專利名稱：制備矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物的合成方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及合成的矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物以及生產(chǎn)和使用所述低聚物的方法。
背景技術(shù)：
多酚是存在于許多植物中的非常多的一類化合物(Ferreira，D.，Steynberg，J.P.，Roux，D.G.和Brandt，E.V.，Tetrahedron，48(10)，1743-1803(1992))，其中的一些進(jìn)入食物鏈。在一些情況下它們代表人類食物中的一類重要的化合物。盡管一些多酚被認(rèn)為是沒(méi)有營(yíng)養(yǎng)的，但由于它們對(duì)健康可能具有有益的效果，使得對(duì)這些化合物的重視程度日益增加。
例如，在實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物研究中已經(jīng)證明五羥黃酮具有抗癌活性(Decshner，E.E.，Ruperto，J.，Wong，G.和Newmark，H.L.，Carcinogenesis，7，1193-1196(1991)和Kato，R.，Nakadate，T.，Yamamto，S和Sugimura，T.，Carcinogenesis，4，1301-1305(1983))。已經(jīng)證明(+)-兒茶素和(-)-表兒茶素具有抑制白血病逆轉(zhuǎn)錄酶活性(Chu，S.-C.，Hsieh，Y.-S和Lim，J-Y.，J.of Natural Products，55(2)，179-183(1992))。已經(jīng)證明Nobatanin(一種低聚的可水解的單寧)具有抗腫瘤活性(Okuda，T.，Yoshida，T.，和Hatano，T.，多酚的分子結(jié)構(gòu)和藥理學(xué)活性-低聚的可水解的單寧和其它物質(zhì)-發(fā)表于XVIth Intemational Conference of theGroup Polyphenols，Lisbon，Portugal，July 13-16，1992)。統(tǒng)計(jì)學(xué)報(bào)導(dǎo)也證明了在產(chǎn)茶的日本胃癌的死亡率低許多。已報(bào)導(dǎo)在綠茶中的表兒茶素(Epigallocatechin)沒(méi)食子酸具有藥理學(xué)活性抑制了小鼠皮膚腫瘤(Okuda等，出處同上)。還證明鞣花酸在各種動(dòng)物腫瘤模型中具有抗癌活性(Boukharta，M.，Jalbert，G.和Castonguay，A.，鞣花丹寧和鞣花酸作為癌癥化療劑的功效-發(fā)表于XVIth International Conference of theGroup Polyphenols，Lisbon，Portugal，July 13-16，1992)。KikkomanCorporation申請(qǐng)專利的原花色素低聚物被用作抗突變劑。酚類化合物在食物中的應(yīng)用和它們?cè)趯?shí)驗(yàn)性動(dòng)物模型中對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的控制最近發(fā)表于202ndNational Meeting ofthe American Chemical Society(食物中的酚類化合物和它們對(duì)于健康的影響I，Analysis，Occurrence&Chemisty，Ho，C-T.，Lee，C.Y.和Huang，M-T.編輯，ACS SymposiumSeries 506，American Chemical Society，Washington，D.C.(1 992)；食物中的酚類化合物和它們對(duì)于健康的影響II，抗氧化劑和防癌，Huang，M-T.Ho，C-T.和Lee，C.Y.編輯，ACS Symposium Series 506，AmericanChemical Society，Washington，D.C.(1992))。
但是，這些文獻(xiàn)資料沒(méi)有涉及咖啡提取物或其化合物或者涉及任何制備這些提取物或其化合物的方法，或者涉及在1996年9月10授予Romanczyk等人的美國(guó)專利5,554,645、1998年1月27日授權(quán)予Romanczyk等人的美國(guó)專利5,712,305和1997年7月22日授權(quán)予Walker等人的美國(guó)專利5,650,432中所述的各種應(yīng)用。
現(xiàn)已建立回收一定范圍的矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物的離析、分離、純化和鑒定的方法從而對(duì)體外和體內(nèi)的生理活性評(píng)估進(jìn)行比較。例如，通過(guò)五聚體至十聚體的矢車(chē)菊苷配質(zhì)，而不是通過(guò)四聚體化合物來(lái)表征抗癌活性。當(dāng)前，克數(shù)量的純(＞95％)五聚體通過(guò)時(shí)間消耗(time-consuming)法獲得。這些方法不足以獲得用于大規(guī)模藥理學(xué)和生物利用率研究的足量的五聚體。由于在天然產(chǎn)物中的濃度遠(yuǎn)低于五聚體，需要更多的努力去獲得多-克數(shù)量的較高級(jí)的低聚物(六聚體至十聚體)以進(jìn)行類似的研究。此外，增加低聚物的尺寸增加了結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性。一些因素如包括在不同黃烷間(interflavan)鍵合位置的低聚物的單體單元的手性、黃烷間鍵的動(dòng)態(tài)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)化、吡喃環(huán)的構(gòu)象態(tài)以及在親核中心的多點(diǎn)鍵合限制了用于后續(xù)鑒定的分離和純化的目前的分析方法的有效性。
例如，過(guò)去在含水介質(zhì)中采用無(wú)機(jī)酸作為催化劑偶合游離酚形式的單體單元的嘗試并不成功。收率低、進(jìn)行的反應(yīng)的選擇性差以及低聚物難以分離(Stynberg，P.J.，Nel，R.J.，和Ferreira，D.，Tetrahedron，54，8153-8158(1998)；Botha，J.J.，Young，DA.，F(xiàn)erreira，F(xiàn).，和Roux，D.J.J.，J. Chem.Soc.，Perkins Trans.I，1213-1219(1981))。
通過(guò)Kawamoto，H.，Nakatsubo，F(xiàn).和Murkami K.，在MokuzaiGakkashi，37，741-747(1991)中所述的方法制備芐基化單體，其中使用芐基溴與碳酸鉀(K2CO3)和二甲基甲酰胺(DMF)結(jié)合。但是收率只有大約40％。另外，競(jìng)爭(zhēng)的C-芐基化作用生成混合產(chǎn)物，使得目標(biāo)單體的分離更加困難。還在(+)-兒茶素的C-2和C-3位置觀察到部分外消旋作用(Pierre，M.-C.等，Tetrahedron Letters，3832，5639-5642(1997))。
在文獻(xiàn)中提到了用于氧化官能化的兩種基本方法(Betts，M.J.，Brown，B.R.和Shaw，M.R.，J.Chem.Soc.，C.1178(1969)；Steenkamp，J.A.，F(xiàn)erreira，D.和Roux，D.J.，Tetrahedron Lett.，26，3045-3048(1985))。在較早的方法中，用四乙酸鉛(LTA)的苯溶液處理受保護(hù)的(+)-兒茶素從而生成4β-乙酸基衍生物，該衍生物隨后水解成3，4-二醇。在矢車(chē)菊苷配質(zhì)的仿生合成中，黃烷-3，4-二醇是原始的親電性物質(zhì)。但是在C-5位置具有氧官能團(tuán)的黃烷-3，4-二醇不能從天然源中獲得，因而必須通過(guò)合成得到。因此，前手性芐基位置的氧化官能化以形成3，4-二醇為合成矢車(chē)菊苷配質(zhì)提供了充分的可行性。這個(gè)反應(yīng)的主要缺點(diǎn)是在LTA氧化中乙酸鹽的收率低(30-36％)。C-4位置的氧化官能化的更新的方法依靠使用2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(DDQ)。在這種方法中，用DDQ的甲醇溶液處理受保護(hù)的單體。它可以立體有擇方式在C-4位置引入甲氧基。收率約為40-50％。
存在許多關(guān)于在含水的酸中單體間偶合反應(yīng)和它們的3，4-二醇的報(bào)導(dǎo)。這些方法是不令人滿意的，因?yàn)槭章实汀⑷狈Ｒ恍圆⑶译y以從水介質(zhì)中進(jìn)行純化。Kawamoto，H.，Nakatsubo，F(xiàn).和Murakami，K.，J.of Wood Chem.Tech.，9，35-52(1989)報(bào)導(dǎo)了四氯化鈦(TiCl4)介質(zhì)偶合4-羥基四-O-芐基(+)-兒茶素和5當(dāng)量(eq)的四-O-芐基(+)-兒茶素從而生成4α→8和4β→8二聚體的3∶2混合物。
因此，需要提供大量的結(jié)構(gòu)限定的低聚物用于體外和體內(nèi)評(píng)估的合成方法。這些合成方法可能導(dǎo)致生成多構(gòu)象低聚物，一些與自然界中的相同，其它為稀有或“非天然”型。因此，研究一種能夠大量提供任何所需的矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物的通用的合成方法是有利的。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了一種制備部分受保護(hù)的矢車(chē)菊苷配質(zhì)二聚體的方法。所述方法包括(a)用可除去的保護(hù)基團(tuán)保護(hù)矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體的各個(gè)酚羥基，所述保護(hù)基團(tuán)不使單體的A環(huán)失活，其中所述保護(hù)步驟在非質(zhì)子溶劑中進(jìn)行；(b)通過(guò)采用有機(jī)酸的鉛(IV)鹽引入酸基來(lái)活化步驟(a)的化合物的C-4位置的偶合從而提供一種活化化合物；和(c)在偶合催化劑的存在下，使步驟(b)的活化化合物與未受保護(hù)的矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體偶合從而生成二聚體。
本發(fā)明還提供了一種制備線性矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物的方法。所述方法包括以下步驟(a)制備部分保護(hù)的矢車(chē)菊苷配質(zhì)二聚體，其中用不使受保護(hù)的基體的A環(huán)失活的可除去的保護(hù)基團(tuán)保護(hù)頂部基體(top mer)的酚羥基；(b)采用使掩蔽、受保護(hù)的二聚體的底部基體失活的可除去的掩蔽基團(tuán)掩蔽步驟(a)的底部基體的未受保護(hù)的酚羥基和C-3位置基體的羥基；
(c)使步驟(b)的二聚體的頂部基體去保護(hù)從而提供一種去保護(hù)的、掩蔽的二聚體；(d)用沒(méi)有封端或封端的、受保護(hù)的、活化的單體偶合步驟(c)的二聚體以形成三聚體，其中所述三聚體的頂部基體為受保護(hù)的封端基體或受保護(hù)的沒(méi)有封端基體，并且其中在C-8位置上進(jìn)行偶合；(e)掩蔽步驟(d)的沒(méi)有封端或已封端的三聚體；(f)使步驟(e)的沒(méi)有封端或已封端的、受保護(hù)的、掩蔽的三聚體去保護(hù)從而形成沒(méi)有封端或已封端的掩蔽的三聚體；和(g)任選重復(fù)或交替步驟(a)-(f)從而制備較高級(jí)的低聚物，其中基體數(shù)為4-18。
在下面的示例性的化合物中，P為保護(hù)基團(tuán)，B為封端基團(tuán)，M為掩蔽基團(tuán)。下面的化合物是部分受保護(hù)的矢車(chē)菊苷配質(zhì)二聚體如在上面步驟(a)中形成的二聚體的例子。 下面化合物為在上面步驟(b)中形成的受保護(hù)的掩蔽二聚體的例子。 下面的化合物為在上面步驟(c)中形成的去保護(hù)的掩蔽二聚體的例子。 下面的化合物為受保護(hù)的、掩蔽的、封端的線性三聚體的例子。 或 下面的化合物為步驟(d)中沒(méi)有封端和已封端受保護(hù)的掩蔽的線性三聚體的例子。 或 下面的化合物為步驟(e)中沒(méi)有封端和/或已封端的、去保護(hù)的掩蔽的線性三聚體的例子。 或 下面的化合物為來(lái)自任選重復(fù)或選擇步驟(a)-(f)以制備較高級(jí)低聚物(其中基體數(shù)為4)的化合物的例子。 或 或 或 本發(fā)明也提供了一種制備分支的矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物的方法。所述方法包括以下步驟(a)制備沒(méi)有封端或已封端的、部分受保護(hù)的矢車(chē)菊苷配質(zhì)二聚體，其中采用不使受保護(hù)的基體的A環(huán)失活的可除去的保護(hù)基團(tuán)保護(hù)頂部基體的酚羥基，而底部基體具有游離的酚羥基；(b)使步驟(a)的二聚體與沒(méi)有封端或已封端的、受保護(hù)的、活化的矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體偶合以形成分支的三聚體；(c)將步驟(b)的三聚體去保護(hù)；和(d)任選按順序、交替或者以組合方式實(shí)施以下的一個(gè)步驟以提供具有4-18個(gè)包括(4→8)、(4→6)、(6→4)和/或(8→4)鍵合的基體的矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物。
