柴胡在制備抑制IL-6、G-CSF、或IL1-β以治療或減緩克羅恩病之藥物的用圖
【專利摘要】一種治療或減緩發(fā)炎性腸病(IBD)的醫(yī)藥組合物，包括柴胡(Bupleurum)作為有效成分。
【專利說(shuō)明】柴胡在制備抑制丨L-6、G-CSF、或IL1 -β以治療或減緩克羅恩病 之藥物的用途
[00011 本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2010年12月29日，申請(qǐng)?zhí)枮?01010612036.7,發(fā)明名稱為"治療 或減緩發(fā)炎性腸病的醫(yī)藥組合物"的分案申請(qǐng)。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002]本發(fā)明關(guān)于一種治療或減緩發(fā)炎性腸?。↖BD)的醫(yī)藥組合物，特別是關(guān)于以柴胡 (Bupleurum)作為有效成分治療或減緩發(fā)炎性腸?。↖BD)的醫(yī)藥組合物。
【背景技術(shù)】
[0003] 目前醫(yī)界對(duì)于發(fā)炎性腸?。╥nflammatory bowel disease;IBD)的治療藥物可分 為四大類：（1)免疫抑制劑，例如azathioprine、cyclosporine、類固醇等；（2)疾病治療藥 物，例如sulfsalazine及5-氨基水楊酸（5-aminosalicylic acid;5-ASA); (3)生物制劑 (biological agent)，以抑制體內(nèi)特異性的發(fā)炎反應(yīng)物質(zhì)而達(dá)到治療效果，例如 infliximab及remicade;及(4)抗腹瀉用藥。然而，這些藥物對(duì)于發(fā)炎性腸病的治療效果皆 不優(yōu)良，而且有產(chǎn)生其他副作用的風(fēng)險(xiǎn)。
[0004] 目前亦有抑制腫瘤壞死因子(TNF-α)的新一代類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物，用于治療發(fā) 炎性腸病，例如etanercept、adalimumab等。新一代的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物雖具有藥效快、 療效顯著、免疫耐受性佳的優(yōu)點(diǎn)，但是價(jià)格昂貴、需要靜脈注射、可能引起免疫反應(yīng)、及有效 病人的比例低等的因素，在臨床使用上受相當(dāng)限制。
[0005] 本發(fā)明人基于上述課題，從常用的中草藥中，積極尋求副作用小、可治療或減緩發(fā) 炎性腸病的藥物。
[0006] 柴胡(Bupleurum)自古即列為「神農(nóng)本草經(jīng)」上品藥用植物，為「?jìng)摗股訇?yáng)病之 主藥，能解熱、鎮(zhèn)痛、解毒、消炎，主治胸脅苦滿、口苦咽干、往來(lái)寒熱、黃疸、與肝炎等。已知 柴胡的利用主要在根部，可分離出含有阜苷（saikosaponin)、龍吉戒元 (Iongispinogenin)、固醇、脂肪油、類黃醇及糖類，其中以阜苷為主要成份。
[0007] 柴胡目前是肝炎治療生藥中積極開(kāi)發(fā)的對(duì)象，然而，尚未有柴胡應(yīng)用于治療發(fā)炎 性腸病的研究或文獻(xiàn)問(wèn)世。本發(fā)明人等研究特定的柴胡萃取方式，進(jìn)一步確認(rèn)柴胡萃取物 與發(fā)炎性腸病的關(guān)系，研發(fā)出新穎治療或減緩發(fā)炎性腸病的醫(yī)藥組合物及方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明提供一種治療或減緩發(fā)炎性腸?。↖BD)的醫(yī)藥組合物，包括一柴胡 (Bupleurum)作為有效成分。
[0009] 本發(fā)明還提供柴胡在制備治療或減緩發(fā)炎性腸病之藥物的用途。
【附圖說(shuō)明】
[0010] 圖1顯示小鼠腸浸出液中TNF-α的含量，（A)顯示以不含TNBS的50 %乙醇水溶液注 射小鼠大腸的控制組；（B)顯示以TNBS誘發(fā)小鼠腸炎的載體處理組；（C)顯示經(jīng)誘發(fā)為腸炎 的小鼠，口服l〇〇mg/kg實(shí)施例1萃取的阿爾泰柴胡萃取物之實(shí)驗(yàn)組;及(D)顯示經(jīng)誘發(fā)為腸 炎的小鼠，口服200mg/kg的5-ASA之正對(duì)照組。
