專利名稱：包含白藜蘆醇和類維生素a的化妝品組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包含白藜蘆醇和類維生素A的化妝品組合物，并涉及應(yīng)用所述組合物調(diào)理皮膚的方法。
眾所周知，雌激素和起著類似雌激素作用的合成化合物可增加老化皮膚中皮層的厚度并減少皺紋形成。絕經(jīng)期后發(fā)生的皮膚干燥、皮膚彈性喪失以及皮膚豐滿等變化均源于缺乏雌激素生產(chǎn)。雌激素療法可防止或減緩許多與皮膚老化有關(guān)的變化(Creidi等，共軛雌激素乳油(Premarin)對老化的面部皮膚的作用，Maturitas，19，第211-23頁，1994)。天然雌激素雌二醇具有以下的結(jié)構(gòu) 視黃醇(維生素A)是一種內(nèi)源性化合物，其在人體內(nèi)自然產(chǎn)生，對于正常的上皮細胞分化來說是必要的。天然和合成的維生素A衍生物已廣泛用于治療各種皮膚疾病和用作皮膚修復和更新劑。視黃酸被用于治療各種皮膚病，如痤瘡、皺紋、牛皮癬、老年斑和皮膚變色。
雌二醇會引起類維生素A受體在兩種不同細胞類型中表達。在小鼠頸上皮細胞中，雌二醇刺激類維生素A的X受體和視黃酸受體的表達(Exp Cell Res.，226273，1996)。在乳癌細胞中，雌二醇引起視黃酸受體基因表達的亞型表達(Mol.Endocrinol.12882，1998)。人體皮膚表達了大量的相同類型的視黃酸受體和類維生素A的X受體(Voorhees等，Skin Pharmacol.，670，1993)。但是，與胸或頸不同，皮膚并非雌激素作用的靶器官。
Ptchelintsev等(US專利5,847,003和US專利5,834,513)公開了包含含氧酸和相關(guān)化合物的組合物，其可進一步包含多種選擇性成分，其中可提及的是雌二醇、類維生素A和生物類黃酮。
近年來，消費者對于包含植物提取物的產(chǎn)品或包含源于植物的成分的產(chǎn)品的需求不斷增加。消費者認為這種產(chǎn)品純潔和柔和，優(yōu)于化學合成的產(chǎn)品。
植物雌激素是一類天然的化合物，其可存在于植物中并具有雌激素樣的活性。某些生物類黃酮如染料木黃酮和黃豆甘原均為公知的植物雌激素。WO 99/04747(Unilever)指出，在各種植物中可發(fā)現(xiàn)的化合物白藜蘆醇是一種植物雌激素，該文獻公開了包含白藜蘆醇的化妝品組合物。所描述的組合物之一也包含棕櫚酸視黃酯。
本發(fā)明部分基于以下的發(fā)現(xiàn)，并非所有的植物雌激素和并非所有的類維生素A組合時均顯示出協(xié)同作用。但是，白藜蘆醇與選定的類維生素A組合協(xié)同地增強了類維生素A對皮膚的有益作用。
如上所述的現(xiàn)有技術(shù)并未描述本申請所要保護的用于皮膚護理化妝品用途的白藜蘆醇和類維生素A的組合。
本發(fā)明包括一種護膚化妝品組合物，其包含0.00001-10wt％的白藜蘆醇和選自下述的類維生素A視黃酸、視黃醇、乙酸視黃酯和亞油酸視黃酯，還包含化妝品可接受的賦形劑。
本發(fā)明也包括一種改善或預防皮膚產(chǎn)生皺紋、產(chǎn)生細皺紋、干燥、脫皮、老化或光致?lián)p傷和改善皮膚厚度、彈性、柔韌性、光澤、光亮和豐滿的方法，該方法包括在皮膚上涂敷本發(fā)明的組合物。本發(fā)明的組合物可局部涂敷于已經(jīng)干燥、脫皮、產(chǎn)生皺紋、產(chǎn)生細皺紋、老化、光致?lián)p傷的哺乳動物的皮膚上，或者可將本發(fā)明的組合物預防性地涂敷以減少皮膚退化性變化。