i使步驟(c)的低聚物與沒(méi)有封端或已封端的、受保護(hù)的矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體進(jìn)行偶合；ii掩蔽步驟(c)的低聚物，使受掩蔽的低聚物去保護(hù)，并使受掩蔽的低聚物與未受保護(hù)或受保護(hù)的、已封端的活化的矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體進(jìn)行偶合。
通過(guò)使二聚體或低聚物，如果需要，使二聚體或低聚物解蔽和/或解封得到游離酚形式的矢車(chē)菊苷配質(zhì)二聚體、線性矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物或分支的矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物。所述二聚體或低聚物可以含有相同或不同的表兒茶素或兒茶素基體。優(yōu)選n為5-12，更優(yōu)選n為5。在線性低聚物中的鍵合為(4→6)、(4→8)和/或(4→6)。在分支的低聚物中的鍵合為(4→6)、(4→8)、(6→4)和/或(8→4)。
所述受保護(hù)的基團(tuán)可為芐基、對(duì)甲氧基芐基、叔丁基或三苯甲基；優(yōu)選芐基。在保護(hù)步驟中使用的非質(zhì)子溶劑如二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺或二甲基亞砜；優(yōu)選二甲基乙酰胺。酸基活化基團(tuán)通常為乙酸基、甲酸基或丙酸基；優(yōu)選乙酸基。使用鉛(IV)鹽如四乙酸鉛、四甲酸鉛或四丙酸鉛實(shí)施所述活化。優(yōu)選還使用與用于制備鉛鹽的相同的有機(jī)酸實(shí)施所述活化步驟。合適的有機(jī)酸包括甲酸、乙酸和丙酸。優(yōu)選用于活化步驟的溶劑為苯。所述封端基團(tuán)為鹵素基團(tuán)，優(yōu)選溴或碘基團(tuán)。采用烷基鋰如叔丁基鋰或正丁基鋰實(shí)施所述解封步驟。通過(guò)堿水解實(shí)施所述解蔽步驟。通過(guò)氫解實(shí)施去保護(hù)步驟。具有下面結(jié)構(gòu)的二重分支的低聚物 可以通過(guò)包括以下步驟的方法制備(a)采用不使單體的A環(huán)失活的第一可除去保護(hù)基團(tuán)來(lái)保護(hù)第一矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體的各個(gè)酚羥基，其中在非質(zhì)子溶劑中實(shí)施保護(hù)步驟以提供一種受保護(hù)的單體；(b)通過(guò)使用有機(jī)酸的鉛鹽引入一個(gè)酸基來(lái)活化步驟(a)的化合物的C-4位置的偶合從而提供活化的受保護(hù)的單體；(c)在偶合催化劑的存在下，采用未受保護(hù)的矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體偶合步驟(b)的化合物從而提供部分保護(hù)的二聚體；
(d)掩蔽步驟(c)的二聚體提供掩蔽的部分保護(hù)的二聚體；(e)使步驟(d)的受掩蔽的、部分保護(hù)的二聚體去保護(hù)以提供一種受掩蔽的二聚體；(f)使步驟(e)的受掩蔽的二聚體與4β-乙酸基保護(hù)的矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體偶合從而生成三聚體；(g)使步驟(f)的三聚體與4β-乙酸基矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體偶合從而生成矢車(chē)菊苷配質(zhì)四聚體；(h)使步驟(g)的四聚體解蔽；和(i)使步驟(h)的四聚體與4β-乙酸基矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體偶合從而生成矢車(chē)菊苷配質(zhì)五聚體。
可以重復(fù)以上至(i)的步驟從而生成含有n個(gè)基體的多重分支的矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物，其中n為6-18的整數(shù)。
本發(fā)明提供了一種制備具有(88)鍵合的矢車(chē)菊苷配質(zhì)二聚體的方法。所述方法包括以下步驟(a)在鈀(o)的存在下使第一8-溴保護(hù)的單體與六烷基二錫烷反應(yīng)從而提供受保護(hù)的單體-8-三烷基錫烷；(b)采用四(三苯基膦)鈀(o)的苯溶液，使步驟(a)的化合物與第二8-溴保護(hù)的單體偶合生成(88)偶合的二聚體；和(c)使步驟(b)的化合物去保護(hù)生成(88)二聚體。
本發(fā)明也提供了一種生成具有(66)鍵合的矢車(chē)菊苷配質(zhì)二聚體的方法。所述方法包括以下步驟(a)在鈀(o)錫的存在下，使第一6-溴保護(hù)的單體與六烷基二錫烷反應(yīng)從而提供受保護(hù)的單體-6-三烷基錫烷；(b)使用四(三苯基膦)鈀(o)的苯溶液，使步驟(a)的化合物與第二6-溴保護(hù)的單體偶合生成(66)偶合的二聚體；和(c)使步驟(b)的化合物去保護(hù)從而生成(66)二聚體。
本發(fā)明也提供了一種生成具有(68)鍵的矢車(chē)菊苷配質(zhì)二聚體的方法。所述方法包括以下步驟
(a)在鈀(o)的存在下，使第一6-溴保護(hù)的單體與六烷基二錫烷反應(yīng)從而提供受保護(hù)的單體-6-三烷基錫烷；(b)使用四(三苯基膦)鈀(o)的苯溶液，使步驟(a)的化合物與第二8-溴保護(hù)的單體偶合生成(68)偶合的二聚體；和(c)使步驟(b)的化合物去保護(hù)從而生成(68)二聚體。
本發(fā)明也提供了一種制備具有(86)鍵合的矢車(chē)菊苷配質(zhì)二聚體的方法。所述方法包括以下步驟(a)在鈀(o)的存在下使第一8-溴保護(hù)的單體與六烷基二錫烷反應(yīng)從而提供一種受保護(hù)的單體-8-三烷基錫烷；(b)使用四(三苯基膦)鈀(o)的苯溶液，使步驟(a)的化合物與第二6-溴保護(hù)的單體偶合生成(86)偶合的二聚體；和(c)使步驟(b)的化合物去保護(hù)生成(86)二聚體。
本發(fā)明的方法與先前制備矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物的方法比較具有重要的優(yōu)點(diǎn)和效率，它們包括更好的收率、更好的選擇性和更容易的產(chǎn)物分離。通過(guò)在二甲基乙酰胺而不是二甲基甲酰胺中實(shí)施保護(hù)步驟，可以更容易地控制酚羥基的部分或全部保護(hù)。
當(dāng)在保護(hù)步驟中采用二甲基乙酰胺作為溶劑時(shí)，本發(fā)明還提供了結(jié)晶的8-溴-四-O-芐基(-)兒茶素。
本發(fā)明的詳細(xì)描述包括矢車(chē)菊苷配質(zhì)的單體具有以下結(jié)構(gòu)
矢車(chē)菊苷配質(zhì)包括那些存在于可可豆中的矢車(chē)菊苷配質(zhì)，所述可可豆得自可可(Theobroma cacao)和各種相關(guān)可可種類以及Herrania屬和它們的屬間和屬內(nèi)基因雜交體(inter-and intra-genetic crosses)。
含有矢車(chē)菊苷配質(zhì)的單體包括(+)-兒茶素、(-)-表兒茶素和它們各自的表異構(gòu)物(如(-)-兒茶素和(+)-表兒茶素)。
具有下面結(jié)構(gòu)的合成線性和/或分支的低聚物為那些可以通過(guò)上面方法制備的物質(zhì)的例子。
線性低聚物，其中n為0-16的整數(shù)， 分支的低聚物，式中A和B獨(dú)立為1-15的低聚物，最終低聚物的總數(shù)為3-18。 在低聚物中n為2-18，優(yōu)選3-12，更優(yōu)選5-12，最優(yōu)選5的整數(shù)。所述低聚物具有(4→6)和/或(4→8)的黃烷間鍵合。由本發(fā)明方法制備的低聚物可以由上面結(jié)構(gòu)式代表。對(duì)于線性低聚物而言，當(dāng)x為0時(shí)，所述低聚物稱為“二聚體”；當(dāng)x為1時(shí)，所述低聚物稱為“三聚體”；當(dāng)x為2時(shí)，所述低聚物稱為“四聚體”；當(dāng)x為3時(shí)，所述低聚物稱為“五聚體”；類似的命名可用以表述x高達(dá)并且包括16和更高的低聚物，這樣當(dāng)x為16時(shí)，所述低聚物稱為“十八聚體”。對(duì)于分支的低聚物而言，當(dāng)A或B為1時(shí)，所述低聚物稱為“三聚體”；采用與用于線性低聚物的那些描述類似的命名。
低聚物的立體異構(gòu)體包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。單體(包括低聚物)的立體化學(xué)可根據(jù)它們的相對(duì)立體化學(xué)，即“α/β”或“順式/反式”進(jìn)行描述，或根據(jù)它們的絕對(duì)立體化學(xué)，即“R/S”進(jìn)行描述。術(shù)語(yǔ)“α”表示取代基定向于黃烷環(huán)平面的下面，而術(shù)語(yǔ)“β”表示取代基定向于黃烷環(huán)平面的上面。術(shù)語(yǔ)“順式”表示兩個(gè)取代基定向于環(huán)的相同面上，而術(shù)語(yǔ)“反式”表示兩個(gè)取代基定向于環(huán)的相反的面上。術(shù)語(yǔ)“R”和“S”用于指定圍繞立體中心(stereogenic center)的取代基的排列(基于直接與立體中心連接的原子的原子序數(shù)對(duì)各基團(tuán)進(jìn)行排列的順序(CIP規(guī)則))。
在黃烷3-醇單體的C4位和相鄰單體的C-6和C-8位上存在多重立體化學(xué)鍵合。對(duì)于線性低聚物而言，單體單元之間的立體化學(xué)鍵合在此表示為(4α→6)或(4β→6)或(4α→8)或(4β→8)。對(duì)于分支或接合單體的鍵合而言，立體化學(xué)鍵合表示為(6→4α)或(6→4β)或(8→4α)或(8→4β)。當(dāng)(+)-兒茶素(在此表示為C)與另一個(gè)C相連或與(-)-表兒茶素(在此表示為EC)相連時(shí)，所述鍵合最好為(4α→6)或(4α→8)。當(dāng)EC與C或另一個(gè)EC相連時(shí)，所述鍵合最好為(4β→6)或(4β→8)。
線性和分支的低聚物可以通過(guò)采用保護(hù)、活化、偶合、掩蔽、封端、去保護(hù)、解蔽和解封步驟的本發(fā)明方法制備。在各個(gè)反應(yīng)序列中，可用以制備線性或分支低聚物的單體包括相同或不同的單體?？梢酝ㄟ^(guò)重復(fù)二聚體、三聚體等與用于上面步驟的其它單體的偶合制備較高級(jí)的低聚物。
可以根據(jù)本發(fā)明方法合成的化合物的例子包括二聚體；EC-(4β→8)-EC和EC-(4β→6)-EC，其中優(yōu)選EC-(4β→8)-EC；三聚體[EC-(4β→8)]2-EC、[EC-(4β→8)]2-C和[EC-(4β→6)]2-EC，其中優(yōu)選[EC-(4β→8)]2-EC；四聚體[EC-(4β→8)]3-EC、[EC-(4β→8)]3-C和[EC-(4β→8)]2-EC-(4β→6)-EC，其中優(yōu)選[EC-(4β→8)]3-EC；五聚體[EC-(4β→8)]4-EC、[EC-(4β→8)]3-EC-(4β→6)-EC、[EC-(4β→8)]3-EC-(4β→8)-C和[EC-(4β→8)]3-(4β→6)-C，其中優(yōu)選[EC-(4β→8)]4-EC。分支的三聚體的例子為
分支的四聚體的例子為 分支五聚體的例子為 可以合成的其它化合物包括以下物質(zhì)(i)六聚體，其中一個(gè)單體(C或EC)與上面所列的五聚體化合物，如[EC-(4β→8)]5-EC、[EC-(4β→8)]4-EC-(4β→6)-EC、[EC-(4β→8)]4-EC-(4β→6)-C和[EC-(4β→8)]4-EC-(4β→6)-C相連；其中優(yōu)選[EC-(4β→8)]5-EC，分支六聚體的一個(gè)例子為 (ii)七聚體，其中將任意兩個(gè)單體(C和/或EC)的組合與上面的一個(gè)五聚體，如[EC-(4β→8)]6-EC、[EC-(4β→8)]5-EC-(4β→6)-EC、[EC-(4β→8)]5-EC-(4β→8)-C和[EC-(4β→8)]5-EC-(4β→6)-C相連；其中優(yōu)選[EC-(4β→8)]6-EC，分支七聚體的一個(gè)例子為 (iii)八聚體，其中任何三個(gè)單體(C和/或EC)的組合與上面的一個(gè)五聚體，如[EC-(4β→8)]7-EC、[EC-(4β→8)]6-EC-(4β→6)-EC、[EC-(4β→8)]6-EC-(4β→8)-C和[EC-(4β→8)]6-EC-(4β→6)-C相連；其中優(yōu)選[EC-(4β→8)]7-EC，分支八聚體的一個(gè)例子為 (iv)九聚體，其中任何四個(gè)單體(C和/或EC)的組合與上面的一個(gè)五聚體，如[EC-(4β→8)]8-EC、[EC-(4β→8)]7-EC-(4β→6)-EC、[EC-(4β→8)]7-EC-(4β→8)-C和[EC-(4β→8)]7-EC-(4β→6)-C相連；其中優(yōu)選[EC-(4β→8)]8-EC，分支九聚體的一個(gè)例子為 (v)十聚體，其中任何五個(gè)單體(C和/或EC)的組合與上面的一個(gè)五聚體，如[EC-(4β→8)]9-EC、[EC-(4β→8)]8-EC-(4β→6)-EC、[EC-(4β→8)]8-EC-(4β→8)-C和[EC-(4β→8)]8-EC-(4β→6)-C相連；其中優(yōu)選[EC-(4β→8)]9-EC，分支十聚體的一個(gè)例子為 (vi)十一聚體，其中任何六個(gè)單體(C和/或EC)的組合與上面的一個(gè)五聚體，如[EC-(4β→8)]10-EC、[EC-(4β→8)]9-EC-(4β→6)-EC、[EC-(4β→8)]9-EC-(4β→8)-C和[EC-(4β→8)]9-EC-(4β→6)-C相連；其中優(yōu)選[EC-(4β→8)]10-EC，分支十一聚體的一個(gè)例子為 (vii)十二聚體，其中任何七個(gè)單體(C和/或EC)的組合與上面的一個(gè)五聚體，如[EC-(4β→8)]11-EC、[EC-(4β→8)]10-EC-(4β→6)-EC、[EC-(4β→8)]10-EC-(4β→8)-C和[EC-(4β→8)]10-EC-(4β→6)-C相連；其中優(yōu)選[EC-(4β→8)]11-EC，分支十二聚體的一個(gè)例子為 上述低聚物為舉例說(shuō)明，提供用于說(shuō)明可以通過(guò)本發(fā)明方法制備的化合物類型，而不是窮舉屬于本發(fā)明范圍的化合物?？梢酝ㄟ^(guò)公開(kāi)于1976年9月10授權(quán)予Romanczyk等人的美國(guó)專利5,554,645和1998年1月27日授權(quán)予Romanczyk等人的美國(guó)專利5,712,305中的方法進(jìn)行分離和純化。
