冷卻時(shí)由于溶解度降低，溶液變成過飽和而析出晶體。利用溶劑對被提純物質(zhì)及雜志的溶解度不同，可以使被提純物質(zhì)從過飽和溶液中析出。而讓雜質(zhì)全部或大部分仍留在溶液中，從而達(dá)到提純目的。
[0033]結(jié)晶方法的選擇
[0034]結(jié)晶的方法一般有2種:一種是蒸發(fā)溶劑法，即蒸發(fā)溶劑，使溶液由不飽和變?yōu)轱柡?，繼續(xù)蒸發(fā)，過剩的溶質(zhì)就會呈晶體析出的方法，它適用于溫度對溶解度影響不大的物質(zhì)；另一種是冷卻熱飽和溶液法，即先加熱溶液，蒸發(fā)溶劑成飽和溶液，此時(shí)降低熱飽和溶液的溫度，溶解度隨溫度變化較大的溶質(zhì)就會呈晶體析出的方法，此法適用于溫度升高，溶解度也增加的物質(zhì)。而姜黃素溶解度隨溫度升高而升高，所以選用冷卻熱飽和溶液法。
[0035]結(jié)晶與重結(jié)晶溶劑的選擇條件
[0036](I)所選溶劑不與被提純物質(zhì)起化學(xué)反應(yīng)。
[0037](2)在較高溫度時(shí)能溶解大量的被提純物質(zhì)；而在室溫或更低溫度時(shí)，只能溶解很少量的該種物質(zhì)。使被提純物質(zhì)熱易溶，冷難溶。
[0038](3)對雜質(zhì)的溶解非常大或者非常小(前一種情況是使雜質(zhì)留在母液中不隨被提純物晶體一同析出；后一種情況是使雜質(zhì)在熱過濾時(shí)被濾去)。
[0039](4)容易揮發(fā)(溶劑的沸點(diǎn)較低)，易與結(jié)晶分離除去。
[0040](5)能給出較好的晶體。
[0041](6)無毒或毒性很小，便于操作。
[0042](7)價(jià)廉易得，回收率高。
[0043](8)適當(dāng)時(shí)候可以選用混合溶劑。
[0044]結(jié)晶試劑及溫度的確定
[0045]已有用甲醇-水，正丙醇用于姜黃素的結(jié)晶，考慮到乙醇毒性及刺激性都較小，所以選用乙醇-水。乙醇的沸點(diǎn)為78.4°C (351.6K)，所以溫度設(shè)為70 °C。
[0046]本發(fā)明的有益效果在于:
[0047]本發(fā)明提供一種從姜黃中提取姜黃素的方法，通過丙酮提取，液液萃取、結(jié)晶與重結(jié)晶，獲得高純度的姜黃素，結(jié)晶后用HPLC檢測純度可達(dá)88%以上，重結(jié)晶后用HPLC檢測純度可達(dá)95 %以上，實(shí)現(xiàn)了姜黃素的純度高，提取成本低，二次污染小。
[0048]本發(fā)明提供的方法解決了傳統(tǒng)工業(yè)生產(chǎn)過程中姜黃素單體純度低的難題，可應(yīng)用于姜黃素的規(guī)模化提取制備生產(chǎn)，提高我國農(nóng)產(chǎn)品的深加工利用水平和農(nóng)產(chǎn)品的附加值。生產(chǎn)的姜黃素晶體可以應(yīng)用于具有抗氧化、延緩老年性記憶衰退等保健食品或者具有保護(hù)心腦血管等相關(guān)藥物的開發(fā)。
【附圖說明】
[0049]圖1為本發(fā)明提供提純結(jié)晶前姜黃素的HPLC光電二極管陣列檢測器(PDA)測定圖。
[0050]圖2為本發(fā)明提供結(jié)晶后姜黃素的HPLC光電二極管陣列檢測器(PDA)測定圖。
[0051]圖3為本發(fā)明提供重結(jié)晶后姜黃素的HPLC光電二極管陣列檢測器(PDA)測定圖。
[0052]附圖標(biāo)記:
[0053]I:姜黃素;2:去甲氧基姜黃素;3:雙去甲氧基姜黃素
【具體實(shí)施方式】
[0054]下面以具體實(shí)施例和附圖來進(jìn)一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案。
[0055]實(shí)施例1
[0056]溶液配制:
[0057]70?85%丙酮的配制:準(zhǔn)確量取700?850mL丙酮，加蒸餾水定容至lOOOmL，配置3000mL備用。
[0058]乙腈-5%乙酸(1:1)的配制:準(zhǔn)確量取500mL乙腈，5%乙酸500mL，混勻，磁性漏斗過濾，密閉保存，備用。
[0059]5 %醋酸水溶液配制:準(zhǔn)確量取50mL醋酸，用雙蒸水定容至100mL，混勻，磁性漏斗過濾，密封保存。配制4000mL備用。
[0060]1.姜黃素的粗提取:
[0061 ] 準(zhǔn)確稱取70.0Og的姜黃粉末，75 %丙酮700mL，超聲15min/次，每次間隔20min。提取3次，減壓回收丙酮，液液萃取，得到棕褐色油狀浸膏，為姜黃素粗提物，稱重15.33g。取1mg姜黃素粗提物，溶于加有10yL甲醇的離心管作為樣品，用HPLC檢測，提取物中姜黃素粗提物的含量為0.72g，提取率為1.03 %。
[0062]2.精制:
[0063]I號萃取劑:石油醚:丙酮:7K = 2:2: l(v/v)。
[0064]2號萃取劑:乙酸乙酯:水=1:1 (v/v)。
