一株炭角菌屬真菌及其在制備菌紋木中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一株炭角菌菌株（Xylaria?venosula）J22QIU及其在制備菌紋木中的應(yīng)用，屬于微生物【技術(shù)領(lǐng)域】。所述菌株保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏編號(hào)為CGMCC?No：5964。所述菌株對(duì)木質(zhì)基材料具有優(yōu)良的浸染能力，浸染時(shí)間短且深度大，在材料表面能形成美觀的色澤及紋理，且對(duì)物理力學(xué)強(qiáng)度無(wú)影響。用所述菌株制備菌紋木的方法包括菌株活化、擴(kuò)繁與接菌培養(yǎng)步驟，首先將菌株接種到活化與擴(kuò)繁培養(yǎng)基上，在22~30℃下活化與擴(kuò)繁10~15天，然后將木質(zhì)基材料滅菌，與活化及擴(kuò)繁后的菌株充分接觸，在22~30℃下培養(yǎng)4~8周即可。本發(fā)明所述方法工藝合理，操作簡(jiǎn)單，所制得的菌紋木具有很好的裝飾效果，且對(duì)基材的物理力學(xué)性質(zhì)無(wú)影響，有利于大規(guī)模生產(chǎn)和推廣應(yīng)用。
【專利說(shuō)明】一株炭角菌屬真菌及其在制備菌紋木中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種侵染時(shí)間短且深度大，色澤及紋理美觀，對(duì)木質(zhì)基材料物理力學(xué)強(qiáng)度無(wú)影響的炭角菌菌株及其在制備菌紋木中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]木材的真菌色變長(zhǎng)期以來(lái)被視為木材的缺陷，降低了木材的價(jià)值，實(shí)際上真菌的色變，如線條、染色等，具有自然天成、獨(dú)一無(wú)二的特點(diǎn)，當(dāng)腐朽不嚴(yán)重時(shí)可以作為木材的一種奇妙的修飾。若利用這種帶有自然線條或色彩的木材制作工藝品，如花瓶、耳環(huán)、鋼筆、貼木單板等，可提高木材的附加價(jià)值。帶有天然花紋和色澤的菌紋木在市場(chǎng)，尤其裝飾、裝修、工藝品市場(chǎng)將會(huì)受到歡迎。
[0003]但是天然獲得的菌紋木仍存在以下不足:1、原料不易獲得，帶有很強(qiáng)的偶然性，因?yàn)樘烊痪y木在自然界中只有在具有可形成菌紋木的菌種存在時(shí)才有可能形成，所以只有少部分林中的枯枝倒木中能找到少量菌紋木；2、天然菌紋木形成的時(shí)間長(zhǎng)，受到很多氣候、環(huán)境因素的影響，如干燥、寒冷、缺氧、陽(yáng)光強(qiáng)烈、其他微生物干擾等；3、天然菌紋木在自然條件下形成，常常存在某些菌種對(duì)木質(zhì)基材料侵染過(guò)度的問(wèn)題，導(dǎo)致材料的強(qiáng)度損失嚴(yán)重，無(wú)法進(jìn)行加工使用，或者滲透性明顯增加，在進(jìn)行防腐、阻燃等后處理時(shí)會(huì)吸入過(guò)多的藥劑，導(dǎo)致成本成倍增加；4、天然菌紋木在自然條件下形成，木材大小、形態(tài)不可預(yù)見，加工時(shí)或?qū)p失美觀線條的部分；5、天然菌紋木在自然條件下形成，易受到蟲害或其他真菌侵染，使木材不完整或形成不美觀的腐朽或變色。
[0004]因此，有必要分離、改良一種侵染時(shí)間短且深度大，色澤及紋理美觀，對(duì)木質(zhì)基材料物理力學(xué)強(qiáng)度無(wú)影響的菌株，用其對(duì)木質(zhì)基材料進(jìn)行侵染處理制備菌紋木，以滿足裝飾、裝修、工藝品制作的需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明要解決的第一技術(shù)問(wèn)題在于提供一種侵染時(shí)間短且深度大，色澤及紋理美觀，對(duì)木質(zhì)基材料物理力學(xué)強(qiáng)度無(wú)影響的炭角菌菌株。
[0006]本發(fā)明要解決的第二技術(shù)問(wèn)題在于提供所述炭角菌菌株在制備菌紋木中的應(yīng)用。
[0007]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案。
[0008]除非另有說(shuō)明外，本發(fā)明中所采用的百分?jǐn)?shù)均為體積百分?jǐn)?shù)。
[0009]一株炭角菌屬真菌菌株命名為J22QIU，經(jīng)鑒定為炭角菌{Xylaria venosula)的一個(gè)株系,是從腐朽的樹樁、倒木或枯枝中分離得到，已于2012年4月6日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱06110:，地址為:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I`號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編100080)，其保藏編號(hào)為CGMCC No:5964。
