一種含有單線態(tài)氧保護(hù)劑的組合物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明的技術(shù)目的在于利用1O2保護(hù)劑大幅提高單線態(tài)氧的壽命用于增效光動(dòng)力治療的方法，屬于光動(dòng)力療法的增效及其臨床應(yīng)用領(lǐng)域。具體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明是一種利用保護(hù)劑的延長(zhǎng)單線態(tài)氧能力，以及用乳化的方法將保護(hù)劑、光敏劑和乳化劑制備成納米?；蛭⒚琢Ｒ栽鲂Ч鈩?dòng)力治療的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]光動(dòng)力治療是一種具有時(shí)空選擇性的腫瘤治療方案，它通過(guò)遞送光敏劑至腫瘤組織，進(jìn)一步利用可見(jiàn)/近紅外激光對(duì)腫瘤部位進(jìn)行輻照，此時(shí)光敏劑吸收光子躍迀至激發(fā)態(tài)，激發(fā)態(tài)光敏劑可以將能量傳遞給處于基態(tài)的氧氣(三線態(tài)氧氣)，將其激發(fā)到激發(fā)態(tài)(單線態(tài)氧)。單線態(tài)氧具有很高的氧化性和反應(yīng)活性，可以迅速地氧化腫瘤組織里的核酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)，導(dǎo)致腫瘤壞死凋亡，但單線態(tài)氧的壽命也極短(0.l-20ys)。因此，光動(dòng)力治療的療效與腫瘤組織內(nèi)的單線態(tài)氧壽命密切相關(guān)，腫瘤組織內(nèi)單線態(tài)氧壽命越長(zhǎng)，光動(dòng)力治療的療效也就越尚。
[0003]單線態(tài)氧在溶液中的壽命與光敏劑種類相關(guān)性較小，而主要取決于溶劑的種類。保護(hù)劑是可以延長(zhǎng)單線態(tài)氧壽命的物質(zhì)，此類材料一般是但不限于是不溶于水、不溶解光敏劑的惰性材料，并且擁有孵育單線態(tài)氧并大幅提高其壽命的能力?？梢杂行У靥岣邌尉€態(tài)氧的壽命從而提高藥效。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的技術(shù)目的在于提供一種包含光敏劑、乳化劑和保護(hù)劑組合物及其制備方法，所述保護(hù)劑可有效延長(zhǎng)單線態(tài)氧壽命用于增效光動(dòng)力治療，以解決目前光敏劑分子在腫瘤介質(zhì)中產(chǎn)生的單線態(tài)氧壽命太短導(dǎo)致光動(dòng)力療效十分有限的問(wèn)題。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為:
一種含有單線態(tài)氧保護(hù)劑的組合物的制備方法，包括以下步驟:
(a)用一種溶劑溶解光敏劑、乳化劑獲得混合溶液；
(b)向獲得的混合溶液中加入適量保護(hù)劑，并在冰浴的情況下用適當(dāng)?shù)姆椒ㄈ榛Ｗo(hù)劑，形成納米粒者微米粒。
[0006]具體地，所述步驟(a)操作中的溶劑是二氯甲烷、三氯甲烷、乙醇、甲醇、丙醇或它們的混合中的一種或幾種。
[0007]具體地，所述步驟(b)中的乳化方法是擠出法、超聲法、或者高速分散法等。
[0008]本發(fā)明技術(shù)方案中所述的脂質(zhì)體納米粒的平均粒徑為20nm-2000nm，優(yōu)化的粒徑為35-800nm，最優(yōu)的是為50-300nm。
