專利名稱：一類記憶增強(qiáng)肽和它們的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及多肽及它的類似物的合成，更具體的說是記憶增強(qiáng)肽和它的類似物的合成與應(yīng)用。
有關(guān)垂體后葉加壓素(AVP)等多肽能影響動(dòng)物的記憶過程，而對(duì)學(xué)習(xí)未發(fā)現(xiàn)有明顯作用已經(jīng)有了報(bào)導(dǎo)。由于AVP是一類增加血壓和抗利尿的體內(nèi)激素，因此它不適合用于增強(qiáng)記憶方面的臨床治病，為此我們?cè)诎l(fā)明專利記憶增強(qiáng)肽及其應(yīng)用(ZL93112493.X)的基礎(chǔ)上，繼續(xù)對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行改造，藥理試驗(yàn)，希望能改進(jìn)現(xiàn)有專利存在的缺陷，尋找出結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、生產(chǎn)便利、藥理作用更強(qiáng)的新記憶增強(qiáng)肽，能在臨床上對(duì)未成年兒童智力發(fā)育，改善成年人智力障礙或健忘癥，促進(jìn)人的記憶功能。
本發(fā)明目的是提供一類能增加記憶的記憶增強(qiáng)肽，促進(jìn)未成年兒童的智力發(fā)育，改善成年人智力障礙或健忘癥，甚至作為對(duì)老年性癡呆患者病情的改善的藥物。
本發(fā)明結(jié)合生物活性的測(cè)定設(shè)計(jì)出一類具有記憶、學(xué)習(xí)功能的新化合物，它的結(jié)構(gòu)通式如下 X為Ala，Leu；Ile；Cys；Phe；Tyr；Val；R1為PyroGlu；HR2為S-S-C(CH3)3； S-(CH3)3；具有類似能穩(wěn)定該分子空間構(gòu)象的疏水側(cè)鏈；
當(dāng)R1為PyroGlu時(shí)，R2為S-S-(CH3)3；S-(CH3)3或具有類似能穩(wěn)定該分子空間構(gòu)象的疏水側(cè)鏈；R1為H時(shí)，R2為S-S-(CH2)； S-(CH)3或具有類似能穩(wěn)定該分子空間構(gòu)象的疏水側(cè)鏈；X為Ala，Leu；Ile；Cys；Phe；Tyr；Val。
本發(fā)明可通過固相多肽合成法或液相多肽合成法逐步合成制得，以下是合成步驟 (I)肽的合成 反應(yīng)過夜。反應(yīng)過夜。反應(yīng)48小時(shí)反應(yīng)過夜?！鶦bz-PyroGlu-Asn-Cys(S-Bu′)-Pro-Arg(Tos)-OCH2φ 2、Asn.Cys(Bu′).Pro.Arg的化學(xué)合成 (1)TFA/CH2Cl2(1∶1)30分鐘(2)Et3N/CH2Cl2反應(yīng)過夜， 反應(yīng)過夜同上1，2處理。反應(yīng)48小時(shí)， 本發(fā)明所合成的記憶增強(qiáng)肽的藥理試驗(yàn)采用分成給藥組、對(duì)照組及模型組三組動(dòng)物分別給記憶肽、生理鹽水、生理鹽水及東莨菪鹼等實(shí)驗(yàn)組，除對(duì)照組外的各組動(dòng)物在給藥后50分鐘注射東莨菪鹼，10分鐘后開始訓(xùn)練，將動(dòng)物放入反應(yīng)箱內(nèi)適應(yīng)環(huán)境3分鐘，然后即通以36V的交流電。動(dòng)物受到電擊，其正常反應(yīng)是跳回平臺(tái)以躲避傷害性刺激，多數(shù)動(dòng)物可能再次或多次跳至銅柵上，受到電擊又迅速跳回平臺(tái)上，反復(fù)訓(xùn)練5分鐘記錄第一次跳下平臺(tái)的潛伏期和5分鐘內(nèi)的錯(cuò)誤次數(shù)以此作為學(xué)習(xí)成績(jī)。24小時(shí)后重新測(cè)驗(yàn)，以此作為記憶保持測(cè)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)證明從表1可見，記憶增強(qiáng)肽能明顯改善東莨菪鹼所致小白鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙。
與模型組比效0.5.ug和1μg/Kg劑量，記憶增強(qiáng)肽明顯改善東莨菪鹼所致的學(xué)習(xí)記憶障礙，其潛伏期的延長(zhǎng)和錯(cuò)誤次數(shù)的減少均有顯著性差異(P＜0.01)與石杉鹼甲(100μg/Kg)比較；記憶增強(qiáng)肽(0.μg/Kg和1μg/Kg)對(duì)東莨菪鹼所致學(xué)習(xí)障礙的改善作用比石杉鹼甲好。