除了實施例之外，除非另有清楚說明，在本說明書中所指示物質(zhì)的數(shù)量或反應(yīng)條件、物質(zhì)的物理性質(zhì)和/或用途均應(yīng)理解為由詞語“約”進行修飾。除非另有說明，所有的數(shù)量均以組合物重量計。
白藜蘆醇(也稱之為5-對羥基苯乙烯基間苯二酚，或3，4′，5-茋三醇)是本發(fā)明組合物的基本成分。白藜蘆醇具有下述結(jié)構(gòu) 純的白藜蘆醇可從Sigma商購，粗品可由其它化妝品供應(yīng)商處商購，如DNP International，Pharma Sciernce or Madis Botanicals。
通常，以組合物重量計，白藜蘆醇在本發(fā)明組合物中的量為0.00001-10wt％。為了降低成本和使效果最好，白藜蘆醇的量優(yōu)選為0.001％-5％，首選0.1％-5％。
本發(fā)明組合物還包含選自視黃酸、視黃醇、乙酸視黃酯和亞油酸視黃酯的類維生素A。業(yè)已發(fā)現(xiàn)，除棕櫚酸視黃酯以外的這些類維生素A與白藜蘆醇會起到協(xié)同作用。
由于已證實具有化妝品功效，類維生素A優(yōu)選選自視黃醇、乙酸視黃酯和亞油酸視黃酯。
類維生素A在本發(fā)明組合物中的常規(guī)用量為0.001-10％，優(yōu)選0.01-1％，首選0.01-0.5％，以組合物的重量計。
本發(fā)明的組合物也包含化妝品可接受的賦形劑，這些賦形劑對于組合物中的白藜蘆醇和類維生素A起著稀釋劑、分散劑或載體的作用，從而當組合物涂敷于皮膚上時有利于白藜蘆醇和類維生素A的分布。
除了水之外，其它的賦形劑可包括液體或固體潤膚劑、溶劑、濕潤劑、增稠劑和粉末。特別優(yōu)選的非水載體為聚二甲基硅氧烷和/或聚二甲基苯基硅氧烷。本發(fā)明適宜的硅氧烷可為25℃下粘度為約10-10,000,000mm2/s(厘沲)的那些。優(yōu)選它們是低粘度硅氧烷與高粘度硅氧烷的混合物。這些硅氧烷可商購自General Electric Company的商標名為Vicasil、SE和SF，以及Dow Corning Company的200和550系列。用于本發(fā)明組合物中的硅氧烷的用量為5％-95％，優(yōu)選25％-90％，以組合物的重量計。
以組合物的重量計，化妝品可接受的賦形劑通常為5％-99.9％，優(yōu)選25％-80％，并在不存在其它化妝品附加劑時成為組合物的其余部分。方便地，以賦形劑重量計，至少80wt％為水。優(yōu)選地，本發(fā)明組合物至少包含50wt％的水，首選包含60-80wt％的水，以組合物的重量計。
作為選擇性的有益于皮膚的材料或化妝品附加劑，油或油性材料可與乳化劑一起存在，以提供油包水乳劑或水包油乳劑，這這主要取決于所采用乳化劑的平均親水-親油平衡值(HLB)。
本發(fā)明組合物優(yōu)選包含防曬劑。防曬劑包括常規(guī)用于阻止紫外線的那些材料。代表性化合物為PABA的衍生物、肉桂酸酯和水楊酸酯。例如，可采用甲氧基肉桂酸辛酯和2-羥基-4-甲氧基二苯酮(也稱之為羥苯甲酮)。甲氧基肉桂酸辛酯和2-羥基-4-甲氧基二苯酮可分別以商標名Parsol MCX和Benzophenone-3商購。用于乳劑中的防曬劑的準確用量取決于希望保護紫外線照射的程度。
潤膚劑通?？蓳饺氡景l(fā)明的化妝品組合物中。潤膚劑的含量為0.5％-50％，優(yōu)選5％-30％，以組合物總重量計。潤膚劑一般化學分類為酯、脂肪酸和醇，多元醇和烴。
酯可為單酯或二酯。脂肪酸二酯可接受的實例包括己二酸二丁酯、癸二酸二乙酯、二聚酸二異丙酯(diisopropyl dimerate)和琥珀酸二辛酯?？山邮艿闹ф溨舅狨グㄈ舛罐⑺?-乙基-己酯、硬脂酸異丙酯和棕櫚酸異硬脂基酯?？山邮艿娜狨グㄈ齺営退崛惐ズ蜋幟仕崛鹿鸹??？山邮艿闹辨溨舅狨グㄗ貦八嵩鹿瘐ァ⑷樗崛舛罐⒒ズ陀退嵊仓?。優(yōu)選的酯包括椰子-辛酸酯/癸酸酯(椰子-辛酸酯和椰子-癸酸酯的摻混物)、丙二醇肉豆蔻基醚乙酸酯、己二酸二異丙基酯和辛酸鯨蠟酯。
