專(zhuān)利名稱(chēng)：一種人血管瘤鼠動(dòng)物模型及其構(gòu)建方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種動(dòng)物模型及其構(gòu)建方法，尤其是涉及一種人血管瘤鼠動(dòng)物模型及其構(gòu)建方法。
背景技術(shù)：
血管瘤是一種常見(jiàn)的良性血管畸形，根據(jù)其形態(tài)和病理特點(diǎn)可以分為海綿狀血管瘤，草莓狀血管瘤和蔓狀血管瘤三種，在嬰幼兒和青少年中發(fā)病率高達(dá)1-3％。血管瘤一般好發(fā)于兒童顏面部，也可發(fā)生于內(nèi)臟器官，并且大多隨年齡的增長(zhǎng)而增大，發(fā)生在顏面部者嚴(yán)重影響美觀，而發(fā)生在重要器官者可能會(huì)因?yàn)檠芰龅钠屏讯＜吧?br> 血管瘤的發(fā)生機(jī)制至今不完全明了。一種理論認(rèn)為，由于局部血管發(fā)生和生成調(diào)節(jié)失控導(dǎo)致過(guò)度血管生成；另一理論認(rèn)為，血管瘤的生成與遺傳因素有關(guān)，某些遺傳因子的缺陷導(dǎo)致異常血管結(jié)構(gòu)的形成。由于對(duì)血管瘤的發(fā)生機(jī)制不完全清楚，目前對(duì)血管瘤的治療效果難以令人滿意；手術(shù)治療可能根治，但對(duì)于發(fā)生于顏面部和頭頸部的血管瘤，手術(shù)切除后會(huì)遺留瘢痕影響美觀；用物理或化學(xué)治療方法，費(fèi)用高、效果不穩(wěn)定且存在一定危險(xiǎn)性。鑒于目前缺乏特效的治療藥物，因此，研究對(duì)血管瘤發(fā)生機(jī)制和尋找新的有效藥物或治療方法是此病研究的熱點(diǎn)。
研究人血管瘤的發(fā)生機(jī)制和探索有效的治療方法或藥物都需要建立一個(gè)合適的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。目前國(guó)際上所建立的唯一的血管瘤動(dòng)物模型是將鼠的內(nèi)皮細(xì)胞瘤移植到免疫缺陷鼠而建立的。但是，此模型中存在兩個(gè)缺陷1.模型中應(yīng)用的血管內(nèi)皮瘤細(xì)胞是惡性腫瘤，與屬于良性的血管瘤細(xì)胞有明顯的不同，因此所建立的動(dòng)物模型與血管瘤差別較大；2.這種血管內(nèi)皮瘤細(xì)胞來(lái)源于小鼠而不是來(lái)源于人，因此應(yīng)用它來(lái)研究人血管瘤的發(fā)生機(jī)制或篩選對(duì)人血管瘤的有效治療藥物都不是非常理想。因此，如果一個(gè)血管瘤的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型能夠克服以上兩個(gè)缺陷，對(duì)于血管瘤的研究將具有獨(dú)特的價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種人血管瘤鼠動(dòng)物模型。
本發(fā)明要解決的另一技術(shù)問(wèn)題是提供一種人血管瘤鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法。
為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明一種人血管瘤鼠動(dòng)物模型，是將從人血管瘤組織分離培養(yǎng)的血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞釋放產(chǎn)物共同移植到免疫缺陷鼠動(dòng)物達(dá)到皮下，得到的人血管瘤鼠動(dòng)物模型。
為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明一種人血管瘤鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法步驟如下1、從血管瘤的臨床手術(shù)標(biāo)本中分離出人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞；2、將5×105～1×107個(gè)人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞和1×105～1×106個(gè)人類(lèi)腫瘤細(xì)胞用無(wú)血清的DMEM培養(yǎng)基洗滌1～3遍，以去除培養(yǎng)基中的血清，然后重懸于0.05～0.15毫升的DMEM中；3、用注射器將上述人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞與人類(lèi)腫瘤細(xì)胞共同接種到免疫缺陷鼠動(dòng)物的皮下；為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明一種人血管瘤實(shí)驗(yàn)鼠動(dòng)物模型的另一種構(gòu)建方法，包括如下步驟1、從血管瘤的臨床手術(shù)標(biāo)本中分離出人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞；2、將5×105～1×107個(gè)人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞用無(wú)血清的DMEM培養(yǎng)基洗滌1～3遍，以去除培養(yǎng)基中的血清；3、將1×105～1×106個(gè)人類(lèi)腫瘤細(xì)胞懸于0.2～0.4ml無(wú)血清的DMEM培養(yǎng)基中，使用超聲粉碎或反復(fù)凍融裂解，5000g～10000g離心10分鐘，離心后收集上清液；4、將5×105～1×107個(gè)人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞和步驟3制備的上清液混合，用注射器接種到免疫缺陷鼠動(dòng)物的皮下。
