是治療WHIm-綜合征和類風(fēng)濕關(guān)節(jié) 炎;腫瘤學(xué)領(lǐng)域，特別是治療癌癥，特別是表現(xiàn)出CRCX受體的癌癥，例如肝、膜腺、前列腺或 乳腺的癌癥;治療造血功能素亂，特別是支持干細(xì)胞的動(dòng)員、增殖和遷移、T-細(xì)胞激活W及 對(duì)免疫母細(xì)胞，例如CTL/PD-1支持;治療受傷，特別是燒傷所致傷口；抗纖維化的治療;治療 或預(yù)防瘤痕;治療屯、源性疾病，特別是屯、臟機(jī)能不全;治療代謝疾病，特別是糖尿病;治療病 毒性疾病，特別是HIV-UHIV-2、巨細(xì)胞病毒（切tomegalo virus)、單純瘤疹病毒化erpes simplex vi;rus)(l 和2 型），水痘帶狀瘤疹病毒（Varicella zoster virus)、甲型 巧epatitis A)及乙型肝炎病毒巧epatitis B virus)、流感病毒（Influenza virus)、脊髓 灰質(zhì)炎病毒（Polio virus)、鼻病毒（lihino virus)、風(fēng)疹病毒（Rubella virus)、麻疹病毒 (Measles virus)、狂犬病病毒（Rabies virus)、勞斯肉瘤病毒(Rous s曰rcom曰 virus)、EB 病毒化pstein-Barr Virus)的感染；治療細(xì)菌和真菌，特別是假單胞菌(Pseudomonas)、念 珠菌(化ndida )、金黃色葡萄球菌(S. aureus)所致感染;治療感染過程、異常感染過程;治療 生長(zhǎng)障礙、治療神經(jīng)元疾病、血液凝固級(jí)聯(lián)反應(yīng)和造血功能素亂、血管疾病、免疫系統(tǒng)疾病、 和改善傷口及骨折愈合。
[0115] 本發(fā)明的再一個(gè)主題是通過固相合成制造至少一種本發(fā)明的膚。
[0116] 此外，本發(fā)明的主題也是用于制造至少一種本發(fā)明膚的方法，其中在能夠氧化細(xì) 鍵W產(chǎn)生-SS鍵的氧化反應(yīng)條件下提供和偶聯(lián)單體膚。
[0117] 發(fā)明詳述
[0118] 利用SEQ ID NO: 16所示膚作為本發(fā)明膚的典型代表更詳細(xì)地進(jìn)一步描述本發(fā)明。 除了本發(fā)明的公開內(nèi)容，W0 2009/004054 A2中述及的也通過引用并入本文。
[0119] 本發(fā)明的膚W小于50μΜ的IC50值有效阻斷X4嗜性HIC-1NL4-3感染。那些膚視作具 有足夠的抑制效果，W阻抑或抑制活性CXCR4介導(dǎo)的生理反應(yīng)。本發(fā)明的膚包含W下通式氨 基酸序列：
[0120] Zl X χ1 χ2 χ3 χ4 χ5 V χ6 χ7 χ8 χ9 ζ2
[0121] 除了SEQ ID No :16-28所示氨基酸序列構(gòu)成的膚。排除SEQ ID No :16-28所示氨基 酸序列的膚是因?yàn)樗鼈児_于WO 2009/004054A2并與本發(fā)明膚的通式氨基酸序列重疊。然 而，本發(fā)明的膚W及SEQ ID N0:16-28的那些膚可用作藥物，用于W下領(lǐng)域:神經(jīng)系統(tǒng)疾病 的治療，特別是中風(fēng)、帕金森病、阿爾茨海默病、多發(fā)性硬化癥；免疫學(xué)領(lǐng)域，特別是治療 WHIm-綜合征和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎;腫瘤學(xué)領(lǐng)域，特別是治療癌癥，特別是表現(xiàn)出CRCX受體的癌 癥，例如肝、膜腺、前列腺或乳腺的癌癥;治療干細(xì)胞動(dòng)員、增殖和遷移的缺乏、T-細(xì)胞激活 W及對(duì)免疫母細(xì)胞，例如CTL/PD-1支持;治療燒傷所致傷口；抗纖維化的治療;治療或預(yù)防 瘤痕;治療屯、源性疾病，特別是屯、臟機(jī)能不全;治療代謝疾病，特別是糖尿病。
[0122] 在本發(fā)明膚的分子式中，W下定義是有效的：
[0123] X = I、P或L。代表焦谷氨酸的征也可替代I、P或LW保護(hù)膚的N-末端免遭蛋白水解 攻擊?；蛘?，如果Zi不存在，N-末端氨基酸可W選自下組:化、(11、0-1^、0-1、諷氨基酸（5111)， 例如511^^511^1、5111-￥，￥、￥、5、和1';或選自己酸(〔6簇酸）、鄉(xiāng)氨酸(巧簇酸）。
[0124] 氨基酸序列的其它位置如下所示：
[01 巧]χο = V或者，如果X = I，則χο是V或d-V、d-L、d-1、d-M、d-P、β-ν、β-L、β-1、β-Μ、β-Ρ、或 Sul-V；
[0126] χ? = κ、Η或 Κ，特別是 χ? = Κ;
[0127] χ2 二 Y、F、s或 w;
[012 引 χ3 二 A、T、c或 S;
[0129] X4和X5 = κ或C，前提是X4 = C，則X5辛C和如果X5 = C，則X4辛C;
[0130] χ6 = ρχ或缺失，W及χ4和χ5均二K;
[0131] x7 = q、c 或缺失；
[0132] χ8二 c、v或缺失.
