專利名稱：減少毛發(fā)生長、毛囊及毛干尺寸與毛發(fā)色素沉著的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明有關(guān)一種可有效地減緩毛發(fā)生長之方法及組合物。詳言之，本發(fā)明有關(guān)一種改變毛發(fā)生長速率、縮小毛囊及毛干尺寸、及減少毛干色素沉著之方法，其系局部施用含有絲氨酸蛋白酶抑制活性之植物萃取物，尤其是大豆萃取物諸如豆?jié){，或前述物質(zhì)之混合物及調(diào)配物，同時(shí)結(jié)合以其他活性成分諸如異黃酮。
哺乳類毛發(fā)的一種主要功能系提供外在保護(hù)。然而，在人類身上幾乎已完全喪失此種功能，其毛發(fā)基本上系基于社交及美觀因素而保持或移除。
已使用許多方法以移除不需要之毛發(fā)，包括剃除、電針除毛、拔除、激光及光療及注射治療性抗雄激素物質(zhì)。此等習(xí)用方法不無缺點(diǎn)。例如，剃除可能于皮膚表面產(chǎn)生割痕及刀痕，可能明顯地增加毛發(fā)再生長速率，亦可能留下不期望產(chǎn)生之短粗毛。雖然電針除毛可長時(shí)間使某一區(qū)域保持沒有不期望之毛發(fā)，但此種方法經(jīng)常是昂貴而疼痛，亦可能導(dǎo)致疤痕。拔除不僅會導(dǎo)致疼痛及不適，亦經(jīng)常無法完全移除短毛。使用抗雄性經(jīng)常產(chǎn)生數(shù)種不期望之副作用，諸如影響肌肉之形成。因此，需要一種可減緩毛發(fā)生長之較佳方法。
假性須囊炎系為發(fā)炎性毛發(fā)疾病，大多發(fā)生于胡須區(qū)域。當(dāng)毛發(fā)尖端穿入皮膚而非穿透毛孔時(shí)，則產(chǎn)生發(fā)炎性小囊丘疹。此種過程于黑種人身上極為常見，因其毛發(fā)通常卷曲，而于銳角下穿出皮膚。密貼式的剃除，尤其是使用剃刀，易罹患假性須囊炎。目前最有效之治療系使該等毛發(fā)完全于皮膚表面上生長。但經(jīng)常不期望使用該種治療。
多毛癥系為極為常見之疾病，約有4％女性患有此癥。顏面多毛癥經(jīng)常防礙個人及工作活動，而暫時(shí)性的毛發(fā)移除系為處理多毛患者的主要方式。剃除系為顏面毛發(fā)最常使用之暫時(shí)方法，因?yàn)榘纬?、敷蠟及使用除毛劑更難以忍受，且需謹(jǐn)慎以避免毛囊炎、色素沉著、及產(chǎn)生疤痕。通常使用化妝品覆蓋以遮蔽刀痕及短毛，而電針除毛及熱除可適當(dāng)?shù)赜糜谟谰眯猿?br> 除毛之取代性或互補(bǔ)式研究系為減緩毛發(fā)生長、縮小毛囊及毛干尺寸及減少毛干色素沉著之方法。該項(xiàng)研究可降低現(xiàn)存毛發(fā)之可見度，使其變得較細(xì)較柔軟。與其他除毛法結(jié)合時(shí)，該方法可促進(jìn)并延長除毛效果，并降低除毛之需求及頻率。長期使用該項(xiàng)研究結(jié)果，可使毛發(fā)生長變稀、變軟而降低色素沉著，使其變得較不易察覺，而不需使用其他除毛方法。
腋部(腋窩)需減緩毛發(fā)生長，此處使用除臭劑及制汗劑以控制腋毛內(nèi)所產(chǎn)生之氣味。期望有可供腋下使用之產(chǎn)品，在除臭或制汗活性之同時(shí)具有減緩毛發(fā)生長活性。
非裔型毛發(fā)的形態(tài)獨(dú)特--具有不同直徑之卷曲毛干。此種復(fù)雜之毛干結(jié)構(gòu)需要特殊之修飾產(chǎn)品及方法，以確定非裔型毛發(fā)保持美觀上所需之性質(zhì)。期望有一種產(chǎn)品，可降低此種復(fù)雜性，使該非裔型毛發(fā)更易處理，并改善其外觀。
期望提供一種方法，以化學(xué)或自然地影響毛發(fā)生長、毛囊及毛干尺寸及毛干色素沉著，而不對使用者產(chǎn)生不需要之副作用。
根據(jù)本發(fā)明，吾人已發(fā)現(xiàn)一種組合物及方法，以改變哺乳類毛發(fā)生長、毛囊及毛干尺寸及毛發(fā)色素沉著，其系于哺乳類皮膚上局部施用有效量之局部活性組合物，包含蛋白酶抑制劑、植物萃取物，尤其是豆科植物萃取物包括但不限于豆?jié){，歷經(jīng)足以影響毛發(fā)生長、毛囊及毛干尺寸及毛干色素沉著之時(shí)間。該種局部活性組合物可另外組合以其他活性成分，包括但不限于合成或天然異黃酮，以促進(jìn)針對毛發(fā)生長及色素沉著所期望之效果。
本發(fā)明組合物及方法提供一種獨(dú)特而簡便之方式，以減緩毛發(fā)生長、縮小毛囊及毛干尺寸并減少毛干色素沉著，其系使用含有絲氨酸蛋白酶抑制活性之絲氨酸蛋白酶抑制劑、豆科植物之植物萃取物，尤其但不限于豆?jié){，及其與異黃酮之組合物。
附圖簡單說明本發(fā)明含有至少一種彩色圖型。此種具有彩色圖型之專利的副本系于請求及付出必要費(fèi)用下由專利商標(biāo)局提供。
