本發(fā)明屬于微生物肥料技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種防治黃瓜真菌病害的液體微生物肥料及其制備方法。
背景技術(shù)：
黃瓜，別名王瓜、胡瓜，為葫蘆科黃瓜屬一年生攀緣性草本植物，起源于喜馬拉雅山南麓的熱帶雨林地區(qū)。黃瓜具有產(chǎn)量高、營(yíng)養(yǎng)豐富、效益好等特點(diǎn)，是世界上栽培最普遍的一種瓜類蔬菜，也是我國(guó)栽培面積最大、種植范圍最廣的主要蔬菜作物之一。
真菌病害，如白粉病、霜霉病等，是黃瓜栽培中普遍發(fā)生的病害，流行年份可減產(chǎn)30～50％。國(guó)內(nèi)外關(guān)于防治黃瓜真菌病害的方法主要包括：選用抗性品種、化學(xué)農(nóng)藥防治、物理防治、生物防治和生態(tài)防治等，其中，化學(xué)農(nóng)藥防治是最普遍的防治方法。然而，農(nóng)藥的不合理使用不僅達(dá)不到預(yù)期的防治效果，而且容易造成藥害，污染環(huán)境，增加在農(nóng)產(chǎn)品上的農(nóng)藥殘留量；農(nóng)藥的盲目施用還會(huì)殺傷天敵，增強(qiáng)病菌或害蟲的抗藥性，進(jìn)一步增加病蟲害防治的難度，增加生產(chǎn)成本。因此，黃瓜生產(chǎn)過程中合理防治方法的選擇，對(duì)減少病原菌產(chǎn)生抗藥性、降低化學(xué)藥劑施用量、減少環(huán)境污染、提高黃瓜食用安全具有重要意義。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一種防治黃瓜真菌病害的液體微生物肥料，有效解決現(xiàn)有技術(shù)中黃瓜有害物質(zhì)或農(nóng)藥殘留、病原菌產(chǎn)生抗藥性及環(huán)境污染等問題，并能有效提高黃瓜抗病性，防治真菌病害，改善黃瓜品質(zhì)，提高黃瓜產(chǎn)量及食用安全，對(duì)于促進(jìn)綠色農(nóng)業(yè)發(fā)展和綠色食品生產(chǎn)具有重要意義。
本發(fā)明通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：
一種防治黃瓜真菌病害的液體微生物肥料，包括下述重量份的原材料：細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液50～100份、碳酸鈣60～80份、硫酸鎂10～40份、硼砂0.5～1份、硫酸鐵0.5～1份、硫酸錳0.1～0.5份、硫酸鋅0.001～0.01份、硫酸銅0.001～0.007份、鉬酸銨0.001～0.005份。
優(yōu)選地，一種防治黃瓜真菌病害的液體微生物肥料，包括下述重量份的原材料：細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液60～70份、碳酸鈣65～75份、硫酸鎂20～30份、硼砂0.6～0.8份、硫酸鐵0.6～0.8份、硫酸錳0.2～0.4份、硫酸鋅0.003～0.007份、硫酸銅0.003～0.005份、鉬酸銨0.002～0.004份。
優(yōu)選地，一種防治黃瓜真菌病害的液體微生物肥料，包括下述重量份的原材料：細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液65份、碳酸鈣70份、硫酸鎂28份、硼砂0.7份、硫酸鐵0.7份、硫酸錳0.3份、硫酸鋅0.005份、硫酸銅0.004份、鉬酸銨0.003份。
本發(fā)明還提供一種防治黃瓜真菌病害的液體微生物肥料的制備方法，包括以下步驟：
(1)細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液的制備：
