組分1與組分2的濾液置入雙效真空濃縮器 中，濃縮至90°C時(shí)相對密度為1.05的濃縮液，置0~5°C低溫冷藏24小時(shí);將冷藏液加0.3 % 的助濾劑娃藻上，過濾，濾液再置入雙效真空濃縮器中，濃縮至每1ml含0.1 g生藥量;然后加 蜂蜜調(diào)和制成口服液。
[00化]具體實(shí)施例3
[0066] 本發(fā)明口服液劑的制備：
[0067] 收獲的將在夏、秋二季種子成熟時(shí)采收果穗，曬干，磋出種子，大約4500g，放入乙 醇浸泡1-2小時(shí)，加熱提取2次，每次1-2小時(shí)，煎至味盡后合并提取液，靜置后去上清液，然 后100-120目濾過，再經(jīng)截流分子量為5000-10000的超濾柱超濾，超濾液減壓濃縮相對密度 為80°C時(shí)1.36的浸膏，成為組分1。將其余原料溪黃草1200g，絞股藍(lán)llOOg，馬齒寬1200g，夏 枯草llOOg，蒼術(shù)llOOg，牛筋草1200g，陳皮llOOg，雞內(nèi)金llOOg，黃琴llOOg，檐子1200g，白 茅根1200g，馬鞭草1200g，半邊蓮llOOg，豬等1200g，蒲公英llOOg，玉米須1200g，桑寄生 1200g，金錢草I100g，放入10倍量乙醇中，浸泡1-2小時(shí)，加熱提取2次，每次1-2小時(shí)，合并提 取液，靜置后去上清液，然后放入減壓濃縮罐內(nèi)，減壓回收乙醇，濃縮至藥液濃度為〇.6g生 藥/mL,抽濾至濾液的相對密度為20°C時(shí)1.06的浸膏，成為組分2。將組分1和組分2合并后置 入雙效真空濃縮器中，濃縮至90°C時(shí)相對密度為1.05的濃縮液，置0~5°C低溫冷藏24小時(shí)； 將冷藏液加0.3%的助濾劑娃藻±，過濾，濾液再置入雙效真空濃縮器中，濃縮至每1ml含 0.1 g生藥量;濃縮后的膏劑加糊精調(diào)和成口服液，紫外線殺菌后裝瓶。
[006引具體實(shí)施例4
[0069] 收獲的將在夏、秋二季種子成熟時(shí)采收果穗，曬干，磋出種子，大約4500g，放入乙 醇浸泡1-2小時(shí)，加熱提取2次，每次1-2小時(shí)，煎至味盡后合并提取液，靜置后去上清液，然 后100-120目濾過，再經(jīng)截流分子量為5000-10000的超濾柱超濾，超濾液減壓濃縮相對密度 為80°C時(shí)1.36的浸膏，成為組分1。將其余原料溪黃草1200g，絞股藍(lán)llOOg，馬齒寬1200g，夏 枯草llOOg，蒼術(shù)llOOg，牛筋草1200g，陳皮llOOg，雞內(nèi)金llOOg，黃琴llOOg，檐子1200g，白 茅根1200g，馬鞭草1200g，半邊蓮llOOg，豬等1200g，蒲公英llOOg，玉米須1200g，桑寄生 1200g，金錢草llOOg。將所述組份原料藥去雜，驚干，粉碎成顆粒，加水浸泡1小時(shí);將浸泡好 的原料置多功能提取罐中加水煎煮二次;第一次加總藥材10倍量的水，煎煮1.5~2小時(shí)，取 煎液，濾過;第二次加總量7倍量的水，煎煮1~1.2小時(shí)，取兩次煎液混合，濾過;為組分1;再 將藥渣加10倍量乙醇，加熱回流提取2次，每次1~2小時(shí)，將2次提取液合并靜置;減壓回收 乙醇并濃縮至藥液濃度為0.6g生藥/mL，抽濾后，濾液的相對密度約為20°C時(shí)1.08;溫度至 60°C-70°C的浸膏，靜置備用，成為組分2。將組分1與組分2置入雙效真空濃縮器中，濃縮至 90°C時(shí)相對密度為1.05的濃縮液，置0~5°C低溫冷藏24小時(shí);將冷藏液加0.3 %的助濾劑娃 藻±，過濾，濾液再置入雙效真空濃縮器中，濃縮至每1ml含0.1 g生藥量，加蜂蜜調(diào)和成口服 液。
[0070] 藥理學(xué)毒性試驗(yàn)
[0071] -、試驗(yàn)材料；
[0072] (一）實(shí)驗(yàn)動物：小鼠 NIH，體重25-28g，雌雄各半；大鼠 Wistar體重130-160g，雌雄 各半，大鼠、小鼠的飼料由山東醫(yī)學(xué)院動物實(shí)驗(yàn)中屯、提供。
[0073] (二)受試藥物：
