一種具有免疫調(diào)節(jié)作用的雙鏈聚核苷酸—ε-聚賴氨酸—硫酸聚糖復(fù)合物及其制備使用方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體的說本發(fā)明提供一種具有免疫調(diào)節(jié)作用的雙鏈聚核苷 酸一 ε-聚賴氨酸一硫酸聚糖復(fù)合物及其制備方法、使用方法。本發(fā)明亦提供一種具有引發(fā) 增強(qiáng)免疫反應(yīng)與改變免疫反應(yīng)類型作用的免疫原組合物及其制備使用方法。
【背景技術(shù)】
[0002] -、雙鏈聚核苷酸:雙鏈聚核苷酸或其衍生物具有多種藥理活性，來源是天然提取 或人工合成。人工合成的雙鏈聚核苷酸如聚肌胞(P〇lyl:C)可誘導(dǎo)體內(nèi)產(chǎn)生干擾素，保護(hù)細(xì) 胞免受病毒感染，具有防治病毒性疾病等療效;天然提取的雙鏈聚核苷酸如呼腸孤病毒科 提取的病毒雙鏈RNA具有抗病毒、抗腫瘤等活性。
[0003] 聚肌胞(PolyIC，PIC)是人工合成的聚次黃嘌呤核苷酸(PolyI)和聚胞嘧啶核苷酸 (PolyC)配對后的雙鏈產(chǎn)物，是一種高效干擾素誘生劑。但由于PIC易于被人及靈長目動(dòng)物 血清中的核酸酶水解，限制了臨床使用。
[0004] 聚肌胞主要用于預(yù)防和治療病毒性感染，如流感、病毒性肝炎、皰疹性結(jié)膜炎。也 試用于腫瘤的輔助性治療。少數(shù)病人有一過性低熱，偶見乏力、口干、惡心等。
[0005] 二、硫酸聚糖:硫酸聚糖包括多糖和低聚糖。
[0006] 多糖由許多單糖分子（10個(gè)以上)縮合而成的長鏈結(jié)構(gòu)，一般分子量較大，10個(gè)以 下單糖分子縮合而成的稱為低聚糖:又稱寡糖。
[0007] 常見的多糖按其來源可分為四類:動(dòng)物多糖、植物多糖、海洋生物多糖或微生物多 糖等。
[0008]植物多糖是從植物，尤其是從中藥材中提取的水溶性多糖。如當(dāng)歸多糖、人參多 糖、艾葉多糖、柴胡多糖、紫根多糖等。這類多糖沒有細(xì)胞毒性，而且質(zhì)量容易通過化學(xué)手 段控制，已成為當(dāng)今新藥研究的發(fā)展方向之一。
[0009] 動(dòng)物多糖是從動(dòng)物組織、器官及體液中分享純化得到的多糖。如肝素、硫酸軟骨 素、透明質(zhì)酸、豬胎盤脂多糖等。
[0010] 微生物多糖包括香菇多糖、茯苓多糖、銀耳多糖、云芝多糖等。這類多糖主要對腫 瘤治療及免疫調(diào)節(jié)效果顯著。
[0011] 海洋生物多糖是從海洋、湖沼生物體內(nèi)分離、純化得到的多糖。這類多糖具有廣泛 的生物學(xué)效應(yīng)，如海帶多糖等。
[0012] 多糖的糖鏈能控制細(xì)胞的分裂與分化，調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長與衰老。特別是多糖作為 廣譜免疫調(diào)節(jié)劑可用于免疫性疾病的治療以及抗腫瘤、抗病毒治療等。
[0013] 常見的低聚糖有卡拉膠寡糖、艾蒿葉寡糖、大豆低聚糖、低分子肝素等。低聚糖通 常聚有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒等藥理作用。
[0014] 硫酸基的引入會(huì)引起聚糖的理化性質(zhì)、特別是立體構(gòu)像的變化，而構(gòu)象變化是活 性變化的決定因素。研究發(fā)現(xiàn)有的聚糖本來無抗病毒活性，經(jīng)硫酸化后表現(xiàn)出抗病毒活性； 而有抗病毒活性的硫酸聚糖被脫去硫酸根后，即失去抗病毒活性。例如卡拉膠和肝素等具 有抑制皰疹病毒復(fù)制作用，但如果將這些聚糖的硫酸根去掉，上述活性則隨之消失。