a、海藻提取液的制備：稱取海藻200～400份，粉碎，過100目篩，以料液質(zhì)量比1：6的量加入去離子水，加熱滅酶，得懸浮液；調(diào)整懸浮液的ph至7.0，加入α～淀粉酶、中性蛋白酶、纖維素酶、非淀粉多糖酶，在超聲波輔助作用下酶解，期間采用攪拌機(jī)勻速攪拌；酶解結(jié)束后滅酶、離心，取上清液，得海藻提取液；
b、液體培養(yǎng)基的制備：向步驟(a)所得海藻提取液中加入葡萄糖、酵母汁、磷酸二氫鉀、氯化鈉、硫酸亞鐵，添加量分別為海藻提取液質(zhì)量的1～3％、1～2％、0.01～0.05％、0.02～0.05％、0.001～0.005％，ph調(diào)至7.0～7.4；
c、發(fā)酵液的制備：向裝有步驟(b)所制備的液體培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，接種活化后的細(xì)黃鏈霉菌，振蕩發(fā)酵培養(yǎng)，得到的發(fā)酵液中細(xì)黃鏈霉菌的菌落形成單位為細(xì)黃鏈霉菌≥2.0×109cfu/ml；
(2)液體微生物肥料的制備：
按重量份稱取碳酸鈣、硫酸鎂、硼砂、硫酸鐵、硫酸錳、硫酸鋅、硫酸銅、鉬酸銨及步驟(1)所得細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液，混合均勻，既得本發(fā)明所述的液體微生物肥料。
優(yōu)選地，步驟(1)中α～淀粉酶、中性蛋白酶、纖維素酶、非淀粉多糖酶的加入量依次為海藻質(zhì)量的3～5％、1～2％、2～3％、1～2％。
優(yōu)選地，步驟(1)中酶解條件為：酶解溫度50～70℃，超聲功率300w，酶解時(shí)間為30～60min。
優(yōu)選地，步驟(1)中細(xì)黃鏈霉菌接種重量百分比為1％～5％。
優(yōu)選地，步驟(1)中發(fā)酵培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度28～32℃，培養(yǎng)時(shí)間4～6d，振蕩培養(yǎng)轉(zhuǎn)速為160～260rpm/min。
本發(fā)明所述各成分作用機(jī)理如下：
海藻：海藻是海洋中分布最廣的生物，種類繁多，有綠藻門、褐藻門、藍(lán)藻門、紅藻門等，這些藻體中含有豐富的海藻蛋白質(zhì)、脂肪、維生素、礦物質(zhì)以及具有特殊功效的生理活性物質(zhì)(如海藻多糖、藻骯酸、酶、多種植物激素、多酚等)，能夠誘發(fā)作物生長(zhǎng)和降低非生物脅迫的機(jī)制，激發(fā)作物的防御能力和滲透保護(hù)功能，且無毒無害無污染，是綠色食品的首選肥料。其次，海藻中所含的海藻酸，具有絡(luò)合金屬離子的作用，將其與中微量元素配合使用即可以保持養(yǎng)分，減少肥料流失，提高肥料利用率。
細(xì)黃鏈霉菌：細(xì)黃鏈霉菌是一種資源豐富的放線菌，能產(chǎn)生紡錘菌素、螺旋霉素等抗菌物質(zhì)，抑制革蘭氏陽性及陰性細(xì)菌、酵母菌、絲狀真菌的生長(zhǎng)繁殖，促進(jìn)植物生長(zhǎng)，預(yù)防病害發(fā)生。研究表明，細(xì)黃鏈霉菌對(duì)苜蓿霜霉病、白粉病、褐斑病、根腐病等農(nóng)作物病原菌顯示出很好的防治效果，常用于農(nóng)業(yè)上防病保苗；細(xì)黃鏈霉菌還可用作菌肥，轉(zhuǎn)化土壤中氮磷元素，提高土壤肥力，并有刺激作物生長(zhǎng)的作用。
