一種痔特佳片及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種痔特佳片，制備方法為：取地榆炭100g、黃芩100g、炒槐角200g、當(dāng)歸100g、炒枳殼100g、防風(fēng)100g、鞣質(zhì)2g、阿膠10g，加五味子藥材10倍重量的水，浸泡0.5h，煎煮1小時(shí)，過(guò)濾，藥渣再加入藥材8倍重量的水，煎煮1小時(shí)，藥液濾出等步驟，并采用特有的濃縮和干燥設(shè)備，制備得到的痔特佳片中阿魏酸含量高，并發(fā)現(xiàn)所述痔特佳片在制備抑制中國(guó)倉(cāng)鼠肺CHL細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
【專利說(shuō)明】
一種痔特佳片及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及中藥提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種痔特佳片及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 痔特佳片能降低血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶，可用于慢性肝炎谷丙轉(zhuǎn)氨酶升高者。具有顯著 的肝細(xì)胞損傷拮抗作用，能夠增強(qiáng)肝細(xì)胞對(duì)毒物的抵御能力和損傷修復(fù)能力以及抗突變能 力，可以促進(jìn)肝細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和糖原的生物合成，加速氨基酸滲入人體肝臟速率，改善機(jī)體 對(duì)糖的利用，提高機(jī)體能量供應(yīng)，有利于肝細(xì)胞功能的恢復(fù)?，F(xiàn)有技術(shù)中的制備方法，工藝 粗糙、落后，雜質(zhì)多，有效成分含量低，導(dǎo)致患者用量過(guò)大，不方便服用，嚴(yán)重影響了本品在 臨床上應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 發(fā)明目的：為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種痔特佳片及其制備方 法。
[0004] 技術(shù)方案:本發(fā)明的目的是通過(guò)如下的方案實(shí)現(xiàn)的：
[0005] -種痔特佳片，制備方法為:取地榆炭100g、黃芩100g、炒槐角200g、當(dāng)歸100g、炒 枳殼I OOg、防風(fēng)I OOg、鞣質(zhì)2g、阿膠I Og，加藥材10倍重量的水，浸泡0.5h，煎煮1小時(shí)，過(guò)濾， 藥渣再加入藥材8倍重量的水，煎煮1小時(shí)，藥液濾出，合并兩次煎煮液，濃縮至60°C相對(duì)密 度為1.05，加乙醇使含醇量的體積百分比達(dá)75%，攪拌，靜置，過(guò)濾，濾液濃縮至65°C時(shí)相對(duì) 密度為1.25,并回收乙醇，得濃縮液，使用大孔樹(shù)脂精制，所述大孔樹(shù)脂精制方法為:加到大 孔吸附樹(shù)脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，制 粒，壓片，制備成痔特佳片。
[0006] 所述痔特佳片的制備方法，所述大孔吸附樹(shù)脂柱型號(hào)為D101、D201、D301。
[0007] 所述痔特佳片，上述制備方法中三次濃縮使用裝置，包括罐體，設(shè)置在所述罐體上 的進(jìn)料口和設(shè)置在所述罐體底部的出料管，在所述罐體內(nèi)設(shè)有攪拌軸，在所述攪拌軸上設(shè) 有攪拌槳，在所述罐體的頂部設(shè)有與所述攪拌軸相連接的攪拌電機(jī)，在所述罐體的內(nèi)壁上 設(shè)有環(huán)形凹槽，所述環(huán)形凹槽的底端靠近所述罐體的底壁，在所述環(huán)形凹槽內(nèi)設(shè)有環(huán)形旋 轉(zhuǎn)塊，在所述罐體的側(cè)壁內(nèi)設(shè)有驅(qū)動(dòng)電機(jī)，在所述驅(qū)動(dòng)電機(jī)的主軸上設(shè)有驅(qū)動(dòng)齒盤，在所述 環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊的外環(huán)面上設(shè)有與所述驅(qū)動(dòng)齒盤相齒合的齒槽，在所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊的內(nèi)環(huán)面上 均勻設(shè)有至少三條刮筋，所述刮筋的底壁抵壓在所述罐體的底壁上端面上，在所述罐體上 設(shè)有與所述驅(qū)動(dòng)電機(jī)相連接的調(diào)節(jié)器。
[0008] 所述痔特佳片，上述制備方法中濃縮裝置所述環(huán)形凹槽的頂壁與底壁均勻設(shè)有滾 珠，所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊的上端面和下端面抵壓在所述滾珠上。