所述的人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞優(yōu)選數(shù)量為1×106～1×107個(gè)，更優(yōu)選為2×106～8×106個(gè)，最優(yōu)選為5×106個(gè)；所述人類(lèi)腫瘤細(xì)胞是人骨肉瘤細(xì)胞系HOS、人肝癌細(xì)胞系Bel-7402或人肝癌細(xì)胞系HepG2，(這些細(xì)胞可以從國(guó)內(nèi)外的多個(gè)細(xì)胞中心獲得，如美國(guó)ATCC)；人類(lèi)腫瘤細(xì)胞的數(shù)量為1×105～1×106，優(yōu)選為5×105個(gè)；所述的免疫缺陷鼠動(dòng)物包括T細(xì)胞免疫缺陷的裸鼠，如裸大鼠或小鼠，也包括T細(xì)胞和B細(xì)胞嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷的鼠，如SCID鼠。
本發(fā)明的血管瘤模型在外觀和組織結(jié)構(gòu)上非常類(lèi)似人類(lèi)血管瘤，在接種后10-25天左右在細(xì)胞移植的局部形成血管網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，表現(xiàn)為局部團(tuán)塊樣充血水腫、擠壓后充血消失。病理檢查發(fā)現(xiàn)，模型的組織中存在膨大的血竇，內(nèi)含紅細(xì)胞和大量新生毛細(xì)血管，這些特點(diǎn)與臨床上的血管瘤非常類(lèi)似。通過(guò)接種轉(zhuǎn)染了綠色熒光蛋白的人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞，在血管瘤形成后的組織中觀察到沿血管壁分布的綠色熒光，證實(shí)該模型中的內(nèi)皮細(xì)胞來(lái)自接種的人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞，因此這種模型具有人血管瘤的病理特點(diǎn)，非常適合用于人血管瘤的發(fā)病機(jī)制研究和開(kāi)發(fā)人血管瘤的治療藥物或方法，也可以將其用于藥物的療效觀察和藥物療效評(píng)價(jià)。
本發(fā)明一種人血管瘤鼠動(dòng)物模型具有以下特征1、血管瘤的內(nèi)皮細(xì)胞是從人的血管瘤組織分離純化和培養(yǎng)而來(lái)，因此模型具有人源化的特點(diǎn)。應(yīng)用綠色熒光蛋白示蹤技術(shù)證實(shí)，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血管瘤管壁上存在大量的熒光，表明所形成的血管瘤由移植的人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞所組成。
2、由于移植的是人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞，因此所形成的血管瘤模型具有人血管瘤的病理特點(diǎn)，組織學(xué)基礎(chǔ)證實(shí)血管瘤組織中存在膨大的血竇樣結(jié)構(gòu)和新生的毛細(xì)血管。這些病理特點(diǎn)與人的血管瘤組織非常相似。
這兩個(gè)特點(diǎn)完全彌補(bǔ)了國(guó)際上現(xiàn)有血管瘤鼠動(dòng)物模型的兩個(gè)缺陷，是目前理想的血管瘤鼠動(dòng)物模型。
為驗(yàn)證本發(fā)明模型的有效性，利用所構(gòu)建的血管瘤動(dòng)物模型對(duì)現(xiàn)有的抗血管瘤藥物平陽(yáng)霉素，內(nèi)皮抑素和待篩選藥物進(jìn)行了篩選和療效評(píng)價(jià)。結(jié)果證明平陽(yáng)霉素和內(nèi)皮抑素對(duì)血管瘤模型的療效與臨床血管瘤的療效一致，而待篩選藥物是一種更為特異有效的血管瘤新藥。


圖1.體外培養(yǎng)的人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞及其鑒定。A.體外培養(yǎng)至匯合狀態(tài)的血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞。表現(xiàn)為單層生長(zhǎng)、接觸抑制的內(nèi)皮細(xì)胞特性；B.免疫熒光染色顯示血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)志性抗原vWF；C.免疫熒光染色顯示血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)志性抗原CD31。
圖2.不同方式接種后形成的血管瘤樣結(jié)構(gòu)。A.單獨(dú)接種腫瘤細(xì)胞組，在接種后30天內(nèi)未見(jiàn)任何腫瘤形成；B.單純接種血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞組，在接種后30天內(nèi)未見(jiàn)任何腫瘤形成；C.共接種組，在接種后15天形成明顯的血管瘤樣結(jié)構(gòu)；D.轉(zhuǎn)染綠色熒光蛋白組，在接種后15天也形成明顯的血管瘤樣結(jié)構(gòu)。
圖3.血管瘤模型的組織學(xué)檢查。A.箭頭指示血管瘤模型中的血竇結(jié)構(gòu)；B.箭頭指示血管瘤模型中的新生血管結(jié)構(gòu)；C.血管瘤模型中血竇結(jié)構(gòu)的明場(chǎng)照片；D.C所示視野的熒光顯微鏡暗場(chǎng)照片，箭頭所示的綠色熒光分布與明場(chǎng)的血管壁一致。
圖4.利用血管瘤鼠動(dòng)物模型觀察待篩選藥物的療效。A模型血管瘤治療前，可見(jiàn)局部隆起，充血發(fā)紅；B給予待篩選藥物7天后，可見(jiàn)局部皮下血管出現(xiàn)壞死；C局部給予待篩選藥物15天后，局部結(jié)痂，血管瘤萎縮；D結(jié)痂脫落后的局部皮膚，可見(jiàn)血管瘤消失，無(wú)明顯疤痕。