表1記憶肽MEP-531對(duì)小白鼠學(xué)習(xí)記憶的影響組別 給藥劑量 東莨菪鹼 學(xué)習(xí)成績(jī) 記憶成績(jī)?chǔ)蘥/Kg mg/Kg 潛伏期(s) 錯(cuò)誤次數(shù) 潛伏期(s) 潛伏期(s)對(duì)照組 生理鹽水 - 131.4±98.3 0.9±0.87 285.4±22.60.4±0.51模型組 生理鹽水 1 27.5±29.4▲▲ 2.3±1.4▲140±117▲▲ 1.9±1.2▲▲石杉鹼甲100 1 120.5±114.9* 1.3±2.3**231.9±78**0.9±0.7**MEP-531 0.25 1 78.8±118.7 0.3±0.48** 197.6±75.10.9±0.56**MEP-531 0.5 1 241.6±51.9** 0.2±0.4**245.5±62.9** 0.5±0.5**MEP-531 11 267.6±31.4** 0.3±0.5**282.8±33.4** 0.3±0.5**▲＜0.05，▲▲＜0.01，與對(duì)照組比較*＜0.005，**＜0.01，與模型組比較氨基酸組成合理，分析結(jié)果如下實(shí)驗(yàn)值A(chǔ)sn1.05Arg0.96 Pro1.08Cys未測(cè)理論 Asn1.00Arg1.00 Pro1.00質(zhì)譜分析分子離子峰544.3X為Ala；Leu；Ile；Phe；Tyr；Val時(shí)，同樣可采用上述方法制得相應(yīng)產(chǎn)物。
實(shí)施例2 PyroGlu-Asn.Cys(S-But).Pro.Arg(MEP531)的化學(xué)合成2gMerrifield Resin開始采用Boc系統(tǒng)逐步固相法合成首先從 反應(yīng)過夜———→Boc-Pro-Arg(Tos)-OCH2φ同上①，②步處理 反應(yīng)過夜 反應(yīng)48小時(shí) 反應(yīng)過夜-----→Cbz-PyroGlu-Asn-Cys(S-Bu′)-Pro-Arg(Tos)OCH2φ 通過上述反應(yīng)得五肽粗品，經(jīng)硅膠柱層析分離純化再經(jīng)C18HPLC分離純化，HPLC層析中的出峰時(shí)間為19.5分鐘，溶劑系統(tǒng)為TEA/乙腈系統(tǒng)。氨基酸組成合理，分析結(jié)果如下實(shí)驗(yàn)值A(chǔ)sn1.01Glu1.03Arg0.96Pro0.95Cys未測(cè)理論 Asn1.00Glu1.00Arg1.00Pro1.00質(zhì)譜分析分子離子峰687X為Ala；Leu；Ile；Phe；Tyr；Val時(shí)，同樣可采用上述方法制得相應(yīng)產(chǎn)物。
權(quán)利要求
1.一類記憶增強(qiáng)肽，其特征在于它的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為 X為Ala；Leu；Ile；Cys；Phe；Tyr；Val；R1為PyroGlu；H；R2為S-S-(CH3)3；S-(CH3)3；具有能穩(wěn)定分子空間構(gòu)象的疏水側(cè)鏈基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一類記憶增強(qiáng)肽，其特征在于當(dāng)R1為PyroGlu時(shí)，R2為S-S-(CH3)3或S-(CH3)3或具有類似能穩(wěn)定該分子空間構(gòu)象的疏水側(cè)鏈基；當(dāng)R1為H，R2為S-S-(CH3)3或S-(CH3)3或具有類似能穩(wěn)定該分子空間構(gòu)象的疏水側(cè)鏈基；其X為Ala；Leu，Ile；Cys；Phe；Tyr；Val。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一類記憶增強(qiáng)肽，其特征在于通過固相多肽合成法或液相多肽合成法逐步合成制得。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一類記憶增強(qiáng)肽，其特征在于它們?cè)谥苽涓纳朴洃浾系K或促進(jìn)兒童智力發(fā)育的藥物或保健品中應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明對(duì)記憶增強(qiáng)肽通過化學(xué)合成多肽結(jié)構(gòu)改進(jìn),通過動(dòng)物試驗(yàn)證明該類化合物具有較明顯的生理活性有望對(duì)改善成年人智力障礙或健忘癥并促進(jìn)未成年兒童的智力發(fā)育,甚至可為老年癡呆患者的臨床藥物。
文檔編號(hào)C07K7/06GK1331083SQ0011687
公開日2002年1月16日 申請(qǐng)日期2000年6月30日 優(yōu)先權(quán)日2000年6月30日
發(fā)明者杜雨蒼, 沈金煥 申請(qǐng)人:上海中科英泰生物技術(shù)有限公司