本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到由于空間位阻，尤其如果低聚物被取代(如用芐基取代)，低聚物中許多鍵的旋轉(zhuǎn)受到限制。因此，通過(guò)本發(fā)明制備的化合物的所有可能的配向異構(gòu)體(regioisomers)和立體異構(gòu)體均屬于本發(fā)明范圍。
定義此處所用的“保護(hù)基團(tuán)”是一種可以除去的基團(tuán)，其置換在矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體或低聚物中的酚羥基中的氫。所述基團(tuán)可在不影響矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物的條件下除去。
此處所用的“封端基團(tuán)”是一種可以除去的基團(tuán)，其通過(guò)封端矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物的A環(huán)的C-8位置引導(dǎo)偶合，由此引導(dǎo)在A環(huán)C-6位置與另一個(gè)矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體進(jìn)行偶合。所述基團(tuán)可在不影響矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物的條件下除去。
此處所用“掩蔽基團(tuán)”是一種在C-4位置上的可除去基團(tuán)，其在二聚體較高級(jí)的低聚物與另一個(gè)矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體偶合時(shí)掩蔽矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體或較高級(jí)低聚物的未受保護(hù)的酚羥基和C-3羥基。所述基團(tuán)可在不影響矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物的條件下除去。
此處所用“活化基團(tuán)”為活化矢車(chē)菊苷配質(zhì)二聚體或低聚物的C環(huán)的C-4位置的酸基，并且導(dǎo)致在該位置與另一個(gè)矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體或低聚物的偶合。
此處所用術(shù)語(yǔ)“組合的”是指能夠制備任何給定的矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物的可能的區(qū)域化學(xué)鍵合。例如，線性矢車(chē)菊苷配質(zhì)四聚體可以包括在包括所述四聚體的單體之間的(4→8)和(4→6)鍵合。對(duì)于合成而言，這些鍵合導(dǎo)致將具有不同生物活性的化合物隔離開(kāi)。對(duì)于結(jié)構(gòu)-活性研究而言，最好提供一系列的這些低聚物以確定區(qū)域化學(xué)鍵對(duì)生物活性的重要意義。對(duì)于線性四聚體而言，可能的鍵合如下
這就要求一種方法來(lái)制備8個(gè)不同的四聚體，所述四聚體各自需要不同的制備步驟。
保護(hù)基團(tuán)適用于本發(fā)明的保護(hù)基團(tuán)為在如下所述的C-4活化和偶合反應(yīng)中用于活化矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體的給電子部分。在C-4活化反應(yīng)中，給電子的酚保護(hù)基團(tuán)具有穩(wěn)定功能，并由此輔助受保護(hù)的單體與鉛(IV)鹽的氧化形成的C-4芐基陽(yáng)離子中間體的形成。在偶合反應(yīng)中，即親電的芳族取代反應(yīng)中，給電子的酚保護(hù)基團(tuán)同樣具有穩(wěn)定功能，由此輔助通過(guò)路易斯酸催化劑處理C-4酸基取代的矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體(一種活化的單體)形成的C-4芐基陽(yáng)離子的形成。在偶合反應(yīng)中，給電子的酚保護(hù)基團(tuán)還具有增大在所述反應(yīng)中可能存在的不同芳族部分之間的活性差異的功能。如下所述，在偶合反應(yīng)中，矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物的未受保護(hù)的矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體或選擇的未受保護(hù)(去保護(hù))的單體單元用作親核試劑；在采用路易斯酸的處理中，C-4酸基取代的、受保護(hù)的矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體用作親電試劑(nucleophiles)。未受保護(hù)的矢車(chē)菊苷配質(zhì)用作親核試劑，因?yàn)樗鼈冚^受保護(hù)的矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體具有較高的電子密度，即親核性。任何在受保護(hù)的矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體之間的自偶合反應(yīng)受到限制，這是因?yàn)槲词鼙Ｗo(hù)的矢車(chē)菊苷配質(zhì)具有較高的親核性。
在各種保護(hù)基團(tuán)中，優(yōu)選芐基，因?yàn)樗鼈冊(cè)跍睾蜅l件下如氫解中更容易被除去。芐基化(除了如對(duì)硝基芐基化外)的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)在于當(dāng)矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體或低聚物用作親核試劑時(shí)不會(huì)引起芳環(huán)失去對(duì)偶合的活性。令人驚奇和非常出乎意料的是，在保護(hù)步驟中改變所用的非質(zhì)子有機(jī)溶劑，將二甲基甲酰胺(DMF)改為二甲基乙酰胺(DMA)導(dǎo)致提高了受保護(hù)低聚物的收率，也許是因?yàn)镈MA具有稍大的介電常數(shù)可能有利于O-烷基化的事實(shí)。所述收率至少為約50％，通常約60％至約70％。另外，不需要額外的清理程序，產(chǎn)品容易結(jié)晶。實(shí)施例1和2描述了制備四-O-芐基-(+)-兒茶素和四-O-芐基-(-)-表兒茶素的具體條件。對(duì)溶劑體系的進(jìn)一步研究表明，由于在優(yōu)選的溶劑體系中的溶解性，碳酸鉀(K2CO3)優(yōu)于碳酸鈉(Na2CO3)。發(fā)現(xiàn)碘化鉀可以與芐基溴一起按催化量使用。
(-)-表兒茶素的其它有用的保護(hù)基團(tuán)為對(duì)甲氧基芐基(PMB)基團(tuán)。如果選擇PMB作為制備部分保護(hù)的矢車(chē)菊苷配質(zhì)二聚體的保護(hù)基團(tuán)，那么所述保護(hù)步驟還包括乙?；杠?chē)菊苷配質(zhì)單體，然后用氫化鈉、PMB-氯化物和DMF的水溶液進(jìn)行處理以除去酚乙酸根，從而用PMB進(jìn)行酚鹽離子的烷基化反應(yīng)。當(dāng)在保護(hù)步驟中采用DMA作為溶劑時(shí)，不應(yīng)采用PMB基團(tuán)。可采用Kawamoto，H.，Nakatsubo，F(xiàn).和Murakami，K.在Synth.Commun.，26，531-534(1996)中所述的方法制備四-O-PMB-(-)-表兒茶素。用足以產(chǎn)生等價(jià)量的堿以除去后面的酚乙酸根(4eq)的氫化鈉(NaH)、對(duì)甲氧基芐基氯(PMBCl)、二甲基甲酰胺(DMF)和水處理，首先制備五乙?；?-)-表兒茶素。用PMBCl對(duì)所得的酚鹽離子進(jìn)行快速烷基化作用。實(shí)施例4和5描述了制備五乙?；?+)-兒茶素和四-O-對(duì)甲氧基芐基-3-乙?；?(-)表兒茶素所用的具體條件。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到可以使用其它保護(hù)基團(tuán)，如叔丁基、三苯甲基和2，4-二甲氧基芐基。
C-4活化作用將LTA反應(yīng)條件改為1∶1的苯∶乙酸最終可以獲得最高的收率(60-70％)和立體有擇性的4β產(chǎn)物。其它有用的溶劑混合物包括與有機(jī)酸摻混的苯、甲苯、氯苯、環(huán)己烷、庚烷、四氯化碳或其混合物，其中所述有機(jī)酸與用于制備用于活化反應(yīng)的鉛(IV)鹽的有機(jī)酸相同。
在活化步驟中采用有機(jī)酸的鉛鹽如四甲酸鉛、四丙酸鉛等。優(yōu)選相應(yīng)有機(jī)酸即甲酸和丙酸結(jié)合鉛鹽一起使用以提高收率。優(yōu)選的鹽為乙酸鉛，優(yōu)選的組合為四乙酸鉛和乙酸。
實(shí)施例6-9描述了制備4β-乙酸基四-O-芐基-(-)-表兒茶素、4β-羥基四-O-芐基-(+)-兒茶素、4β-羥基四-O-芐基-(-)-表兒茶素和4β-乙酸基四-O-芐基-(+)-兒茶素的具體條件。
掩蔽基團(tuán)適用于本發(fā)明的掩蔽基團(tuán)為在下面所述的親電芳族取代偶合反應(yīng)中使矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物的選擇單體單元失活的吸電子基團(tuán)。當(dāng)矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物用于所述偶合反應(yīng)中時(shí)，活化單體必需不任意地與低聚物的不同的單體單元進(jìn)行反應(yīng)。使用掩蔽基團(tuán)以增大所述低聚物不同單體單元之間的活性差異。使用吸電子部分作為掩蔽基團(tuán)使帶有所述掩蔽基團(tuán)的低聚物的單體單元對(duì)活化的、保護(hù)的單體的偶合失活。因此，在本發(fā)明方法中，由于低聚物的未受保護(hù)的單體單元的高活性(親核性)和掩蔽單體單元的低活性，活化的單體選擇性地與部分掩蔽的低聚物的未受保護(hù)的單體單元反應(yīng)。
用于本發(fā)明方法的掩蔽基團(tuán)包括酰基如乙?；捅；?、芳?；绫郊柞；?；氨基甲酸根如N-苯基氨基甲酸根；碳酸根如甲基碳酸根以及芳基磺?；?，4-二硝基苯磺?；?。優(yōu)選掩蔽基團(tuán)為乙酰基。可以采用任何常規(guī)技術(shù)，用如上所述的合適掩蔽基團(tuán)置換羥基中的氫來(lái)完成矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物的未受保護(hù)的酚羥基和C-3羥基的掩蔽。所用試劑取決于所導(dǎo)入的掩蔽基團(tuán)并且為本領(lǐng)域所熟知。
偶合反應(yīng)在本發(fā)明的方法中，優(yōu)選使用偶合催化劑作為路易斯酸(如溴化鋰)。也優(yōu)選使用4β-乙酸基衍生物作為親電試劑。偶合反應(yīng)的選擇性由此獲得明顯提高。使用鋰離子(Li+)作為抗衡離子，相對(duì)于C-烷基化作用來(lái)說(shuō)其更有利于O-烷基化作用。
將甲醇加入到回流的4β-乙酸基四-O-芐基-(+)-兒茶素和溴化鋰的二氯甲烷溶液中時(shí)，獲得收率顯著提高的4β-甲氧基四-O-芐基-(+)-兒茶素(參見(jiàn)實(shí)施例10)。基于H-3和H-4之間3.5Hz的偶合常數(shù)(表明為順式關(guān)系)來(lái)指定β立體化學(xué)。在這個(gè)反應(yīng)中，乙酸基被鹵素負(fù)離子置換，該鹵素隨后與充當(dāng)親核試劑的甲醇反應(yīng)，由此推動(dòng)所述反應(yīng)至平衡。
沒(méi)有意料的是使用溴化鋰作為路易斯酸會(huì)推動(dòng)4β-乙酸基四-O-芐基單體和充當(dāng)親核試劑的另一個(gè)單體之間的偶合反應(yīng)，由此免去了制備單體的3，4-二醇的步驟。
為了測(cè)試這個(gè)出乎意料的發(fā)現(xiàn)并且深入了解這個(gè)反應(yīng)的潛在應(yīng)用性，在如實(shí)施例11所述的溴化鋰的存在下，使4β-乙酸基四-O-芐基-(+)-兒茶素與(-)-表兒茶素反應(yīng)。所得的二聚體的純度為90％，收率為62％，1H NMR表明在δ5.85的單峰表示1H，在δ6.19和6.16處的一對(duì)雙峰各自結(jié)合至具有典型1.5Hz的m-偶合的1H中，這表明只形成一種異構(gòu)體。用乙酸酐/吡啶處理所述二聚體形成六乙酸酯，如所期望的那樣，C-6’氫的單峰漂移至低場(chǎng)δ6.52。C-4氫的雙峰的偶合常數(shù)為9.6Hz，表明為α構(gòu)型。用氫/鈀(o)(H2/Pd)使部分芐基化的二聚體去保護(hù)從而獲得二聚體(+)-兒茶素-(4α→8)-(-)-表兒茶素(參見(jiàn)實(shí)施例12)。HPLC分析(