鈣：鈣是細(xì)胞壁中膠層的組成成分，使細(xì)胞與細(xì)胞能聯(lián)結(jié)起來形成組織，并使植物的器官或個(gè)體具有一定的機(jī)械強(qiáng)度；其次，鈣對(duì)作物體內(nèi)氮代謝有一定的影響，且能中和作物代謝過程中形成的有機(jī)酸，對(duì)穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)環(huán)境有重要的作用；鈣還能減低原生質(zhì)膠體的分散度，使細(xì)胞的充水度、粘性、彈性及滲透性等維持在正常的生理狀態(tài)，有利于作物的正常代謝。番茄屬喜鈣的蔬菜作物，對(duì)鈣反應(yīng)敏感，番茄缺鈣時(shí)，植株瘦弱，根系不發(fā)達(dá)，且會(huì)誘發(fā)生理性病害，如臍腐病等。
鎂：鎂是植物葉綠素和聚核糖體的組成成分，也是多種酶的活化劑，能促進(jìn)作物體內(nèi)維生素a、維生素c的形成。因此，施用鎂肥能促進(jìn)農(nóng)作物的光合作用及蛋白質(zhì)的合成，提高農(nóng)作物產(chǎn)量，改善農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)。另據(jù)報(bào)道，鎂還能促進(jìn)植物對(duì)硅的吸收，有利于防止病菌侵入。
硼：硼是植物多種酶類的組成成分，參與植物體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成、氮素與糖類的代謝。硼能促進(jìn)碳水化合物的正常運(yùn)轉(zhuǎn)及生殖器官的正常發(fā)育，改善氧的供應(yīng)，對(duì)根系的發(fā)育及果實(shí)、種子的形成有重要影響。其次，硼還能調(diào)節(jié)植物對(duì)水分的吸收和氧化—還原過程，也能促進(jìn)豆科根瘤的形成。
鐵：鐵參與葉綠素的合成,它是組成某些酶和蛋白質(zhì)的成分，參與植物體內(nèi)的氧化—還原過程和碳水化合物的制造。
錳：錳參與蛋白質(zhì)和無機(jī)酸的代謝、光合作用中二氧化碳的同化、碳水化合物的分解以及胡蘿卜素、核黃素和抗壞血酸的形成等。錳對(duì)葉綠素的形成和糖類的積累轉(zhuǎn)運(yùn)、種子萌發(fā)、幼苗生長(zhǎng)及植株結(jié)實(shí)等均有很好的促進(jìn)作用。錳是多種酶的活化劑，對(duì)植物呼吸、蛋白質(zhì)分解、硝態(tài)氮還原均具有顯著作用。
鋅：鋅是植物生長(zhǎng)發(fā)育必需的微量元素，是植物體內(nèi)許多酶的組成成分和活化劑，直接參與植物生長(zhǎng)素的形成，對(duì)植物體內(nèi)物質(zhì)水解、氧化—還原過程有重要作用，還可催化蛋白質(zhì)合成，促進(jìn)種子成熟等。
銅：銅是植物體內(nèi)組成多種氧化酶的成分，也是呼吸作用的觸媒，它參與葉綠素的合成以及糖類與蛋白質(zhì)的代謝。銅還具有提高葉綠素穩(wěn)定性的能力，避免葉綠素過早遭受破壞，有利于葉片更好地進(jìn)行光合作用。
鉬：鉬存在于生物催化劑之中，參與共生性生物固氮與蛋白質(zhì)的合成，并增進(jìn)光合作用的強(qiáng)度。其次，植物依賴鉬進(jìn)行硝酸還原，消除酸性土壤中活性鋁在植物體內(nèi)累積而產(chǎn)生的毒害作用。
本發(fā)明的有益效果：
1、本發(fā)明采用超聲輔助酶解的方法制備海藻提取液，避免了海藻加工過程中強(qiáng)堿、高溫、高壓的破壞作用，完全保留了海藻中豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；
2、本發(fā)明將超聲輔助酶解制備的海藻提取液用于細(xì)黃鏈霉菌的發(fā)酵培養(yǎng)，所得發(fā)酵液兼具海藻活性和細(xì)黃鏈霉菌的活體調(diào)節(jié)功能，實(shí)現(xiàn)了海藻生物活性與生物菌劑的有機(jī)統(tǒng)一；