[0133] χ9二 s、c或缺失。
[0134] N-末端基團(tuán)Zi(如果存在的話)是1^、22、或征，其中Z2 = 0或該膚鏈N-末端氮原子的 修飾形式，該修飾形式與該膚N-末端氨基酸的氨基一起形成具有-NR2R3結(jié)構(gòu)的部分，其中R 2 和/或R3彼此獨(dú)立為Η或取代或未取代的酷基烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基和雜環(huán)烷基；
[0135] C 末端基團(tuán) Ζ3 = 0、ΤΡΤΕ-Ζ4、ΤΡΤ-Ζ4、ΤΡ-Ζ4、Τ-Ζ4、或 Ζ4，其中
[0136] Ζ4 = 0或該膚鏈C-末端簇基的修飾形式，該修飾形式與該膚C-末端氨基酸的簇基 一起形成具有-C(0)-0-Ri或-C(0)-NR 2R3結(jié)構(gòu)的部分，其中Ri是取代或未取代的烷基、芳基、 芳烷基、環(huán)烷基和雜環(huán)烷基。其它縮寫具有W下意義：
[0137] Cap =己酸(C6簇酸），<E =焦谷氨酸(pyro gutamate)，Val =鄉(xiāng)氨酸（C5簇酸），和 Sul =諷氨基酸（sulfon amino acid)。
[0138] 本發(fā)明膚的逆-反膚(retro-inverso p邱tide)也落在本發(fā)明的范圍內(nèi)，W及穩(wěn)定 膚鍵W抵御膚酶的其它衍生物。
[0139] 術(shù)語衍生物表示所有長(zhǎng)度的片段，包括N和C末端的截短，含有氨基酸殘基取代(包 括D-氨基酸殘基和修飾的氨基酸殘基)的本發(fā)明膚，W及在N和C端含有二硫鍵和延伸的膚。
[0140] 本發(fā)明證明了本發(fā)明膚影響T細(xì)胞遷移和干細(xì)胞動(dòng)員，W及抑制細(xì)菌病原體。因 此，本發(fā)明的膚是天然的CXCR4括抗劑，可防止X4HIV-1毒株傳播和在體內(nèi)調(diào)節(jié)CXCR4活性和 抗微生物免疫力中起作用。
[0141] 在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式中，本發(fā)明的膚包含W下氨基酸序列：
[0142] I V χ? χ2 χ3 χ4 χ5 V χ6 χ7 χ8 χ9
[0143] 其中
[0144] χ? = κ、Η或 Κ，特別是 χ? = Κ;
[0145] χ2 二 Y、F、s或 W;
[0146] χ3 二 T、c或 s;
[0147] χ4 二 κ或。
[014 引 χ5 二 Κ或。
[01 49] χ6二 Ρ或者，如果χ1 二R和χ2 二 W和χ3 二 S和χ4二Κ和χ5 二Κ，則χ6二。
[0150] X? = Q 或 C;
[0151] χ8 二 V或。
[0152] X9 = S、C或者，如果χ? = R和X2 = Υ和 X3 = S和X4 = Κ和X5=Κ，則X9 缺失。
[0153] 在更進(jìn)一步的本發(fā)明實(shí)施方式中，本發(fā)明的膚選自具有至少一種W下氨基酸序列 的膚組成的組：
[0154] IVRFTKKVPQVS,408Ι-419Υ411F
[0155] IVRWTKKVPQVS,408I-419Υ411W
[0156] IVRYSKKVPQVS,408I-419T412S〇
[0157] 本發(fā)明的還有另一實(shí)施方式包括的本發(fā)明膚具有至少一種W下氨基酸序列：
[0158] IVRYTKCVPQVS，4081-419K414C
[0159] IVRYSKKVPQC,408I-418SC
[0160] IVRWTKKVPQVC,4081-419WC01
[0161] IVRWTCKVPQVS,4081-419WC0 2
[0162] IVRWCKKVPQVS,4081-419WC0 3
[0163] IVRWSKKVPQCS,408I-419WSC01
[0164] IVRWSKKVPCVS,4081-419WSC0 2 [01 化]IVRWSKKVCQVS，408I-419WSC03