圖1B)表明除了上述二聚體外，還存在未知的二聚體(13.5％)以及微量的三聚體和四聚體。通過(guò)制備八乙酸酯并且將1H NMR與文獻(xiàn)資料(Kawamoto，H.，Nakatsubo，F(xiàn).和Murakami，K.，J.Wood Chem.Tech.，9，35-92(1989))進(jìn)行比較從而對(duì)二聚體的構(gòu)象進(jìn)行最后確定。
為了研究使用溴化鋰偶合反應(yīng)的令人驚訝的結(jié)論，如實(shí)施例15(參考實(shí)施例17的兒茶素二聚體)所述實(shí)施4β-乙酸基四-O-芐基-(-)-表兒茶素和(-)-表兒茶素之間的偶合。在氫解后獲得二聚體(-)-表兒茶素-(4β→8)-表兒茶素(實(shí)施例16)。如下表如示，在這個(gè)反應(yīng)中產(chǎn)生了顯著量的三聚體和四聚體。
表1-溴化鋰偶合反應(yīng)單體1 單體2 ％二聚體*％三聚體*％四聚體*4β-乙酸基四-O-芐基(-)-表兒茶素 71.4，13.5 3.8 4.7(+)-兒茶素4β-乙酸基四-O-芐基(-)-表兒茶素 44.7 16.8，9.34.5，3.3(-)-表兒茶素4β-乙酸基四-O-芐基(+)-兒茶素68.0**-- --(+)-兒茶素*HPLC-MS分析負(fù)離子模式(NH4OH)@0.04mL/min；碎片儀(fragmentor)75；Vcap3000。(也可參見(jiàn)圖1A和1B)。
**基于硅膠層析的收率。
該表表明只有一種主要的二聚體來(lái)源于該反應(yīng)。控制反應(yīng)時(shí)間和反應(yīng)單體的量可以減少較高級(jí)低聚物的存在。另外，在溴化鋰偶合反應(yīng)中觀察到四芐基-單體不是作為親核試劑。必需有游離酚羥基以提高芳環(huán)對(duì)偶合的活性。這是重要的，因?yàn)樗峁┮环N區(qū)分能夠參與偶合的環(huán)和不能夠參與偶合的環(huán)的方法。
通過(guò)使用碘化鋰(LiI)作為路易斯酸還提高了偶合反應(yīng)收率(參見(jiàn)實(shí)施例20)。另外，采用層析法，僅在18小時(shí)內(nèi)完成4β-乙酸基四-O-芐基-(+)-兒茶素和(-)-表兒茶素之間的反應(yīng)，收率為85％。在實(shí)施例11(使用溴化鋰)中，24小時(shí)后的收率僅為62％。
如下面的反應(yīng)式所示，這個(gè)偶合方法可以用于除二聚體外的較高級(jí)低聚物。 由于A環(huán)中的酚羥基被芐基化，所以只有D環(huán)的C-6’位置發(fā)生偶合并形成分支的三聚體。通過(guò)采用溴化鋰的THF-二氯甲烷溶液，使四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-(-)-表兒茶素(參見(jiàn)實(shí)施例11)與4β-乙酸基四-O-芐基-(+)-兒茶素(參見(jiàn)實(shí)施例6)進(jìn)行反應(yīng)成功進(jìn)行測(cè)試。由薄層層析(TLC)分離出斑點(diǎn)，其中1H NMR太復(fù)雜難以解釋。但是質(zhì)譜分析表明m/z 1861處的分子離子峰對(duì)應(yīng)所需要的結(jié)構(gòu)(其中一個(gè)羥基沒(méi)有被乙?；?。重復(fù)該反應(yīng)并分離出相同的產(chǎn)物。質(zhì)譜清楚表明形成了這種分支三聚體，其中觀察到在m/z 1610的(M+Na)+和m/z1588的(M+H)+，其為典型的逆狄爾斯-阿德?tīng)柗至阉槠Ｔ谳^長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行第三次重復(fù)的反應(yīng)，質(zhì)譜分析的結(jié)果再一次與分支的三聚體一致，所述三聚體的暫時(shí)性(tentative)結(jié)構(gòu)確定為四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-(-)-表兒茶素-(6→4α)-四-O-芐基-(+)-兒茶素(參見(jiàn)實(shí)施例24)。
對(duì)于合成線性低聚物而言，研究了能夠參與偶合反應(yīng)的環(huán)的選擇性活化-失活的方法。在這種情況下，部分芐基化的二聚體被乙?；?，隨后氫解，用A/B環(huán)中的游離酚羥基(OH)和D/E環(huán)中的乙酸根制備二聚體。吸電子的乙?；笵環(huán)失活，并由此在A環(huán)的C-8位置區(qū)域選擇性地發(fā)生與4β-乙酸基單體的偶合。所得的三聚體可以進(jìn)行相同的乙?；磻?yīng)和去芐基化反應(yīng)，然后與另一個(gè)4β-乙酸基單體偶合從而生成四聚體。重復(fù)這些步驟獲得增大尺寸的低聚物。
由對(duì)實(shí)施例11的部分保護(hù)的二聚體乙?；?參見(jiàn)實(shí)施例13)，然后氫解(參見(jiàn)實(shí)施例14)進(jìn)一步證實(shí)了本發(fā)明。觀察到NMR雙重峰，表明存在旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體。在較高溫度(313°K)下的NMR譜簡(jiǎn)化了所述光譜，確認(rèn)了旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的存在。有趣的是，在乙酸乙酯中的氫解可以分離單-O-芐基-3-乙酰基-(+)-兒茶素(4α→8)-五乙?；?(-)-表兒茶素，該物質(zhì)的NMR譜示于圖7。當(dāng)氫解這種低聚物時(shí)，所述產(chǎn)物與前面獲得的相同。使3-乙?；?(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙?；?(-)-表兒茶素(參見(jiàn)實(shí)施例14)與4β-乙酸基四-O-芐基-(-)-兒茶素(參見(jiàn)實(shí)施例16)獲得所要的產(chǎn)物，即四-O-芐基-(+)-兒茶素(4α→8)-3-乙?；?+)-兒茶素(4α→8)-五乙?；?-)-表兒茶素(參見(jiàn)實(shí)施例20)。質(zhì)譜(APCI，負(fù)離子模式)表明在m/z 1479.6存在強(qiáng)的分子離子峰，其與C85H74O24的計(jì)算質(zhì)量相同(1479.5)。m/z 1437、1389和1347處的質(zhì)量碎片與從母化合物上脫落下來(lái)的乙酰基、芐基和乙?；?芐基一致。FAB MS表明在m/z 1482(M+H)+處的分子離子峰和碎片模式與四-O-芐基-3-乙?；?(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙?；?(-)-表兒茶素的一致。
同樣，通過(guò)制備四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-3-乙?；?(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙酰基-(-)-表兒茶素(參見(jiàn)實(shí)施例20)形成線性四聚體，將上述表兒茶素乙?；癁樗?O-芐基-3-乙?；?(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙?；?(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙酰基-(-)-表兒茶素(參見(jiàn)實(shí)施例21)。氫解上述化合物(參見(jiàn)實(shí)施例22)生成3-乙?；?(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙?；?(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙?；?(-)-表兒茶素。將3-乙?；?(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙酰基-(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙?；?(-)-表兒茶素與4β-乙酸基四-O-芐基-(+)-兒茶素偶合(參見(jiàn)實(shí)施例6)導(dǎo)致形成四聚體四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-3-乙酰基五乙?；?(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙?；?(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙酰基-(-)-表兒茶素(參見(jiàn)實(shí)施例23)。FAB質(zhì)譜表明m/z 1978處的分子離子峰與所述結(jié)構(gòu)一致。
還研究出采用芐基原位置換酚乙酸根的方法。采用實(shí)施例18中規(guī)定的條件，在3-乙酰基-四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙?；?(-)-表兒茶素(參見(jiàn)實(shí)施例13)上實(shí)施乙酰基對(duì)芐基的原位置換，從而制備3-乙?；?四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-3-乙?；?四-O-芐基-(-)-表兒茶素。氫解(參見(jiàn)實(shí)施例19)提供回收四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-四-O-芐基-(-)-表兒茶素，隨后將它氫解成游離的二聚體，從而證明這種方法的可行性。
封端基團(tuán)在上面步驟的基礎(chǔ)上，開(kāi)發(fā)出單體之間的(4→6)黃烷間鍵合的合成方法。例如，采用前述的DMA溶劑體系可以對(duì)單體進(jìn)行高收率地芐基化作用。所述芐基化的單體可以在C-8位溴化以提供8-溴-四-O-芐基單體(如實(shí)施例25所示)和幾個(gè)變體(實(shí)施例26和27所示)，實(shí)施例28描述了8-溴-四-O-(-)-表兒茶素的絕對(duì)立體化學(xué)。使這些衍生物去保護(hù)導(dǎo)致制備8-溴單體。所得的溴衍生物有效地屏蔽在C-8位的偶合，由此引導(dǎo)在C-6位的偶合。在溴化鋰方法的條件下使8-溴單體與4β-乙酸基-四-O-芐基-單體偶合導(dǎo)致形成(4→6)二聚體。典型反應(yīng)方案如下所示。 在低溫(-78℃)的溶液中采用合適的烷基鋰化合物如正丁基鋰或叔丁基鋰，然后用弱的質(zhì)子酸(如水)使所得的二聚體質(zhì)子化實(shí)施去溴化(即解封)。通過(guò)采用本發(fā)明的其它步驟，(4→6)二聚體可以擴(kuò)展成更大的低聚物尺寸，其包括了上面所述的區(qū)域和立體化學(xué)的各種變體。
去保護(hù)和解蔽在去保護(hù)中使用的試劑將取決于待除去的基團(tuán)。例如，在除去芐基保護(hù)基團(tuán)時(shí)，采用實(shí)施例12、16和22中的所描述的條件實(shí)施氫解。在除去掩蔽基團(tuán)時(shí)，采用實(shí)施例5和18中所描述的條件實(shí)施加堿水解(hudrolysis)。
或者，可以采用商品脂酶將受保護(hù)的低聚物酶解去乙酰基化?？梢圆捎萌魏纬Ｒ?guī)技術(shù)完成保護(hù)基團(tuán)和掩蔽基團(tuán)的去除，條件是所述技術(shù)對(duì)矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物沒(méi)有不利影響。
本發(fā)明的化合物可采用本發(fā)明方法生成的新化合物，包括由下面結(jié)構(gòu)代表的新的多重分支，優(yōu)選二重分支的矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物。 可以生成的其它化合物包括含有(88)、(68)和(66)鍵合的矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物，其中代表性結(jié)構(gòu)如下所示。具有(88)鍵合的矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物 具有(66)鍵合的矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物 具有(86)鍵合的矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物 可以擴(kuò)展在上面封端基團(tuán)部分所描述的步驟以生成含有(66)、(68)、(88)黃烷間鍵合的矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物。這些化合物可以由8-溴-或6-溴-單體中間體獲得。通過(guò)Suzuki偶合或Stille反應(yīng)，將這些化合物與由相同的鹵化中間體獲得的芳基硼化物或芳基錫烷偶合從而獲得所需要的低聚體的鍵合(Suzuki，A.，Pure Appl.Chem.57，11749-11758(1985)，Stille，J.K.，Agnew，Chem.Internal.Ed.Engl.，25，508-524(1986))。
矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物的應(yīng)用所述低聚物具有相同的應(yīng)用，并且可以如1996年9月10授權(quán)予Romanczyk等人的美國(guó)專利5,554,645和1998年1月27日授權(quán)予Romanczyk等人的美國(guó)專利5,712,305中所描述的相同方法進(jìn)行配制、純化和給藥。這些應(yīng)用包括用作抗瘤劑、抗癌藥、抗腫瘤藥、抗氧化劑、DNA拓?fù)洚悩?gòu)體抑制劑、環(huán)加氧酶和脂氧化酶調(diào)制劑、一氧化氮或一氧化氮合酶調(diào)制劑、非甾族(steriodal)消炎藥、編程性細(xì)胞死亡調(diào)制劑(apoptosis modulators)、血小板凝集調(diào)制劑、血液或體內(nèi)調(diào)制劑、抗菌劑以及氧化性DNA損傷的抑制劑。