[0011 ]圖2顯示小鼠腸浸出液中IL-6的含量，（A)顯示以不含TNBS的50 %乙醇水溶液注射 小鼠大腸的控制組；（B)顯示溶于50%乙醇的TNBS誘發(fā)小鼠腸炎的載體處理組；（C)顯示經(jīng) 誘發(fā)為腸炎的小鼠，口服l〇〇mg/kg實(shí)施例1萃取的阿爾泰柴胡萃取物之實(shí)驗(yàn)組;及(D)顯示 經(jīng)誘發(fā)為腸炎的小鼠，口服200mg/kg的5-ASA之正對(duì)照組。
[0012]圖3顯示小鼠腸浸出液中G-CSF的含量，（A)顯示以不含TNBS的50%乙醇水溶液注 射小鼠大腸的控制組；（B)顯示溶于50%乙醇的TNBS誘發(fā)小鼠腸炎的載體處理組；（C)顯示 經(jīng)誘發(fā)為腸炎的小鼠，口服l〇〇mg/kg實(shí)施例1萃取的阿爾泰柴胡萃取物之實(shí)驗(yàn)組;及(D)顯 示經(jīng)誘發(fā)為腸炎的小鼠，口服200mg/kg的5-ASA之正對(duì)照組。
[0013]圖4顯示小鼠腸浸出液中IL卜β的含量，（A)顯示以不含TNBS的50%乙醇水溶液注 射BABL/c小鼠大腸的控制組；（B)顯示溶于50%乙醇的TNBS誘發(fā)小鼠腸炎的載體處理組； (C)顯示經(jīng)誘發(fā)為腸炎的小鼠，口服100mg/kg實(shí)施例1萃取的阿爾泰柴胡萃取物之實(shí)驗(yàn)組； 及(D)顯示經(jīng)誘發(fā)為腸炎的小鼠，口服200mg/kg的5-ASA之正對(duì)照組。
[0014]圖5顯示以不含TNBS的50 %乙醇水溶液注射小鼠大腸的大腸型態(tài)，大腸直徑約 1mm，糞便呈顆粒狀。
[0015] 圖6顯示以TNBS刺激小鼠大腸形成腸炎，但不施用任何柴胡萃取物的大腸型態(tài)，大 腸腫大直徑達(dá)約3-5mm，糞便呈水糜狀。
[0016] 圖7顯示以TNBS刺激小鼠大腸形成腸炎，口服施用100mg/kg阿爾泰柴胡萃取物之 大腸型態(tài)。
[0017]圖8顯示以TNBS刺激小鼠大腸形成腸炎，口服施用1000mg/kg阿爾泰柴胡萃取物之 大腸型態(tài)。
[0018] 圖9顯示以TNBS刺激小鼠大腸形成腸炎，口服施用100mg/kg北柴胡萃取物之大腸 型態(tài)。
[0019] 圖10顯示以TNBS刺激小鼠大腸形成腸炎，口服施用100mg/kg黃花鴨跖柴胡萃取物 之大腸型態(tài)。
[0020] 圖11顯示以TNBS刺激小鼠大腸形成腸炎，口服施用100mg/kg狹葉柴胡萃取物之大 腸型態(tài)。
[0021] 圖12顯示以TNBS刺激小鼠大腸形成腸炎，口服施用100mg/kg三輻柴胡萃取物之大 腸型態(tài)。
[0022]圖13顯示以TNBS刺激小鼠大腸形成腸炎，口服施用100mg/kg三島柴胡萃取物之大 腸型態(tài)。
[0023]圖14顯示以TNBS刺激小鼠大腸形成腸炎，口服施用100mg/kg高氏柴胡萃取物之大 腸型態(tài)。
[0024]圖15顯示以TNBS刺激小鼠大腸形成腸炎，口服施用200mg/kg的5-ASA之大腸型態(tài)。
【具體實(shí)施方式】
[0025]本發(fā)明之柴胡可選用具有苦平、微寒之性味的柴胡品種。具體而言，可選自下列所 構(gòu)成的群組：阿爾泰柴胡（Bupleurum krylovianum)、北柴胡（Bupleurum chinense)、黃花 甲鳥(niǎo)妬柴古月（Bupleurum commelynoideum)、狹葉柴古月（Bupleurum scorzonerifolium)、三福 柴胡（Bupleurum triradiatum)、三島柴胡（Bupleurum falcatum)、及高氏柴胡（Bupleurum kaoi)〇
[0026] 上述柴胡可選取整棵植株，或較佳采用根部。
[0027] 本發(fā)明之柴胡可進(jìn)一步經(jīng)由溶劑萃取。例如將柴胡植株研磨成粉末后，室溫下浸 泡于乙醇溶液中，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間，在室溫下干燥、濃縮，獲得柴胡萃取物。本發(fā)明之較佳實(shí)施 例中，乙醇溶液較佳為乙醇水溶液，而且，乙醇的濃度可為20%~95%體積百分比，較佳為 50~95 %體積百分比。