[0065]通過用液-液萃取法，按姜黃素粗提物和I號萃取劑的質(zhì)量體積比為1:60，加入后混勻，靜置分層，取下層溶液，進(jìn)行三次萃取，去除提取物中脂溶性雜質(zhì);然后，按姜黃素粗提物和2號萃取劑的質(zhì)量體積比為1:60，，加入后混勻，靜置分層，取上層溶液，進(jìn)行三次萃取，利用姜黃素在兩相中的分配比，去除水溶性雜質(zhì)，干燥，獲得精制姜黃素粉末。萃取前后成分含量檢測，損失率為0.75 %。
[0066]3.結(jié)晶
[0067]由于粗提取和精制制得姜黃素粉末數(shù)量少，不利于結(jié)晶和重結(jié)晶操作，因此重復(fù)上述姜黃素提取和精制步驟來增加精制姜黃素粉末，至精制姜黃素粉末總量為6.1 lg。
[0068]精制姜黃素粉末6.1Ig加入400mL乙醇，混勻后，充分?jǐn)嚢瑁?0°C水浴加熱，加熱過程須不時(shí)攪拌，使姜黃粉末充分溶解，得深紅色澄清透明溶液。后向所得溶液中緩慢加入700C熱蒸餾水35mL，至出現(xiàn)渾濁。再向溶液中加入1mL乙醇，溶液再次變?yōu)樯罴t色澄清透明溶液。將所得溶液從水浴鍋中取出，用封口膜封口，置于冰箱4°C冷藏，靜置36小時(shí)。燒杯壁和燒杯底出現(xiàn)橙黃色針狀結(jié)晶，倒出上清液，將結(jié)晶干燥，得一次結(jié)晶物，稱重3.68g，回收率60.2%。
[0069]制備含量檢測樣品，由于高濃度姜黃素超出檢出限，因此進(jìn)行逐級稀釋，方法為:取I Omg—次結(jié)晶物溶于10yL的甲醇，取5OyL所得溶液中加入5OyL甲醇，稀釋為二倍溶液，然后再取稀釋溶液50yL加入50yL甲醇，制成四倍稀釋液，選取四倍稀釋液作為樣品進(jìn)行HPLC檢測姜黃素含量。
[0070]4.重結(jié)晶
[0071]取結(jié)晶粉末1.66g，溶于ISOmL乙醇，混勻，充分?jǐn)嚢瑁?0°C水浴加熱，加熱過程須不時(shí)攪拌，使結(jié)晶粉末充分溶解，得深紅色澄清透明溶液，后向所得溶液中緩慢加入70°C熱蒸餾水20mL，至出現(xiàn)渾濁。再向溶液中加入I OmL乙醇，溶液再次變?yōu)樯罴t色澄清透明溶液。將所得溶液從水浴鍋中取出，用封口膜封口，置于冰箱4 V中冷藏，靜置48小時(shí)。燒杯壁和燒杯底出現(xiàn)橙紅色針狀結(jié)晶，倒出上清液，將結(jié)晶干燥，稱重得重結(jié)晶1.12g，回收率67.4%。
[0072]制備含量檢測樣品，由于高濃度姜黃素超出檢出限，因此進(jìn)行逐級稀釋，方法為:取I Omg重結(jié)晶溶于I OOyL的甲醇，取50yL所得溶液中加入50yL甲醇，稀釋為二倍溶液，后再取稀釋溶液50yL加入50yL甲醇，制成四倍稀釋液，選取四倍稀釋液作為樣品進(jìn)行HPLC檢測姜黃素含量。
[0073]5.HPLC 測定
[0074]I)檢測波長的選擇
[0075]對姜黃素于200-600nm進(jìn)行波長掃描，在420-430nm處有明顯的紫外吸收峰，在427nm處有最大吸收峰且分離效果較好，所以選427nm為檢測波長。
[0076]2)流動(dòng)相的選擇
[0077]由于姜黃素的提取成分中含有姜黃素、單脫甲氧基姜黃素和雙脫甲氧基姜黃素，三種成分結(jié)構(gòu)相似，其極性大小順序?yàn)?雙脫甲氧基姜黃素〉單脫甲氧基姜黃素〉姜黃素。為了使三者得到更好的分離，文獻(xiàn)[16]報(bào)道用甲醇-乙腈或5%醋酸溶液-乙腈以一定得比例作為流動(dòng)相，分離效果好。通過條件優(yōu)化，確定最佳流動(dòng)相配比為:乙腈-5%醋酸溶液(1:1)。
[0078]3)色譜柱
[0079]色譜柱選用003((]18)柱250]1\4.6臟\5111]1柱，柱溫30°0，流速:lmL/min。
[0080]6.測定結(jié)果
[0081]使用光電二極管陣列檢測器(PDA)測定HPLC的結(jié)果。
[0082]I)結(jié)晶前HPLC的測定結(jié)果:
[0083]圖1中三種化合物按照:3:雙去甲氧基姜黃素;2:去甲氧基姜黃素；1:姜黃素的順序出峰。由圖1采用峰面積歸一法計(jì)算得出結(jié)晶前，雙去甲氧基姜黃素的含量為8%，去甲氧基姜黃素的含量為19%，姜黃素的含量為71 %。其中圖上姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素的主吸收峰后面的小峰是姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素在不同波長下的吸收光譜圖，可以看出在425nm左右為最大的吸收峰。
[0084]2)結(jié)晶后HPLC的測定結(jié)果:
[0085]圖2中兩種化合物按照:2:去甲氧基姜黃素；1:姜黃素的順序出峰。由圖2采用峰面積歸一法計(jì)算得出經(jīng)過結(jié)晶除去了雙去甲氧基姜黃素，去甲氧基姜黃素的含量由結(jié)晶前19%減為11%而目標(biāo)產(chǎn)物姜黃素的含量由結(jié)