[0015] 聚糖可以通過硫酸酯化等方式轉(zhuǎn)化為硫酸聚糖，諸如香菇多糖、右旋糖酐、牛膝多 糖的硫酸化衍生物的毒性更低活性更高，是多種胞膜病毒的強(qiáng)大抑制劑。
[0016] 三、ε-聚賴氨酸
[0017] 1977年日本學(xué)者S.Shima和Η.Sakai在從微生物中篩選的過程中，發(fā)現(xiàn)一株放線菌 No. 346能產(chǎn)生大量而穩(wěn)定的Dragendo~Positi ve(簡寫為DP)物質(zhì)，通過對酸水解產(chǎn)物的分 析及結(jié)構(gòu)分析，證實(shí)該DP物質(zhì)是一種含有25-30個(gè)賴氨酸殘基的同型單體聚合物，稱為ε-多聚賴氨酸(ε-PL)。
[0018] ε-聚賴氨酸具有很好的殺菌能力和熱穩(wěn)定性。ε-聚賴氨酸的作用機(jī)理主要表現(xiàn)在 如下3個(gè)方面：
[0019] (1)作用于細(xì)胞壁和細(xì)胞膜系統(tǒng)；
[0020] (2)作用于遺傳物質(zhì)或遺傳微粒結(jié)構(gòu)；
[0021] (3)作用于酶或功能蛋白。
[0022] ε-聚賴氨酸富含陽離子，與帶有陰離子的物質(zhì)有強(qiáng)的靜電作用力并且對生物膜有 良好的穿透力，基于這一特性多聚賴氨酸可用于某些藥物的載體，因此在醫(yī)療和制藥方面 得到廣泛應(yīng)用。聚賴氨酸與氨甲嘌呤（治療白血病、腫瘤的藥物）聚合，能提高藥物的療 效。
[0023]四、特異性免疫的類型
[0024] 特異性免疫（specific immunity)又稱獲得性免疫或適應(yīng)性免疫，這種免疫只針 對一種病原。是獲得免疫經(jīng)后天感染(病愈或無癥狀的感染)或人工預(yù)防接種(菌苗、疫苗、 類毒素、免疫球蛋白等)而使機(jī)體獲得抵抗感染能力。一般是在微生物等抗原物質(zhì)刺激后才 形成的(免疫球蛋白、免疫淋巴細(xì)胞），并能與該抗原起特異性反應(yīng)。
[0025] 特異性免疫類型細(xì)胞免疫：
[0026] T細(xì)胞是參與細(xì)胞免疫的淋巴細(xì)胞，受到抗原刺激后，轉(zhuǎn)化為致敏淋巴細(xì)胞，并表 現(xiàn)出特異性免疫應(yīng)答，免疫應(yīng)答只能通過致敏淋巴細(xì)胞傳遞，故稱細(xì)胞免疫。免疫過程通過 感應(yīng)、反應(yīng)、效應(yīng)三個(gè)階段，在反應(yīng)階段致敏淋巴細(xì)胞再次與抗原接觸時(shí)，便釋放出多種淋 巴因子(轉(zhuǎn)移因子、移動(dòng)抑制因子，激活因子，皮膚反應(yīng)因子，淋巴毒，干擾素），與巨噬細(xì) 胞，殺傷性T細(xì)胞協(xié)同發(fā)揮免疫功能。細(xì)胞免疫主要通過抗感染;免疫監(jiān)視;移植排斥;參與 遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)起作用。其次輔助性T細(xì)胞與抑制性T細(xì)胞還參與體液免疫的調(diào)節(jié)。
[0027] 特異性免疫類型一體液免疫：
[0028] B細(xì)胞是參與體液免疫的致敏B細(xì)胞。在抗原刺激下轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞，合成免疫球蛋 白，能與革巴抗原結(jié)合的免疫球蛋白即為抗體。免疫球蛋白（Immunoglobulin, Ig)分為五類。
[0029] ① IgG是血清中含量最多的免疫球蛋白，唯一能通過胎盤的抗體，具有抗菌、抗病 毒、抗毒素等特性，對毒性產(chǎn)物起中和、沉淀、補(bǔ)體結(jié)合作用，臨床上所用丙種球蛋白即為 IgG0