圖5.體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證待篩選藥物的療效。通過(guò)MTT測(cè)定觀察待篩選藥物與平陽(yáng)霉素(已知對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞有殺傷作用)和內(nèi)皮抑素(已知對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖無(wú)抑制作用)對(duì)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響。表明待篩選藥物明顯抑制血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，呈現(xiàn)良好的量效關(guān)系，并且其作用較平陽(yáng)霉素溫和。結(jié)果代表三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)，每次實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)平行孔，結(jié)果表示為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1.
1、人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞的分離和培養(yǎng)人海綿血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞采用現(xiàn)有方法進(jìn)行分離(參見(jiàn)Lou J.，Ythier A.，Burger D.et al.Modulation of soluble and membrane-bound TNF-inducedphenotypic and functional changes of human brain microvascularendothelial cells by recombinant TNF binding protein I.JNeuroimmunology 1997，77107-115.)。簡(jiǎn)言之，將人海綿血管瘤組織剪成1～2mm3的小塊，然后用0.2％I型膠原酶在37℃消化15分鐘，再加入0.1％胰酶/0.1％EDTA溶液繼續(xù)消化5分鐘。將消化的組織懸液過(guò)100目銅網(wǎng)，收集液體，用DMEM離心洗滌2次。細(xì)胞與2ml胎牛血清(Hyclone公司)，混合靜止2分鐘，加入人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液(含有20％胎牛血清、100μg/ml ECGS、40U/ml肝素、100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素及2mM谷氨酰胺的M199(美國(guó)Gibco公司)種于2％明膠(美國(guó)Sigma公司)包被的培養(yǎng)瓶(Costar公司)中，于37℃，5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。12小時(shí)后換液以棄去未粘附的細(xì)胞，以后每3天更換一次培養(yǎng)液。人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞采用現(xiàn)有的亞細(xì)胞克隆法純化。純化的人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞通過(guò)免疫組化檢測(cè)vWF、CD31的表達(dá)(抗體均購(gòu)自Sigma公司)進(jìn)行鑒定，結(jié)果如圖1所示。體外培養(yǎng)的血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞表現(xiàn)為單層生長(zhǎng)，接觸抑制，并表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)志性抗原vWF和CD31，如圖1所示。
2、人血管瘤鼠動(dòng)物模型的制備實(shí)驗(yàn)動(dòng)物將裸鼠40只，隨機(jī)均分為四組共接種組，單獨(dú)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞組，單獨(dú)腫瘤細(xì)胞組，綠色熒光蛋白組。
(1)共接種組將步驟一中獲得的人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞和人肝癌細(xì)胞系Bel-7402細(xì)胞用無(wú)血清的DMEM洗滌2次，取2×106個(gè)人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞與5×105個(gè)人肝癌細(xì)胞系Bel-7402細(xì)胞混合，重懸于0.1mlDMEM中，用1ml注射器接種于免疫缺陷的裸鼠耳部皮下或背部皮下。
(2)單獨(dú)接種人肝癌細(xì)胞系Bel-7402細(xì)胞組將5×105個(gè)人肝癌細(xì)胞系Bel-7402細(xì)胞單獨(dú)接種。
(3)單獨(dú)接種人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞組將2×106個(gè)人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞單度接種。