[0028] 萃取的時(shí)間通常為2小時(shí)以上，較佳為2小時(shí)~24小時(shí)，更佳為4~5小時(shí)。
[0029] 萃取的溫度通常為室溫，較佳為室溫至乙醇水溶液沸騰回流的溫度。
[0030] 上述萃取方法可再包括一濃縮干燥過(guò)程，將上述經(jīng)過(guò)加熱回流后的萃取液濃縮、 干燥成固體或結(jié)晶體。上述萃取方法可反復(fù)操作數(shù)次，以獲得純度較高的萃取物。
[0031] 在腸炎的動(dòng)物模式中，腸型態(tài)呈現(xiàn)腫脹、糞便型態(tài)不能呈正常顆粒形，甚至呈糜狀 到水樣的型態(tài)。本發(fā)明一實(shí)施例中，腸炎的動(dòng)物模式經(jīng)施用柴胡之后，腸腫脹的現(xiàn)象明顯受 到抑制，而且腸炎部位形成軟便的現(xiàn)象，顯示柴胡具有抑制及減緩發(fā)炎性腸病的效果。在一 實(shí)施例中，腸炎的動(dòng)物模式經(jīng)施用柴胡之后，亦明顯降低發(fā)炎部位的腸浸出液中TNF-CUlL- 6、G-CSF、及ILl-β的表現(xiàn)量，推測(cè)這些因子與發(fā)炎性腸病有關(guān)。
[0032] 根據(jù)本發(fā)明，柴胡可用以治療或抑制個(gè)體的發(fā)炎性腸病，包括克羅恩病(Crohn's disease)、腸炎、或具有類似發(fā)炎癥狀的腸疾病。
[0033] 上述個(gè)體包括哺乳類動(dòng)物，例如鼠、狗、貓、馬、羊、豬、猴、猿，特別是人。
[0034]柴胡的有效使用量可由熟知此技術(shù)領(lǐng)域之人士，依個(gè)體的年齡、生理狀況、發(fā)炎程 度等條件予以判斷，沒(méi)有特別限制，但較佳可為50~1000mg/kg的劑量，更佳為100mg/kg的 劑量。
[0035] 本發(fā)明之醫(yī)藥組合物可進(jìn)一步包括此技術(shù)領(lǐng)域中熟知的藥學(xué)上可接受載劑及/或 添加劑，根據(jù)劑型、保存方式、施用方式等因素，以適當(dāng)比例添加。
[0036] 本發(fā)明之醫(yī)藥組合物可經(jīng)由例如靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、口服或皮下施用，較佳為口服施 用。本發(fā)明之醫(yī)藥組合物也可在適當(dāng)期間內(nèi)對(duì)患者進(jìn)行多重劑量給藥，該給藥療程依據(jù)藥 學(xué)上例行方法加以測(cè)定。
[0037] 本發(fā)明之具體實(shí)施詳細(xì)說(shuō)明如下，然而以下的實(shí)施例僅用于進(jìn)一步揭露本發(fā)明之 技術(shù)內(nèi)容，不應(yīng)藉以限制本案的發(fā)明范疇。
[0038][實(shí)施例1]柴胡萃取物的制造
[0039] 分別選取阿爾泰柴胡（Bupleurum krylovianum)、北柴胡（Bupleurum chinense)、 黃花甲鳥(niǎo)妬柴古月（Bupleurum commelynoideum)、狹葉柴古月（Bupleurum scorzonerifolium)、 三福柴胡（Bupleurum triradiatum)、三島柴胡（Bupleurum falcatum)、高氏柴胡 (Bup I eurum kao i)的植物根部，研磨成植物粉末。
[0040] 分別取上述植物粉末0.5g，各自以25ml濃度為25%、50%、75%及95 %體積百分比 的乙醇水溶液在室溫下振蕩過(guò)夜后，經(jīng)過(guò)干燥濃縮后，獲得各柴胡萃取物。
[0041 ][實(shí)施例2 ]柴胡萃取物對(duì)腸炎的腸浸出液中TNF-α、IL-6、G-CSF及IL1 -β含量的抑 制作用
[0042] 本發(fā)明之柴胡萃取物對(duì)腸炎的腸浸出液中TNF-α、IL-6、G-CSF及IL1 -β含量的抑制 作用可以參考下列文獻(xiàn)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)探討：
[0043] I.Current Protocols in Immunology(2001)15.19.1-15.19.14.