[0010]一種用所述炭角菌菌株制備菌紋木的方法,包括菌株活化與擴(kuò)繁、接菌培養(yǎng)工序，具體包括以下步驟:A、菌株活化與擴(kuò)繁:將炭角菌菌株venosula) J22QIU接種到活化與擴(kuò)繁培養(yǎng)基上，在22~3(TC下培養(yǎng)10-15天，得活化與擴(kuò)繁菌株；活化與擴(kuò)繁培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、PDA液態(tài)培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基或OA培養(yǎng)基中的任一種；
B、接菌培養(yǎng):將待接種的木質(zhì)基材料滅菌后，與活化及擴(kuò)繁后的菌株充分接觸，在22~30°C下培養(yǎng)４－8周，即得菌紋木。
[0011]本發(fā)明的有益效果包括以下幾個(gè)方面。
[0012]1、本發(fā)明所述菌株對(duì)木質(zhì)基材料的侵染效果好，在非常短的時(shí)間內(nèi)即可在木質(zhì)基材料表面及內(nèi)部產(chǎn)生美麗的花紋和顏色。采用固體接菌法，在處理后的第5飛周，基材表面即有紋理和色斑產(chǎn)生，處理后的第61周，處理深度在橫向及縱向方向上均可達(dá)0.2^0.6cm。采用液體接菌法，在處理后的第4飛周，基材表面即有紋理和色斑產(chǎn)生，處理后的第6~8周，處理深度在橫向及縱向方向上均可達(dá)0.3^0.8cm。
[0013]2、本發(fā)明所述菌株對(duì)木質(zhì)基材料的侵染方式非常多樣，能夠形成不同效果的花紋，能夠適用于不同的處理對(duì)象。采用固體接菌法，有利于形成生動(dòng)多變的具有圈狀圖案的花紋，更有利于按照裝飾設(shè)計(jì)的需要形成局部紋理。而采用液體接菌法，有利于形成長(zhǎng)而彎曲的細(xì)線狀或帶狀狀線條，更有利于處理形體不規(guī)則的樣品，消除處理死角，使處理效果事半功倍。
[0014]3、本發(fā)明所述菌株及菌紋木的制備方法對(duì)木質(zhì)基材料的各項(xiàng)物理力學(xué)性質(zhì)，如質(zhì)量、硬度、順紋抗壓強(qiáng)度等無(wú)明顯影響。接菌處理后的第8周，電鏡掃描結(jié)果顯示，真菌的菌絲體主要位于木質(zhì)基材料的細(xì)胞腔中，對(duì)細(xì)胞壁幾乎無(wú)損傷。由于菌絲沒(méi)有對(duì)木質(zhì)基材料的細(xì)胞壁形成明顯的破壞，所制備的菌紋木在質(zhì)量、硬度、強(qiáng)度等方面的性能與健康材無(wú)明顯差別。
[0015]4、本發(fā)明所述菌紋木的制備方法技術(shù)路線合理、操作流程簡(jiǎn)單、原料易得、耗時(shí)短、顯效快，有利于大規(guī)模生產(chǎn)和推廣應(yīng)用。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0016]圖1為實(shí)施例3中西南棺木處理4周后橫切面的表面的花紋。
[0017]圖2為實(shí)施例3中西南榿木處理4周后縱切面的表面的花紋。
[0018]圖3為實(shí)施例3中西南棺木處理6周后橫切面的表面的花紋。
[0019]圖4為實(shí)施例3中西南榿木處理6周后縱切面的表面的花紋。
[0020]圖5為實(shí)施例3中西南榿木處理6周后縱剖面上的花紋。
[0021]圖6為實(shí)施例3中西南榿木處理8周后橫切面的表面的花紋。
[0022]圖7為實(shí)施例3中西南榿木處理8周后縱切面的表面的花紋。
[0023]圖8為實(shí)施例3中西南榿木處理8周后縱剖面上的花紋。
[0024]圖9為實(shí)施例5中西南棺木處理8周后橫切面的表面的花紋。
[0025]圖10為實(shí)施例5中西南榿木處理8周后縱切面的表面的花紋。
[0026]圖11為實(shí)施例5中西南榿木處理8周后縱剖面上的花紋。
[0027]圖12為實(shí)施例10中西南棺木處理后橫切面表層花紋處的掃描電鏡圖。
[0028]圖13為實(shí)施例10中西南榿木處理后弦切面的花紋處掃描電鏡圖。
[0029]圖14為實(shí)施例10中西南棺木處理后徑切面的花紋處掃描電鏡圖?！揪唧w實(shí)施方式】
[0030]下面對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，但不以任何方式對(duì)本發(fā)明加以限制，基于本發(fā)明教導(dǎo)所作的任何變換，均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0031]一株炭角菌菌株UWaria venosula) ^22m,已于2012年4月6日在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCCJias:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編100080)，其保藏編號(hào)為CGMCC No:5964。
[0032]所述菌株能夠在木質(zhì)基材料表面形成黑色、深灰色的線狀、帶狀、塊狀、團(tuán)狀、點(diǎn)狀花紋中任一種或幾種。
[0033]所述菌株在接種到木質(zhì)基材料后的第4飛周即能在木質(zhì)基材料的表面產(chǎn)生花紋，接種6~8周，木質(zhì)基材料中的花紋橫向及縱向方向的深度可達(dá)0.3^0.8cm。
[0034]所述菌株是通過(guò)下述具體步驟獲得的。