實(shí)施例在下面的實(shí)施例中，(+)-兒茶素和(-)-表兒茶素為用以說(shuō)明本發(fā)明的方法并且不用于限制本發(fā)明的示例性的矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體。這些單體可以由商業(yè)來(lái)源獲得或者由天然來(lái)源分離和純化獲得，這些天然來(lái)源如可可(Thebroma Cacao)的種子、相關(guān)的物種、Herrania屬和它們屬間或?qū)賰?nèi)的雜交體。除非另有特別的說(shuō)明，否則在實(shí)施例中制備的化合物的純度為85％或更高。
實(shí)施例1四-O-芐基-(+)-兒茶素的制備往(+)-兒茶素(580mg，2mmol)的DMA溶液(15mL)中加入芐基溴(960μL，4eq)和K2CO3(1.7g，6eq)并在氬氣和室溫下攪拌所述混合物48小時(shí)。然后使所述混合物在乙酸乙酯和水中(各自50mL)分配。用水(3×50mL)洗滌有機(jī)相，然后用50mL飽和的氯化鈉進(jìn)行洗滌。除去溶劑獲得粘稠的殘余物，通過(guò)在50mL的二氯甲烷∶甲醇((9∶1，體積/體積)中結(jié)晶分離，由所述殘余物獲得題述化合物，得到880mg的灰白色的晶體，收率為68％。1H NMR(CDCl3)δH7.44-7.24(20H，m，Ar-H)、7.0(1H，s，H-2’)、6.94(2H，s，H-5’，H-6’)、6.25、6.19(2x1H，2xd，J＝2.0Hz，H-6，H-8)、5.16(4H，s，CH2Ph)、5.0、4.97(2x2H，2xs，CH2Ph)、4.61(1H，d，J＝8.2Hz，H-2)、3.98(1H，m，H-3)、3.10(1H，dd，J＝16.5Hz，H-4α)、2.63(1H，dd，J＝8.9，16.5Hz，H-4β)。
實(shí)施例2四-O-芐基-(-)-表兒茶素的制備采用與實(shí)施例1所描述的相同方法制備題述化合物，不同之處在于本實(shí)施例使用(-)-表兒茶素代替(+)-兒茶素從而提供893mg的灰白色的晶體，收率為69％。1H NMR(CDCl3)δH7.43-7.30(20H，m，Ar-H)、7.13(1H，s，H-2’)、6.96(2H，s，H-5’，H-6’)、6.26(2H，m，H-6，H-8)、5.18、5.16(2x2H，s，CH2Ph)、5.01、4.99(2x2H，2xs，CH2Ph)、4.90(1H，s，H-2)、4.19(1H，bm，H-3)、2.45(2H，m，H-4)、1.64(1H，d，J＝3.8Hz，OH)。
實(shí)施例3五乙?；?(-)-表兒茶素的制備將500mg的(-)-表兒茶素(1.6mmol)溶于5mL冷(0℃)的無(wú)水吡啶中。加入2mL的乙酸酐，在氬氣氛圍中攪拌所述溶液18小時(shí)。所述溶液在50mL乙酸乙酯∶50mL的1N HCl中進(jìn)行分配，有機(jī)相用1N HCl進(jìn)行洗滌(3x50mL)，然后是50mL水和50mL飽和的氯化鈉洗滌。經(jīng)過(guò)洗滌的有機(jī)層采用MgSO4干燥，過(guò)濾并干燥以獲得粘稠的油狀產(chǎn)物，所述產(chǎn)物在加入100mL的己烷后固化從而提供720mg的產(chǎn)物，收率為90％。1H NMR(CDCl3)δH7.36(1H，d，J＝2Hz，H-2’)、7.27(1H，dd，J＝2.0，8.4Hz，H-6’)、7.20(1H，d，J＝8.4Hz，H-5’)、6.67(1H，d，J＝2.3Hz，H-6或H-8)、6.56(1H，d，J＝2.3Hz，H-8或H-6)、5.38(1H，m，H-3)、5.11(1H，bs，H-2)、2.98(1H，dd，J＝4.4，17.8Hz，H-4)、2.87(1H，dd，J＝2，17.8Hz，H-4)、2.299、2.297、2.295、2.282、1.920(5x3H，5xs，5xCOCH3)。
實(shí)施例4五乙酰基(+)-兒茶素的制備采用與實(shí)施例3所描述的相同方法制備題述化合物，不同之處在于本實(shí)施例使用(+)-兒茶素代替(-)-表兒茶素從而提供720mg的產(chǎn)物，收率為90％。1H NMR(CDCl3)δH7.16(1H，d，J＝2Hz，H-2’)、7.26(1H，dd，J＝2.0，8.4Hz，H-6’)、7.19(1H，d，J＝8.4Hz，H-5’)、6.66(1H，d，J＝2.3Hz，H-6或H-8)、6.59(1H，d，J＝2.3Hz，H-8或H-6)、5.25(1H，m，H-3)、5.15(1H，d，J＝6.1Hz H-2)、2.87(1H，dd，J＝5.1，16.8Hz，H-4)、2.63(1H，dd，J＝6.4，16.8Hz，H-4)、2.290、2.286、2.279、2.051、2.006(5x3H，5xs，5xCOCH3)。
實(shí)施例5四-O-對(duì)甲氧基芐基-3-乙?；?(-)-表兒茶素的制備在0℃下，在5分鐘內(nèi)往五乙?；?-)-表兒茶素(50mg，0.2mmol)、對(duì)甲氧基芐基氯(69mg，4.4eq)、60％NaH在礦物油(10mg，4eq)和DMF(5mL)中的溶液的混合物中滴加水(20μL，4eq)。在室溫下和氬氣氛圍中攪拌12小時(shí)后，將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(30mL)進(jìn)行稀釋，并用水(50mL)和30mL飽和氯化鈉進(jìn)行洗滌。將有機(jī)層用硫酸鎂進(jìn)行干燥并蒸發(fā)溶劑獲得淡黃色的油狀產(chǎn)物，由該產(chǎn)物通過(guò)硅膠層析分離出白色固體的題述化合物，從己烷∶二氯甲烷(1∶1，體積/體積)中結(jié)晶(50mg，70％)。1H NMR(CDCl3)δH7.35-7.29(9H，m，Ar-H)、6.92-6.85(10H，m，Ar-H)、6.26(2H，bs，H-6，H-8)、5.38(1H，m，H-3)、5.06-6.85(8H，m，4xCH2)、4.92(1H，s，H-2)、3.80(12H，重疊的單峰，4xOCH3)、2.93(2H，m，H-4)、1.85(3H，s，OCOCH3)。
實(shí)施例64β-乙酸基四-O-芐基-(+)-兒茶素的制備將四-O-芐基-(+)-兒茶素(300mg，0.46mmole)和四乙酸鉛(304mg，1.5eq)在圓底燒瓶中結(jié)合并在真空下干燥30分鐘。引入氬氣，然后加入苯和冰乙酸(各5mL)。在加入乙酸后最初的黃色消褪。將溶液在室溫下攪拌24小時(shí)并轉(zhuǎn)入分液漏斗中。所述混合物用1NNaOH(4x50mL)進(jìn)行洗滌，然后用水(50mL)，最后用飽和氯化鈉(50mL)進(jìn)行洗滌。有機(jī)層用硫酸鈉干燥，然后除去溶劑從而生成褐色的殘余物，由該殘余物進(jìn)行硅膠層析，用己烷∶乙酸乙酯(7∶3，體積/體積)進(jìn)行洗脫提供題述化合物。蒸發(fā)洗脫液生成210mg、產(chǎn)率為66％的題述化合物。1H NMR(CDCl3)δH7.44-7.28(20H，m，Ar-H)、7.08(1H，s，H-2’)、7.01、6.95(2H，ABq，J＝8.3Hz，H-5’，H-6’)、6.41(1H，d，J＝3.6Hz，H-4)、6.23、6.15(2x1H，2xd，J＝2.1Hz，H-6，H-8)、5.16(4H，s，CH2Ph)、5.05、4.97(2x2H，2xs，CH2Ph)、4.83(1H，d，2xd，J＝10.3Hz，H-2)、4.13(1H，dd，J＝3.6，10.3Hz，H-3)、2.23(1H，bs，OH)、2.07(3H，s，COCH3)。
實(shí)施例74β-乙酸基四-O-芐基-(-)-表兒茶素的制備采用與實(shí)施例6所描述的相同方法制備題述化合物，不同之處在于本實(shí)施例采用1.01mg的四-O-芐基-(-)-表兒茶素(1.55mmol)代替四-O-芐基-(+)-兒茶素從而提供62mg、產(chǎn)率59％的產(chǎn)物。1HNMR(CDCl3)δH7.44-7.24(20H，m，Ar-H)、7.12(1H，s，H-2’)、6.98、6.95(2H，ABq，J＝8.3Hz，H-5’，H-6’)、6.25(2H，s，H-6，H-8)、5.16(4H，s，CH2Ph)、6.10(1H，d，J＝2.5Hz，H-4)、5.17、5.16、5.03(4x2H，4xs，CH2Ph)、4.97(1H，s，H-2)、3.95(1H，m，H-3)、2.0(3H，s，COCH3)。
實(shí)施例84β-羥基四-O-芐基-(+)-兒茶素的制備往4-乙酸基四-O-芐基-(+)-兒茶素(692mg，1mmol)的THF(9mL)和甲醇(1mL)溶液中加入粉狀氫氧化鉀(168mg，3eq)，將所述溶液在室溫下攪拌2小時(shí)。加入飽和的氯化銨(25mL)，用乙酸乙酯萃取所述溶液。有機(jī)層用硫酸鈉進(jìn)行干燥，蒸發(fā)溶劑提供灰白色的固體(650mg，定量)。1H NMR(CDCl3)δH7.45-7.28(20H，m，Ar-H)、7.08(1H，s，H-2’)、6.99、6.95(2H，ABq，J＝8.3Hz，H-5’，H-6’)、6.26、6.15(2x1H，2xd，J＝2.1Hz，H-6，H-8)、5.16(4H，s，CH2Ph)、5.06(3H，m，H-4，CH2Ph)、4.97(2H，s，CH2Ph)、4.85(1H，d，J＝9.9Hz，H-2)、3.95(1H，m，H-3)、2.75(1H，bs，OH)、2.55(1H，bs，OH)。
實(shí)施例94β-羥基四-O-芐基-(-)-表兒茶素的制備采用與實(shí)施例8所描述的相同方法制備題述化合物，不同之處在于本實(shí)施例采用4β-乙酸基四-O-芐基-(-)-表兒茶素代替4β-乙酸基四-O-芐基-(+)-兒茶素從而提供287mg、產(chǎn)率86％的產(chǎn)物。1HNMR(CDCl3)δH7.45-7.31(20H，m，Ar-H)、7.16(1H，s，H-2’)、6.99、6.95(2H，ABq，J＝8.3Hz，H-5’，H-6’)、6.29、6.27(2x1H，2xd，J＝2.1Hz，H-6，H-8)、5.18(4H，s，CH2Ph)、5.18(4H，s，CH2Ph)、5.07(3H，m，H-4，CH2Ph)、5.01(2H，s，CH2Ph)、4.92(1H，s，H-2)、3.98(1H，dd，J＝2.5，5.7Hz，H-3)、2.43(1H，d，J＝2.4Hz，OH)、1.58(1H，d，J＝5.7Hz，OH)。
實(shí)施例104β-甲氧基四-O-芐基-(+)-兒茶素的制備往4-乙酸基四-O-芐基-(+)-兒茶素(70mg，0.1mmol)的二氯甲烷(5mL)和甲醇(1mL)溶液中加入溴化鋰(87mg，10eq)，并回流所述溶液4小時(shí)。然后將所述混合物在二氯甲烷和水(各為25mL)中進(jìn)行分配。有機(jī)層用硫酸鈉進(jìn)行干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)出溶劑。將殘余物進(jìn)行硅膠層析生成54mg、80％的淡黃色油狀的題述化合物。1H NMR(CDCl3)δH7.42-7.27(20H，m，Ar-H)、7.07(1H，d，J＝1.6Hz，H-2’)、6.96(2H，m，H-5’，H-6’)、6.26(1H，d，J＝2.2Hz，H-6或H-8)、6.15(1H，d，J＝2.2Hz，H-8，H-6)、5.15(4H，s，CH2Ph)、5.02(2H，ABq，J＝7.8Hz，CH2Ph)、4.97(2H，s，CH2Ph)、4.92(1H，d，J＝10.4Hz，H-2)、4.72(1H，d，J＝3.5Hz，H-4)、3.85(1H，dt，J＝3.5，9.2Hz，H-3)、3.47(3H，s，OCH3)。
實(shí)施例11四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-(-)-表兒茶素的制備將4β-乙酸基四-O-芐基-(+)-兒茶素(實(shí)施例6)(140mg，0.2mmol)、(-)-表兒茶素(290mg，5eq)和溴化鋰(87mg，5eq)溶于THF和二氯甲烷(各為5mL)的混合物中，并回流所述溶液24小時(shí)，此后將所述溶液在乙酸乙酯和水(各為40mL)中進(jìn)行分配。有相層用硫酸鈉進(jìn)行干燥，然后蒸發(fā)溶劑。將殘余物再懸浮在乙酸乙酯中，過(guò)濾除去大多數(shù)的(-)-表兒茶素。蒸發(fā)濾液并進(jìn)行硅膠層析，采用二氯甲烷∶乙酸乙酯(1∶1，體積/體積)進(jìn)行洗脫，得到116mg、產(chǎn)率62％的灰白色的粉狀二聚體。在NMR波譜中，指定含有二聚體的上部單體的Hs為A，指定含有二聚體的下部單體的Hs為B。1H NMR(CDCl3d4-甲醇，9∶1)δH7.36-7.23(20H，m，Ar-H)、7.02-6.74(5H，m，A-5’，A-6’，A-2’，B-2’，B-5’)、6.35(1H，dd，J＝1.7，8.2Hz，B-6’)、6.18-6.16(2H，ABq，J＝2.2Hz，A-6，A-8)、5.86(1H，s，B-6)、5.12(5H，m，CH2Ph，B-2)、4.90(2H，s，CH2Ph)、4.71(1H，d，J＝8.2Hz，A-2)、4.59(1H，d，J＝10Hz，CH2Ph)、4.47(1H，d，J＝10Hz，CH2Ph)、4.29(1H，dd，J＝8.3，8.3Hz，A-4)、3.80(1H，m，H-3)、2.71(1H，d，J＝16.6Hz，B-4)、2.53(1H，dd，J＝4.4，16.6Hz，B-4)；13CNMRδ156.5、156.0、154.6、154.0、152.5、151.6、151.4、151.2、150.6、147.0、146.7、141.7、141.6、141.5、139.8、134.8、134.4、134.2、133.9、129.3、128.7、126.2、126.1、126.0、125.8、125.5、125.4、125.2、125.1、125.0、124.9、119.8、115.0、112.6、111.2、106.1、104.5、96.5、94.9、93.0、92.8、79.9、70.5、69.1、69.0、67.8、67.7、63.9、35.0、25.5；IR(KBr，cm-1)3418、3057、3034、2918、1609、1510、1446、1371、1260、1202、1097、806、731、696；MS(FAB，m/z)939.6(M+H)+、649.1、607.0、559.0、459.8。