[0009] 所述痔特佳片，上述制備方法中濃縮裝置所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊與所述環(huán)形凹槽的連接 面上設(shè)有密封金屬條，所述滾珠設(shè)置在所述密封金屬條與環(huán)形凹槽的內(nèi)側(cè)端。
[0010] 所述痔特佳片，上述制備方法中濃縮裝置所述出料管上還設(shè)有冷卻器，在所述罐 體內(nèi)設(shè)有水份測(cè)定儀。
[0011]所述痔特佳片，上述制備方法中干燥使用裝置，包括機(jī)體，設(shè)置在所述機(jī)體內(nèi)的中 軸，設(shè)置在所述中軸外壁上的旋轉(zhuǎn)盛放盤，在所述中軸的下端設(shè)有震動(dòng)電機(jī)，在所述機(jī)體的 頂部設(shè)有熱蒸汽輸送管道，其特征在于:在所述中軸內(nèi)設(shè)有空腔，在所述中軸的頂部設(shè)有圓 盤，所述圓盤設(shè)置在所述旋轉(zhuǎn)盛放盤的頂部，在所述圓盤上設(shè)有上下通透的細(xì)孔，在所述圓 盤內(nèi)設(shè)有與所述空腔相連接的導(dǎo)熱柱桿，在所述空腔內(nèi)設(shè)有電加熱塊，所述導(dǎo)熱柱桿上設(shè) 有導(dǎo)熱刺柱，所述導(dǎo)熱刺柱伸入所述細(xì)孔內(nèi)，在所述機(jī)體內(nèi)設(shè)有溫度傳感器、在所述空腔內(nèi) 設(shè)有與所述溫度傳感器相連接的驅(qū)動(dòng)器，所述驅(qū)動(dòng)器與所述電加熱塊的控制開(kāi)關(guān)相連接。
[0012] 所述痔特佳片，上述制備方法中干燥使用裝置所述細(xì)孔為頂部大底部小的喇叭狀 孔，所述導(dǎo)熱刺柱伸入所述喇叭狀孔的中部，在所述喇叭狀孔上設(shè)有上下通透的傳導(dǎo)網(wǎng)孔。
[0013] 所述痔特佳片，上述制備方法中干燥使用裝置所述機(jī)體的底面設(shè)有箱門，所述箱 門設(shè)置在旋轉(zhuǎn)盛放盤的最底端，所述導(dǎo)熱柱桿為銀或鋁或銅質(zhì)柱桿。
[0014] 所述痔特佳片在制備抑制中國(guó)倉(cāng)鼠肺CHL細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
[0015] 現(xiàn)有技術(shù)中，痔特佳片采用醇提的方法，工藝粗糙、落后，雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量過(guò) 大，不方便服用，本發(fā)明制備的阿魏酸得率增加，含量高。本發(fā)明中的濃縮設(shè)備結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、操 作便捷，在加熱濃縮時(shí)，可以通過(guò)驅(qū)動(dòng)電機(jī)驅(qū)動(dòng)環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊旋轉(zhuǎn)，從而使刮筋在罐體的底面 刮動(dòng)，從而可有效的防止罐體的底壁結(jié)塊，一定程度上可提高加熱濃縮效率，解決了傳統(tǒng)技 術(shù)中藥濃縮設(shè)備罐底容易結(jié)塊從而影響加熱效率的技術(shù)不足，使用穩(wěn)定性好，藥物的有效 成分穩(wěn)定不被破壞。本干燥設(shè)備結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，操作便捷，在中軸的頂部設(shè)有圓盤，并且在圓盤 上設(shè)有細(xì)孔，可以使熱蒸汽通過(guò)圓盤，并且在中軸內(nèi)設(shè)有電加熱塊和導(dǎo)熱柱桿，可以根據(jù)需 要啟動(dòng)電加熱塊，并通過(guò)導(dǎo)熱柱桿實(shí)現(xiàn)溫度傳遞，并與通過(guò)圓盤的熱蒸汽進(jìn)行混合，從而可 以保證熱蒸汽的溫度，調(diào)節(jié)性能好，使用穩(wěn)定性強(qiáng)，有效解決了傳統(tǒng)技術(shù)中熱蒸汽加熱干燥 機(jī)中溫度無(wú)法控制的技術(shù)不足。并發(fā)現(xiàn)所述痔特佳片在制備抑制中國(guó)倉(cāng)鼠肺CHL細(xì)胞增殖 藥物中的應(yīng)用。
【附圖說(shuō)明】
[0016] 為了使本發(fā)明的內(nèi)容更容易被清楚的理解，下面根據(jù)具體實(shí)施例并結(jié)合附圖，對(duì) 本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，其中：
[0017] 圖1為本發(fā)明濃縮裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0018] 圖2為本發(fā)明干燥裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 以下通過(guò)實(shí)施例形式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但不應(yīng)將此 理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均 屬于本發(fā)明的范圍。
