基中間體上的敏感部分和親核試劑在偶聯(lián)之前可以進(jìn)行保護(hù)。
用于上述合成路線的化學(xué)品可以包括，例如，溶劑、反應(yīng)物、催化劑、和保護(hù)基與脫保護(hù)基團(tuán)試劑。上述方法也可以另外包括，在這里具體描述的步驟前后加入或者除去適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基的步驟，以便能夠最終合成嘧啶化合物。另外，為了得到希望的化合物，各種合成步驟可以以選擇的順序或次序進(jìn)行。用于合成可適用的嘧啶化合物的合成化學(xué)轉(zhuǎn)化與保護(hù)基方法學(xué)(保護(hù)和脫保護(hù))在本領(lǐng)域中是已知的，包括，例如在以下文獻(xiàn)中所述的內(nèi)容R.Larock，Comprehensive OrganicTransformations，VCH Publishers(1989)；T.W.Greene和P.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，3Ed.，John Wiley andSons(1999)；L.Fieser和M.Fieser，F(xiàn)ieser and Fieser’s Reagents for OrganicSynthesis，John Wiley and Sons(1994)；和L.Paquette，ed.，Encyclopediaof Reagents for Organic Synthesis，John Wiley and Sons(1995)以及其后續(xù)版。
這樣得到的嘧啶化合物可以進(jìn)一步通過(guò)快速柱層析、高效液相色譜法、或者結(jié)晶法純化。
包含有效量的一種或多種本發(fā)明的嘧啶化合物和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。此外，本發(fā)明包括對(duì)需要治療與過(guò)量生成IL-12有關(guān)的疾病(例如，類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、膿毒癥、克羅恩氏病、多發(fā)性硬化、牛皮癬、或者胰島素依賴(lài)型糖尿病)的患者給予有效量的這種化合物的方法?！逵行Я俊迨侵改芙o受治療的患者帶來(lái)治療效果所需要的化合物的量。用于動(dòng)物和人的劑量(以每平方米體表的毫克數(shù)計(jì))的相互關(guān)系參見(jiàn)Freireich等人的Cancer Chemother Rep，50219(1966)。體表面積可以近似地由患者的高度和重量確定。參見(jiàn)，例如，Scientific Tables，Geigy Pharmaceuticals，Ardley，N.Y.，1970，537。有效量的本發(fā)明的嘧啶化合物，其范圍可以為約0.001毫克/公斤-約1000毫克/公斤。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，有效劑量也將根據(jù)待治療的疾病、給藥途徑、賦形劑用量、以及與其他治療法，例如與其他試劑共同使用的可能性而變化。
為了實(shí)施本發(fā)明的方法，嘧啶化合物作為藥物組合物的一個(gè)組分可以經(jīng)口、經(jīng)腸胃外、通過(guò)吸入噴霧、局部、直腸給藥、經(jīng)鼻、經(jīng)口腔、經(jīng)陰道或者通過(guò)植入儲(chǔ)存器給藥。這里使用的術(shù)語(yǔ)″腸胃外″包括皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、滑液內(nèi)、胸骨內(nèi)、鞘內(nèi)、患部?jī)?nèi)和顱內(nèi)注射或者輸液。
可注射的無(wú)菌組合物，例如，可注射的無(wú)菌水質(zhì)或油質(zhì)懸浮液，可以根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法使用適當(dāng)?shù)姆稚┗蛘邼?rùn)濕劑(比如，Tween80)和助懸劑配制。可注射的無(wú)菌制劑也可以為可注射的無(wú)菌溶液或者懸浮液形式，它們處于無(wú)毒的不經(jīng)腸道可接受的稀釋劑或者溶劑中，例如為1，3-丁二醇的溶液。在可接受的賦形劑和溶劑當(dāng)中，可以使用的是甘露糖醇、水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，無(wú)菌的固定油類(lèi)通常用作溶劑或者懸浮介質(zhì)(例如，合成的甘油單或者二酯)。脂肪酸，比如油酸及其甘油脂衍生物可用于制備可注射的制劑，與藥學(xué)上可接受的天然油類(lèi)，比如橄欖油或者蓖麻油一樣，特別是其聚氧乙烯化物形式。這些油溶液或者懸浮液也可以包含長(zhǎng)鏈醇稀釋劑或者分散劑，或者羧甲基纖維素或者類(lèi)似的分散劑。通常用于制備藥學(xué)上可接受的固體、液體或者其他劑型的其他通用的表面活性劑，比如Tweens或者Spans或者其他類(lèi)似的乳化劑或者生物利用度增強(qiáng)劑也可以用于本發(fā)明的制劑。
用于口服的組合物可以是任何經(jīng)口可接受的劑型，其包括但不限于膠囊、片劑、乳液和水懸劑、分散劑及溶液。在用于口服的片劑情況下，通常使用的載體包括乳糖和玉米淀粉。通常也加入潤(rùn)滑劑，比如硬脂酸鎂。對(duì)于口服的膠囊劑形式，有用的稀釋劑包括乳糖和干燥的玉米淀粉。當(dāng)水懸劑或者乳液經(jīng)口給藥時(shí)，活性成分可以懸浮或者溶于與乳化劑或者助懸劑結(jié)合的油相中。如果希望的話，可以加入某些甜味劑、調(diào)味劑或者著色劑。經(jīng)鼻氣霧劑或者吸入組合物可以根據(jù)藥物制劑領(lǐng)域公知的的方法制備，并可以在生理鹽水中制成溶液，其中使用苯甲醇或者其他適當(dāng)?shù)姆栏瘎⒂糜谠鰪?qiáng)生物利用度的吸收促進(jìn)劑、氟烴和/或領(lǐng)域已知的其他增溶或者分散劑。本發(fā)明的嘧啶化合物也可以以用于直腸給藥的栓劑形式給藥。
藥物組合物中的載體必須是在與該制劑活性成分相容的意義上是″可接受的″(并且優(yōu)選能夠使之穩(wěn)定)，而且對(duì)于接受治療的患者來(lái)說(shuō)是無(wú)害的。例如，可以使用諸如環(huán)糊精等能與本發(fā)明的化合物形成特定的更易溶的絡(luò)合物的增溶劑，或者一種或多種增溶劑作為傳遞嘧啶化合物的藥物賦形劑。其他載體的實(shí)例包括膠體二氧化硅、硬脂酸鎂纖維素、月桂基硫酸鈉、和D & C Yellow #10。
嘧啶化合物的生物學(xué)活性可以通過(guò)大量基于細(xì)胞的試驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)。一種這類(lèi)試驗(yàn)可以使用人體外周血單核細(xì)胞(PBMC)或者人體單核細(xì)胞的細(xì)胞系(THP-1)來(lái)進(jìn)行。在試驗(yàn)化合物的存在下，該細(xì)胞受到人體干擾素-γ(IFNγ)與脂多糖的組合物或者IFNγ與金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)Cowan I的組合物的刺激。抑制產(chǎn)生IL-12的水平可以通過(guò)確定p70的量來(lái)測(cè)定，測(cè)定通過(guò)使用具有抗-人體IL-12抗體的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法試驗(yàn)(sandwich ELISA)進(jìn)行。之后可以確定試驗(yàn)化合物的IC50。具體地說(shuō)，用試驗(yàn)化合物培養(yǎng)PBMC或者THP-1細(xì)胞。使用MTS[3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑]的生物還原來(lái)評(píng)價(jià)細(xì)胞的生存能力(Promega，Madison，WI)。
也可以通過(guò)動(dòng)物研究評(píng)價(jià)嘧啶化合物。例如，一種這類(lèi)研究涉及到試驗(yàn)化合物治療大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(即，與過(guò)量生成IL-12有關(guān)的病癥)的能力。
即使不進(jìn)行進(jìn)一步的描述，我們也相信，上述說(shuō)明書(shū)已經(jīng)能足以實(shí)施本發(fā)明。因此，以下的具體實(shí)施方案僅僅是以實(shí)施例的方式闡明本發(fā)明，無(wú)論如何，它們不以任何方式構(gòu)成對(duì)所公開(kāi)內(nèi)容其余部分的限定。這里提到的所有出版物均全文在此引入作為參考。
實(shí)施例1制備化合物1N-{2-[3-(3，4-二甲氧基苯基)-丙基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基}-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼向3-(3，4-二甲氧基苯基)-丙基碘化物(1.224克，4.0毫摩爾)在20毫升干燥THF中形成的溶液中加入高活性鋅(THF懸浮液，得自Aldrich的Rieke金屬，5.2毫升，0.05g/mL，4.0毫摩爾)，得到混合物?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^(guò)夜。將2，4-二氯-6-嗎啉代嘧啶(0.932克，4.0毫摩爾)和反式-芐基(氯)-二(三苯基膦)鈀(II)(0.03克，0.04毫摩爾)加入到混合物中，在60℃下攪拌2天。常規(guī)的后處理之后，通過(guò)快速層析純化法將4-氯-2-[3-(3，4-二甲氧基苯基)丙基]-6-嗎啉代嘧啶(0.34克，0.90毫摩爾，22.4％)與2-氯-4-[3-(3，4-二甲氧基苯基)丙基]-6-嗎啉代嘧啶(0.45克，1.19毫摩爾，30％)分離開(kāi)來(lái)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)6.70-6.80(m，3H)；6.32(s，1H)；3.87(s，3H)；3.85(s，3H)；3.73-3.78(m，4H)；3.60-3.64(m，4H)；2.76(d，J＝7.8Hz，2H)；2.63(d，J＝7.5Hz，2H)；和2.01-2.12(m，2H).
MS(ESI)m/z 380.2(M+H).
之后，使4-氯-2-[3-(3，4-二甲氧基苯基)丙基]-6-嗎啉代嘧啶(0.34克，0.90毫摩爾)與肼(0.29克，9毫摩爾)反應(yīng)得到2-[3-(3，4-二甲氧基苯基)丙基]-4-肼基-6-嗎啉代嘧啶，白色固體(0.30克，0.80毫摩爾，89％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)6.73-6.80(m，3H)；5.88(s，1H)；5.74(s，1H)；3.87(s，3H)；3.85(s，3H)；3.76-3.79(m，4H)；3.69(d，J＝0.6Hz，2H)；3.56-3.60(m，4H)；2.64(d，J＝7.5Hz，4H)；和2.00-2.15(m，2H).
MS(ESI)m/z 374.2(M-H).
將含有2-[3-(3，4-二甲氧基苯基)丙基]-4-肼基-6-嗎啉代嘧啶(0.177克，0.50毫摩爾)、吲哚-3-甲醛(0.073克，0.50毫摩爾)、和AcOH(20毫克，催化劑)的5毫升甲醇溶液在70℃下攪拌4小時(shí)。除去溶劑，使用快速層析純化粗的殘余物，得到化合物1，淺棕色固體(0.21克，0.42毫摩爾，84％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)8.57(brs，1H)；8.45(br s，1H)；8.29-8.32(m，1H)；8.00(s，1H)；7.39-7.43(m，2H)；7.23-7.34(m，2H)；6.74-6.80(m，3H)；6.30(s，1H)；3.86(s，3H)；3.85(s，3H)；3.78-3.84(m，4H)；3.67-3.70(m，4H)；2.63-2.71(m，4H)，和2.03-2.13(m，2H).
MS(ESI)m/z 501.2(M+H).
