[0039] 以下列舉實(shí)施例（試驗(yàn)例和制劑例）以更詳細(xì)地說明本發(fā)明，但本發(fā)明的范圍不 限于此。
[0040] 實(shí)施例1 (小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的三維膠原凝膠收縮抑制試驗(yàn)） 使用小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞，依據(jù)Nishida等的方法（Investigative Ophthalmology&VisualScience, 42，1247-1253 (2001))，評(píng)價(jià)受試化合物對(duì)三維膠原 凝膠收縮的抑制效果。從小鼠眼球采集含有視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的視網(wǎng)膜下的片狀色素上 皮細(xì)胞，進(jìn)行原代培養(yǎng)。通過0. 05%胰蛋白酶-EDTA從培養(yǎng)載玻片剝離并回收培養(yǎng)的細(xì)胞， 用無血清培養(yǎng)基（MEM:制品編號(hào)11095，Gibco公司制）清洗2次后，加入無血清培養(yǎng)基制備 細(xì)胞懸液。以7:1:1:0. 2:1. 8的容量比在冰上將I型膠原（3mg/ml:制品編號(hào)637-00653， NUtaGelatinInc.制）、10XMEM、重建緩沖液（制品編號(hào)635-00791，NittaGelatinInc. 制）、細(xì)胞懸液（1. 1X1〇7個(gè)細(xì)胞/ml在MEM中）和水混合。將該混合液（0. 5ml)接種于用 1%BSA涂布的培養(yǎng)皿中，于37°C培養(yǎng)1小時(shí)以制備膠原凝膠。接著，在膠原凝膠上分別加入 0. 5ml的lng/mlTGF-0 2 (R&D公司制）和添加有0、0. 01、0. 1、1μΜ本發(fā)明的苯甲酸的 無血清培養(yǎng)基，并于37 °C進(jìn)行溫育，在24小時(shí)后測(cè)定凝膠的直徑。作為對(duì)照，只加入0. 5ml 的無血清培養(yǎng)基并相同地進(jìn)行溫育。將結(jié)果示出于圖1。
[0041](結(jié)果） 根據(jù)圖1可知，本發(fā)明的苯甲酸抑制使用小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的由TGF導(dǎo)致的膠 原凝膠收縮。這顯示本發(fā)明的苯甲酸有助于膠原的更新（turnover)，有效抑制視網(wǎng)膜脈絡(luò) 膜病癥，有抑制眼組織中的炎癥、出血、感染、手術(shù)、外傷等之后產(chǎn)生的組織重塑，即視網(wǎng)膜 組織纖維化、視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜瘢痕形成和收縮的作用。
[0042] 實(shí)施例2 (小鼠的視網(wǎng)膜下瘢痕形成的抑制試驗(yàn)） 通過制備小鼠的視網(wǎng)膜下瘢痕模型，研究本發(fā)明的苯甲酸是否具有視網(wǎng)膜下瘢痕形 成的抑制效果。小鼠的視網(wǎng)膜下瘢痕模型依據(jù)Young-joon等的方法（Investigative Ophthalmology&VisualScience, 52，6089-6095(2001))，通過以下不出的方法來制備。 [0043](小鼠的視網(wǎng)膜下瘢痕模型的制備） 首先，對(duì)小鼠C57BL/6 (從SLC公司購(gòu)入）的眼底后極部進(jìn)行1處的激光照射（0. 05 秒、200mW、532nm)，破壞布魯赫膜。由此，使得炎癥細(xì)胞可從脈絡(luò)膜浸潤(rùn)，與此同時(shí)在視網(wǎng)膜 下產(chǎn)生氣泡。
[0044] 接著，從睫狀體平坦部刺入33G針，在視網(wǎng)膜下注入0. 5μ1的4X107ml硫膠質(zhì)誘 導(dǎo)的腹腔巨噬細(xì)胞和1μg、5μg或50μg的本發(fā)明的苯甲酸。作為對(duì)照，不注入本發(fā)明的 苯甲酸（0μg)。
[0045] 從注入上述巨噬細(xì)胞和本發(fā)明的苯甲酸起7日后對(duì)視網(wǎng)膜下進(jìn)行觀察，與此同時(shí) 測(cè)定視網(wǎng)膜下瘢痕區(qū)域。將結(jié)果示出于圖2中。
[0046](結(jié)果） 如圖2A所示，在注入50μg的本發(fā)明的苯甲酸的情況下，與對(duì)照相比可抑制瘢痕的形 成。另外，如圖2B所示，隨著本發(fā)明的苯甲酸的注入量增加，瘢痕區(qū)域（纖維化區(qū)域）變窄， 表明可通過本發(fā)明的苯甲酸抑制視網(wǎng)膜下瘢痕的形成和收縮。
[0047] 實(shí)施例3 [制劑例] (制劑例1)滴眼劑 100ml中 本發(fā)明的苯甲酸 100mg 氯化鈉 800mg 聚山梨酯80 適量 磷酸氫二鈉 適量 磷酸二氫鈉 適量 滅菌純化水 適量 在滅菌純化水中加入本發(fā)明的苯甲酸和除此之外的上述成分，將它們充分混合以制備 滴眼液。通過改變本發(fā)明的苯甲酸等的添加量，可制備濃度為0. 05% (W/V)、0. 3% (W/V)、 0. 5% (W/V)或 1% (W/V)的滴眼劑。
[0048](制劑例2)眼用軟膏 100g中 本發(fā)明的苯甲酸 〇. 3g 液體石錯(cuò) 10. 〇g 白凡士林 適量 在均勻熔化的白凡士林和液體石蠟中加入本發(fā)明的苯甲酸，將它們充分混合后緩慢冷 卻，由此制備眼用軟膏。通過改變本發(fā)明的苯甲酸等的添加量，可制備濃度為0. 05% (W/W)、 0. 1% (W/W)、0. 5% (W/W)或 1% (W/W)的眼用軟膏。