[0020] 實(shí)施例1
[0021] 取取地榆炭l〇〇g、黃芩l〇〇g、炒槐角200g、當(dāng)歸100g、炒枳殼100g、防風(fēng)100g、鞣質(zhì) 2g、阿膠IOg，加藥材10倍重量的水，浸泡0.5h，煎煮1小時(shí)，過(guò)濾，藥渣再加入藥材8倍重量的 水，煎煮1小時(shí)，藥液濾出，合并兩次煎煮液，濃縮至60°C相對(duì)密度為1.05，加乙醇使含醇量 的體積百分比達(dá)75%，攪拌，靜置，過(guò)濾，濾液濃縮至65°C時(shí)相對(duì)密度為1.25,并回收乙醇， 得濃縮液，使用大孔樹(shù)脂精制，加到大孔吸附樹(shù)脂柱上，50 %乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗 脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，制粒，壓片，制備成痔特佳片，每片〇.5g。
[0022] 所述痔特佳片的制備方法，所述大孔吸附樹(shù)脂柱型號(hào)為D101。
[0023] 見(jiàn)圖1:所述痔特佳片的制備方法，上述三次濃縮裝置，包括罐體1，設(shè)置在所述罐 體1上的進(jìn)料口 2和設(shè)置在所述罐體1底部的出料管3,在所述罐體1內(nèi)設(shè)有攪拌軸4,在所述 攪拌軸4上設(shè)有攪拌槳5，在所述罐體1的頂部設(shè)有與所述攪拌軸4相連接的攪拌電機(jī)6，在所 述罐體1的內(nèi)壁上設(shè)有環(huán)形凹槽7,所述環(huán)形凹槽7的底端靠近所述罐體1的底壁，在所述環(huán) 形凹槽7內(nèi)設(shè)有環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊8,在所述罐體1的側(cè)壁內(nèi)設(shè)有驅(qū)動(dòng)電機(jī)9,在所述驅(qū)動(dòng)電機(jī)9的主 軸上設(shè)有驅(qū)動(dòng)齒盤10,在所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊8的外環(huán)面上設(shè)有與所述驅(qū)動(dòng)齒盤10相齒合的齒 槽11，在所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊8的內(nèi)環(huán)面上均勻設(shè)有至少三條刮筋12,所述刮筋12的底壁抵壓在 所述罐體1的底壁上端面上，在所述罐體1上設(shè)有與所述驅(qū)動(dòng)電機(jī)9相連接的調(diào)節(jié)器13,調(diào)節(jié) 器為市場(chǎng)上已使用結(jié)構(gòu)，只需要按照其連接要求連接使用即可。在使用時(shí)通過(guò)控制驅(qū)動(dòng)電 機(jī)，使驅(qū)動(dòng)電機(jī)帶動(dòng)環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊旋轉(zhuǎn)，從而使刮筋在環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊的帶動(dòng)下在罐體的底壁頂 面刮動(dòng)，從而可以槳聚積在罐體底壁頂面的藥渣刮松，從而可防止結(jié)塊。
[0024] 在所述環(huán)形凹槽7的頂壁與底壁均勻設(shè)有滾珠14,所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊8的上端面和下 端面抵壓在所述滾珠14上。設(shè)有滾珠，可以保證環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊的正常旋轉(zhuǎn)，減少環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊與 環(huán)形凹槽之間的摩擦，從而提高使用壽命和使用穩(wěn)定性。
[0025] 在所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊8與所述環(huán)形凹槽7的連接面上設(shè)有密封金屬條15,所述滾珠設(shè) 置在所述密封金屬條與環(huán)形凹槽的內(nèi)側(cè)端。
[0026] 在所述出料管上還設(shè)有冷卻器16,在所述罐體內(nèi)設(shè)有水份測(cè)定儀17。