實(shí)施例2制備化合物2N-(2-正丁氧基-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基)-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼在-78℃下，向2，4，6-三氯嘧啶(25克，136毫摩爾)的CH2Cl2(500毫升)溶液中慢慢地加入嗎啉(11.89毫升，136毫摩爾)，隨后加入DIPEA(25毫升，143毫摩爾)。所得反應(yīng)混合物在-78℃下攪拌5小時(shí)，然后升溫到室溫。反應(yīng)混合物用水洗滌。得到的有機(jī)相經(jīng)Na2SO4干燥。減壓除去溶劑。粗的殘余物，2，4-二氯-6-(嗎啉-4-基)嘧啶，用EtOAc重結(jié)晶，得到白色晶體(24.7克，77％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)6.40(s，1H)；和4.0-3.5(m，8H).
MS(ESI)m/z 234.0(M+H).
在0℃和N2保護(hù)下，向正丁醇(0.633克，8.54毫摩爾)的無(wú)水DMF(50毫升)溶液中快速加入NaH(0.307克，12.8毫摩爾)。得到的懸浮液在0℃下攪拌0.5小時(shí)。把2，4-二氯-6-(嗎啉-4-基)嘧啶(2克，8.54毫摩爾)加入到懸浮液中。懸浮液升溫到室溫并攪拌12小時(shí)之后，反應(yīng)混合物用冰/鹽水急冷，用200毫升EtOAc萃取。萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥。減壓除去溶劑。粗的殘余物用快速層析(二氧化硅；EtOAc/己烷1/6)純化，得到1.4克2-正丁氧基-4-氯-6-(嗎啉-4-基)嘧啶(白色固體，60％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)6.20(s，1H)；4.26(t，J＝6.6Hz，2H)；3.78-3.70(m，4H)；3.66-3.56(m，4H)；1.80-1.68(m，2H)；1.54-1.40(m，2H)；和0.96(t，J＝6.9，3H).
MS(ESI)m/z 272.1(M+H).
向2-正丁氧基-4-氯-6-(嗎啉-4-基)嘧啶(1.38克，5.1毫摩爾)的二氧六環(huán)(50毫升)溶液中加入無(wú)水肼(1.6毫升，50毫摩爾)。得到的反應(yīng)混合物加熱到95℃，并在N2下攪拌12小時(shí)。冷卻到室溫后，反應(yīng)混合物用冰-鹽水急冷，用EtOAc(200毫升)萃取。有機(jī)萃取液用鹽水、水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥。減壓除去溶劑。粗殘余物用甲醇重結(jié)晶，得到2-正丁氧基-4-肼基-6-(嗎啉-4-基)嘧啶，白色晶體(1.10克，81％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)5.89(br s，1H)，5.49(s，1H)，4.26(t，J＝6.6，2H)，3.84-3.78(m，6H)，3.62-3.47(m，4H)，1.82-1.67(m，2H)，1.55-1.42(m，2H)，和0.96(t，J＝6.9，3H)；MS(ESI)m/z 268.2(M+H).
向2-正丁氧基-4-肼基-6-(嗎啉-4-基)嘧啶(200毫克，0.748毫摩爾)的甲醇(20毫升)溶液中，順序加入吲哚-3-甲醛(108.6毫克，0.748毫摩爾)和乙酸(1滴)。得到的反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)。形成白色沉淀，收集并用2毫升甲醇洗滌，得到200克化合物2(68％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)8.36 (br s，1H)，8.30(dd，J＝6.6，1.8，1H)，8.05(s，1H)，8.00(s，1H)，7.44-7.40(m，2H)，7.33-7.24(m，2H)，6.13(s，1H)，4.26(t，2H，J＝６.6)，3.84-3.78(m，4H)，3.70-3.64(m，4H)，1.80-1.70(m，2H)，1.54-1.42(m，2H)，和0.96(t，J＝6.9，3H)；MS(ESI)m/z 395.2(M+H).
實(shí)施例3制備化合物3N-(2-(4-羥丁基)-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基)-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼將4-乙氧基-4-氧代丁基溴化鋅(50毫升，0.5M的THF溶液，25毫摩爾)，2，4-二氯-6-嗎啉代嘧啶(4.68克，20.0毫摩爾)和反-芐基(氯)二(三苯基膦)鈀(II)(0.15克，0.2毫摩爾)的THF溶液的混合物(總體積為80毫升)在60℃下攪拌2天。常規(guī)的后處理之后，進(jìn)行快速層析純化，得到4-氯-2-(4-乙氧基-4-氧代丁基)-6-嗎啉代嘧啶，白色固體(2.073克，6.60毫摩爾，33.0％)。
在-78℃下，向4-氯-2-(4-乙氧基-4-氧代丁基)-6-嗎啉代嘧啶(1.108克，3.54毫摩爾)的THF(50毫升)溶液中慢慢地加入二異丁基氫化鋁(DIBAL)溶液(4.72毫升，1.5M，甲苯溶液，7.08毫摩爾)。加料結(jié)束后，使得到的反應(yīng)混合物慢慢升溫到0℃，并在0℃下保溫10分鐘。常規(guī)的后處理之后，進(jìn)行快速層析，得到4-氯-2-(4-羥丁基)-6-嗎啉代嘧啶(0.76克，2.80毫摩爾，79％)，淡黃色固體。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)6.33(s，1H)，3.76-3.79(m，4H)；3.61-3.68(m，6H)；2.76(t，J＝7.8Hz，2H)；1.81-1.91(m，2H)；和1.60-1.74(m，3H).
MS(ESI)m/z 370.2(M+H).
按照典型的方法，使4-氯-2-(4-羥丁基)-6-嗎啉代嘧啶(0.542克，2.00毫摩爾，1.00當(dāng)量)與肼和吲哚-3-甲醛反應(yīng)，得到化合物3，灰白色固體(0.75克，1.90毫摩爾，95％)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)，δ(ppm)11.47(s，1H)；10.64(s，1H)；8.25(s，1H)；8.18(d，J＝6.6Hz，1H)；7.71(s，1H)；7.43(d，J＝8.4Hz，1H)；7.17-7.20(m，2H)；6.16(s，1H)，4.37(t，J＝4.8Hz，1H)；3.72(br s，4H)；3.55(br s，4H)；3.41-3.45(m，2H)；2.49-2.54(m，2H)，1.66-1.76(m，2H)；和1.42-1.53(m，2H).
MS(ESI)m/z 395.1(M+H).
實(shí)施例4制備化合物4N-[2-(2-[1，3]二氧六環(huán)-2-基-乙基)-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基]-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼按類(lèi)似于實(shí)施例1所述的方式制備化合物4。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)，δ(ppm)11.46(s，1H)；10.64(s，1H)；8.25(s，1H)；8.18(d，J＝6.6Hz，1H)；7.71(s，1H)；7.43(d，J＝6.0Hz，7.5Hz，1H)；7.16-7.19(m，2H)；6.15(s，1H)，4.58(t，J＝5.1Hz，1H)；4.00(dd，J＝11.4Hz，4.5Hz，2H)；3.64-3.72(m，6H)；3.54(br s，4H)；2.50-2.59(m，2H)；1.80-1.94(m，3H)，和1.33(d，J＝9.6Hz，1H).
MS(ESI)m/z 437.2(M+H).
實(shí)施例5制備化合物5N-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-N’-[2-(3-甲氧基丙基)-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基]-肼按照合成N-(2-(4-羥丁基)-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基)-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼(化合物3)的方法，合成4-氯-2-(3-羥丙基)-6-嗎啉代嘧啶(0.81克，3.15毫摩爾)，用氫化鈉(0.48克，6.30毫摩爾)甲基化10分鐘，并在0℃下，在30毫升THF中，用MeI(0.895克，6.30毫摩爾)甲基化5小時(shí)，得到4-氯-2-(3-甲氧基丙基)-6-嗎啉代嘧啶，無(wú)色粘性油(0.792克，3.03毫摩爾，96％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)6.32(s，1H)，3.75-3.79(m，4H)；3.61-3.64(m，4H)；3.44(t，J＝6.6Hz，2H)；3.34(s，3H)；2.78(t，J＝7.8Hz，2H)；和2.00-2.09(m，2H).
MS(ESI)m/z 262.1(M+H).
按照典型的方法，順序用肼和吲哚-3-甲醛處理4-氯-2-(3-甲氧基丙基)-6-嗎啉代嘧啶(0.783克，3.00毫摩爾)，得到0.89克化合物5(2.26毫摩爾，75％)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)，δ(ppm)11.46(s，1H)10.64(s，1H)；8.26(s，1H)；8.17-8.20(m，1H)；7.72(d，J＝2.4Hz，1H)；7.43(dd，J＝6.0Hz，2.4Hz，1H)；7.15-7.21(m，2H)；6.16(s，1H)，3.70-3.73(m，4H)；3.52-3.56(m，4H)；3.37(t，J＝6.9Hz，2H)，3.23(s，3H)；2.50-2.57(m，2H)，和1.88-1.97(m，2H).
MS(ESI)m/z 395.2(M+H).
實(shí)施例6制備化合物63-{4-[N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基硫烷基}-丙烷-1-醇按類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方式制備化合物6。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)，δ(ppm)11.48(s，1H)；10.68(s，1H)；8.26(s，1H)；8.15-8.18(m，1H)；7.73(d，J＝2.1Hz，1H)；7.42-7.44(m，1H)；7.16-7.20(m，2H)；6.04(s，1H)，4.53(t，J＝5.1Hz，1H)；3.65-3.71(m，4H)；3.48-3.56(m，6H)；3.06(t，J＝7.2Hz，2H)，和1.76-1.85(m，2H).
MS(ESI)m/z 413.1(M+H).
實(shí)施例7制備化合物73-{2-[N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基硫烷基}-丙烷-1-醇按類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方式制備化合物7。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)，δ(ppm)11.34(s，1H)；10.48(s，1H)；8.45(d，J＝7.8Hz，1H)；8.25(s，1H)；7.64(d，J＝2.7Hz，1H)；7.40(d，J＝8.1Hz，1H)；7.05-7.19(m，2H)；6.08(s，1H)，4.60(t，J＝5.1Hz，1H)；3.50-3.68(m，10H)；3.20-3.30(m，2H)；和1.78-1.86(m，2H).
MS(ESI)m/z 413.1(M+H).
實(shí)施例8制備化合物8N-[2-(2，2-二甲基-[1，3]-二氧戊烷-4-基甲氧基)-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基]-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼按類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方式制備化合物8。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)8.38(br s，1H)；8.30(dd，J＝7.2，1.8，1H)，8.02(br s，1H)；8.00(s，1H)；7.44-7.41(m，2H)；7.32-7.26(m，2H)；6.14(s，1H)；4.51-4.42(m，2H)；，4.22-4.12(m，2H)；3.96-3.91(m，1H)；3.84-3.79(m，4H)；3.70-3.64(m，4H)；1.47(s，3H)；和1.38(s，3H).
MS(ESI)m/z 453.2(M+H).
實(shí)施例9制備化合物9N-{2-[2-(3，4-二甲氧基苯基)乙氧基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基}-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼按類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方式制備化合物9。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)8.43(bs，1H)；8.30(d，J＝7.5Hz 1H)；8.2(bs，1H)；8.02(d，J＝2.7Hz，1H)；7.46-7.40(m，2H)；7.30-7.26(m，2H)；6.82(d，J＝1Hz，3H)；4.45(d，J＝3.6Hz，1H)；4.45(t，J＝5.2Hz，2H)；3.87(d，J＝3.9Hz，3H)；3.86(d，J＝3.9Hz，3H)；3.81(s，4H)；3.67(s，4H)；和3.04(t，J＝5.0Hz，2H).
MS(ESI)m/z 503.2(M+H).