[0044] 2.Lahat G,Halperin D1Fabian I,et al. Immunomodulatory Effects of Ciprofloxacin in TNBS-Induced Colitis in Mice .Inflamm Bowel Dis2007；13:557-565.
[0045] 3.ten Hove T,van den Blink B1Pronk I,et al.Dichotomal role of inhibition of p38MAPK with SB 203580in experimental colitis.Gut2002；50:507-512.
[0046] 4 . Bouma G, Strober ff. The Immunological and Genetic Basis of Inflammatory Bowel Disease.Nature Review Immunology 2003；3:521-533.
[0047] 取6只小鼠為一組、共四組小鼠，其中三組從每只BABL/c小鼠肛門(mén)深入大腸內(nèi)4公 分注射1 · 75mg三硝基苯橫酸（trinitrobenzene sulfonic acid;TNBS) (Sigma)，經(jīng)過(guò)48小 時(shí)后，該部位誘發(fā)形成腸炎。另外一組以不含TNBS的50%乙醇水溶液注射BABL/c小鼠肛門(mén) 深入大腸內(nèi)4公分處，作為控制組(A)。經(jīng)50%乙醇水溶液注射的部位維持正常的腸型態(tài)，未 誘發(fā)成腸炎。
[0048]上述誘發(fā)為腸炎的部位，取自肛門(mén)起6公分大腸，浸泡于PBS2小時(shí)，為(B)載體處理 組。
[0049]另外，上述誘發(fā)為腸炎的小鼠組，分別以（C) 口服實(shí)施例1以50%乙醇水溶液萃取 的阿爾泰柴胡萃取物l〇〇mg/kg，作為實(shí)驗(yàn)組；以及(D) 口服200mg/kg的5-氨基水楊酸（5-aminosalicylic acid;5_ASA) (Sigma)，作為正對(duì)照組。分別取自肛門(mén)起6公分大腸，浸泡于 PBS 2小時(shí)。
[0050]上述(A)、（B)、（C)、（D)組的小鼠腸浸出液分別以酵素免疫分析法（ELISA) (R&D Sy StemS?)，定量分析TNF-α、IL-6、G-CSF及ILl-β的含量，結(jié)果分別如圖1~4所示。
[0051][實(shí)施例3]柴胡萃取物改善腸炎的腸腫大及糞便水糜樣現(xiàn)象 [0052]如實(shí)施例2,誘發(fā)小鼠形成腸炎。分別對(duì)形成腸炎的小鼠，口服施用實(shí)施例1中以 50%乙醇水溶液萃取的：阿爾泰柴胡萃取物100mg/kg及1000mg/kg、北柴胡萃取物IOOmg/ kg、黃花鴨妬柴胡萃取物100mg/kg、狹葉柴胡萃取物100mg/kg、三福柴胡萃取物100mg/kg、 三島柴胡萃取物l〇〇mg/kg、及高氏柴胡萃取物100mg/kg。之后，分別取小鼠肛門(mén)起6公分大 腸，觀察腸腫大及糞便型態(tài)(如圖7~14)。
[0053]另一方面，將上述施用各柴胡萃取物的腸型態(tài)，與上述實(shí)施例2之（1)以不含有 TNBS的50 %乙醇水溶液注射小鼠大腸之腸型態(tài)（控制組）（如圖5);(2)以溶于50 %乙醇的 TNBS刺激小鼠大腸形成腸炎、但不施用柴胡萃取物之腸型態(tài)(載體處理組）（如圖6);以及 (3)對(duì)于誘發(fā)腸炎的小鼠口服施用200mg/kg的5-ASA(Sigma)之腸型態(tài)（正對(duì)照組）（如圖 15)，相互比較。