參照以下本發(fā)明詳述及附圖可進(jìn)一步明了本發(fā)明及其他優(yōu)點(diǎn)，其中

圖1對照組及經(jīng)豆?jié){處理之C57B1/6老鼠毛發(fā)的相片(高倍率)。
圖2對照組及經(jīng)豆?jié){處理之C57B1/6老鼠毛干于毛發(fā)周期第四日之組織剖面圖。
圖3對照組及經(jīng)豆?jié){處理之C57B1/6老鼠毛干于毛發(fā)周期第七日之組織剖面圖，高及低倍率。
圖4對照組及經(jīng)豆?jié){處理之C57B1/6老鼠毛干于毛發(fā)周期第18日之組織剖面圖。
圖5對照組及經(jīng)豆?jié){處理之C57B1/6老鼠毛干于毛發(fā)周期第21日之組織剖面圖。
圖6對照組、經(jīng)豆?jié){處理及經(jīng)豆?jié){衍化蛋白質(zhì)處理之C3H老鼠毛干(高倍率)于毛發(fā)周期第七日之組織剖面圖。
圖7對照組、經(jīng)豆?jié){處理及經(jīng)豆?jié){衍化蛋白質(zhì)處理之C3H老鼠毛干(低倍率)于毛發(fā)周期第七日之組織剖面圖。
圖8對照組、經(jīng)豆?jié){處理及經(jīng)豆?jié){衍化蛋白質(zhì)處理之C3H老鼠毛干于毛發(fā)周期第21日之組織剖面圖。
圖9對照組及經(jīng)豆?jié){衍化蛋白質(zhì)處理之C3H老鼠毛發(fā)之相片(高倍率)。
圖10對照組及經(jīng)豆?jié){衍化蛋白質(zhì)處理之C57B1/6老鼠毛干(高倍率)于毛發(fā)周期第八日之組織剖面圖。
圖11說明豆?jié){之色胺酸抑制活性的圖。
圖12:C57B1/6老鼠皮膚于整個毛發(fā)周期之Western印跡法，說明于豆?jié){處理后降低之酪胺酸及TRP-1蛋白質(zhì)濃度。
圖13人類顏面未經(jīng)處理及經(jīng)豆?jié){處理側(cè)面的相片，每日使用豆?jié){處理歷經(jīng)四周。
圖14使用及不使用豆?jié){處理時(shí)毛干尺寸定量分析。
圖15于一腿部使用豆?jié){處理五周之后的人類腿部毛發(fā)相片。
圖16對照組、經(jīng)豆?jié){處理、及經(jīng)富含異黃酮之豆?jié){處理之C57B1/6老鼠毛發(fā)(高倍率)的相片。
圖17對照組、經(jīng)豆?jié){處理、及經(jīng)富含異黃酮之豆?jié){處理之C57B1/6老鼠皮膚于毛發(fā)周期第15日之組織剖面圖，說明毛干之厚度及顏色。
圖18使用各種豆?jié){及異黃酮調(diào)配物處理三周后，C57B1/6老鼠毛發(fā)之相片。
較佳具體實(shí)施例詳述本發(fā)明中，″哺乳類″應(yīng)包括任何″高級脊椎動物包括哺乳動物類″，如Webster氏醫(yī)學(xué)字典407(1986)所定義，包括但不限于人類。本發(fā)明所使用之″(％，重量/體積)″意指每100毫升總組合物之特定成分克數(shù)。
適用于本發(fā)明組合物之局部活性劑系包括蛋白酶抑制劑及具有蛋白酶抑制活性之天然植物萃取物及其混合物。較佳蛋白酶抑制劑系為絲氨酸蛋白酶抑制劑，尤其是大豆色胺酸抑制劑(″STI＂)及由大豆衍生之Bowman Birk抑制劑(″BBI＂)。較佳植物萃取物系為豆科植物者，尤其是大豆萃取物，諸如豆?jié){。該蛋白酶抑制劑以本發(fā)明組合物總體積計(jì)之較佳用量系由約0.0001％(重量/體積)至約20％(重量/體積)，更佳系由約0.001％(重量/體積)至約5％(重量/體積)。較佳之植物含水萃取物諸如豆?jié){之含量系10-99％(體積/體積)，更佳系由50-99％(體積/體積)。
吾人已意外地發(fā)現(xiàn)當(dāng)局部活性劑諸如前述者--尤其是豆?jié){或含有豆?jié){之調(diào)配物--富含異黃酮時(shí)，尤其是由大豆衍化之異黃酮，可增進(jìn)其對于毛發(fā)生長、毛發(fā)尺寸及毛發(fā)色素沉著之抑制效果。該植物含水萃取物諸如豆?jié){中之異黃酮含量較佳系0.000005-15％(體積/體積)，更佳系0.00001-10％(體積/體積)。
若需要該局部活性醫(yī)藥或化妝劑之輸送參數(shù)，則本發(fā)明局部活性組合物可另外包含藥學(xué)上可接受或化妝學(xué)上可接受之媒質(zhì)，其可作為輸送系統(tǒng)，以使該局部活性劑滲入毛干及皮膚內(nèi)。