[0035]A、標(biāo)本采集:在腐朽樹樁、倒木或枯枝中，采集具有黑色、灰色的線狀、帶狀、塊狀、團(tuán)狀或點(diǎn)狀花紋中的任一種或幾種的木質(zhì)基材料組織，連帶其上面生長(zhǎng)的真菌子實(shí)體，保存?zhèn)溆谩?br> [0036]B、菌株分離與篩選:將采集的木質(zhì)基材料組織，連帶其上面生長(zhǎng)的真菌子實(shí)體破碎、消毒后，置于富集培養(yǎng)基中在22~3(TC黑暗中，靜置培養(yǎng)1(T15天至長(zhǎng)出菌絲；富集培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基或OA培養(yǎng)基中的任一種；
將圓周狀發(fā)散生長(zhǎng)、氣生菌絲發(fā)達(dá)、菌絲白色、邊緣平整、在與周圍菌絲體之間的培養(yǎng)基上形成黑色線條的菌落挑取，接種至增殖培養(yǎng)基中在22~3(TC黑暗中靜置培養(yǎng)7~12天至菌落長(zhǎng)出；增殖培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基、OA培養(yǎng)基中的任一種。
`[0037]C、菌種保存:挑取增殖培養(yǎng)基中菌落長(zhǎng)勢(shì)旺盛者接種至保存培養(yǎng)基中，在22~30°C黑暗中靜置培養(yǎng)9~12天，再于4°C冰箱中保存；保存培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基或OA培養(yǎng)基中的任一種；
PDA培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)為:馬鈴薯160~240、葡萄糖10~20、瓊脂14~20、自然pH ;
PDA培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)優(yōu)選為:馬鈴薯200、葡萄糖15、瓊脂17、pH 6.5^7.0 ；
MA培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)為:麥芽膏21~28、瓊脂14~20、PH6.0~7.5 ；
MA培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)優(yōu)選為:麥芽膏25、瓊脂17、PH6.5~7.0 ；
OA培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)為:燕麥片27~33、瓊脂14~20、PH6.0~7.5 ；
OA培養(yǎng)基成分以g/L優(yōu)選為:燕麥片30、瓊脂17、PH6.5~7.0。
[0038]步驟A所述的標(biāo)本采集是在溫暖潮濕的闊葉林、針葉林或針闊葉混交林中進(jìn)行。
[0039]步驟A所述的標(biāo)本采集優(yōu)選在溫暖潮濕的闊葉林中進(jìn)行。
[0040]步驟A所述的木質(zhì)基材料組織，連帶其上面生長(zhǎng)的真菌子實(shí)體采集后需冷藏保存?zhèn)溆?，冷藏溫度?°C。
[0041 ] 步驟A所述的標(biāo)本采集優(yōu)選在楊柳科楊屬、樺木科榿屬、樺木屬、薔薇科櫻桃屬、杉科杉木屬、木棉科輕木屬或殼斗科櫟屬樹種的腐朽樹樁、倒木或枯枝中，采集具有黑色、深灰色的線狀、帶狀、塊狀、團(tuán)狀或點(diǎn)狀花紋中的任一種或幾種的木質(zhì)基材料組織，連帶其上面生長(zhǎng)的真菌子實(shí)體，保存?zhèn)溆谩?br> [0042]所述楊屬樹種優(yōu)選毛白楊。[0043]所述樺木屬樹種優(yōu)選西南樺。
[0044]所述棺屬樹種優(yōu)選西南棺木。
[0045]步驟B所述的破碎，是用解剖刀將木質(zhì)基材料組織，連帶其上面生長(zhǎng)的真菌子實(shí)體切成0.3~0.7cmX0.3~0.7cmX0.3~0.7cm的小塊。
[0046]步驟B所述的消毒，是用75%酒精浸泡消毒l(Tl5s,再用0.1%升萊浸泡消毒3^7min,再用滅菌蒸餾水清洗3次。
[0047]步驟B所述的富集培養(yǎng)的條件優(yōu)選:28°C黑暗靜置培養(yǎng)12天。
[0048]步驟B所述的菌株分離與篩選是從富集培養(yǎng)基中將圓周狀發(fā)散生長(zhǎng)、氣生菌絲發(fā)達(dá)、菌絲白色、邊緣平整、在與周圍菌絲體之間的培養(yǎng)基上形成黑色線條的菌落挑取，接種至增殖培養(yǎng)基中。
[0049]步驟B所述的增殖培養(yǎng)的條件優(yōu)選:28°C黑暗靜置培養(yǎng)10天。
[0050]步驟C所述的保存培養(yǎng)的條件優(yōu)選:28°C黑暗靜置培養(yǎng)10天。
[0051]—種用所述的炭角菌菌株1^/705^^)1220111制備菌紋木的方法,包括菌株活化與擴(kuò)繁、接菌培養(yǎng)工序，具體包括以下步驟:
A、菌株活化與擴(kuò)繁:將炭角菌菌株venosula) J22QIU接種到活化與擴(kuò)繁培養(yǎng)基上，在22~30°C下培養(yǎng)1(T15天，得活化與擴(kuò)繁菌株；活化與擴(kuò)繁培養(yǎng)基成分為:為PDA培養(yǎng)基、PDA液態(tài)培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基或OA培養(yǎng)基中的任一種；