[0166] IVRYTKKVPQCS，4081-419V418C。
[0167] 運(yùn)些氨基酸用于制備經(jīng)由它們的半脫氨酸連接的二聚體?？蒞組合運(yùn)些膚合成均 二聚體或雜二聚體。
[0168] 本發(fā)明的特別有用的膚是包含氨基酸半脫氨酸的本發(fā)明的兩個(gè)相同單體膚構(gòu)成 的二聚膚，其中該二聚膚經(jīng)由在所述單體膚之間形成的半脫氨酸橋彼此相連。在本發(fā)明的 特定二聚膚中，包含氨基酸半脫氨酸的單體膚選自具有W下氨基酸序列的膚構(gòu)成的組：
[0169] IVRYTKCVPQVS，4081-419K414C
[0170] IVRYSKKVPQC,408I-418SC
[0171] IVRWTKKVPQVC,4081-419WC01
[0172] IVRWTCKVPQVS,4081-419WC0 2
[0173] IVRWCKKVPQVS,4081-419WC0 3
[0174] IVRWSKKVPQCS,408I-419WSC01 [01 巧]IVRWSKKVPCVS，408I-419WSC02
[0176] IVRWSKKVCQVS,4081-419WSC0 3
[0177] IVRYTKKVPQCS,4081-419V418C 〇
[0178] 本發(fā)明的主題還是用于W下領(lǐng)域的本發(fā)明膚:神經(jīng)疾病的治療，特別是中風(fēng)、帕金 森病、阿爾茨海默病、多發(fā)性硬化癥;免疫學(xué)領(lǐng)域，特別是治療WHIm-綜合征和類風(fēng)濕關(guān)節(jié) 炎;腫瘤學(xué)領(lǐng)域，特別是治療癌癥，特別是表現(xiàn)出CRCX受體的癌癥，例如肝、膜腺、前列腺或 乳腺的癌癥;治療造血功能素亂，特別是支持干細(xì)胞的動(dòng)員、增殖和遷移、T-細(xì)胞激活W及 對(duì)免疫母細(xì)胞，例如CTL/PD-1支持;治療受傷，特別是燒傷所致傷口；抗纖維化的治療;治療 或預(yù)防瘤痕;治療屯、源性疾病，特別是屯、臟機(jī)能不全;治療代謝疾病，特別是糖尿病;治療病 毒性疾病，特別是HIV-UHIV-2、巨細(xì)胞病毒（切tomegalo virus)、單純瘤疹病毒化erpes simplex vi;rus)(l 和2 型），水痘帶狀瘤疹病毒（Varicella zoster virus)、甲型 巧epatitis A)及乙型肝炎病毒巧epatitis B virus)、流感病毒（Influenza virus)、脊髓 灰質(zhì)炎病毒（Polio virus)、鼻病毒（lihino virus)、風(fēng)疹病毒（Rubella virus)、麻疹病毒 (Measles virus)、狂犬病病毒（Rabies virus)、勞斯肉瘤病毒(Rous s曰rcom曰 virus)、EB 病毒化pstein-Barr Virus)的感染；治療細(xì)菌和真菌，特別是假單胞菌(Pseudomonas)、念 珠菌(化ndida )、金黃色葡萄球菌(S. aureus)所致感染;治療感染過程、異常感染過程;治療 生長(zhǎng)障礙、治療神經(jīng)元疾病、血液凝固級(jí)聯(lián)反應(yīng)和造血功能素亂、血管疾病、免疫系統(tǒng)疾病、 和改善傷口及骨折愈合。
[0179] 本發(fā)明的膚可W用合適的藥學(xué)上可接受的運(yùn)載體配制成藥物。
[0180] 本發(fā)明的膚可采用常規(guī)用于膚的胃腸外、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、鼻內(nèi)、局部-外用、皮下 或含服途徑等方式施用。膚的給藥量為化g到Ig每單位劑量每天。
[0181] 本發(fā)明的另一主題是通過固相合成制造至少一種本發(fā)明膚的方法。本發(fā)明膚的化 學(xué)合成可通過常規(guī)的固相合成法，例如采用已知的Fmoc化學(xué)方法，利用膚合成儀9050(應(yīng)用 生物系統(tǒng)公司-Applied Biosystems)。