[0074] 1、本發(fā)明藥物:實(shí)施例2所制的口服液，=批量等量混合物實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸饋水稀釋 應(yīng)用。
[0075] 2、陽性對照藥物:金匿腎氣丸，市售。
[0076] 二、試驗(yàn)方法及結(jié)果：
[0077] (1)取體重25-28g的健康小鼠80只，雌、雄各半，按性別和體重分別分成四組，每組 20只。1、2、3組服用本發(fā)明藥物，劑量分別為8.6g生藥/kg/d，6.4g生藥/kg/d，4.2g生藥Ag/ d，第4組服用陽性對照藥金匿腎氣丸，劑量為6g生藥/kg/d，連用15天。
[0078] 試驗(yàn)結(jié)果：1、2、3組小鼠比4組小鼠性興奮度明顯增強(qiáng)，1、2、3組小鼠的交配次數(shù)比 4組小鼠的交配次數(shù)平均每日增加3次。
[0079] 試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明藥物對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有明顯的興奮作用，所W本發(fā)明藥物對 于調(diào)節(jié)人體機(jī)能平衡、益氣、補(bǔ)血、延緩衰老增強(qiáng)新陳代謝，精神疲急，性機(jī)能減退都有治療 依據(jù)。
[0080] 本發(fā)明動物急性毒性試驗(yàn) [0081 ] 一、試驗(yàn)材料
[0082] (一)動物小鼠 NIH種雌雄各半，體重20-22g，由山東醫(yī)學(xué)院動物實(shí)驗(yàn)室提供。
[0083] (二)受試藥物:本發(fā)明所制的口服液，用蒸饋水稀釋成混懸液。
[0084] 二、試驗(yàn)方法及結(jié)果：
[0085] 小鼠最大耐受量測定：取健康小鼠32只，雌雄各半，在24小時(shí)之內(nèi)分=組，灌胃腸 每次0.6ml/只，總重量1.8ml，相當(dāng)于原生藥4. Og,即100g生藥/kg/d，相當(dāng)于臨床65公斤人 的857倍。小鼠給藥后按常規(guī)飼料12天未見動物死亡及未出、現(xiàn)毒性反應(yīng)。因此證明，本發(fā)明 藥物無毒副作用，臨床應(yīng)用安全可靠。
[0086] 本發(fā)明藥物組合物的動物長期毒性試驗(yàn)
[0087] -、試驗(yàn)材料及方法
[0088] (一)受試藥物:本發(fā)明實(shí)施例所制的口服液。
[0089] (二)實(shí)驗(yàn)動物，健康大鼠 Wistar,體重100-130g，140只雌雄各半，按性別及體重隨 機(jī)分組，四組，每組35只。1、2、3組服用受試藥物，劑量分別為9.6/kg/d，6.4/kg/d，3.2/kg/ cL4組對照給相應(yīng)體積量的蒸饋水、大鼠均灌胃腸給藥，每組一次連用6個(gè)月，處死一半，余 下1/2停藥觀察12天全部死亡。
[0090] 二、測試指標(biāo)
[0091] ( - ) 一般狀況包括體重、飲食、情緒、活動能量。
[0092] (二）血象檢查：紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)、血象等，血紅蛋白定量計(jì) 數(shù)。
[0093] (=)生化檢查、血清蛋白定量、膽固醇、血糖定量。
[0094] (四）病理組織檢查：實(shí)驗(yàn)結(jié)果后取半數(shù)動物稱重，斷頭處死，取血，同時(shí)解剖屯、、 肝、腎、肺、腦、脾、胃腸、膀脫、腎上腺做病理組織檢查。
[0095] =、試驗(yàn)結(jié)果:經(jīng)大鼠長期毒性試驗(yàn)表明，用本發(fā)明大劑量灌腸六個(gè)月，對大鼠的 生長、體重增加、對腦、肝、腎功能均無毒副作用。對大鼠的各組織器官、循環(huán)系統(tǒng)未發(fā)現(xiàn)損 害改變，用藥組與對照組比較無明顯差異。說明本發(fā)明藥物具有溫補(bǔ)腎陽、益氣、補(bǔ)血、延緩 衰老增強(qiáng)新陳代謝等藥效，無毒性。
[0096] 藥物與臨床實(shí)驗(yàn)
[0097] 藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)：