[0027]見(jiàn)圖2,所述痔特佳片的制備方法，上述干燥使用裝置，包括機(jī)體1，設(shè)置在所述機(jī) 體1內(nèi)的中軸2,設(shè)置在所述中軸2外壁上的旋轉(zhuǎn)盛放盤3,在所述中軸2的下端設(shè)有震動(dòng)電機(jī) 4，在所述機(jī)體1的頂部設(shè)有熱蒸汽輸送管道5，在所述中軸2內(nèi)設(shè)有空腔6，在所述中軸2的頂 部設(shè)有圓盤7,所述圓盤7設(shè)置在所述旋轉(zhuǎn)盛放盤3的頂部，在所述圓盤7上設(shè)有上下通透的 細(xì)孔8,熱蒸汽經(jīng)過(guò)圓盤，進(jìn)入旋轉(zhuǎn)盛放盤，在所述圓盤7內(nèi)設(shè)有與所述空腔6相連接的導(dǎo)熱 柱桿9,在所述空腔6內(nèi)設(shè)有電加熱塊10,所述導(dǎo)熱柱桿9上設(shè)有導(dǎo)熱刺柱11，所述導(dǎo)熱刺柱 11伸入所述細(xì)孔8內(nèi)，可以大大提高熱蒸汽與電加熱塊之間的溫度混合，提高溫度控制的效 率，在所述機(jī)體1內(nèi)設(shè)有溫度傳感器12、在所述空腔6內(nèi)設(shè)有與所述溫度傳感器12相連接的 驅(qū)動(dòng)器13,所述驅(qū)動(dòng)器13與所述電加熱塊10的控制開(kāi)關(guān)相連接。本實(shí)施例中溫度傳感器和 驅(qū)動(dòng)器為市面上已存在的產(chǎn)品，其在使用時(shí)只需要按照對(duì)應(yīng)的產(chǎn)品說(shuō)明進(jìn)行連接即可。
[0028]所述細(xì)孔為頂部大底部小的喇叭狀孔，所述導(dǎo)熱刺柱伸入所述喇叭狀孔的中部， 在所述喇叭狀孔上設(shè)有上下通透的傳導(dǎo)網(wǎng)孔14。
[0029]在所述機(jī)體的底面設(shè)有箱門15，所述箱門設(shè)置在旋轉(zhuǎn)盛放盤的最底端。
[0030]所述導(dǎo)熱柱桿為銀或鋁或銅質(zhì)柱桿。
[0031] 實(shí)施例2
[0032]取取地榆炭100g、黃芩100g、炒槐角200g、當(dāng)歸100g、炒枳殼100g、防風(fēng)100g、鞣質(zhì) 2g、阿膠IOg，加藥材10倍重量的水，浸泡0.5h，煎煮1小時(shí)，過(guò)濾，藥渣再加入藥材8倍重量的 水，煎煮1小時(shí)，藥液濾出，合并兩次煎煮液，濃縮至60 °C相對(duì)密度為1.05，加乙醇使含醇量 的體積百分比達(dá)75%，攪拌，靜置，過(guò)濾，濾液濃縮至65°C時(shí)相對(duì)密度為1.25,并回收乙醇， 得濃縮液，使用大孔樹(shù)脂精制，加到大孔吸附樹(shù)脂柱上，50 %乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗 脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，制粒，壓片，制備成痔特佳片，每片〇.5g。
[0033]所述痔特佳片的制備方法，所述大孔吸附樹(shù)脂柱型號(hào)為D201。
[0034]濃縮和干燥裝置同上。
[0035] 實(shí)施例3
[0036]取取地榆炭100g、黃芩100g、炒槐角200g、當(dāng)歸100g、炒枳殼100g、防風(fēng)100g、鞣質(zhì) 2g、阿膠IOg，加藥材10倍重量的水，浸泡0.5h，煎煮1小時(shí)，過(guò)濾，藥渣再加入藥材8倍重量的 水，煎煮1小時(shí)，藥液濾出，合并兩次煎煮液，濃縮至60 °C相對(duì)密度為1.05，加乙醇使含醇量 的體積百分比達(dá)75%，攪拌，靜置，過(guò)濾，濾液濃縮至65°C時(shí)相對(duì)密度為1.25,并回收乙醇， 得濃縮液，使用大孔樹(shù)脂精制，加到大孔吸附樹(shù)脂柱上，50 %乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗 脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，制粒，壓片，制備成痔特佳片，每片〇.5g。
[0037]所述痔特佳片的制備方法，所述大孔吸附樹(shù)脂柱型號(hào)為D301。
[0038]濃縮和干燥裝置同上。
[0039] 上述實(shí)施例中鞣質(zhì)又稱單寧，是存在于植物體內(nèi)的一類結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的多元酚類 化合物，其余藥材符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。
[0040] 實(shí)施例4:本發(fā)明痔特佳片中阿魏酸含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)研究資料
[0041] 1.1實(shí)驗(yàn)藥物:本發(fā)明痔特佳片:按實(shí)施例1-3方法制備。對(duì)照組采用普通濃縮方法 制備痔特佳片。
[0042] 1.2儀器:高效液相色譜儀系統(tǒng)包括高效液相色譜儀(Waters 515) ;P200高壓栗； Waters 2487紫外檢測(cè)器及GJ605型高壓六通進(jìn)樣閥；色譜柱為0DS-C18(鉆石）色譜柱 (250mm X 4.6mm，5μπι);數(shù)據(jù)采集及處理采用HS色譜數(shù)據(jù)工作站V4.0+(杭州英譜科技）