該醫(yī)藥或化妝組合物可視情況結(jié)合其他成分，諸如潤濕劑、化妝佐劑、抗氧化劑、脫色劑、抗老化劑、除毛劑、頭發(fā)造型劑、防曬劑、表面活性劑、發(fā)泡劑、調(diào)理劑、保濕劑、香料、著色劑、稠化劑、緩沖劑、防腐劑等，及其混合物?？捎诓挥绊懺摻z氨酸蛋白酶活性之用量下結(jié)合此等物質(zhì)，以產(chǎn)生化妝或醫(yī)藥產(chǎn)品，諸如但不限于精油、乳霜、洗劑、糊劑、凝膠、粉末、敷劑或注射物，以減緩毛發(fā)生長、毛發(fā)尺寸及毛發(fā)色素沉著。
本發(fā)明組合物可于其他活性成分或組合物之前、同時(shí)或之后施用，以促進(jìn)其效果。例如，本發(fā)明組合物可與一或多種有利于除毛之產(chǎn)品結(jié)合使用，以實(shí)際移除毛發(fā)，降低毛發(fā)可見度、改善毛發(fā)風(fēng)采或改善毛發(fā)處理。本發(fā)明組合物可于除毛之前、之期間或之后施用。其可與下列物質(zhì)中之一或多種同時(shí)局部施用除毛劑、洗發(fā)精、毛發(fā)調(diào)理劑、造型凝膠、護(hù)發(fā)產(chǎn)品、發(fā)蠟產(chǎn)品、剃毛產(chǎn)品、除毛產(chǎn)品、剃毛后產(chǎn)品、除臭劑、制汗劑、電針除毛、激光除毛、光導(dǎo)性除毛、敷劑或沐浴添加劑。
本發(fā)明組合物可每日施用至少歷經(jīng)四至八周，如此應(yīng)可發(fā)現(xiàn)其對毛發(fā)外觀之影響?？蛇B續(xù)施用，先決條件為期望保持該毛發(fā)之狀態(tài)。每日施用于臉部可緩和假性須囊炎及/或多毛癥之狀況；施用于腋部可減緩腋下之毛發(fā)生長，施用于頭皮及頭發(fā)上有助于非裔型毛發(fā)之處理及造型。
該局部活性醫(yī)藥或化妝組合物之施加量應(yīng)可有效地改變哺乳類毛發(fā)生長、毛囊及毛干尺寸及毛干色素沉著。本發(fā)明所使用之″有效量″意指足以覆蓋皮膚表面期望延遲毛發(fā)生長及毛發(fā)色素沉著及縮小毛發(fā)尺寸之區(qū)域之量。當(dāng)期望延遲毛發(fā)生長、毛發(fā)尺寸及毛發(fā)色素沉著時(shí)，該組合物較佳系施加于皮膚表面，使得基于每平方厘米皮膚表面存有約2微升/平方厘米至約500微升/平方厘米之局部活性劑。
吾人意外地發(fā)現(xiàn)當(dāng)局部活性劑諸如豆?jié){或富含異黃酮之豆?jié){局部施加于動物皮膚時(shí)，明顯延遲毛發(fā)生長、毛囊及毛干尺寸及毛干色素沉著。吾人亦相信因?yàn)槿祟愔l(fā)生長周期經(jīng)常較老鼠緩慢，故于人類體內(nèi)之毛發(fā)生長延遲遠(yuǎn)長于老鼠。
本文所述的發(fā)明可適當(dāng)?shù)赜谌魏谓M份、成分、或未詳細(xì)揭示于本發(fā)明之步驟等不存在下進(jìn)行。下文闡述的實(shí)施例用于進(jìn)一步說明本發(fā)明之性質(zhì)及其進(jìn)行方式。然而，本發(fā)明應(yīng)不限于其細(xì)節(jié)。
實(shí)施例實(shí)施例1試驗(yàn)物質(zhì)于老鼠系統(tǒng)中之除毛性C57BI/6或C3H老鼠(雄性及雌性)系得自Charles River(Kingston,NY),8-10周大，處于其個別毛發(fā)周期之休止(靜止)期。根據(jù)Stenn等人″糖皮質(zhì)激素對毛發(fā)生長起始之影響再審查″，6 Skin Pharmacol.,125-134(1993)所列示之方法，通過敷蠟除毛(拔除)動物的各背毛而誘發(fā)毛發(fā)生長。8-10周大之C57B1/6及C3H老鼠于除毛時(shí)所有毛囊皆同時(shí)開始生長期(毛發(fā)生長期)。如表1所示，于誘發(fā)部位發(fā)現(xiàn)以下現(xiàn)象
表1于誘發(fā)部位之發(fā)現(xiàn)
如表1所示，當(dāng)除毛后數(shù)日動物粉紅色皮膚開始變黑時(shí)，可見到毛發(fā)生長。此因該C57BI/6及C3H老鼠僅于毛囊中含有黑素細(xì)胞，而背部表皮中則否，故毛干中有毛發(fā)色素沉著。使用市售產(chǎn)品進(jìn)行化學(xué)除毛時(shí)，吾人國際申請案編號PCT/US97/11033中記錄了相似的毛發(fā)生長特性。
因?yàn)槭箢惷l(fā)周期不僅因種類不同而異，個別動物之間亦有差異，研究時(shí)于每只動物體內(nèi)分析毛發(fā)周期之狀態(tài)。使用剪刀自每只老鼠身上取下2厘米×1厘米皮膚試樣，于25℃下使用pH約6.9-7.1之10％經(jīng)緩沖甲醛水溶液(StephensScientific)固定，根據(jù)已知方法成型于石蠟塊中。該蠟塊經(jīng)切薄片，剖面使用H&E或Fontana-Mason染色法染色。組織性地檢測該剖面，使用本領(lǐng)域眾所周知之方法，以確定毛發(fā)周期之期數(shù)、毛囊及毛干尺寸及毛發(fā)色素沉著程度。目測及使用低倍率(×8)解剖顯微鏡毛發(fā)長度。