[0009]本發(fā)明技術(shù)方案中所述的脂質(zhì)體納米粒中保護(hù)劑所占體積比為1%_35%。
[0010]本發(fā)明技術(shù)方案中所述的步驟(a)中的光敏劑其特征在于所述光敏物質(zhì)為安全無(wú)毒的能被光激活產(chǎn)生光化學(xué)反應(yīng)的所有物質(zhì)，這些光敏劑可為親水性、親油性、兩親性的。所述的光敏劑選自卟啉及其衍生物如ICG、Ce6、5-ALA、葉綠素及其衍生物如脫鎂葉綠素和二氫卟酚及紫紅素18、蒽醌及其衍生物;酞菁及其衍生物如鋅酞菁和酞菁鋁；內(nèi)源性光敏劑如5-氨基乙酰丙酸、藻膽蛋白如藻紅蛋白和藻藍(lán)蛋白、五氮齒類衍生物如镥III五氮齒、醌類化合物、玫瑰紅、富勒烯、聚乙炔類如苯庚三炔、噻吩類化合物如α噻吩;無(wú)機(jī)光敏劑如氧化鈦(Ti02)、氧化鋅;或選自中草藥類光敏劑的竹紅菌素衍生物、補(bǔ)骨脂素、姜黃素、金絲桃素、假金絲桃素、大黃素、核黃素、蘆薈大黃素;七甲川菁類如IR780、IR775等。這些光敏劑或近紅外染料都適用于本發(fā)明。
[0011]其中，優(yōu)選的光敏劑是IR780、IR775、酞菁等.本發(fā)明技術(shù)方案中所述的步驟(a)中的乳化劑是脂質(zhì)類:DSPE-PEG2000，卵磷脂，膽固醇，DSPC，DPPC，DSPE等；蛋白類:人血白蛋白、血紅蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、免疫球蛋白、胰島素、血管內(nèi)皮抑制素、肌紅蛋白、纖維連接蛋白、膠原蛋白、明膠、人造多肽和蛋白，或者他們的組合等;高分子類:聚乙烯醇PVA，泊洛沙姆、吐溫、司盤、芐澤，賣澤、聚氧乙烯、蓖麻油等。
[0012]其中優(yōu)選的載體乳化劑是磷脂、DSPE-PEG2000和白蛋白。
[0013]另外，為了使本發(fā)明的組合物可以靶向特定的腫瘤組織或病變部位如肝腫瘤、腎腫瘤、骨腫瘤、乳腺癌和子宮肌瘤等，還可在該組合物中加入對(duì)所述的腫瘤組織或病灶部位有特異親和性的物質(zhì)，如識(shí)別腫瘤的抗體、肽、配體、適體(aptamcr)等而形成的革E向物質(zhì)；為使本發(fā)明的高效光敏劑具有生物膜穿透功能，還可加入具有生物膜穿透功能的物質(zhì)對(duì)其進(jìn)行修飾而得的各種具有生物膜穿透功能的組合物。所述具有生物膜穿透功能的物質(zhì)衍生自(但不僅限于)流感病毒、VSV、SFV、仙臺(tái)病毒和HIV病毒，或選自人工合成的穿膜肽。
[0014]在本發(fā)明中，所述含具有延長(zhǎng)單線態(tài)氧壽命的保護(hù)劑、光敏劑和乳化劑的組合物可以是通過(guò)保護(hù)劑、乳化劑和光敏物質(zhì)混和而成的組合物，也可以是通過(guò)(但不僅限于)化學(xué)方法或物理方法使含有延長(zhǎng)單線態(tài)氧壽命的保護(hù)劑、乳化劑和光敏物質(zhì)構(gòu)建成一個(gè)整體而形成的組合物，可以是微泡、微囊、微粒、微乳以及納米粒和納米乳。光敏物質(zhì)包裹或粘附于微泡、微囊、微粒、微乳以及納米粒和納米乳內(nèi)部或表面。微泡、微囊、微粒、微乳以及納米粒和納米乳可為(但不僅限于)直接市場(chǎng)現(xiàn)有的產(chǎn)品，也可為自制的，其膜材料可為脂類、多聚物、白蛋白、多糖。其芯材料所采用具有攜氧功能的氣體、液體或納米級(jí)生物相容性固體中的一種或幾種。
