注射疫苗組合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及作為癌或感染癥的預(yù)防或治療劑有用的注射疫苗組合物。特別是本發(fā) 明設(shè)及通過(guò)將特定的脂多糖作為佐劑、與抗原一起給藥，能夠安全且有效地誘導(dǎo)全身性免 疫應(yīng)答的注射疫苗組合物。
【背景技術(shù)】
[0002] 作為疫苗制劑的劑型，現(xiàn)在產(chǎn)品化的制劑大部分為注射劑。
[0003] 現(xiàn)行的疫苗制劑例如日本使用的通常的流感疫苗制劑中，不含有佐劑，其效果不 充分，還存在接種了疫苗制劑的對(duì)象在流感感染后嚴(yán)重化的例子。
[0004] 另外，人類乳頭瘤病毒疫苗中，也存在含有單憐酷脂作為佐劑的產(chǎn)品。但是，該單 憐酷脂為了提高安全性而去除了源自沙口氏菌屬菌的脂多糖的糖鏈部分，實(shí)際情況是作為 佐劑的效果減弱。
[0005] 因此，期待利用源自安全性比較高的菌種的脂多糖、可W兼具高的安全性和免疫 增強(qiáng)作用的佐劑。
[0006] 例如專利文獻(xiàn)1中提出了源自泛菌屬菌的脂多糖（11口〇口〇173曰。證曰1'1(16、1^^)，記 載了與W往的LI^相比安全性高，與抗原同時(shí)給藥的情況下免疫響應(yīng)得到增強(qiáng)。
[0007] 但是，專利文獻(xiàn)1中，對(duì)于對(duì)獲得性免疫的使用沒(méi)有明確的提及、例示，另外，對(duì)于 最合適的佐劑/抗原的比率也沒(méi)有提及。
[000引另外，例如專利文獻(xiàn)2中提出了含有病原體的滅活抗原、W及作為免疫刺激劑(佐 劑）的P0ly(I:C)與酵母聚糖的組合的疫苗，記載了使用源自成團(tuán)泛菌（Pantoea agglomerans)的脂多糖(LPS)作為佐劑，使用流感病毒作為病原體的例子。
[0009] 但是，專利文獻(xiàn)2中記載的使用源自成團(tuán)泛菌（Pantoea agglomerans)的脂多糖 (LPS)的疫苗的例子是對(duì)鼻粘膜給藥，對(duì)于注射給藥沒(méi)有教導(dǎo)。通常若給藥部位不同則有效 的佐劑不同是技術(shù)常識(shí)。由此由該專利文獻(xiàn)2中記載的使用源自成團(tuán)泛菌（Pantoea agglomerans)的脂多糖化PS)的疫苗的例子，在注射給藥中源自成團(tuán)泛菌（Pantoea agg 1 omerans)的脂多糖(LPS)是否發(fā)揮效果還不明確。
[0010] 現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0011] 專利文獻(xiàn)
[0012] 專利文獻(xiàn)1:日本專利第4043533號(hào)
[0013] 專利文獻(xiàn)2:日本特開(kāi)2009-242367號(hào)公報(bào)

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014] 發(fā)明要解決的問(wèn)題
[0015] 本發(fā)明鑒于上述現(xiàn)狀，其目的在于，提供安全，作為癌或感染癥的預(yù)防或治療劑有 用，可W有效地誘導(dǎo)全身性免疫應(yīng)答的注射疫苗組合物。
[001 y 用于解決問(wèn)題的方案
[0017] 本發(fā)明人等為了解決上述問(wèn)題而進(jìn)行深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，將源自革蘭氏陰性細(xì) 菌的脂多糖或其鹽作為佐劑，與抗原一起注射給藥，由此可^安全且有效地誘導(dǎo)全身性免 疫應(yīng)答，從而完成了本發(fā)明，所述革蘭氏陰性細(xì)菌選自由沙雷氏菌屬(Serratia)、勒克菌屬 (Leclercia)、控恩菌屬（Rahnella)、嗜熱酸菌屬（Acidicaldus)、嗜酸菌屬 (Acidiphilium)、酸球形菌屬（Acidisphaera)、酸胞菌屬（Acidocella)、酸單胞菌屬 (Acidomonas)、亞細(xì)亞菌屬（Asaia)、別爾納普氏菌屬（Belnapia)、脆弱球菌屬 (Oaurococcus)、葡糖醋桿菌屬（Gluconacetobacter)、葡糖桿菌屬（Gluconobacter)、柯扎 克氏菌屬（Kozakia)、利亞桿菌屬(Xeahibacter)、贏球菌屬（Muricoccus)、新亞細(xì)亞菌數(shù) (Neoasaia)、嗜油單胞菌屬（Oleomonas)、副脆弱球菌屬（Paracraurococcus)、紅球狀菌屬 (民110(1〇9；!