此實(shí)施例及吾人國際申請案編號PCT/US97/11033所述的實(shí)施例，顯示平均約25日之C57BI/6及C3H老鼠的毛發(fā)生長周期，并記錄毛囊及毛干發(fā)展之相同時(shí)序，而與所使用之除毛方法無關(guān)。
實(shí)施例2豆?jié){及豆?jié){調(diào)配物之制備一種制造豆?jié){之方法系將大豆浸于去離子水或純水中歷經(jīng)數(shù)小時(shí)，于其完全水合之后進(jìn)行研磨，添加少量水。(研磨方法使得豆?jié){被萃取)。收集之后，可過濾該豆?jié){以除去任何殘留之豆皮部分。用于下述調(diào)配物之豆?jié){可為前述新鮮豆?jié){，或可自大豆粉及水制得。該大豆粉系自大豆研磨，亦可經(jīng)冷凍干燥、噴干、或冷凍干燥，形成之豆?jié){可經(jīng)或不經(jīng)過濾。所制備之豆?jié){可含有約1至約90重量％之干燥大豆粉末。另一實(shí)施例系使用豆?jié){粉，由經(jīng)冷凍干燥、噴干或冷凍干燥之豆?jié){制得，添加水或經(jīng)過濾或均質(zhì)化調(diào)理。亦可使用其他大豆萃取方法，以于下述調(diào)配物中產(chǎn)生該活性成分。例如，該活性成分可使用乙醇/水混合物而自經(jīng)研磨之大豆萃取，如此保留該大豆之絲氨酸蛋白酶抑制活性，較佳系該蛋白質(zhì)STI保持不變。
可用于本發(fā)明之豆制品可制自所有大豆類，而與其地理來源、曝曬、收割時(shí)間等因素?zé)o關(guān)。然而，以特定種類、地理來源或生長條件較佳。例如但不限于其大豆胰蛋白酶抑制劑(STI)含量或異黃酮含量豐富之大豆種類，或使豆類中之STI或異黃酮含量豐富之生長條件較佳。應(yīng)已知可用于本發(fā)明組合物中之大豆產(chǎn)品具有明顯氣味，某些種類可讓人接受，某些則較不受歡迎。若需要，則本發(fā)明組合物之氣味可藉著使用由已知可減少氣味之特定大豆種類衍生之大豆產(chǎn)品降低，包括但不限于脂肪氧合酶-2-缺乏型大豆及具有經(jīng)修飾糖性質(zhì)者等。于該調(diào)配物中降低氧濃度之方法亦可減少氣味。亦可使用各種遮蔽劑或香料以掩蓋該氣味。
本發(fā)明組合物可另外包含表面活性劑、潤濕劑、保濕劑、調(diào)理劑、香料、著色劑、防腐劑、抗氧化劑、脫色劑、除毛劑、抗老化劑、防曬劑、發(fā)泡劑、化妝佐劑、緩沖劑或其混合物。
本發(fā)明組合物可停留于皮膚上，歷經(jīng)足以產(chǎn)生改變之時(shí)間。例如，本發(fā)明組合物可應(yīng)用于皮膚日常處理歷經(jīng)至少約四周，更佳系每日施加該組合物歷經(jīng)至少八周。
本發(fā)明另一種方法系為減少或預(yù)防假性須囊炎之方法。每日施加本發(fā)明組合物可減少或預(yù)防此種狀況。本發(fā)明組合物亦可每日施加于該輔助區(qū)域以減緩毛發(fā)生長。此外，本發(fā)明組合物可每日施加于頭皮，以造型或改善非裔型毛發(fā)之處理。
如吾人共待審美國專利申請案(代理文件編號JBP430)所示，可使用數(shù)種以大豆為主之調(diào)配物以減少色素沉著。所有此等調(diào)配物亦可用于減緩毛發(fā)生長。下表2中列示部分特佳之豆?jié){調(diào)配物及含有異黃酮之豆?jié){調(diào)配物的實(shí)施例。用于本發(fā)明之異黃酮配制劑的實(shí)施例系為來自Ichimaru,Japan之黃固酮SE，含有約0.1％之純異黃酮。所有此等調(diào)配物中，豆?jié){皆可使用適量之豆粉或豆?jié){粉及水置換。
表2豆?jié){精油調(diào)配物
實(shí)施例3含有由大豆衍生之蛋白酶抑制劑之局部活性組合物的制備購自Sigma-Aldrich Corporation之大豆胰蛋白酶抑制劑(STI)及Bowman-Birk抑制劑(BBI)混合于pH7.4之0.1M經(jīng)磷酸鹽緩沖之鹽水(PBS,Gibco-BRL,Gaithersburg,MA)中，濃度為1％至0.001％。四份體積之形成之溶液與1份體積之(100毫克/毫升)脂質(zhì)體媒質(zhì)混合，該媒質(zhì)系藉Niemiec等人所述之方法制備，以產(chǎn)生該局部活性組合物。非離子性脂質(zhì)體配制劑，諸如Niemiec等人″非離子性脂質(zhì)體組合物對于肽藥物進(jìn)入毛囊-皮脂腺單位之局部輸送的影響使用Hamster Ear模型進(jìn)行體內(nèi)研究″，12 Pharm.Res.1184-88(1995)(″Niemiec)(在此引用作為參考)中所揭示的，是本領(lǐng)域所熟知的，并且在吾人專利申請案(代理文件編號JBP 430)中有描述。GDL脂質(zhì)體系如前述Niemiec等人所述般地制備，不同之處在于以下變化該非離子性脂質(zhì)體調(diào)配物含有甘油二月桂酸酯(Emulsynt GDL,ISP Van Dyk)/脂固醇(Croda)/聚氧化乙烯-10-硬脂醚(Brij76,ICI)/聚氧化乙烯-9-月桂醚，比例為37.5∶12.5∶33.3∶16.7。使用PBS或Hepes緩沖劑0.05M,pH7.4(Gibco-BRL ofGaithersburg,MD)作為制備該脂質(zhì)體所使用之水相。