[0043] 1.3測(cè)定條件：照高效液相色譜法（中國(guó)藥典2000年版二部附錄VD)測(cè)定。采用 0DS-C18(鉆石）色譜柱（25〇111111\4.6111111，5以111)，流動(dòng)相為乙腈-1%冰醋酸（20:80)，流速為 1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為322nm，進(jìn)樣量為10yL。
[0044] h 4實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0045] 各實(shí)施例制備的痔特佳片中阿魏酸含量測(cè)定結(jié)果
[0048]根據(jù)上表的試驗(yàn)結(jié)果可知，本發(fā)明實(shí)施例1-3制備的痔特佳片中阿魏酸含量明顯 高于對(duì)照組。
[0049] 實(shí)施例5:本發(fā)明痔特佳片抑制中國(guó)倉(cāng)鼠肺CHL細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究資料
[0050] 1實(shí)驗(yàn)材料
[00511 1.1實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株
[0052] 中國(guó)倉(cāng)鼠肺CHL細(xì)胞，南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫(kù)，DMEM+10%FBS常規(guī)培養(yǎng)。
[0053] 1.2實(shí)驗(yàn)藥物
[0054] 研究藥物:本發(fā)明痔特佳片:按實(shí)施例1方法制備。
[0055] 藥液儲(chǔ)液:稱取IOOmg痔特佳片，溶于5ml無(wú)水乙醇中，0.2μπι濾器過(guò)濾，500μ1 doff 管分裝，-20°C存儲(chǔ)，同時(shí)0.2μπι濾器過(guò)濾無(wú)水乙醇以備對(duì)照組之用。
[0056] 1.3實(shí)驗(yàn)試劑
[0057] DMEM(GIBC0 公司Cat.No. 12100-061 Lot.No.758137);胎牛血清(浙江天杭生物科 技有限公司Lot. No. 100419) ;NaHC03(上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat. No. 11810-033Lot.No. 1088387) ;Trypsin(AMRES ⑶公司批號(hào)：2010/04) ;EDTA(AMRESC0 公司批號(hào)： 2009/10) !Penicillin G Sodium Salt(AMRESCX)公司批號(hào)：2010242) !Streptomycin Sulfate (AMRESC0公司批號(hào)：2010382);無(wú)水乙醇（南京化學(xué)試劑有限公司批號(hào)： 080310182) ;MTT(Biosharp批號(hào)：0793) ;PBS(實(shí)驗(yàn)室自配）；1.4實(shí)驗(yàn)器材 [0058]萊卡倒置顯微鏡(德國(guó)Leica型號(hào):DMlL);可見(jiàn)-紫外光微孔板檢測(cè)儀(美國(guó)MD公司 型號(hào):SPECTRA MAX 190) ;C02培養(yǎng)箱(FORMA型號(hào):3111);超凈臺(tái)（蘇凈集團(tuán)安泰公司制造型 號(hào)：SW-CJ-ZFD);純水儀(美國(guó)Spring公司型號(hào)：S/N 020579);精密移液器(法國(guó)吉爾森公司 型號(hào):P2);電子天平(德國(guó)賽多利斯有限公司型號(hào):BT323S);全自動(dòng)高壓滅菌鍋（日本SANYO 公司型號(hào):MLS-3020);臺(tái)式電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司型號(hào):DHG9123A);冰箱 (西門子公司型號(hào):KG18V21TI);液氮罐(CBS型號(hào):2001);低速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠 型號(hào)：KA-1000);0 · 2μπι濾器(MILLIP0RE型號(hào)：SLGP033RB); IOcm培養(yǎng)皿（NEST公司）、96孔培 養(yǎng)板(NEST公司）；細(xì)胞計(jì)數(shù)板;離心管、移液管、Tips若干。
[0059] 2實(shí)驗(yàn)方法
[0060] 1)中國(guó)倉(cāng)鼠肺CHL細(xì)胞用DMEM+10%FBS于37°C、5%⑶2進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)（10cm培養(yǎng) 皿），當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期時(shí)，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml 0.25 %胰蛋白 酶-0.04 %EDTA，37 °C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后將其轉(zhuǎn) 入離心管中，1000 rpm離心5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3 X 104個(gè)/ml。