實(shí)施例12(+)-兒茶素(4α→8)-(-)-表兒茶素的制備將實(shí)施例11制備的四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-(-)-表兒茶素(50mg)溶于甲醇(10mL)并通過(guò)吹掃氬氣進(jìn)行脫氣10分鐘。加入30％的鈀-活性炭(30mg)并在45psi下氫解3小時(shí)。將所述溶液通過(guò)Celite硅藻土過(guò)濾，用甲醇進(jìn)行洗滌。蒸發(fā)合并的濾液和洗液，將殘余物溶于水中，然后凍干提供定量收率的灰白色固體的二聚體。對(duì)于NMR波譜而言，指定含有二聚體的上部單體的Hs為A，指定含有二聚體的下部單體的Hs為B。1H NMR(CDCl3d4-甲醇，9∶1)δH7.21(1H，bs，A-2’)、7.04(1H，bs，B-2’)、6.95-6.75(2H，m，A-5’，B-5’)、6.62(1H，m，A-6’)、6.45(1H，m，B-6’)、6.20(1H，m，B-6)、6.05(1H，m，B-6)、5.89(2H，m，A-6，A-8)、4.98(1H，m，B-2)、4.85(1H，m，B-2)、4.42-4.25(3H，m，A-4，A-3，A-2)、3.05-2.62(2H，m，B-4)。
實(shí)施例133-乙?；?四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙酰基-(-)-表兒茶素的制備將實(shí)施例11中制備的四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)表兒茶素用乙酸酐的吡啶溶液進(jìn)行乙?；?。將120mg的四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-(-)-表兒茶素溶于2mL的無(wú)水吡啶和加入的500μL的乙酸酐中。在室溫下和氬氣下攪拌所述反應(yīng)混合物18小時(shí)。將所述混合物在乙酸乙酯和1N HCl(各為25mL)中進(jìn)行分配。有機(jī)層用25mL水、然后用25mL的5％碳酸氫鈉、接著用25mL的飽和氯化鈉進(jìn)行洗滌，并將有機(jī)相用硫酸鈉進(jìn)行干燥。通過(guò)層析純化所述產(chǎn)物提供140mg的題述化合物，收率為91％。在NMR波譜中，指定含有二聚體的上部單體的Hs為A，指定含有二聚體的下部單體的Hs為B。1HNMR(CDCl3d4-甲醇，9∶1)δH7.40-7.29(20H，m，Ar-H)、7.19-7.13(5H，m，A-2’，A-6’，B-2’，B-5’，B-6’)、6.92(1H，d，J＝83Hz，A-5’)、6.52(1H，s，B-6)、6.21、6.18(2x1H，2xd，J＝2.3Hz，A-6，A-8)、5.67(1H，t，J＝9.6Hz，H-3)、5.14(3H，s，CH2Ph，B-3)、5.0(2H，s，CH2Ph)、4.98(2H，s，CH2Ph)、4.84(1H，d，J＝9.1Hz，A-3)、4.75(1H，d，J＝10.1Hz，A-2)、4.58、4.41(2H，ABq，J＝9.2Hz，CH2Ph)、2.64(2H，m，B-4)、2.29(6H，s，COCH3)、2.26(3H，s，COCH3)、2.26(3H，s，COCH3)、1.76(3H，s，COCH3)、1.74(3H，s，COCH3)、1.64(3H，s，COCH3)；13C NMR 169.6、168.2、168.0、167.5、158.0、156.2、153.2、149.2、148.7、147.1、146.2、142.5、142.0、137.0、136.8、136.5、136.2、130.0、129.8、128.3、128.2、127.7、127.6、127.3、127.1、122.8、121.6、121.4、114.9、114.8、110.2、108.4、106.0、95.0、94.6、80.0、75.5、73.4、71.4、71.0、70.5、69.7、66.5、35.0、26.2、20.6、20.5、20.4、20.3、20.0；MS(FAB，m/z)1192(M+H)+、1131、1039、949、841、691。
實(shí)施例143-乙?；?(+)-兒茶素(4α→8)-五乙?；?(-)-表兒茶素的制備將實(shí)施例13中制備的3-乙?；?四-O-芐基-(+)-兒茶素(4α→8)-五乙酰基-(-)-表兒茶素溶于經(jīng)過(guò)脫氣的乙酸乙酯-甲醇(各為3mL)中并在45psi下采用30％的鈀-活性炭氫解4小時(shí)。將所述溶液通過(guò)Celite硅藻土過(guò)濾并蒸發(fā)溶劑從而提供定量收率的淡黃色固體的二聚體。在NMR波譜中，指定含有二聚體的上部單體的Hs為A，指定含有二聚體的下部單體的Hs為B。1H NMR(CDCl3d4-甲醇，9∶1)δH7.47、6.98(2x1H，bs，B-2’)、7.36、6.98(2x1H，2xd，J＝8.4，B-6’)、7.24、7.16(2x1H，2xd，J＝8.4Hz，B-5’)、6.89、6.60(2x1H，2xbs，A-2’)、6.83、6.79(2x1H，ABq，J＝8.4Hz，A-5’，A-6’)、6.66(1H，d，J＝8.4Hz，A-5’)、6.47(1H，d，J＝8.4Hz，A-6’)、6.51、6.45(2x1H，2xs，B-6)、5.97、5.84(2x1H，2xd，J＝2Hz，A-6，A-8)、5.96(2H，s，A-6，A-8)、5.71(2H，m，A-3)、5.50、5.17(2x1H，2xbs，B-3)、5.28(2x1H，2xbs，B-2)、5.0、4.54(2x1H，2xd，J＝8.9，9.4Hz，A-2)、4.74、4.61(2x1H，2xd，J＝9.9Hz，A-4)、3.2、2.74(2x2H，2xm，B-4)、2.32、2.29、2.28、2.26、2.23、2.01、1.80、1.77、1.63(s，COCH3)；13C NMR172.5、172.0、171.8、171.5、170.3、170.2、170.1、170.0、169.8、169.2、157.2、157.1、156.8、154.8、154.0、149.2、147.5、146.0、145.9、145.6、145.0、143.0、142.8、137.5、137.0、129.8、125.8、124.9、124.0、123.0、122.6、121.8、120.8、120.2、119.8、115.9、115.8、115.5、115.1、110.8、110.9、109.5、109.4、105.0、104.2、98.0、97.5、96.8、96.0、81.0、80.2、79.0、78.8、78.6、78.0、75.0、72.2、68.1、68.0、37.5、36.0、26.5、26.0、20.7。
實(shí)施例15四-O-(-)-表兒茶素-(4β→8)-(-)-表兒茶素的制備將實(shí)施例7制備的4β-乙酸基四-O-芐基-(-)-兒茶素(70mg，0.1mmol)、(-)-表兒茶素(145mg，5eq)和溴化鋰(44mg，5eq)溶于THF和二氯甲烷(各為3mL)的混合物中，并在氬氣下回流所述溶液24小時(shí)，將所述溶液在乙酸乙酯和水(各為25mL)中進(jìn)行分配，有相層用硫酸鈉進(jìn)行干燥。蒸發(fā)溶劑，將殘余物再懸浮在乙酸乙酯中，然后過(guò)濾除去大多數(shù)的(-)-表兒茶素。蒸發(fā)濾液得到殘余物并進(jìn)行硅膠層析，采用二氯甲烷∶乙酸乙酯(1∶1，體積/體積)進(jìn)行洗脫分離出目標(biāo)化合物。蒸發(fā)洗脫液提供56mg(60％)的灰白色粉末。1H NMR(CDCl3d4-甲醇，9∶1)δH[未指定]7.35-7.14(20H，m)、6.92(1H，bs)、6.82(1H，s)、6.29(1H，s)、6.18(1H，s)、5.85(1H，s)、5.01(4H，s)、4.94(2H，s)、4.93(2H，s)、4.38(1H，s)、3.93(1H，s)、2.85(2H，s)。
實(shí)施例16(-)-表兒茶素-(4β→8)-(-)-表兒茶素的制備將實(shí)施例15制備的四-O-(-)-表兒茶素(4β→8)-(-)-表兒茶素(40mg，0.043mmol)溶于8mL甲醇中并通過(guò)吹掃氬氣脫氣10分鐘。往所述溶液中加入25mg的30％的鈀-活性炭，并將所述混合物在45psi下氫解3小時(shí)。將所述溶液通過(guò)Celite硅藻土過(guò)濾，然后用25mL甲醇進(jìn)行洗滌。蒸發(fā)合并的濾液和洗液，將殘余物溶于水中。凍干提供23mg的灰白色粉末。HPLC分析(圖1A)顯示存在18％的單體、45％的二聚體、25％的三聚體和8％的四聚體。1H NMR譜圖顯示于圖2中。
實(shí)施例17四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-(+)-兒茶素的制備將實(shí)施例6制備的4β-乙酸基四-O-芐基-(+)-兒茶素(70mg，0.1mmol)、(+)-兒茶素(145mg，5eq)和溴化鋰(44mg，5eq)溶于THF和二氯甲烷(各為3mL)的混合物中，并在氬氣下回流所述溶液24小時(shí)。此后將所述溶液在乙酸乙酯和水(各為25mL)中進(jìn)行分配，有相層用硫酸鈉進(jìn)行干燥。蒸發(fā)去溶劑后，將殘余物再懸浮在乙酸乙酯中，然后過(guò)濾除去大多數(shù)未反應(yīng)的(+)-兒茶素。蒸發(fā)后將殘余物進(jìn)行硅膠層析，采用二氯甲烷∶乙酸乙酯(1∶1，體積/體積)進(jìn)行洗脫，在蒸發(fā)后提供灰白色粉末(81mg，68％)。1H NMR(CDCl3d4-甲醇，9∶1)δH7.39-7.06(20H，m)、6.84-6.68(5H，m)、6.47(1H，d，J＝7.9Hz)、6.32-5.98(4H，m)、5.00-4.33(11H，m)、3.58(1H，m)、2.98(1H，m)、2.35(1H，m)；IR(KBr，cm-1)3441、3057、3034、2918、1609、1542、1510、1371、1266、1097、812、737、696；MS(APCI，m/z)938(M-H)、920、848、816、696、607、558。
實(shí)施例183-乙?；?四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-3-乙酰基四O-芐基-(-)-表兒茶素的制備在0℃下，將實(shí)施例13制備的3-乙?；?四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙酰基-(-)-表兒茶素(119mg，0.1mmol)加入無(wú)水DMF(4mL)中，然后加入NaH(29mg，4.2eq)，接著加入芐基溴(54μL，4.5eq)。在2分鐘內(nèi)慢慢加入水(8μL，4eq)并在室溫下攪拌所述混合物24小時(shí)。將所述溶液在乙酸乙酯和水(各為25mL)中進(jìn)行分配，有機(jī)相用硫酸鎂進(jìn)行干燥。蒸發(fā)后，將殘余物進(jìn)行硅膠層析，采用20％乙酸乙酯的己烷溶液進(jìn)行洗脫，在蒸發(fā)后提供105mg(90％)的題述化合物。指定含有二聚體的上部單體的Hs為A，指定含有二聚體的下部單體的Hs為B。1H NMR(CDCl3d4-甲醇，9∶1)δH7.45-7.24(40H，m，Ar-H)、6.90-6.78(6H，m，A-2’，A-5’，A-6’，B-2’，B-5’，B-6’)、6.22(2H，m，A-6，A-8)、6.21(1H，s，B-6)、5.92(1H，m，A-3)、5.21-4.40(20H，絡(luò)合物，CH2Ph，A-2，A-4，B-2，B-3)、2.70(2H，m，B-4)、1.67(6H，s，CH2Ph，COCH3)。
實(shí)施例19四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-(+)-四-O-芐基-(-)-表兒茶素的制備往實(shí)施例18中制備的3-乙?；?四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-3-乙?；?O-芐基-(-)-表兒茶素的THF(2mL)和甲醇(200μL)溶液中加入粉末狀KOH(5mg，3eq)，在氬氣和室溫下攪拌所述溶液18小時(shí)。將反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和飽和氯化銨(各為25mL)中進(jìn)行分配。有機(jī)層用硫酸鎂進(jìn)行干燥并蒸發(fā)溶劑。然后將殘余物進(jìn)行硅膠層析，采用20％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液進(jìn)行洗脫，蒸發(fā)溶劑后提供無(wú)色油狀的題述化合物(31mg，82.5％)。在NMR波譜中指定含有二聚體的上部單體的Hs為A，指定含有二聚體的下部單體的Hs為B。1HNMR(CDCl3d4-甲醇，9∶1)δH7.41-7.13(40H，m，Ar-H)、6.97-6.79(6H，絡(luò)合物，A-2’，A-5’，A-6’，B-2’，B-5’，B-6’)、6.22(1H，s，B-6)、6.20、6.12(2x1H，2xd，J＝2.4Hz，A-6，A-8)、5.18-4.51(19H，CH2Ph，A-2，A-4，B-2)、4.28(1H，m，A-3)、3.85(1H，m，B-3)、2.95(1H，d，J＝16Hz，B-4)、2.60(1H，dd，J＝5，16Hz，B-4)。