實(shí)施例10制備化合物10N-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼按類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方式制備化合物10。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)9.3(bs，1H)；8.66(s，1H)；8.55-8.53(m，1H)；8.28-8.26(m，1H)；8.04(s，1H)；7.62-7.57(m，1H)；7.41-7.10(m，6H)；6.08(s，1H)；4.64(t，J＝6.6Hz，2H)；3.76(s，4H)；3.62(s，4H)；和3.26(t，J＝6.6Hz，2H).
MS(ESI)m/z 444.2(M+H).
實(shí)施例11制備化合物11N-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(3-吡啶-2-基丙基)-嘧啶-4-基]-肼按類(lèi)似于實(shí)施例1所述的方式制備化合物11。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)，δ(ppm)11.47(s，1H)；10.65(s，1H)；8.50(d，J＝4.5Hz，1H)；8.26(s，1H)；8.20-8.18(m，1H) 7.72-7.68(m，2H)；7.45-7.42(m，1H)；7.29-7.18(m，4H)；6.17(s，1H)；3.73(s，4H)；3.5(s，4H)；2.79(t，J＝7.5Hz，2H)；2-58-2.51(m，2H)；和2.18-2.06(m，2H).
MS(ESI)m/z 442.2(M+H).
實(shí)施例12制備化合物12N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼按類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方式制備化合物12。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)8.55-8.48(m，2H)；7.71(s，1H)；7.65-7.55(m，1H)；7.49-7.42(m，2H)；7.30-7.15(m，4H)；6.08(s，1H)；4.64(t，J＝6.6Hz，2H)；3.81-3.75(m，4H)；3.64-3.61(m，4H)；3.25(t，J＝7.0Hz，2H)；和2.38(s，3H).
MS(ESI)m/z 419.2(M+H).
實(shí)施例13制備化合物13N-(3-乙基苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼按類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方式制備化合物13。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)8.58-8.50(m，1H)；8.43(s，1H)；7.95(s，1H)；7.64-7.58(m，2H)；7.30-7.25(m，1H)；7.18-7.05(m，3H)；6.07(s，1H)；4.65(t，J＝6.9Hz，2H)；3.80-3.76(m，4H)；3.64-3.61(m，4H)；3.26(t，J＝6.9Hz，2H)；2.40(q，J＝7.6Hz，2H)；和1.45(t，J＝7.6Hz，3H).
MS(ESI)m/z 433.3(M+H).
實(shí)施例14制備化合物14N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(3-吡啶-2-基丙基)-嘧啶-4-基]-肼按類(lèi)似于實(shí)施例1所述的方式制備化合物14。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)9.6(bs，1H)；8.53(d，J＝4.5Hz，1H)；7.76(s，1H)；7.56(t，J＝6Hz，1H)；7.49-7.47(m，2H)；7.28(m，1H)；7.18-7.06(m，3H)；6.26(s，1H)；3.81-3.79(m，4H)；3.69-3.67(m，4H)；2.89(t，J＝7.8Hz，2H)；2.71(t，J＝7.5Hz，2H)；2.39(s，3H)；和2.22(t，J＝7.5Hz，2H).
MS(ESI)m/z 417.2(M+H).
實(shí)施例15制備化合物15N-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基乙氧基)-嘧啶-4-基]-N’-(1-間甲苯基-亞乙基)-肼按類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方式制備化合物15。
1H NHR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)8.56(bs，1h)，7.66-7.46(m，4H)，7.32-7.26(m，2H)，7.16-7.14(m，2H)，6.44(s，1H)，4.69(t，J＝6.9Hz，2H)，3.80-3.77(m，4H)，3.63-3.60(m，4H)，3.31(t，J＝6.9Hz，2H)，2.39(s，3H).
MS(ESI)m/z 433.2(M+H).
實(shí)施例16制備化合物16N-[1-(1H-吲哚-3-基)-亞乙基]-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼按類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方式制備化合物16。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)9.35(bs，1H)；8.54(dd，J＝0.9，4.2Hz，1H)；8.33(d，J＝7.5Hz，1H)；7.93(s，1H)；7.58(t，J＝7.2Hz，1H)；7.36-7.33(m，2H)；7.27-7.120(m，4H)；6.49(s，1H)；4.68(t，J＝7.2Hz，2H)；3.76-3.73(m，4H)；3.60-3-57(m，4H)；3.50(s，3H)；和3.33-3.28(t，J＝7.0Hz，2H).
MS(ESI)m/z 458.2(M+H).
實(shí)施例17制備化合物173-甲基-苯甲醛O-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基乙氧基)-嘧啶-4-基]-肟按類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方式制備化合物17。
1H NMR.(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)8.56-8.53(m，1H)；8.45(s，1H)；7.62-7.50(m，3H)；7.38-7.26(m，3H)；7.18-7.10(m，1H)；6.17(s，1H)；4.68(t，J＝6.9Hz，2H)；3.80-3.76(m，4H)；3.67-3.64(m，4H)；3.29(t，J＝6.9Hz，2H)；和2.41(s，3H).
MS(ESI)m/z 420.1(M+H).
實(shí)施例18制備化合物181H-吲哚-3-甲醛O-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基乙氧基)-嘧啶-4-基]-肟按類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方式制備化合物18。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)，δ(ppm)11.82(bs，1H)；8.81(s，1H)；8.50(d，J＝4.5Hz，1H)；8.04(d，J＝6.9Hz，1H)；7.93(s，1H)；7.72(t，J＝6.9Hz，1H)；7.49(d，J＝6.9Hz，1H)；7.33(d，J＝7.8Hz，1H)；7.30-7.18(m，3H)；6.22(s，1H)；4.57(t，J＝6.3Hz，2H)；3.67(s，4H)；3.56(s，4H)；和3.15(t，J＝6.3Hz，2H).
MS(ESI)m/z 445.2(M+H).
實(shí)施例19制備化合物19N-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-N’-{6-嗎啉-4-基-2-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-肼按類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方式制備化合物19。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)9.20(br s，1H)；8.30(br s，1H)；8.29(t，J＝3.3Hz，1H)；8.18-8.12(m，2H)；7.44-7.41(m，2H)；7.26-7.18(m，5H)；6.08(s，1H)；4.66(t，J＝4.8Hz，2H)；4.29(t，J＝5.0Hz，2H)；3.80-3.76(m，4H)；和3.67-3.62(m，4H).
MS(ESI)m/z 460.2(M+H).
實(shí)施例20制備化合物20N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-{6-嗎啉-4-基-2-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-肼按類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方式制備化合物20。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)8.55(s，1H)；8.34(br s，1H)；8.30-8.23(m，1H)；7.78(s，1H)；7.50-7.47(m，2H)；7.32-7.24(m，1H)；7.20-7.17(m，3H)；6.14(s，1H)；4.66(t，J＝5.0Hz，2H)；4.35(t，J＝4.8Hz，2H)；3.83-3.80(m，4H)；3.68-3.65(m，4H)；和2.40(s，3H).
MS(ESI)m/z 435.2(M+H).
實(shí)施例21制備化合物21丁基-{4-[N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-胺按類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方式制備化合物21。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δppm8.41(bs，1H)，8.33-8.30(m，1H)，8.19(bs，1H)，7.95(s，1H)，7.41-7.37(m，2H)，7.29-7.25(m，2H)，5.96(s，1H)，4.65(t，J＝4Hz，1H)，3.83-3.80(m，4H)，3.65-3.62(m，4H)，3.36(dd，J＝6.3，13.5Hz，2H)，1.60-1.55(m，2H)，1.35-1.33(m，4H)，0.92-0.87(m，3H).
MS(ESI)m/z 408.2(M+H).
實(shí)施例22制備化合物22N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(吡啶-3-基氧)-嘧啶-4-基]-肼在0℃和N2保護(hù)下，向3-羥基吡啶(950毫克，10毫摩爾)的無(wú)水THF(50毫升)溶液中加入NaH(60％，油中)(480毫克，12毫摩爾)。懸浮液在0℃下攪拌0.5小時(shí)，加入2，4，6-三氯嘧啶(1.84克，10毫摩爾)。懸浮液升溫到室溫并攪拌2小時(shí)之后，反應(yīng)混合物通過(guò)冰/鹽水急冷，用EtOAc(300毫升)萃取。有機(jī)相用鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)，過(guò)濾，真空蒸發(fā)。粗產(chǎn)物在硅膠柱上經(jīng)快速層析純化(EtOAc-己烷，1∶7)。在0℃下慢慢地將產(chǎn)物(1.80g，7.4mmol)的CH2Cl2((150毫升)溶液加入到嗎啉(2.5g，28mmol)中。反應(yīng)混合物在0℃攪拌1小時(shí)，在室溫下再攪拌1小時(shí)。混合物用水洗滌。有機(jī)相干燥(Na2SO4)，過(guò)濾并真空蒸發(fā)，存在三種異構(gòu)體。異構(gòu)體通過(guò)在硅膠柱上用快速層析分離(EtOAc-己烷，1∶7和1∶3)，得到4-[6-氯-2-(吡啶-3-基氧)-嘧啶-4-基]-嗎啉(320mg，14.7％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)8.51(d，1H，J＝2.7Hz)，8.44(dd，1H，J＝1.5，J＝3.3Hz)，7.53-7.49(m，1H)，7.34-7.3(m，1H)，6.25(s，1H)，3.71-3.67(m，4H)，3.51-3.48(m，4H).
MS(ESI)m/z 293.1.
在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，向4-[6-氯-2-(吡啶-3-基氧)-嘧啶-4-基]-嗎啉(295mg，1毫摩爾)的THF(10毫升)溶液中加入肼(0,320毫升，10毫摩爾)。混合物在70℃下加熱15分鐘。冷卻到室溫后，反應(yīng)混合物通過(guò)冰-鹽水急冷，通過(guò)EtOAc(100毫升)萃取。有機(jī)相用鹽水(10毫升)和水(10毫升×2)洗滌，干燥(Na2SO4)，過(guò)濾，蒸發(fā)，并在硅膠柱上通過(guò)快速層析純化(CH2Cl2和CH2Cl2-MeOH，95∶5)，得到[6-嗎啉-4-基-2-(吡啶-3-基氧)-嘧啶-4-基]-肼(180毫克)，收率為62％。
M/Z(M+1)289-2向[6-嗎啉-4-基-2-(吡啶-3-基氧)-嘧啶-4-基]-肼(145毫克，0.5毫摩爾)和間甲基苯甲醛(72毫克，0.6毫摩爾)的MeOH(10毫升)溶液中加入乙酸(1滴)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，沉淀出白色固體。所得沉淀通過(guò)過(guò)濾收集，用少量甲醇洗滌，得到125毫克化合物22，收率為64％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)8.71(s，1H)，8.57(d，1H，J＝2.4Hz)，8.44(dd，1H，J＝1.5，3.2Hz)，7.78(s，1H)，7.56-7.52(m，1H)，7.46-7.43(m，2H)，7.34-7.26(m，2H)，7.17(d，1H，J＝8.1Hz)，6.17(s，1H)，3.76-3.73(m，4H)，3.57-3.54(m，4H)，2.38(s，3H).
MS(ESI)m/z 391.2.
實(shí)施例23制備化合物23N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-(5-甲基-6-嗎啉-4-基-2-苯基嘧啶-4-基)肼將苯甲脒鹽酸鹽(7.06克，0.045摩爾)和甲基丙二酸二甲酯(6.0克，0.041摩爾)溶于甲醇(100毫升)中。加入甲醇鈉(21.5毫升，0.099摩爾，25重量％的甲醇溶液)，該溶液在室溫下攪拌18小時(shí)。減壓下將溶劑的體積降低到約50毫升，然后傾倒在冰水上。該溶液用HOAc中和，得到白色沉淀。收集該沉淀，干燥，獲得白色固體(6.1克，74％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ(ppm)1.68(s，3H)，7.70-7.87(m，3H)，8.21(d，J＝8.4Hz).