實(shí)施例4豆?jié){延遲毛發(fā)生長并縮小毛囊及毛干尺寸并減少毛發(fā)色素沉著C57B1/6老鼠系如實(shí)施例1所述般地誘導(dǎo)新毛發(fā)周期，每日使用豆?jié){處理。每日觀察動物之毛發(fā)生長情況，于該毛發(fā)周期之重要時(shí)間點(diǎn)取下皮膚組織切片。使用豆?jié){處理之結(jié)果，延遲毛發(fā)生長，可見到其毛發(fā)變得稀薄，觸感較為光滑。如同預(yù)期地，經(jīng)處理之老鼠于該毛發(fā)周期之第7-8日未顯示皮膚變黑，且與對照組動物不同地，于第11-12日未見到其毛干。經(jīng)豆?jié){處理之老鼠的毛發(fā)周期平均延遲3-6日。圖1系為老鼠毛皮之圖型，顯示于豆?jié){處理后之毛發(fā)外觀、顏色、尺寸及厚度差異。
組織切片皮膚試樣之組織檢驗(yàn)確定此等觀察結(jié)果。如Fontana-Mason(F&M)染色之圖2所示，于毛發(fā)周期之第四日，未經(jīng)處理之毛囊如同預(yù)期地完全發(fā)展，含有所有之細(xì)胞層及色素沉積。相反地，經(jīng)豆?jié){處理之試樣(于相同倍率下)顯示較小而未完全發(fā)展之毛囊，而無色素沉積。
圖3系顯示兩組使用F&M染色之組織剖面，其為低及高倍率。此等剖面系得自毛發(fā)周期之第七日。上層顯示在與未經(jīng)處理之對照組比較之下，經(jīng)豆?jié){處理之皮膚具有較小、較短且較少色素沉著之毛囊。下層顯示較高倍率之毛囊，進(jìn)一步說明經(jīng)豆?jié){處理之后的毛囊及毛干尺寸及色素沉著差異。
圖4顯示于毛發(fā)周期第18日時(shí)之經(jīng)F&M染色皮膚的低倍率剖面圖。于此倍率下，顯然該豆?jié){處理使得毛囊尺寸縮小，而導(dǎo)致毛干長度及厚度縮小，并使得經(jīng)處理毛囊之整體色素沉著減少。
圖5系顯示兩倍率下之毛發(fā)周期第21日的皮膚剖面。上層說明對照動物系處于生長中期，此時(shí)毛囊退化。另一方面，經(jīng)豆?jié){處理之毛囊已完成生長中期，因其已顯示靜止期，休止期。此情況顯示經(jīng)豆?jié){處理之后，不僅延遲毛發(fā)周期，亦使其提早終止。下層者于高倍率下說明該生長中期對照毛囊及較短、靜止期(休止期)經(jīng)豆?jié){處理毛囊。
實(shí)施例5豆?jié){對于毛發(fā)生長、尺寸及色素沉著之影響可于C3H老鼠體內(nèi)再現(xiàn)為了證實(shí)豆?jié){對于毛發(fā)生長之影響并非C57B1/6老鼠所特有，吾人使用棕毛(Agouti)C3H老鼠重復(fù)實(shí)施例4所述之實(shí)驗(yàn)。此等實(shí)驗(yàn)之結(jié)果于目測及組織上皆相同。豆?jié){于C3H老鼠體內(nèi)延遲毛發(fā)生長并縮小毛囊及毛干尺寸及色素沉著。
組織分析確定此等目測結(jié)果。如圖6之上層所示，使用F&M染色，于該毛發(fā)周期之第七日，經(jīng)豆?jié){處理之毛囊在與未經(jīng)處理之對照組比較之下，較小而累積較少色素。圖7之上層(F&M染色)顯示較低倍率之相同皮膚剖面，說明經(jīng)豆?jié){處理之后，較稀薄而較少色素沉著之毛囊。
圖8系顯示于毛發(fā)周期第21日時(shí)經(jīng)F&M染色之皮膚剖面。如C57B1/6老鼠所示，經(jīng)豆?jié){處理之后，該毛發(fā)周期提早終止。經(jīng)豆?jié){處理之毛囊系處于休止期，而未經(jīng)處理之對照毛囊仍處于生長中期。
實(shí)施例6豆?jié){及由大豆衍生之絲氨酸蛋白酶抑制劑對于毛發(fā)生長、尺寸及色素沉著之影響研究豆?jié){對于毛發(fā)生長之影響的機(jī)制之中，吾人試驗(yàn)由豆?jié){衍生之絲氨酸蛋白酶抑制劑STI及BBI的效果。吾人早期已證實(shí)此等蛋白質(zhì)藉著影響PAR-2路徑而于皮膚中誘發(fā)脫色(美國專利申請案，代理文件編號JBP 430)。