[0049](制劑例3)片劑 100mg中 本發(fā)明的苯甲酸 lmg 乳糖 66.4mg 玉米淀粉 20mg 羧甲基纖維素鈣 6mg 羥丙基纖維素 6mg 硬脂酸鎂 0. 6mg 在混合機(jī)中將本發(fā)明的苯甲酸、玉米淀粉和乳糖混合，在該混合物中加入羧甲基纖維 素鈣和羥丙基纖維素并進(jìn)行造粒，將得到的顆粒干燥后進(jìn)行整粒，在該整粒顆粒中加入硬 脂酸鎂并進(jìn)行混合，用壓片機(jī)進(jìn)行壓片。另外，通過改變本發(fā)明的苯甲酸等的添加量，可制 備100mg中的含量為0·lmg、10mg或50mg的片劑。
[0050] 產(chǎn)業(yè)上的可利用性 作為本發(fā)明的視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜病癥抑制劑的有效成分的（E) -4- (2- {3- [ (1H-吡 唑-1-基）甲基]-5, 5, 8, 8-四甲基-5, 6, 7, 8-四氫萘-2-基}乙烯基）苯甲酸、其酯或它 們的鹽通過強(qiáng)效地抑制視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜中視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞 等的膠原收縮，從而作為視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜病癥的抑制劑、特別是視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜瘢痕的形成和 收縮的抑制劑有用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜病癥的抑制劑，所述抑制劑含有(6)-4-(2-{3-[(1H-吡唑-1-基）甲 基]-5, 5, 8, 8-四甲基-5, 6, 7, 8-四氫萘-2-基}乙烯基）苯甲酸、其酯或它們的鹽作為有 效成分。2. 權(quán)利要求1的視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜病癥的抑制劑，其中，（Ε)-4-(2-{3-[(1Η-吡唑-1-基） 甲基]-5, 5, 8, 8-四甲基-5, 6, 7, 8-四氫萘-2-基}乙烯基）苯甲酸、其酯或它們的鹽為 出)-4-(2-{3-[(1!1-吡唑-1-基）甲基]-5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫萘-2-基}乙烯 基）苯甲酸或其鹽。3. 權(quán)利要求1或2的視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜病癥的抑制劑，其中，視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜病癥為視網(wǎng)膜 上、視網(wǎng)膜內(nèi)或視網(wǎng)膜下的任一組織中視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜瘢痕的形成和收縮。4. 權(quán)利要求1~3中任一項(xiàng)的視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜病癥的抑制劑，其中，給藥方式為滴眼給藥 或口服給藥。5. 權(quán)利要求1~4中任一項(xiàng)的視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜病癥的抑制劑，其中，劑型為滴眼劑、眼用軟 膏、注射劑、片劑、顆粒劑、微粒劑、散劑或膠囊劑。
【專利摘要】本發(fā)明的課題在于：提供視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜病癥的抑制劑，特別是視網(wǎng)膜上、視網(wǎng)膜內(nèi)或視網(wǎng)膜下的任一組織中視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜瘢痕的形成和收縮的抑制劑。作為解決手段，制備含有(E)-4-(2-{3-[(1H-吡唑-1-基)甲基]-5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫萘-2-基}乙烯基)苯甲酸、其酯或它們的鹽作為有效成分的視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜病癥的抑制劑。這樣的視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜病癥的抑制劑通過抑制視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞等的膠原收縮，可抑制視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜病癥。
【IPC分類】A61K9/16, A61P27/02, A61K9/48, A61K9/06, A61K31/4155, A61K9/14, A61K9/08, A61P43/00, A61K9/20
【公開號(hào)】CN105377258
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201480041392
【發(fā)明人】木村和博
【申請(qǐng)人】國(guó)立大學(xué)法人山口大學(xué)
【公開日】2016年3月2日
【申請(qǐng)日】2014年5月21日
【公告號(hào)】CA2913005A1, EP3000466A1, US20160120843, WO2014188716A1