適宜的脂肪醇和酸包括具有10-20個碳原子的那些。特別優(yōu)選的化合物為鯨蠟基、肉豆蔻基、棕櫚基和硬脂基醇和酸。
在可用作潤膚劑的多元醇中，可采用直鏈和支鏈的烷基多羥基化合物。例如，優(yōu)選丙二醇、山梨醇和甘油。也可采用聚合多元醇，如聚丙二醇和聚乙二醇。丁二醇和丙二醇也是特別優(yōu)選的滲透增強劑。
可用作潤膚劑的舉例性的烴是那些烴鏈中具有12-30個碳原子的烴。其具體實例包括礦物油、礦脂、角鯊烯和異鏈烷烴。
另一類存在于本發(fā)明化妝品組合物中的功能成分為增稠劑。增稠劑的用量通常為0.1-20wt％，優(yōu)選約0.5％-10wt％，以組合物的重量計。舉例性的增稠劑為交聯(lián)聚丙烯酸酯材料，可以商標名Carbopol從B.F.Goodrich Company商購。還可采用膠質(zhì)成分，如黃原膠、角叉菜膠、明膠、卡拉亞膠、果膠和槐樹豆膠。在某些情形下，增稠功能也可由用作硅氧烷或潤膚劑作用的材料來完成。例如，超過10厘沲的硅氧烷膠質(zhì)和酯如甘油硬脂酸酯具有雙重功能。
在本發(fā)明的化妝品組合物中可摻入粉末。這些粉末包括白堊、滑石、高齡土、淀粉、綠土粘土、化學改性的硅酸鎂鋁、有機改性的蒙脫石粘土、氫化硅酸鋁、煅制二氧化硅、鋁淀粉琥珀酸辛烯酯和其混合物。
其它附加劑少量組分也可摻入化妝品組合物中。這些成分包括著色劑、遮光劑和香料。這些附加劑少量組分的含量為0.001％-20％，以組合物的重量計。
本發(fā)明的組合物主要用作局部化妝涂敷于人體皮膚上的產(chǎn)品，特別是用作調(diào)理、增濕和潤滑皮膚以及預防或減少起皺、皺紋或老化皮膚外觀的試劑。
使用時，從適宜的容器或涂敷器，將少量的組合物如1-100ml涂敷于皮膚的暴露表面上，如果需要的話，用手或手指或適宜的工具將組合物涂抹開和/或在皮膚上摩擦。
本發(fā)明的局部皮膚處理組合物可配制成洗劑、霜劑或凝膠。可將組合物包裝于適合其粘度的適宜的容器中，由消費者使用。例如，可將洗劑或霜劑包裝于瓶中或圓球涂敷器中，或由氣溶膠作為推動劑驅(qū)動的裝置或容器中，所述裝置或容器配有適用于手動操作的泵。當組合物為霜劑時，可簡單地將其貯藏于不變形的瓶中或擠出容器中，如管或有蓋子的罐中。組合物也可包含于膠囊中，如U.S.專利5,063,507所述，該文獻引入本文作為參考。因此本發(fā)明也提供了包含本文所限定的化妝品可接受的組合物的密封容器。
以下的具體實例進一步說明本發(fā)明，但是，本發(fā)明并非受其限制。在所有實施例中，白藜蘆醇從Sigma獲得。類維生素A從Sigma獲得。斯氏“t-檢驗”用于計算p值。
采用以下的方法細胞培養(yǎng)法
使用由25-30歲的女性志愿者的防曬內(nèi)臂獲得的成人成纖維細胞。將該細胞在1∶1 DMEM/Hams F12培養(yǎng)基中生長，所述培養(yǎng)基包含10％FBS，保持在37℃下，5％的CO2氣氛，正常大氣氧壓力。在12-孔板中，將第三通道成人成纖維細胞于DMEM培養(yǎng)基中生長，所述培養(yǎng)基包含10％的FBS，接種密度為40,000細胞/mL/孔。將80％匯合下的細胞用無血清和無酚紅(PRF)的DMEM培養(yǎng)基漂洗兩次。將細胞用白藜蘆醇預處理4小時，然后加入類維生素A并再培養(yǎng)48小時。培養(yǎng)后，將孔板用1X PBS洗滌兩次，將細胞單層收獲到100μL細胞溶解緩沖液(包含1X PBS，1％Triton X，0.5％脫氧膽酸鈉，0.1％含蛋白酶抑制劑的SDS(10mg/ml PMSF異丙醇溶液，10μl/ml)中。將懸浮液于14000rpm下旋轉(zhuǎn)10分鐘，收集上清液，將此上清液的等分樣品用于蛋白質(zhì)定量分析。蛋白質(zhì)濃度采用Pierce蛋白質(zhì)試劑盒確定。將100μl上清液的殘余部份(細胞溶解產(chǎn)物)在40μl樣品緩沖液(NOVEX)和0.5％β-巰基乙醇(BME)的混合物進行變性，并將樣品煮沸5分鐘。