3、本發(fā)明將細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液與中微量元素復(fù)配，所得液體肥料配方科學(xué)、合理，營(yíng)養(yǎng)全面、豐富，不僅可滿足黃瓜生長(zhǎng)發(fā)育的需要，還可有效提高黃瓜抗病性，防治真菌病害，并可改善黃瓜品質(zhì)，提高黃瓜產(chǎn)量及食用安全，對(duì)于促進(jìn)綠色農(nóng)業(yè)發(fā)展和綠色食品生產(chǎn)具有重要意義。
具體實(shí)施方式
為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
實(shí)施例1
一種防治黃瓜真菌病害的液體微生物肥料，包括下述重量份的原材料：細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液50份、碳酸鈣60份、硫酸鎂30份、硼砂0.8份、硫酸鐵0.5份、硫酸錳0.1份、硫酸鋅0.003份、硫酸銅0.001份、鉬酸銨0.004份。
上述一種防治黃瓜真菌病害的液體微生物肥料的制備方法，包括如下步驟：
(1)細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液的制備：
a、海藻提取液的制備：稱取海藻400份，粉碎，過100目篩，以料液質(zhì)量比1：6的量加入去離子水，加熱滅酶，得懸浮液；調(diào)整懸浮液的ph至7.0，加入α～淀粉酶、中性蛋白酶、纖維素酶、非淀粉多糖酶，其加入量依次為海藻質(zhì)量的3.5％、1.3％、2.3％、1.3％，在超聲波輔助作用下酶解，酶解溫度55℃，超聲功率300w，酶解時(shí)間為50min，期間采用攪拌機(jī)勻速攪拌；酶解結(jié)束后滅酶、離心，取上清液，得海藻提取液；
b、液體培養(yǎng)基的制備：向步驟(a)所得海藻提取液中加入葡萄糖、酵母汁、磷酸二氫鉀、氯化鈉、硫酸亞鐵，添加量分別為海藻提取液質(zhì)量的2.5％、1.3％、0.04％、0.03％、0.002％，ph調(diào)至7.4；
c、發(fā)酵液的制備：向裝有步驟(b)所制備的液體培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，接種重量百分比為2％的活化后的細(xì)黃鏈霉菌，于27℃，200rpm/min振蕩培養(yǎng)5d，得到的發(fā)酵液中細(xì)黃鏈霉菌的菌落形成單位為細(xì)黃鏈霉菌≥2.0×109cfu/ml；
(2)液體微生物肥料的制備：
按重量份稱取碳酸鈣、硫酸鎂、硼砂、硫酸鐵、硫酸錳、硫酸鋅、硫酸銅、鉬酸銨及步驟(1)所得細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液，混合均勻，既得本發(fā)明所述的液體微生物肥料。
實(shí)施例2
一種防治黃瓜真菌病害的液體微生物肥料，包括下述重量份的原材料：細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液60份、碳酸鈣65份、硫酸鎂40份、硼砂0.5份、硫酸鐵0.6份、硫酸錳0.2份、硫酸鋅0.001份、硫酸銅0.005份、鉬酸銨0.005份。
上述一種防治黃瓜真菌病害的液體微生物肥料的制備方法，包括如下步驟：
(1)細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液的制備：
a、海藻提取液的制備：稱取海藻320份，粉碎，過100目篩，以料液質(zhì)量比1：6的量加入去離子水，加熱滅酶，得懸浮液；調(diào)整懸浮液的ph至7.0，加入α～淀粉酶、中性蛋白酶、纖維素酶、非淀粉多糖酶，其加入量依次為海藻質(zhì)量的3％、2％、3％、1％，在超聲波輔助作用下酶解，酶解溫度50℃，超聲功率300w，酶解時(shí)間為60min，期間采用攪拌機(jī)勻速攪拌；酶解結(jié)束后滅酶、離心，取上清液，得海藻提取液；