[0054]未施用柴胡萃取物之腸炎模式，腸型態(tài)呈現(xiàn)腫大及糞便水糜樣的現(xiàn)象(如圖6)。然 而，在施用上述柴胡萃取物的腸型態(tài)中，腸腫脹的現(xiàn)象減少，而且出現(xiàn)軟便甚至正常顆粒狀 的狀態(tài)，顯示發(fā)炎的腸部位出現(xiàn)好轉(zhuǎn)的現(xiàn)象（圖7~HhS-ASA為目前治療發(fā)炎性腸病的常 用藥物，然而在施用腸炎模式中，腸腫狀的現(xiàn)象并未減緩或消失(如圖15)。
[0055]雖然本發(fā)明已以較佳實(shí)施例揭露如上，然其并非用以限定本發(fā)明，任何熟悉此項(xiàng) 技藝者，在不脫離本發(fā)明之精神和范圍內(nèi)，當(dāng)可做些許更動(dòng)與潤(rùn)飾，因此本發(fā)明之保護(hù)范圍 當(dāng)視后附之申請(qǐng)專利范圍所界定者為準(zhǔn)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種柴胡乙醇萃取物在制備抑制IL-6、G-CSF、或ILl-β以治療或減緩克羅恩病 (Crohn's disease)之藥物的用途，其中該柴胡系選自由下列所構(gòu)成的群組:阿爾泰柴胡 (Bupleurum krylovianum)、北柴古月（Bupleurum chinense)、黃花甲鳥(niǎo)妬柴古月（Bupleurum commelynoideum)、狹葉柴古月（Buplcurum scorzonerifolium)、三福柴古月（Bupleurum triradiatum)、三島柴胡（Bupleurum falcatum)、及高氏柴胡（Bupleurum kaoi)或其組合， 該柴胡來(lái)自柴胡根部，其中所述柴胡乙醇萃取物是經(jīng)乙醇萃取后直接干燥濃縮即獲得的。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述之用途，其中該柴胡乙醇萃取物系以濃度20%~95%體積百分 比之乙醇水溶液萃取。3. 根據(jù)權(quán)利要求1-2中任一項(xiàng)所述之用途，其中該藥物為口服施用。4. 一種柴胡乙醇萃取物在制備抑制ILl-β之藥物的用途，其中該柴胡系選自由下列所 構(gòu)成的群組：阿爾泰柴胡（Bupleurum krylovianum)、北柴胡（Bupleurum chinense)、黃花 甲鳥(niǎo)妬柴古月（Bupleurum commelynoideum)、狹葉柴古月（Buplcurum scorzonerifolium)、三福 柴胡（Bupleurum triradiatum)、三島柴胡（Bupleurum falcatum)、及高氏柴胡（Bupleurum kaoi)或其組合，該柴胡來(lái)自柴胡根部，其中所述柴胡乙醇萃取物是經(jīng)乙醇萃取后直接干燥 濃縮即獲得的。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述之用途，其中該柴胡乙醇萃取物系以濃度20%~95%體積百分 比之乙醇水溶液萃取。6. 根據(jù)權(quán)利要求4-5中任一項(xiàng)所述之用途，其中該藥物為口服施用。
【文檔編號(hào)】A61P29/00GK105963331SQ201610395416
【公開(kāi)日】2016年9月28日
【申請(qǐng)日】2010年12月29日
【發(fā)明人】石英珠, 李連滋, 胡乃韻, 童天送
【申請(qǐng)人】財(cái)團(tuán)法人工業(yè)技術(shù)研究院