B、接菌培養(yǎng):將待接種的`木質(zhì)基材料滅菌后，與活化及擴(kuò)繁后的菌株充分接觸，在22~30°C下培養(yǎng)4~8周，即得菌紋木。
[0052]所述的制備方法，還可以包括后處理步驟，將接菌培養(yǎng)后得到的菌紋木刮去表面的菌絲，洗凈后干燥至含水率8~10%。
[0053]PDA液態(tài)培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)為:馬鈴薯160~240、葡萄糖10~20、自然PH。
[0054]PDA液態(tài)培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)優(yōu)選為:馬鈴薯200、葡萄糖15、PH 6.5~7.0。
[0055]步驟B所述的木質(zhì)基材料可以為原木、實(shí)木塊、木板、木皮、木薄片、木棒、異形木制品中的任一種或幾種。
[0056]步驟B所述的木質(zhì)基材料的樹種可以為任意樹種。
[0057]步驟B所述的木質(zhì)基材料的樹種優(yōu)選自楊柳科楊屬、樺木科榿屬、樺木屬、薔薇科樓桃屬、木棉科輕木屬或殼斗科櫟屬樹種。
[0058]步驟B所述的木質(zhì)基材料的樹種更優(yōu)選自毛白楊、西南樺、西南榿木、思茅松。
[0059]步驟B所述的木質(zhì)基材料在接種前，可根據(jù)需要加工成任意的形狀。
[0060]步驟B所述的滅菌，是將木質(zhì)基材料在高壓蒸汽式滅菌器中，在121 °C下滅菌處理20分鐘以上。
[0061]步驟B所述的滅菌，是將木質(zhì)基材料置于培養(yǎng)瓶中，將蛭石倒入培養(yǎng)瓶中至覆蓋木質(zhì)基材料，加少量水使木質(zhì)基材料及蛭石濕潤(rùn)，蓋上瓶蓋，置于高壓蒸汽式滅菌器中，在121°C滅菌60分鐘。
[0062]步驟B所述的將待接種的木質(zhì)基材料與活化及擴(kuò)繁后的菌株充分接觸，在固體接菌時(shí)，是將含有菌落的培養(yǎng)基切成與待接種木質(zhì)基材料大小、形狀相近的菌塊，將至少一塊菌塊貼在木質(zhì)基材料表面。
[0063]所述菌塊的尺寸和形狀優(yōu)選邊長(zhǎng)或直徑為f4cm的三角形、方形、多邊形或面積相近的圓形。
[0064]所述菌塊的總面積在2cm2以上。
[0065]步驟B所述的將待接種的木質(zhì)基材料與活化及擴(kuò)繁后的菌株充分接觸，在液體接菌時(shí)，是將待接種的木質(zhì)基材料浸入含有菌落的培養(yǎng)液中，且/或?qū)⒊蓤F(tuán)的菌絲體夾取置于木質(zhì)基材料的表面或附近。
[0066]所述菌絲體的夾取量與木質(zhì)基材料的體積比為0.r0.5:1。
[0067]所述菌絲體的夾取量的總體積在Icm3以上。
[0068]實(shí)施例1
-炭角菌venosula") J22QIU的獲得、鑒定與保藏。
[0069](I)炭角菌仰7a) J22QIU 的獲得與鑒定。
[0070]本發(fā)明所述的炭角菌，是從西南榿木的腐朽的樹樁、倒木或枯枝中分離得到。樣品采自云南省昆明市金殿公園，采集西南榿木已腐朽的且在木質(zhì)部出現(xiàn)黑色線條花紋的樹樁、樹枝樣品100g，連帶其上面生長(zhǎng)的真菌子實(shí)體，在4°C冷藏保存?zhèn)溆谩?br> [0071]將采集的已腐朽樹樁、樹枝樣品，連帶其上面生長(zhǎng)的真菌子實(shí)體，用解剖刀切成
0.3^0.5cmX0.3^0.5cmX0.3^0.5cm 的小塊，用 75% 酒精浸泡消毒 l(Tl5s，再用 0.1% 升汞浸泡消毒5min，再用滅菌蒸餾水清洗3次。然后置于富集培養(yǎng)基中在28°C ±2°C黑暗中，靜置培養(yǎng)10天至長(zhǎng)出菌絲；富集培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基。
[0072]然后將圓周狀發(fā)散生長(zhǎng)、氣生菌絲發(fā)達(dá)、菌絲白色、邊緣平整、在與周圍菌絲體之間的培養(yǎng)基上形成黑色線條的菌落挑取，接種至增殖培養(yǎng)基中在28°C ±2°C黑暗中，靜置培養(yǎng)10天至菌落長(zhǎng)出；增殖培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基。
[0073]待菌落長(zhǎng)出后，挑取長(zhǎng)勢(shì)旺盛者接種至保存培養(yǎng)基中，在28°C ±2°C黑暗中靜置培養(yǎng)8天，然后于4°C冰箱保存；保存培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基。
[0074]PDA培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)為:馬鈴薯200、葡萄糖18、瓊脂17、pH6.5~7.0。
[0075]對(duì)上述分離的菌株J22QIU，通過(guò)生物學(xué)特性觀察，進(jìn)行進(jìn)一步的形態(tài)鑒定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄如下。
[0076]A、形態(tài)特征:在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)9天，菌落呈圓形，直徑約6.5cm,生長(zhǎng)較慢；菌落正面白色，圓周狀發(fā)散生長(zhǎng)，具輪紋，背面形成圈狀黑色染色；菌落毛氈狀，氣生菌絲發(fā)達(dá)，邊緣平整；具蘑菇氣味。