b、液體培養(yǎng)基的制備：向步驟(a)所得海藻提取液中加入葡萄糖、酵母汁、磷酸二氫鉀、氯化鈉、硫酸亞鐵，添加量分別為海藻提取液質(zhì)量的1％、2％、0.01％、0.05％、0.001％，ph調(diào)至7.0；
c、發(fā)酵液的制備：向裝有步驟(b)所制備的液體培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，接種重量百分比為2％的活化后的細(xì)黃鏈霉菌，于32℃，160rpm/min振蕩培養(yǎng)6d，得到的發(fā)酵液中細(xì)黃鏈霉菌的菌落形成單位為細(xì)黃鏈霉菌≥2.0×109cfu/ml；
(2)液體微生物肥料的制備：
按重量份稱取碳酸鈣、硫酸鎂、硼砂、硫酸鐵、硫酸錳、硫酸鋅、硫酸銅、鉬酸銨及步驟(1)所得細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液，混合均勻，既得本發(fā)明所述的液體微生物肥料。
實(shí)施例3
一種防治黃瓜真菌病害的液體微生物肥料，包括下述重量份的原材料：細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液65份、碳酸鈣70份、硫酸鎂28份、硼砂0.7份、硫酸鐵0.7份、硫酸錳0.3份、硫酸鋅0.005份、硫酸銅0.004份、鉬酸銨0.003份。
上述一種防治黃瓜真菌病害的液體微生物肥料的制備方法，包括如下步驟：
(1)細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液的制備：
a、海藻提取液的制備：稱取海藻300份，粉碎，過100目篩，以料液質(zhì)量比1：6的量加入去離子水，加熱滅酶，得懸浮液；調(diào)整懸浮液的ph至7.0，加入α～淀粉酶、中性蛋白酶、纖維素酶、非淀粉多糖酶，其加入量依次為海藻質(zhì)量的4％、1.5％、2.5％、1.5％，在超聲波輔助作用下酶解，酶解溫度60℃，超聲功率300w，酶解時(shí)間為40min，期間采用攪拌機(jī)勻速攪拌；酶解結(jié)束后滅酶、離心，取上清液，得海藻提取液；
b、液體培養(yǎng)基的制備：向步驟(a)所得海藻提取液中加入葡萄糖、酵母汁、磷酸二氫鉀、氯化鈉、硫酸亞鐵，添加量分別為海藻提取液質(zhì)量的2％、1.5％、0.03％、0.03％、0.003％，ph調(diào)至7.3；
c、發(fā)酵液的制備：向裝有步驟(b)所制備的液體培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，接種重量百分比為2％的活化后的細(xì)黃鏈霉菌，于29℃，230rpm/min振蕩培養(yǎng)5d，得到的發(fā)酵液中細(xì)黃鏈霉菌的菌落形成單位為細(xì)黃鏈霉菌≥2.0×109cfu/ml；
(2)液體微生物肥料的制備：
按重量份稱取碳酸鈣、硫酸鎂、硼砂、硫酸鐵、硫酸錳、硫酸鋅、硫酸銅、鉬酸銨及步驟(1)所得細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液，混合均勻，既得本發(fā)明所述的液體微生物肥料。
實(shí)施例4
一種防治黃瓜真菌病害的液體微生物肥料，包括下述重量份的原材料：細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液70份、碳酸鈣80份、硫酸鎂20份、硼砂0.6份、硫酸鐵1份、硫酸錳0.4份、硫酸鋅0.01份、硫酸銅0.003份、鉬酸銨0.001份。
上述一種防治黃瓜真菌病害的液體微生物肥料的制備方法，包括如下步驟：