MS(ESI)m/z 203.1(M+H)+將5-甲基-2-苯基嘧啶-4，6二醇(3.3克，0.016摩爾)和POCl3加熱到60℃，加熱3小時(shí)。使該溶液冷卻到室溫，然后傾倒在冰上。所得白色沉淀過(guò)濾，干燥，得到希望的化合物，白色固體(810毫克，21％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ(ppm)2.40(s，3H)，7.51-7.56(m，3H)，8.23(d，8.4Hz).
MS(ESI)m/z 239.1(M+H)+將4，6-二氯-5-甲基-2-苯基嘧啶(2.5克，0.010摩爾)和嗎啉(2.93克，0.031摩爾)溶于THF(50毫升)中并加熱回流3小時(shí)。使該溶液冷卻，然后加入EtOAc(100毫升)和水(100毫升)。EtOAc層用水洗滌(3×100毫升)，用MgSO4干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑。所得固體不經(jīng)進(jìn)一步純化即使用(2.66克，92％)。
MS(ESI)m/z298.1(M+H)+將4-(6-氯-5-甲基-2-苯基嘧啶-4-基)嗎啉(439毫克，1.51毫摩爾)溶于THF(50毫升)中。加入肼(0.25毫升，7.96毫摩爾)，并將溶液加熱回流18小時(shí)。使反應(yīng)冷卻，在減壓下除去溶劑。加入EtOAc(100毫升)和水(100毫升)。EtOAc層用水(3×100毫升)洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過(guò)濾并減壓除去溶劑，得到白色固體(374毫克)。將該固體再溶解于THF(50毫升)中，加入間甲基苯甲醛(157毫克，1.31毫摩爾)。將溶液加熱回流4小時(shí)，然后使其冷卻。減壓除去溶劑，然后加入EtOAc(100毫升)和水(100毫升)。EtOAc層用水洗滌(3×100毫升)，用MgSO4干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑。粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠柱層析純化，用25％的EtOAc/己烷洗脫，得到純的希望的產(chǎn)物，黃色固體(313毫克，53％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ(ppm)2.26(s，3H)，2.36(s，3H)，3.35(m，4H)，3.75-3.78(m，4H)，7.20(d，J＝6.9Hz)，7.33(t，J＝6.9Hz)，7.47-7.52(m，5H)，8.19(s，1H)，8.35-8.38(m，2H)，10.60(s，1H).
MS(ESI)m/z 388.3(M+H)+實(shí)施例24制備化合物24N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-(2-苯基-6-硫代嗎啉-4-基-嘧啶-4-基)-肼按類(lèi)似于實(shí)施例23所述的方式制備化合物24。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.36(s，3H)，2.76(s，4H)，4.07(s，4H)，6.36(s，1H)，7.19(d，J＝8.1Hz)，7.32(t，J＝8.1Hz)，7.47-7.57(m，5H)，8.09(s，1H)，8.30-8.31(m，1H)，11.02(s，1H).
MS(ESI)m/z 389.1.
實(shí)施例25制備化合物25(2，3-二甲基-1H-吲哚-5-基)-{6-嗎啉-4-基-2-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-胺在室溫和N2保護(hù)下，向2-(吡啶-3-基氧)-乙醇(3.48克，25毫摩爾)的無(wú)水THF(40毫升)溶液中加入2，4，6-三氯嘧啶(4.56克，25毫摩爾)，隨后分步加入NaH(60％的油懸浮液，1.1克，27.5毫摩爾)。攪拌30分鐘之后，用水急冷反應(yīng)，水層用EtOAc萃取，合并的有機(jī)溶液用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥。使用快速層析(二氧化硅；二氯甲烷/丙酮/甲醇3/1/0.1)純化得到4，6-二氯-2-和2，6-二氯-4-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶的混合物(3.72克，52％)，(NMR比例為1∶1.2)，油狀物。
向上述混合物(3.72克，13毫摩爾)的1，4-二氧六環(huán)(20毫升)溶液中加入DIPEA(2.49毫升，14.3毫摩爾)，隨后加入2，3-二甲基-5-氨基吲哚(2.08克，13毫摩爾)，混合物回流1小時(shí)。減壓除去溶劑，使用柱層析(二氧化硅；二氯甲烷/丙酮/甲醇3/1/0.1)分離反應(yīng)混合物，得到{6-氯-2-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-胺(2.07克，39％)。也得到{4-氯-6-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-胺和{2-氯-6-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-胺的混合物(2.5克，47％)，并用于另一個(gè)反應(yīng)。
將{6-氯-2-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-胺(2.07克，5.05毫摩爾)和嗎啉(1.32毫升，15.15毫摩爾)的1，4-二氧六環(huán)溶液在110℃下加熱24小時(shí)。減壓除去溶劑，使用快速層析(二氧化硅；二氯甲烷/丙酮/甲醇3/1/0.1)對(duì)反應(yīng)混合物進(jìn)行純化，得到化合物25(2克，86％)，無(wú)色固體。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)8.34(br s，1H)，8.23(dd，1H，J＝3.6，2.1)，7.96 (brs，1H)，7.34-7.21(m，4H)，6.98(dd，1H，J＝8.4，1.8Hz)，6.60(brs，1H)，5.36(s，1H)，4.65(t，2H，J＝5.1Hz)，4.34(t，2H，J＝5.1Hz)，3.66(m，4H)，3.42(m，4H)，2.37(s，3H)，和2.20(s，3H).
MS(ESI)m/z 461.5(M+H).
實(shí)施例26制備化合物26(2，3-二甲基-1H-吲哚-5-基)-{4-嗎啉-4-基-6-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-2-基}-胺如實(shí)施例24所述進(jìn)行{4-氯-6-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-胺和{2-氯-6-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-胺的混合物(2.5g，47％)和(2.5克，6.1毫摩爾)與嗎啉的反應(yīng)。通過(guò)快速層析純化，用乙醚-戊烷重結(jié)晶，得到0.3克化合物26。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)8.36(br s，1H)，8.24(m，1H)，7.85(m，1H)，7.70(brs，1H)，7.26-7.14(m，4H)，6.78(brs，1H)，5.42(s，1H)，4.68(t，2H，J＝5.1)，4.31(t，2H，J＝5.1)，3.70(m，4H)，3.54(m，4H)，2.35(s，3H)，和2.18(s，3H).
MS(ESI)m/z 461.5(M+H).
實(shí)施例27制備化合物273-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-丙酸乙酯按類(lèi)似于實(shí)施例1所述的方式制備化合物27。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)8.22(s，1H)；7.69(s，1H)；8.07(s，1H)；7.47(m，2H)；7.28(t，J＝7.5Hz，1H)；7.17(d，J＝7.5Hz，1H)；6.23(s，1H)；4.13(q，J＝7.2Hz，2H)；3.78-3.81(m，4H)；3.62-3.65(m，4H)；2.98(t，J＝7.2Hz，2H)；2.77(t，J＝7.2Hz，2H)；2.39(s，3H)；和1.24(t，J＝7.2Hz，3H).
MS(ESI)m/z 398.2(M+H).
實(shí)施例28制備化合物28N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-{6-嗎啉-4-基-2-[2-(1-氧-吡啶-2-基)-乙氧基]-嘧啶-4基}-肼向4-[6-氯-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-嗎啉(1.61克，5.0毫摩爾)的CH2Cl2(40毫升)溶液中加入甲醇(10毫升)，隨后一次性加入MCPBA(70％，1.43克，5.8毫摩爾)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，得到透明溶液。將溶液倒入飽和的NaHCO3水溶液(35毫升)中，然后分離有機(jī)相，用10％的Na2S2O3水溶液(40毫升)和鹽水(40毫升)洗滌，干燥(Na2SO4)，過(guò)濾并真空蒸發(fā)，得到純產(chǎn)物，4-{6-氯-2-[2-(1-氧-吡啶-2-基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-嗎啉，白色固體，(1.46克，86.7％)。
1H-NMR(CDCl3)(ppm)，J(Hz)8.25-8.23(m，1H)；7.41-7.7.38(m，1H)；7.20-7.16(m，2H)；6.14(s，1H)；4.71(t，J＝6.0，2H)；3.77-3.73(m，4H)；3.63-3.55(m，4H)；和3.40(t，J＝6.0，2H).
在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將無(wú)水肼(0.640毫升，20毫摩爾)加入到4-{6-氯-2-[2-(1-氧-吡啶-2-基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-嗎啉(1.35克，4.0毫摩爾)的二氧六環(huán)(15毫升)溶液中。得到的混合物在95-100℃加熱2小時(shí)。冷卻之后，真空蒸發(fā)溶劑直到開(kāi)始沉淀出白色固體(到原始體積的-半)，然后加入H2O(15毫升)。所得沉淀通過(guò)過(guò)濾收集，并用水洗滌(直到pH值為中性)。得到{6-嗎啉-4-基-2-[2-(1-氧-吡啶-2-基)-乙氧基)-嘧啶-4-基}-肼(1.02克)，收率76.7％。
1H-NMR(DMSO-d6)(ppm)，J(Hz)8.25(bs，1H)；7.66(s，1H)；7.44.7.41(m，1H)；7.33-7.25(m，2H)；5.59(s，1H)；4.46(t，J＝6.0，2H)；3.64-3.61(m，4H)；3.41-3.38(m，4)；和3.17(t，J＝6.，2H).
向{6-嗎啉-4-基-2-[2-(1-氧-吡啶-2-基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-肼(820毫克，2.46毫摩爾)和間甲基苯甲醛(97％，320毫克，2.58毫摩爾)的甲醇(7毫升)溶液中加入乙酸(2滴)。反應(yīng)混合物回流加熱15分鐘。冷卻到室溫時(shí)，形成沉淀，通過(guò)過(guò)濾收集固體，用少量甲醇和乙醚洗滌，干燥，得到950毫克(89％)N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-{6-嗎啉-4-基-2-[2-(1-氧-吡啶-2-基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-肼，白色固體(熔點(diǎn)187-188℃)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)10.86(s，1H)；8.28-8.26(m，1H)；7.98(s，1H)；7.50-7.43(m，3H)；7.33-7.26(m，3H)；7.17(d，J＝7.8Hz，1H)；6.05(s，1H)；4.53(t，J＝6.3Hz，2H)；3.68-3.64(m，4H)；3.54-3.50(m，4H)；3.21(t，J＝6.3，2H)；和2.33(s，3H).
ESMSC23H26N6O3的計(jì)算值434.21；測(cè)量值457.2(M+Na)+實(shí)施例29制備化合物291-(2-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基氧}-乙基)-1H-吡啶-2-酮
如以上流程圖所示，1-(羥乙基)-1H-吡啶-2-酮(1.5克，10.7毫摩爾)與4-(2，6-二氯嘧啶-4-基)-嗎啉在氫化鈉的存在下在DMF中偶合。加入水之后，濾出沉淀，用水洗滌，干燥，得到差不多是希望的差向異構(gòu)體(1.7克，47％)。得到的差向異構(gòu)體與3.5當(dāng)量的肼在二氧六環(huán)中回流。向反應(yīng)混合物中加入水，形成沉淀。通過(guò)過(guò)濾收集沉淀，用水洗滌3次，干燥，得到肼衍生物(1.7克，85％)。與間甲基苯甲醛縮合得到標(biāo)題化合物(2.1克，95％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ10.90(s，1H)，7.98(s，1H)，7.62(dd，J＝6.8，2.1Hz，1H)，7.49(d，J＝7.5Hz，1H)，7.48(s，1H) 7.41(td，J＝7.8，2.1Hz，1H)，7.29(t，J＝7.5Hz，1H)，7.17(d，J＝7.8Hz，1H)，6.39(d，J＝9.3Hz，1H)，6.20(t，J＝6.2Hz，1H)，6.05(s，1H)，4.43(t，J＝5.1Hz，2H)，4.22(t，J＝5.2Hz，2H)，3.66(m，4H)，3.52(m，4H)，2.34(s，3H).