[0061 ] 2)將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180μ1，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中 (37°C，5%C02)常規(guī)培養(yǎng)。
[0062] 3)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，一般長(zhǎng)至50 % -70 %，加入痔特佳片溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。
[0063] 4)24h 后加入 20μ1 MTT 溶液（5mg/ml，即0·5%ΜΤΤ)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。
[0064] 5)4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200μ1二甲基亞砜，置搖床 上低速振蕩l〇min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀490nm處測(cè)量各孔的吸光值。
[0065] 6)同時(shí)設(shè)置本底(不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液），對(duì)照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介 質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜），每組設(shè)定6個(gè)復(fù)孔。
[0066] 7)結(jié)果以藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率表示：
[0067] 細(xì)胞增值抑制率（％ )=(對(duì)照孔OD值-給藥孔OD值)/對(duì)照孔OD值X 100%。實(shí)驗(yàn)重 復(fù)3次。
[0068] 3統(tǒng)計(jì)處理
[0069] 米用Microsoft Excel 2003軟件中的相關(guān)分析和Student t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以mean土 S.D.表示。
[0070] 4實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0071] MTT法實(shí)驗(yàn)后統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時(shí)，對(duì)中國(guó)倉(cāng)鼠肺 CHL細(xì)胞增殖抑制有差異(P〈0.05)，劑量在lOmg/ml時(shí)該差異具有顯著性0〈〇.〇1)，當(dāng)劑量 達(dá)到15-20mg/ml時(shí)有極顯著性差異(P〈0.0 Ol)。
[0072] 痔特佳片對(duì)中國(guó)倉(cāng)鼠肺CHL細(xì)胞增殖抑制影響研究(li±SD)
[0074] 注：與對(duì)照組比較，*P〈0 · Ol;林P〈0 · OOl
[0075] 5實(shí)驗(yàn)結(jié)論
[0076] 痔特佳片可以抑制中國(guó)倉(cāng)鼠肺CHL細(xì)胞增殖，減少中國(guó)倉(cāng)鼠肺CHL細(xì)胞的細(xì)胞生長(zhǎng) 數(shù)目，該作用呈劑量依賴性。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種痔特佳片，其特征在于制備方法為:取地榆炭100g、黃苳100g、炒槐角200g、當(dāng)歸 l〇〇g、炒枳殼l〇〇g、防風(fēng)l〇〇g、鞣質(zhì)2g、阿膠10g，加藥材10倍重量的水，浸泡0.5h，煎煮1小 時(shí)，過(guò)濾，藥渣再加入藥材8倍重量的水，煎煮1小時(shí)，藥液濾出，合并兩次煎煮液，濃縮至60 °C相對(duì)密度為1.05，加乙醇使含醇量的體積百分比達(dá)75%，攪拌，靜置，過(guò)濾，濾液濃縮至65 °C時(shí)相對(duì)密度為1.25,并回收乙醇，得濃縮液，使用大孔樹(shù)脂精制，所述大孔樹(shù)脂精制方法 為:加到大孔吸附樹(shù)脂柱上，50 %乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮 并干燥，制粒，壓片，制備成痔特佳片。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述痔特佳片，其特征在于上述制備方法中所述大孔吸附樹(shù)脂柱型 號(hào)為 D101、D201、D301。