(4)綠色熒光蛋白組為鑒定人血管瘤鼠動(dòng)物模型中血管壁中內(nèi)皮細(xì)胞的來(lái)源，在體外對(duì)步驟1的2×106個(gè)人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，使其表達(dá)綠色熒光蛋白，轉(zhuǎn)染方法如Wang，H，and Iynedjian，PB.Modulation of glucoseresponsiveness of insulinoma beta-cells by graded overexpression ofglucokinase Proc Natl Acad Sci U S A.1997；94(9)4372-4377的描述)，然后與5×105個(gè)人肝癌細(xì)胞系Bel-7402細(xì)胞混合接種。
各組于接種后每日觀察血管瘤生長(zhǎng)情況。如圖2所示，人肝癌細(xì)胞系Bel-7402細(xì)胞組和單獨(dú)接種人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞組在一個(gè)月內(nèi)均無(wú)腫塊生長(zhǎng)，而共接種組在接種后7天左右即可見(jiàn)發(fā)紅包塊，15天左右包塊生長(zhǎng)明顯，表現(xiàn)為局部團(tuán)塊樣充血、擠壓后充血消失，外觀非常類(lèi)似人類(lèi)的血管瘤。綠色熒光蛋白組在接種后15天，也形成類(lèi)似血管瘤樣的結(jié)構(gòu)。
于接種后15天將包塊手術(shù)切下，作組織學(xué)病理檢查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，瘤體局部存在大量密集的新生血管樣結(jié)構(gòu)，可見(jiàn)許多增殖活躍的內(nèi)皮細(xì)胞，并有較大血竇，內(nèi)含有大量紅細(xì)胞。綠色熒光蛋白組的病理檢查也有血竇形成，分別在熒光顯微鏡的明場(chǎng)和暗場(chǎng)觀察同一視野下的血管壁，結(jié)果發(fā)現(xiàn)暗場(chǎng)下觀察到的綠色熒光的分布在模型組織的血管壁上，如圖3所示，表明移植后的血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞參與了血管的形成。
3、利用步驟二建立的模型進(jìn)行藥物篩選將待篩選的藥物用含0.2％二甲基亞砜、20％甘油和30％乙醇的蒸餾水配制成濃度為0.3mg/ml的液體，涂抹在步驟二所建立的血管瘤模型局部，每日兩次，觀察其對(duì)血管瘤的治療效果。結(jié)果如圖4所示，局部給藥7天，在體視顯微鏡下可見(jiàn)血管瘤局部出現(xiàn)與血管走行分布一致的壞死，15天后局部出現(xiàn)萎縮及結(jié)痂，停止給藥后結(jié)痂脫落，血管瘤消失，局部愈合。
為驗(yàn)證本發(fā)明的血管瘤模型的可靠性，觀察待篩選藥物在體外對(duì)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞增殖的抑制作用。使用MTT測(cè)定的方法，并將臨床上用于治療血管瘤的化療藥物平陽(yáng)霉素和已知對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖無(wú)抑制作用的內(nèi)皮抑素用作對(duì)照。具體地，將人海綿血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞接種于明膠包被的96孔板(1×104細(xì)胞/孔)。待細(xì)胞貼壁后，加入含有不同濃度內(nèi)皮抑素、平陽(yáng)霉素和待篩選藥物的DMEM培養(yǎng)基(含10％FCS)，細(xì)胞與藥物共培養(yǎng)24小時(shí)，然后每孔加入50μl MTT(5mg/ml)，4小時(shí)后棄去培養(yǎng)基，每孔中加入150μl DMSO，輕輕振蕩5分鐘，于492nm測(cè)定OD值。評(píng)價(jià)藥物對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。結(jié)果如圖所示待篩選藥物明顯抑制血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，呈現(xiàn)良好的量效關(guān)系，并且其作用較平陽(yáng)霉素溫和，如圖5所示。結(jié)果代表三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)，每次實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)平行孔，結(jié)果表示為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差。
實(shí)施例2重復(fù)實(shí)施例1，其不同之處僅在于取5×105個(gè)人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞與1×105個(gè)人骨肉瘤細(xì)胞系HOS細(xì)胞共同接種；所述的免疫缺陷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是SCID鼠。
實(shí)施例3重復(fù)實(shí)施例1，其不同之處僅在于取1×106個(gè)人肝癌細(xì)胞系HepG2，懸于1mlDMEM中，經(jīng)超聲粉碎，超聲條件為每次10秒，間隔30秒，共進(jìn)行10次，10000g離心10分鐘收集上清液，然后將1×107個(gè)人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞和此上清液混合后共同接種；所述的免疫缺陷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是SCID鼠。
實(shí)施例4重復(fù)實(shí)施例1，其不同之處僅在于取1×106個(gè)人肝癌細(xì)胞系Bel-7402，懸于1mlDMEM中，-70℃冷凍后在37℃融解，反復(fù)兩次，10000g離心10分鐘收集上清，然后將5×106個(gè)人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞和此上清液混合后共同接種。