ESMSC23H26N6O3的計(jì)算值434.21；測(cè)量值457.2(M+23)+實(shí)施例30制備化合物30N-(3-碘-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼按照類(lèi)似于實(shí)施例29所述的方式制備化合物30。
1H NMR(DMSO-d6)δ10.97(s，1H)，8.51(d，J＝4.5Hz，1H)，8.00(s，1H)，7.95(s，1H)，7.78-7.70(m，3H)，7.34(d，J＝7.8Hz，1H)，7.26-7.18(m，2H)，6.08(s，1H)，4.55(t，J＝6.6Hz，2H)，3.66(m，4H)，3.53(m，4H)，3.14(t，J＝6.6Hz，2H).
ESMSC22H23IN6O2的計(jì)算值530.09；測(cè)量值531.1(M+1)+實(shí)施例31制備化合物31N-(3-氟-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼按照類(lèi)似于實(shí)施例29所述的方式制備化合物31。
1H NMR(DMSO-d6)δ10.98(s，1H)，8.51(d，J＝3.9Hz，1H)，8.01(s，1H)，7.72(td，J＝7.6，1.8Hz，1H)，7.57(brd，J＝9.9Hz，1H)，7.51-7.40(m，2H)，7.33(d，J＝7.2Hz，1H)，7.24(dd，J＝7.6，5.2Hz，1H)，7.20(brt，J＝7.8Hz，1H)；6.11(s，1H)，4.54(t，J＝6.8Hz，2H)，3.65(m，4H)，3.54(m，4H)，3.14(t，J＝6.7Hz，2H).
ESMSC22H23FN6O2的計(jì)算值422.19；測(cè)量值445.2(M+23)+實(shí)施例32制備化合物32N-(3-氯-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼按照類(lèi)似于實(shí)施例29所述的方式制備化合物32。
1H NMR(DMSO-d6)δ11.00(s，1H)，8.51(d，J＝4.5Hz，1H)，8.00(s，1H)，7.74-7.70(m，2H)，7.65(d，J＝6.6Hz，1H)，7.45-7.41(m，2H)，7.33(d，J＝7.8Hz，1H)，7.24(dd，J＝7.8，4.8Hz，1H)，6.09(s，1H)，4.54(t，J＝6.6Hz，2H)，3.66(m，4H)，3.54(m，4H)，3.14(t，J＝6.6Hz，2H).
ESMSC22H23ClN6O2的計(jì)算值438.16；測(cè)量值461.2(M+23)+實(shí)施例33制備化合物33N-(3-溴-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼按照類(lèi)似于實(shí)施例29所述的方式制備化合物33。
1H NMR(DMSO-d6)δ10.99(s，1H)，8.51(d，J＝4.2Hz，1H)，7.98(s，1H)，7.86(s，1H)，7.72(t，J＝8.5Hz，1H)，7.71(d，J＝8.1Hz，1H)，7.54(d，J＝7.5Hz，1H)，7.38-7.32(m，2H)，7.24(dd，J＝7.2，4.8Hz，1H)，6.09(s，1H)，4.54(t，J＝6.6Hz，2H)，3.66(m，4H)，3.53(m，4H)，3.14(t，J＝6.6Hz，2H).
ESMSC22H23BrN6O2的計(jì)算值482.11；測(cè)量值505.10(M+23)+實(shí)施例34制備化合物343-{[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-亞肼基甲基}-苯甲酸甲酯按照類(lèi)似于實(shí)施例29所述的方式制備化合物34。
1H NMR(DMSO-d6)δ11.00(s，1H)，8.51(d，J＝5.4Hz，1H)，8.12(s，1H)，8.10(s，1H)，8.06(d，J＝8.1Hz，1H)，7.93(d，J＝6.6Hz，1H)，7.73(t，J＝7.6Hz，1H)，7.57(t，J＝8.0Hz，1H)，7.34(d，J＝7.8Hz，1H)，7.24(dd，J＝6.0，4.5Hz，1H)，6.07(s，1H)，4.55(t，J＝6.4Hz，2H)，3.88(s，3H)，3.68(m，4H)，3.53(m，4H)，3.15(t，J＝6.6Hz，2H).
ESMSC24H26N6O4的計(jì)算值462.20；測(cè)量值463.3(M+1)+實(shí)施例35制備化合物351-(2-{4-[N’-(3-碘-苯亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基氧}-乙基)-1H-吡啶-2-酮按照類(lèi)似于實(shí)施例29所述的方式制備化合物35。
1H NMR(DMSO-d6)δ11.02(s，1H)，8.00(s，1H)，7.93(s，1H)，7.75-7.69(m，2H)，7.61(dd，J＝7.0，1.8Hz，1H)，7.41(td，J＝7.9，2.1Hz，1H)，7.20(t，J＝8.0Hz，1H)，6.38(d，J＝8.4Hz，1H)，6.19(t，J＝6.7Hz，1H)，6.06(s，1H)，4.43(t，J＝5.3Hz，2H)，4.22(t，J＝5.3Hz，2H)，3.66(m，4H)，3.53(m，4H)，3.14(t，J＝6.6Hz，2H).
ESMSC22H23IN6O3的計(jì)算值546.09；測(cè)量值569.2(M+23)+實(shí)施例36制備化合物363-{[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-亞肼基甲基}-苯甲酸N-甲基酰胺按照類(lèi)似于實(shí)施例29所述的方式制備化合物36。
1H NMR(DMSO-d6)δ11.00(s，1H)，8.6(s，1H)，8.41(d，J＝5.4Hz，1H)，8.12(s，1H)，8.11(s，1H)，8.0(d，J＝8.1Hz，1H)，7.83(d，J＝6.8Hz，1H)，7.73(t，J＝7.2Hz，1H)，7.57(t，J＝8.0Hz，1H)，7.34(d，J＝7.8Hz，1H)，7.34(dd，J＝6.0，4.5Hz，1H)，6.07(s，1H)，4.55(t，J＝6.4Hz，2H)，3.5-3.0(m，7H).
ESMSC24H27N7O3的計(jì)算值461.2；測(cè)量值485.1(M+Na)+實(shí)施例37制備化合物37(3-{[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-亞肼基甲基}-苯基)-甲醇按照類(lèi)似于實(shí)施例29所述的方式制備化合物37。
1H NMR(DMSO-d6)δ10.86(s，1H)，8.51(d，J＝3.9Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.73(td，J＝7.8 and 1.8Hz，1H)，7.39(m，2H)，7.39-7.32(m，3H) 7.24(dd，J＝6.3and 4.8Hz，1H)，6.06(s，1H)，5.25(t，J＝5.7Hz，1H)，4.54(t，J＝6.8Hz，2H)；4.53(d，J＝6.5Hz，2H)，3.66(m，4H)，3.53(m，4H)，3.14(t，J＝6.9Hz，2H).
ESMSC23H26N6O3的計(jì)算值434.49；測(cè)量值435.2(M+1)+通過(guò)以下方法制備化合物38-41。
按照從4-氰基丁酸酯(6.49克，43.9毫摩爾)開(kāi)始的方法制備4-脒基(carbamimidoyl)-丁酸乙酯鹽酸鹽，并在乙醇鈉的存在下與丙二酸二乙酯偶合，得到希望的二羥基嘧啶(1.27g，15％)。用三氯氧磷處理所述二羥基嘧啶，得到二氯衍生物(0.88克，60％)，之后它與DIPEA和嗎啉在THF中反應(yīng)轉(zhuǎn)化為嗎啉衍生物(0.89克，85％)。二氯衍生物與4當(dāng)量的肼在二氧六環(huán)中回流，得到肼衍生物(0.52克，59％)，其與間甲基苯甲醛縮合，得到腙(0.61克，88％)。用KOH在甲醇中對(duì)腙進(jìn)行水解，形成酸4-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-丁酸(0.47克，82％)。
向該酸的溶液中加入EDC、DMAP和適當(dāng)?shù)陌返腄MF溶液。得到的反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，并在二氯甲烷和水層之間分配。二氯甲烷層液用水、鹽水洗滌兩次，干燥。得到的酰胺(收率70-80％)通過(guò)柱層析分離。
實(shí)施例38制備化合物38N，N-二乙基-4-{4-[N”-(3-甲基-苯亞甲基)肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-丁酰胺1H NMR(CDCl3)δ8.38(brs，1H)，7.71(s，1H)，7.47(m，2H)，7.31-7.26(m，2H)，7.17(d，J＝7.5Hz，1H)，6.24(s，1H)，3.78(m，4H)，3.66(m，4H)，3.37(q，J＝7.2Hz，2H)，3.30(q，J＝7.2Hz，2H)，2.67(t，J＝7.4Hz，2H)，2.39(m，4H)，2.13(qv，J＝7.4Hz，2H)，1.13(t，J＝7.4Hz，3H)，1.11(t，J＝7.4Hz，3H).
ESMSC24H34N6O2的計(jì)算值438.27；測(cè)量值439.30(M+1)+實(shí)施例39制備化合物394-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-1-(4-甲基哌嗪-1-基)丁烷-1-酮1H NMR(CDCl3)δ8.36(brs，1H)，7.71(s，1H)，7.46 (m，2H)，7.31-7.26(m，2H)，7.17(d，J＝7.8Hz，1H)，6.25(s，1H)，3.80(m，4H))，3.65(m，6H)，3.46(t，J＝4.9Hz，2H)，2.67(t，J＝7.4Hz，2H)，2.42-2.34(m，8H)，2.30(s，3H)，2.11(qv，J＝7.5Hz，2H).
ESMSC25H35N7O2的計(jì)算值465.29；測(cè)量值466.30(M+1)+實(shí)施例40制備化合物404-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-N-吡啶-4-基甲基丁酰胺1H NMR(CDCl3)δ8.59(brs，1H)，7.92(s，1H)，7.60(m，2H)，7.37(m，2H)，7.22-7.11(m，4H)，7.00(m，1H)，6.15(s，1H)，4.36(d，J＝5.7Hz，2H)，3.68(m，4H)，3.53(m，4H)，2.62(t，J＝7.4Hz，2H)，2.31(s，3H)，2.25(t，J＝6.9Hz，2H)，2.05(qv，J＝6.8Hz，2H).
ESMSC26H31N7O2的計(jì)算值473.25；測(cè)量值474.30(M+1)+實(shí)施例41
制備化合物414-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-N-吡啶-4-基丁酰胺1H NMR(CDCl3)δ9.43(s，1H)，8.68(brs，1H)，8.43(d，J＝4.8Hz，2H)，7.75(s，1H)，7.51(d，J＝5.4Hz，2H)，7.44(m，2H)，7.27(t，J＝7.2Hz，1H)，7.16(d，J＝6.9Hz，1H)，6.23(s，1H)，3.77(m，4H)，3.64(m，4H)，2.72(t，J＝6.9Hz，2H)，2.46(t，J＝6.9Hz，2H)，2.37(s，3H)，，2.15(qv，J＝6.9Hz，2H).