使用STI、BBI及豆?jié){，重復(fù)實(shí)施例4所述的實(shí)驗(yàn)。STI及BBI如實(shí)施例3所述般地用于PBS-脂質(zhì)體媒質(zhì)中。與豆?jié){相同地，該毛發(fā)周期中之視覺觀察確定STI及BBI皆可延遲毛發(fā)生長，并縮小毛囊及毛干尺寸(參照圖9之毛發(fā)圖片)。使用高濃度之STI及BBI，對于毛發(fā)生長及色素沉著之影響極為實(shí)質(zhì)。
組織分析確定此等發(fā)現(xiàn)。如圖6所示，于毛發(fā)周期之第七日，1％STI及1％BBI于C3H老鼠體內(nèi)縮小毛囊及毛干尺寸并減少毛干色素沉著。圖7顯示該毛發(fā)周期之同一日的低倍率剖面，說明相對于未經(jīng)處理之對照組，使用豆?jié){、STI或BBI處理之毛囊及毛干較小并色素沉著較少。圖10顯示STI及BBI亦于C57B1/6老鼠體內(nèi)具有相同效果，證明有較小且較少色素沉著之毛囊。綜合起來，此實(shí)施例顯示豆?jié){中所含之STI及BBI系為由大豆衍生之絲氨酸蛋白酶抑制劑，可延遲毛發(fā)生長，縮小毛囊及毛干尺寸，并減少毛發(fā)色素沉著。STI及BBI代表豆?jié){成分中影響毛發(fā)生長之一部分。
為了支持豆?jié){中之STI及BBI涉及前述毛發(fā)生長效應(yīng)之假說，吾人試驗(yàn)豆?jié){之絲氨酸蛋白酶抑制活性。使用＂Enzchek＂進(jìn)行檢定，其系一種由Molecular Probeof Eugene,OR所制造之蛋白酶消化螢光試驗(yàn)系統(tǒng)。使用100單位之胰蛋白酶(購自Sigma chemicals,St.Louis MO)，該試驗(yàn)系統(tǒng)產(chǎn)生約1100單位之螢光讀數(shù)。此種反應(yīng)系使用漸增濃度之STI抑制，如已知之胰蛋白酶抑制劑所預(yù)測。豆?jié){之連續(xù)稀釋物于此檢定中測試，發(fā)現(xiàn)其抑制胰蛋白酶活性。如圖11所示，豆?jié){所具之胰蛋白酶抑制活性如同約0.2％純度之STI。顯示豆?jié){自身之毛發(fā)生長效應(yīng)至少有一部分系來自STI及BBI。
實(shí)施例7豆?jié){誘發(fā)酪氨酸酶及TRP-1蛋白質(zhì)表達(dá)之改變上述實(shí)施例所述經(jīng)豆?jié){處理之皮膚樣本的組織學(xué)分析顯現(xiàn)毛囊內(nèi)色素沉積減少。為進(jìn)一步了解豆?jié){誘發(fā)之去色素作用的機(jī)制，吾等研究了酪氨酸酶(黑色素生成中關(guān)鍵的酶)及酶酪氨酸酶相關(guān)蛋白-1(TRP-1)(它穩(wěn)定酪氨酸酶)。如上述處理C57B1/6及C3H鼠，于研究中全程收集樣本以供蛋白質(zhì)分析用。使用標(biāo)準(zhǔn)程序，如Juan S.Bonifacino等人編輯之細(xì)胞生物學(xué)第六章電泳及免疫印跡中目前之程序(1999年著作權(quán)John Wiley & Sons,Inc.)，進(jìn)行蛋白質(zhì)萃取及Western印跡分析，該文獻(xiàn)整體并于此以供參考用。如此研究之一范例示于圖12。
等量之萃取自皮膚的蛋白質(zhì)，用抗酪氨酸酶抗體“抗PEP1”以及抗-TRP-1抗體“抗PEP7”探測，其述于Jimeneze,M.,Kameyama,K.,Maloy,WL,Tomita Y.,及Hearing,V.哺乳動物酪氨酸酶生合成、處理及藉由黑色素細(xì)胞刺激荷爾蒙之調(diào)節(jié)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1988),85:3830-34，及Jimenez,M.,K.,Maloy,WL,及Hearing,V.酪氨酸酶克隆的專一性鑒別，J.Biol.Chem.(1989)264:3397-3403，其整體并于此以供參考用。
如圖12所示，酪氨酸酶及TRP-1蛋白質(zhì)之表達(dá)顯著地由豆?jié){處理所影響。酪氨酸酶及TRP-1之量減少，及表達(dá)之持續(xù)期間縮短。此二因素影響整體毛發(fā)之色素沉著，其因黑色素生成之量減少及持續(xù)期間較短而減少。
實(shí)施例8豆?jié){減少人類臉部毛發(fā)之長度及厚度每天刮毛之具深色臉部毛發(fā)之男性個人在刮毛后立即以豆?jié){處理其臉右側(cè)長達(dá)5周。在第3周前及更顯著地在第4周前，經(jīng)處理之該側(cè)毛發(fā)可看出較淡且觸摸感覺較柔順。處理期間使用Hi-Scope在不同放大倍數(shù)下拍攝數(shù)位照片。此等照片清楚地證明處理側(cè)中毛干尺寸及厚度之減小。如此照片之范例示于圖13，證明四周處理后，毛干厚度及密度之差異。因臉部兩側(cè)均在同一時(shí)間刮毛且兩側(cè)照片系在同一時(shí)間拍攝，臉部毛發(fā)長度之差異顯示在處理區(qū)域中較緩慢之生長速度。