[0077]B、培養(yǎng)特征:在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)20天或以上，形成炭質(zhì)短棒狀子實(shí)體。以液體馬鈴薯培養(yǎng)基在搖床上培養(yǎng)的菌絲體呈球形，培養(yǎng)液清澈，初期無(wú)可溶性色素。在木塊上接種培養(yǎng)期間可形成黑色細(xì)棒狀子實(shí)體，長(zhǎng)0-5cm。
[0078]C、菌株的穩(wěn)定性:該菌生長(zhǎng)溫度范圍在3~35°C，適宜生長(zhǎng)溫度為22~30°C ;喜好偏微酸性的環(huán)境，生長(zhǎng)PH值為4.5~7.2之間，最適宜PH值為6.5~7.0之間。
[0079]D、5.8S rDNA序列分析:對(duì)該菌株進(jìn)行5.8S rDNA序列測(cè)定，以菌株J22QIU 的總 DNA 為模板，在引物 ITSl (5，-TCCGTAGGTGAACCTGCGG -3，)和 ITS4(5，-TCCTCCGCTTATTGATATGC -3’ )的引導(dǎo)下 PCR 擴(kuò)增該菌株的 5.8S rDNA 序列，PCR 反應(yīng)體系為:2iUDNA 模版、1.5iil 引物 ITS1、L 5iil 引物 ITS4、Taqmix25 yl、去離子水 20 yl，共 50ul。PCR 反應(yīng)程序:a、94°C 4min ;b、94°C lmin，50°C 45s，72°C lmin，35 個(gè)循環(huán)；c、72°C IOmin。[0080]將PCR反應(yīng)產(chǎn)物送到生物公司測(cè)序得ITS序列，經(jīng)復(fù)檢，在美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(NCBI)中比對(duì)，比對(duì)結(jié)果表明，菌株J22QIU與炭角菌屬真菌venosula)的5.8S rDNA序列的相似性達(dá)到了 99%。通過(guò)序列比對(duì)將菌株J22QIU鑒定為炭角菌屬真菌{Xylaria venosula)。
[0081](2)炭角菌CCWaria 防/70仰7a) J22QIU 的保藏。
[0082]通過(guò)上述鑒定結(jié)果,確認(rèn)菌株J22QIU為炭角菌的一個(gè)株系，命名為J22QIU，于2013年4月6日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC，地址為:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編100080)，其保藏編號(hào)為CGMCC No:5964。
[0083]實(shí)施例2
-由炭角菌venosula ) J22QIU制備菌紋木(液體法)。
[0084](1)菌紋木制備。
[0085]首先，將炭角菌菌株venosula) mm接種到PDA液態(tài)培養(yǎng)基上，在28V ±2°C下黑暗搖床培養(yǎng)10天，形成直徑廣3cm的菌絲體及其菌絲體孢子懸浮液。PDA液態(tài)培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)為:馬鈴薯200、葡萄糖18、pH6.5~7.0。
[0086]然后，將待接種的西南榿木原木鋸成2cmX2cmX 2cm的方形木塊(共計(jì)18塊)，裝在底面直徑6cm高Ilcm的培養(yǎng)瓶中。接著，將蛭石倒入培養(yǎng)瓶中至覆蓋木塊，加少量水使木塊及蛭石濕潤(rùn)，蓋上瓶蓋，置于高壓蒸汽式滅菌器中，在121°C滅菌30分鐘。
[0087]夾取木塊放入菌懸液中沾上菌絲或孢子后，放入一并經(jīng)過(guò)消毒的蛭石中，并將成團(tuán)的菌絲體夾取置于木塊表面，所夾菌絲體積與木塊體積的比值為0.3:1。在28°C ±2°C下黑暗培養(yǎng)，4周后取出其中6塊木塊，6周后取出其中6塊木塊，8周后取出剩余6塊木塊。最后，將木塊刮去表面的菌絲，洗凈后干燥至含水率10%，得菌紋木。
[0088](2)結(jié)果觀察。
[0089]分別將接種4周、6周、8周的木塊用BenQ Scanner 5560掃描儀在2400分辨率下掃描后劈開木塊觀察。
[0090]侵染深度:在接種的第4周內(nèi)，木塊表面即出現(xiàn)花紋，到第4周結(jié)束時(shí)，深入木塊超過(guò)0.1cm。在接種到第6周結(jié)束時(shí)，深入木塊超過(guò)0.4cm。在接種到第8周結(jié)束時(shí)，深入木塊超過(guò)0.8cm,幾乎貫穿木塊。
[0091]花紋的顏色和類型:接種4周后，木塊表面形成長(zhǎng)而不規(guī)則彎曲的細(xì)線狀的黑色至灰色線條，有少部分閉合成圈，以及少量的塊狀、團(tuán)狀、點(diǎn)狀的染色花紋；接種6周后，木塊表面形成顏色較接種4周后的線條顏色更深更清晰的彎曲不規(guī)則線條，伴隨線條的染色也較明顯；接種8周后，木塊表面形成較接種6周后線條和染色顏色更深、數(shù)量更多，特別是染色數(shù)量明顯增加，幾乎布滿木塊表面。
[0092]實(shí)施例3
-由炭角菌venosula ) J22QIU制備菌紋木(液體法)。
[0093](1)菌紋木制備。