ESMSC25H29N7O2的計(jì)算值459.24；測(cè)量值460.30(M+1)+實(shí)施例42.體外試驗(yàn)試劑金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)Cowan I(SAC)得自Calbiochem(La Jolla，CA)，脂多糖(LPS，Serratia marscencens)得自Sigma(St.Louis，MO)。人體與小鼠的重組IFNγ分別購(gòu)自BoehringerMannheim(Mannheim，Germany)和Pharmingen(San Diego，CA)。
人體體外試驗(yàn)使用Ficoll-Paque(Pharmacia Biotech，Uppsala，Sweden)離心分離人體PBMC，并在補(bǔ)充有10％胎牛血清(FCS)、100U/mL青霉素、以及100μg/mL鏈霉素的RPMI培養(yǎng)基中制備。將PBMC放入96孔板中，濃度為5×105個(gè)細(xì)胞/孔，并通過(guò)加入IFNγ(30U/mL)預(yù)處理22小時(shí)，通過(guò)加入LPS(1μg/mL)或者IFNγ(100U/mL)進(jìn)行刺激，然后再加入SAC(0.01％)進(jìn)行刺激。將試驗(yàn)的嘧啶化合物溶于二甲亞砜中并加入到96孔板的各孔中。把所有培養(yǎng)物，包括不含化合物的對(duì)照物中最終的DMSO濃度都調(diào)節(jié)到0.25％。將人體的THP-1細(xì)胞植入孔中，通過(guò)加入IFNγ(100U/mL)預(yù)處理22小時(shí)，在不同濃度嘧啶化合物的存在下加入SAC(0.025％)進(jìn)行刺激。18小時(shí)后，取無(wú)細(xì)胞的上層清液測(cè)定細(xì)胞因子。使用MTS的生物還原評(píng)價(jià)細(xì)胞的生存能力。細(xì)胞存活率通過(guò)測(cè)定用化合物處理的組與不含化合物的對(duì)照物中吸光率的比例來(lái)估算。
使用具有抗人抗體的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(sandwichELISA)，即，來(lái)自R&D Systems(Berkeley，CA)的人體IL-12 p40 ELISA試劑盒，和來(lái)自Endogen(Cambridge，MA)的人體IL-12 p70或者IL-10ELISA試劑盒，來(lái)測(cè)定上層清液中IL-12 p40，IL-12 p70，或者IL-10的量。試驗(yàn)根據(jù)廠家的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。
鼠科體外試驗(yàn)用結(jié)核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis)H37Ra(Difco，Detroit，MI)使Balb/c小鼠(Taconic，Germantown，NY)免疫。采集5天脾細(xì)胞，并在補(bǔ)充有10％FCS和抗生素的RPMI培養(yǎng)基中制備，置于平底96孔板中，濃度為1×106個(gè)細(xì)胞/孔。然后在試驗(yàn)化合物的存在下用IFNγ(60ng/mL)和SAC(0.025％)[或者LPS(20μg/mL)]的組合對(duì)脾細(xì)胞進(jìn)行刺激。24小時(shí)后，取無(wú)細(xì)胞的上層清液測(cè)定細(xì)胞因子。化合物的制備和細(xì)胞生存能力的評(píng)價(jià)如上所述進(jìn)行。使用Endogen公司的ELISA試劑盒，根據(jù)廠家的說(shuō)明書(shū)，測(cè)定小鼠的IL-12 p70，IL-10，IL-1B以及TNFα。
在人體PBMC或者THP-1細(xì)胞上測(cè)試嘧啶化合物的生物學(xué)活性。出人意料的是，一些試驗(yàn)化合物的IC50值低到＜1nM。
實(shí)施例43體內(nèi)試驗(yàn)治療大鼠的佐劑性關(guān)節(jié)炎通過(guò)皮內(nèi)注射(尾巴端部)0.1毫升10mg/mL懸浮在弗氏不完全佐劑中的由研磨的、熱殺的結(jié)核分枝桿菌H37Ra制成的細(xì)菌懸液而使雌性Lewis大鼠產(chǎn)生佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)。給大鼠經(jīng)口服用試驗(yàn)化合物，一天一次，共服用12天，從產(chǎn)生關(guān)節(jié)炎的下一天開(kāi)始。在關(guān)鍵階段(免疫后10-25天)，通過(guò)肉眼可見(jiàn)的檢查和對(duì)各種動(dòng)物關(guān)節(jié)炎指數(shù)的說(shuō)明監(jiān)測(cè)多發(fā)性關(guān)節(jié)炎的進(jìn)展。
根據(jù)以下流程評(píng)定多發(fā)性關(guān)節(jié)炎的強(qiáng)度(a)根據(jù)出現(xiàn)關(guān)節(jié)紅斑、腫脹、畸形對(duì)每一爪記錄為0-3級(jí)0為沒(méi)有紅斑或者腫脹；0.5為在至少一個(gè)關(guān)節(jié)中可測(cè)量到腫脹；1為有輕微的腫脹和紅斑；2為在跗骨和腕骨都出現(xiàn)腫脹和紅斑；3為關(guān)節(jié)僵硬且發(fā)生似骨畸形。所有的4個(gè)爪的最大分?jǐn)?shù)為12。(b)身體其他部分的級(jí)別對(duì)于每一個(gè)耳朵，0.5是指出現(xiàn)紅色，如果有腫塊出現(xiàn)，另加一個(gè)0.5；1是指結(jié)締組織發(fā)生腫脹(鞍鼻)；如果尾部存在腫塊或者扭結(jié)也是1。最大可能的關(guān)節(jié)炎指數(shù)為16。
口服本發(fā)明的嘧啶化合物(例如，化合物12)可重現(xiàn)性地降低關(guān)節(jié)炎分值，并以依賴(lài)于劑量的方式延遲多發(fā)性關(guān)節(jié)炎的進(jìn)展。用于這一模型的關(guān)節(jié)炎分?jǐn)?shù)反映出所監(jiān)測(cè)結(jié)構(gòu)的炎癥狀態(tài)，因此，其結(jié)果表明了試驗(yàn)化合物在減輕該方面病狀的能力。
在用二硝基苯磺酸誘導(dǎo)的炎癥性腸部綜合癥模型大鼠中治療克羅恩氏病使用Wistar源雄性或者雌性大鼠，其重量為200±20克，使用前已被絕食24小時(shí)。通過(guò)結(jié)腸內(nèi)法滴注2，4-二硝基苯磺酸(DNBS，25mg，在0.5毫升乙醇中，濃度為30％)，隨后通過(guò)套管輕輕地注入空氣(2毫升)以保證溶液留在結(jié)腸內(nèi)而導(dǎo)致產(chǎn)生末梢結(jié)腸炎。在DNBS滴注之前24小時(shí)和2小時(shí)，以經(jīng)口方式給予試驗(yàn)化合物和/或載體，然后每天給藥，共計(jì)5天。一個(gè)對(duì)照組類(lèi)似地只用載體處理，而另一個(gè)則用載體加上DNBS處理。在最后一次劑量的試驗(yàn)化合物給藥之后24小時(shí)時(shí)，將動(dòng)物殺死，取出每一個(gè)結(jié)腸并稱(chēng)重。然后對(duì)每一個(gè)動(dòng)物根據(jù)以下表達(dá)式計(jì)算結(jié)腸-體重比結(jié)腸(g)/BW×100。載體對(duì)照組+DNBS組相對(duì)于載體對(duì)照組的比例的凈增加用作比較試驗(yàn)物質(zhì)治療組的基礎(chǔ)，并以″％減除″來(lái)表示。本發(fā)明的嘧啶化合物(如，化合物12)可重現(xiàn)性地具有約30％的減除。相對(duì)于載體處理的對(duì)照組來(lái)說(shuō)，結(jié)腸-體重比降低30％或者更多被認(rèn)為是很重要的。
以經(jīng)口方式用試驗(yàn)物質(zhì)處理的大鼠表現(xiàn)出顯著降低的炎癥性反應(yīng)。這些實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，結(jié)果可重現(xiàn)。
在CD4+CD45RbhighT細(xì)胞重組的SCID結(jié)腸炎模型小鼠中克羅恩氏病的治療從正常的雌性BALB/c小鼠制備脾細(xì)胞。為了細(xì)胞純化，使用以下抗小鼠抗體來(lái)標(biāo)記非CD4+T細(xì)胞B220(RA3-6B2)、CD11b(M1/70)、和CD8α(53-6.72)。所有的抗體均得自BioSource(Camarillo，CA)。M450抗大鼠IgG-涂覆的磁珠(Dynal，Oslo，Norway)用來(lái)使抗體結(jié)合在一起，使用MPC-1磁選機(jī)實(shí)現(xiàn)負(fù)性選擇。然后，為了進(jìn)行細(xì)胞分選，用FITC-共軛的CD45RB(16A，Pharmingen，SanDiego，CA)和PE-接合的CD4(CT-CD4，Caltag，Burlingame，CA)標(biāo)記富集的CD4+細(xì)胞。操作時(shí)，CD4+CD45RBhigh細(xì)胞定義為染有CD45Rb的CD4+細(xì)胞的上部40％，它們?cè)跓o(wú)菌條件下通過(guò)流細(xì)胞計(jì)數(shù)法分選。收集的細(xì)胞以4×106個(gè)/毫升的濃度再懸浮于PBS中，并且把100μl的這種懸浮液通過(guò)腹膜內(nèi)注射法注入到雌性C.B-17 SCID小鼠身上。本發(fā)明的嘧啶化合物(如，化合物12)和/或載體經(jīng)口給藥，一天一次，每周5天，從注射后的第二天開(kāi)始。對(duì)移植的SCID小鼠每周都稱(chēng)重，并監(jiān)測(cè)其臨床狀況。
將結(jié)腸組織樣品固定在10％的福爾馬林緩沖劑中，并嵌入石蠟中。切開(kāi)分別從上行、橫向、和下行結(jié)腸中收集的切面(4μm)，用蘇木精和曙紅著色。通過(guò)用組織學(xué)檢查法檢查末梢結(jié)腸切面確定結(jié)腸炎的嚴(yán)重程度，從而以0-3的尺度將結(jié)腸發(fā)炎的程度分為四個(gè)標(biāo)準(zhǔn)等級(jí)。小囊伸長(zhǎng)、細(xì)胞滲透、杯狀細(xì)胞排除、和小囊膿腫數(shù)目。
從新近得到的結(jié)腸樣品分離出LP淋巴細(xì)胞。除去付給者的斑片之后，把結(jié)腸在不含Ca/Mg的HBSS中洗滌，切成0.5厘米的小片，并在包含有EDTA(0.75mM)、DTT(1mM)、和抗生素(二性霉素2.5μg/mL、慶大霉素50μg/mL，得自Sigma公司)的HBSS中溫育兩次，溫度為37℃，時(shí)間為15分鐘。之后，該組織進(jìn)一步在37℃下，在包含0.5mg/mL膠原酶D、0.01mg/mL脫氧核糖核酸酶I(Boehringer Manheim)、和抗生素的RPMI中消化。然后，將LP細(xì)胞在40-100％的Percoll梯度(Pharmacia，Uppsala，Sweden)上分層，富集有淋巴細(xì)胞的種群與細(xì)胞在40-100％的界面上分離開(kāi)來(lái)。
為了測(cè)定細(xì)胞因子的生成情況，將48孔板在4℃用10μg/mL的鼠科抗CD3ε抗體(145-2C11)涂覆過(guò)夜，其中所述抗體處于碳酸酯緩沖劑中(pH值為9.6)。然后，在預(yù)涂的孔中，在1μg/ml可溶的抗CD28抗體(37.51)存在下，在0.5ml的完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)5×105個(gè)LP細(xì)胞。純化的抗體得自Pharmingen。48小時(shí)之后除去培養(yǎng)物上層清液，并測(cè)定細(xì)胞因子的生成。使用Endogen(Cambridge，MA)的ELISA試劑盒，根據(jù)廠家的說(shuō)明書(shū)測(cè)定鼠科IFNγ。
組織分析表明，與載體對(duì)照相比，口服本發(fā)明的嘧啶化合物(如，化合物12)能減少結(jié)腸發(fā)炎情況。抑制效果依賴(lài)于劑量，在10mg/kg的劑量下有大幅度的削減。計(jì)算的結(jié)腸-體重比與組織學(xué)分?jǐn)?shù)相一致，這表明，用試驗(yàn)化合物處理有減弱作用。此外，從對(duì)抗CD3抗體和抗CD28抗體作出響應(yīng)的LP細(xì)胞的細(xì)胞因子分析表明，從載體對(duì)照得到的LP細(xì)胞產(chǎn)生的IFNγ量增加，而用試驗(yàn)物質(zhì)處理卻可大大地降低IFNγ的生成。這些結(jié)果清楚地說(shuō)明了試驗(yàn)物質(zhì)在治療由克羅恩氏病代表的炎癥性腸病方面的潛力。
其他實(shí)施方案該說(shuō)明書(shū)中公開(kāi)的所有特征可以以任何組合方式結(jié)合。該說(shuō)明書(shū)中公開(kāi)的每一特征都可代以起相同作用的可選特征、等價(jià)物或類(lèi)似的目的。因此，除非另外清楚說(shuō)明，公開(kāi)的每一特征都只是通用系列等價(jià)物或者類(lèi)似特征的實(shí)例。
由上面的說(shuō)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以很容易地確定本發(fā)明的主要特征，并且在不背離其精神和范圍的情況下，可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種變化和改進(jìn)以使其適合各種各樣的用途和狀況。例如，可以制備出與本說(shuō)明書(shū)中所述嘧啶化合物結(jié)構(gòu)類(lèi)似的化合物，對(duì)其抑制IL-12的活性進(jìn)行篩選，并用于實(shí)施本發(fā)明。
權(quán)利要求
1.一種式(I)的化合物 其中R1是 芳基、或雜芳基；各個(gè)R2和R4獨(dú)立地是Rc、鹵素、硝基、氰基、異硫硝基、SRc、或ORc；或者R2和R4一起是羰基；R3是Rc、烯基、炔基、ORc、OC(O)Rc、SO2Rc、S(O)Rc、S(O2)NRcRd、SRc、NRcRd、NRcCORd、NRcC(O)ORd、NRcC(O)NRcRd、NRcSO2Rd、CORc、C(O)ORc、或C(O)NRcRd；R5是H或烷基；n是0、1、2、3、4、5、或6；X是O、S、S(O)、S(O2)、或NRc；Y是共價(jià)鍵、CH2、C(O)、CN-Rc、C＝N-ORc、C＝N-SRc、O、S、S(O)、S(O2)、或NRc；Z是N或CH；U和V中的一個(gè)是N，另一個(gè)是CRc；W是O、S、S(O)、S(O2)、NRc或NC(O)Rc；其中，各個(gè)Ra和Rb獨(dú)立地是H、烷基、芳基、雜芳基；各個(gè)Rc和Rd獨(dú)立地是H、烷基、芳基、雜芳基、環(huán)基、雜環(huán)基、或烷羰基。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R1是
3.權(quán)利要求2的化合物，其中U是N，V是CH。
4.權(quán)利要求2的化合物，其中Z是N，W是O。
5.權(quán)利要求2的化合物，其中X是O或NRc。
6.權(quán)利要求2的化合物，其中Y是共價(jià)鍵、O、S、或CH2，n是0、1、2、3、或4。
7.權(quán)利要求6的化合物，其中R3是芳基或雜芳基。
8.權(quán)利要求6的化合物，其中R3是ORc、SRc、C(O)ORc、NRcRd、或C(O)NRcRd。
9.權(quán)利要求6的化合物，其中R3是 或 其中，各個(gè)A和A’獨(dú)立地是O、S或NH；各個(gè)Re和Rf獨(dú)立地是H、烷基、芳基、或雜芳基；和m是1或2。
10.權(quán)利要求2的化合物，其中Ra或Rb中的一個(gè)是 或 其中B是NRi、O或S；B’是N或CRi；Rg是H、鹵素、CN、烷基、環(huán)基、烷氧基、烷羰基、烷氧羰基、芳氧羰基、雜芳氧羰基、羥烷基、烷氨基、或烷氨基羰基；Rh是H、鹵素、NO2、CN、烷基、芳基、雜芳基、ORc、OC(O)Rc、SO2Rc、S(O)Rc、S(O2)NRcRd、SRc、NRcRd、NRcCORd、NRcC(O)ORd、NRcC(O)NRcRd、NRcSO2Rd、CORc、C(O)ORc、或C(O)NRcRd；Ri是H、烷基、或烷羰基；p是0、1或2；q是0、1、2、3或4。
11.權(quán)利要求10的化合物，其中Ra或Rb中的一個(gè)是 或 其中Rg、Rh、Rl和q如權(quán)利要求10中定義；Ra或Rb中的另一個(gè)是H或烷基。