_13)、玫瑰球菌屬（1?036〇(3〇(3(3113)、如比特皮達(dá)（加131'；!_巾691(13)、糖桿菌屬 (5過(guò)(3(31131'化3(3巾61')、星狀菌屬化巾6113)、斯瓦米納坦氏菌屬化￥3111；!_113巾1131113)、替考球菌屬 (Teichococcus)、扎瓦爾金氏菌屬（Zavarzinia)、假單胞菌屬（Pseudomonas)、無(wú)色桿菌屬 (Achromobacter)、芽抱桿菌屬（Bacillus)、甲焼袋狀菌屬（Methanoculleus)、甲焼八疊球 菌屬（Methanosarcina)、梭菌屬（Clostridium)、微球菌屬（Micrococcus)、黃桿菌屬 化13￥0自3(3巾61'；!_11111)、泛菌屬（？311巾0 63)、醋酸桿菌屬（六06巾0自3(3巾61')、發(fā)酵單胞菌屬 (Zymomonas)、黃單胞菌屬（Xan化omonas)和腸桿菌屬化nterobacter)組成的組中的至少一 種。
[0018] 即，本發(fā)明為一種注射疫苗組合物，其特征在于，其為對(duì)人或動(dòng)物注射給藥的注射 疫苗組合物，其含有至少一種抗原和作為免疫刺激劑的源自革蘭氏陰性細(xì)菌的脂多糖或其 鹽，所述革蘭氏陰性細(xì)菌選自由沙雷氏菌屬（Serratia)、勒克菌屬化eclercia)、控恩菌屬 (Rahnella)、嗜熱酸菌屬（Acidicaldus)、嗜酸菌屬（Acidiphilium)、酸球形菌屬 (Acidisphaera)、酸胞菌屬（Acidocella)、酸單胞菌屬(Acidomonas)、亞細(xì)亞菌屬（Asaia)、 別爾納普氏菌屬（Belnapia)、脆弱球菌屬（Craurococcus)、葡糖醋桿菌屬 (Gluconacetobacter)、葡糖桿菌屬（Gluconobacter)、柯扎克氏菌屬（Kozakia)、利亞桿菌 屬化eahibacter)、贏球菌屬（Muricoccus)、新亞細(xì)亞菌數(shù)（Neoasaia)、嗜油單胞菌屬 (Oleomonas)、副脆弱球菌屬（Paracraurococcus)、紅球狀菌屬（Rhodopila)、玫瑰球菌屬 (民0360(30(3(3113)、如比特皮達(dá)（加131'；!_巾691(13)、糖桿菌屬（53(3(31131'化3(3巾61')、星狀菌屬 (Stella)、斯瓦米納坦氏菌屬（Swaminathania)、替考球菌屬（Teichococcus)、扎瓦爾金氏 菌屬（Zavarzinia)、假單胞菌屬（Pseudomonas)、無(wú)色桿菌屬（Achromobacter)、芽抱桿菌屬 (Bacillus)、甲焼袋狀菌屬(Methanoculleus)、甲焼八疊球菌屬(Methanosarcina)、梭菌屬 (Clostridium)、微球菌屬（Micrococcus)、黃桿菌屬化lavobacterium)、泛菌屬（Pantoea)、 醋酸桿菌屬(Acetobacter)、發(fā)酵單胞菌屬（Zymomonas)、黃單胞菌屬（Xanthomonas)和腸桿 菌屬化nterobacter)組成的組中的至少一種D
[0019] 本發(fā)明的注射疫苗組合物中，上述免疫刺激劑與抗原的質(zhì)量比（免疫刺激劑的總 質(zhì)量/抗原的總質(zhì)量)優(yōu)選為0.002~50。
[0020] 另外，本發(fā)明的注射疫苗組合物優(yōu)選用于誘導(dǎo)體液免疫。
[0021] 另外，本發(fā)明的注射疫苗組合物中，抗原優(yōu)選為源自感染癥的抗原或癌抗原。
[0022] W下對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。
[0023] 本發(fā)明的注射疫苗組合物含有至少一種抗原和免疫刺激劑。