[0094]首先，將炭角菌菌株venosula) mm接種到PDA液態(tài)培養(yǎng)基上，在240C ±2°C下黑暗搖床培養(yǎng)15天，形成直徑廣3cm的菌絲體及其菌絲體孢子懸浮液。PDA液態(tài)培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)為:馬鈴薯240、葡萄糖10、pH7.(T7.5。[0095]然后，將待接種的西南榿木原木鋸成2cmX 2cmX 3cm的方形木塊(共計(jì)60塊，按照GB1931-1991《木材含水率測(cè)定方法》烘至絕干,用精確到0.001的電子天秤稱每一木塊的絕干質(zhì)量)，裝在底面直徑6cm高Ilcm的培養(yǎng)瓶中。接著，將蛭石倒入培養(yǎng)瓶中至覆蓋木塊，加少量水使木塊及蛭石濕潤(rùn)，蓋上瓶蓋，置于高壓蒸汽式滅菌器中，在121°C滅菌40分鐘。
[0096]夾取木塊放入菌懸液中沾上菌絲或孢子后，放入一并經(jīng)過(guò)消毒的蛭石中，并將成團(tuán)的菌絲體夾取置于木塊表面，所夾菌絲體積與木塊體積的比值為0.5:1。在24°C ±2°C下黑暗培養(yǎng)4周、6周、8周后分別取出10塊、10塊、40塊。最后，將木塊刮去表面的菌絲，洗凈后干燥至含水率9%，得菌紋木。
[0097](2)結(jié)果觀察。
[0098]侵染深度:分別取4周、6周、8周的木塊各10塊，劈開觀察侵染深度。在接種的第4周內(nèi)，木塊表面即出現(xiàn)花紋，到第4周結(jié)束時(shí)，深入木塊超過(guò)0.1cm0在接種到第6周結(jié)束時(shí)，深入木塊超過(guò)0.4cm。在接種到第8周結(jié)束時(shí),深入木塊超過(guò)0.8cm。
[0099]花紋的顏色和類型:木塊表面形成黑色的形狀不規(guī)則、大小不一的圈狀花紋，包裹著不均勻的似暈染的染色，組合成多種圖案，每個(gè)木塊的花紋圖案都獨(dú)一無(wú)二；劈開觀察，木塊內(nèi)部也形成了黑色彎曲細(xì)線閉合成圈的花紋，僅有線條而沒(méi)有染色，使線條十分清晰。
[0100]實(shí)施例4
-由炭角菌venosula ) J22QIU制備菌紋木(液體法)。
[0101](I)菌紋木 制備。
[0102]首先，將炭角菌菌株venosula) mm接種到PDA液態(tài)培養(yǎng)基上，在250C ±2°C下黑暗搖床培養(yǎng)10天，形成直徑廣3cm的菌絲體及其菌絲體孢子懸浮液。PDA液態(tài)培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)為:馬鈴薯160、葡萄糖20、pH6.0~6.5。
[0103]然后,將待接種的西南棺木原木鋸成7cmX5cmX5cm的方形木塊(共計(jì)40塊),裝在底面直徑IOcm高12cm的培養(yǎng)瓶中。接著，將蛭石倒入培養(yǎng)瓶中至覆蓋木塊，加少量水使木塊及蛭石濕潤(rùn)，蓋上瓶蓋，置于高壓蒸汽式滅菌器中，在121°C滅菌40分鐘。
[0104]夾取木塊放入菌懸液中沾上菌絲或孢子后，放入一并經(jīng)過(guò)消毒的蛭石中，并將成團(tuán)的菌絲體夾取置于木塊表面，所夾菌絲體積與木塊體積的比值為0.1:1。在25°C ±2°C下黑暗培養(yǎng)8周后取出。最后，將木塊刮去表面的菌絲，洗凈后干燥至含水率10%，得菌紋木。
[0105](2)結(jié)果觀察。
[0106]侵染深度:取其中10塊，劈開觀察侵染深度。在接種到第8周結(jié)束時(shí)，深入木塊超過(guò) 0.8cm。
[0107]花紋的顏色和類型:木塊表面形成長(zhǎng)的不規(guī)則的細(xì)線狀的、彎曲的、黑色、深棕色、藍(lán)黑色線條，大部分閉合成圈，圈或線伴隨著塊狀、團(tuán)狀、點(diǎn)狀的染色花紋，圈、線和染色組合成各種圖案；劈開觀察，木塊內(nèi)部形成形狀多樣、大小不一的小圈，沒(méi)有染色而僅有線條，線條細(xì)而清晰。
[0108]實(shí)施例5
-由炭角菌venosula ) J22QIU制備菌紋木(固體法)。
[0109](I)菌紋木制備。
[0110]首先，將炭角菌菌株venosula) mm接種到PDA平板培養(yǎng)基上，在260C ±2°C下黑暗靜置培養(yǎng)14天，菌絲體幾乎布滿平板，制成平板菌落。PDA平板培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)為:馬鈴薯210、葡萄糖20、瓊脂17、pH 6.5~7.0。
[0111]然后，將待接種的西南榿木原木鋸成2cmX2cmX 3cm的方形木塊(共計(jì)10塊)，裝在底面直徑6cm高Ilcm的培養(yǎng)瓶中。接著，將蛭石倒入培養(yǎng)瓶中至覆蓋木塊，加少量水使木塊及蛭石濕潤(rùn)，但無(wú)多余水分溢出。蓋上瓶蓋，置于高壓蒸汽式滅菌器中，在121°C滅菌40分鐘。
[0112]用解剖刀將菌落及其培養(yǎng)基切成邊長(zhǎng)約2cm的方形菌塊，用鑷子將3塊菌塊夾取，貼在滅菌木塊的表面，在26°C ±2°C下黑暗培養(yǎng)8周。最后，將木塊刮去表面的菌絲，洗凈后干燥至含水率8%，得菌紋木。
[0113](2)結(jié)果觀察。
[0114]侵染深度:劈開觀察侵染深度。到8周，木塊花紋深度在縱向及橫向方向上均達(dá)
0.6cm。