(1)細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液的制備：
a、海藻提取液的制備：稱取海藻270份，粉碎，過100目篩，以料液質(zhì)量比1：6的量加入去離子水，加熱滅酶，得懸浮液；調(diào)整懸浮液的ph至7.0，加入α～淀粉酶、中性蛋白酶、纖維素酶、非淀粉多糖酶，其加入量依次為海藻質(zhì)量的5％、1％、2％、2％，在超聲波輔助作用下酶解，酶解溫度70℃，超聲功率300w，酶解時(shí)間為30min，期間采用攪拌機(jī)勻速攪拌；酶解結(jié)束后滅酶、離心，取上清液，得海藻提取液；
b、液體培養(yǎng)基的制備：向步驟(a)所得海藻提取液中加入葡萄糖、酵母汁、磷酸二氫鉀、氯化鈉、硫酸亞鐵，添加量分別為海藻提取液質(zhì)量的3％、1％、0.05％、0.02％、0.005％，ph調(diào)至7.2；
c、發(fā)酵液的制備：向裝有步驟(b)所制備的液體培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，接種重量百分比為2％的活化后的細(xì)黃鏈霉菌，于28℃，260rpm/min振蕩培養(yǎng)4d，得到的發(fā)酵液中細(xì)黃鏈霉菌的菌落形成單位為細(xì)黃鏈霉菌≥2.0×109cfu/ml；
(2)液體微生物肥料的制備：
按重量份稱取碳酸鈣、硫酸鎂、硼砂、硫酸鐵、硫酸錳、硫酸鋅、硫酸銅、鉬酸銨及步驟(1)所得細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液，混合均勻，既得本發(fā)明所述的液體微生物肥料。
實(shí)施例5
一種防治黃瓜真菌病害的液體微生物肥料，包括下述重量份的原材料：細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液100份、碳酸鈣75份、硫酸鎂10份、硼砂1份、硫酸鐵0.8份、硫酸錳0.5份、硫酸鋅0.007份、硫酸銅0.007份、鉬酸銨0.002份。
上述一種防治黃瓜真菌病害的液體微生物肥料的制備方法，包括如下步驟：
(1)細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液的制備：
a、海藻提取液的制備：稱取海藻200份，粉碎，過100目篩，以料液質(zhì)量比1：6的量加入去離子水，加熱滅酶，得懸浮液；調(diào)整懸浮液的ph至7.0，加入α～淀粉酶、中性蛋白酶、纖維素酶、非淀粉多糖酶，其加入量依次為海藻質(zhì)量的4.5％、1.8％、2.7％、1.7％，在超聲波輔助作用下酶解，酶解溫度65℃，超聲功率300w，酶解時(shí)間為45min，期間采用攪拌機(jī)勻速攪拌；酶解結(jié)束后滅酶、離心，取上清液，得海藻提取液；
b、液體培養(yǎng)基的制備：向步驟(a)所得海藻提取液中加入葡萄糖、酵母汁、磷酸二氫鉀、氯化鈉、硫酸亞鐵，添加量分別為海藻提取液質(zhì)量的1.5％、1.8％、0.02％、0.04％、0.004％，ph調(diào)至7.1；
c、發(fā)酵液的制備：向裝有步驟(b)所制備的液體培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，接種重量百分比為2％的活化后的細(xì)黃鏈霉菌，于30℃，180rpm/min振蕩培養(yǎng)6d，得到的發(fā)酵液中細(xì)黃鏈霉菌的菌落形成單位為細(xì)黃鏈霉菌≥2.0×109cfu/ml；
(2)液體微生物肥料的制備：
按重量份稱取碳酸鈣、硫酸鎂、硼砂、硫酸鐵、硫酸錳、硫酸鋅、硫酸銅、鉬酸銨及步驟(1)所得細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液，混合均勻，既得本發(fā)明所述的液體微生物肥料。