[009引1、材料與方法
[0099] 藥物:本發(fā)明提醇沉液的制備:取一定量本發(fā)明原料藥，水煎兩次，水浴上濃縮至 一定體積后加95%乙醇沉淀雜質(zhì)，過液，濾液回收乙醇。配成100%濃度。
[0100] 對照組為白云山消炎利膽片，國藥準(zhǔn)字Z44022243。熊去氧膽酸為日本S菱化成生 產(chǎn)。
[0101] 動物ICR小鼠，SD大鼠均由本院動物研究室提供。
[0102] 1. 1對四氯化碳引起的小鼠肝損傷的保護(hù)作用:雄性小鼠78只，體重18-23g，按體 重隨機(jī)分層分成六組，每組13只。本發(fā)明3個(gè)劑量組2.5g/kg、5. Og/kg、10.0 g/kg，陽性對照 藥白云山消炎利膽片lOg/kg，模型組，水對照組每天灌胃給藥一次，連續(xù)6d，于第六天給藥 后化除水對照組外其余各組均皮下注射0.15的四氯化碳菜油5ml/kgJ化后摘眼球取血用 北京化工廠產(chǎn)的試劑盒測定血清SGPT、SGOT。解剖出肝臟稱重，根據(jù)處死時(shí)體重計(jì)算每只小 鼠的肝體比、數(shù)據(jù)W均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間進(jìn)行t檢驗(yàn)。
[0103] 1. 2對正常大鼠膽汁流量的影響1.2.1
[0104] 膽汁流量的測定:取大鼠60只，雄性，體重250~350g，稱重隨機(jī)分成五組，每組12 只，實(shí)驗(yàn)前禁食12h，不禁水。實(shí)驗(yàn)W10%烏拉坦l.Og/kg腹腔注射麻醉，仰位固定于手術(shù)臺， 沿腹正中線切開腹壁，找出十二指腸，在降部腸系膜中找到白色有初性的膽管，在其下穿二 根絲線，結(jié)扎乳頭部，向肝臟方向作"V"形切口，插入硬質(zhì)塑料管，結(jié)扎固定，即可見有淡黃 綠色膽汗流出，試管收集膽汁，術(shù)后W鹽水紗布覆蓋腹腔，待穩(wěn)定Ih后，先收集30min的膽 汁，作為給藥前的基礎(chǔ)值，然后分組給藥(經(jīng)十二指腸）。本發(fā)明3個(gè)劑量組2.5g/kg、5.Og/ 1^、10.0邑/1^，水對照組，陽性藥熊去氧膽酸0.5邑/4邑。給藥后每隔30111111收集測量1次膽汁。 共4h。
[0105] 1.2.2膽汁成分的測定:將給藥前，給藥后4h收集的膽汁測定膽紅素(伊利康生物 技術(shù)有限公司生產(chǎn)，咖啡因法）。膽固醇含量測定用東歐生物工程公司生產(chǎn)的試劑盒，酶法 測定。
[0106] 2實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0107] 2. 1對四氯化碳引起的小鼠肝損傷的保護(hù)作用：四氯化碳引起的SGPT、SG0T顯著 升高P<0.01，說明造型成功。本發(fā)明使SGOT顯著降低S個(gè)劑量組均P<0.05,本發(fā)明對SGPT 無明顯影響。白云山消炎利膽片使SGPT、SG0T顯著降低(P-~0.05)。澤蘭lOg/kg組使肝體比 顯著低于四氯化碳模型組。詳見表1。
[0108] 表1本發(fā)明對四氯化碳中毒小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶的影響(X±S)
[0110] 注:組間進(jìn)行t檢驗(yàn)，與四氯化碳組比沖<0.05，*沖<0.01
[0111] 2. 2對正常大鼠膽汁流量的影響:本發(fā)明2.5g/kg組使正常大鼠膽汁流量增加，持 續(xù)2h，W給藥后的30min增加最顯著<0.05)。5.0肖八肖組給藥化各時(shí)相都顯著增加< 0.05.10.0 g/kg組給藥后90min內(nèi)各時(shí)相都比對照組顯著升高(P<0.0 l，P<0.05)。陽性藥 熊去氧膽酸也使流量增加，持續(xù)化。P<〇. 05詳見表2。
[0112] 表2本發(fā)明對麻醉大鼠膽汁流量的影響(X±S)
[011引注t W給藥前流量為100%，組問進(jìn)行t檢驗(yàn)，與對照組比沖<0.05，*沖<0.01.本 發(fā)明給藥前、給藥后渭定膽汁中膽紅素和膽同醇含量與對照組相比未見顯著差異。詳見表 3。