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述痔特佳片，其特征在于上述制備方法中三次濃縮使用裝置，包括 罐體，設(shè)置在所述罐體上的進(jìn)料口和設(shè)置在所述罐體底部的出料管，在所述罐體內(nèi)設(shè)有攪 拌軸，在所述攪拌軸上設(shè)有攪拌槳，在所述罐體的頂部設(shè)有與所述攪拌軸相連接的攪拌電 機(jī)，在所述罐體的內(nèi)壁上設(shè)有環(huán)形凹槽，所述環(huán)形凹槽的底端靠近所述罐體的底壁，在所述 環(huán)形凹槽內(nèi)設(shè)有環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊，在所述罐體的側(cè)壁內(nèi)設(shè)有驅(qū)動(dòng)電機(jī)，在所述驅(qū)動(dòng)電機(jī)的主軸 上設(shè)有驅(qū)動(dòng)齒盤，在所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊的外環(huán)面上設(shè)有與所述驅(qū)動(dòng)齒盤相齒合的齒槽，在所 述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊的內(nèi)環(huán)面上均勻設(shè)有至少三條刮筋，所述刮筋的底壁抵壓在所述罐體的底壁 上端面上，在所述罐體上設(shè)有與所述驅(qū)動(dòng)電機(jī)相連接的調(diào)節(jié)器。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述痔特佳片，其特征在于上述制備方法中濃縮裝置所述環(huán)形凹槽 的頂壁與底壁均勻設(shè)有滾珠，所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊的上端面和下端面抵壓在所述滾珠上。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述痔特佳片，其特征在于上述制備方法中濃縮裝置所述環(huán)形旋轉(zhuǎn) 塊與所述環(huán)形凹槽的連接面上設(shè)有密封金屬條，所述滾珠設(shè)置在所述密封金屬條與環(huán)形凹 槽的內(nèi)側(cè)端。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述痔特佳片，其特征在于上述制備方法中濃縮裝置所述出料管上 還設(shè)有冷卻器，在所述罐體內(nèi)設(shè)有水份測(cè)定儀。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述痔特佳片，其特征在于上述制備方法中干燥使用裝置，包括機(jī) 體，設(shè)置在所述機(jī)體內(nèi)的中軸，設(shè)置在所述中軸外壁上的旋轉(zhuǎn)盛放盤，在所述中軸的下端設(shè) 有震動(dòng)電機(jī)，在所述機(jī)體的頂部設(shè)有熱蒸汽輸送管道，其特征在于：在所述中軸內(nèi)設(shè)有空 腔，在所述中軸的頂部設(shè)有圓盤，所述圓盤設(shè)置在所述旋轉(zhuǎn)盛放盤的頂部，在所述圓盤上設(shè) 有上下通透的細(xì)孔，在所述圓盤內(nèi)設(shè)有與所述空腔相連接的導(dǎo)熱柱桿，在所述空腔內(nèi)設(shè)有 電加熱塊，所述導(dǎo)熱柱桿上設(shè)有導(dǎo)熱刺柱，所述導(dǎo)熱刺柱伸入所述細(xì)孔內(nèi)，在所述機(jī)體內(nèi)設(shè) 有溫度傳感器、在所述空腔內(nèi)設(shè)有與所述溫度傳感器相連接的驅(qū)動(dòng)器，所述驅(qū)動(dòng)器與所述 電加熱塊的控制開(kāi)關(guān)相連接。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述痔特佳片，其特征在于上述制備方法中干燥使用裝置所述細(xì)孔 為頂部大底部小的喇叭狀孔，所述導(dǎo)熱刺柱伸入所述喇叭狀孔的中部，在所述喇叭狀孔上 設(shè)有上下通透的傳導(dǎo)網(wǎng)孔。9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述痔特佳片，其特征在于上述制備方法中干燥使用裝置所述機(jī)體 的底面設(shè)有箱門，所述箱門設(shè)置在旋轉(zhuǎn)盛放盤的最底端，所述導(dǎo)熱柱桿為銀或鋁或銅質(zhì)柱 桿。10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述痔特佳片在制備抑制中國(guó)倉(cāng)鼠肺CHL細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K9/20GK105963395SQ201610543150
【公開(kāi)日】2016年9月28日
【申請(qǐng)日】2016年7月11日
【發(fā)明人】李洋
【申請(qǐng)人】南京多寶生物科技有限公司