豬皮膚器官培養(yǎng)方法取7mm的豬皮活體樣本，將該樣本置于無血清的DMEM中，培養(yǎng)2天。然后，將介質(zhì)換成無酚紅的介質(zhì)。將取自活體的樣本以5μl乙醇/活體樣本用白藜蘆醇局部處理24小時。24小時后，將類維生素A局部施加至活體樣本上。然后培養(yǎng)處理后的活體樣本4天。處理后，將活體樣本用1X磷酸鹽緩沖液漂洗兩次，然后在-20℃下冷凍備用。通過冷凍并刮去表皮而將表皮與真皮分離。收集表皮，并在溶解緩沖液(包含1X PBS、1％Triton X、0.5％脫氧膽酸鈉、0.1％含蛋白酶抑制劑的SDS(10mg/ml PMSF的異丙醇溶液，10μl/ml，抑肽酶，30μl/ml和100mM原釩酸鈉，10μl/ml)中勻化。將勻漿在14000rpm下旋轉(zhuǎn)，收集上清液以測定蛋白(上清液等分樣品進行蛋白質(zhì)測定)。
在成纖維細胞和豬皮活體樣本中檢測細胞視黃酸結(jié)合蛋白2(CRABP-2)在細胞內(nèi)，視黃醇和視黃酸與特異性細胞結(jié)合蛋白結(jié)合。兩種主要的蛋白質(zhì)為CRABP-1和CRABP-2(Roos等，藥理學綜述(Pharmacological reviews)50，315-333，1998)。這些蛋白質(zhì)通過作為類維生素A代謝中的貯藏蛋白或穿梭蛋白而調(diào)控類維生素A的細胞內(nèi)濃度。CRABP蛋白質(zhì)的含量受細胞內(nèi)視黃酸的量控制。類維生素A高細胞含量增加了CRABP-2的表達。因此，細胞中該蛋白質(zhì)的數(shù)量是對細胞的類維生素A活性的度量。在表皮和真皮中，皮膚細胞均包含高含量的CRABP-2。在體外成纖維細胞中應(yīng)答類維生素A的CRABP-2被用于可重復地測量預測人體皮膚應(yīng)答的類維生素A的生物活性(Elder等，J.Invest.Dermatol.，106517-521，1996)。CRABP-2增加也與表皮分化作用以及真皮類維生素A作用有關(guān)。因此，在這些研究中，我們采用成纖維細胞和豬皮表皮的CRABP-2表達作為導致表皮分化(皮膚調(diào)理和干皮膚有效)和真皮膠原和細胞外基層合成(抗老化、抗起皺作用)增加的類維生素A活性的度量。
為測量在如上所述成纖維細胞和豬皮提取物中CRABP-2的含量，將細胞上清液在4X樣品緩沖液和10％BME中再次懸浮，煮沸5分鐘，用于蛋白質(zhì)印跡法。將等量的蛋白質(zhì)負載于16％Tris-glycine凝膠中進行CRABP-2蛋白分析，該分析采用SDS-PAGE和蛋白質(zhì)印跡法。將凝膠轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，按照標準方法，采用抗CRABP-2單克隆抗體進行蛋白質(zhì)印跡。采用由Boehringer Mannheim(Indianopolis，IN)獲得的化學發(fā)光系統(tǒng)將CRABP-2蛋白帶在蛋白質(zhì)印跡中顯現(xiàn)出來。膜中的該帶通過光密度掃描定量，來自一式三份樣品的數(shù)據(jù)以對照的％進行計算，在下表中表示為相對于對照增加的％(對照為100％)+/-標準偏差。
在第一個實驗中的對照為0.0763+/-0.0259，在第二個實驗中為0.11+/-1.01 OD。
表1