[0115]花紋的顏色和類型:木塊表面形成不規(guī)則的彎曲的細(xì)線狀的黑色、深褐色、黑褐色線條，或閉合成圈，線條和圈伴有不均勻無(wú)規(guī)則的帶狀、塊狀、團(tuán)狀、點(diǎn)狀的黑色、褐色、藍(lán)黑色染色花紋；縱向劈開，剖面形成閉合圈狀花紋，線條細(xì)而無(wú)染色，清晰可見，深度達(dá)
0.6cm。
[0116]實(shí)施例6
—菌紋木表面花紋面積百分率。
[0117]實(shí)驗(yàn)材料:接種`后的實(shí)施例2中的囷紋木，接種時(shí)間分別為4周、6周、8周。
[0118]實(shí)驗(yàn)方法:分別將接種后的實(shí)施例2中的接種時(shí)間分別為4周、6周、8周的菌紋木的花紋面，用BenQ Scanner 5560掃描儀在2400分辨率下掃描后，所得圖片以Scion ImageSoftware軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
[0119]實(shí)驗(yàn)結(jié)果:接種4周、6周、8周后菌紋木表面帶線及染色花紋面積百分率分別為
6.37%,21.02%,74.11%。
[0120]實(shí)施例7
——菌紋木的質(zhì)量損失率。
[0121]實(shí)驗(yàn)材料:實(shí)施例3中的接種8周的菌紋木。
[0122]實(shí)驗(yàn)方法:按照GB1931-1991《木材含水率測(cè)定方法》將實(shí)施例3中的接種8周后的菌紋木木塊(未劈開的30塊)烘至絕干，用精確到0.001的電子天秤稱木塊質(zhì)量，得菌紋木木塊的絕干質(zhì)量。按下式計(jì)算菌紋木的質(zhì)量損失率。
[0123]質(zhì)量損失率=(接種前木塊絕干質(zhì)量-菌紋木木塊絕干質(zhì)量)接種木塊絕干質(zhì)量 X 100%O
[0124]以30塊木塊的質(zhì)量損失率平均值為菌紋木平均質(zhì)量損失率。
[0125]實(shí)驗(yàn)結(jié)果:接種8周后菌紋木的平均質(zhì)量損失率為8.16%。
[0126]實(shí)施例8
——菌紋木的表面硬度損失率。
[0127]實(shí)驗(yàn)材料:實(shí)施例4中的菌紋木與同樹種健康材。
[0128]實(shí)驗(yàn)方法:按照GB/T 1941-2009《木材硬度試驗(yàn)方法》對(duì)未處理的西南榿木健康材及實(shí)施例4所得的菌紋木(未劈開的30塊)進(jìn)行表面硬度測(cè)試。按下式計(jì)算菌紋木的平均表面硬度損失率。[0129]平均表面硬度損失率=(未處理健康材表面硬度平均值-菌紋木表面硬度平均值)+未處理健康材表面硬度平均值X100%。
[0130]實(shí)驗(yàn)結(jié)果:接種8周后菌紋木的平均表面硬度損失率為9.62%。
[0131]實(shí)施例9
——菌紋木的順紋抗壓強(qiáng)度損失率。
[0132]實(shí)驗(yàn)材料:實(shí)施例7中的菌紋木和同樹種健康材。
[0133]實(shí)驗(yàn)方法:將實(shí)施例7中接種8周的菌紋木和未處理的西南榿木健康材按照GB1931-1991《木材含水率測(cè)定方法》將木塊烘至絕干，然后參照GB 1935-2009-T《木材順紋抗壓強(qiáng)度試驗(yàn)方法》，測(cè)定木塊的順紋抗壓強(qiáng)度，按下式計(jì)算菌紋木的平均順紋抗壓強(qiáng)度損失率。
[0134]平均順紋抗壓強(qiáng)度損失率=(未處理健康材順紋抗壓強(qiáng)度平均值-菌紋木順紋抗壓強(qiáng)度平均值)+未處理健康材順紋抗壓強(qiáng)度平均值X100%。
[0135]實(shí)驗(yàn)結(jié)果:接種8周后菌紋木的平均順紋抗壓強(qiáng)度損失率為10.05%。
[0136]實(shí)施例10
——菌紋木微觀結(jié)構(gòu)觀察。
[0137]實(shí)驗(yàn)材料:實(shí)施例2中 接種8周的木塊。
[0138]實(shí)驗(yàn)方法:將菌紋木鋸成0.6cmX0.6cmX0.6cm的立方體，立方體至少一個(gè)表面含花紋，置于恒溫水浴鍋中80°C ±5°C水煮至木塊下沉。以切片機(jī)削平含花紋的表面，在真空裝置中對(duì)含花紋的表面及其垂直面實(shí)施噴金，置于掃描電鏡下觀察拍照。
[0139]實(shí)驗(yàn)結(jié)果:菌絲體分布于菌紋木形成花紋的區(qū)域，在黑色、深褐色、藍(lán)灰色線條之外無(wú)菌絲分布；從菌絲體分布情況來(lái)看，菌絲主要位于西南棺木基材的細(xì)胞腔中，通過(guò)細(xì)胞壁上的紋孔出入胞腔，而基材的各類細(xì)胞尤其木纖維的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)完整，與無(wú)菌絲體分布區(qū)域未有明顯差別。由于基材的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)完整無(wú)損，基材的物理力學(xué)性質(zhì)受到的影響極其輕微，與健康材幾無(wú)差別。
【權(quán)利要求】
1.一株炭角菌屬真菌株(辦) J22QIU,于2012年4月6日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱06110:，地址為:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編100080)，其保藏編號(hào)為CGMCC No:5964。