圖14顯示豆?jié){處理四周后臉部毛發(fā)長度、厚度及全區(qū)之電腦化影像分析。所有影像以Image Pro Plus 3.0軟體(Media Cybemetics,Silver Spring,MD)分析。數(shù)據(jù)以臉部各側(cè)180根毛干之平均值與標(biāo)準(zhǔn)誤差呈現(xiàn)(SigmaPlot(r)5.0,SPSS Science,Chicago,IL)。使用SigmaStat(r)2.0(SPSS Science)軟體進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，證明豆?jié){處理后所有測量之參數(shù)中均有統(tǒng)計(jì)上顯著的差異。
實(shí)施例9豆?jié){減少人類腳部毛發(fā)長度及厚度一個人膝蓋下方腳中間部份之兩對稱區(qū)以蠟除毛。每天以豆?jié){處理一腳長達(dá)4周。視覺觀察顯示處理部位之毛發(fā)生長較慢。毛干之?dāng)?shù)目較未處理部位者少且較短及較稀疏，如圖15所示。此等觀察進(jìn)一步確認(rèn)豆?jié){對毛發(fā)生長之效果。實(shí)施例8及9一起確認(rèn)豆?jié){對人類毛發(fā)生長之效果與除毛方法或被處理之身體部位無關(guān)。
實(shí)施例10加入異黃酮之豆?jié){配方于降低毛發(fā)生長及色素沉著上較豆?jié){配方佳使用表2所述之兩個配方豆?jié){為基質(zhì)之配方豆?jié){精23及與豆?jié){精23相同但添加5％之0.1％異黃酮萃取物之豆?jié){精30重覆實(shí)施例4所述之實(shí)驗(yàn)。如圖16所示，以大豆精23處理之鼠顯現(xiàn)較少之毛發(fā)生長及較佳之毛發(fā)外觀。此效果以使用豆?jié){精30者較顯著，證明添加異黃酮之豆?jié){配方在減少毛發(fā)生長上優(yōu)于豆?jié){配方。圖17顯示在處理第15天時(shí)，經(jīng)處理之鼠的組織皮膚斷面。此等斷面所考證之毛干清楚地證明豆?jié){精處理后毛干尺寸之減小，毛干內(nèi)色素沉著量之減少及毛干柔順度之增加。
實(shí)施例11添加異黃酮之豆?jié){配方較異黃酮配方佳，其有效減少毛發(fā)生長及色素沉著使用上述表2中之配方含或不含增加濃度之異黃酮的豆?jié){精重覆實(shí)施例4所述之實(shí)驗(yàn)。此等豆精配方相當(dāng)于類似配方，其中僅豆?jié){成份被水取代。制備此三組配方(豆精、異黃酮及含額外異黃酮之豆精)以測試黃酮可能足以對毛發(fā)生長產(chǎn)生所觀察之效果的可能性。圖18顯示如實(shí)施例4所述三周局部處理后之C57B1/6鼠毛發(fā)。未經(jīng)處理之對照組鼠及經(jīng)安慰劑之鼠兩者均具有長且較亂之毛發(fā)。如本案先前所敘述者，豆?jié){精23減少毛發(fā)生長且產(chǎn)生較佳之外觀。含1、5及10％之含0.1％異黃酮萃取物的豆?jié){精配方對毛發(fā)生長產(chǎn)生優(yōu)異的效果。然而，含異黃酮而不含豆?jié){之配方證明較溫和，但效果不如并用豆?jié){優(yōu)異。此實(shí)施例證明含異黃酮之豆?jié){配方可減少毛發(fā)生長。此實(shí)施例進(jìn)一步證明含異黃酮之豆?jié){配方較僅含異黃酮之配方更能減少毛發(fā)生長。
實(shí)施例12豆精配方影響人類毛發(fā)生長豆?jié){精23及30相較于安慰劑配方之功效及刺激性，在盲式安慰劑對照組和12周試驗(yàn)中被檢視，其中有12個年齡29至45歲更年期前之女性試驗(yàn)者，其藉由研究調(diào)查者評估、試驗(yàn)者自我評估及Hi-scope影像分析檢視。試驗(yàn)者簽署被告知同意書并指示其研究程序及期望與要求當(dāng)晚刮毛。第二天基線(baseline)探視時(shí)，分給各試驗(yàn)者二個試驗(yàn)化妝水(第1天)安慰劑化妝水及豆?jié){精23或30?；瘖y水隨機(jī)給予右腳或左腳。在研究期間不使用其他化妝水于腳部下方，將試驗(yàn)化妝水及安慰劑用于各腳。試驗(yàn)者經(jīng)指示每日施予試驗(yàn)化妝水早晚兩次并被指示嘗試不刮除腳部下方之毛發(fā)直至各周評估后。評估當(dāng)天，調(diào)查者以視覺檢查試驗(yàn)者腳部是否有任何臨床刺激征狀及比較腳部之毛發(fā)生長變稀疏之程度。在各評估時(shí)間點(diǎn)(第1、2、3及4周)由試驗(yàn)者完成自我評估問卷。此外，在各時(shí)間點(diǎn)使用MX-MACROZ鏡頭(Hirox)取得Hi-scope影像(各影像直徑2.5公分，KH-2400R,Hirox)。