[0015]下面是對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案進(jìn)一步描述:
除上述總的技術(shù)方案以外，本發(fā)明進(jìn)一步提出了一種利用保護(hù)劑有效延長(zhǎng)單線態(tài)氧壽命用于增效光動(dòng)力治療的方法，所述方法包括以下步驟:(a)在溫度是10-35°C，pH3-10的條件下，用一種溶劑溶解光敏劑、乳化劑獲得混合溶液;利用兩親性脂質(zhì)同時(shí)作為攜載疏水性光敏劑的載體和保護(hù)劑的乳化劑;有機(jī)溶劑同時(shí)溶解脂溶性光敏劑和兩親性乳化劑(b)將以上混合溶液置于合適的圓底燒瓶中并抽真空恒溫水浴鍋內(nèi)除去溶劑，可使光敏劑均勻分散到乳化劑的疏水端中乳化劑和光敏劑在圓底燒瓶底部形成一層均勻的薄膜。(c)向上述圓底燒瓶?jī)?nèi)加入適量溶劑，并用超聲水化10_15min，可使乳化劑脫落，分散于水中形成膠束、囊泡等結(jié)構(gòu)使脂質(zhì)薄膜完全從瓶壁脫落，并均勻分散在溶劑中；(d)在溫度是2-35°C，PH3-9的條件下向步驟(c)獲得的混合溶液中加入適量保護(hù)劑，并用高速分散器進(jìn)行高速分散，可利用親水-疏水相互作用，使得乳化劑包裹保護(hù)劑，形成納米或微米乳滴。通過(guò)乳化時(shí)間、輸出功率、轉(zhuǎn)速等因素的控制，可以制得粒徑均一的納米或微米乳劑。這種納米乳同時(shí)攜帶保護(hù)劑和光敏劑，并可以通過(guò)靜脈注射后的EPR效應(yīng)蓄積到腫瘤部位。進(jìn)行光動(dòng)力治療時(shí)，由于保護(hù)劑可進(jìn)一步有效延長(zhǎng)單線態(tài)氧壽命，進(jìn)而產(chǎn)生高效的光動(dòng)力療效。
[0016]本技術(shù)方案中形成的納米?；蛭⒚琢５钠骄綖?0nm-2000nm，其中保護(hù)劑的體積比約為1%_35%。
[0017]本技術(shù)方案步驟(a)中的溶劑包括但不局限于二氯甲烷、三氯甲烷、乙醇、甲醇、丙醇或它們的混合。本技術(shù)方案步驟本技術(shù)方案步驟(b)中的除去溶劑的方法包括但不局限于噴霧干燥、水浴干燥、減壓干燥和水浴減壓干燥等。
[0018]本技術(shù)方案步驟(C)中的溶劑包括但不局限于是水、生理鹽水、醋酸鹽、生理葡萄糖、磷酸鹽緩沖液或TRIS緩沖液。本技術(shù)方案步驟(c)中的溶解瓶壁上光敏劑和乳化劑形成的薄膜的操作方法包括但不局限于是超聲水化法、渦旋振蕩法、水洗法。本發(fā)明技術(shù)方案中所述的步驟(d)中的保護(hù)劑包括但不局限于是石蠟、碘油、大豆油、二氯甲烷、氯仿、全氟化物、重水，其中全氟化物包括但不限于是全氟烷烴類、全氟胺類、全氟冠醚類、溴代全氟烷烴。其中優(yōu)選的全氟化物是全氟己烷和全氟三丁胺。其中文獻(xiàn)報(bào)道單線態(tài)氧在各種溶劑中的壽命，水:2ys,重水20ys，甲醇7ys，乙醇12ys，己燒17ys，氯仿60± 15ys，全氟己燒600土200ys，二硫化碳200 土 60ys，F(xiàn)reonl I 1000 土 200ys。保護(hù)劑在本技術(shù)方案步驟(d)中的乳化方法包括但不局限于是擠出法、超聲法、高速分散法等。其中，優(yōu)選的操作是超聲法和高速分散法法。
[0019]本發(fā)明的另一目的是提供上述方法制備出的組合物，該組合物可有效延長(zhǎng)單線態(tài)氧壽命用于增效光動(dòng)力治療。
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