[0024] 本發(fā)明的注射疫苗組合物中，上述免疫刺激劑與上述抗原的質(zhì)量比（免疫刺激劑 的總質(zhì)量/抗原的總質(zhì)量)優(yōu)選為0.002~50。若不足0.002則有可能不能誘導(dǎo)充分強(qiáng)度的免 疫，若超過(guò)50則有可能產(chǎn)生本發(fā)明的注射疫苗組合物的安全性上的問(wèn)題。上述免疫刺激劑 與上述抗原的質(zhì)量比的更優(yōu)選的下限為0.01，更優(yōu)選的上限為10。通過(guò)上述免疫刺激劑與 上述抗原的質(zhì)量比處于該范圍內(nèi)，可W確保安全性的同時(shí)誘導(dǎo)充分強(qiáng)度的免疫。
[0025] 本說(shuō)明書(shū)中所稱的"抗原的質(zhì)量"，除了特別記載的情況之外，指的是疫苗中的抗 原中含有的抗原蛋白質(zhì)或膚的質(zhì)量。因此，抗原為源自病毒等生物體的物質(zhì)的情況下，指的 是該抗原中含有的全部蛋白質(zhì)的質(zhì)量。
[0026] 作為本發(fā)明中使用的抗原，可W為源自感染癥的抗原，作為源自感染癥的抗原，若 為感染性病原體和源自感染性病原體的抗原則沒(méi)有特別限定。
[0027] 作為由上述感染性病原體患染的疾病，沒(méi)有特別限定，可列舉出例如由腺病毒、瘤 疹病毒(例如冊(cè)￥-1、冊(cè)￥-11八1￥或￥2￥)、痘病毒(例如天花病毒或痘苗病毒、或者傳染性軟 痛等正痘病毒）、小核糖核酸病毒(例如鼻病毒或腸道病毒）、正黏病毒(例如流感病毒）、副 黏病毒(例如副流感病毒、流行性腮腺炎病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞病毒(RSV))、冠狀病毒 (例如SARS)、乳多空病毒(例如引起生殖器痛、尋常性膀脫痛或足底痛的乳多空病毒等人類 乳頭瘤(papilloma)病毒）、嗜肝DNA病毒(例如乙型肝炎病毒）、黃病毒(例如丙型肝炎病毒 或登革病毒）、或反轉(zhuǎn)錄病毒(例如HIV等慢病毒)等病毒感染患染的疾病等病毒疾??；由埃 希氏菌屬、腸桿菌屬、沙口氏菌屬、葡萄球菌、志賀氏菌、李斯特菌屬、氣桿菌屬、螺桿菌屬、 克雷伯氏桿菌屬、變形桿菌屬、假單胞菌屬、鏈球菌、衣原體屬、支原體屬、肺炎球菌、奈瑟氏 菌屬、梭菌屬、桿菌屬、棒狀桿菌屬、分支桿菌屬、彎曲桿菌屬、弧菌屬、沙雷氏菌屬、普羅維 登斯菌屬、色素桿菌屬、布氏桿菌屬、耶爾森氏菌屬、嗜血桿菌屬、或博代氏桿菌屬等細(xì)菌感 染患染的疾病等細(xì)菌疾病；W衣原體(化lamydia)癥、念珠菌癥、曲霉病、組織胞漿菌病、隱 球菌腦膜炎為代表但是不限于此的真菌疾病;追疾;卡氏肺囊蟲(chóng)肺炎;利什曼??；隱抱子蟲(chóng) 病；弓形體病和錐蟲(chóng)病等。
[0028] 本發(fā)明中，上述源自感染癥的抗原優(yōu)選為選自由源自流感病毒的抗原、源自人類 乳頭瘤病毒的抗原和源自肺炎球菌的抗原組成的組中的至少一種，其中，優(yōu)選為源自流感 病毒的抗原。
[0029] 在此，上述流感病毒指的是屬于正黏病毒科的具有直徑約100皿的粒子尺寸的RNA 包膜病毒，基于內(nèi)部蛋白的抗原性，分為A、B和C型。上述流感病毒包含與被具有脂雙層結(jié)構(gòu) 的病毒包膜包圍的內(nèi)部核殼體或核蛋白結(jié)合的核糖核酸(RNA)的核、和外部糖蛋白。上述病 毒包膜的內(nèi)層主要由基質(zhì)蛋白構(gòu)成，外層大部分由源自宿主的脂質(zhì)物質(zhì)構(gòu)成。另外，上述流 感病毒的RNA采用分成多部分的結(jié)構(gòu)。需要說(shuō)明的是，全世界大流行的流感為由于A型流感 病毒所導(dǎo)致的，該A型流感病毒具有血凝素化A)和神經(jīng)氨酸酶(NA)運(yùn)兩種包膜糖蛋白，根據(jù) 抗原性的不同，對(duì)于HA而言分為16種亞型、對(duì)于NA而言分為9種亞型。
[0030] 本發(fā)明中，作為上述源自感染癥的抗原，合適地使用源自A型和B型流感病毒的抗 原。需要說(shuō)明的是，作為上述的A型和B型流感病毒的亞型，沒(méi)有特別限定，可W為迄今已分 離的亞型或?qū)?lái)可分離的亞型。
[0031] 本發(fā)明中，作為源自流感病毒的抗原，若為構(gòu)成上述流感病毒的各種成分的至少 一部分則沒(méi)有特別限定，可W為使得脂質(zhì)包膜可溶化來(lái)用有機(jī)溶劑/表面活性劑或其它試 劑將純化病毒粒子分解而成的亞病毒粒子、或者WHA