實(shí)施例20四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-3-乙酰基-(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙?；?(-)-表兒茶素的制備往實(shí)施例14制備的3-乙酰基-(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙?；?(-)-表兒茶素(100mg，0.068mmol)和實(shí)施例6制備的4β-乙酸基四-O-芐基-(+)-兒茶素(334mg，2eq)的THF(7mL)和二氯甲烷(7mL)溶液中加入161mg的碘化鋰。將所述溶液回流24小時(shí)，然后在乙酸乙酯和水(各為25mL)中進(jìn)行分配。有機(jī)相用硫酸鈉進(jìn)行干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)溶劑。采用乙酸乙酯-二氯甲烷(1∶1，體積/體積)作為洗脫液對(duì)殘余物進(jìn)行硅膠層析，蒸發(fā)溶劑后提供帶褐白色固體(100mg，28％)。所得的1H NMR顯示于圖3中。MS(FAB，m/z)1482(M+H)+、1148、1042、962、920、650。
實(shí)施例21四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙?；?(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙?；?(-)-表兒茶素的制備在氬氣下，將實(shí)施例20中制備的四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-3-乙?；?(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙?；?(-)-表兒茶素(100mg，0.068mmol)在無(wú)水吡啶(2mL)和乙酸酐(1mL)中攪拌24小時(shí)。然后將所述溶液在1N HCl和乙酸乙酯(各為25mL)中進(jìn)行分配。有機(jī)層用5％的碳酸氫鈉、飽和氯化鈉進(jìn)行洗滌，用硫酸鎂進(jìn)行干燥。蒸發(fā)溶劑后提供一種油狀殘余物，采用10％的乙酸乙酯的二氯甲烷溶液作為洗脫液，對(duì)所述殘余物進(jìn)行硅膠層析，蒸發(fā)溶劑后提供一種白色粉末(70mg，61％)。所得的1H NMR譜圖顯示于圖4中。
實(shí)施例223-乙?；?(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙?；?(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙?；?(-)-表兒茶素的制備將實(shí)施例21制備的四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙酰基-(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙?；?(-)-表兒茶素(50mg)溶于脫氣的乙酸乙酯-甲醇(各為3mL)中并在45psi下在30％的鈀-活性炭的存在下氫解4小時(shí)。通過(guò)Celite硅藻土過(guò)濾除去催化劑，蒸發(fā)提供淡褐色粉末的題述化合物(35mg，91％)。所得的1H NMR譜圖顯示于圖5中。
實(shí)施例23四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-3-乙?；?(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙酰基-(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙?；?(-)-表兒茶素的制備往實(shí)施例22制備的3-乙?；?(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙?；?(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙?；?(-)-表兒茶素(30mg，0.0226mmol)和實(shí)施例6制備的4β-乙酸基四-O-芐基-(+)-兒茶素(31mg，2eq)的THF和二氯甲烷(各2mL)溶液中加入碘化鋰(16mg，5eq)并將所述溶液回流24小時(shí)。然后將所述溶液在乙酸乙酯和水(各為25mL)中進(jìn)行分配，有機(jī)層用硫酸鎂進(jìn)行干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)溶劑。采用10％的甲醇的二氯甲烷溶液作為洗脫液對(duì)殘余物進(jìn)行硅膠層析，蒸發(fā)溶劑后提供帶褐白色固體(20mg，45％)。MS(FAB，m/z)1978(M+H)+、1934(M+-COCH3)、1571(M+-COCH3，-3xCH2Ph)、1646、1430、1373、1330、1269。
實(shí)施例24四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-(-)-表兒茶素-(6→4α)-四-O-芐基-(+)-兒茶素的制備往實(shí)施例11制備的四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-(-)-表兒茶素(69mg，0.074mmol)和實(shí)施例6制備的4β-乙酸基四-O-芐基-(+)-兒茶素(51mg，0.074mmol)的二氯甲烷和THF(各為7mL)的溶液中加入溴化鋰(65mg，10eq)，并將所述混合物回流24小時(shí)。將所述溶液在乙酸乙酯和水(各為25mL)中進(jìn)行分配，有機(jī)相用硫酸鎂進(jìn)行干燥。蒸發(fā)溶劑，采用乙酸乙酯-二氯甲烷(1∶1，體積/體積)作為洗脫液對(duì)殘余物進(jìn)行硅膠層析，蒸發(fā)溶劑后提供白色粉末(35mg，30％)。所得的1H NMR顯示于圖6中。MS(FAB，m/z)1588(M+H)+、1255、772、648、607、560。
實(shí)施例258-溴四-O-芐基-(-)-表兒茶素的制備往四-O-芐基-(-)-表兒茶素(實(shí)施例2)(65mg，0.1mmol)的二氯甲烷溶液(2mL)中加入N-溴代丁二酰胺(18mg，0.1mmol)，并在氬氣下攪拌所述溶液10分鐘。將所述混合物通過(guò)硅膠過(guò)濾，然后用20mL的乙酸乙酯∶二氯甲烷(1∶1，體積/體積)進(jìn)行洗脫。將合并的濾液和洗液蒸發(fā)。采用二氯甲烷作洗脫液對(duì)殘余物進(jìn)行硅膠層析，蒸發(fā)溶劑后提供帶亮桃紅色的白色晶體(66mg，90％)。1H NMR(CDCl3)δH7.45-7.21(21H，m，Ar-H)、7.01(1H，dd，J＝1.48.3Hz，H-6)、6.96(1H，d，J＝8.3Hz，H-5)、6.23(2H，s，H-6)、5.38(1H，m，H-3)、5.21、5.18、5.10、4.97(4x2H，4xs，4xCH2)、5.01(1H，s，H-2)、4.3(1H，m，H-3)、3.03(1H，dd，J＝1.9，17.4Hz，H-4)、2.89(1H，dd，J＝4.，17.4Hz，H-4)、1.55(1H，d，J＝4.8Hz，OH)。
實(shí)施例268-溴五芐基-(-)-表兒茶素的制備往0℃的五芐基-(-)-表兒茶素(55mg，0.074mmo1)的二氯甲烷溶液(2mL)中加入N-溴代丁二酰胺(14mg，1eq)，并在室溫下攪拌所述溶液30分鐘。將所述溶液通過(guò)25毫米直徑的硅膠(7gm)柱，用二氯甲烷(30mL)進(jìn)行洗滌。蒸發(fā)合并的濾液和洗脫液從而在蒸發(fā)溶劑后提供白色泡沫狀的題述化合物(50mg，82.5％)。1H NMR(CDCl3)δH7.43-6.90(28H，m，Ar-H)、6.21(1H，s，H-6)、5.17(2H，s，CH2)、5.09(5H，s，2xCH2，H-2)、4.96(2H，s，CH2)、4.37、4.27(2H，AB，J＝12.6Hz，3-OCH2)、3.95(1H，m，H-3)、2.94(1H，dd，J＝3.6，17.1Hz，H-4)、2.78(1H，dd，J＝4.4，17.1Hz，H-4)。
實(shí)施例278-溴4β-乙酸基五芐基-(-)-表兒茶素的制備在氬氣下往8-溴五芐基-(-)-表兒茶素(實(shí)施例26)(59mg，0.072mmol)和四乙酸鉛(48mg，1.5eq)的混合物中加入苯(2mL)，然后加入2mL乙酸，并在室溫下攪拌所述混合物60小時(shí)。將所述溶液在乙酸乙酯和水(各為50mL)中進(jìn)行分配。有機(jī)層用1N NaOH(2x50mL)進(jìn)行洗滌，然后用水(50mL)、飽和氯化鈉(50mL)進(jìn)行洗滌，用硫酸鈉進(jìn)行干燥。過(guò)濾所述溶液并蒸發(fā)提供油狀殘余物，采用20％的乙酸乙酯的己烷溶液作為洗脫液對(duì)所述殘余物進(jìn)行硅膠層析，在蒸發(fā)后提供白色泡沫狀的題述化合物(38mg，60％)。1H NMR(CDCl3)δH7.46-6.85(28H，m，Ar-H)、6.25(1H，s，H-6)、6.18(1H，d，J＝2.3Hz，H-4)、5.20、5.13、5.02(4x2H，4xs，4xCH2)、4.99(1H，s，H-2)、4.51、4.33(2H，AB，J＝12.3Hz，3-OCH3)、3.65(1H，m，H-3)、2.0(2H，s，OCOCH3)。
實(shí)施例28確定8-溴四-O-芐基-(-)-表兒茶素的絕對(duì)構(gòu)型將8-溴四-O-芐基-(-)-表兒茶素晶體固定在玻璃纖維上，并置于Siemens SMART CCD X-射線衍生儀中的-44℃的冷氮?dú)饬髦小Ｍǔ＞w的衍射較弱，存在極少或角度不大的反射，并且總體上具有弱的強(qiáng)度。盡管采用比通常長(zhǎng)的暴露時(shí)間，前面三個(gè)晶體沒(méi)有發(fā)生充分的衍射以測(cè)量晶胞。使用15次反射，第4個(gè)晶體發(fā)生充分的衍射從而精確修定出晶胞。采用Mo輻射對(duì)該晶體超過(guò)2千個(gè)晶格(frame)進(jìn)行暴露50秒，從而粗略覆蓋衍射球體，收集數(shù)據(jù)。
晶胞體積表明晶胞中包含兩個(gè)分子。盡管一個(gè)晶胞角度清楚地為90°，一個(gè)明顯不同于90°(92.6°)，第三個(gè)角與90°相差0.1°(這對(duì)于單斜晶胞而言是一個(gè)較大的誤差)。但是，可能的系統(tǒng)消光檢測(cè)表明一條明顯的21軸與用于手性化合物的單斜晶空間群P21一致。隨后成功的結(jié)構(gòu)求解和對(duì)P21的精修支持了這種選擇。通過(guò)采用SHELX軟件包(Sheldrick，G.M.SHELXTL structure Determination SoftwareProgramsSiemens Analytical X-ray Instruments Inc.Madison，WI，1990)中的程序的直接方法解出這種結(jié)構(gòu)。氫原子位于固定的、計(jì)算的位置。芐基上的苯環(huán)作為剛性基團(tuán)進(jìn)行各向同性精修。沒(méi)有對(duì)吸收或消光進(jìn)行校正。下表列出了晶體數(shù)據(jù)。
表8-溴四-O-芐基-(-)-表兒茶素的晶體數(shù)據(jù)和結(jié)構(gòu)精修經(jīng)驗(yàn)式 C43H37BrO6分子量 729.64溫度 229(2)°K波長(zhǎng) 0.71073A°晶體體系 單斜晶空間群 P21晶胞尺寸 a＝15.9122(8)A°α＝90°b＝4.8125(3)A° β＝92.6390(10)°c＝22.4772(1 3)A° γ＝90°體積，z 1719.42(17)A03，2密度(計(jì)算值) 1.409 Mg/m3吸收系數(shù) 1.246 mm-1F(000) 756晶體尺寸 0.45×0.04×0.04mm采集數(shù)據(jù)的θ范圍 1.28-23.44°界限指數(shù)(Limiting-17≤h≤17，-5≤k≤5，-24≤1≤24indices)采集的反射 13371獨(dú)立的反射 4868(Rint＝0.2246)對(duì)θ＝23.44°的完整性99.2％吸收校正 無(wú)精修方法 在F2上整個(gè)矩陣的最小二乘方(Full matrixleast squares on F2)數(shù)據(jù)/約束(restraints)/參 4868/1/274數(shù)在F2上的擬合優(yōu)度1,091R指數(shù)(全部) R1＝0.2263， wR2＝0.4749最后的R指數(shù)[I＞2σ(I)] R1＝0.1515， wR2＝0.3875絕對(duì)結(jié)構(gòu)參數(shù) 0.00(5)峰和谷的最大差值 1.857和-1,268 eA03
對(duì)正確的絕對(duì)構(gòu)型的確定通過(guò)計(jì)算Flack‘x’參數(shù)來(lái)測(cè)試。這個(gè)參數(shù)基本接近0，表明指定了正確的構(gòu)型。對(duì)轉(zhuǎn)化構(gòu)型的測(cè)試精修導(dǎo)致Flack‘x’參數(shù)值為0.95(5)，并且R因子明顯增大，兩者均表明所述指定是正確的。8-溴四-O-芐基-(-)-表兒茶素的最后模型示于圖7中。
實(shí)施例29(88)、(86)和(66)鍵合的矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物的制備可以擴(kuò)展本發(fā)明所述的步驟以提供含有(88)、(86)和(66)黃烷間鍵合的矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物。這些化合物由6-溴-和/或8-溴-(單體)中間體獲得。在鈀(o)催化劑的存在下，通過(guò)Stille反應(yīng)使這些溴化單體與有機(jī)錫衍生物進(jìn)行偶合從而獲得所需要的低聚物的鍵合(Stille，J.K.，Agnew，Chem.Internal.Ed.Engl.，25，508-524(1986))。