無一試驗(yàn)者系因任何產(chǎn)品相關(guān)之理由自研究退出。未在任一時(shí)間點(diǎn)在任一研究試驗(yàn)者看到刺激征狀，亦未在研究期間任一時(shí)間點(diǎn)上于試驗(yàn)者所作自我評估中報(bào)告有任何刺激。
為計(jì)算包括短毛之所有毛發(fā)數(shù)目，在各時(shí)間點(diǎn)對各試驗(yàn)者進(jìn)行2.5公分區(qū)域之計(jì)數(shù)。結(jié)果顯示對于豆?jié){精30，在第5周前及對于豆?jié){精23，在第4周前腳部下方毛發(fā)數(shù)減少。雖然標(biāo)準(zhǔn)誤差大，但經(jīng)安慰劑處理之腳在研究全程中未顯示平均腳毛發(fā)數(shù)有改變。生長率藉由試驗(yàn)者腳毛發(fā)之平均長度(其自在各試驗(yàn)部位使用Image Pro Plus分析對各試驗(yàn)者所作之hi-scope影像計(jì)算得到)除以自最后一次刮毛算起之時(shí)間長度(天)而計(jì)算得到。結(jié)果記錄于表3，證明豆?jié){精23及30處理二者均較安慰劑產(chǎn)生較減緩之毛發(fā)生長速度。
表3豆?jié){精或安慰劑處理后之平均腳毛發(fā)生長速度
自試驗(yàn)者自我評估問卷之結(jié)果顯示，試驗(yàn)者感覺試驗(yàn)化妝水相較于安慰劑化妝水減少毛發(fā)之生長及軟化腳毛發(fā)之觸覺。試驗(yàn)者感覺毛發(fā)較不粗糙且短毛較少。大部份之試驗(yàn)者相信試驗(yàn)化妝水減少腳毛發(fā)之生長或改變毛發(fā)之紋理以致感覺較柔順及較不粗糙。Hi Scope分析進(jìn)一步證明以豆?jié){精23或30處理后毛發(fā)似乎以相同方向再生長且形狀、紋理及外觀更均勻。相反地，在經(jīng)安慰劑處理之腳上再生長之毛發(fā)以不同方向、不同長度、不同生長角度及厚度生長。
此實(shí)施例清楚地證明豆?jié){配方于延緩及減少毛發(fā)生長并使毛發(fā)較柔軟、較不粗糙及更易處理與定向生長之效果。
權(quán)利要求
1．一種改變哺乳動物毛發(fā)外觀、毛發(fā)生長、毛發(fā)色素沉著及毛囊與毛干尺寸之方法，其特征在于，它包括局部施予有效量之局部活性組合物至哺乳動物皮膚上，該組合物包含一或多個衍生自一或多科植物豆科、茄科、禾本科及葫蘆科之化合物。
2．如權(quán)利要求1所述的方法，其中該萃取物含有至少一種絲氨酸蛋白酶抑制活性。
3．如權(quán)利要求2所述的方法，其中該至少一種絲氨酸蛋白酶抑制活性劑為絲氨酸蛋白酶抑制劑。
4．如權(quán)利要求3所述的方法，其中該至少一種絲氨酸蛋白酶抑制劑之存在量為約0.0001％(重量/體積)至20％(重量/體積)，以局部活性組合物之總體積為基準(zhǔn)。
5．如權(quán)利要求4所述的方法，其中該至少一種絲氨酸蛋白酶抑制劑之存在量為約0.001％(重量/體積)至約5％(重量/體積)，以局部活性組合物之總體積為基準(zhǔn)。
6．如權(quán)利要求1所述的方法，其中該改變之一系毛發(fā)生長遲緩、毛囊及毛干尺寸縮小及毛發(fā)色素沉著減少。
7．如權(quán)利要求1所述的方法，其中該局部活性組合物進(jìn)一步包含制藥或化妝品可接受之賦形劑。
8．如權(quán)利要求1所述的方法，其中該局部活性組合物進(jìn)一步包含一或多種異黃酮。
9．如權(quán)利要求8所述的方法，其中該局部活性組合物進(jìn)一步包含制藥或化妝品可接受之賦形劑。
10．一種改變哺乳動物毛發(fā)外觀、毛發(fā)生長、毛發(fā)色素沉著及毛囊與毛干尺寸之組合物，其特征在于，它包含局部施予有效量之局部活性組合物至哺乳動物皮膚上，該組合物包含一或多個衍生自一或多科植物豆科、茄科、禾本科及葫蘆科之化合物。
全文摘要
本發(fā)明利用天然及/或合成絲氨酸蛋白酶抑制劑或含絲氨酸蛋白酶抑制活性之植物萃取物，添加或不添加一或多種異黃酮及/或含一或多種異黃酮之額外的天然萃取物，它們能影響哺乳動物毛發(fā)生長、毛囊及毛干尺寸與改變毛發(fā)色素沉著。
文檔編號A61Q5/00GK1316272SQ00122289
公開日2001年10月10日 申請日期2000年7月27日 優(yōu)先權(quán)日1999年7月27日
發(fā)明者M·塞伯格, S·S·夏皮羅, 盧瑞城, J·米勒 申請人:強(qiáng)生消費(fèi)者公司