權(quán)利要求
1.一種人血管瘤鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，包括如下步驟a、從血管瘤的臨床手術(shù)標(biāo)本中分離出人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞；b、將5×105～1×107個(gè)人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞和1×105～1×106個(gè)人類(lèi)腫瘤細(xì)胞用無(wú)血清的DMEM培養(yǎng)基洗滌1～3遍，以去除培養(yǎng)基中的血清，然后重懸于0.05～0.15毫升的DMEM中；c、用注射器將上述人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞與人類(lèi)腫瘤細(xì)胞共同接種到免疫缺陷鼠動(dòng)物的皮下。
2.一種人血管瘤鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，包括如下步驟1)、從血管瘤的臨床手術(shù)標(biāo)本中分離出人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞；2)、將5×105～1×107個(gè)人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞用無(wú)血清的DMEM培養(yǎng)基洗滌1～3遍，以去除培養(yǎng)基中的血清；3)、將1×105～1×106個(gè)人類(lèi)腫瘤細(xì)胞懸于0.2～0.4ml無(wú)血清的DMEM培養(yǎng)基中，使用超聲粉碎或反復(fù)凍融裂解，5000g～10000g離心10分鐘，離心后收集上清液；4)、將5×105～1×107個(gè)人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞和步驟3制備的上清液混合，用注射器接種到免疫缺陷鼠動(dòng)物的皮下。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述人血管瘤鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于優(yōu)選的人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)量為1×106～1×107個(gè)；更優(yōu)選為2×106～8×106個(gè)，最優(yōu)選為5×106個(gè)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述人血管瘤鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于所述人類(lèi)腫瘤細(xì)胞是人骨肉瘤細(xì)胞系HOS、人肝癌細(xì)胞系Bel-7402或人肝癌細(xì)胞系HepG2。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述人血管瘤鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于所述人類(lèi)腫瘤細(xì)胞的數(shù)量為1×105～1×106個(gè)，優(yōu)選為5×105個(gè)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述人血管瘤鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于所述免疫缺陷鼠動(dòng)物是T細(xì)胞免疫缺陷的裸鼠或T細(xì)胞和B細(xì)胞嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷的SCID鼠。
7.一種如權(quán)利要求1或2所述的方法構(gòu)建的人血管瘤鼠動(dòng)物模型，其特征在于是將從人血管瘤組織分離培養(yǎng)的血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞與人類(lèi)腫瘤細(xì)胞或人類(lèi)腫瘤細(xì)胞釋放產(chǎn)物共同接種到免疫缺陷鼠動(dòng)物，達(dá)到皮下，得到的人血管瘤鼠動(dòng)物模型。
全文摘要
一種人血管瘤鼠動(dòng)物模型及其構(gòu)建方法，本發(fā)明將從人血管瘤組織分離培養(yǎng)的血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞釋放產(chǎn)物共同移植到免疫缺陷鼠動(dòng)物達(dá)到皮下，得到的人血管瘤鼠動(dòng)物模型；本發(fā)明的技術(shù)方法獨(dú)特，技術(shù)操作簡(jiǎn)便，模型成功率高；實(shí)驗(yàn)資料證明所建立的血管瘤模型中的血管內(nèi)皮細(xì)胞為人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞，并且該模型具有人血管瘤的膨大血竇和新生毛細(xì)血管的病理特點(diǎn)；應(yīng)用此種血管瘤動(dòng)物模型可以用于系統(tǒng)研究血管瘤的發(fā)病機(jī)制和篩選對(duì)人血管瘤的治療藥物。
文檔編號(hào)G09B23/36GK1851780SQ200610087309
公開(kāi)日2006年10月25日 申請(qǐng)日期2006年6月6日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月6日
發(fā)明者張文健, 婁晉寧 申請(qǐng)人:中日友好醫(yī)院