對(duì)比例1
液體肥料中不添加細(xì)黃鏈霉菌，包括下述重量份的原材料：碳酸鈣70份、硫酸鎂28份、硼砂0.7份、硫酸鐵0.7份、硫酸錳0.3份、硫酸鋅0.005份、硫酸銅0.004份、鉬酸銨0.003份。
上述液體肥料的制備方法，包括如下步驟：
(1)海藻提取液的制備：稱取海藻300份，粉碎，過100目篩，以料液質(zhì)量比1：6的量加入去離子水，加熱滅酶，得懸浮液；調(diào)整懸浮液的ph至7.0，加入α～淀粉酶、中性蛋白酶、纖維素酶、非淀粉多糖酶，其加入量依次為海藻質(zhì)量的4％、1.5％、2.5％、1.5％，在超聲波輔助作用下酶解，酶解溫度60℃，超聲功率300w，酶解時(shí)間為40min，期間采用攪拌機(jī)勻速攪拌；酶解結(jié)束后滅酶、離心，取上清液，得海藻提取液；
(2)向步驟(1)所得海藻提取液中加入葡萄糖、酵母汁、磷酸二氫鉀、氯化鈉、硫酸亞鐵，添加量分別為海藻提取液質(zhì)量的3％、1％、0.05％、0.02％、0.005％，ph調(diào)至7.2，得混合液a；
(3)按重量份稱取碳酸鈣、硫酸鎂、硼砂、硫酸鐵、硫酸錳、硫酸鋅、硫酸銅、鉬酸銨及步驟(2)所得混合液a，混合均勻，既得本發(fā)明所述的液體肥料。
試驗(yàn)例1
技術(shù)指標(biāo)的測(cè)定
按照微生物肥料的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(gb20287-2006)，檢測(cè)按上述實(shí)施例1～5和對(duì)比例1制備的肥料樣品中的有效活菌數(shù)、雜菌率、ph及無害化指標(biāo)。
檢測(cè)結(jié)果：檢測(cè)結(jié)果如下表1所示。
表1技術(shù)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果
經(jīng)檢測(cè)，本發(fā)明的一種防治黃瓜真菌病害的液體微生物肥料符合微生物肥料的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(gb20287-2006)。與對(duì)比例1相比，本發(fā)明的實(shí)施例1～5中有效活菌數(shù)顯著增加，雜菌率顯著降低，且實(shí)施例3中所含的有效活菌數(shù)最高，為5.4億/毫升，雜菌率最低，為3.0％。有效活菌數(shù)是微生物肥料產(chǎn)品主要的指標(biāo)，說明本發(fā)明的一種防治黃瓜真菌病害的液體微生物肥料具有優(yōu)良的品質(zhì)，用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)可以顯著提高農(nóng)產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量。
試驗(yàn)例2
本發(fā)明的一種防治黃瓜真菌病害的液體微生物肥料對(duì)黃瓜病原真菌的抑制作用
采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定按上述實(shí)施例1～5和對(duì)比例1制備的肥料樣品對(duì)6種供試病原菌(古巴假霜霉、葫蘆科白粉菌、瓜類單囊殼白粉菌、尖孢鐮刀菌、立枯絲核菌、菌核病菌)的抑制作用。將肥料樣品用無菌去離子水稀釋成10、60、120、200倍，加入到定量的滅菌后冷卻至50℃左右的pda培養(yǎng)基中，充分搖勻，制成含藥平板。以加與樣品等量無菌去離子水為對(duì)照，每處理重復(fù)3次。用直徑5mm的打孔器打取生長(zhǎng)良好的菌柄，將菌柄菌絲面向下接種于含藥平板中央。接好菌種后放置于25℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)數(shù)天，測(cè)量菌落直徑，計(jì)算菌絲生長(zhǎng)抑制率。由第三天開始檢查結(jié)果，待對(duì)照菌落長(zhǎng)至平板邊緣時(shí)停止檢查。按下面式子計(jì)算抑菌率。