[0030] ②IgM是分子量最大的免疫球蛋白，是個(gè)體發(fā)育中最先合成的抗體，因?yàn)樗且环N 巨球蛋白，故不能通過胎盤。血清中檢出特異性IgM，作為傳染病早期診斷的標(biāo)志，揭示新近 感染或持續(xù)感染，具有調(diào)理、殺菌、凝集作用。
[0031]③IgA有兩型即分泌與血清型。分泌型IgA存在于鼻、支氣管分泌物、唾液、胃腸液 及初乳中。其作用是將病原體粘附于粘膜表面，阻止擴(kuò)散。血清型IgA，免疫功能尚不完全清 楚。④IgE是出現(xiàn)最晚的免疫球蛋白，可致敏肥大細(xì)胞及嗜堿性粒細(xì)胞，使之脫顆粒，釋放組 織胺。寄生蟲感染，血清IgE含量增高。
[0032]⑤IgD其免疫功能不清。
[0033]還有一類無 T與B淋巴細(xì)胞標(biāo)志的細(xì)胞，具有抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用能殺 傷特異性抗體結(jié)合的靶細(xì)胞，又稱殺傷細(xì)胞(KiIler cel 1 )，簡稱K細(xì)胞，參與ADCC效應(yīng)，在 抗病毒，抗寄生蟲感染中起殺作用。再一類具有自然殺傷作用的細(xì)胞，稱為自然殺傷細(xì)胞 (natural killer cell)即NK細(xì)胞。在殺傷靶細(xì)胞時(shí)，不需要抗體與補(bǔ)體參與。
[0034]特異性免疫形成過程
[0035] 在抗原刺激下，機(jī)體的特異性免疫應(yīng)答一般可分為感應(yīng)、反應(yīng)和效應(yīng)3個(gè)階段。分 為三個(gè)階段:1感應(yīng)階段是抗原處理、呈遞和識(shí)別的階段；
[0036] 2.反應(yīng)階段是B細(xì)胞、T細(xì)胞增殖分化，以及記憶細(xì)胞形成的階段；
[0037] 3.效應(yīng)階段是效應(yīng)T細(xì)胞、抗體和淋巴因子發(fā)揮免疫效應(yīng)的階段。
[0038] 如果某些病原體突破了第一道和第二道防線，即進(jìn)入人體并生長繁殖，引起感染。 有的有癥狀，就是患病;有的沒有癥狀，稱作隱性感染。不論是哪一種情況，機(jī)體都經(jīng)歷了一 次與病原體斗爭的過程，這種專門針對某一種病原體(抗原）的識(shí)別和殺滅作用稱為特異性 免疫。譬如得過傷寒病的人對傷寒桿菌有持久的免疫力，那是因?yàn)閭畻U菌刺激機(jī)體產(chǎn)生 免疫應(yīng)答，增加了巨噬細(xì)胞的吞噬功能，同時(shí)在體內(nèi)還產(chǎn)生抗傷寒桿菌的抗體。人體的免疫 系統(tǒng)又能把傷寒桿菌這個(gè)"敵人"的特征長期"記憶"下來，如果再有傷寒桿菌進(jìn)入，就會(huì)很 快被識(shí)別、被消滅。
[0039] 能進(jìn)行免疫應(yīng)答的免疫細(xì)胞有很多種，最重要的是淋巴細(xì)胞。它又分成兩種。兩種 細(xì)胞的發(fā)育成熟過程不一樣，一種是在胸腺內(nèi)發(fā)育成熟，稱作T淋巴細(xì)胞，是在骨髓內(nèi)發(fā)育 成熟的為B淋巴細(xì)胞。
[0040] 具有吞食異物的巨噬細(xì)胞也是一種重要的免疫細(xì)胞，它具有"加工廠"的作用，即 巨噬細(xì)胞吞噬異物（如細(xì)菌、腫瘤細(xì)胞等）后，對異物進(jìn)行加工處理。處理后的異物(抗原） 就與T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞發(fā)生免疫反應(yīng)，它本身也能直接殺滅異物或者產(chǎn)生細(xì)胞因子參 與