12.權(quán)利要求11的化合物，其中Rg是H、甲基、乙基、丙基、環(huán)丙基、甲氧基、乙氧基、甲氧基羰基或鹵素；Rh是F、Cl、CN、甲基、甲氧基、乙氧基、OC(O)CH3、OC(O)C2H5、C(O)OH、C(O)OC2H5、C(O)NH2、NHC(O)CH3、或S(O2)NH2；Ri是H、甲基、乙基或乙?；籷是0、1或2。
13.權(quán)利要求12的化合物，其中U是N，V是CH，Z是N，W是O。
14.權(quán)利要求13的化合物，其中X是NRc；Rc是H、甲基、乙基或乙?；?br> 15.權(quán)利要求14的化合物，其中Y是共價(jià)鍵、O、S、或CH2，n是0、1、2、3、或4。
16.權(quán)利要求15的化合物，其中R3是Rc、ORc、SRc、C(O)ORc、或C(O)NRcRd。
17.權(quán)利要求16的化合物，其中R3是芳基、雜芳基、羥基、烷氧基或雜芳氧基。
18.權(quán)利要求1的化合物，其中R1是芳基或雜芳基。
19.權(quán)利要求18的化合物，其中R1是 其中，D是O、S或NRm；Rj是苯并、鹵素、CN、羥基、烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、芳氧基、或雜芳氧基；Rm是H、烷基、或烷羰基；r是0、1或2。
20.權(quán)利要求19的化合物，其中X是NRc；Rc是H、甲基、乙基或乙?；?。
21.權(quán)利要求20的化合物，其中U是N，V是CH，Z是N，W是O。
22.權(quán)利要求21的化合物，其中Y是共價(jià)鍵、O、S、或CH2，n是0、1、2、3、或4。
23.權(quán)利要求22的化合物，其中R3是芳基或雜芳基。
24.權(quán)利要求22的化合物，其中R3是ORc、SRc、C(O)ORc、NRcRd、或C(O)NRcRd。
25.權(quán)利要求22的化合物，其中R3是 或 其中，各個(gè)A和A’獨(dú)立地是O、S或NH；各個(gè)Re和Rf獨(dú)立地是H、烷基、芳基、或雜芳基；m是1或2。
26.權(quán)利要求22的化合物，其中R1是 其中，Rm是H、烷基或烷羰基；Rj是甲基、乙基、丙基、或苯并；r是1或2。
27.權(quán)利要求1的化合物，其中R1是 各個(gè)R2和R4均是H；R3是H、烷基、芳基、雜芳基、環(huán)基、雜環(huán)基、烷氧基羰基、烷氨基羰基、或烷羰基；X是NRc。
28.權(quán)利要求27的化合物，其中X是NH。
29.權(quán)利要求27的化合物，其中Ra或Rb中的一個(gè)是H或烷基；另一個(gè)是任選被Rg和Rhq取代的芳基或雜芳基；Rg是鹵素、CN、烷基、烷氧基、烷羰基、烷氧羰基、芳氧羰基、雜芳氧羰基、羥烷基、烷氨基、或烷氨基羰基；Rh是鹵素、CN、羥基、烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、芳氧基、或雜芳氧基；q是0、1、2、3或4。
30.權(quán)利要求29的化合物，其中Ra或Rb中的一個(gè)是H或烷基；另一個(gè)是 其中，Rg是H、烷基、烷氧基、甲氧基羰基、或鹵素；Rh是鹵素、CN、羥基、烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、芳氧基、或雜芳氧基；q是0、1、2、3或4。
31.權(quán)利要求27的化合物，其中U是N，V是CH，Z是N，W是O。
32.權(quán)利要求31的化合物，其中R3是雜芳基或雜環(huán)基。
33.權(quán)利要求32的化合物，其中R3是吡啶基。
34.權(quán)利要求32的化合物，其中R3是1-氧吡啶基。
35.權(quán)利要求32的化合物，其中R3是1H-吡啶-2-酮。
36.權(quán)利要求32的化合物，其中n是2，Y是O。
37.權(quán)利要求36的化合物，其中X是NH。
38.權(quán)利要求37的化合物，其中Ra或Rb中的一個(gè)是H或烷基；另一個(gè)是 其中，Rg是H、烷基、烷氧基、甲氧基羰基、或鹵素；Rh是鹵素、CN、羥基、烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、芳氧基、或雜芳氧基；q是0、1、2、3或4。
39.權(quán)利要求38的化合物，其中Ra或Rb中的一個(gè)是H或烷基；另一個(gè)是 其中，Rg如權(quán)利要求38中定義。
40.權(quán)利要求1的化合物，其中化合物是N-{2-[3-(3，4-二甲氧基苯基)-丙基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基}-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼，N-(2-正丁氧基-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基)-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼，N-(2-(4-羥丁基)-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基)-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼，N-[2-(2-[1，3]二氧六環(huán)-2-基-乙基)-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基]-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼，N-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-N’-[2-(3-甲氧基丙基)-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基]-肼，3-{4-[N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基硫烷基}-丙烷-1-醇，3-{2-[N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基硫烷基}-丙烷-1-醇，N-[2-(2，2-二甲基-[1，3]-二氧戊烷-4-基甲氧基)-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基]-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼，N-{2-[2-(3，4-二甲氧基苯基)乙氧基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基}-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼，N-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼，N-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(3-吡啶-2-基丙基)-嘧啶-4-基]-肼，N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼，N-(3-乙基苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼，N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(3-吡啶-2-基-丙基)-嘧啶-4-基]-肼，N-(6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基)-N’-(1-間甲苯基-亞乙基)-肼，N-[1-(1H-吲哚-3-基)-亞乙基]-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼，3-甲基苯甲醛O-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肟，1H-吲哚-3-甲醛O-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基乙氧基)-嘧啶-4-基]-肟，N-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-N’-{6-嗎啉-4-基-2-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-肼，N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-{6-嗎啉-4-基-2-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-肼丁基-{4-[N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-胺，N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(吡啶-3-基氧)-嘧啶-4-基]-肼，N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-(5-甲基-6-嗎啉-4-基-2-苯基嘧啶-4-基)肼，N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-(2-苯基-6-硫代嗎啉-4-基-嘧啶-4-基)-肼，(2，3-二甲基-1H-吲哚-5-基)-{6-嗎啉-4-基-2-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-胺，(2，3-二甲基-1H-吲哚-5-基)-{4-嗎啉-4-基-6-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-2-基}-胺，3-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-丙酸乙酯，N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-{6-嗎啉-4-基-2-[2-(1-氧-吡啶-2-基)-乙氧基]-嘧啶-4基}-肼，1-2-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基氧}-乙基)-1H-吡啶-2-酮，N-(3-碘-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼，N-(3-氟-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼，N-(3-氯-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼，N-(3-溴-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼，3-{[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-亞肼基甲基}-苯甲酸甲酯，1-(2-{4-[N’-(3-碘-苯亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基氧}-乙基)-1H-吡啶-2-酮，3-{[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-亞肼基甲基}-苯甲酸N-甲基酰胺，(3-{[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-亞肼基甲基}-苯基)-甲醇，N，N-二乙基-4-{4-[N”-(3-甲基-苯亞甲基)肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-丁酰胺，4-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-1-(4-甲基哌嗪-1-基)丁烷-1-酮，4-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-N-吡啶-4-基甲基丁酰胺，4-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-N-吡啶-4-基丁酰胺。
41.一種含有藥學(xué)上可接受的載體和有效量的下式(I)化合物的藥物組合物 其中R1是 芳基、或雜芳基；各個(gè)R2和R4獨(dú)立地是Rc、鹵素、硝基、氰基、異硫硝基、SRc、或ORc；或者R2和R4一起是羰基；R3是Rc、烯基、炔基、ORc、OC(O)Rc、SO2Rc、S(O)Rc、S(O2)NRcRd、SRc、NRcRd、NRcCORd、NRcC(O)ORd、NRcC(O)NRcRd、NRcSO2Rd、CORc、C(O)ORc、或C(O)NRcRd；R5是H或烷基；n是0、1、2、3、4、5、或6；X是O、S、S(O)、S(O2)、或NRc；Y是共價(jià)鍵、CH2、C(O)、C＝N-Rc、C＝N-ORc、C＝N-SRc、O、S、S(O)、S(O2)、或NRcZ是N或CH；U和V中的一個(gè)是N，另一個(gè)是CRc；W是O、S、S(O)、S(O2)、NRc或NC(O)Rc；其中，各個(gè)Ra和Rb獨(dú)立地是H、烷基、芳基、雜芳基；各個(gè)Rc和Rd獨(dú)立地是H、烷基、芳基、雜芳基、環(huán)基、雜環(huán)基、或烷羰基。
42.權(quán)利要求41的藥物組合物，其中R1是 各個(gè)R2和R4均是H；R3是H、烷基、芳基、雜芳基、環(huán)基、雜環(huán)基、烷氧基羰基、烷氨基羰基、或烷羰基；X是NRc。
43.權(quán)利要求42的藥物組合物，其中Ra或Rb中的一個(gè)是H或烷基；另一個(gè)是任選被Rg和Rhq取代的芳基或雜芳基；Rg是鹵素、CN、烷基、烷氧基、烷羰基、烷氧羰基、芳氧羰基、雜芳氧羰基、羥烷基、烷氨基、或烷氨基羰基；Rh是鹵素、CN、羥基、烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、芳氧基、或雜芳氧基；q是0、1、2、3或4。
44.一種治療與過(guò)量生成白細(xì)胞間介素-12有關(guān)的病癥的方法，該方法包括給予需要這種治療的患者有效量的下式(I)的化合物 其中R1是 芳基、或雜芳基；各個(gè)R2和R4獨(dú)立地是Rc、鹵素、硝基、氰基、異硫硝基、SRc、或ORc；或者R2和R4一起是羰基；R3是Rc、烯基、炔基、ORc、OC(O)Rc、SO2Rc、S(O)Rc、S(O2)NRcRd、SRc、NRcRd、NRcCORd、NRcC(O)ORd、NRcC(O)NRcRd、NRcSO2Rd、CORc、C(O)ORc、或C(O)NRcRd；R5是H或烷基；n是0、1、2、3、4、5、或6；X是O、S、S(O)、S(O2)、或NRc；Y是共價(jià)鍵、CH2、C(O)、C＝N-Rc、C＝N-ORc、C＝N-SRc、O、S、S(O)、S(O2)、或NRc；Z是N或CH；U和V中的一個(gè)是N，另一個(gè)是CRc；W是O、S、S(O)、S(O2)、NRc或NC(O)Rc；其中，各個(gè)Ra和Rb獨(dú)立地是H、烷基、芳基、雜芳基；各個(gè)Rc和Rd獨(dú)立地是H、烷基、芳基、雜芳基、環(huán)基、雜環(huán)基、或烷羰基。
45.權(quán)利要求44的方法，其中所述病癥是類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、膿毒癥、克羅恩氏病、多發(fā)性硬化、牛皮癬、或者胰島素依賴(lài)型糖尿病。
46.權(quán)利要求44的方法，其中R1是 各個(gè)R2和R4均是H；R3是H、烷基、芳基、雜芳基、環(huán)基、雜環(huán)基、烷氧基羰基、烷氨基羰基、或烷羰基；X是NRc。
47.權(quán)利要求46的方法，其中Ra或Rb中的一個(gè)是H或烷基；另一個(gè)是任選被Rg和Rhq取代的芳基或雜芳基；Rg是鹵素、CN、烷基、烷氧基、烷羰基、烷氧羰基、芳氧羰基、雜芳氧羰基、羥烷基、烷氨基、或烷氨基羰基；Rh是鹵素、CN、羥基、烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、芳氧基、或雜芳氧基；q是0、1、2、3或4。