抑菌率＝[(對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑)/(對(duì)照菌落直徑-5)]×100％
測(cè)定結(jié)果：檢測(cè)結(jié)果如下表2所示。
表2對(duì)供試病原菌的抑制作用
由表2可知，與對(duì)比例1相比，本發(fā)明實(shí)施例1～5制備的一種防治黃瓜真菌病害的液體微生物肥料稀釋至10倍、60倍、120倍、200倍時(shí)，對(duì)6種病菌的抑菌率均遠(yuǎn)高于對(duì)比例1，抑菌效果顯著。其中，當(dāng)肥料樣品稀釋至10倍、60倍時(shí)，對(duì)6種病菌的抑菌率均達(dá)到100％；當(dāng)肥料樣品稀釋至120倍時(shí)，對(duì)古巴假霜霉、葫蘆科白粉菌、瓜類單囊殼白粉菌的抑制作用較強(qiáng)，抑菌率為89.2～91.5％，對(duì)尖孢鐮刀菌、立枯絲核菌、菌核病菌的抑菌率為79.7～82.7％；當(dāng)肥料樣品稀釋至200倍時(shí)，對(duì)古巴假霜霉、葫蘆科白粉菌、瓜類單囊殼白粉菌的抑菌率為69.4～72.8％，對(duì)尖孢鐮刀菌、立枯絲核菌、菌核病菌的抑菌率為59.8～62.1％。
試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的一種防治黃瓜真菌病害的液體微生物肥料能夠有效防治古巴假霜霉、葫蘆科白粉菌、瓜類單囊殼白粉菌、尖孢鐮刀菌、立枯絲核菌、菌核病菌感染的真菌病害，應(yīng)用前景廣闊。
試驗(yàn)例3
本發(fā)明的一種防治黃瓜真菌病害的液體微生物肥料對(duì)黃瓜產(chǎn)量和品質(zhì)的影響
試驗(yàn)在日光溫室進(jìn)行，供試黃瓜品種為新泰密刺，試驗(yàn)采用完全隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，每塊試驗(yàn)小區(qū)面積為3.5m2。試驗(yàn)共設(shè)6個(gè)處理，處理1為清水對(duì)照，處理2～6為按上述實(shí)施例1～5制備的液體微生物肥料樣品，每個(gè)處理重復(fù)3次。處理2～6于黃瓜初花期、初果期、盛果期各噴施或灌根實(shí)施例1～5制備的液體微生物肥料一次，初花期噴施量或灌根量為1kg/畝，初果期噴施量或灌根量為2.5kg/畝，盛果期噴施量或灌根量為3kg/畝；處理1于黃瓜初花期、初果期、盛果期各噴施或灌根等量清水。試驗(yàn)田其他的基肥、追肥、灌溉、及其他田間管理等條件均一致。
于黃瓜盛果期采收取樣，并測(cè)定各處理黃瓜產(chǎn)量(單瓜重、瓜條數(shù)和單株產(chǎn)量)及品質(zhì)(可溶性糖含量、維生素c含量和可溶性蛋白含量)。試驗(yàn)結(jié)果如下表3所示。
表3對(duì)黃瓜產(chǎn)量和品質(zhì)的影響
由表3可知，與對(duì)照清水相比，本發(fā)明實(shí)施例1～5制備的一種防治黃瓜真菌病害的液體微生物肥料可以有效提高黃瓜產(chǎn)量，改善黃瓜品質(zhì)，其中，實(shí)施例3效果最佳，與對(duì)照清水相比，黃瓜單瓜重、瓜條數(shù)和單株產(chǎn)量分別提高32.31％、73.52％、81.82％，可溶性糖含量、維生素c含量和可溶性蛋白含量分別提高89.44％、72.18％、54.79％。