[0182] 此外，本發(fā)明的主題也是用于制造至少一種本發(fā)明膚的方法，其中在能夠氧化細(xì) 鍵W產(chǎn)生-S-S-鍵的氧化反應(yīng)條件下提供和偶聯(lián)單體膚。
[0183] 使用X4HIV-1化4-3分子克隆進(jìn)行抗病毒篩選。為了確定抗病毒活性是否依賴于病 毒輔助受體嗜性并排除運(yùn)種可能性：即，污染物質(zhì)導(dǎo)致觀察到的效果，我們隨后測(cè)試了 SEQ ID NO 16所示的化學(xué)合成膚對(duì)各種HIV-1毒株的作用。合成膚通常抑制X4HIV-1毒株所致感 染，平均50%抑制濃度（1C日0)為15.祉g/ml(對(duì)應(yīng)于8.6μΜ)。在濃度>4μg/ml時(shí)，野生型(wt) HIV-1化4-3在PBMC中的復(fù)制受到顯著抑制。值得注意的是，僅需要將約1%高豐度的HSA前 體轉(zhuǎn)換為SEQ ID N0:16所示膚W達(dá)到約10μg/ml。即便在非常高的濃度下，SEQ ID N0:16所 示膚不顯示細(xì)胞毒性作用。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)證實(shí)，該膚也抑制X4HIV-2和SIV毒株所致的感染， 雖然效果都相對(duì)一般，因?yàn)檫\(yùn)些病毒利用多種輔助受體。我們發(fā)現(xiàn)預(yù)處理病毒祀細(xì)胞而非 病毒體有效降低了HIV感染，運(yùn)表明SEQ ID NO: 16所示膚具有細(xì)胞祀標(biāo)。此外，如果SEQ ID NO: 16所示膚在細(xì)胞暴露于病毒體之后加入，抑制效力逐漸下降，而HSA前體沒有抗逆轉(zhuǎn)錄 病毒的作用。因此，該數(shù)據(jù)表明，人血漿中最豐富蛋白的片段是針對(duì)病毒生命周期的早期步 驟的X4HIV-1毒株的天然產(chǎn)生的和特異性抑制劑。
[0184] 業(yè)已發(fā)現(xiàn)，SEQ ID顯：16所示膚^劑量依賴方式與〔乂化12競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合〔乂0?4。解離常 數(shù)(DCso)等于8±：3μΜ，對(duì)應(yīng)于3±1μΜ的Κι值。因此，SEQ ID NO 16所示膚的DCso值類似于在 HIV-1抑制測(cè)定中獲得的ICso值。如上所述，然而，通過蛋白水解切割一小部分的豐富HSA前 體不難實(shí)現(xiàn)運(yùn)些濃度。
[01化]檢測(cè)了 SEQ ID NO 16所示膚是否影響CXCR4/CX化12-介導(dǎo)的細(xì)胞遷移，它在各種 癌癥的穩(wěn)態(tài)、免疫反應(yīng)和轉(zhuǎn)移中起到關(guān)鍵作用。業(yè)已發(fā)現(xiàn)，SEQ ID NO 16所示膚抑制 CX化12-誘導(dǎo)的化rkat T細(xì)胞W及CD34+人干細(xì)胞遷移。類似地，SEQ ID NO 16所示膚在體 外防止腫瘤細(xì)胞侵襲。因此，該膚可W發(fā)揮抗炎W及抗-侵入性和抗轉(zhuǎn)移作用。
[0186] CX化12-CXCR4軸參與造血干細(xì)胞化SC)的骨髓保留，造血干細(xì)胞通常用于移植患 者的造血作用重建(Mohty等.，2011)。人和小鼠 CXCR4高度保守，在小鼠中試驗(yàn)性研究顯示， 單次腹膜內(nèi)給予SEQ ID NO 16所示膚顯著動(dòng)員祖細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞進(jìn)入外周（系統(tǒng)）。移 植衍生自SEQ ID NO 16所示膚處理小鼠的細(xì)胞導(dǎo)致植入率提高，進(jìn)一步支持該天然產(chǎn)生的 膚能成功動(dòng)員干細(xì)