48.權(quán)利要求44的方法，其中化合物是N-{2-[3-(3，4-二甲氧基苯基)-丙基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基}-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼，N-(2-正丁氧基-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基)-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼，N-(2-(4-羥丁基)-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基)-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼，N-[2-(2-[1，3]二氧六環(huán)-2-基-乙基)-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基]-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼，N-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-N’-[2-(3-甲氧基丙基)-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基]-肼，3-{4-[N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基硫烷基}-丙烷-1-醇，3-{2-[N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基硫烷基}-丙烷-1-醇，N-[2-(2，2-二甲基-[1，3]-二氧戊烷-4-基甲氧基)-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基]-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼，N-{2-[2-(3，4-二甲氧基苯基)乙氧基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基}-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼，N-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼，N-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(3-吡啶-2-基丙基)-嘧啶-4-基]-肼，N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼，N-(3-乙基苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼，N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(3-吡啶-2-基-丙基)-嘧啶-4-基]-肼，N-(6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基)-N’-(1-間甲苯基-亞乙基)-肼，N-[1-(1H-吲哚-3-基)-亞乙基]-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼，3-甲基苯甲醛O-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肟，1H-吲哚-3-甲醛O-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基乙氧基)-嘧啶-4-基]-肟，N-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-N’-{6-嗎啉-4-基-2-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-肼，N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-{6-嗎啉-4-基-2-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-肼丁基-{4-[N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-胺，N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(吡啶-3-基氧)-嘧啶-4-基]-肼，N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-(5-甲基-6-嗎啉-4-基-2-苯基嘧啶-4-基)肼，N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-(2-苯基-6-硫代嗎啉-4-基-嘧啶-4-基)-肼，(2，3-二甲基-1H-吲哚-5-基)-{6-嗎啉-4-基-2-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-胺，(2，3-二甲基-1H-吲哚-5-基)-{4-嗎啉-4-基-6-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-2-基}-胺，3-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-丙酸乙酯，N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-{6-嗎啉-4-基-2-[2-(1-氧-吡啶-2-基)-乙氧基]-嘧啶-4基}-肼，1-2-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基氧}-乙基)-1H-吡啶-2-酮，N-(3-碘-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼，N-(3-氟-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼，N-(3-氯-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼，N-(3-溴-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼，3-{[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-亞肼基甲基}-苯甲酸甲酯，1-(2-{4-[N’-(3-碘-苯亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基氧}-乙基)-1H-吡啶-2-酮，3-{[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-亞肼基甲基}-苯甲酸N-甲基酰胺，(3-{[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-亞肼基甲基}-苯基)-甲醇，N，N-二乙基-4-{4-[N”-(3-甲基-苯亞甲基)肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-丁酰胺，4-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-1-(4-甲基哌嗪-1-基)丁烷-1-酮，4-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-N-吡啶-4-基甲基丁酰胺，4-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-N-吡啶-4-基丁酰胺。
49.權(quán)利要求45的方法，其中化合物是N-{2-[3-(3，4-二甲氧基苯基)-丙基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基}-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼，N-(2-正丁氧基-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基)-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼，N-(2-(4-羥丁基)-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基)-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼，N-[2-(2-[1，3]二氧六環(huán)-2-基-乙基)-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基]-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼，N-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-N’-[2-(3-甲氧基丙基)-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基]-肼，3-{4-[N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基硫烷基}-丙烷-1-醇，3-{2-[N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基硫烷基}-丙烷-1-醇，N-[2-(2，2-二甲基-[1，3]-二氧戊烷-4-基甲氧基)-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基]-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼，N-{2-[2-(3，4-二甲氧基苯基)乙氧基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基}-N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼，N-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼，N-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(3-吡啶-2-基丙基)-嘧啶-4-基]-肼，N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼，N-(3-乙基苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼，N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(3-吡啶-2-基-丙基)-嘧啶-4-基]-肼，N-(6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基)-N’-(1-間甲苯基-亞乙基)-肼，N-[1-(1H-吲哚-3-基)-亞乙基]-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼，3-甲基苯甲醛O-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肟，1H-吲哚-3-甲醛O-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基乙氧基)-嘧啶-4-基]-肟，N-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-N’-{6-嗎啉-4-基-2-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-肼，N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-{6-嗎啉-4-基-2-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-肼丁基-{4-[N’-(1H-吲哚-3-基亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-胺，N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(吡啶-3-基氧)-嘧啶-4-基]-肼，N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-(5-甲基-6-嗎啉-4-基-2-苯基嘧啶-4-基)肼，N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-(2-苯基-6-硫代嗎啉-4-基-嘧啶-4-基)-肼，(2，3-二甲基-1H-吲哚-5-基)-{6-嗎啉-4-基-2-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-胺，(2，3-二甲基-1H-吲哚-5-基)-{4-嗎啉-4-基-6-[2-(吡啶-3-基氧)-乙氧基]-嘧啶-2-基}-胺，3-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-丙酸乙酯，N-(3-甲基-苯亞甲基)-N’-{6-嗎啉-4-基-2-[2-(1-氧-吡啶-2-基)-乙氧基]-嘧啶-4基}-肼，1-2-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基氧}-乙基)-1H-吡啶-2-酮，N-(3-碘-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼，N-(3-氟-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼，N-(3-氯-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼，N-(3-溴-苯亞甲基)-N’-[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-肼，3-{[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-亞肼基甲基}-苯甲酸甲酯，1-(2-{4-[N’-(3-碘-苯亞甲基)-肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基氧}-乙基)-1H-吡啶-2-酮，3-{[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-亞肼基甲基}-苯甲酸N-甲基酰胺，(3-{[6-嗎啉-4-基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-亞肼基甲基}-苯基)-甲醇，N，N-二乙基-4-{4-[N”-(3-甲基-苯亞甲基)肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-丁酰胺，4-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-1-(4-甲基哌嗪-1-基)丁烷-1-酮，4-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-N-吡啶-4-基甲基丁酰胺，4-{4-[N’-(3-甲基-苯亞甲基)肼基]-6-嗎啉-4-基-嘧啶-2-基}-N-吡啶-4-基丁酰胺。
全文摘要
本發(fā)明的特征在于式(I)的嘧啶化合物，其中R
文檔編號(hào)C07D401/14GK1599726SQ02823951
公開(kāi)日2005年3月23日 申請(qǐng)日期2002年11月27日 優(yōu)先權(quán)日2001年11月30日
發(fā)明者小野光則, 孫利軍, 特雷莎·普熱沃克, 章世杰, 葉連娜·科斯季科, 英偉文, 和田裕美子, 古屋圭三, 武亞明, 周丹, 辰田寬昭 申請(qǐng)人:辛塔醫(yī)藥品有限公司