例如，將實(shí)施例26制備的8-溴五芐基-(-)-表兒茶素與六丁基二錫烷反應(yīng)以提供五芐基(-)-表兒茶素的烷基錫烷。在四(三苯基膦)鈀(o)的苯溶液的存在下使這種錫烷與另一種8-溴五芐基(-)-表兒茶素偶合提供具有(88)鍵合的十芐基(-)表兒茶素二聚體。采用H2/Pd去保護(hù)提供了游離酚形式的(-)-表兒茶素-(88)-(-)-表兒茶素。
同樣，采用合適的6-溴-或8-溴-(單體)衍生物可以合成具有(86)或(66)鍵合的矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物。另外，偶合8-溴-或6-溴-二聚體、三聚體和更高級(jí)的低聚物可以提供具有(88)、(86)和(66)鍵合的“偶數(shù)”矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物。
再進(jìn)一步，如本發(fā)明所述采用封端的單體進(jìn)行偶合以制備(46)鍵合的低聚物可以用于Stille反應(yīng)以提供含有(46)和(48)鍵合的低聚物與(88)、(86)和(66)鍵合組合的新的矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物。舉例而言，下面的結(jié)構(gòu)說(shuō)明了(88)、(48)鍵合的矢車(chē)菊苷配質(zhì)三聚體。 附圖的簡(jiǎn)單描述圖1A代表實(shí)施例16制備的(-)-表兒茶素-(4β→8)-(-)-表兒茶素的HPLC分離。
圖1B代表實(shí)施例12制備的(+)-兒茶素-(4α→8)-(-)-表兒茶素的HPLC分離。
圖2代表實(shí)施例16制備的(-)-表兒茶素-(4β→8)-(-)-表兒茶素的1HNMR譜圖。
圖3代表實(shí)施例20制備的四-O-芐基-(-)-兒茶素-(4α→8)-五乙酰基(-)-表兒茶素的1H NMR譜圖。
圖4代表實(shí)施例21制備的四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙?；?+)-兒茶素-(4α→8)-(-)-表兒茶素的1H NMR譜圖。
圖5代表實(shí)施例22制備的四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-五乙酰基(+)-兒茶素-(4α8)-五乙?；?-)-表兒茶素的1H NMR譜圖。
圖6代表實(shí)施例24制備的四-O-芐基-(+)-兒茶素-(4α→8)-(-)-表兒茶素-(6→4α)四-O-芐基(+)-兒茶素的1H NMR譜圖。
圖7代表8-溴四-O-芐基(-)-表兒茶素的X-射線模型。
權(quán)利要求
1.一種制備矢車(chē)菊苷配質(zhì)二聚體的方法，所述方法包括以下步驟(a)用不會(huì)使單體的A環(huán)失活的可除去的保護(hù)基團(tuán)保護(hù)矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體的各個(gè)酚羥基，其中所述保護(hù)步驟在非質(zhì)子溶劑中實(shí)施；(b)采用有機(jī)酸的鉛(IV)鹽，通過(guò)引入酸基活化步驟(a)化合物的C-4位的偶合以提供一種活化的化合物；和(c)在偶合催化劑的存在下，使步驟(b)的活化化合物與未受保護(hù)的矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體偶合以生成二聚體。
2.一種制備線性矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物的方法，該方法包括以下步驟(a)制備部分保護(hù)的矢車(chē)菊苷配質(zhì)二聚體，其中所述頂部基體的酚羥基用不使受保護(hù)的基體的A環(huán)失活的可除去的保護(hù)基團(tuán)保護(hù)；(b)用使所述掩蔽的、受保護(hù)的二聚體的底部基體失活的可除去的掩蔽基團(tuán)掩蔽步驟(a)的底部基體的未受保護(hù)的酚羥基和兩個(gè)C-3位置的羥基；(c)使步驟(b)的二聚體的頂部基體去保護(hù)從而提供一種去保護(hù)的、掩蔽的二聚體，由此在所述二聚體的去保護(hù)的頂部基體的C-8位置進(jìn)行偶合；(d)用沒(méi)有封端或已封端的、受保護(hù)的、活化的單體偶合步驟(c)的二聚體以形成三聚體，其中所述三聚體的頂部基體為受保護(hù)的封端基體或受保護(hù)的沒(méi)有封端的基體，其中在C-8位置上進(jìn)行偶合；(e)掩蔽步驟(d)的已封端或沒(méi)有封端的三聚體；(f)使步驟(e)的已封端或沒(méi)有封端的、受保護(hù)的、掩蔽的三聚體去保護(hù)從而形成已封端或沒(méi)有封端的三聚體；和(g)任選重復(fù)或交替步驟(a)-(f)從而制備較高級(jí)的低聚物，其中基體數(shù)為4-18。
3.一種制備分支的矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物的方法，所述方法包括以下步驟(a)制備未封端或封端的、部分受保護(hù)的矢車(chē)菊苷配質(zhì)二聚體，其中用不使受保護(hù)基體的A環(huán)失活的可除去的保護(hù)基團(tuán)保護(hù)頂部基體的酚羥基，而底部基體具有游離的酚羥基；(b)使步驟(a)的二聚體與未封端或封端的、受保護(hù)的、活化的矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體偶合以形成分支的三聚體；(c)使步驟(b)的三聚體去保護(hù)；和(d)任選按順序，交替或者以組合方式實(shí)施以下的一個(gè)步驟，以提供具有4-18個(gè)包括(4→8)、(4→6)、(6→4)和/或(8→4)鍵合的基體的矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物；(i)將步驟(c)的三聚物與沒(méi)有封端或已封端的、受保護(hù)的矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體進(jìn)行偶合；或(ii)掩蔽步驟(b)的三聚物，使受掩蔽的三聚物去保護(hù)，并使受掩蔽的三聚物與未受保護(hù)或受保護(hù)的、封端的活化的矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體進(jìn)行偶合。
4.一種獲得權(quán)利要求1的矢車(chē)菊苷配質(zhì)二聚體、權(quán)利要求2的線性矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物或權(quán)利要求3的分支的矢車(chē)菊苷配質(zhì)的方法，所述方法還包括使二聚體或低聚物去保護(hù)以及，如果需要，使所述二聚體或低聚物解蔽和/或解封的步驟。
5.權(quán)利要求2或3的方法，其中n為5-12。
6.權(quán)利要求5的方法，其中n為5。
7.權(quán)利要求1、2或3的方法，其中所述表兒茶素或兒茶素單體相同或不同。
8.權(quán)利要求2的方法，其中所述鍵合為(4→6)或(4→8)。
9.權(quán)利要求3的方法，其中所述鍵合為(4→6)、(4→8)、(6→4)和/或(8→4)。
10.權(quán)利要求2或3的方法，其中通過(guò)堿水解實(shí)施所述解蔽步驟。
11.權(quán)利要求1、2或3的方法，其中在所述保護(hù)步驟中，所述保護(hù)基團(tuán)為芐基、對(duì)甲氧基芐基、叔丁基或三苯甲基，并且其中所述非質(zhì)子溶劑為二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺或二甲基亞砜。
12.權(quán)利要求1、2或3的方法，其中所述活化基團(tuán)為乙酸基、甲酸基或丙酸基；其中所述鉛鹽為四乙酸鉛、四甲酸鉛或四丙酸鉛；并且其中所述溶劑為苯。
13.權(quán)利要求12的方法，其中采用有機(jī)酸實(shí)施所述活化步驟。
14.權(quán)利要求13的方法，其中所述有機(jī)酸與所述鉛鹽所用的有機(jī)酸相同。
15.權(quán)利要求14的方法，其中所述有機(jī)酸為甲酸、乙酸或丙酸。
16.權(quán)利要求2或3的方法，其中封端基團(tuán)為鹵素基團(tuán)。
17.權(quán)利要求16的方法，其中鹵素基團(tuán)為溴或碘基團(tuán)。
18.權(quán)利要求2或3的方法，其中用烷基鋰實(shí)施所述解封步驟。
19.權(quán)利要求18的方法，其中所述烷基鋰為正丁基鋰或叔丁基鋰。
20.權(quán)利要求1、2或3的方法，其中通過(guò)氫解實(shí)施所述去保護(hù)步驟。
21.一種具有以下結(jié)構(gòu)的二重分支低聚物。
22.一種制備權(quán)利要求21的二重分支低聚物的方法，所述方法包括以下步驟(a)采用不使單體的A環(huán)失活的第一保護(hù)基團(tuán)來(lái)保護(hù)第一矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體的各個(gè)酚羥基，其中在非質(zhì)子溶劑中實(shí)施所述保護(hù)步驟以提供受保護(hù)的單體；(b)通過(guò)使用有機(jī)酸的鉛鹽引入酸基來(lái)活化步驟(a)的化合物的C-4位置的偶合從而提供一種活化的受保護(hù)的單體；(c)在偶合催化劑的存在下，采用未受保護(hù)的矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體偶合步驟(b)的單體從而提供部分受保護(hù)的二聚體；(d)乙?；襟E(c)的二聚體以提供乙酰化的部分受保護(hù)的二聚體；(e)使步驟(d)的乙?；摹⒉糠质鼙Ｗo(hù)的二聚體去保護(hù)以提供乙酰化的二聚體；(f)使步驟(e)的乙酰化的二聚體與4β-乙酸基保護(hù)的單體偶合從而生成三聚體；(g)使步驟(f)的三聚體脫乙酰基；(h)使步驟(g)的三聚體與4β-乙酸基單體偶合以生成雙重鍵合的矢車(chē)菊苷配質(zhì)五聚體；和(i)使步驟(h)的雙重鍵合的矢車(chē)菊苷配質(zhì)五聚體脫乙?；腿ケＷo(hù)從而生成去保護(hù)的二重分支的矢車(chē)菊苷配質(zhì)四聚體。
23.權(quán)利要求22的方法，所述方法還包括重復(fù)步驟(a)-(c)以生成含有n個(gè)單體的多重分支的矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物，其中n為6-18的整數(shù)。
24.一種制備具有(88)鍵合的矢車(chē)菊苷配質(zhì)二聚體的方法，所述方法包括以下步驟(a)在鈀(o)的存在下，使第一8-溴保護(hù)的單體與六烷基二錫烷反應(yīng)以提供受保護(hù)的單體-8-三烷基錫烷；(b)采用四(三苯基膦)鈀(o)的苯溶液，使步驟(a)的產(chǎn)物與第二8-溴保護(hù)的單體進(jìn)行偶合以生成(88)偶合的二聚體；和(c)使步驟(b)的產(chǎn)物去保護(hù)以生成(88)二聚體。
25.一種制備具有(66)鍵合的矢車(chē)菊苷配質(zhì)二聚體的方法，所述方法包括以下步驟(a)在鈀(o)的存在下，使第一6-溴保護(hù)的單體與六烷基二錫烷反應(yīng)從而提供受保護(hù)的單體-6-三烷基錫烷；(b)使用四(三苯基膦)鈀(o)的苯溶液，使步驟(a)的產(chǎn)物與第二6-溴保護(hù)的單體偶合生成(6→6)偶合的二聚體；和(c)使步驟(b)的產(chǎn)物去保護(hù)從而生成(6→6)二聚體。
26.一種制備具有(68)鍵合的矢車(chē)菊苷配質(zhì)二聚體的方法，所述方法包括以下步驟(a)在鈀(o)的存在下，使第一6-溴保護(hù)的單體與六烷基二錫烷反應(yīng)從而提供受保護(hù)的單體-6-三烷基錫烷；(b)使用四(三苯基膦)鈀(o)的苯溶液，使步驟(a)的產(chǎn)物與第二8-溴保護(hù)的單體偶合生成(6→8)偶合的二聚體；和(c)使步驟(b)的產(chǎn)物去保護(hù)從而生成(6→8)二聚體。
27.一種制備具有(86)鍵合的矢車(chē)菊苷配質(zhì)二聚體的方法，所述方法包括以下步驟(a)在鈀(o)的存在下，使第一8-溴保護(hù)的單體與鋰三烷基錫反應(yīng)從而提供受保護(hù)的單體-8-三烷基錫烷；(b)使用四(三苯基膦)鈀(o)的苯溶液，使步驟(a)的產(chǎn)物與第二6-溴保護(hù)的單體偶合生成(8→6)偶合的二聚體；和(c)使步驟(b)的產(chǎn)物去保護(hù)從而生成(8→6)二聚體。
28.一種結(jié)晶的8-溴-四-O-芐基(-)表兒茶素。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了生產(chǎn)具有“n”個(gè)矢車(chē)菊苷配質(zhì)單體單元的線性和分支的矢車(chē)菊苷配質(zhì)低聚物的方法,其中n為2至18。所述方法包括使受保護(hù)的活化單體與未受保護(hù)的單體偶合以生成部分受保護(hù)的(4→8)二聚體。任選用活化的受保護(hù)單體將所述二聚體封端、偶合以生成部分受保護(hù)、任選封端的三聚體并且去保護(hù)。重復(fù)所述步驟以生成更高級(jí)的低聚物。本發(fā)明也提供了生成(8→8)、(8→6)和(6→6)的二聚體和二重分支低聚物的方法。在某些條件下生成結(jié)晶的8－溴四－O－芐基(－)－表兒茶素。
文檔編號(hào)C07D311/32GK1355796SQ00808778
公開(kāi)日2002年6月26日 申請(qǐng)日期2000年3月29日 優(yōu)先權(quán)日1999年4月15日
發(fā)明者L·J·羅曼茨克, A·巴薩克, C·A·湯森 申請(qǐng)人:馬爾斯公司