2.如權(quán)利要求1所述的菌株，其特征在于，所述菌株能夠在木質(zhì)基材料表面及內(nèi)部形成黑色、灰色的線狀、帶狀、塊狀、團(tuán)狀、點(diǎn)狀花紋中任一種或幾種。
3.如權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)所述的菌株，其特征在于，所述菌株在接種到木質(zhì)基材料后的第4飛周即能在木質(zhì)基材料的表面產(chǎn)生花紋，接種6~8周，木質(zhì)基材料中的花紋深度可達(dá)0.3^0.8cm。
4.如權(quán)利要求1所述的菌株，其特征在于，所述菌株是通過(guò)下述具體步驟獲得的: A、標(biāo)本采集:在腐朽樹樁、倒木或枯枝中，采集具有黑色、灰色的線狀、帶狀、塊狀、團(tuán)狀或點(diǎn)狀花紋中的任一種或幾種的木質(zhì)基材料組織，連帶其上面生長(zhǎng)的真菌子實(shí)體，保存?zhèn)溆茫? B、菌株分離與篩選:將采集的木質(zhì)基材料組織，連帶其上面生長(zhǎng)的真菌子實(shí)體破碎、消毒后，置于富集培養(yǎng)基中在22~3(TC黑暗中，靜置培養(yǎng)1(T15天至長(zhǎng)出菌絲；富集培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基或OA培養(yǎng)基中的任一種；將圓周狀發(fā)散生長(zhǎng)、氣生菌絲發(fā)達(dá)、菌絲白色、邊緣平整、在與周圍菌絲體之間的培養(yǎng)基上形成黑色線條的菌落挑取，接種至增殖培養(yǎng)基中在22~30°C黑暗中，靜置培養(yǎng)7~12天至菌落長(zhǎng)出；增殖培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基或OA培養(yǎng)基中的任一種； C、菌種保存:挑取增殖培養(yǎng)基中菌落長(zhǎng)勢(shì)旺盛者接種至保存培養(yǎng)基中，于恒溫箱中22^300C，黑暗靜置培養(yǎng)9~12天，再于4°C冰箱中保存；純化培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基或OA培養(yǎng)基中的任一種。
5.如權(quán)利要求4所述的菌株，其特征在于，步驟A所述的標(biāo)本采集是在溫暖潮濕的闊葉林、針葉林或針闊葉混交林中進(jìn)行。
6.如權(quán)利要求4或5任一項(xiàng)所述的菌株，其特征在于，步驟A所述的標(biāo)本采集優(yōu)選在楊柳科楊屬、樺木科榿屬、樺木屬、薔薇科櫻桃屬、杉科杉木屬、木棉科輕木屬或殼斗科櫟木屬樹種的腐朽樹樁、倒木或枯枝中，采集具有灰色、黑色的線狀、帶狀、塊狀、團(tuán)狀或點(diǎn)狀花紋中的任一種或幾種的木質(zhì)基材料組織，連帶其上面生長(zhǎng)的真菌子實(shí)體，保存?zhèn)溆谩?br> 7.一種用權(quán)利要求1所述的炭角菌菌株J22QIU制備菌紋木的方法，包括菌株活化與擴(kuò)繁、接菌培養(yǎng)工序，其特征在于，包括以下具體步驟: A、菌株活化與擴(kuò)繁:將炭角菌菌株venosula) J22QIU接種到活化及擴(kuò)繁培養(yǎng)基上，在22~30°C下黑暗培養(yǎng)1(T15天，得活化與擴(kuò)繁菌株；活化及擴(kuò)繁培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、PDA液態(tài)培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基或OA培養(yǎng)基中的任一種； B、接菌培養(yǎng):將待接種的木質(zhì)基材料滅菌后，與活化及擴(kuò)繁后的菌株充分接觸，在22~30°C下培養(yǎng)4~8周，即得菌紋木。
8.如權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，還可以包括后處理步驟，將接菌培養(yǎng)后得到的菌紋木刮去表面的菌絲，洗凈后干燥至含水率8~10%。
9.如權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，步驟B所述的將待接種的木質(zhì)基材料與活化及擴(kuò)繁后的菌株充分接觸，在固體接菌時(shí)，是將含有菌落的培養(yǎng)基切成與待接種木質(zhì)基材料大小、形狀相近的菌塊，將至少一塊菌塊貼在木質(zhì)基材料表面。
10.如權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，步驟B所述的將待接種的木質(zhì)基材料與活化及擴(kuò)繁后的菌株充分接觸，在液體接菌時(shí)，是將待接種的木質(zhì)基材料浸入含有菌落的培養(yǎng)液中，且/或?qū)⒊蓤F(tuán)的菌絲體夾取置于木質(zhì)基材料的表面或附近。
【文檔編號(hào)】B27K5/00GK103756910SQ201310428232
【公開日】2014年4月30日 申請(qǐng)日期:2013年9月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年4月19日
【發(fā)明者】邱堅(jiān), 何海珊, 伍建榕, 羅蓓, 伍建玲, 甘昌濤 申請(qǐng)人:西南林業(yè)大學(xué)