由表1的結(jié)果可以看出，白藜蘆醇本身對CRABP-2表達僅顯示出很小的不顯著的作用。視黃醇和視黃酸顯示出對CRABP-2表達相當高的刺激。當豬皮表皮用白藜蘆醇預處理時，白藜蘆醇協(xié)同地增強了視黃醇和視黃酸的活性。
表2A
表2B
從表2A和2B的結(jié)果看出，白藜蘆醇與類維生素A組合協(xié)同地刺激了在皮膚成纖維細胞中CRABP-2的表達，而白藜蘆醇與棕櫚酸視黃酯組合時則無此作用(在兩個實驗中均無效)。視黃醇在對其進行測試的第二個實驗中是有效的(在第一個實驗中未對視黃醇進行測試-表2A)。低含量的乙酸視黃酯單獨使用或與白藜蘆醇組合時均無效。但是，當存在白藜蘆醇時，高含量(表2B)的乙酸視黃酯刺激CRABP-2的表達。比較例3該實施例研究了大豆提取物(公知的植物雌激素)和類維生素A組合對皮膚的作用。
在該實施例中，將得自ADM(Nova Soy)的大豆粉溶解于乙醇中，得到濃度為1mg/ml的溶液，在70℃下加熱半小時，過濾。將醇提取物用于在實驗中進行測試。獲得的結(jié)果列于表3中。
表3
從表3看出，大豆提取物單獨刺激成纖維細胞的CRABP-2表達為對照的400％(與類維生素A相同)。不同的類維生素A刺激CRABP-2表達為對照的200-400％。但是，當組合在一起時，大豆并未與不同的類維生素A產(chǎn)生協(xié)同作用。在大多數(shù)情形下，所述組合甚至比單獨時的活性低。因此，大豆提取物雖然是植物雌激素，但是，在CRABP-2于成纖維細胞中表達時，其與類維生素A并未顯示出協(xié)同作用。
實施例4-9舉例說明本發(fā)明的護膚組合物。這些組合物可按照常規(guī)方式加工，并適宜用作化妝品使用。具體說來，這些組合物適用于涂敷至產(chǎn)生皺紋、產(chǎn)生細皺紋、粗糙、干燥、鱗狀、老化和/或UV損傷的皮膚，以改善外觀和其感覺，并可涂敷至健康的皮膚上以預防或延緩退化。
應(yīng)理解為，以上說明和描述的本發(fā)明的具體形式僅用于說明目的。在不背離本發(fā)明所公開的清楚的教導的前提下，在說明書的實施方案可作出各種變化，包括但不限于說明書列出的那些。因此，本發(fā)明的保護范圍僅受所附的權(quán)利要求書的限制。
權(quán)利要求
1.一種護膚化妝品組合物，其包含(i)白藜蘆醇，其含量為0.00001-10wt％；(ii)類維生素A，其選自視黃酸、視黃醇、乙酸視黃酯和亞油酸視黃酯；和(iii)化妝品可接受的賦形劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的護膚化妝品組合物，其中，白藜蘆醇的含量為0.0001-5％，以組合物的重量計。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化妝品組合物，其中，類維生素A的含量為0.001-10wt％。
4.一種改善產(chǎn)生了皺紋、細皺紋、干燥、鱗狀、老化或光致?lián)p傷的皮膚和改善皮膚厚度、彈性、柔韌性和豐滿的方法，該方法包括在皮膚上涂敷權(quán)利要求1-3任一項的組合物。
5.一種增加皮膚中細胞視黃酸結(jié)合蛋白水平的美容方法，該方法包括在皮膚上涂敷權(quán)利要求1-3任一項的組合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了包含白藜蘆醇與選定的類維生素A組合的護膚化妝品組合物。
文檔編號A61Q19/00GK1382035SQ00814689
公開日2002年11月27日 申請日期2000年9月28日 優(yōu)先權(quán)日1999年10月22日
發(fā)明者S·皮萊, M·N·馬哈詹, S·P·格蘭格爾, D·J·波卡利科, M·巴拉特 申請人:荷蘭聯(lián)合利華有限公司